CN1330241C - 蔬菜根腐病生防制剂及其生产方法和用途 - Google Patents

蔬菜根腐病生防制剂及其生产方法和用途 Download PDF

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蔬菜根腐病生防制剂及其生产方法和用途，涉及蔬菜等作物使用的克服土传性疾病的微生物制品及其用途和制作方法。土传性病害，可造成农作物和蔬菜严重的经济损失。一种蔬菜根腐病生防制剂，所述的制剂包括从黄瓜的根分离出来的生防菌株——枯草芽孢杆菌(Bacillus Subtilis)的变异菌株在CGMCC的菌种保藏号为0752。它对腐霉菌，立枯丝核菌，镰刀菌等病原真菌有较强的抑制作用，温室盆栽实验表明这种生防制剂对由腐霉菌、立枯丝核菌、镰刀菌等引起的根腐病生防效果可达70%以上，并具有促进植物生长的作用，可用于蔬菜等作物根腐病的生物防治。

Description

蔬菜根腐病生防制剂及其生产方法和用途
技术领域：本发明涉及一种蔬菜根腐病生防制剂、该制剂的生产方法及其该制剂的用途。
背景技术：本发明所述的生防制剂属于微生物技术领域。根腐病是由腐霉菌、立枯丝核菌、镰刀菌等病原真菌引起的土传性病害，可造成农作物和蔬菜严重的经济损失。化学农药对根腐病虽然能起到一定的作用，但由于其药效持续时间短，因而造成使用药剂的次数和剂量的增加，对人体健康和生态环境构成极的大的危害。
发明内容：
本发明的目的是提供一种蔬菜等作物根腐病生防制剂、该制剂的生产方法及其该制剂的用途，克服目前过多使用化学农药对人和环境的危害。用生防制剂代替化学农药以减少对人和环境的危害。用生防制剂代替化学农药，以保护生态环境以达到防治根腐病，并可促进植株株高生长。
上述的目的通过以下的技术方案实现：
第一部分：本发明的产品：
一种蔬菜根腐病生防制剂，所述的制剂包括从黄瓜的根分离出来的生防菌株——枯草芽孢杆菌的变异菌株，该菌株保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会(CGMCC)菌种保藏号为0752。
该菌株的菌学特性如下：
一、形状特征和培养基特征：
革兰氏染色：G+
形状：杆状
大小：0.5-1。8nm
芽孢：椭圆形
可溶性色素：无
菌落：原型，表面粗糙，边缘不整齐，颜色为乳白色。
生理生化特性：
明胶液化：+
淀粉水解：+
VP反应：  +
硝酸盐还原：+
甲基红反应：+
葡萄糖发酵：产酸不产气
柠檬酸：+
吲哚：-
石蕊牛奶：胨化
二、生防制剂发酵培养基及其菌种的保藏：
1.NYDA培养基：
牛肉膏：8克
酵母膏：5克
葡萄糖：10克
琼脂粉：15克
H2O：1000ml
2.NYD培养基：
牛肉膏：8克
酵母膏：5克
葡萄糖：10克
H2O：1000ml
3.液体发酵培养基：
玉米浆：30克
大豆粉：20克
蔗糖：15克
KH2PO4：1克
K2HPO4：3克
MgSO4.5H2O：0.5克
CaCl2：0.2克
H2O：1000ml
4.菌种的保藏：
用30％甘油冷冻保存，冻干可以保存一年以上。
含有该菌株的试管或平板可在4℃冰箱保存一周。
第二部分：本发明的蔬菜根腐病生防制剂的制作方法：
取上述的枯草芽孢杆菌菌种，进行活化，接入NYDA斜面，然后转接到NYDA的平板上，取其中的单菌落，接入到5mlNYD培养基中，按1％的比例将其接种到50mlNYD培养基中，向液体发酵培养基中接入5％，加入到上述的液体发酵培养基中，在30℃ PH7.2下溶氧发酵，32-48小时。
第三部分：本发明的蔬菜等作物根腐病生防制剂的用途：该制剂在黄瓜、豆角等十字花科和豆科的作物与蔬菜由腐霉菌、立枯丝杆菌、镰刀菌等病原菌引起的植物根部疾病上的应用。
这个技术方案有以下有益效果：
1.这里所称的生防制剂是由土壤或根际天然存在的微生物经生物发酵而成的，其药效持久且对人体和生态环境无害，是安全、低毒、成本又低、对人畜无害的生防制剂。本发明研制的生防制剂是从黄瓜的根际筛选到的一株枯草芽孢杆菌ZXX-68，经生物发酵而制成的。它对腐霉菌，立枯丝核菌，镰刀菌等病原真菌有较强的抑制作用，温室盆栽实验表明这种生防制剂对由腐霉菌、立枯丝核菌、镰刀菌等引起的根腐病生防效果可达70％以上，并具有促进植物生长的作用，可用于蔬菜等作物根腐病的生物防治。
2.本发明的生防制剂的用途包括抑制病原真菌的生长，效果达到70％-90％，经应用测试，本产品对于腐霉菌效果为91％、立指丝核菌为86％、镰刀菌为72％，生物防效达到70％以上，并可促进植株的株高(根长，茎长和芽长)生长。
3.本发明研制的生防制剂是一种广谱的生物菌剂，适用于黄瓜、豆角等十字花科和豆科的作物与蔬菜由腐霉菌、立枯丝杆菌、镰刀菌等病原菌引起的根腐病。
实施例1：
一种蔬菜根腐病生防制剂，所述的制剂包括从黄瓜的根分离出来的生防菌株——枯草芽孢杆菌(Bacillus Subtilis)的变异菌株，该菌株保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会(CGMCC)菌种保藏号为0752。
采用浸种或者浇穴的方式使用本制剂具有生物防治效果：
该制剂稀释100倍，既每毫升活菌数10,000,000，浸种30分钟，捞出沥干，再进行播种。
在苗期，将10-15ml稀释液浇于作物的根际周围，经过温室对比试验，使用本产品的生物防治效果达到70％以上。
本产品具有明显的促生长作用：
将本制剂稀释10倍，100倍和1000倍，将黄瓜种子在上述的菌液中浸泡30分钟，其中将菌液稀释成1000倍，与对照相比，芽长增加30％，根长增加54％，茎长增加82％。
本制剂的效价以其中所含的活菌数表示，每毫升的活菌数不低于10,000,000，本制剂可以制成菌液、可溶性粉剂或者种子包衣剂，使用时，可将种子浸泡在菌液中30分钟，然后播种，每亩地需用菌液500-1000ml。
本产品适合于十字花科和豆科等作物，以及蔬菜果树等高温、高湿，多雨等天气引起的根腐病，在播种前使用最好，在苗期和生长期也可浇穴。
本制剂可在室温下(18-22℃)保存6-12个月，其效价不低于前述的10,000,000。
实施例2：
将生防菌株——枯草芽孢杆菌(Bacillus Subtilis)的变异菌株在CGMCC菌种保藏号为0752，将该菌种转接到NYDA斜面培养基中，以活化菌种，在30℃培养过夜，
从NYDA斜面培养基将菌种转接置平板上，在平板上划线使之产生新的菌落，在30℃过夜，
从NYDA平板上取单菌落，转接到50mlNYD培养液中，在30℃培养过夜，
以1％接种量，转接到50mlNYD培养液中，在30℃培养过夜，
以5％接种量转接于液体发酵培养基2000ml中，在30℃，pH7.2培养为25％饱和氧浓度培养液，32-48小时以后，取发酵液，测定发酵液的活菌数，达到每毫升1,000,000,000。
实施例3：
上述的蔬菜根腐病生防制剂生产方法：
所述的发酵中：
所述的菌株以5％接种量转接，可在20-37℃下生长，pH为6.0-8.0，发酵时间为24-72小时，为较好的发酵条件，特别在温度30℃，pH7.2发酵时间为32小时，每毫升液体中可以达到活菌数为10,000,000---1,000,000,000
实施例4.：
上述的蔬菜根腐病生防制剂的用途：该制剂在黄瓜、豆角等十字花科和豆科的作物与蔬菜由腐霉菌、立枯丝杆菌、镰刀菌等病原菌引起的植物根部病害上的应用。

Claims (4)

1.一种蔬菜根腐病生防制剂，其特征是：所述的制剂包括从黄瓜的根分离出来的生防菌株——枯草芽孢杆菌(Bacillus Subtilis)的变异菌株，该菌株保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会(CGMCC)，菌种保藏号为0752。
2.一种权利要求1所述的蔬菜根腐病生防制剂生产方法：取上述的枯草芽孢杆菌菌种，进行活化，接入NYDA斜面，然后转接到NYDA的平板上，取其中的单菌落，接入到5ml NYD培养基中，按1％的比例将其接种到50mlNYD培养基中，向液体发酵培养基中接入5％，加入到上述的液体发酵培养基中，在30℃Ph 7.2下溶氧发酵，32-48小时，
其具体过程是：
将生防菌株——枯草芽孢杆菌(Bacillus Subtilis)的变异菌株在CGMCC保藏，菌种保藏号为0752，将该菌种转接到NYD斜面培养基中，在30℃过夜培养以活化菌种，
从NYDA斜面培养基将菌种转接置平板上，在平板上划线使之产生新的菌落，在30℃过夜，
从NYDA平板上取单菌落，转接到50mlNYD培养液中，在30℃培养过夜，
以1％接种量，转接到50mlNYD培养液中，在30℃培养过夜，
以5％接种量转接于液体发酵培养基2000ml中，在30℃，pH7.2培养为25％饱和氧浓度培养液，32-48小时以后，取发酵液，测定发酵液的活菌数，达到每毫升1,000,000,000。
3.根据权利要求2所述的蔬菜根腐病生防制剂生产方法：
其特征是：所述的发酵中：
所述的菌株以5％接种量转接，在温度30℃，pH7.2发酵时间为32小时，每毫升液体中可以达到活菌数为10,000,000---1,000,000,000.
4.上述的蔬菜根腐病生防制剂的用途：该制剂在十字花科和豆科的作物与蔬菜由腐霉菌或立枯丝杆菌或镰刀菌病原菌引起的植物根部疾病上的应用。
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