CN1307906A - 一种新型药物靶向载体 - Google Patents
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Abstract
本发明属于制药领域,具体涉及高密度脂蛋白作为抗肿瘤药物靶向载体的新用途。本发明将高密度脂蛋白作为抗肿瘤药物靶向载体与抗癌药物重组成复合物用于肝癌靶向治疗。高密度脂蛋白作为抗癌药物载体为肝癌治疗提供了一条新的特效治疗途径。
Description
本发明属于制药领域，具体涉及高密度脂蛋白作为抗肿瘤药物靶向载体的用途。
癌症是危害人类键康最主要疾病之一。虽然抗癌新药不断发明，但药物对癌细胞杀伤专一性及提高药物细胞利用度一直是困绕癌症药物治疗取得突破性进展的关键问题。脂质体作为抗癌药物载体曾一度引起人们注意。虽然脂质体由于细胞膜较好相融性，有利于将药物载入胞内发挥抗癌作用。但对提高杀伤癌细胞专一性无明显作用。再则由于脂质体是体内异物，易被网状内皮系统识别清除，因而限制了脂质体应用。脂蛋白是体内天然存在的一种广义脂质体。Brown和Goldstein提出了低密度脂蛋白(LDL)代谢通路。哺乳类动物几乎所有细胞表面都存在着LDL受体。血浆LDL通过ApoB100结合细胞受体进入胞内。在细胞溶酶体内其胆固醇酯水解成游离胆固醇释放到胞内。肿瘤细胞LDL受体活性显著增高。作为药物载体，显然LDL由于受体专一性比脂质体更有选择性。因此近几年来国外对LDL作为抗癌药物靶向载体进行了广泛研究。
本发明的目的是将高密度脂蛋白作为抗肿瘤药物靶向载体与抗癌药物重组成复合物用于肿瘤靶向治疗。
实际上本发明涉及将高密度脂蛋白作为抗肝癌药物靶向载体与抗癌药物重组成复合物用于肝癌靶向治疗。本发明对高密度脂蛋白(HDL)代谢研究显示HDL作为胆固醇接受体，接受肝外细胞多余胆固醇并转运到肝脏进行代谢，完成胆固醇逆向转运转。研究证实HDL通过肝细胞表面ApoA-I确认的HDL受体途径内吞进入肝细胞内。在肝细胞HDL不经过溶酶体分解过程(与LDL代谢不同)，其Apo组分通过逆向胞饮途径释放到胞外，而留下胆固醇酯在胞内。其次，肝细胞通过表面肝性脂酶作用下，直接摄取HDL中胆固醇酯。并且HDL受体和肝性脂酶在肝选择性摄取HDL-胆固醇酯中具有协同作用。显示HDL作为抗癌药物载体用于肝癌治疗比LDL更具优越性，它除了LDL所具有的优点外，还进一步克服了LDL的缺点：1．HDL只进入肝细胞内释放脂质或药物，使其选择性比LDL更强。2．HDL在肝细胞内不经过溶酶体分解途径，可避免所载药物在溶酶体内可能的部分分解，HDL作为抗癌药物载体为肝癌治疗提供了一条新的特效的治疗途径。3．HDL中主要载脂蛋白Apo-I分子量小呈水溶性，而LDL中主要载脂蛋白ApoB100分子量大，水不溶，因而重组含抗癌药物的HDL颗粒在技术上比重组LDL简便，同时为今后进一步利用基因工程制备的ApoA-I来重组含抗癌药物的HDL打下基础。
为了更好地理解本发明的实质，下面将用高密度脂蛋白-亲脂性抗肿瘤药物复合物对体外细胞和动物实验结果说明将高密度脂蛋白作为药物靶向载体的新用途。本发明的亲脂性抗肿瘤药物选用了阿克拉霉素，也可选用其它脂溶性药物。1、制备和纯化“高密度脂蛋白-阿克拉霉素”复合物(rHDL-ACM)①常规超速离心法分离人血浆高密度脂蛋白(HDL)；②常规法乙醇∶乙醚(3∶1,v/v)脱脂后收集HDL中载脂蛋白部分；③将载脂蛋白、磷脂和阿克拉霉素(ACM)在Tris-NaCl缓冲液中经超声重组“高密度脂蛋白-阿克拉霉素”复合物(rHDL-ACM)，ACM的包封率为92％；④rHDL-ACM经透析去除少量游离阿克拉霉素(fACM)质量控制指标：
a、琼脂糖凝胶电泳鉴定人血浆高密度脂蛋白纯度。
b、rHDL-ACM用琼脂糖凝胶电泳鉴定，用凝胶过滤法和鱼精蛋白法进行纯度鉴定。
c、蛋白浓度用Lowry法测定，ACM浓度在激活剂作用下用荧光色谱法测定。
重组rHDL-ACM经生理盐水-0.01％EDTA透析后无游离fACM。
⑤rHDL-ACM中HDL生物活性鉴定：按细胞竞争结合实验测定。
取2×105/ml人肝癌SMMC-7721细胞和125μg/ml(rHDL-ACM)，加入不同浓度nHDL，置37℃培养24h后测定细胞结合rHDL-ACM的荧光强度(FM)。
结果显示rHDL-ACM保持天然人血浆HDL特性，通过受体途径进入肝细胞内。2．体外细胞培养试验：rHDL-ACM对人肝癌SMMC-7721细胞选择性(靶向)杀伤作用(以正常人肝L02细胞作对照)。①肝癌细胞对“rHDL-ACM”及fACM摄取比较；
取2×105/ml细胞加不同剂量rHDL-ACM或fACM，置37℃培养24h后分离细胞，提取细胞内吸收药物(ACM)采用荧光分光光度法测定细胞对药物吸收荧光强度。
结果显示人肝癌SMMC-7721细胞摄取rHDL-ACM显著高于fACM(p＜0.01)。②肝癌细胞与正常肝L02细胞对rHDL-ACM摄取比较；
取2×105/ml细胞加不同剂量rHDL-ACM，置37℃培养24h后分离细胞，提取细胞吸收药物(ACM)采用荧光分光光度法测定细胞对药物吸收荧光强度。
结果显示人肝癌SMMC-7721细胞摄入rHDL-ACM显著高于人正常肝L02细胞(p＜0.01)。③细胞存活率MTT法测定；
取2×105/ml细胞加不同剂量rHDL-ACM或fACM，置37℃培养24h后，MTT法测定细胞存活率。
结果显示rHDL-ACM杀伤人肝癌SMMC-7721细胞显著强于fACM(p＜0.01)。④细胞蛋白合成抑制实验。
取2×105/ml细胞×6ml/皿加1μg/ml rHDL-ACM或fACM，置37℃,24h培养后，分离细胞，采用Lowry法测定细胞裂解液中蛋白含量。
结果显示rHDL-ACM抑制人肝癌SMMC-7721细胞蛋白合成显著强于fACM(p＜0.01)。3、动物实验：①药代动力学实验
10只wastar大鼠分两组，尾静脉注射1mg/mlrHDL-ACMlml，在各时间点取血浆0.2ml，每组同一时间点血浆合并，得1ml混合血浆，分别测定血浆浓度。
大鼠血浆F-ACM的T1/2为1.49h。
表1为大鼠静注Rhd1-ACM后体内血药浓度测定结果
| t(min)C(ug/ml)lnC组别 | 5 | 15 | 30 | 60 | 120 | 240 | 360 | T1,2(min) |
| 12 | 503(6.221)496(6.207) | 368(5.908)474(6.161) | 264(5.576)416(6.031) | 184(5.215)224(5.412) | 165(5.106)154(5.037) | 125(4.828)115(4.745) | 49(3.892)53(3.970) | 162154 |
| 平均值 | 158 |
结果显示：rHDL-ACM在大鼠体内血浆T1/2(158min)比F-ACM提高1.78倍多。②测定动物组织药物浓度(药物浓度/克组织)
取wastar大鼠28只，分4组，其中两组尾静脉注射0.22mg/mlF-ACM1mg/Kg；另两组注射0.220mg/mlrHDL-ACM1mg/Kg。给药后2h和4h心脏取血，处死动物取出脏器，测定组织药物浓度(药物浓度/克组织)。
动物实验结果证实：rHDL-ACM的肝脏靶向性比F-ACM强
本发明以高密度脂蛋白为药物靶向载体和亲脂性抗肿瘤药物如阿克拉霉素组成“高密度脂蛋白-阿克拉霉素”复合物在体内将亲脂性抗肿瘤药物定向引入肝癌细胞，杀伤肝癌细胞，提高肝癌治疗的专一性，增强疗效，降低毒性。本发明以高密度脂蛋白为药物靶向载体，其定向性强，对肿瘤细胞作用特异性高。为肝癌和肝病的治疗提供了新的特效的给药途径。
附图说明：
图1为rHDL-ACM的凝胶过滤(SephadexG-25柱1×18.5cm)
其中A为重组rHDL-ACM未透析(除游离ACM前)的凝胶过滤图
峰1蛋白质定性试验为阳性，是rHDL-ACM
峰2蛋白质定性试验为阴性，是游离ACMB为重组rHDL-ACM经生理盐水-0.01％EDTA透析后，凝胶过滤图。
图2为rHDL-ACM与正常HDL(nHDL)竞争结合人肝癌SMMC-7721细胞
图3为人肝癌SMMC-7721细胞对rHDL-ACM及fACM摄取量的比较
图4为人肝癌SMMC-7721细胞与正常人肝L02细胞对rHDL-ACM摄入量比较
图5为rHDL-ACM与fACM对人肝癌SMMC-7721细胞杀伤作用
图6为rHDL-ACM与fACM对人肝癌SMMC-7721细胞及人正常肝L02细胞蛋白合成抑制的影响
图7为大鼠静注rHDL-ACM后体内血药浓度
图8为大鼠静注rHDL-ACM和F-ACM后体内各组织分布
Claims (4)
1、高密度脂蛋白在制备药物靶向载体中的应用。
2、高密度脂蛋白在制备抗恶性肿瘤药物靶向载体中的应用。
3、高密度脂蛋白在制备抗肝癌药物靶向载体中的应用。
4、高密度脂蛋白在制备抗肝病药物靶向载体中的应用。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN01105249A CN1307906A (zh) | 2001-01-18 | 2001-01-18 | 一种新型药物靶向载体 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
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| CN01105249A CN1307906A (zh) | 2001-01-18 | 2001-01-18 | 一种新型药物靶向载体 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
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| CN1307906A true CN1307906A (zh) | 2001-08-15 |
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ID=4654334
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN01105249A Pending CN1307906A (zh) | 2001-01-18 | 2001-01-18 | 一种新型药物靶向载体 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN1307906A (zh) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102580109A (zh) * | 2012-03-02 | 2012-07-18 | 河南师范大学 | 一种抗癌药物载体及其制备方法 |
| CN102614515A (zh) * | 2012-04-16 | 2012-08-01 | 中国药科大学 | 具有靶向及双重抗肿瘤作用的新型化学重组高密度脂蛋白载药系统及应用 |
| CN102846551A (zh) * | 2011-06-28 | 2013-01-02 | 复旦大学 | 一种肝靶向高密度脂蛋白类似物纳米粒及其制备方法和用途 |
| CN117244073A (zh) * | 2023-10-30 | 2023-12-19 | 武汉大学 | 一种高密度脂蛋白在制备抗肝癌药物中的应用 |
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2001
- 2001-01-18 CN CN01105249A patent/CN1307906A/zh active Pending
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