CN1304446A - 聚(adp－核糖)聚合酶基因 - Google Patents

聚(adp－核糖)聚合酶基因 Download PDF

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Abstract

本发明涉及一种聚(ADP－核糖)聚合酶(PARP)同系物,其具以下的氨基酸序列,a)功能性NAD+结合结构域及b)不含下式锌指序列基序CX2CXmHX2C其中,m为自28或30的整数值,及X基各自独立为任何氨基酸;及其功能性相当物。本发明还涉及编码该聚(ADP－核糖)聚合酶(PARP)同系物的核酸,该新蛋白质的特异性抗体,含有本发明产品的药剂或基因治疗剂,测定本发明的蛋白和核酸的方法,本发明蛋白的结合配偶体的效应物的方法,新PARP效应物及测定该效应物效能的方法。

Description

聚(ADP-核糖)聚合酶基因
本发明系有关新颖聚(ADP-核糖)聚合酶(PARP)基因及自其衍生的蛋白质；对新颖蛋白质具特异性的抗体；医药及基因疗法组合物，其包括根据本发明的产物；分析测定根据本发明的蛋白质和核酸的方法；鉴定根据本发明蛋白质的效应物或结合配偶体的方法；测定如此效应物活性的方法及其用以诊断或治疗病理状态的用途。
在1966年，Chambon和同僚发现116 kD酶，其在其后年间经详细表征现称为PARP(EC2.4.2.30)(聚(腺苷-5＇-二磷酸核糖)聚合酶)、PARS(聚(腺苷-5′-二磷酸核糖)合成酶)或ADPRT(腺苷-5′-二磷酸核糖转移酶)。在植物界(拟南芥(Arabidopsisthaliana))中，在1995年发现72 kD(637个氨基酸)PARP(LepiniecL.等人，FEBS Lett 1995；364(2):103-8)。未清楚的是此截短形式的PARP是否为植物特异的个体还是加工品(“剪接”变异体或类似物)。116 kD PARP 7酶目前已知仅在动物和人体中有活性，其经描述于下，以下称为PARP1以避免混淆。
PARP1的主要生理功能似乎为其参预复合物修复机制，其细胞经发展以修复DNA链断裂处。对DNA链断裂处的主要细胞反应，再者，似乎包括聚(ADP-核糖)自NAD+的PARP1-催化合成(参阅DeMurcia,G.等人(1994)TIBS,19,172)。
PARP1具基准的分子结构。3个主要功能元件目前已经鉴定：N-端46kD DNA结合结构域；中央22kD自身修饰结构域，其上连接着聚(ADP-核糖)，而PARP1酶活性随增加的延长而降低；及C-端54kD NAD+结合结构域。亮氨酸拉链区经发现在自修饰结构域内，表明可能的蛋白质-蛋白质相互作用仅于果蝇的PARP中。所有目前已知的PARP假定以同源二聚体为活性形式.
分子的高度组织反映于氨基酸序列的强保守性。因此，氨基酸的62％保守已发现在人、小鼠、牛和鸡的PARP1中。与果蝇的PARP有更大的结构差异。个别的结构域具有更为保守的簇串。因此，DNA结合区域含2个所谓锌指为次结构域(包括CX2CX28/30HX2C型的基序)，其涉及DNA单链断裂处或单链DNA突出的Zn2+-依赖性识别(例如在染色体末端上，端粒)。C-端催化的结构域包括约50个氨基酸模块(残基859-908)，其在脊椎动物间为约100％保守的(PARP“签名(Signature)”)。此模块结合天然底物NAD+及因此管理聚(ADP-核糖)的合成(参阅de Murcia，上引)。GX3GKG基序特别地在此块中为PARP的特征。
上述的有利功能对应于多种疾病的病理(中风、心肌梗塞、败血症等)。PARP涉及脑(Choi,D.W.,(1997)天然医学，3,10,1073)、心肌(Zingarelli,B.等人(1997)，心血管研究，36,205)及眼(Lam,T.T.(1997)，分子病理和药理学的研究通讯，95,3,241)的局部缺血造成的细胞死亡。由炎性介体诱导的PARP活化曾见于脓毒性休克(Szabo,C.等人(1997)，临床探讨会刊，100,3,723)。在这些病例中，PARP的活化伴随NAD+的广泛地消耗。因为1摩尔NAD+的生合成消耗4摩尔ATP，细胞能量供给戏剧性地降低。结果为细胞死亡。
在前述专业文献中所述的PARP1抑制剂为烟碱酰胺和3-胺基苄酰胺。3,4-二氢-5-[4-(1-六氢吡啶基)丁氧基]-1(2H)-异喹啉酮系由Takahashi,K.等人(1997)，脑血流和代谢会刊17,1137,所揭示。进一步抑制剂系述,例如于Banasik,M.等人(1992)J.Biol.Chem.,267,3,1569及Griffin,R.J.等人(1995)，抗癌药物设计，10,507。
被描述为人PARP1的高分子量结合配偶体包括碱基切除修复(BER)蛋白质XRCC1(X-光修复交叉互补1)，其经锌指基序和BRCT(BRCA1C-端)模块(氨基酸372-524)结合(Masson,M.等人(1998)分子和细胞生物学，18,6,3563)。
基于PARP的多样生理和病理功能,本发明的目标是提供新颖PARP同系物。理由是均相PARP的提供对发展新颖药物靶物及新颖药物特别重要，以期改进涉及PARP、PARP同系物或自其衍生的物质的病理状态的诊断和/或疗法。
目标通过提供PARP同系物达到，优选地来自人和非人哺乳动物衍生，且具以下的氨基酸序列a)功能性NAD+结合结构域，即具特征性GX3GKG基序的PARP“签名”序列
及
b)特别地在N-端序列区域中，即在最初200个N-端氨基酸的区域中如，例如在最初100个的区域中，无下式的PARP锌指序列基序CX2CXmHX2C
其中
m为自28或30的整数值，及X基各自独立为任何氨基酸；及其功能性相当物。
因为根据本发明的PARP分子特别代表功能性同系物，其亦自然地具聚(ADP-核糖)合成活性。NAD结合结构域必要地与此活性相对应且位于C端。
因此，根据本发明的PARP必要特性系功能性NAD+结合结构域(PARP签名)的存在，其位在氨基酸序列的C-端区域(即约在最后400个，例如最后350或300个C-端氨基酸的区域中)，结合着不具锌指基序的N-端序列。因为在已知PARP中的锌指基序假定地贡献于DNA断裂的识别，假定地根据本发明的蛋白质不与DNA相互作用或以另一种方式进行。有关的生化试验示范，根据本发明的PARP2可由“活化DNA”(即由限制DNaseⅠ消化后的DNA)活化。可自此进一步结论根据本发明的PARP2具DNA结合性质。然而，根据本发明的PARPDNA结合与酶活化的机制和PARP1不同。其DNA结合与酶活化，如述地，由特性锌指基序所介导。无如此的基序存在于根据本发明的PARP中。假定地，此些性质由根据本发明PARP的N-端区域中的正电荷氨基酸所介导。因为“活化DNA”(即例如在以去氧核酸酶Ⅰ的限制处后后的DNA)具很多缺点(单链断裂、单链裂隙、单链突出、双链断裂等)，可能地虽然PARP1和根据本发明的PARP系由相同“活化DNA”所活化，其系由不同的缺点亚群(例如单链裂隙而非单链断裂)所活化。
功能性NAD+结合结构域(即催化结构域)结合聚-(ADP-核糖)合成的底物。与已知PARP一致，特别是具有序列基序GX1X2X3GKG的那些，其中G为甘氨酸，K为赖氨酸，及X1、X2和X3各自独立为任何氨基酸。然而，惊人地，如由比较根据本发明PARP分子的NAD+结合结构域的氨基酸序列与前面揭示的人PARP1者所示，根据本发明的序列与NAD+结合结构域的已知序列明显地不同。
根据本发明的优选PARP分子优选地在普通的催化结构域上具以下的一般序列基序：
PXn(S/T)GX3GKGIYFA(SEQ ID NO:11)，特别地
(S/T)XGLR(I/V)XPXn(S/T)GX3GKGIYFA(SEQ ID NO:12)，
优选地
LLWHG(S/T)X7IL(S/T)XGLR(I/V)XPXn(S/T)GX3GKGIYFAX3SKSAXY
(SEQ ID NO:13)其中(S/T)描述此序列位置由S或T的可替代占有，(I/V)描述此序列位置由I或V的可替代占有及n为自1至5的整数值，及X基各自独立为任何氨基酸。最后的组合亦称为“PARP签名”组合。
自修饰结构域优选地同样存在于根据本发明的PARP中。其可位在例如在NAD+结合结构域N-端前面的自约100至200个氨基酸的区域中。
根据本发明的PARP同系物可附加地包括N-端NAD+结合结构域(即约30至约80个氨基酸更近于N端)、下式的亮氨酸拉链样序列基序
   (L/V)X6LX6LX6L(SEQ ID NO:14)其中(L/V)代表此序列位置由L或V的可替代占有，及X基各自独自为任何氨基酸。根据本发明所见的亮氨酸拉链基序明显地不同于自那些所述为果蝇PARP的位置。亮氨酸拉链可导致同质二聚体(2个PARP分子)或异源二聚体(1个PARP分子及与其不同的结合配偶体)。
根据本发明的PARP同系物优选地，附加地包括在N-端上的上述亮氨酸拉链似序列基序，即约10至250个氨基酸残基更近于N端，至少另一个以下的部分序列基序：
LX9NX2YX2OLLX(D/E)XbWGRVG，(基序1；SEQ ID NO:15)
AX3FXKX4KTXNXWX5FX3PXK，(基序2；SEQ ID NO:16)
QXL(I/L)X2IX9MX10PLGKLX3QIX6L，(基序3；SEQ ID NO:17)
FYTXIPHXFGX3PP，(基序4；SEQ ID NO:18)
及
KX3LX2LXDIEXAX2L          (基序5；SEQ ID NO:19)其中(D/E)描述此序列位置由D或E可替代地占有，(I/L)描述此序列位置由I或L可替代地占有，b为整数值10或11，及X基各自独立为任何氨基酸。最优选地，此些基序1至5全部存在于所述的序列中，而基序1最近于N端。
上述的PARP签名基序在根据本发明的蛋白质中跟随着至少另一个以下的基序：
GX3LXEVALG            (基序6；SEQ ID NO:20)
GX2SX4GX3PXaLXGX2V    (基序7；SEQ ID NO:21)及
E(Y/E)X2YX3QX4YLL     (基序8；SEQ ID NO:22)其中(Y/F)描述此序列位置由Y或F的可替代占有，a等于7至9及X在各例中为任何氨基酸。最优选地此3个C-端基序全部存在且在所述的序列中，而基序8最近于C端。
根据本发明的优选PARP结构可图式地描述如下：基序1至5/PARP签名/基序6至8或基序1至5/亮氨酸拉链/PARP签名/基序6至8
可能地，进一步氨基酸残基，例如多至40个排列在个别基序间及进一步氨基酸残基，例如多至80个排列在N端上和/或在C端上。
根据本发明特别佳的PARP同系物为蛋白质人PARP2、人PARP3、小鼠PARP3及其功能性相当物。称为PARP2的蛋白质包括570个氨基酸(参阅SEQ ID NO:2)。称为人PARP3的蛋白质可能地以2种形式存在。第1型包括533个氨基酸(SEQ ID NO:4)及第2型包括540个氨基酸(SEQ ID NO:6)。不同形式可能源自不同起始的转译。称为小鼠PARP3的蛋白质以2种形式存在，其不同在于5个氨基酸(15bp)的删除。第1型包括533个氨基酸(SEQ ID NO:8)及第2型包括528个氨基酸(SEQ ID NO:10)。本发明的PARP同系物在序列中显著不同于拟南芥的该PARP蛋白质(见以上)。例如，PARP2和PARP3不包括植物PARP特异肽序列AAVLDQWIPD，相对应于拟南芥蛋白质的氨基酸残基143至152。
本发明进一步涉及根据本发明PARP同系物的结合配偶体。此些结合配偶体优选地选自a)抗体及其片段，例如Fv、Fab、F(ab′)2，b)蛋白质性质的化合物，其例如经以上的亮氨酸拉链区域或另一个序列段，与PARP相互作用，及c)低分子量效应物，其调节生物PARP功能，例如催化性PARP活性，即消耗NAD+的ADP核糖苷化，或与活化剂蛋白质或与DNA结合。本发明进一步有关核酸，包括a)编码至少一个根据本发明的PARP同系物的核苷酸序列，或其互补的核苷酸序列；b)与如在a)中所特异的序列杂交的核苷酸序列，优选地在严紧条件下；或c)由于基因码简并性而由a)和b)中界定的核苷酸序列衍生的核苷酸序列。
根据本发明的合适核酸特别地包括至少一个部份序列，其编码上述氨基酸序列基序。
根据本发明的优选核酸包括如示于SEQ ID NO:1和3中的核苷酸序列，及特别地具有根据本发明PARP同系物的特性的部份序列，如包括以下的核苷酸序列a)示于SEQ ID NO:1的核苷酸+3至+1715；b)示于SEQ ID NO:3的核苷酸+242至+1843；c)示于SEQ ID NO:5的核苷酸+221至+1843；d)示于SEQ ID NO:7的核苷酸+112至+1710；或e)示于SEQ ID NO:9的核苷酸+1至+1584或a)、b)、c)、d)和e)的部份序列，其编码根据本发明PARP同系物的上述特性氨基酸序列基序。
本发明进一步有关表达盒，其包括在调节核苷酸序列的基因控制下至少一种根据本发明的上述核苷酸序列。此些可用以制备根据本发明的重组载体，例如病毒载体或质粒，其包括至少一个根据本发明的表达盒。
根据本发明的重组微生物以至少一种上述载体转化。
本发明亦有关以根据本发明的载体转染(transfigiert)外来基因哺乳动物。
本发明进一步有关体外检测方法，其检测PARP抑制剂，均相或多相地进行，其包括a)将无支持物的或有支持物的可聚-ADP-核糖苷化靶物与包括以下的反应混合液温孵
a1)根据本发明的PARP同系物；
a2)PARP活化剂；及
a3)PARP抑制剂或分析物，其中至少被怀疑为一个PARP抑制剂；b)进行聚ADP核糖苷化反应；及c)定性或定量地测定靶物的聚ADP核糖苷化。
检测方法优选地由将PARP同系物与PARP活化剂和PARP抑制剂或至少一个被怀疑为抑制剂的分析物预培养，在进行聚ADP核糖苷化反应前，进行约1-30分。
在由具单链断裂的DNA(称为根据本发明的“活化DNA”)活化后，PARP在NAD存在下聚-ADP核糖苷化大量的核蛋白质。此些蛋白质，包括PARP自身，及组蛋白等。
在检测方法中所用的优选可聚-ADP-核糖苷化靶物为以其天然形式的组蛋白蛋白质或自其衍生的可聚-ADP-核糖苷化相当物。由Sigma供应的组蛋白制备物(SIGMA，目录号H-7755；自小牛胸腺的组蛋白Ⅱ-AS型，Luck,J.M.等人，J.Biol.Chem.,233,1407(1958),Satake K.等人，J.Biol.Chem.,235,2801(1960))经使用为实例。原则上可能地使用易于PARP聚-ADP-核糖苷化的所有类型蛋白质或其部分。此些优选地为核蛋白质，例如组蛋白、DNA聚合酶、端粒酶或PARP自身。自相对应蛋白质衍生的合成肽亦可作为靶物。
在根据本发明的ELISA中，可能地使用在自约0.1微克/孔至约100微克/孔的范围内的组蛋白量，优选地约1微克/孔至约10微克/孔。PARP酶的量在自约0.2皮摩尔/孔至约2纳摩尔/孔的范围内，优选地自约2皮摩尔/孔至约200皮摩尔/孔，反应混合液在各例中包括100微升/孔。降至更小孔则相应更少的反应量。
在根据本发明的HTRF分析法中，采用相同量的PARP，及组蛋白或修饰组蛋白的量在自约2纳克/孔至约25微克/孔的范围内，优选地约25纳克/孔至约2.5微克/孔，反应混合液在各例中包括50微升/孔。降至更小则相应反应量更少。
根据本发明所用的PARP活化剂优选地为活化DNA。
不同类型的受损DNA可作用为活化剂。DNA损伤可由去氧核酸酶或其他DNA修饰酶(例如限制内核酸酶)消化，由照射或其他物理方法或化学处理DNA产生。进一步可能地以靶物方式使用合成寡核苷酸刺激DNA损伤情况。在藉实例所示的分析法中，自小牛胸腺的活化DNA已被采用(Sigma，产物号D4522；CAS:91080-16-9，由Aposhian和Kornberg的方法使用小牛胸腺DNA(SIGMA D-1501)和去氧核糖核酸酶第Ⅰ型(D-4263)制备。Aposhian,H.V.和Kornberg,A.,J.Biol.Chem.,237,519(1962))。活化DNA在反应步骤中在自0.1至1000微克/毫升的浓度范围下使用，优选地自1至100微克/毫升。
聚ADP核糖苷化反应在根据本发明的方法中由添加NAD+启动。NAD浓度在自约0.1微摩尔浓度至约10毫摩尔浓度的范围内，优选地在自约10微摩尔浓度至约1毫摩尔浓度的范围内。
在可多相地进行以上方法的变通方案中，结合支持物的靶物的聚ADP核糖苷化系使用抗聚(ADP-核糖)抗体测定。为达成此，反应混合液系与结合支持物的靶物分开，清洗及与抗体培养。此抗体本身可经标记。然而，作为检测结合抗聚(ADP-核糖)抗体的可替代法，标记的第二抗体或相对应的标记抗体断可予应用。合适的标记物为例如放射标记、发色团-或萤光团-标记生物素化、化学发光标记、具顺磁金属的标记，或特别地例如以辣根过氧化酶的酶标记。适当检测技术通常对熟谙此技艺者系已知的。
在可均相地进行以上方法的变异法中，无支持物的靶物以受体萤光团标记。在此例中所用的优选靶物为生物素化组蛋白，受体萤光团经抗生物素蛋白或链霉抗生物素蛋白与组蛋白的生物素基团偶合。特别合适作为受体萤光团的为藻胆蛋白质(例如藻蓝蛋白、藻红蛋白)，例如R-藻蓝蛋白(R-PC)、别藻蓝素(APC)、R-藻红蛋白(R-PE)、C-藻蓝蛋白(C-PC)、B-藻红蛋白(B-PE)或其互相或与萤光染剂如Cy5、Cy7或德州红(Tandem系统)的组合(Thammapalerd,N.等人，东南亚热带医学和公共健康会刊，27(2):297-303(1996)；Kronick,M.N.等人，临床化学，29(9),1582-1586(1986)；Hicks,J.M.,人体病理学，15(2),112-116(1984))。在实施例中所用的染剂XL 665为交联的别藻蓝素(Glazer,A.N.,Rev.Microbiol.,36,173-198(1982)；Kronick,M.N.,J.Imm.Meth.,92,1-13(1986)；MacColl,R.等人，藻胆蛋白质，CRC Press Inc.,Boca Raron,Florida(1987)；MacColl,R.at al,Arch.Biochem.Biophys.,208(1)42-48(1981))。
此外，在均相方法中优选的在测定未结合支持物的靶物的聚ADP核糖苷化，使用抗聚(ADP-核糖)抗体，其系以供体萤光团标记，其在因标记抗体与聚ADP-核糖苷化组蛋白结合而供体和受体在空间上接近时，能转移能量于受体萤光团。氪酸铕优选地作为抗聚(ADP-核糖)抗体的供体萤光团。
除使用氪酸铕外，其他化合物亦可能作为潜在供体分子。在一方面，此会留下氪酸盐笼(kryptatkafig)的修饰。由其他稀土金属如铽置换铕亦为可能的。决定性地，萤光持续时间越长时间迟滞越长(Lopez,E.等人，Clin.Chem.39/2,196-201(1993)；美国专利号5,534,622)。
上述的检测方法系基于以下原理，即PARP活性与在组蛋白上形成ADP-核糖聚合物量间有相关性。在此所述的分析法，以ELISA和HTRF(均相时间解析(time-resolved)萤光)形式，使用特定抗体可能定量分析ADP-核糖聚合物。此两种分析法的特定具体实施例系详述于以下实施例中。
发展的HTRF(均相时间解析萤光)分析系统使用特定的抗体测定在组蛋白上聚(ADP-核糖)的形成。相对于ELISA，此分析法在均质相中进行，而无分开和清洗步骤。此造成更高的样品产量及更少的可能误差敏感性。HTRF系基于在2种萤光团间“萤光共振能量转移(FRET)”。在FRET分析法中，激发的供体萤光团可当其在空间上相互接近时，转移其能量予受体萤光团。在HTRF技术中，供体荧光团为氪酸铕[(Eu)K]及受体为LX665，稳定化的别藻蓝素。氪酸铕系基于Jean Marie Lehn的研究(Strasbourg)(Lopez,E.等人，Clin.Chem.,39/2,196-201(1993)；美国专利号5,534,622)。
在均相分析法中，所有成份均于测定时出现。而此具进行分析法的优点(快速、复合性)，必要时需排除分析成份的干扰(原有的荧光、染剂的猝灭等)。HTRF通过双波长(665纳米、620纳米)下的时间延迟测定而排除如此干扰。HTRF具极长的衰退时间，时间延迟测定因此是可能的。不受短生背景荧光(例如自分析成份或物质库的抑制剂)影响。此外，测定总在2个波长下进行，以期补足有色物质的猝灭作用。HTRF分析法可例如在96-或384-孔微滴度板孔式下进行，及使用“发现HTRF微滴度板分析仪”(Canberra Packard)评估。
根据本发明亦提供的是以下PARP结合配偶体，特别地根据本发明的PARP同系物的体外筛选方法。
第一个变异法由以下进行a1)将至少一个PARP同系物固定在支持物上；b1)将固定化APRP同系物与其中被怀疑有至少一个结合配偶体的分析物接触；及c1)在适当时在一段培养时段后，测定与固定化PARP同系物结合的分析物成分。第二个变异法a2)将分析物固定在支持物上，其分析物包括至少一个PARP同系物的可能结合配偶体；b2)将固定化分析物与至少一个结合配偶体所找寻的一个PARP同系物，接触c2)在适当时在一段培养时段后，检视固定化分析物上PARP同系物的结合。本发明亦有关定性或定量测定编码PARP同系物的核酸的方法，其包括a)将生物样品与一定量根据本发明的外源核酸(例如与约20至500个碱基的长度或更长)培养、杂交、优选地在严格条件下，测定杂交的核酸及，在适当时与标准物比较；或b)将生物样品与一定量对编码PARP同系物核酸具特异性的寡核苷酸引物对培养，扩增核酸，测定扩增产物及，在适当时与标准物比较。本发明进一步有关定性或定量测定根据本发明PARP同系物的方法，其包括a)将生物样品与至少一个PARP同系物特异性结合配偶体温孵，b)侦测结合配偶体/PARP复合物及，在适当时c)将结果与标准物比较。
在此例中结合配偶体优选地抗PARP抗体或其结合片段，其在适当时载有可检测的标志。
根据本发明对PARP，特别地对PARP同系物及对其编码核酸序列的测定方法系合适的及对诊断脓毒性或局部缺血性组织损伤，特别是中风、心肌梗塞、糖尿病或脓毒性休克系有利的。
本发明进一步包括测定PARP效应物效率的方法，其包括a)将根据本发明的PARP同系物与包括具生理或病理PARP活性的效
应物的分析物培养，在适当时再除去效应物；及b)在适当时在添加底物或共底物后，测定PARP同系物的活性。
本发明进一步有关基因疗法组合物，其在基因疗法可接受的载体中包括核酸构建物，其编码a)包括根据本发明的编码核酸的反义核酸；或b)针对根据本发明非编码核酸的核糖酶；或c)特异PARP抑制剂。
本发明进一步有关医药组合物，在医药上可接受的载体中，包括至少一种根据本发明的PARP蛋白质，至少一种根据本发明的结合配偶体或至少一种根据本发明的编码核苷酸序列。
最后，本发明系有关在诊断或治疗在发展和/或进行的病理状态上PARP同系物的结合配偶体的用途，其中涉及至少一种PARP蛋白质，特别地根据本发明的PARP同系物，或自其衍生的多肽。使用的结合配偶体可例如为低分子量结合配偶体，其分子量可例如为少于约2000道尔顿或少于约1000道尔顿。
此外，本发明系有关诊断或治疗由能量不足介导病理状态的PARP结合配偶体的用途。为本发明目的的能量不足特别地为细胞能量不足，其经见于全身性或于个别身体区域、器官或器官区域，或组织或组织区域不适的病人。这些病症的特征在于，NAD和/或ATP损耗超出了NAD和/或ATP量的生理变异范围(上限或下限)，及优选地由具PARP活性的蛋白质，特别地根据本发明的PARP同系物，或自其衍生的多肽所介导。
“能量不足介导的疾病”，为本发明的目的，附加地包括组织损伤系来自因坏死或细胞凋亡所致的细胞死亡。根据本发明的方法系适合治疗和预防因细胞计划凋亡或坏死的细胞损伤所致的组织损伤；因局部缺血和/或再灌注对神经组织的损伤；神经疾病；神经退行性疾病；血管中风；治疗和预防心血管疾病；治疗其他疾病或病况如，老年性黄斑变性、AIDS或其他免疫缺陷疾病；关节炎；动脉粥样硬化症；恶病质；癌症；骨骼肌的退行性疾病；糖尿病；颅外伤；胃肠道的炎性疾病，例如Crohnsche氏症；肌肉营养不良；骨关节炎；骨质疏松症；慢性和/或急性疼痛；肾失调；视网膜局部缺血；脓毒性休克(例如内毒素休克)；皮肤老化或全身老化；老化的全身显现。根据本发明的方法可附加地予以采用，以延长身体组织细胞的寿命和增殖能力及，与照射疗法相组合，以敏感化肿瘤细胞。
本发明特别有关使用如上界定的PARP结合配偶体以诊断或治疗(急性或预防)由能量不足所介导的病理状态，及选自神经退行性疾病，或由脓毒性或局部缺血所致的组织损伤，特别地神经毒性紊乱、中风、心肌梗塞、在梗塞解离(Infarktlyse)期间或其后的损伤(例如以TPA、Reteplase或机械性以激光或旋光束(Rotablator)引起)及在心瓣置换期间或其后的微梗塞，动脉瘤切除术和心脏移植、头和脊髓的重伤、肾梗塞(急性肾衰竭、急性肾无能或在紧移植和其后的损伤)、骨骼肌的损伤、肝梗塞(肝衰竭、在肝移植期间或其后的损伤)、外周神经病痛、AIDS痴呆、脓毒性休克、糖尿病、在局部缺血后发生的神经退化疾病、重伤(颅脑重伤)、大出血、蜘蛛膜下出血和中风，以有神经退化疾病如阿尔滋海默氏病、多梗塞痴呆、哈丁顿氏症、帕金森氏症、肌萎缩侧索硬化、癫痫，特别地全身性癫痫发作如癫痫小发作(Petitmal)和紧张阵挛发作及部分癫痫发作如颞叶性，及复合的部分发作、肾衰竭，亦于肿瘤的化学治疗和转移的预防及以治疗炎症和风湿性疾病，例如类风湿关节炎，进一步以治疗极窄冠状动脉和极窄外周动脉，例如腿动脉的脉管再形成。“局部缺血”，为本发明目的，包括氧的局部性不正常供应予组织，由动脉血流封闭所致。球状局部缺血在血流至整个脑经中断一段有限时间时发生。此可例如由心停止所致。病灶局部缺血在脑的部分经切断其正常血供应时发生。病灶局部缺血可由血管的血栓性栓塞封闭，由脑重伤、水肿或脉肿瘤所致。甚至短暂的局部缺血可导致广泛神经元损伤。虽然对“神经组织”的损伤可在局部缺血开始后数天或数周内发生，但一些永久性损伤(例如坏死性细胞死亡)在血供应中断后最初几分钟内发生。此损伤例如由谷氨酸的神经毒性所致及接着二次再灌注，例如自由基的释出(例如氧自由基、NO自由基)。局部缺血可同样地在其他器官和组织中发生，例如在心(心肌梗塞及由冠状动脉的闭塞所致的其他心血管疾病)中或在眼睛(视网膜的局部缺血)中。
本发明附加地有关使用有效治疗量的PARP结合配偶体以影响神经元活性。“神经元活性”，为本发明目的，包括刺激损伤的神经元、促进神经元再生或治疗神经元疾病。“神经元损伤”，为本发明目的，包括各型对“神经组织”的损伤的及自此损伤所至的每一项物理或精神损伤或死亡。损伤的致因本质上为代谢、毒性、化学或热的及包括，藉实例，局部缺血、缺氧症、重伤、脑血管损伤、手术、压力、出血、照射、血管痉挛、神经变性疾病、感染、癫痫、知觉疾病、谷氨酸代谢混乱及因而所致的继发性。“神经组织”，为本发明目的，包括形成神经系统的不同成份，特别地由神经元、胶质细胞、星状细胞、施旺氏细胞、内部及供给用的血管系统、CNS、脑、脑干、脊髓、外周神经系统等组成。
“神经保护”，为本发明目的，包括神经元损伤的降低、断绝、减缓或改进，及暴露在神经元损伤下的神经组织的保护、恢复及再生。
“神经变性疾病的预防”包括在人体中预防、减缓和改进神经变性疾病的可能性，其已诊断出如此疾病或其已包括在此些神经变性疾病的相应的风险人群中。已罹患此些疾病症状的患者亦可接受此种治疗。
“治疗”，为本发明目的，包括(ⅰ)在具如此倾向的人体中预防疾病、混乱或病状；(ⅱ)由减缓其发展预防疾病、混乱或病状；及(ⅲ)改进疾病、混乱或病状。
可由根据本发明的方法治疗的“神经学疾病”实例为神经痛(三叉神经、舌咽)、重症肌无力、肌肉营养不良、肌萎缩侧索硬化(ALS)、进展性肌肉萎缩性、由中毒所致的外周神经病痛(例如铅中毒)、孔巴二氏症候群、哈丁顿氏病、阿尔滋海默氏症、帕金森氏症或神经丛疾病。根据本发明的方法优选地适于治疗神经学疾病，选自由物理损伤或生病所致的外周神经病痛；颅外伤，例如重创性脉损伤；脊髓的物理损伤；与脑损伤有关的中风，如与缺氧和脑损伤联合的中风，及脑再灌注损伤；脱髓鞘疾病(脊髓病、阿尔滋海默氏症、帕金森氏症、哈丁顿氏症、肌萎缩侧索硬化)。
根据本发明的方法可附加地用以治疗心血管疾病。“心血管疾病”，为本发明目的，包括那些导致局部缺血者或由局部缺血或心的局部缺血/再灌注所致者。实例为冠状血管疾病(例动脉粥状硬化症)、胸部绞痛、心肌硬塞、因心停止或分流手术的心血管损伤。
根据本发明的方法可用以治疗癌症或在照射疗法中以敏感化癌细胞。“癌症”一词经了解为广的观念。根据本发明蛋白质的调节剂可作为“抗癌疗剂”。例如，那些方法可用以治疗各型的癌症或肿瘤细胞，如ACTH-生成肿瘤、急性淋巴或淋巴胚细胞白血病；急性或慢性淋巴细胞白血病；急性非淋巴细胞白血病；膀胱癌；脑肿瘤；乳癌；子宫颈癌；慢性髓细胞白血病；肠癌；T区域淋巴瘤；子宫内膜组织异位；食道癌；胆囊癌；尤恩氏癌；头颈癌；舌癌；霍奇金氏病；卡波西氏病；肾癌；肝癌；肺癌；间皮瘤、多发性骨髓瘤；神经田细胞瘤；非霍奇金氏淋巴瘤；骨肉瘤；卵巢瘤；神经胶母细胞瘤；乳房瘤；子宫颈瘤；前列腺瘤；胰瘤；阴茎瘤；神网膜胚细胞瘤；皮肤癌；胃癌；甲状腺癌；子宫瘤；阴道瘤；威而斯氏肿瘤；或营养层瘤。“放射敏感化物”或“照射敏感化物”，为本发明目的，系有关在体内增加细胞对电磁辐射的照射(例如X-射线)的敏感化，或加速此照射处理的分子。照射敏感化物增加癌细胞对电磁辐射的毒性作用的敏感化。那些在文献中所揭示者包括丝裂霉素C、5-溴脱氧尿苷和灭滴灵。可能地使用具波长在自10-20至10米范围内的辐射，优选地γ射线(10-20至10-13米)、X-射线(10-11至10-9米)；紫外辐射(10纳米至400纳米)、可见光(400纳米至700纳米)、红外辐射(700纳米至1毫米)及微波辐射(1毫米至30厘米)。
可由如此疗法治疗的疾病特别地为赘瘤疾病、良性或恶性肿瘤和癌症。其他疾病使用电磁辐射的治疗系同样可能的。
本发明现将以参阅随附的图更详细地叙述。
在图1中，人PARP(人PARP1)及根据本发明的2个优选PARP(人PARP2、人PARP3、鼠PARP3)的序列对仗。在人PARP1和人PARP2、人PARP3或鼠PARP3间的序列一致性系在码框内描述。大多数序列在对仗内指出。人PARP1的锌指基序系位在与氨基酸残基21至56及125至162相对应的序列区段上；
在图2中，具不同人组织的Northern Blot法在说明根据本发明PARP2和PARP3分子的组织分布。第1行：脑；第2行：心；第3行：骨髓肌；第4行：结肠；第5行：胸腺；第6行：脾；第7行：肾；第8行：肝；第9行：肠；第10行：胎盘；第11行：肺；第12行：外周血液白血球；尺寸标准物(kb)的个别位置经指出。
在图3中，具进一步不同人组织的Northern Blot法在说明根据本发明PARP3分子的组织分布。第1行：心；第2行：脑；第3行：胎盘；第4行：肺；第5行：肝；第6行：骨骼肌；第7行：肾；第8行；胰；尺寸标准物(kb)的个别位置经指出。
在图4中，具不同人组织的Western Blot法在说明在蛋白质量下根据本发明PARP3分子的组织分布。第1行：心；第2行：肺；第3行：肝；第4行：脾；第5行：肾；第6行：结肠；第7行：肌肉；第8行：脑；尺寸标准物(kb)的个别位置经指出。
在图5中，具不同人组织的Western Blot法在说明根据本发明PARP3分子的组织分布。第1行：额皮质；第2行：后皮质；第3行：小脑；第4行：海马；第5行：嗅蕾；第6行：纹状体；第7行：丘脑；第8行：中脑；第9行：侧皮质；第10行：脑桥；第11行：质髓；第12行：脊髓。
在图6中，PARP分析法(ELISA)的图式表示。
在图7中，PARP分析法(HTRF)的图式表示。
本发明的进一步优选具体实施例系述于以下节中。PARP同系物及功能性相当物
除非另有说明，为本说明书目的，氨基酸序列经指示以N端开始。若为氨基酸使用1字码时，然后G为甘氨酸、A为丙氨酸、V为缬氨酸、L为亮氨酸、I为异亮氨酸、S为丝氨酸、T为苏氨酸、D为天冬氨酸、N为天冬酰氨、E为谷氨酸、Q为谷氨酰胺、W为色氨酸、H为组氨酸、R为精氨酸、P为脯氨酸、K为赖氨酸、Y为酪氨酸、F为苯丙氨酸、C为半胱氨酸及M为甲硫氨酸。
本发明不限制于上述特异的PARP同系物。相反地，为其功能性相当物的那些同系物亦包含在内。功能性相当物包括天然，例如种特异或器官特异的，及在此所述特异蛋白质的人工制备变异体。根据本发明的功能性相当物由添加、取代、反转、插入和/或删除人PARP2(SEQ IDNO:2)、人PARP3(SEQ ID NO:4和6)及鼠PARP3(SEQ ID NO:8和10)的1或多个氨基酸残基而不同，其至少保守由功能性催化C-端结构域所介导蛋白质的NAD-结合功能。同样地，优选地保守聚(ADP-核糖)生成的催化活性。功能性相当物在适当时，亦包括那些变异体，其中与亮氨酸接链相似的区域当必要时保守着。
再者，可能地例如自人PARP2或人PARP3的序列出发，由那些具相似物理化学性质的氨基酸(容积、碱性、疏水性等)置换一些氨基酸。可能地，例如精氨酸由赖氨酸残基置换，缬氨酸残基由异亮氨酸残基或天冬氨酸残基由谷氨酸残基置换。然而，亦可能的在序列中1或多个氨基酸经交换，添加或删除，或此些方法合并使用。已以此方式自人PARP2或人PARP3序列修饰的蛋白质与起始序列有至少60％，优选地至少75％，极特别佳地至少85％的同源性，使用皮尔生和利埔曼的互除法计算，Proc.Natl.Acad.Sci(美国)85(5),1988,2444-2448。
以下的同源性在氨基酸量和DNA量下在人PARP1、2和3间测定(快速A程式，皮尔生和利埔曼，上引)：
氨基酸同源性：
百分相同性 在PARP签名的百分相同性
PARP1/PARP2 41.97％(517) 85％(50)
PARP1/PARP3 33.81％(565) 53.1％(49)
PARP2/PARP3 35.20％(537) 53.1％(49)
括弧内的数字指出重叠氨基酸的数字。
DNA同源性：
PARP1/PARP2 60.81％(467) 77.85％(149)
PARP1/PARP3 58.81％(420) 59.02％(61)
PARP2/PARP3 60.22％(269) 86.36％(22)
括弧内的数字指出重叠核苷酸的数字。
根据本发明的多肽可归类为均相的聚(ADP-核糖)聚合酶，基于在催化结构域区域的极大相似性。
对本发明亦必要地，这种新的PARP同系物不具传统的锌指基序。此意味着此些酶不必要涉及DNA修复或以不同于PARP1的方式修复，但仍能进行其病理机制(NAD+消耗及因此因ATP消耗的能量消耗)。在Western Blot法中可见的强蛋白质表达，特别地PARP3，表明它在NAD消耗中的显著角色。此对药物发展特别重要。根据本发明聚合酶的潜在新颖抑制剂因此可抑制病理功能，而对想要的生理性质不具不利作用。此对目前已知对抗PARP的抑制剂是不可能的，因为其总是亦抑制DNA修复功能。已知PARP抑制剂的潜在致癌作用因此易于了解。亦可理解地，在设计PARP抑制剂使其在高亲和力下有效地抑制所有PARP同系物。在这种情形的下，依需要而定的这种潜在作用是可以预料的。
根据本发明优选的PARP同系物及示于SEQ ID NO:2(人PARP2)，有利地自人脑、心、骨骼肌、肾和肝分离。人PARP2在其他组织或器官的表达明显地较弱。
根据本发明优选的PARP同系物及示于SEQ ID NO:4和6(人PARP3)，可有利地自人脑(在此例中，极佳地自海马)、心、骨骼肌、肝或肾。人PARP3在其他组织或器官的表达，如肌肉或肝，明显地较弱。
熟谙蛋白质分离者将利用制备方法的组合，其在各例中最适合自组织中分离根据本发明的天然PARP，或自细胞培养液中重组体制备根据本发明的PARP。合适的标准制备方法例如，述于Cooper,T.G.，生物化学方法，由华特孔拉特出版，柏林，纽约或于Scopes,R.蛋白质纯化，Springer Verlag，纽约、海德堡、柏林。
本发明附加地有关PARP2和PARP3同系物，虽然其可自其他真核生物种分离，即无脊椎动物类或脊椎动物类，特别地其他哺乳动物，例如小鼠、大鼠、猫、狗、猪、绵羊、牛、马或猴子，或自其他器官例如心肌分离，其具由根据本发明的PARP预定的必要结构和功能性质。
特别是，可自人脑分离的人PARP2及其功能性相当物为发展神经退化疾病例如中风的抑制剂的优选剂。因为可假定地，基于PARP2作为指示剂的药物发展可能地发展最适合用于人脑的抑制剂。然而，可排除基于PARP2发展的抑制剂，在其他器官中治疗PARP介导的病理状态的应用(见根据本发明蛋白质的组织分布)。
与PARP1相似的PARP2及假定地PARP3亦由受伤的DNA活化，但由假定的不同机制。在DNA修复的意义是可理解的。根据本发明的PARP封阻在如癌症的指示中亦应为有利的(例如在肿瘤病患的放射敏感化中)。
根据本发明的PARP及其功能性相当物的另一个必需生物学性质是使与相互作用配偶体结合的能力为可视的。人PARP2和3不同于自高等真核生物如，特别地哺乳动物的前面揭示PARP，在于具潜在所谓亮氨酸拉链基序。此为蛋白质-蛋白质相互作用的典型基序。可能地，此些基序由相互作用配偶体允许PARP活性的调整。此附加的结构元件因此亦提供可能的起始点，以发展PARP效应物，例如抑制剂。
本发明因此进一步有关可与PARP2和/或3相互作用的蛋白质，优选地那些可引起其活化或去活化者。
本发明进一步有关蛋白质，其仍具上述配体结合活性，其可自具体公开的氨基酸序列开始经定向修饰制备。
可能地采用自根据本发明蛋白质的肽序列出发制备合成合成肽，单独或组合，作为产生多克隆或单克隆抗体的抗原。亦可能地，采用PARP蛋白质或其片段以生成抗体。本发明因此亦有关根据本发明PARP蛋白质的肽片段，其包括特性化部分序列，特别地那些寡或多肽者，其包括至少一个上述的序列基序。此型的片段可例如由蛋白水解消化PARP蛋白质或由肽的化学合成获得。新颖特异的PARP2和PARP3结合配偶体
对抗根据本发明蛋白质的活性和优选地选择性抑制剂使用上述为PARP2和PARP3的结合配偶体的特异分析法系统发展。此些抑制剂视情况亦相对PARP1有效。
根据本发明提供的抑制剂对PARP2具强抑制活性。Ki值在此例中可少于约1000纳摩尔浓度，如少于约700纳摩尔浓度，少于约200纳摩尔浓度或少于约30纳摩尔浓度，例如约1至20纳摩尔浓度。
根据本发明的抑制剂亦可对PARP2具惊人的选择性。此由根据本发明如此抑制剂的Ki(PARP1)∶Ki(PARP2)比值所示，其例如大于3或大于5，如例如大于10或大于20。
应提及的实例为4-(N-(4-羟基苯基)胺基甲基)-(2H)-2,3二氮杂萘-1-酮。此及其他类似化合物的制备可根据以下进行：Puodzhyunas等人，Pharm.Chem.J.1973,7,566或Mazkanowa等人，Zh.Obshch.Khim.,1958,28,2798或Mohamed等人，Ind.J.Chem.B.,1994,33,769,各自引入作为参考。
以上鉴定的化合物显示PARP2的Ki值为113纳摩尔浓度及相对于PARP3，对PARP2有8倍选择性。编码PARP同系物的核酸：
除非另有说明，核苷酸序列在本说明书系指示自5′至3′方向。
本发明进一步有关编码上述蛋白质的核酸序列，特别地那些具在SEQ ID NO:2、4、6、8和10中描述的氨基酸序列者，但不限于此。根据本发明可使用的核酸序列亦包括等位基因变异体，如以上所述为氨基酸序列，其可由删除、反转、插入、添加和/或取代核苷酸获得，优选地在SEQ ID NO:1、3、7和9中所示的核苷酸，但必要地保守相对应基因产物的生物性质和生物活性。可使用的核苷酸序列例如可由导致沉默的核苷酸取代(而未改变氨基酸序列)或保守氨基酸变化的核苷酸取代(交换相似尺寸、电荷、极性或溶解度的氨基酸)获得。
根据本发明的核酸序列亦包含基因的功能性相当物，如真核生物同源物，例如自非脊椎动物如Caenorhabditis如果蝇，或脊椎动物，优选地自上述的哺乳动物。优选的基因为那些自脊椎动物者，其编码具如上述的本发明必要性质的基因产物。
根据本发明的核酸可以传统方式由不同途径获得：
例如，基因组或cDNA库可筛选编码PARP分子或其部分的DNA。例如，自人脑、心或肾获得的cDNA库可以合适的探针筛选标记的单链DNA片段，其与合适长度选自SEQ ID NO:1或3的部分序列，或与其互补的序列相对应。为此目的，可能地例如已转移至合适克隆载体的DNA库片段，在转化至细菌后，在琼脂板上涂板培养。克隆然后转至硝酸纤维素滤纸，及在DNA变性后，与标记探针杂交。阳性克隆然后经分离及特性化。
编码根据本发明的PARP同系物或部分片段的DNA亦可自本发明内含的序列资料开始而化学合成。例如，可能地为此目的，具约100个碱基长度的寡核苷酸以本质上已知的方式，由例如提供合适的末端限制裂解位点而合成及依序连结。
根据本发明的核苷酸序列亦可藉聚合酶链反应(PCR)制备。为此，靶物DNA，例如自合适长度克隆的DNA与一对合成寡核苷酸引物杂交，其具约15个碱基的长度及其结合至靶物DNA的相反端。位在其间的序列区段然后以DNA聚合酶填入。此循环重复许多次使靶物DNA扩增(参阅怀特等人(1989)，基因学趋势5,185)。
根据本发明的核酸序列亦当然地包括截短序列、编码和非编码的单链DNA或RNA、互补DNA序列、mRNA序列及自其衍生的cDNA。
本发明进一步包括在严格条件下与以上序列杂交的核苷酸序列。严格的杂交条件，为本发明目的，在杂交序列具约70至100％同源性时存在，例如约80至100％或90至100％(优选地至少约40，例如约50、100、150、200、400或500个氨基酸的氨基酸区段中)。
筛选DNA，特别地cDNA库的严格条件在杂交混合液以0.1XSSC缓冲液(20XSSC缓冲液=3摩尔浓度NaCl、0.3摩尔浓度柠檬酸钠，pH7.0)和0.1％SDS在约60℃的温度下清洗时存在。
Nothern Blot分析，例如，在约65℃的温度以0.1X SSC,0.1％SDS的严格条件下分析及清洗。核酸衍生物及表达构建物：
核酸序列当然地亦包括衍生物，例如启动子变异体或可替代性的剪切变异体。操作地连结至根据本发明核苷酸序列上游的启动子可再由核苷酸添加或取代、反转、插入和/或删除修饰，但不减弱启动子的功能性或活性。启动子亦可由修饰其序列而具增加的活性，或由更有效的启动子，甚至来自异种生物的启动子，完全取代。上述的启动子可经用以制备根据本发明的表达盒。
可提及的人PARP2剪接变异体的特定实例为：
变异体人PARP2a：删除碱基对766至904(参阅SEQ ID NO:1)。此导致具新的终止密码子的移码(“TAA”相对应于SEQ ID NO:1的核苷酸922至924)。
变异体人PARP 2b：在核苷酸204(SEQ ID NO:1)后插入5′-gta tgc cag gaa ggt cat ggg cca gca aaa ggg tct ctg-3′。这样一来，以插入物：GMPGRSWASKRVS延伸氨基酸序列
核酸衍生物亦指变异体，其在起始密码子前面自-1至-1000区域内的核苷酸序列已经修饰，使基因表达和/或蛋白质表达增加。
除上述的核苷酸序列外，根据本发明可使用的核酸构建物在功能性、操作连结中已包括1或多个其他的调节序列，如启动子、扩增信号、增强子、聚腺苷化序列、复制起点、报告基因、可选定标记基因及类似物。此连结可，根据所要的用途，导致基因表达的增加或降低。
在新颖调节序列的外，可能地天然调节序列仍存在于真实结构基因前面。此天然调节可在适当时由基因修饰而关闭，以增加或降低的基因表达。然而，基因构建物亦可具更简单的结构，即无附加的调节信号插在结构基因前面，及具其调节的天然启动子并未经删除。或者，天然调节序列以一种方式突变，使调节不再发生，及基因表达经增强或消弱。亦可能地在核酸序列的3′端上插入附加的有利的调节元件。核酸序列可以在基因构建物中以1或多拷贝存在。
根据本发明表达方法的有利调节序列例如存在于启动子中，如cos、tac、trp、tet、trp-tet、lpp、lac、lpp-lac、lacIg、T7、T5、T3、gal、trc、ara、SP6、1-PR或1-PL启动子，其有利地用于革兰氏阴性菌中。其他有利调节序列系存在于例如革兰氏阳性启动子amy和SPO2中，于酵母启动子ADC1、MFa、AC、P-60、CYC1、GAPDH中或在植物启动子CaMV/35S、SSU、OCS、lib4、usp、STLS1、B33、nos中或在遍在蛋白或菜豆蛋白启动子中。
可能地原则上使用具其调节序列的所有天然启动子。亦可能及有利地使用合成的启动子。
那些调节序列意在使核酸序列的特定表达和蛋白质表达成为可能。此指例如，基于宿主生物，基因仅在诱导后表达或过度表达，或其立即表达和/或过度表达。
调节序列或因子优选地可再对表达具正面影响，及因此增加或降低。因此，调节元件的增强可有利地在转录阶段发生，藉使用强转录信号如启动子和/或增强子。然而，可能地由例如，改进mRNA的稳定性而增强转译作用。
增强子指例如DNA序列经RNA聚合酶和DNA间的改进相互作用而增加表达。
重组核酸构建物或基因构建物，为在合适的宿主生物中表达，有利地插入宿主特异的载体中，其使基因在宿主中最适表达成为可能。载体对熟悉熟谙此技艺者系熟知的及可见于例如“克隆载体”(Pouwels P.H.等人，编者，Elsevier，阿姆斯特丹-纽约-牛津，1985)。除质粒外，载体亦指熟谙此技艺者所知的所有其他载体，例如噬菌体、病毒如SV40、CMV、杆病毒和腺病毒、转座子、IS元件、粘粒、柯斯质粒及线性或环状DNA。此些载体可在宿主生物或染色体复制中经历自我复制。构建物的表达：
上述根据本发明的重组构建物有利地导入合适的宿主系统中表达。熟谙此技艺者所熟悉的克隆与转移感染方法优选地使用，以期使那些核酸在特殊表达系统中表达。合适的系统描述于例如分子生物学的目前实验计划，F.Ausubel等人，编者，怀尼内科学，纽约，1997。
合适的宿主生物原则上为所有生物，其可能地表达根据本发明的核酸、其对偶基因变异体、其功能性相当物或衍生物或重组核酸构建物。宿主生物指例如细菌、真菌、酵母、植物或细胞。优选的生物为细菌，如大肠杆菌属，例如大肠杆菌、链霉属、芽孢杆菌属或假单孢菌属，真核微生物如啤酒酵母菌、霉菌属，动物或植物的高等真核生物的细胞，例如Sf9或CHO细胞。
基因产物亦可在需要时在导入外来基因生物中表达，如导入外来基因的动物，如特别地小鼠、绵羊或导入外来基因植物。导入外来基因生物亦可为所谓“剔除”的动物或植物，其中相对应的基因关闭，例如由突变或部分或完全删除。
宿主生物和此些生物适当的载体如质粒、病毒或噬菌体，例如具RNA聚合酶/启动子系统的质粒、噬菌体λ、μ或其他温和噬菌或转座子和/或其他有利的调节序列的组合，形成表达系统。表达系统一词优选地指，例如哺乳动物细胞如CHO细胞和载体如pcDNA3neo载体的组合，其载体适合哺乳动物细胞。
如上述，基因产物亦可有利地在导入外来基因动物，例如小鼠、绵羊或导入外来基因植物中表达。同样可能地计划进行以自核酸衍生的RNA的无细胞转译系统。
基因产物亦可以治疗或诊断合适的片段形式表达。为分离重组蛋白质，可能和有利地使用载体系统或寡核苷酸，其由一些核苷酸序列而延伸cDNA因此编码供作简化纯化的修饰多肽。此些的合适修饰例如为所谓标志，其作为锚着物着物，例如称为六组氨酸锚着物的修饰，或可由抗体识别为抗原的抗原决定部位(例如述于Harlow,E.和Lane,D.,1988，抗体：实验室手册。冷泉港(纽约)出版社)。此些锚着物可用以连结蛋白质至固体支持物，例如聚合物基质，其可例如填充至层析柱中，或至微滴度板或至另一个支持物。
此些锚着物亦可在同时用以识别蛋白质。亦可能地使用识别蛋白质的传统标记如萤光染剂、酶标记，其在与底物反应后形成可检测的反应产物，或放射性标记、单独或联结着衍生化蛋白质的锚着物。抗体的制备：
抗-PARP2抗体以熟谙此技艺者熟悉的方式制备。抗体指多克隆、单克隆、人或人化抗体或其片段，单链抗体或亦指合成抗体，同样地抗体片段如Fv、Fab和F(ab′)2。合适的制备方法例如述于Campbell,A.M.,单克隆抗体技术，(1987)Elsevier Verlag，阿姆斯特丹、纽约、牛津及于Breitling,F.和Dubel,S.,重组抗体(1997)，SpektrumAkademischer Verlag，海德堡。编码序列的进一步用途：
本cDNA附加地提供克隆新颖PARP基因的基因组序列基础。此亦包括相关的调节或启动子序列，其例如可由定序位在根据本发明的cDNA5′上游或位在基因插入序列的区域获得。cDNA序列资讯亦藉已知方法的助为制备反义分子或核糖酶的基础(参阅Jones,J.T.和Sallenger,B.A.(1997)Nat.Biotechnol.15,902；Nellen,W.和Lichtenstein,C.(1993)TIBS,18,419)。基因组DNA同样地用以制备上述的基因构建物。
使用核苷酸序列或其部分的另一个可能性在产生导入外来基因动物。在合适动物模型中序列资讯的导入外来基因过度表达或基因剔除可提供进一步有价值的资讯，有关新颖基因的(病)生理学。治疗应用：
在普遍缺乏根据本发明的蛋白质的情况中，可能地采用一些置换方法。一方面，天然或重组蛋白质可以其编码核酸(DNA或RNA)直接或由基因疗法施用。可能地使用为此的任何合适载体，例如病毒和非病毒载体。合适的方法例如述于由Strauss和Barranger的基因疗法概念(1997),Walter de Gruyter，出版商。另一个可替代法系由合适的药剂刺激内源基因提供。
亦可能地例如由蛋白酶封阻根据本发明PARP的周转(turn over)或去活化。最后，根据本发明PARP的抑制剂或拮抗剂可采用。
在PARP过量存在或过度活化的情况中，不同类型的抑制剂可采用。此抑制可由反义分子、核糖酶、寡核苷酸或抗体，及由低分子量化合物达成。
根据本发明的活性物质，即PARP蛋白质、核酸和PARP结合配偶体例如抗体或调节剂，可以单一治疗活性物质或以与其他治疗活性物质的混合物施用。其可以如此施用，但通常其以医药组合物形式施用，即以活性物质与至少一种合适医药载体或稀释剂的混合物。活性物质或组合物可以适合特殊治疗目的的任何方式，例如口服或肠外施用。
医药组合物和医药载体或稀释剂的本质依所要的施用模型而定。口服组合物可例如为片剂或胶囊的形式，及可含惯用赋形剂如粘合剂(例如糖浆、阿拉伯胶、明胶、山梨糖醇、黄蓍胶或聚乙烯基吡咯烷酮)、填充剂(例如乳糖、糖、玉米淀粉。磷酸钙、山梨糖醇或甘氨酸)、润滑剂(例如硬脂酸镁、滑石、聚乙二醇或二氧化硅)、崩解剂(例如淀粉)或湿润剂(例如月桂基硫酸钠)。口服液体产物可为水性或油性悬浮液、溶液、乳化液、糖浆、酏剂或喷雾剂等的形式，或可为干粉形式，供以水或另一种合适载体复原。此些形式的液体产物可含传统添加物，例如悬浮剂、香味剂、稀释剂或乳化剂。可能地采用肠外施用溶液或悬浮液及传统的医药载体。根据本发明活性物质的肠外施用有利地使用液医药组合物进行，其可以肠外，特别地静脉内施用。此在适合此目的的医药可接受载体中优选地含有效量的至少一种活性物质，优选地以溶解形式。适合此目的的医药载体实例特别地为水溶液，例如生理盐水、磷酸盐缓冲盐水、林格氏液、林格氏乳酸溶液及类似物。再者，组合物可含进一步添加物如抗氧化剂、螯合剂或抗微生物剂。
在各例中根据本发明活性物质剂量的选定及特殊施剂时程系为治疗医师的决定。后者将选择合适的剂量及适当的施剂时程，根据选定的施用途径、在各例中医药的效力、要治疗疾病的本质和严重性及病人的状况和其对治疗的反应。因此，例如药理活性物质可以约0.5毫克至约100毫克每千克体重和天的剂量施至哺乳动物(人或动物)。其可以单一剂量或以多次剂量施用。非治疗应用：
根据本发明的核酸，例如cDNA、基因组DNA、启动子和多肽及其部分片段，亦可以重组成非重组形式使用，供发展不同的试验系统。
例如，可能地建立试验系统，其在试验物质存在下适合测定启动子或蛋白质的活性。在此例中测定的方法优选地简单的，例如比色测定、发光测定、荧光测定、免疫或放射性方法，及优选地允许要快速测定的大数目试验物质。此型的试验系适合及有利地供所谓高产量筛选。此些试验系统允许试验物质就其结合至其激动、拮抗或抑制根据本发明的蛋白质进行评估。
在人体中测定根据本发明蛋白质或其潜在mRNA的量、活性和分布可用以诊断、以测定倾向及以监测一些疾病。同样地，cDNA序列及基因序列可提供有关一些疾病的基因素因和倾向资讯。可能地为此目的使用多种类和形式的DNA/RNA探针和抗体。根据本发明的核苷酸序列或其部分可进一步以适当探针的形式使用，以检测点突变、删除或插入。
根据本发明的蛋白质可进一步用以鉴定及分离其天然配体或相互作用配偶体。根据本发明的蛋白质可附加地用以鉴定和分离人工或合成的配体。为此目的，重组制备或纯化的天然蛋白质可以一种方式衍生化，即其具允许连结至支持物物质的修饰。以此方式结合的蛋白质可与不同分析物温孵，例如蛋白质萃取物或肽库或其他来源的配体。特异结合的肽、蛋白质或低分子量、非蛋白质物质可以此方式分离和特性化。非蛋白质物质指例如低分子量化学物质，其例如可源自传统药物合成或自所谓物质库，其经组合地合成。
使用的蛋白质萃取物系例如衍生自植物的均质物或植物的部分、微生物、人或动物组织或器官。
配体或相互作用配偶体亦可由如酵母2-杂交系统的方法鉴定(Fields,S.和Song,O.(1989)自然，340,245)。可在此例中采用的表达库可例如衍生自人组织，例如脑、心、肾等。
根据本发明的核酸序列及由编码的蛋白质可予采用以发展试剂、激动剂和拮抗剂或抑制剂，以诊断和治疗与活化表达根据本发明蛋白质序列的一，例如其增加或降低表达有关的慢性和急性疾病。发展的试剂、激动剂、拮抗剂或抑制剂其后可用以产生治疗或诊断疾病的医药制备物。可能与此相关的疾病实例为以下者：脑、外周神经系统、心血管系统或眼睛、脓毒性休克、类风湿性关节炎、糖尿病、急性肾衰竭或癌症。
根据本发明蛋白质在那些指示的相关性系使用特定的抑制剂在相关的动物模型中确认。
本发明现藉参阅以下实施例而详细说明。实施例1:PARP2和PARP3 cDNA的分离
本cDNA序列第1次被发现于自人脑cDNA库的cDNA克隆序列分析上(人脑5′伸展加上cDNA库，#HL3002a，克隆技术)。小鼠PARP3克隆自“λ三重小鼠脑cDNA库”分离(选择技术货号ML5004t)。此些克隆的序列描述于SEQ ID NO:1、3、7和9。实施例2:PARP2和PARP3在人体组织的表达
人PARP2和PARP3的表达在12个不同人体组织中由NorthernBlot分析法探讨。由克隆技术供应的多量组织Northern Blot(MTNTM)(#7760-1和#7780-1)为此目的与RNA探针杂交。探针由相对应的人PARP2和人PARP3 cDNA在地高辛-标记核苷酸存在下，与厂商的方法一致地体外转录产生(BOEHRINGER MANNHEIM DIG简单杂交货号1603 558,RNA:RNA杂交的DIG简单杂交方法)。实验计划经修饰以进行与添加鲱鱼精子DNA(10毫克/毫升杂交溶液)的预杂交：2×1h。杂交与添加鲱鱼精子DNA(10毫克/毫升杂交溶液)然后进行过夜。条带使用CDP-星实验计划(BOEHRINGER MANNHEIM CDP-星TM货号1685 627)检测。
严格清洗后，PARP2的转录本主要在人脑、心、骨骼肌、肾和肝中检出。约1.9kb的转录本尺寸与cDNA测定的长度(1.85kb)相对应(参阅图2(A))。
在其他组织或器官中，人PARP2表达系相当地弱。
严格清洗后，PARP3的转录本主要在心、脑、肾、骨骼肌和肝中检出。在其他组织(胎盘、肺、胰)中表达系明显较弱(参阅图2(B))。人PAPR3至少有2个转录本，其假定地可由不同聚腺苷化部位或可替代剪接解释。其尺寸(分别地约2.2kb和2.5kb)与cDNA测定的长度(2.3kb)相对应。清洗以0.2×SSC/0.2％SDS在室温下进行2×15分及然后以0.1×SSC/0/1％SDS在65℃下2×15分(自20×SSC:3摩尔浓度NaCl,0.3摩尔浓度柠檬酸钠，pH7.0制备)。
实施例3：抗体的制备
制备抗根据本发明蛋白质的特定抗体。此些特别用于分析在PARP2和PARP3的蛋白质水平上的组织分布，使用免疫印迹(Western Blot)分析。如此抗体制备的实施例经示于下。
以下的肽由合成法以熟谙抗体制备者所熟悉的方式制备。在一些例中，半胱氨酸残基经连结至序列的N或C端，以期促进偶合至KLH(匙孔槭血蓝蛋白)。PARP-2:NH2-MAARRRRSTGGGRARALNES-CO2H(氨基酸1-
20；SEQ ID NO:23)
NH2-KTELQSPEHPLDQHYRNLHC-CO2H(氨基酸
335-353；SEQ ID NO:24)PARP-3:NH2-CKGRQAGREEDPFRSTAEALK-CO2H(氨基酸25
-44；SEQ ID NO:25)
NH2-CKQQIARGFEALEALEEALK-CO2H(氨基酸
230-248；SEQ ID NO:26)
抗PARP3抗体的制备经述为代表性样品。
多株抗体使用具肽序列H2N-KQQIARG-FEALEALEEALK-CO2H(SEQ ID NO:27)(人PARP3蛋白质序列的氨基酸230-248)的合成肽在兔子中产生人PARP3。相对应的小鼠序列在此区域仅以1个氨基酸不同(H2N-KQQIARGFEALEALEEAMK-CO2H；SEQ IDNO:28)。半胱氨酸亦连结至N端，以期可能地使蛋白质偶合至KLH。
兔子以KLH-肽共轭物在7-14天时段下免疫化总计5次。得到抗血清使用抗原经亲和力纯化。特异IgG级分自血清使用个别肽分离，为此目的，其以熟谙此技艺者所熟知的方式先固定在亲和层析柱上。个别抗血清经载入此亲和层析柱，及未特异吸收的蛋白质以缓冲液溶析。特异结合IgG级分以0.2摩尔浓度甘氨酸/HCl缓冲液pH2.2溶析。pH立即使用1摩尔浓度TRIS/HCl缓冲液调至pH7.5。含IgG级分的洗脱液与饱合硫酸铵溶液混合1∶1(体积)及在+4℃下培养30分以完成沉淀。生成的沉淀物在10,000g下离心及，在除去上清液，溶于最小量的PBS/TBS。生成的溶液然后对PBS/TBS以比值1∶100(体积)透析。抗体经调至约100微克IgG/毫升的浓度。以此方式纯化的PARP3抗体具对PARP3的高特异性。虽然小鼠PARP3经识别良好，但与PARP1或PARP2并无可见的相互作用。实施例4：组织分布由免疫印迹(Western Blot)分析
在蛋白质阶段下的组织分布亦为PARP2和PARP3由免疫印迹(Western Blot)分析法探讨。为蛋白质凝胶的小鼠组织的制备：
组织或细胞使用Potter或Ultra-Turrax匀浆。为此，0.5克组织(或细胞)在5毫升缓冲液(10毫摩尔浓度Tris-HCl pH7.5,1毫摩尔浓度EDTA,6毫摩尔浓度MgCl2)、1片蛋白酶抑制剂鸡尾酒(BoehringerMannheim，货号：1836153)和benzonase(纯度级Ⅰ，默克)中在37℃下培养30分。制备小鼠的心、肺、肝、脾、肾、肠、肌肉、脑及人胎盘肾细胞(HEK293，人胎盘肾)的组织样品。蛋白质凝胶：
由NOVEX供应的NuPAGE系统根据蛋白质凝胶的指导使用。聚丙烯酰胺凝胶(NuPAGE4-12％BisTris,NOVEX NP 0321)、展开缓冲液(MES-展开缓冲液，NOVEX NP 0002)、抗氧化剂(NOVEX NP0005)、蛋白质尺寸标准物(多标记颜色标准物，NOVEX LC 5725)、样品缓冲液(NuPAGE LDS样品缓冲液(4X),NOVEX NP 0007)经使用。凝胶在200伏特的电压下展开45分。Western Blot法：
Western Blot法使用NOVEX系统与指导一致地进行。硝酸纤维素膜(硝酸纤维素孔径45微米，NOVEX LC 2001)经使用。转移在200毫安培的电流下耗时1小时。转移缓冲液包括50毫升转移缓冲浓缩液(NOVEX NP 0006)、1毫升抗氧化剂(NOVEX NP 0002)、100毫升分析级甲醇及849毫升二次蒸馏水。
除以此方式制备的印迹外，亦使用的是预制的印迹，例如自Chemicon(小鼠脑印迹，Chemicon，目录号：NS 106具组织1．前皮质，2．后皮质，3．小脑，4．海马，5．嗅蕾，6．纹状体，7．丘脑，8．中脑，9．侧皮质，10．脑桥，11．髓质，12．骨髓)。与PARP3的抗体反应：
Western Blot法在TBST(TBS+0.3％吐温20)中以5％干乳粉封阻至少5小时(TBS:100毫摩尔浓度Tris pH7.5,200毫摩尔浓度NaCl)。与第一抗体的抗体反应(稀释1∶1000)在TBST中以5％干乳粉(见以上)在温和搅拌(垂直旋转器)下在室温下进行至少2小时或在4℃下过夜。此接着在TBST中清洗3次5分。与第二抗体(抗兔IgG，过氧化酶偶合，SIGMAA-6154，稀释1∶2000)的培养在TBST中以5％干乳粉进行1小时。此接着清洗3次，每次如上5分。其后的检测系基于化学发光法，使用超光辉套组(皮尔斯，信号光辉化学发光底物34095)，如由厂商所述。“Lumi-膜”(化学发光检测膜，Boehringer货号：1666916)经使用。膜经展现约2(X-射线展开剂浓缩物，ADEFO-Chemie GmbH)、水合、固定约4分(酸固定85克/升/AGFA)、水合及然后干燥。
实施例5：酶制备
为比较，人PARP1在杆病毒系统中以熟谙此技艺者熟悉的方式重组地表达及如述地部分纯化(Shah等人，分析生物化学1995,227,1-13)。纯度30-50％的牛PARP1(c=0.22毫克/毫升，在25℃下比活性170纳摩尔浓度ADP-核糖/分/毫克的总蛋白质)系购自BIOMOL(货号SE-165)。人和小鼠PARP2和PARP3在杆病毒系统(Bac-至-Bac系统，BRL生命科学)中重组地表达。为此目的，适当cDNA引入pFASTBAC-1载体。重组杆病毒DNA由重组在大肠杆菌中制备，接着以适当重组杆病毒DNA转染昆虫细胞(Sf9或High-Five)。相对应蛋白质的表达由Western Blot分析法确认。病毒株以熟谙此技艺者熟悉的方式扩增。大量的重组蛋白质由以5-10 MOI(感染多重性；病毒对细胞的比值)以病毒感染500毫升昆虫细胞培养物(2×106个细胞/毫升)及培养3至4天获得。昆虫细胞然后由离心成片，及蛋白质自片段物纯化。
纯化由熟谙此技艺者所熟悉的蛋白质纯化古典方法进行，以适当的特异抗体检测酶。在一些例中，蛋白质亦在3-胺基苯酰胺亲和层析柱上如述地经亲和力纯化(Burtscher等人，Anal Biochem 1986,152:285-290)。纯度为＞90％。实施例6：测定PARP2和PARP3的活性及效应物在PARP1、PARP2和PARP3上抑制作用的分析法系统a)对抗聚(ADP-核糖)的抗体制备
可能地使用聚(ADP-核糖)作为抗原以产生抗聚(ADP-核糖)抗体。抗聚(ADP-核糖)抗体的制备系述于文献中(Kanai Y等人(1974)BiochemBiophys Res Comm 59:1,300-306；Kawamaitsu H等人(1984)生物化学23,3771-3777；Kanai Y等人(1978)免疫学34,501-508)。
以下特别地经使用：抗聚(ADP-核糖)抗体(多克隆抗血清，兔子)，BIOMOL；货号SA-276，抗聚(ADP-核糖)抗体(单克隆，小鼠，克隆10H；融合瘤上清液，亲和力纯化)。
自融合瘤上清液获得的抗血清或单克隆抗体由蛋白质A亲和力层析法以熟谙此技艺者所熟悉的方式纯化。b)ELISA材料：ELISA颜色试剂：TMB混料，SGMA T-8540
96孔微滴度板(FALCON微试验ⅢTM弹性分析盘，#3912)经涂以组蛋白(SIGMA,H-7755)。组蛋白为此目的以50微克/毫升的浓度溶于碳酸盐缓冲液(0.05摩尔浓度Na2HCO；pH9.4)。微滴度板的个别孔各与150微升此组蛋白溶液在室温下培养至少2小时或4℃下过夜。孔然后由添加150微升1％BSA在碳酸盐缓冲液的溶液(SIGMA,A-7888)在室温下封阻2小时。此接着以清洗缓冲液(0.05％吐温10在1xPBS；PBS(磷酸盐缓冲盐水；Gibco，货号10010):0.21克/升KH2PO4、9克/升NaCl、0.726克/升Na2HPO4·7H2O,pH7.4)的3次清洗步骤。清洗步骤全在微滴度板清洗器(“哥伦布”微滴度板清洗器，SLT-实验室仪器，澳洲)中进行。
酶反应所需的是酶反应溶液及底物溶液，在各例中为预混料。此些溶液的绝对量依所要分析孔数数目而定。
酶反应溶液每孔的组成：-4微升PARP反应缓冲液(1摩尔浓度Tris-HCl pH8.0,1.00毫摩尔浓度MgCl2,10毫摩尔浓度DTT)-20纳克PARP1(人或牛)或8纳克PARP2(人或小鼠)-4微升活化DNA(1毫克/毫升；SIGMA,D-4522)-H2O至40微升底物溶液每孔的组成：-5微升PARP反应缓冲液(10x)-0.8微升DNA溶液(10毫摩尔浓度，SIGMA N-1511)-44微升水
抑制剂经溶于1xPARP反应缓冲液。偶而在较高浓度时用MDSO溶解抑制剂最多至2％的终浓度。为酶反应，40微升的酶反应溶液在导入各孔中及与10微升抑制剂溶液培养10分。然后由各孔中加入50微升底物溶液开始酶反应。反应在室温下进行30分及然后由清洗缓冲液清洗3次中止。
采用的初始抗体为以1∶5000稀释的特异抗聚(ADP-核糖)抗体。稀释在抗体缓冲液(1％BSA在PBS；0.05％吐温20)中进行。第一抗体的培养时间在室温下为1小时。在其后以清洗缓冲液清洗3次后，与以1∶10,000稀释在抗体缓冲液的第二抗体(抗小鼠IgG,Fab片段，过氧化酶偶合，Boehringer Mannheim，货号1500.686；抗兔IgG，过氧化酶偶合，SIGMA，货号A-6154)在室温下培养1小时。以清洗缓冲液清洗3次后接着为颜色反应，各孔使用100微升颜色试剂(TMB混料，SIGMA)在室温下约15分。颜色反应由添加100微升2摩尔浓度H2SO4中止。其后接着在ELISA板阅汉机(EAR340AT“易读机”，SLT-实验室仪器，澳洲)中立即测定(450纳米对620纳米)。测定原理系图式说明于图6中。
用不同浓度绘制量效曲线，以确定抑制剂的Ki值。对特别的抑制剂浓度数值以一式三份获得。算术平均值使用微软Excel决定。IC50使用Microcal(原点软件(第5.0版)决定(“S形调配”)。IC50值的换算系以此方式计算为Ki值，由使用“校准抑制剂”进行。“校准抑制剂”亦在各分析中测定。“校准抑制剂”的Ki值在相同的分析法系统中由以熟谙此技艺者所熟悉的方式分析Dixon图形决定。b)HTRF(均相时间解析荧光)分析法
在根据本发明的HTRF PARP分析法中，组蛋白，作为由PARP修饰的靶物蛋白质，间接以XL665荧光团标记。抗聚(ADP-核糖)抗体直接以氪酸铕-PAR-氪酸盐标记。若XL665荧光团在空间上在直接邻近时，其由结合至组蛋白上的聚(ADP-核糖)所确认，然后可能能量转移。在665纳米的放射因此直接与结合抗体量成比例，因而对应于聚(ADP-核糖)的量。测定的信号因此与PARP活性相对应。测定原理经图示说明于图7中。使用的物质与那些在ELISA中使用者完全相同(见以上)，除非另有说明。
组蛋白以3毫克/毫升的浓度溶于Hepes缓冲液(50毫摩尔浓度，pH=7.5)。生物素化以磺酰基-NHS-LC-生物素(皮尔斯，#21335T)进行。使用每个组蛋白4个生物素分子的摩尔比值。培养时间为90分(RT)。生物素化组蛋白然后在G25 SF HR10/10管柱(Pharmacia,17-0591-01)上在Hepes缓冲液(50毫摩尔浓度，pH=7.0)中纯化，以期除去过量的生物素化试剂。抗聚(ADP-核糖)抗体以氪酸铕标记，使用二功能性偶合试剂(Lopez,E.等人，Clin.Chem.39(2),196-201(1993)；美国专利号5,534,622)。纯化在G25SF HR10/30管柱上进行。每个抗体3.1个氪酸盐的摩尔比值经达成。产量为25％。共轭物在0.1％BSA的存在下在磷酸盐缓冲液(0.1摩尔浓度，pH=7)中在-80℃下保存。
为酶反应，以下经吸入各孔中：-10微升PARP溶液，在PARP HTRF反应缓冲液(50毫摩尔浓度Tris-HCl pH8.0,10毫摩尔浓度MgCl2,1毫摩尔浓度DTT)，具20纳克PARP1(人或牛)或8纳克PARP2(人或小鼠)-10微升活化DNA，在PARP HTRF反应缓冲液(50微克/毫升)-10微升生物素化组蛋白，在PARP HTRF反应缓冲液(1.25微摩尔浓度)-10微升抑制剂在PARP HTRF反应缓冲液
此些试剂在反应由添加以下开始前经培养2分-10微升DNA溶液，在PARP HTRF反应缓冲液(41微摩尔浓度/毫升)。
反应时间在室温下为30分。
反应然后由添加以下中止-10微升PARP抑制剂(25微摩尔浓度，Ki=10纳摩尔浓度)，在“启示(Revelation)”缓冲液(100毫摩尔浓度Tris-HCl pH7.2,0.2摩尔浓度KF,0.05％BSA)。
以下然后加入：-10微升EDTA溶液(SIGMA,E-7889,0.5摩尔浓度在H2O中)-100微升Sa-XL665(Packard仪器)在“启示”缓冲液(15-31.25纳摩尔浓度)-50微升抗PAR氪酸盐在“启示”缓冲液(1.6-3.3纳摩尔浓度)。
测定在30分(多至4小时)后为可能的。测定在“发现HTRF微滴度板分析器”(Canberra Packard仪器)中进行。Ki值如所述为ELISA地计算。实施例7：测定PARP抑制剂的治疗效力的试验系统
新颖PARP抑制剂可具其在有关药理模型中检查的治疗效力。一些合适的模型实例经列表于表1。
疾病 模型 文献
神经变性疾病(中风，帕金森氏症等) 在小鼠或大鼠中的NMDA激发毒性 见以下说明
中风 永久性MCAO(“中脑动脉闭塞”) Tokime,T,等人，J.Cereb.Blood Flow Metab.18(9):991-7,1998。Guegan,C.,脑研究。分子脑研究，55(1):133-40,1998。
在大鼠或小鼠中的短暂、病灶的MCAO Eliasson MJL，等人，Nat Med1997,3:1089-1095.Endres,M,等人,J.CerebBlood Flow Metab 1997,17:1143-
1151。TakahashiK.等人，J.CerebBlood Flow Metab 1997,17:1137-1142。
帕金森氏症 在小鼠/大鼠中的MPTP(1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶)毒性 Cosi C，等人，脑研究，1998,809(1):58-67。Cosi C，等人，脑研究，1996,729(2):264-9。
心肌梗塞 在大鼠、猪或兔子中的冠状血管闭塞 Richard V，等人，Br.J.Pharmacol 1994,113,869-876。Thiemermann C，等人，ProcNatl Acad Sci美国1997,94(2):679-83。Zingarelli B，等人，CardiovascRes.1997,36(2):205-15。
在大鼠或兔子中的Langendorf心模型 见以下说明
脓毒性休克 在大鼠中的内毒素休克 Szabo C，等人，J Clin Invest,1997,100(3):723-35。
在大鼠或小鼠中的酵母聚糖-或红藻胶诱生的多器官衰竭 Szabo C，等人，J Exp Med.1997,186(7):1041-9。Cuzzocrea S，等人，Eur JPharmacol.1998,342(1):67-76。
类风湿性关节炎 在大鼠或小鼠中的佐剂-或明胶诱生的关节炎 Szabo C，等人，Proc.Natl AcacSci美国1998,85(7):3867-72。
糖尿病 链霉亚硝基素-或嘌呤-诱生或肥胖-有关的 Uchgata Y等人，糖尿病1983,32:316-318。Masiello P，等人，糖尿病学1985,28:683-686。
ShimabukuroM等人，J.ClinInvest 1997,100:290-295。
癌症 体外模型；见以下 Schlicker等人，1999,75(1),91-100。
a)NMDA激发毒性模型
谷氨酸为在脑中最重要的激发神经传递质。在正常情况下，谷氨酸排至突触裂隙及刺激后突触谷氨酸受体，特定地“NMDA”和“AMPA”型的谷氨酸受体。此刺激在脑的多种功能中扮演显著角色，包括学习、记忆和运动控制。
在急性和慢性神经变性的情况(例如中风)下，突触谷氨酸分泌上大为增加，造成受体的过度刺激。此导致以此方式刺激的细胞死亡。这些增加的谷氨酸活性发生在多数神经疾病或精神疾病中，及导致在中枢神经系统(CNS)以及在外周神经系统中过度激发的状态或毒性作用。因此，谷氨酸系涉及大量的神经变性性疾病，特别地组织缺氧后的神经毒性混乱、缺氧、局部缺血及损伤后，如那些在中风和重伤后发生者，及中风、阿尔滋海默氏症、哈丁顿氏症、肌萎缩侧索硬化症(ALS；“路者林氏病”)，颅外伤、脊髓重伤、外周神经病痛、AIDS痴呆和帕金森氏症。谷氨酸在其中起重要作用的另一种疾病为癫痫(参阅脑研究公告1998；46(4):281-309,EurNeuropsychopharmacol.1998,8(2):141-152)。
谷氨酸作用系经不同受体介导。此些受体之一在特定激动剂后称为NMDA(N-甲基-D-天冬氨酸)受体(Arzneim.Forschung 1990,40,511-514；TIPS,1990,11,334-338；未来的药物1989,14,1059-1071)。N-甲基-D-天冬氨酸为特别类谷氨酸受体的强激动剂(“NMDA”型)。NMDA受体的刺激导致钙流入细胞及生成自由基。自由基导致DNA损伤及PARP活化。PARP在细胞中耗尽高能量磷酸盐(NAD和ATP)导致细胞死亡。这说明NMDA的毒性。NMDA治疗的动物因此可认为是上述疾病的模型，其中涉及激发毒性。
因为谷氨酸受体在神经变性的重要性，许多药理研究途径目前已指向准确地特定封阻此些受体。然而，因为其在正常刺激传导的重要性，此些研究途径已被证明为有问题的(副作用)。此外，受体的刺激发生极快速，使受体的施用时常太迟(“时窗”问题)。因此，对NMDA有关神经毒性的新颖作用理论及抑制剂有着极大的需求。
由激发氨基酸对抗脑过度激发的保护(在小鼠中的NMDA拮抗作用)可视为基于激发毒性的PARP药理效应物在疾病中活性的适当证据。激发(exzitatorischen)氨基酸(EAA)的脑内施用诱生如此有力的过度激发，其在短时间内导致动物(小鼠)的痉挛和死亡。
在本例中，在腹膜(i.p.)施用试验物质120分后单侧脑室内施用10微升0.035％NMDA水溶液。此些症状可由中枢活性的药物的全身性，例如腹膜内施用抑制。因为在中枢神经系统中EAA受体的过度活化在不同神经疾病中起重要作用，可通过体内检测EAA拮抗作用而获得有关物质对如此CNS疾病的可能治疗有效性的资讯。ED50是指先前i.p.施用测定的物质后，其中50％动物不具固定剂量NMDA所有的症状时测定的物质活性的测定值。b)Langendorf心模型(心肌梗塞模型)
雄性Sprague-Dawley大鼠(体重300-400克；原种珍维尔，LeGenest-St-Isle，法国)经用于此试验，大鼠由灌食法口服施以活性物质或安慰剂(体积：5毫升/千克)。50分后，肝素经腹膜内施用(Liquemin N Roche,125IU/动物，0.5毫升)。动物以InactinT133(硫β巴比妥钠10％)麻醉、固定在手术台上，气管切开及以“哈佛换气泵”(40下/分，4.5毫升/下)。胸廓切开后接着主动脉立即插入导管，取出心脏及立即逆行灌流。心脏以75毫米汞柱的恒压灌注，其使用“Gilson Miniplus 2灌流泵”达成。灌注液的组成(毫摩尔/升)：NaCl 118,KCl 4.7,CaCl2×2 H2O 2.53,MgSO4×7 H2O 1.64,NaCHO3 24.88,KH2PO4 1.18,葡萄糖11。温度在实验全程保持在37℃下。功能性参数使用“Gould 4-轨记录器”连续记录。测定经制成左室压(LVP；毫米汞柱)、LVEDP(毫米汞柱)、酶释出(肌酸激酶，毫单位/毫升/克)、冠状流速(毫升/分)、HR(脉搏率，分-1)。左室压使用液体填充乳胶气球及Statham 23 Db压力转导计测定。气球体积先调至达到约12毫米汞柱的LVEDP(左室端舒张压)。dp/dtmax(最大泵力)系使用积分基准自压力信号衍生。心率自压力信号计算。流速使用滴计数器(BMT Messtechnik GmbH柏林)测定。在平衡时间20分后，心接受30分全体局部缺血，由中止灌注液供给，而保持温度在37℃下。在其后60分再灌注时段中，灌注液样品在3、5、10、15、30、45和60分后取出，分析肌酸激酶(CK)活性。测定参数的平均值及标准偏差经统计分析(Dunnett试验法)。显著性限度为p=0.05。
在兔心的实验同样地进行。使用雄性白纽西兰兔(获自：Interfauna)。心如上述大鼠模型制备。灌注压设在最大60毫米汞柱及流速在约25毫升/分。平衡时间为约30分。物质由直接注入心的上游施用。开始注入15分后，30分全体局部缺血由中止流动而致，但维持心脏的温度。接着30分的再灌注。灌注液在底物施用前，在15分后及在再灌注期间不同时间(5、10、15、20、30分)时取出探讨CK活性。以下参数经测定：LVP(毫米汞柱)、LVEDP、LVdP/dt、PP(毫米汞柱)、HR(脉搏率；下/分)、CK活性(单位/分/克心重)。c)急性肾衰竭的动物模型
静脉内施用PARP抑制剂(4天)对具局部缺血后急性肾衰竭的大鼠肾功能的保护作用经探讨。
雄Sprague-Dawley大鼠(在实验开始时约330克；育种者：CharlesRiver)经使用。每个实验组采用10-15只动物。活性物质/安慰剂的施用以渗透微泵连续进行至股静脉。眼窝血液在心烯氟烷(Ethrane Abbot，威斯巴登)吸入麻醉下进行(1.5毫升全血)。
在最初测定(血样品)及测定在24小时中排出尿量后，大鼠经麻醉(“Nembutal”，戊巴比妥钠，Sanofi CEVA；50毫克/千克，腹膜内，体积注射1.0毫升/千克)及固定在可加热的手术台上(37℃)。125 IU/千克肝素(利贵明N，罗氏)经静脉施至尾静脉。腹腔经打开及右肾经暴露。分枝的肾动脉经暴露及使用牛头犬夹(Diefenbach38毫米)在上方夹住。左肾动脉同样地经露出及夹住(上方，约至肾的半途)。在手术期间，渗透微泵经植入股静脉。肠经再放入及流体损失补以微温的0.9％NaCl。动物经盖以湿布及在红光下保温。40分后，肾的外观经记录，及夹经取下，先右后左。肠再放回及加入2滴抗生素(Tardomyocel，拜尔)。腹壁以无菌猫肠(Ethicon 4号)密闭及再一次以1滴抗生素处理。表皮以无菌(Ethibond Exel Ethicon)3/0号缝合，及缝合处喷以Nebacetin N(Yamanouchi)伤品喷雾。每日药物/安慰剂剂量的10分之一经快速浓注给药。
样品和血液在第1、2和4天实验时取出以探讨在血清和尿中的生化参数：Na、K、肌酸、蛋白质(仅在尿中)。此外，饲料和水消耗、体重和尿量经记录。14天后，动物经牺牲及肾经评估。
评估排除在实验期间死于梗塞或在第14天在验尸时显示梗塞的所有动物。肌酸清除与钠级分排出被计算为肾功能参数，比较治疗动物与对照组和假阳性对照(Sham)组。d)放射敏感化的体外模型(肿瘤疗法)
MCF-7-细胞(人乳癌)在具10％热灭活FCS和2毫摩尔浓度L-谷氨酸的达贝可氏修饰伊哥氏培养基中培养。细胞在6孔盘中以每孔100、1000或10,000个细胞的细胞密度接种过夜及然暴露至0至10 Gy范围内剂量的离子辐射(137Cs，雪帕马克，I-68A型，剂量率3.28 Gy/分)。照射后10天，实验经评估，计算群落，而以50个细胞为阳性对照。e)中风模型(病灶性脑局部缺血；在大鼠中的MCA(中脑动脉)闭塞)
病灶性局部缺血在Sprague-Dawley或Long-Evans大鼠中藉右端MCA的导管插入进行。大鼠在MCA闭塞前或其后以根据本发明蛋白质的调节剂处理。通常，1-10毫克/千克的剂量经选定(快速浓注施用)，视情况接着连续注入0.5-5毫克/千克/小时。
大鼠以卤代烷在70％氮气和30％氧气的混合物麻醉(4％在最后时及0.8-1.2％在手术期间)。体温固定地直肠测定及藉可控制热毯保持恒定在37.5℃±0.5℃。再者，动脉血压、动脉pH、Pa(O2)和Pa(CO2)视情况藉尾静脉导管测定。其后，病灶局部缺血使用Chen等人(中风17:738-743；1986)或Liu等人(Am J.Physiol 256:H589-593；1989)的方法进行。藉连续烧灼右MCA的远端部分。当手术终止时，动物保持在温暖环境下再24小时。然后其使用CO2杀死及断头。其脑经取出，快速冷冻(干冰或液态氮)后保存在-80℃下。脑经切成0.02毫米厚切片及每第20个切片用于其后的分析。相对应的切片以甲酚紫(尼斯尔染色法)染色。可替代地，TTC(2,3,4-三苯基四唑氯)可用于染色。梗塞量然后可在显微镜下分析。为正确定量，电脑影像分析软件可使用(J Cereb Blood Flow Metabol 10:290-293；1990)。f)脓毒性休克
每组10只雄C57/BL小鼠(体重18-20克)以LPS(脂多醣，自大肠杆菌，LD10020毫克/动物，静脉内)加入半乳糖胺(20毫克/动物，静脉内)处理。要试验的物质在3个连续天中，腹膜内或静脉内施用(例如1-10毫克/千克)，而第1个剂量在LPS处理30分后施用。死亡率每12小时测定。可替代地，物质亦可以一些剂量在一些日子中施用。g)在老化细胞中改变基因表达的测定
细胞的老化系由改变细胞培养基自完全培养基至具降低血清浓度的培养基而刺激，及其后藉定量性PCR或Northern Blot法(Linskens等人，核酸研究1995:23(16):3244-51)分析。皮肤老化的典型标记例如胶原或弹性蛋白可使用。人纤维胚细胞或纤维胚细胞系经使用，其刺激皮肤老化。根据本发明蛋白质的调节剂经加入培养基中及其在改变基因表达的作用经观察。在细胞中增加的弹性蛋白产生与藉那些调节剂所致的降低老化过程可观察到。
序列表(1)一般资料：
(ⅰ)申请人：
  (A)姓名：BASF Aktiengesellschaft
  (B)街道：
  (C)地区：Ludwigshafen
  (E)国家：Deutschland
  (F)邮编：67065
(ⅱ)发明名称：新的聚ADP核糖聚合物基因
(ⅲ)序列数：28
(ⅳ)计算机可读资料
  (A)数据载体：Floppy disk
  (B)计算机：IBM PC compatible
  (C)操作系统：PC DOS/MS DOS
  (D)软件：PatentIn Release#1.0,Version#1.30(EPA)(2)SEQ ID NO:1描述：
(ⅰ)序列特征：
  (A)长度：1843碱基对
  (B)种类：核苷酸
  (C)链型：单链
  (D)拓扑：线性
(ⅱ)分子类型：cDNA
(ⅲ)假说：非
(ⅳ)反义：非
(ⅵ)来源：
  (F)组织类型：脑
(ⅸ)特征：
  (A)名称/键：CDS
  (B)LAGE:3..1715
  (D)SONSTIGE ANGABEN:/product=“聚ADP核糖聚合酶”
(ⅹⅰ)序列特征：SEQ ID NO:1：CC ATG GCG GCG CGG CGG CGA CGG AGC ACC GGC GGC GGC AGG GCG AGAMet Ala Ala Arg Arg Arg Arg Ser Thr Gly Gly Gly Arg Ala Arg
1               5                   10                  15SCA TTA AAT GAA AGC AAA AGA GTT AAT AAT GGC AAC ACG GCT CCA GAAAla Leu Asn Glu Ser Lys Arg Val Asn Asn Gly Asn Thr Ala Pro Glu
            20                   25                 30GAC TCT TCC CCT GCC AAG AAA ACT CGT AGA TGC CAG AGA CAG GAG TCG         143Asp Ser Ser Pro Ala Lys Lys Thr Arg Arg Cys Gln Arg Gln Glu Ser
        35                   40                  45AAA AAG ATG CCT GTG GCT GGA GGA AAA GCT AAT AAG GAC AGG ACA GAA         191Lys Lys Met Pro Val Ala Gly Gly Lys Ala Asn Lys Asp Arg Thr Glu
    50                  55                  60GAC AAG CAA GAT GAA TCT GTG AAG GCC TTG CTG TTA AAG GGC AAA GCT         239Asp Lys Gln Asp Glu Ser Val Lys Ala Leu Leu Leu Lys Gly Lys Ala
65                   70                  75CCT GTG GAC CCA GAG TGT ACA GCC AAG GTG GGG AAG GCT CAT GTG TAT         287Pro Val Asp Pro Glu Cys Thr Ala Lys Val Gly Lys Ala Bis Val Tyr80                  85                  90                   95TGT GAA GGA AAT GAT GTC TAT GAT GTC ATG CTA AAT CAG ACC AAT CTC         335Cys Glu Gly Asn Asp Val Tyr Asp Val Met Leu Asn Gln Thr Asn Leu
            100                 105                 110CAG TTC AAC AAC AAC AAG TAC TAT CTG ATT CAG CTA TTA GAA GAT GAT         383Gln Phe Asn Asn Asn Lys Tyr Tyr Leu Ile Gln Leu Leu Glu Asp Asp
        115                 120                 125GCC CAG AGG AAC TTC AGT GTT TGG ATG AGA TGG GGC CGA GTT GGG AAA         431Ala Gln Arg Asn Phe Set Val Trp Met Arg Trp Gly Arg Val Gly Lys
    130                 135                 140ATG GGA CAG CAC AGC CTG GTG GCT TGT TCA GGC AAT CTC AAC AAG GCC         479Met Gly Gln His Ser Leu Val Ala Cys Ser Gly Asn Leu Asn Lys Ala145                  150                         155AAG GAA ATC TTT CAG AAG AAA TTC CTT GAC AAA ACG AAA AAC AAT TGG         527Lys Glu Ile Phe Gln Lys Lys Phe Leu Asp Lys Thr Lys Asn Asn Trp160                     165                     170                     175GAA GAT CGA GAA AAG TTT GAG AAG GTG CCT GGA AAA TAT GAT ATG CTA         575Glu Asp Arg Glu Lys Phe Glu Lys Val Pro Gly Lys Tyr Asp Met Leu
            180                 185                 190CAG ATG GAC TAT GCC ACC AAT ACT CAG GAT GAA GAG GAA ACA AAG AAA         623Gln Met Asp Tyr Ala Thr Asn Thr Gln Asp Glu Glu Glu Thr Lys Lys
        195                 200                  205GAG GAA TCT CTT AAA TCT CCC TTG AAG CCA GAG TCA CAG CTA GAT CTT         671Glu Glu Ser Leu Lys Ser Pro Leu Lys Pro Glu Ser Gln Leu Asp Leu
    210                 215                  220CGG GTA CAG GAG TTA ATA AAG TTG ATC TGT AAT GTT CAG GCC ATG GAA         719Arg Val Gln Glu Leu Ile Lys Leu Ile Cys Asn Val Gln Ala Met Glu
225                 230                  235GAA ATG ATG ATG GAA ATG AAG TAT AAT ACC AAG AAA GCC CCA CTT GGG         767Glu Met Met Met Glu Met Lys Tyr Asn Thr Lys Lys Ala Pro Leu Gly240                 245                     250              255AAG CTG ACA GTG GCA CAA ATC AAG GCA GGT TAC CAG TCT CTT AAG AAG         815Lys Leu Thr Val Ala Gln Ile Lys Ala Gly Tyr Gln Ser Leu Lys Lys260                265                270ATT GAG GAT TGT ATT CGG GCT GGC CAG CAT GGA CGA GCT CTC ATG GAA        863Ile Glu Asp Cys Ile Arg Ala Gly Gln His Gly Arg Ala Leu Met Glu
        275                 280                 285GCA TGC AAT GAA TTC TAC ACC AGG ATT CCG CAT GAC TTT GGA CTC CGT        911Ala Cys Asn Glu Phe Tyr Thr Arg Ile Pro His Asp Pne Gly Leu Arg
    290                 295                 300ACT CCT CCA CTA ATC CGG ACA CAG AAG GAA CTG TCA GAA AAA ATA CAA        959Thr Pro Pro Leu Ile Arg Thr Gln Lys Glu Leu Ser Glu Lys Ile Gln
305                 310                 315TTA CTA GAG GCT TTG GGA GAC ATT GAA ATT GCT ATT AAG CTG GTG AAA       1007Leu Leu Glu Ala Leu Gly Asp Ile Glu Ile Ala Ile Lys Leu Val Lys320                 325                  330                335ACA GAG CTA CAA AGC CCA GAA CAC CCA TTG GAC CAA CAC TAT AGA AAC       1055Thr Glu Leu Gln Ser Pro Glu His Pro Leu Asp Gln His Tyr Arg Asn
            340                 345                 350CTA CAT TGT GCC TTG CGC CCC CTT GAC CAT GAA AGT TAC GAG TTC AAA       1103Leu His Cys Ala Leu Arg Pro Leu Asp His Glu Ser Tyr Glu Phe Lys
        355                 360                 365GTG ATT TCC CAG TAC CTA CAA TCT ACC CAT GCT CCC ACA CAC AGC GAC       1151Val Ile Ser Gin Tyr Leu Gln Ser Thr His Ala Pro Thr His Ser Asp
    370                 375                  380TAT ACC ATG ACC TTG CTG GAT TTG TTT GAA GTG GAG AAG GAT GGT GAG       1199Tyr Thr Met Thr Leu Leu Asp Leu Phe Glu Val Glu Lys Asp Gly Glu
385                 390                 395AAA GAA GCC TTC AGA GAG GAC CTT CAT AAC AGG ATG CTT CTA TGG CAT       1247Lys Glu Ala Phe Arg Glu Asp Leu His Asn Arg Met Leu Leu Trp His400                 405                 410                 415GGT TCC AGG ATG AGT AAC TGG GTG GGA ATC TTG AGC CAT GGG CTT CGA       1295Gly Ser Arq Met Ser Asn Trp Val Gly Ile Leu Ser His Gly Leu Arg
            420                 425                  430ATT GCC CCA CCT GAA GCT CCC ATC ACA GGT TAC ATG TTT GGG AAA GGA       1343Ile Ala Pro Pro Glu Ala Pro Ile Thr Gly Tyr Met Phe Gly Lys Gly
        435                 440                  445ATC TAC TTT GCT GAC ATG TCT TCC AAG AGT GCC AAT TAC TGC TTT GCC       1391Ile Tyr Phe Ala Asp Met Ser Ser Lys Ser Ala Asn Tyr Cys Phe Ala
    450                 455                 460TCT CGC CTA AAC AAT AGA GGA CTG CTG CTC TTA TCA GAG GTA GCT CTA       1439Ser Arg Leu Lys Asn Thr Gly Leu Leu Leu Leu Ser Glu Val Ala Leu
465                 470                 475GGT CAG TGT AAT GAA CTA CTA GAG GCC AAT CCT AAG GCC GAA GGA TTG       1487Gly Gln Cys Asn Glu Leu Leu Glu Ala Asn Pro Lys Ala Glu Gly Leu480                 485                 490                 495CTT CAA GGT AAA CAT AGC ACC AAG GGG CTG GGC AAG ATG GCT CCC AGT       1535Leu Gln Gly Lys His Ser Thr Lys Gly Leu Gly Lys Met Ala Pro Ser
            500                 505                 510TCT GCC CAC TTC GTC ACC CTG AAT GGG AGT ACA GTG CCA TTA GGA CCA       1583Ser Ala His Phe Val Thr Leu Asn Gly Ser Thr Val Pro Leu Gly Pro
        515                 520                 525GCA AGT GAC ACA GGA ATT CTG AAT CCA GAT GGT TAT ACC CTC AAC TAC       1631Ala Ser Asp Thr Gly Ile Leu Asn Pro Asp Gly Tyr Thr Leu Asn Tyr
    530                 535                  540AAT GAA TAT ATT GTA TAT AAC CCC AAC CAG GTC CGT ATG CGG TAC CTT       1679Asn Glu Tyr Ile Val Tyr Asn Pro Asn Gln Val Arg Met Arg Tyr Leu
545                 550                 555TTA AAG GTT CAG TTT AAT TTC CTT CAG CTG TGG TGA ATGTTGATAT            1725Leu Lys Val Gln Phe Asn Phe Leu Gln Leu Trp  *560                 565                 570TAAATAAACC AGAGATCTGA TCTTCAAGCA AGAAAATAAG CAGTGTTGTA CTTGTGAATT     1785TTGTGATATT TTATGTAATA AAAACTGTAC AGGTCTAAAAA AAAAAAAAAA AAAAAAAA      1843(2)SEQ ID NO:2描述：
(ⅰ)序列特征：
  (A)长度：571氨基酸
  (B)类型：氨基酸
  (D)拓扑：线性
(ⅱ)分子类型：蛋白质
(ⅹⅰ)序列特征：SEQ ID NO:2：Met Ala Ala Arg Arg Arg Arg Ser Thr Gly Gly Gly Arg Ala Arg Ala1               5                  10                  15Leu Asn Glu Ser Lys Arg Val Asn Asn Gly Asn Thr Ala Pro Glu Asp
        20                   25                 30Ser Ser Pro Ala Lys Lys Thr Arg Arg Cys Gln Arg Gln Glu Ser Lys
    35                  40                  45Lys Met Pro Val Ala Gly Gly Lys Ala Asn Lys Asp Arg Thr Glu Asp
50                   55                  60Lys Gln Asp Glu Ser Val Lys Ala Leu Leu Leu Lys Gly Lys Ala Pro65                  70                  75                 80Val Asp Pro Glu Cys Thr Ala Lys Val Gly Lys Ala His Val Tyr Cys
             85                  90                  95Glu Gly Asn Asp Val Tyr Asp Val Met Leu Asn Gln Thr Asn Leu Gln
        100                 105                 110Phe Asn Asn Asn Lys Tyr Tyr Leu Ile Gln Leu Leu Glu Asp Asp Ala
    115                 120                 125Gln Arg Asn Phe Ser Val Trp Met Arg Trp Gly Arg Val Gly Lys Met130                135                140Gly Gln His Ser Leu Val Ala Cys Ser Gly Asn Leu Asn Lys Ala Lys145                 150                155                  160Glu Ile Phe Gln Lys Lys Phe Leu Asp Lys Thr Lys Asn Asn Trp Glu
            165                 170                 175Asp Arg Glu Lys Phe Glu Lys Val Pro Gly Lys Tyr Asp Met Leu Gln
        180                 185                 190Met Asp Tyr Ala Thr Asn Thr Gln Asp Glu Glu Glu Thr Lys Lys Glu
    195                 200                 205Glu Ser Leu Lys Ser Pro Leu Lys Pro Glu Ser Gln Leu Asp Leu Arg
210                 215                 220Val Gln Glu Leu Ile Lys Leu Ile Cys Asn Val Gln Ala Met Glu Glu225                230                  235                 240Met Met Met Glu Met Lys Tyr Asn Thr Lys Lys Ala Pro Leu Gly Lys
            245                 250                 255Leu Thr Val Ala Gln Ile Lys Ala Gly Tyr Gln Ser Leu Lys Lys Ile
        260                 265                     270Glu Asp Cys Ile Arg Ala Gly Gln His Gly Arg Ala Leu Met Glu Ala
    275                  280                285Cys Asn Glu Phe Tyr Thr Arg Ile Pro His Asp Phe Gly Leu Arg Thr
290                 295                 300Pro Pro Leu Ile Arg Thr Gln Lys Glu Leu Ser Glu Lys Ile Gln Leu305                 310                 315                 320Leu Glu Ala Leu Gly Asp Ile Glu Ile Ala Ile Lys Leu Val Lys Thr
            325                330                  335Glu Leu Gln Ser Pro Glu His Pro Leu Asp Gln His Tyr Arg Asn Leu
        340                 345                350His Cys Ala Leu Arg Pro Leu Asp His Glu Ser Tyr Glu Phe Lys Val
    355                 360                 365Ile Ser Gln Tyr Leu Gln Ser Thr His Ala Pro Thr His Ser Asp Tyr
370                 375                 380Thr Met Thr Lau Leu Asp Leu Phe Glu Val Glu Lys Asp Gly Glu Lys385                 390                  395                400Glu Ala Phe Arg Glu Asp Leu His Asn Arg Met Leu Leu Trp His Gly
            405                 410                 415Sar Arg Met Ser Asn Trp Val Gly Ile Leu Ser His Gly Leu Arg Ile
        420                 425                 430Ala Pro Pro Glu Ala Pro Ile Thr Gly Tyr Met Phe Gly Lys Gly Ile
    435                 440                 445Tyr Phe Ala Asp Met Ser Ser Lys Ser Ala Asn Tyr Cys Phe Ala Ser450                455                460Arg Leu Lys Asn Thr Gly Leu Leu Leu Leu Ser Glu Val Ala Leu Gly465                470                  475                  480Gln Cys Asn Glu Leu Leu Glu Ala Asn Pro Lys Ala Glu Gly Leu Leu
            485                 490                  495Gln Gly Lys His Ser Thr Lys Gly Leu Gly Lys Met Ala Pro Ser Ser
        500                 505                 510Ala His Phe Val Thr Leu Asn Gly Ser Thr Vel Pro Leu Gly Pro Ala
    515                 520                 525Ser Asp Thr Gly Ile Leu Asn Pro Asp Gly Tyr Thr Leu Asn Tyr Asn
530                 535                 540Glu Tyr Ile Val Tyr Asn Pro Asn Gln Val Arg Met Arg Tyr Leu Leu545                 550                 555                  560Lys Val Gln Phe Asn Phe Leu Gln Leu Trp  *
            565                 570(2)SEQ ID NO:3描述：
(ⅰ)序列特征：
  (A)长度：2265碱基对
  (B)种类：核苷酸
  (C)链型：单链
  (D)拓扑：线性
(ⅱ)分子类型：cDNA
(ⅲ)假说：非
(ⅳ)反义：非
(ⅵ)来源：
  (F)组织类型：子宫
(ⅸ)特征：
  (A)名称/键：CDS
  (B)LAGE:242..1843
  (D)SONSTIGE ANGABEN:/product=“聚ADP核糖聚合酶”
(ⅹⅰ)序列特征：SEQ ID NO:3：TGGGACTGGT CGCCTGACTC GGCCTGCCCC  AGCCTCTGCT TCACCCCACT GGTGGCCAAA       60TAGCCGATGT CTAATCCCCC ACACAAGCTC  ATCCCCGGCC TCTGGGATTG TTGGGAATTC      120TCTCCCTAAT TCACGCCTGA GGCTCATGGA  GAGTTGCTAG ACCTGGGACT GCCCTGGGAG      180GCGCACACAA CCAGGCCGGG TGGCAGCCAG  GACCTCTCCC ATGTCCCTGC TTTTCTTGGC      240C ATG GCT CCA AAG CCG AAG CCC TGG GTA CAG ACT GAG GGC CCT GAG           286Met Ala Pro Lys Pro Lys Pro Trp Val Gln Thr Glu Gly Pro Glu575              580               585AAG AAG AAG GGC CGG CAG GCA GGA AGG GAG GAG GAC CCC TTC CGC TCC        334Lys Lys Lys Gly Arg Gln Ala Gly Arg Glu Glu Asp Pro Phe Arg ser
        590                 595                 600ACC GCT GAG GCC CTC AAG GCC ATA CCC GCA GAG AAG CGC ATA ATC CGC        382Thr Ala Glu Ala Leu Lys Ala Ile Pro Ala Glu Lys Arg Ile Ile Arg
    605                 610                 615GTG GAT CCA ACA TGT CCA CTC AGC AGC AAC CCC GGG ACC CAG GTG TAT        430Val Asp Pro Thr Cys Pro Leu Ser Ser Asn Pro Gly Thr Gln Val Tyr
620                 625                 630GAG GAC TAC AAC TGC ACC CTG AAC CAG ACC AAC ATC GAG AAC AAC AAC        478Glu Asp Tyr Asn Cys Thr Leu Asn Gln Thr Asn Ile Glu Asn Asn Asn635                 640                 645                 650AAC AAG TTC TAC ATC ATC CAG CTG CTC CAA GAC AGC AAC CGC TTC TTC        526Asn Lys Phe Tyr Ile Ile Gln Leu Leu Gln Asp Ser Asn Arg Phe Phe
           655                  660                 665ACC TGC TGG AAC CGC TGG GGC CGT GTG GGA GAG GTC GGC CAG TCA AAG        574Thr Cys Trp Asn Arg Trp Gly Arg Val Gly Glu Val Gly Gln Ser Lys
        670                 675                 680ATC AAC CAC TTC ACA AGG CTA GAA GAT GCA AAG AAG GAC TTT GAG AAG        622Ile Asn His Phe Thr Arg Leu Glu Asp Ala Lys Lys Asp Phe Glu Lys
    685                 690                 695AAA TTT CGG GAA AAG ACC AAG AAC AAC TGG GCA GAG CGG GAC CAC TTT        670Lys Phe Arg Glu Lys Thr Lys Asn Asn Trp Ala Glu Arg Asp His Phe
700                 705                 710GTG TCT CAC CCG GGC AAG TAC ACA CTT ATC GAA GTA CAG GCA GAG GAT        718Val Ser His Pro Gly Lys Tyr Thr Leu Ile Glu Val Gln Ala Glu Asp715                 720                 725                 730GAG GCC CAG GAA GCT GTG GTG AAG GTG GAC AGA GGC CCA GTG AGG ACT        766Glu Ala Gln Glu Ala Val Val Lys Val Asp Arg Gly Pro Val Arg Thr
            735                 740                 745GTG ACT AAG CGG GTG CAG CCC TGG TCC CTG GAC CCA GCC ACG CAG AAG        314Val Thr Lys Arg Val Gln Pro Cys Ser Leu Asp Pro Ala Thr Gln Lys
        750                 755                 760CTC ATC ACT AAC ATC TTC AGC AAG GAG ATG TTC AAG AAC ACC ATG GCC        862Leu Ile Thr Asn Ile Phe Ser Lys Glu Met Phe Lys Asn Thr Met Ala
    765                 770                 775CTC ATG GAC CTG GAT GTG AAG AAG ATG CCC CTG GGA AAG CTG AGC AAG        910Leu Met Asp Leu Asp Val Lys Lys Met Pro Leu Gly Lys Leu Ser Lys
780                 785                 790CAA CAG ATT GCA CGG GGT TTC GAG GCC TTG GAG GCG CTG GAG GAG GCC        958Gln Gln Ile Ala Arg Gly Phe Glu Ala Leu Glu Ala Leu Glu Glu Ala795                 800                 805                 810CTG AAA GGC CCC ACG GAT GGT GGC CAA AGC CTG GAG GAG CTG TCC TCA       1006Leu Lys Gly Pro Thr Asp Gly Gly Gln Ser Leu Glu Glu Leu Ser Ser
            815                 820                 825CAC TTT TAC ACC GTC ATC CCG CAC AAC TTC GGC CAC AGC CAG CCC CCG       1054His Phe Tyr Thr Val Ile Pro His Asn Phe Gly His Ser Gln Pro Pro
        830                 835                 840CCC ATC AAT TCC CCT GAG CTT CTG CAG GCC AAG AAG GAC ATG CTG CTG       1102Pro Ile Asn Ser Pro Glu Leu Leu Gln Ala Lys Lys Asp Met Leu Leu
    845                 850                 855GTG CTG GCG GAC ATC GAG CTG GCC CAG GCC CTG CAG GCA GTC TCT GAG       1150Val Leu Ala Asp Ile Glu Leu Ala Gln Ala Leu Gln Ala Val Ser Glu
860                 865                 870CAG GAG AAG ACG GTG GAG GAG GTG CCA CAC CCC CTG GAC CGA GAC TAC       1198Gln Glu Lys Thr Val Glu Glu Val Pro His Pro Leu Asp Arg Asp Tyr875                 880                 885                  890CAG CTT CTC AAG TGC CAG CTG CAG CTG CTA GAC TCT GGA GCA CCT GAG       1246Gln Leu Leu Lys Cys Gln Leu Gln Leu Leu Asp Ser Gly Ala Pro Glu
            895                 900                 905TAC AAG GTG ATA CAG ACC TAC TTA GAA CAG ACT GGC AGC AAC CAC AGG       1294Tyr Lys Val Ile Gln Thr Tyr Leu Glu Gln Thr Gly Ser Asn His Arg
        910                 915                 920TGC CCT ACA CTT CAA CAC ATC TGG AAA GTA AAC CAA GAA GGG GAG GAA       1342Cys Pro Thr Leu Gln His Ile Trp Lys Val Asn Gln Glu Gly Glu Glu
    925                 930                 935GAC AGA TTC CAG GCC CAC TCC AAA CTG GGT AAT CGG AAG CTG CTG TGG       1390
Asp Arg Phe Gln Ala His Ser Lys Leu Gly Asn Arg Lys Leu Leu Trp
940                 945                  950CAT GGC ACC AAC ATG GCC GTG GTG GCC GCC ATC CTC ACT AGT GGG CTC       1438His Gly Thr Asn Met Ala Val Val Ala Ala Ile Leu Thr Ser Gly Leu955                 960                 965                 970CGC ATC ATG CCA CAT TCT GGT GGG CGT GTT GGC AAG GGC ATC TAC TTT       1486Arg Ile Met Pro His Ser Gly Gly Arg Val Gly Lys Gly Ile Tyr Phe
            975                 980                 985GCC TCA GAG AAC AGC AAG TCA GCT GGA TAT GTT ATT GGC ATG AAG TGT       1534Ala Ser Glu Asn Ser Lys Ser Ala Gly Tyr Val Ile Gly Met Lys Cys
        990                 995                 1000GGG GCC CAC CAT GTC GGC TAC ATG TTC CTG GGT GAG GTG GCC CTG GGC       1582Gly Ala His His Val Gly Tyr Met Phe Leu Gly Glu Val Ala Leu Gly
   1005                1010                1015AGA GAG CAC CAT ATC AAC ACG GAC AAC CCC AGC TTG AAG AGC CCA CCT       1630Arg Glu His His Ile Asn Thr Asp Asn Pro Ser Leu Lys Ser Pro Pro
1020                1025                1030CCT GGC TTC GAC AGT GTC ATT GCC CGA GGC CAC ACC GAG CCT GAT CCG       1678Pro Gly Phe Asp Ser Val Ile Ala Arg Gly His Thr Glu Pro Asp Pro1035               1040                 1045               1050ACC CAG GAC ACT GAG TTG GAG CTG GAT GGC CAG CAA GTG GTG GTG CCC       1726Thr Gln Asp Thr Glu Leu Glu Leu Asp Gly Gln Gln Val Val Val Pro
           1055                1060                 1065CAG GGC CAG CCT GTG CCC TGC CCA GAG TTC AGC AGC TCC ACA TTC TCC       1774Gln Gly Gln Pro Val Pro Cys Pro Glu Phe Ser Ser Ser Thr Phe Ser
        1070               1075                 1080CAG AGC GAG TAC CTC ATC TAC CAG GAG AGC CAG TGT CGC CTG CGC TAC       1822Gln Ser Glu Tyr Leu Ile Tyr Gln Glu Ser Gln Cys Arg Leu Arg Tyr
   1085                 1090                       1095CTG CTG GAG GTC CAC CTC TGA GTGCCCGCCC TGTCCCCCGG GGTCCTGCAA          1873Leu Leu Glu Val Mis Leu  *1100                 1105GGCTGGACTG TGATCTTCAA TCATCCTGCC CATCTCTGGT ACCCCTATAT CACTCCTTTT     1933TTTCAAGAAT ACAATACGTT GTTGTTAACT ATAGTCACCA TGCTGTACAA GATCCCTGAA     1993CTTATGCCTC CTAACTGAAA TTTTGTATTC TTTGACACAT GTGCCCAGTC CCTCTCCTCC     2053CAGCCCATGG TAACCAGCAT TTGACTCTTT ACTTGTATAA GGGCAGCTTT TATAGGTTCC     2113ACATGTAAGT GAGATCATGC AGTGTTTGTC TTTCTGTGCC TGGCTTATTT CACTCAGCAT     2173AATGTGCACC GGGTTCACCC ATGTTTTCAT AAATGACAAG ATTTCCTCCT TTAAAAAAAA     2233AAAAAAAAAA AAAAAAAAAA AAAAAAAAAA AA                                   2265(2)SEQ ID NO:4描述：
(ⅰ)序列特征：
  (A)长度：534氨基酸
  (B)类型：氨基酸
  (D)拓扑：线性
(ⅱ)分子类型：蛋白质
(ⅹⅰ)序列特征：SEQ ID NO:4：Met Ala Pro Lys Pro Lys Pro Trp Val Gln Thr Glu Gly Pro Glu Lys1                5                   10                  15Lys Lys Gly Arg Gln Ala Gly Arg Glu Glu Asp Pro Phe Arg Ser Thr
        20                   25                  30Ala Glu Ala Leu Lys Ala Ile Pro Ala Glu Lys Arg Ile Ile Arg Val
    35                  40                  45Asp Pro Thr Cys Pro Leu Ser Ser Asn Pro Gly Thr Gln Val Tyr Glu
50                  55                   60Asp Tyr Asn Cys Thr Leu Asn Gln Thr Asn Ile Glu Asn Asn Asn Asn65                  70                  75                   80Lys Phe Tyr Ile Ile Gln Leu Leu Gln Asp Ser Asn Arg Phe Phe Thr
        85                      90                   95Cys Trp Asn Arg Trp Gly Arg Val Gly Glu Val Gly Gln Ser Lys Ile100                        105                         110Asn His Phe Thr Arg Leu Glu Asp Ala Lys Lys Asp Phe Glu Lys Lys
    115                120                  125Phe Arg Glu Lys Thr Lys Asn Asn Trp Ala Glu Arg Asp His Phe Val
130                 135                 140Ser His Pro Gly Lys Tyr Thr Leu Ile Glu Val Gln Ala Glu Asp Glu145                 150                 155                 160Ala Gln Glu Ala Val Val Lys Val Asp Arg Gly Pro Val Arg Thr Val
            165                 170                 175Thr Lys Arg Val Gln Pro Cys Ser Leu Asp Pro Ala Thr Gln Lys Leu
        180                 185                 190Ile Thr Asn Ile Phe Ser Lys Glu Met Phe Lys Asn Thr Met Ala Leu
    195                 200                 205Met Asp Leu Asp Val Lys Lys Met Pro Leu Gly Lys Leu Ser Lys Gln
210                 215                 220Gln Ile Ala Arq Gly Phe Glu Ala Leu Glu Ala Lau Glu Glu Ala Leu225                 230                 235                 240Lys Gly Pro Thr Asp Gly Gly Gln Ser Leu Glu Glu Leu Ser Ser His
           245                  250                 255Phe Tyr Thr Val Ile Pro His Asn Phe Gly His Ser Gln Pro Pro Pro
        260                 265                 270Ile Asn Ser Pro Glu Leu Leu Gln Ala Lys Lys Asp Met Leu Leu Val
    275                 280                 285Leu Ala Asp Ile Glu Leu Ala Gln Ala Leu Gln Ala Val Ser Glu Gln
290                 295                 300Glu Lys Thr Val Glu Glu Val Pro His Pro Leu Asp Arg Asp Tyr Gln305                 310                 315                 320Leu Leu Lys Cys Gln Leu Gln Leu Leu Asp Ser Gly Ala Pro Glu Tyr
            325                 330                 335Lys Val Ile Gln Thr Tyr Leu Glu Gln Thr Gly Ser Asn His Arg Cys
        340                 345                 350Pro Thr Leu Gln His Ile Trp Lys Val Asn Gln Glu Gly Glu Glu Asp
    355                 360                 365Arg Phe Gln Ala His Ser Lys Leu Gly Asn Arg Lys Leu Leu Trp His
370                 375                 380Gly Thr Asn Met Ala Val Val Ala Ala Ile Leu Thr Ser Gly Leu Arq385                 390                 395                 400Ile Met Pro His Ser Gly Gly Arg Val Gly Lys Gly Ile Tyr Phe Ala
           405                  410                 415Ser Glu Asn Ser Lys Ser Ala Gly Tyr Val Ile Gly Met Lys Cys Gly420                 425                 430Ala His His Val Gly Tyr Met Phe Leu Gly Glu Val Ala Leu Gly Arg
    435                 440                 445Glu His His Ile Asn Thr Asp Asn Pro Ser Leu Lys Sar Pro Pro Pro
450                 455                 460Gly Phe Asp Ser Val Ile Ala Arg Gly His Thr Glu Pro Asp Pro Thr465                 470                 475                 480Gln Asp Thr Glu Leu Glu Leu Asp Gly Gln Gln Val Val Val Pro Gln
            485                 490                 495Gly Gln Pro Val Pro Cys Pro Glu Phe Sar Ser Ser Thr Phe Ser Gln
        500                 505                  510Sar Glu Tyr Leu Ile Tyr Gln Glu Ser Gln Cys Arg Leu Arg Tyr Leu
    515                 520                 525Leu Glu Val His Leu  *
530(2)SEQ ID NO:5描述：
(ⅰ)序列特征：
  (A)长度：2265碱基对
  (B)种类：核苷酸
  (C)链型：单链
  (D)拓扑：线性
(ⅱ)分子类型：cDNA
(ⅲ)假说：非
(ⅳ)反义：非
(ⅵ)来源：
  (F)组织类型：子宫
(ⅸ)特征：
  (A)名称/键：CDS
  (B)LAGE:221..1843
  (D)SONSTIGE ANGABEN:/product=“聚ADP核糖聚合酶”
(ⅹⅰ)序列特征：SEQ ID NO:5：TGGGACTGGT CGCCTGACTC GGCCTGCCCC AGCCTCTGCT TCACCCCACT GGTGGCCAAA      60TAGCCGATGT CTAATCCCCC ACACAAGCTC ATCCCCGGCC TCTGGGATTG TTGGGAATTC     120TCTCCCTAAT TCACGCCTGA GGCTCATGGA GAGTTGCTAG ACCTGGGACT GCCCTGGGAG     180GCGCACACAA CCAGGCCGGG TGGCAGCCAG GACCTCTCCC ATG TCC CTG CTT TTC       235
                                        Met Sar Leu Leu Phe
                                        535TTG GCC ATG GCT CCA AAG CCG AAG CCC TGG GTA CAG ACT GAG GGC CCT       283Leu Ala Met Ala Pro Lys Pro Lys Pro Trp Val Gln Thr Glu Gly Pro540                 545                 550                555GAG AAG AAG AAG GGC CGG CAG GCA GGA AGG GAG GAG GAC CCC TTC CGC        331Glu Lys Lys Lys Gly Arg Gln Ala Gly Arg Glu Glu Asp Pro Phe Arg
           560                  565                 570TCC ACC GCT GAG GCC CTC AAG GCC ATA CCC GCA GAG AAG CGC ATA ATC        379Ser Thr Ala Glu Ala Leu Lys Ala Ile Pro Ala Glu Lys Arg Ile Ile
        575                 580                 585CGC GTG GAT CCA ACA TGT CCA CTC AGC AGC AAC CCC GGG ACC CAG GTG        427Arq Val Asp Pro Thr Cys Pro Leu Ser Ser Asn Pro Gly Thr Gln Val
    590                 595                 600TAT GAG GAC TAC AAC TGC ACC CTG AAC CAG ACC AAC ATC GAG AAC AAC        475Tyr Glu Asp Tyr Asn Cys Thr Leu Asn Gln Thr Asn Ile Glu Asn Asn
605                 610                  615AAC AAC AAG TTC TAC ATC ATC CAG CTG CTC CAA GAC AGC AAC CGC TTC        523Asn Asn Lys Phe Tyr Ile Ile Gln Leu Leu Gln Asp Ser Asn Arg Phe620                 625                630                  635TTC ACC TGC TGG AAC CGC TGG GGC CGT GTG GGA GAG GTC GGC CAG TCA        571Phe Thr Cys Trp Asn Arg Trp Gly Arg Val Gly Glu Val Gly Gln Ser
            640                 645                 650AAG ATC AAC CAC TTC ACA AGG CTA GAA GAT GCA AAG AAG GAC TTT GAG        619Lys Ile Asn His Phe Thr Arg Leu Glu Asp Ala Lys Lys Asp Phe Glu
        655                 660                 665AAG AAA TTT CGG GAA AAG ACC AAG AAC AAC TGG GCA GAG CGG GAC CAC        667Lys Lys Phe Arg Glu Lys Thr Lys Asn Asn Trp Ala Glu Arg Asp His
    670                 675                 680TTT GTG TCT CAC CCG GGC AAG TAC ACA CTT ATC GAA GTA CAG GCA GAG        715Phe Val Ser His Pro Gly Lys Tyr Thr Leu Ile Glu Val Gln Ala Glu
685                 690                 695GAT GAG GCC CAG GAA GCT GTG GTG AAG GTG GAC AGA GGC CCA GTG AGG        763Asp Glu Ala Gln Glu Ala Val Val Lys Val Asp Arg Gly Pro Val Arg700                 705                 710                 715ACT GTG ACT AAG CGG GTG CAG CCC TGC TCC CTG GAC CCA GCC ACG CAG        811Thr Val Thr Lys Arg Val Gln Pro Cys Ser Leu Asp Pro Ala Thr Gln
            720                 725                  730AAG CTC ATC ACT AAC ATC TTC AGC AAG GAG ATG TTC AAG AAC ACC ATG        859Lys Leu Ile Thr Asn Ile Phe Ser Lys Glu Met Phe Lys Asn Thr Met
        735                 740                 745GCC CTC ATG GAC CTG GAT GTG AAG AAG ATG CCC CTG GGA AAG CTG AGC        907Ala Lau Met Asp Leu Asp Val Lys Lys Met Pro Leu Gly Lys Leu Ser
    750                 755                 760AAG CAA CAG ATT GCA CGG GGT TTC GAG GCC TTG GAG GCG CTG GAG GAG        955Lys Gln Gln Ile Ala Arg Gly Phe Glu Ala Leu Glu Ala Leu Glu Glu
765                 770                 775800                  805                  810CCG CCC ATC AAT TCC CCT GAG CTT CTG CAG GCC AAG AAG GAC ATG CTG       1099Pro Pro Ile Asn Ser Pro Glu Leu Leu Gln Ala Lys Lys Asp Met Leu
        815                 820                 825CTG GTG CTG GCG GAC ATC GAG CTG GCC CAG GCC CTG CAG GCA GTC TCT       1147Leu Val Leu Ala Asp Ile Glu Leu Ala Gln Ala Leu Gln Ala Val Ser
    830                 835                 840GAG CAG GAG AAG ACG GTG GAG GAG GTG CCA CAC CCC CTG GAC CGA GAC       1195Glu Gln Glu Lys Thr Val Glu Glu Val Pru His Pro Leu Asp Arq Asp
845                 850                 855TAC CAG CTT CTC AAG TGC CAG CTG CAG CTG CTA GAC TCT GGA GCA CCT       1243Tyr Gln Leu Leu Lys Cys Gln Leu Gln Leu Leu Asp Ser Gly Ala Pro860                 865                 870                 875GAG TAC AAG GTG ATA CAG ACC TAC TTA GAA CAG ACT GGC AGC AAC CAC       1291Glu Tyr Lys Val Ile Gln Thr Tyr Leu Glu Gln Thr Gly Ser Asn His
            880                 885                 890AGG TGC CCT ACA CTT CAA CAC ATC TGG AAA GTA AAC CAA GAA GGG GAG       1339Arg Cys Pro Thr Leu Gln His Ile Trp Lys Val Asn Gln Glu Gly Glu
        895                 900                  905GAA GAC AGA TTC CAG GCC CAC TCC AAA CTG GGT AAT CGG AAG CTG CTG       1387Glu Asp Arg Phe Gln Ala His Ser Lys Leu Gly Asn Arg Lys Leu Leu
    910                 915                 920TGG CAT GGC ACC AAC ATG GCC GTG GTG GCC GCC ATC CTC ACT AGT GGG       1435Trp His Gly Thr Asn Met Ala Val Val Ala Ala Ile Leu Thr Ser Gly
925                 930                 935CTC CGC ATC ATG CCA CAT TCT GGT GGG CGT GTT GGC AAG GGC ATC TAC       1483Leu Arg Ile Met Pro His Ser Gly Gly Arg Val Gly Lys Gly Ile Tyr940                 945                 950                 955TTT GCC TCA GAG AAC AGC AAG TCA GCT GGA TAT GTT ATT GGC ATG AAG       1531Phe Ala Ser Glu Asn Ser Lys Ser Ala Gly Tyr Val Ile Gly Met Lys
            960                 965                 970TGT GGG GCC CAC CAT GTC GGC TAC ATG TTC CTG GGT GAG GTG GCC CTG       1579Cys Gly Ala His His Val Gly Tyr Met Phe Leu Gly Glu Val Ala Leu
        975                 980                 985GGC AGA GAG CAC CAT ATC AAC ACG GAC AAC CCC AGC TTG AAG AGC CCA       1627Gly Arg Glu His His Ile Asn Thr Asp Asn Pro Ser Leu Lys Ser Pro
    990                 995                1000CCT CCT GGC TTC GAC AGT GTC ATT GCC CGA GGC CAC ACC GAG CCT GAT       1675Pro Pro Gly Phe Asp Ser Val Ile Ala Arg Gly His Thr Glu Pro Asp1005               1010               1015CCG ACC CAG GAC ACT GAG TTG GAG CTG GAT GGC CAG CAA GTG GTG GTG       1723Pro Thr Gln Asp Thr Glu Leu Glu Leu Asp Gly Gln Gln Val Val Val1020               1025                 1030               1035CCC CAG GGC CAG CCT GTG CCC TGC CCA GAG TTC AGC AGC TCC ACA TTC       1771Pro Gln Gly Gln Pro Val Pro Cys Pro Glu Phe Ser Ser Ser Thr Pha
           1040                 1045               1050TCC CAG AGC GAG TAC CTC ATC TAC CAG GAG AGC CAG TGT CGC CTG CGC       1819Ser Gln Ser Glu Tyr Leu Ile Tyr Gln Glu Ser Gln Cys Arg Leu Arg
        1055                1060                1065TAC CTG CTG GAG GTC CAC CTC TGA GTGCCCGCCC TGTCCCCCGG GGTCCTGCAA      1873Tyr Leu Leu Glu Val His Leu  *
   1070                1075GGCTGGACTG TGATCTTCAA TCATCCTGCC CATCTCTGGT ACCCCTATAT CACTCCTTTT     1933TTTCAAGAAT ACAATACGTT GTTGTTAACT ATAGTCACCA TGCTGTACAA GATCCCTGAA     1993CTTATGCCTC CTAACTGAAA TTTTGTATTC TTTGACACAT CTGCCCAGTC CCTCTCCTCC     2053CAGCCCATGG TAACCAGCAT TTGACTCTTT ACTTGTATAA GGGCAGCTTT TATAGGTTCC     2113ACATGTAAGT GAGATCATGC AGTGTTTGTC TTTCTGTGCC TGGCTTATTT CACTCAGCAT     2173AATGTGCACC GGGTTCACCC ATGTTTTCAT AAATGACAAG ATTTCCTCCT TTAAAAAAAA     2233AAAAAAAAAA AAAAAAAAAA AAAAAAAAAA AA                                   2265(2)SEQ ID NO:6描述：
(ⅰ)序列特征：
  (A)长度：541氨基酸
  (B)类型：氨基酸
  (D)拓扑：线性
(ⅱ)分子类型：蛋白质
(ⅹⅰ)序列特征：SEQ ID NO:6：Met Ser Leu Leu Phe Leu Ala Met Ala Pro Lys Pro Lys Pro Trp Val1               5                   10                  15Gln Thr Glu Gly Pro Glu Lys Lys Lys Gly Arg Gln Ala Gly Arg Glu
        20                  25                  30Glu Asp Pro Phe Arg Ser Thr Ala Glu Ala Leu Lys Ala Ile Pro Ala
     35                 40                   45Glu Lys Arg Ile Ile Arg Val Asp Pro Thr Cys Pro Leu Ser Ser Asn
50                   55                 60Pro Gly Thr Gln Val Tyr Glu Asp Tyr Asn Cys Thr Leu Asn Gln Thr65                  70                   75                  80Asn Ile Glu Asn Asn Asn Asn Lys Phe Tyr Ile Ile Gln Leu Leu Gln85                        90                         95Asp Ser Asn Arg Phe Phe Thr Cys Trp Asn Arg Trp Gly Arg Val Gly
       100                  105                 110Glu Val Gly Gln Ser Lys Ile Asn His Phe Thr Arg Leu Glu Asp Ala
    115                 120                 125Lys Lys Asp Phe Glu Lys Lys Phe Arg Glu Lys Thr Lys Asn Asn Trp
130                 135                 140Ala Glu Arg Asp His Phe Val Ser His Pro Gly Lys Tyr Thr Leu Ile145                 150                 155                 160Glu Val Gln Ala Glu Asp Glu Ala Gln Glu Ala Val Val Lys Val Asp
            165                 170                 175Arg Gly Pro Val Arg Thr Val Thr Lys Arg Val Gln Pro Cys Ser Leu
        180                 185                 190Asp Pro Ala Thr Gln Lys Leu Ile Thr Asn Ile Phe Ser Lys Glu Met
    195                 200                 205Phe Lys Asn Thr Met Ala Leu Met Asp Leu Asp Val Lys Lys Met Pro
210                 215                 220Leu Gly Lys Leu Ser Lys Gln Gln Ile Ala Arg Gly Phe Glu Ala Leu225                 230                 235                 240Glu Ala Leu Glu Glu Ala Leu Lys Gly Pro Thr Asp Gly Gly Gln Ser
            245                 250                 255Leu Glu Glu Leu Sar Ser His Phe Tyr Thr Val Ile Pro His Asn Phe
        260                 265                 270Gly His Ser Gln Pro Pro Pro Ile Asn Ser Pro Glu Leu Leu Gln Ala
    275                 280                 285Lys Lys Asp Met Leu Leu Val Leu Ala Asp Ile Glu Leu Ala Gln Ala290                  295                 300Leu Gln Ala Val Ser Glu Gln Glu Lys Thr Val Glu Glu Val Pro His305                 310                 315                 320Pro Leu Asp Arg Asp Tyr Gln Leu Leu Lys Cys Gln Leu Gln Leu Leu
            325                330                  335Asp Ser Gly Ala Pro Glu Tyr Lys Val Ile Gln Thr Tyr Leu Glu Gln
        340                 345                 350Thr Gly Ser Asn His Arg Cys Pro Thr Leu Gln His Ile Trp Lys Val
    355                 360                 365Asn Gln Glu Gly Glu Glu Asp Arg Phe Gln Ala His Ser Lys Leu Gly
370                 375                 380Asn Arg Lys Leu Leu Trp His Gly Thr Asn Met Ala Val Val Ala Ala385                 390                 395                 400Ile Leu Thr Ser Gly Leu Arg Ile Met Pro His Ser Gly Gly Arg Val405                410                 415Gly Lys Gly Ile Tyr Phe Ala Ser Glu Asn Ser Lys Ser Ala Gly Tyr
        420                 425                 430Val Ile Gly Met Lys Cys Gly Ala His His Val Gly Tyr Met Phe Leu
    435                 440                 445Gly Glu Val Ala Leu Gly Arg Glu Mis His Ile Asn Thr Asp Asn Pro
450                 455                 460Ser Leu Lys Ser Pro Pro Pro Gly Phe Asp Ser Val Ile Ala Arg Gly465                 470                 475                 480His Thr Glu Pro Asp Pro Thr Gln Asp Thr Glu Leu Glu Leu Asp Gly
            485                 490                 495Gln Gln Val Val Val Pro Gln Gly Gln Pro Val Pro Cys Pro Glu Phe
        500                 505                 510Ser Ser Ser Thr Phe Ser Gln Ser Glu Tyr Leu Ile Tyr Gln Glu Ser
    515                 520                 525Gln Cys Arq Leu Arg Tyr Leu Leu Glu Val His Leu  *
530                 535                 540(2)SEQ ID NO:7描述：
(ⅰ)序列特征：
  (A)长度：1740碱基对
  (B)种类：核苷酸
  (C)链型：单链
  (D)拓扑：线性
(ⅱ)分子类型：cDNA
(ⅲ)假说：非
(ⅳ)反义：非
(ⅵ)来源：
  (F)组织类型：骨骼肌
(ⅸ)特征：
  (A)名称/键：CDS
  (B)LAGE:112..1710
(ⅹⅰ)序列特征：SEQ ID NO:7：CCCGGCTTTC ACTTTTTCTG CTGCCTCGGG GAACACCTCG AGCCAACTGC TTCCTAACTC        60AGGGTGGGCA GAACTGACGG GATCTAAGCT TCTGCATCTC TGAGGAGAAC C ATG GCT        117
                                                     Met AlaCCA AAA CGA AAG GCC TCT GTG CAG ACT GAG GGC TCC AAG AAG CAG CGA         165Pro Lys Arg Lys Ala Ser Val Gln Thr Glu Gly Ser Lys Lys Gln Arg
545                 550                 555CAA GGG ACA GAG GAG GAG GAC AGC TTC CGG TCC ACT GCC GAG GCT CTC        213Gln Gly Thr Glu Glu Glu Asp Ser Phe Arg Ser Thr Ala Glu Ala Leu560                 565                 570                 575AGA GCA GCA CCT GCT GAT AAT CGG GTC ATC CGT GTG GAC CCC TCA TGT        261Arg Ala Ala Pro Ala Asp Asn Arg Val Ile Arg Val Asp Pro Ser Cys
            580                 585                 590CCA TTC AGC CGG AAC CCC GGG ATA CAG GTC CAC GAG GAC TAT GAC TGT        309Pro Phe Ser Arg Asn Pro Gly Ile Gln Val His Glu Asp Tyr Asp Cys
        595                 600                 605ACC CTG AAC CAG ACC AAC ATC GGC AAC AAC AAC AAC AAG TTC TAT ATT        357Thr Leu Asn Gln Thr Asn Ile Gly Asn Asn Asn Asn Lys Phe Tyr Ile
    610                 615                 620ATC CAA CTG CTG GAG GAG GGT AGT CGC TTC TTC TGC TGG AAT CGC TGG        405Ile Gln Leu Leu Glu Glu Gly Ser Arg Phe Phe Cys Trp Asn Arg Trp
625                 630                 635GGC CGC GTG GGA GAG GTG GGC CAG AGC AAG ATG AAC CAC TTC ACC TGC        453Gly Arg Val Gly Glu Val Gly Gln Ser Lys Met Asn His Phe Thr Cys640                 645                 650                 655CTG GAA GAT GCA AAG AAG GAC TTT AAG AAG AAA TTT TGG GAG AAG ACT        501Leu Glu Asp Ala Lys Lys Asp Phe Lys Lys Lys Phe Trp Glu Lys Thr
            660                 665                 670AAA AAC AAA TGG GAG GAG CGG GAC CGT TTT GTG GCC CAG CCC AAC AAG        549Lys Asn Lys Trp Glu Glu Arg Asp Arg Phe Val Ala Gln Pro Asn Lys
        675                 680                 685TAC ACA CTT ATA GAA GTC CAG GGA GAA GCA GAG AGC CAA GAG GCT GTA        597Tyr Thr Leu Ile Glu Val Gln Gly Glu Ala Glu Ser Gln Glu Ala Val
    690                 695                 700GTG AAG GCC TTA TCT CCC CAG GTG GAC AGC GGC CCT GTG AGG ACC GTG        645Val Lys Ala Leu Ser Pro Gln Val Asp Ser Gly Pro Val Arg Thr Val
705                 710                 715GTC AAG CCC TGC TCC CTA GAC CCT GCC ACC CAG AAC CTT ATC ACC AAC        693Val Lys Pro Cys Ser Leu Asp Pro Ala Thr Gln Asn Leu Ile Thr Asn720                 725                 730                 735ATC TTC AGC AAA GAG ATG TTC AAG AAC GCA ATG ACC CTC ATG AAC CTG        741Ile Phe Ser Lys Glu Met Phe Lys Asn Ala Met Thr Leu Met Asn Leu
                           740               745                   750GAT GTG AAG AAG ATG CCC TTG GGA AAG CTG ACC AAG CAG CAG ATT GCC        789Asp Val Lys Lys Met Pro Leu Gly Lys Leu Thr Lys Gln Gln Ile Ala
                   755                        760                        765CGT GGC TTC GAG GCC TTG GAA GCT CTA GAG GAG GCC ATG AAA AAC CCC        837Arg Gly Phe Glu Ala Leu Glu Ala Leu Glu Glu Ala Met Lys Asn Pro
            770                775               780ACA GGG GAT GGC CAG AGC CTG GAA GAG CTC TCC TCC TGC TTC TAC ACT        885Thr Gly Asp Gly Gln Ser Leu Glu Glu Leu Ser Ser Cys Phe Tyr Thr785                      790                      795GTC ATC CCA CAC AAC TTC GGC CGC AGC CGA CCC CCG CCC ATC AAC TCC         933Val Ile Pro His Asn Phe Gly Arg Ser Arg Pro Pro Pro Ile Asn Ser800                 805                 810                  815CCT GAT GTG CTT CAG GCC AAG AAG GAC ATG CTG CTG GTG CTA GCG GAC         981Pro Asp Val Leu Gln Ale Lys Lys Asp Met Leu Leu Val Leu Ala Asp
            820                 825                 830ATC GAG TTG GCG CAG ACC TTG CAG GCA GCC CCT GGG GAG GAG GAG GAG        1029Ile Glu Leu Ala Gln Thr Leu Gln Ala Ala Pro Gly Glu Glu Glu Glu
       835                  840                     845AAA GTG GAA GAG GTG CCA CAC CCA CTG GAT CGA GAC TAC CAG CTC CTC        1077Lys Val Glu Glu Val Pro His Pro Leu Asp Arg Asp Tyr Gln Leu Leu
   850                  855                 860AGG TGC CAG CTT CAA CTG CTG GAC TCC GGG GAG TCC GAG TAC AAG GCA        1125Arg Cys Gln Leu Gln Leu Leu Asp Ser Gly Glu Ser Glu Tyr Lys Ala
865                 870                 875ATA CAG ACC TAC CTG AAA CAG ACT GGC AAC AGC TAC AGG TGC CCA AAC        1173Ile Gln Thr Tyr Leu Lys Gln Thr Gly Asn Ser Tyr Arg Cys Pro Asn880                 885                 890                 895CTG CGG CAT GTT TGG AAA GTG AAC CGA GAA GGG GAG GGA GAC AGG TTC        1221Leu Arg His Val Trp Lys Val Asn Arg Glu Gly Glu Gly Asp Arg Phe
           900                  905                 910CAG GCC CAC TCC AAA CTG GGC AAT CGG AGG CTG CTG TGG CAC GGC ACC        1269Gln Ala His Ser Lys Leu Gly Asn Arg Arg Leu Leu Trp His Gly Thr
        915                 920                 925AAT GTG GCC GTG GTG GCT GCC ATC CTC ACC AGT GGG CTC CGA ATC ATG        1317Asn Val Ala Val Val Ala Ala Ile Leu Thr Ser Gly Leu Arg Ile Met
    930                 935                 940CCA CAC TCG GGT GGT CGT GTT GGC AAG GGT ATT TAT TTT GCC TCT GAG        1365Pro His Ser Gly Gly Arg Val Gly Lys Gly Ile Tyr Phe Ala Ser Glu
945                 950                 955AAC AGC AAG TCA GCT GGC TAT GTT ACC ACC ATG CAC TGT GGG GGC CAC        1413Asn Ser Lys Ser Ala Gly Tyr Val Thr Thr Met His Cys Gly Gly His960                 965                 970                 975CAG GTG GGC TAC ATG TTC CTG GGC GAG GTG GCC CTC GGC AAA GAG CAC        1461Gln Val Gly Tyr Met Phe Leu Gly Glu Val Ala Leu Gly Lys Glu His
            980                 985                 990CAC ATC ACC ATC GAT GAC CCC AGC TTG AAG AGT CCA CCC CCT GGC TTT        1509His Ile Thr Ile Asp Asp Pro Ser Leu Lys Ser Pro Pro Pro Gly Phe
       995                 1000                 1005GAC AGC GTC ATC GCC CGA GGC CAA ACC GAG CCG GAT CCC GCC CAG GAC        1557Asp Ser Val Ile Ala Arg Gly Gln Thr Glu Pro Asp Pro Ala Gln Asp
   1010                1015                1020ATT GAA CTT GAA CTG GAT GGG CAG CCG GTG GTG GTG CCC CAA GGC CCG        1605Ile Glu Leu Glu Leu Asp Gly Gln Pro Val Val Val Pro Gln Gly Pro1025                1030                 1035CCT GTG CAG TGC CCG TCA TTC AAA AGC TCC AGC TTC AGC CAG AGT GAA       1653Pro Val Gln Cys Pro Ser Phe Lys Ser Ser Ser Phe Sar Gln Ser Glu1040               1045                1050                 1055TAC CTC ATA TAC AAG GAG AGC CAG TGT CGC CTG CGC TAC CTG CTG GAG       1701Tyr Leu Ile Tyr Lys Glu Ser Gln Cys Arg Leu Arg Tyr Leu Leu Glu
           1060                1065                 1070ATT CAC CTC TAAGCTGCTT GCCCTCCCTA GGTCCAAGCC                          1740Ile His Leu(2)SEQ ID NO:8描述：
(ⅰ)序列特征：
  (A)长度：533氨基酸
  (B)类型：氨基酸
  (D)拓扑：线性
(ⅱ)分子类型：蛋白质
(ⅹⅰ)序列特征：SEQ ID NO:8：Met Ala Pro Lys Arg Lys Ala Ser Val Gln Thr Glu Gly Ser Lys Lys1               5                    10                  15Gln Arg Gln Gly Thr Glu G1u Glu Asp Ser Phe Arg Ser Thr Ala Glu
        20                  25                   30Ala Leu Arg Ala Ala Pro Ala Asp Asn Arg Val Ile Arg Val Asp Pro
    35                  40                   45Ser Cys Pro Phe Ser Arg Asn Pro Gly Ile Gln Val His Glu Asp Tyr
50                  55                   60Asp Cys Thr Leu Asn Gln Thr Asn Ile Gly Asn Asn Asn Asn Lys Phe65                  70                  75                  80Tyr Ile Ile Gln Leu Leu Glu Glu Gly Ser Arg Phe Phe Cys Trp Asn
            85                  90                   95Arg Trp Gly Arg Val Gly Glu Val Gly Gln Ser Lys Met Asn His Phe
        100                 105                 110Thr Cys Leu Glu Asp Ala Lys Lys Asp Phe Lys Lys Lys Phe Trp Glu
   115                  120                 125Lys Thr Lys Asn Lys Trp Glu Glu Arg Asp Arg Phe Val Ala Gln Pro
130                 135                 140Asn Lys Tyr Thr Leu Ile Glu Val Gln Gly Glu Ala Glu Ser G1n Glu145                 150                 155                 160Ala Val Val Lys Ala Leu Ser Pro Gln Val Asp Ser Gly Pro Val Arg
            165                 170                 175Thr Val Val Lys Pro Cys Ser Leu Asp Pro Ala Thr Gln Asn Leu Ile180                185                190Thr Asn Ile Phe Ser Lys Glu Met Phe Lys Asn Ala Met Thr Leu Met
    195                 200                 205Asn Leu Asp Val Lys Lys Met Pro Leu Gly Lys Leu Thr Lys Gln Gln
210                 215                 220Ile Ala Arg Gly Phe Glu Ala Leu Glu Ala Leu Glu Glu Ala Met Lys225                 230                 235                 240Asn Pro Thr Gly Asp Gly Gln Ser Leu Glu Glu Leu Ser Ser Cys Phe
            245                 250                 255Tyr Thr Val Ile Pro His Asn Phe Gly Arg Ser Arg Pro Pro Pro Ile
        260                 265                 270Asn Ser Pro Asp Val Leu Gln Ala Lys Lys Asp Met Leu Leu Val Leu
   275                  280                     285Ala Asp Ile Glu Leu Ala Gln Thr Leu Gln Ala Ala Pro Gly Glu Glu290                  295                 300Glu Glu Lys Val Glu Glu Val Pro His Pro Leu Asp Arg Asp Tyr Gln305                 310                 315                 320Leu Leu Arg Cys Gln Leu Gln Leu Leu Asp Ser Gly Glu Ser Glu Tyr
            325                 330                 335Lys Ala Ile Gln Thr Tyr Leu Lys Gln Thr Gly Asn Ser Tyr Arg Cys
        340                 345                 350Pro Asn Leu Arg His Val Trp Lys Val Asn Arg Glu Gly Glu Gly Asp
    355                 360                  365Arg Phe Gln Ala His Ser Lys Leu Gly Asn Arg Arg Leu Leu Trp His370                  375                 380Gly Thr Asn Val Ala Val Val Ala Ala Ile Leu Thr Ser Gly Leu Arg385                 390                  395                400Ile Met Pro His Ser Gly Gly Arg Val Gly Lys Gly Ile Tyr Phe Ala
            405                 410                 415Ser Glu Asn Ser Lys Ser Ala Gly Tyr Val Thr Thr Met His Cys Gly
        420                 425                 430Gly His Gln Val Gly Tyr Met Phe Leu Gly Glu Val Ala Leu Gly Lys
    435                 440                 445Glu His His Ile Thr Ile Asp Asp Pro Ser Leu Lys Ser Pro Pro Pro
450                 455                 460Gly Phe Asp Ser Val Ile Ala Arg Gly Gln Thr Glu Pro Asp Pro Ale465                 470                 475                 480Gln Asp Ile Glu Leu Glu Leu Asp Gly Gln Pro Val Val Val Pro Gln
            485                 490                 495Gly Pro Pro Val Gln Cys Pro Ser Phe Lys Ser Ser Ser Phe Ser Gln500                505                510Ser Glu Tyr Leu Ile Tyr Lys Glu Ser Gln Cys Arg Leu Arg Tyr Leu
    515                 520                 525Leu Glu Ile His Leu
530(2)SEQ ID NO:9描述：
(ⅰ)序列特征：
  (A)长度：1587碱基对
  (B)种类：核苷酸
  (C)链型：单链
  (D)拓扑：线性
(ⅱ)分子类型：cDNA
(ⅲ)假说：非
(ⅳ)反义：非
(ⅵ)来源：
  (F)组织类型：骨骼肌
(ⅸ)特征：
  (A)名称/键：CDS
  (B)LAGE:1..1584
(ⅹⅰ)序列特征：SEQ ID NO:9：ATG GCT CCA AAA CGA AAG GCC TCT GTG CAG ACT GAG GGC TCC AAG AAG         48Met Ala Pro Lys Arg Lys Ala Ser Val Gln Thr Glu Gly Ser Lys Lys
535                 540                 545CAG CGA CAA GGG ACA GAG GAG GAG GAC AGC TTC CGG TCC ACT GCC GAG         96Gln Arg Gln Gly Thr Glu Glu Glu Asp Ser Phe Arg Ser Thr Ala Glu550                 555                 560                 565GCT CTC AGA GCA GCA CCT GCT GAT AAT CGG GTC ATC CGT GTG GAC CCC        144Ala Leu Arg Ala Ala Pro Ala Asp Asn Arg Val Ile Arg Val Asp Pro
            570                 575                 580TCA TGT CCA TTC AGC CGG AAC CCC GGG ATA CAG GTC CAC GAG GAC TAT        192Ser Cys Pro Phe Ser Arg Asn Pro Gly Ile Gln Val His Glu Asp Tyr
        585                 590                 595GAC TGT ACC CTG AAC CAG ACC AAC ATC GGC AAC AAC AAC AAC AAG TTC        240Asp Cys Thr Leu Asn Gln Thr Asn Ile Gly Asn Asn Asn Asn Lys Phe
    600                 605                 610TAT ATT ATC CAA CTG CTG GAG GAG GGT AGT CGC TTC TTC TGC TGG AAT        288Tyr Ile Ile Gln Leu Leu Glu Glu Gly Ser Arg Phe Phe Cys Trp Asn
615                 620                 625CGC TGG GGC CGC GTG GGA GAG GTG GGC CAG AGC AAG ATG AAC CAC TTC        336Arg Trp Gly Arg Val Gly Glu Val Gly Gln Ser Lys Met Asn His Phe630                 635                 640                 645ACC TGC CTG GAA GAT GCA AAG AAG GAC TTT AAG AAG AAA TTT TGG GAG    384Thr Cys Leu Glu Asp Ala Lys Lys Asp Phe Lys Lys Lys Phe Trp Glu
            650                 655                 660AAG ACT AAA AAC AAA TGG GAG GAG CGG GAC CGT TTT GTG GCC CAG CCC    432Lys Thr Lys Asn Lys Trp Glu Glu Arg Asp Arg Phe Val Ala Gln Pro
        665                 670                 675AAC AAG TAC ACA CTT ATA GAA GTC CAG GGA GAA GCA GAG AGC  CAA GAG   480Asn Lys Tyr Thr Leu Ile Glu Val Gln Gly Glu Ala Glu Ser Gln Glu
    680                 685                 690GCT GTA GTG AAG GTG GAC AGC GGC CCT GTG AGG ACC GTG GTC AAG CCC    528Ala Val Val Lys Val Asp Ser Gly Pro Val Arg Thr Val Val Lys Pro
695                  700                705TGC TCC CTA GAC CCT GCC ACC CAG AAC CTT ATC ACC AAC ATC TTC AGC    576Cys Ser Leu Asp Pro Ala Thr Gln Asn Leu Ile Thr Asn Ile Phe Ser710                 715                 720                 725AAA GAG ATG TTC AAG AAC GCA ATG ACC CTC ATG AAC CTG GAT GTG AAG    624Lys Glu Met Phe Lys Asn Ala Met Thr Leu Met Asn Leu Asp Val Lys
           730                  735                 740AAG ATG CCC TTG GGA AAG CTG ACC AAG CAG CAG ATT GCC CGT GGC TTC    672Lys Met Pro Leu Gly Lys Leu Thr Lys Gln Gln Ile Ala Arg Gly Phe
        745                 750                 755GAG GCC TTG GAA GCT CTA GAG GAG GCC ATG AAA AAC CCC ACA GGG GAT    720Glu Ala Leu Glu Ala Leu Glu Glu Ala Met Lys Asn Pro Thr Gly Asp
    760                 765                 770GGC CAG AGC CTG GAA GAG CTC TCC TCC TGC TTC TAC ACT GTC ATC CCA    768Gly Gln Ser Leu Glu Glu Leu Ser Ser Cys Phe Tyr Thr Val Ile Pro
775                 780                 785CAC AAC TTC GGC CGC AGC CGA CCC CCG CCC ATC AAC TCC CCT GAT GTG    816His Asn Phe Gly Arg Ser Arg Pro Pro Pro Ile Asn Ser Pro Asp Val790                 795                 800                 805CTT CAG GCC AAG AAG GAC ATG CTG CTG GTG CTA GCG GAC ATC GAG TTG    864Leu Gln Ala Lys Lys Asp Met Leu Leu Val Leu Ala Asp Ile Glu Leu
       810                      815                 820GCG CAG ACC TTG CAG GCA GCC CCT GGG GAG GAG GAG GAG AAA GTG GAA    912Ala Gln Thr Leu Gln Ala Ala Pro Gly Glu Glu Glu Glu Lys Val Glu
        825                 830                 835GAG GTC CCA CAC CCA CTG GAT CGA GAC TAC CAG CTC CTC AGG TGC CAG    960Glu Val Pro His Pro Leu Asp Arg Asp Tyr Gln Leu Leu Arg Cys Gln
    840                 845                 850CTT CAA CTG CTG GAC TCC GGG GAG TCC GAG TAC AAG GCA ATA CAG ACC   1008Leu Gln Leu Leu Asp Ser Gly Glu Ser Glu Tyr Lys Ala Ile Gln Thr
855                 860                 865TAC CTG AAA CAG ACT GGC AAC AGC TAC AGG TGC CCA AAC CTG CGG CAT   1056Tyr Leu Lys Gln Thr Gly Asn Ser Tyr Arg Cys Pro Asn Leu Arg His870                875                880                885GTT TGG AAA GTG AAC CGA GAA GGG GAG GGA GAC AGG TTC CAG GCC CAC   1104Val Trp Lys Val Asn Arg Glu Gly Glu Gly Asp Arg Phe Gln Ala His
            890                 895                 900TCC AAA CTG GGC AAT CGG AGG CTG CTG TGG CAC GGC ACC AAT GTG GCC   1152Ser Lys Leu Gly Asn Arg Arg Leu Leu Trp His Gly Thr Asn Val Ala
       905                  910                  915GTG GTG GCT GCC ATC CTC ACC AGT GGG CTC CGA ATC ATG CCA CAC TCG   1200Val Val Ala Ala Ile Leu Thr Ser Gly Leu Arg Ile Met Pro His Ser
    920                 925                 930GGT GGT CGT GTT GGC AAG GGT ATT TAT TTT GCC TCT GAG AAC AGC AAG   1248Gly Gly Arg Val Gly Lys Gly Ile Tyr Phe Ala Ser Glu Asn Ser Lys
935                 940                 945TCA GCT GGC TAT GTT ACC ACC ATG CAC TGT GGG GGC CAC CAG GTG GGC   1296Ser Ala Gly Tyr Val Thr Thr Met His Cys Gly Gly His Gln Val Gly950                 955                 960                 965TAC ATG TTC CTG GGC GAG GTG GCC CTC GGC AAA GAG CAC CAC ATC ACC   1344Tyr Met Phe Leu Gly Glu Val Ala Leu Gly Lys Glu His His Ile Thr
            970                 975                 980ATC GAT GAC CCC AGC TTG AAG AGT CCA CCC CCT GGC TTT GAC AGC GTC   1392Ile Asp Asp Pro Ser Leu Lys Ser Pro Pro Pro Gly Phe Asp Ser Val
        985                 990                 995ATC GCC CGA GGC CAA ACC GAG CCG GAT CCC GCC CAG GAC ATT GAA CTT   1440Ile Ala Arg Gly Gln Thr Glu Pro Asp Pro Ala Gln Asp Ile Glu Leu
   1000                1005                 1010GAA CTG GAT GGG CAG CCG GTG GTG GTG CCC CAA GGC CCG CCT GTG CAG   1488Glu Leu Asp Gly Gln Pro Val Val Val Pro Gln Gly Pro Pro Val Gln1015                 1020                1025TGC CCG TCA TTC AAA AGC TCC AGC TTC AGC CAG AGT GAA TAC CTC ATA   1536Cys Pro Ser Phe Lys Ser Ser Ser Phe Ser Gln Ser Glu Tyr Leu Ile1030                1035               1040                1045TAC AAG GAG AGC CAG TGT CGC CTG CGC TAC CTG CTG GAG ATT CAC CTC   1584Tyr Lys Glu Ser Gln Cys Arg Leu Arg Tyr Leu Leu Glu Ile His Leu
           1050                1055                 1060TAA                                                               1587(2)SEQ ID NO:10描述：
(ⅰ)序列特征：
  (A)长度：528氨基酸
  (B)类型：氨基酸
  (D)拓扑：线性
(ⅱ)分子类型：蛋白质
(ⅹⅰ)序列特征：SEQ ID NO:10：Met Ala Pro Lys Arg Lys Ala Ser Val Gln Thr Glu Gly Ser Lys Lys1              5                10                15Gln Arg Gln Gly Thr Glu Glu Glu Asp Ser Phe Arg Ser Thr Ala Glu
        20                  25                   30Ala Leu Arg Ala Ala Pro Ala Asp Asn Arg Val Ile Arg Val Asp Pro
    35                  40                  45Ser Cys Pro Phe Ser Arg Asn Pro Gly Ile Gln Val His Glu Asp Tyr
50                  55                   60Asp Cys Thr Leu Asn Gln Thr Asn Ile Gly Asn Asn Asn Asn Lys Phe65                  70                  75                   80Tyr Ile Ile Gln Leu Leu Glu Glu Gly Ser Arg Phe Phe Cys Trp Asn
            85                  90                   95Arg Trp Gly Arg Val Gly Glu Val Gly Gln Ser Lys Met Asn His Phe
        100                 105                 110Thr Cys Leu Glu Asp Ala Lys Lys Asp Phe Lys Lys Lys Phe Trp Glu
    115                 120                 125Lys Thr Lys Asn Lys Trp Glu Glu Arg Asp Arg Phe Val Ala Gln Pro130                  135                 140Asn Lys Tyr Thr Leu Ile Glu Val Gln Gly Glu Ala Glu Ser Gln Glu145                 150                  155                160Ala Val Val Lys Val Asp Ser Gly Pro Val Arg Thr Val Val Lys Pro
            165                 170                 175Cys Ser Leu Asp Pro Ala Thr Gln Asn Leu Ile Thr Asn Ile Phe Ser
        180                 185                 190Lys Glu Met Phe Lys Asn Ala Met Thr Leu Met Asn Leu Asp Val Lys
    195                 200                 205Lys Met Pro Leu Gly Lys Leu Thr Lys Gln Gln Ile Ala Arg Gly Phe
210                 215                 220Glu Ala Leu Glu Ala Leu Glu Glu Ala Met Lys Asn Pro Thr Gly Asp225                 230                 235                 240Gly Gln Ser Leu Glu Glu Leu Ser Ser Cys Phe Tyr Thr Val Ile Pro
            245                  250                255His Asn Phe Gly Arg Ser Arg Pro Pro Pro Ile Asn Ser Pro Asp Val
        260                 265                 270Leu Gln Ala Lys Lys Asp Met Leu Leu Val Leu Ala Asp Ile Glu Leu
    275                  280                285Ala Gln Thr Leu Gln Ala Ala Pro Gly Glu Glu Glu Glu Lys Val Glu
290                 295                 300Glu Val Pro His Pro Leu Asp Arg Asp Tyr Gln Leu Leu Arg Cys Gln305                 310                 315                 320Leu Gln Leu Leu Asp Ser Gly Glu Ser Glu Tyr Lys Ala Ile Gln Thr325                      330                       335Tyr Leu Lys Gln Thr Gly Asn Ser Tyr Arg Cys Pro Asn Leu Arg His
        340                 345                 350Val Trp Lys Val Asn Arg Glu Gly Glu Gly Asp Arg Phe Gln Ala His
   355                  360                 365Ser Lys Leu Gly Asn Arg Arg Leu Leu Trp His Gly Thr Asn Val Ala
370                 375                 380Val Val Ala Ala Ile Leu Thr Ser Gly Leu Arg Ile Met Pro His Ser395                 390                 395                 400Gly Gly Arg Val Gly Lys Gly Ile Tyr Phe Ala Ser Glu Asn Ser Lys
            405                 4l0                 415Ser Ala Gly Tyr Val Thr Thr Met His Cys Gly Gly His Gln Val Gly
        420                 425                  430Tyr Met Phe Leu Gly Glu Val Ala Leu Gly Lys Glu His His Ile Thr
    435                 440                 445Ile Asp Asp Pro Ser Leu Lys Ser Pro Pro Pro Gly Phe Asp Ser Val
450                 455                 460Ile Ale Arg Gly Gln Thr Glu Pro Asp Pro Ala Gln Asp Ile Glu Leu465                 470                 475                 480Glu Leu Asp Gly Gln Pro Val Val Val Pro Gln Gly Pro Pro Val Gln
            485                 490                 495Cys Pro Ser Phe Lys Ser Ser Ser Phe Ser Gln Ser Glu Tyr Leu Ile
        500                 505                 510Tyr Lys Glu Ser Gln Cys Arg Leu Arg Tyr Leu Leu Glu Ile His Leu
    515                 520                 525(2)SEQ ID NO:11描述：
(ⅰ)序列特征：
  (A)长度：14氨基酸
  (B)类型：氨基酸
  (C)链型：单链
  (D)拓扑：线性
(ⅱ)分子类型：肽
(ⅲ)假说：是
(ⅸ)特征：
  (A)名称/键：区段
  (B)IAGE:2
  (D)  SONSTIGE ANGABEN：/注释=  “Xaa代表1至5个其他氨基酸”
(ⅸ)特征：
  (A)名称/键：区段
  (B)LAGE:3
  (D)SONSTIGE ANGABEN：/注释=“Xaa代表Ser或Thr”
(ⅹⅰ)序列特征：SEQ ID NO:11：
Pro Xaa Xaa Gly Xaa Xaa Xaa Gly Lys Gly Ile Tyr Phe Ala
1    5    10(2)SEQ ID NO:12描述：
(ⅰ)序列特征：
  (A)长度：21氨基酸
  (B)类型：氨基酸
  (C)链型：单链
  (D)拓扑：线性
(ⅱ)分子类型：肽
(ⅲ)假说：是
(ⅸ)特征：
  (A)名称/键：区段
  (B)LAGE:1
  (D)SONSTIGE ANGABEN：/注释=“Xaa代表Ser或Thr”
(ⅸ)特征：
  (A)名称/键：区段
  (B)LAGE:6
  (D)SONSTIGE ANGABEN：/注释=“Xaa代表Ile或Val”
(ⅸ)特征：
  (A)名称/键：区段
  (B)LAGE:9
  (D)SONSTIGE ANGABEN：/注释=“Xaa代表1至5个其他氨基酸”
(ⅸ)特征：
  (A)名称/键：区段
  (B)LAGE:10
  (D)SONSTIGE ANGABEN：/注释=“Xaa代表Ser或Thr”
(ⅹⅰ)序列特征：SEQ ID NO:12：Xaa Xaa Gly Leu Arg Xaa Xaa Pro Xaa Xaa Gly Xaa Xaa Xaa Gly Lys1                5                  10                  15Gly Ile Tyr Phe Ala
        20(2)SEQ ID NO:13描述：
(ⅰ)序列特征：
  (A)长度：45氨基酸
  (B)类型：氨基酸
  (C)链型：单链
  (D)拓扑：线性
(ⅱ)分子类型：肽
(ⅲ)假说：是
(ⅸ)特征：
  (A)名称/键：区段
  (B)LAGE:16
  (D)SONSTIGE ANGABEN：/注释= “Xaa代表Ser或Thr”
(ⅸ)特征：
  (A)名称/键：区段
  (B)LAGE:21
  (D)SONSTIGE ANGABEN：/注释=“Xaa代表Ile或Val”
(ⅸ)特征：
  (A)名称/键：区段
  (B)LAGE:24
  (D)SONSTIGE ANGABEN：/注释=“Xaa代表1至5个其他氨基酸”
(ⅸ)特征：
  (A)名称/键：区段
  (B)LAGE:25
  (D)SONSTIGE ANGABEN：/注释=“Xaa代表Ser或Thr”
(ⅸ)特征：
  (A)名称/键：区段
  (B)LAGE:6
  (D)SONSTIGE ANGABEN：/注释=“Xaa代表Ser或Thr”
(ⅸ)序列特征：SEQ ID NO:13：Leu Leu Trp His Gly Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Ile Leu Xaa1               5                    10                 15Xaa Gly Leu Arg Xaa Xaa Pro Xaa Xaa Gly Xaa Xaa Xaa Gly Lys Gly
        20                   25                          30Ile Tyr Phe Ala Xaa Xaa Xaa Ser Lys Ser Ala Xaa Tyr
    35                  40                   45(2)SEQ ID NO:14描述：
(ⅰ)序列特征：
  (A)长度：22氨基酸
  (B)类型：氨基酸
  (C)链型：单链
  (D)拓扑：线性
(ⅱ)分子类型：肽
(ⅲ)假说：是
(ⅸ)特征：
  (A)名称/键：区段
  (B)LAGE:1
  (D)SONSTIGE ANGABEN：/注释=“Xaa代表Leu或Val”
(ⅹⅰ)序列特征：SEQ ID NO:14：Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Leu Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Leu Xaa1                5                  10                  15Xaa Xaa Xaa Xas Xaa Leu
        20(2)SEQ ID NO:15描述：
(ⅰ)序列特征：
  (A)长度：27氨基酸
  (B)类型：氨基酸
  (C)链型：单链
  (D)拓扑：线性
(ⅱ)分子类型：肽
(ⅲ)假说：是
(ⅸ)特征：
  (A)名称/键：区段
  (B)LAGE:21
  (D)SONSTIGE ANGABEN：/注释=“Xaa代表Asp或Glu”
(ⅸ)特征：
  (A)名称/键：区段
  (B)LAGE:22
  (D)SONSTIGE ANGABEN：/注释=“Xaa代表10或11个其他氨基酸”
(ⅹⅰ)序列特征：SEQ ID NO:15：Leu Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Asn Xaa Xaa Tyr Xaa Xaa1               5                   10                  15Gln Leu Leu Xaa Xaa Xaa Trp Gly Arg Val Gly
        20                  25(2)SEQ ID NO:16描述：
(ⅰ)序列特征：
  (A)长度：29氨基酸
  (B)类型：氨基酸
  (C)链型：单链
  (D)拓扑：线性
(ⅱ)分子类型：肽
(ⅲ)假说：是
(ⅹⅰ)序列特征：SEQ ID NO:16：Ala Xaa Xaa Xaa Phe Xaa Lys Xaa Xaa Xaa Xaa Lys Thr Xaa Asn Xaa1                5                  10                  15Trp Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Phe Xaa Xaa Xaa Pro Xaa Lys
        20                  25(2)SEQ ID NO:17描述：
(ⅰ)序列特征：
  (A)长度：44氨基酸
  (B)类型：氨基酸
  (C)链型：单链
  (D)拓扑：线性
(ⅱ)分子类型：肽
(ⅲ)假说：是
(ⅸ)特征：
  (A)名称/键：区段
  (B)LAGE:4
  (D)SONSTIGE ANGABEN：/注释=“Xaa代表Ile或Leu”
(ⅹⅰ)序列特征：SEQ ID NO:17：Gln Xaa Leu Xaa Xaa Xaa Ile Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa1               5                    10                 15Met Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Pro Leu Gly Lys Leu
         20                  25                 30Xaa Xaa Xaa Gln Ile Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Leu
    35                  40(2)SEQ ID NO:18描述：
(ⅰ)序列特征：
  (A)长度：15氨基酸
  (B)类型：氨基酸
  (C)链型：单链
  (D)拓扑：线性
(ⅱ)分子类型：肽
(ⅲ)假说：是
(ⅹⅰ)序列特征：SEQ ID NO:18：Phe Tyr Thr Xaa Ile Pro His Xaa Phe Gly Xaa Xaa Xaa Pro Pro1                5                   10                 15(2)SEQ ID NO:19描述：
(ⅰ)序列特征：
  (A)长度：17氨基酸
  (B)类型：氨基酸
  (C)链型：单链
  (D)拓扑：线性
(ⅱ)分子类型：肽
(ⅲ)假说：是
(ⅹⅰ)序列特征：SEQ ID NO:19：Lys Xaa Xaa Xaa Leu Xaa Xaa Leu Xaa Asp Ile Glu Xaa Ala Xaa Xaa1                5                  10                   15Leu(2)SEQ ID NO:20描述：
(ⅰ)序列特征：
  (A)长度：11氨基酸
  (B)类型：氨基酸
  (C)链型：单链
  (D)拓扑：线性
(ⅱ)分子类型：肽
(ⅲ)假说：是
(ⅹⅰ)序列特征：SEQ ID NO:20：Gly Xaa Xaa Xaa Leu Xaa Glu Val Ala Leu Gly1                5                   10(2)SEQ ID NO:21描述：
(ⅰ)序列特征：
  (A)长度：20氨基酸
  (B)类型：氨基酸
  (C)链型：单链
  (D)拓扑：线性
(ⅱ)分子类型：肽
(ⅲ)假说：是
(ⅸ)特征：
  (A)名称/键：区段
  (B)LAGE:14
  (D)SONSTIGE ANGABEN：/注释=“Xaa代表7至9个其他氨基酸”
(ⅹⅰ)序列特征：SEQ ID NO:21：Gly Xaa Xaa Ser Xaa Xaa Xaa Xaa Gly Xaa Xaa Xaa Pro Xaa Leu Xaa1               5                   10                  15Gly Xaa Xaa Val
         20(2)SEQ ID NO:22描述：
(ⅰ)序列特征：
  (A)长度：16氨基酸
  (B)类型：氨基酸
  (C)链型：单链
  (D)拓扑：线性
(ⅱ)分子类型：肽
(ⅲ)假说：是
(ⅸ)特征：
  (A)名称/键：区段
  (B)LAGE:2
  (D)SONSTIGE ANGABEN：/注释=“Xaa代表Tyr或Phe”
  (ⅹⅰ)序列特征：SEQ ID NO:22：Glu Xaa Xaa Xaa Tyr Xaa Xaa Xaa Gln Xaa Xaa xaa Xaa Tyr Leu Leu1               5                   10                   15(2)SEQ ID NO:23描述：
(ⅰ)序列特征：
  (A)长度：20氨基酸
  (B)类型：氨基酸
  (C)链型：单链
  (D)拓扑：线性
(ⅱ)分子类型：肽
(ⅲ)假说：非
(ⅹⅰ)序列特征：SEQ ID NO:23：Met Ala Ala Arg Arg Arg Arg Ser Thr Gly Gly Gly Arg Ala Arg Ala1               5                   10                  15Leu Asn Glu Ser(2)SEQ ID NO:24描述：
(ⅰ)序列特征：
  (A)长度：20氨基酸
  (B)类型：氨基酸
  (C)链型：单链
  (D)拓扑：线性
(ⅱ)分子类型：肽
(ⅲ)假说：非
(ⅹⅰ)序列特征：SEQ ID NO:24：Lys Thr Glu Leu Gln Ser Pro Glu His Pro Leu Asp Gln His Tyr Arg1               5                   10                  15Asn Leu His Cys
        20(2)SEQ ID NO:25描述：
(ⅰ)序列特征：
  (A)长度：21氨基酸
  (B)类型：氨基酸
  (C)链型：单链
  (D)拓扑：线性
(ⅱ)分子类型：肽
(ⅲ)假说：非
(ⅹⅰ)序列特征：SEQ ID NO:25：Cys Lys Gly Arg Gln Ala Gly Arg Glu Glu Asp Pro Phe Arg ser Thr1               5                    10                  15Ala Glu Ala Leu Lys
        20(2)SEQ ID NO:26描述：
(ⅰ)序列特征：
  (A)长度：20氨基酸
  (B)类型：氨基酸
  (C)链型：单链
  (D)拓扑：线性
(ⅱ)分子类型：肽
(ⅲ)假说：非
(ⅹⅰ)序列特征：SEQ ID NO：26：Cys Lys Gln Gln Ile Ala Arq Gly Phe Glu Ala Leu Glu Ala Leu Glu1               5                   10                   15Glu Ala Leu Lys
        20(2)SEQ ID NO:27描述：
(ⅰ)序列特征：
  (A)长度：19氨基酸
  (B)类型：氨基酸
  (C)链型：单链
  (D)拓扑：线性
(ⅱ)分子类型：肽
(ⅲ)假说：非
(ⅹⅰ)序列特征：SEQ ID NO:27：Lys Gln Gln Ile Ala Arg Gly Phe Glu Ala Leu Glu Ala Leu Glu Glu1               5                    10                  15Ala Leu Lys(2)SEQ ID NO:28描述：
(ⅰ)序列特征：
  (A)长度：19氨基酸
  (B)类型：氨基酸
  (C)链型：单链
  (D)拓扑：线性
(ⅱ)分子类型：肽
(ⅲ)假说：是
(ⅹⅰ)序列特征：SEQ ID NO:28：Lys Gln Gln Ile Ala Arg Gly Phe Glu Ala Leu Glu Ala Leu Glu Glul               5                   10                  15Ala Met Lys

Claims (32)

1．一种聚(ADP-核糖)聚合酶(PARP)同系物，其具以下的氨基酸序列
a)功能性NAD+结合结构域
及
b)不含下式锌指序列基序
       CX2CXmHX2C
其中
m为自28或30的整数值，及X基各自独立为任何氨基酸；及其功能性相当物。
2．如权利要求第1项的PARP同系物，其中功能性NAD+结合结构域包括以下一般序列基序之一：
PXn(S/T)GX3GKGIYFA,
(S/T)XGLR(I/V)XPXn(S/T)GX3GKGIYFA或
LLWHG(S/T)X7IL(S/T)XGLR(I/V)XPXn(S/T)GX3GKGIYFAX3SKSAXY
其中
n为自1至5的整数值，及X基各自独立为任何氨基酸。
3．如权利要求第1或2项的PARP同系物，至少包括另一以下部分序列基序：
LX9NX2YX2QLLX(D/E)X10/11WGRVG,
AX3FXKX4KTXNXWX5FX3PXK,
QXL(I/L)X2IX9MX10PLGKLX3QIX6L,
FYTXIPHXFGX3PP；及
KX3LX2LXDIEXAX2L,
其中X基各自独立为任何氨基酸。
4．如上述权利要求之一的PARP同系物，选自人PARP同系物，其具在SEQ ID NO:2(人PARP2)或SEQ ID NO:4或6(人PARP3第1或2型)中所示的氨基酸序列；或鼠PARP同系物，其具在SEQID NO:8(小鼠PARP长型)或SEQ ID NO:10(小鼠PARP截短型)中所示的氨基酸序列；及其功能性相当物。
5．一种如上述权利要求之一的PARP同系物的结合配偶体，选自
a)其抗体及片段，
b)蛋白质样化合物，其与蛋白质的部分序列相互作用，及
c)低分子量效应物，其调节催化PARP活性或PARP分子的另
一种生物功能。
6．一种核酸，包括
a)一种核苷酸序列，编码至少一种如权利要求第1至4项中任一
项的同系物，或其互补的核苷酸序列；
b)一种核苷酸序列，其与在a)中特定的序列在严格条件下杂交；或
c)从在a)和b)中界定的核苷酸序列，由遗传密码的简并性
而衍生的核苷酸序列。
7．如权利要求第6项的核酸，包括
a)在SEQ ID NO:1中所示的核苷酸+3至+1715；
b)在SEQ ID NO:3中所示的核苷酸+242至+1843；
c)在SEQ ID NO:5中所示的核苷酸+221至+1843；
d)在SEQ ID NO:7中所示的核苷酸+112至+1710；或
e)在SEQ ID NO:9中所示的核苷酸+1至+1584。
8．一种表达盒，包括在至少一种调节核苷酸序列的基因控制下，至少一种如权利要求第6或7项中任一项的核苷酸序列。
9．一种重组载体，包括至少一种如权利要求第8项的表达盒。
10．一种重组微生物，包括至少一种如权利要求第9项的重组载体。
11．一种导入外来基因的哺乳动物，包括如权利要求第9项的载体。
12．一种PARP-缺乏的哺乳动物或PARP-缺乏的真核生物细胞，其中功能性表达至少一种编码如权利要求第1或2项中任一项的PARP同系物的基因被抑制。
13．一种PARP抑制剂的体外检测方法，其包括
a)将未与支持物结合的或与支持物结合的的聚ADP-可核糖苷
化靶物与反应混合液培养，其混合液包括
a1)如权利要求第1至4项中任一项的PARP同系物，
a2)PARP活化剂；及
a3)PARP抑制剂或其中至少一个被怀疑为PARP抑制剂的分
析物；
b)进行聚ADP核糖苷化反应；及
c)定量或定性地测定靶物的聚ADP核糖苷化。
14．如权利要求第13项的方法，其中PARP同系物系与PARP活化剂和PARP抑制或其中被怀疑具有至少一个PARP抑制剂的分析物，在聚ADP核糖苷化反应进行前预培养。
15．如权利要求第13或14项中任一项的方法，其中聚ADP-核糖苷化靶物是组蛋白蛋白质。
16．如权利要求第13至15项中任一项的方法，其中PARP活化剂为活化DNA。
17．如权利要求第13至16项中任一项的方法，其中聚ADP核糖苷化反应系由添加NAD+开始。
18．如权利要求第13至17项中任一项的方法，其中与支持物结合的靶物的聚ADP核糖苷化系使用抗聚(ADP-核糖)抗体测定。
19．如权利要求第13至17项中任一项的方法，其中未与支持物结合的靶物系以受体荧光团标记。
20．如权利要求第19项的方法，其中未与支持物结合的抗体的聚ADP核糖苷化系使用抗聚(ADP-核糖)抗体测定，其以能将能量转予受体荧光团的供体荧光团标记。
21．如权利要求第19和20项中任一项的方法，其中靶物为生物素化的组蛋白，及受体荧光团经抗生物素蛋白或链霉抗生物素蛋白偶合至其上。
22．如权利要求第20或21项中任一项的方法，其中抗聚(ADP-核糖)抗体载有氪酸铕作为供体荧光团。
23．一种体外筛选PARP分子的结合配偶体的方法，其包括
a1)将至少一种如权利要求第1至4项中任一项的PARP同系物固定在支持物上；
b1)将固定化PARP同系物与被怀疑其中具有至少一种结合配偶体的分析物接触；及
c1)在适当时在一段培养时间后，测定与固定化PARP同系物结合的分析物成分；或
a2)将包括至少一个PARP分子的可能结合配偶体的分析物固定在支持物上；
b2)将固定化分析物与至少一个在其中找寻结合配偶体的如权利要求第1至4项中任一项的PARP同系物接触；及
c2)在适当时在一段培养时间后，检视固定化分析物的PARP同系物结合。
24．一种定性或定量地测定核酸的方法，其核酸编码如权利要求第1至4项中任一项的PARP同系物，其包括
a)将生物样品与如权利要求第6和7项中任一项的一定量外源核酸培养，在严格条件下杂交，测定杂交核酸及，在适当时与标准物比较；或
b)将生物样品与一对对PARP同系物编码的核酸具特异性的寡核苷酸引物培养，扩增核酸，测定扩增产物，及在适当时，与标准物比较。
25．一种定性或定量地测定如权利要求第1至4项中任一项的PARP同系物的方法，其包括
a)将生物样品与对PARP同系物特异的结合配偶体培养，
b)检测结合配偶体/PARP复合物，及在适当时，
c)比较结果与标准物。
26．如权利要求第25项的方法，其中结合配偶体为抗体或其结合片段，其在适当时载有可检测的标记。
27．一种如权利要求第24至26项中任一项以诊断能量不足介导疾病的方法。
28．一种测定PARP效应物效力的方法，其包括
a)将如权利要求第1至4项中任一项的PARP同系物与包括生理或病理PARP活性的效应物的分析物培养；再在适当时除去效应物；及
b)在适当时在添加底物或共底物后，测定PARP同系物的活性。
29．一种基因疗法组合物，其包括在基因疗法可接受载体中一种核酸构建物，其编码
a)包括如权利要求第6和7项中任一项的编码核酸的反义核酸；
或
b)对如权利要求第6和7项中任一项的核酸的核糖酶；或
c)特定的PARP抑制剂。
30．一种医药组合物，在医药上可接受的载体中，包括至少一种如权利要求第1至4项中任一项的PARP蛋白质，至少一种如权利要求第5项的PARP结合配偶体及至少一种如权利要求第6或7项的编码核苷酸序列。
31．如权利要求第5项的低分子量PARP结合配偶体，用于诊断或治疗在发展和/或进展其中涉及至少一种PARP蛋白质或自其衍生多肽的病理状态。
32．如权利要求第5项的低分子量PARP结合配偶体，用于诊断或治疗由能量不足介导的病理状态。
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