CN1319987C - γ－分泌酶抑制剂 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种作为γ-分泌酶抑制剂的化合物或其药物上可接受的盐，其由氨基酸序列组成，所述序列由氨基酸序列Val-Val-Ile-Ala-Thr-Val-Ile-Val-Ile-Thr-Leu-Val-Met-Leu-Lys-lys-lys(SEQ ID NO：1)的包括11位Leu的至少3个连续的氨基酸所组成，其中在Leu与紧接其前或后的一个或前后两个氨基酸之间的肽键“-CO-NH-”被羟亚乙基-CHOH-CH2-所取代，而任何其他的中间氨基酸间的键是肽键，其中N末端具有基于C1-10烷基的烷氧羰基，所述烷基可带有苯基或萘基作为取代基，其中C末端被转化成基于C1-10烷基的烷基酯或烷基酰胺，所述烷基可带有苯基或萘基作为取代基，并且，其中第10位的Thr的羟基的氢原子可被C1-4疏水基团或Z基团所取代。

Description

γ-分泌酶抑制剂
技术领域
本发明涉及抑制γ-分泌酶的化合物，所述酶是一种从淀粉样前体蛋白中产生淀粉样蛋白的裂解酶。更具体而言，本发明涉及这些化合物或其药物上可接受的盐、含有这些化合物的γ-分泌酶抑制剂、这些化合物在筛选抗衰老药物或抗痴呆药物中的用途、以及针对这些化合物的抗体。
背景技术
淀粉样蛋白沉积是一种组织病理学改变，其不仅发生在患有阿尔茨海默氏病或唐氏综合症的那些人的脑组织中，也发生在那些经历正常衰老的人的脑组织中。淀粉样蛋白由40-42/43个氨基酸组成，所述氨基酸多数是疏水性氨基酸，这种蛋白由它的前体——淀粉样前体蛋白(下文中称为APP)——通过水解切割所产生。APP由695、751或770个氨基酸组成，是跨越膜1次的1型膜蛋白酶，其氨基末端部分暴露于细胞外面。氨基酸数量上的差别与所称Kunitz型蛋白酶抑制剂活性位点的存在或缺乏相一致，所述位点位于细胞外的区域。在神经细胞中，一种由695个氨基酸所组成的APP(下文中称为“APP695”，其氨基酸序列表示为SEQ ID NO：7)占主要地位。APP695由695个氨基酸所组成，起始于1位的蛋氨酸、并一直延伸到695位的天冬酰胺，APP695是一种主要产生于神经细胞中的同工型，并且是具有跨细胞膜1次的跨膜结构域(由从625位甘氨酸延伸到648位亮氨酸的24个氨基酸所组成)1型膜蛋白。淀粉样蛋白含有由40个氨基酸组成的较短形式的蛋白质分子，所述氨基酸从暴露于细胞外的APP695部分的597位天冬氨酸延伸到位于细胞膜内的636位缬氨酸；和由42或43个氨基酸组成的较长蛋白质分子，所述氨基酸一直延伸到638位丙氨酸或639位苏氨酸。
另一方面，一种由770个氨基酸组成的APP(下文中称为“APP770”，其编码区的核苷酸序列表示为SEQ ID NO：8且氨基酸序列表示为SEQ IDNO：9)是一种由770个氨基酸组成APP基因产物，从1位蛋氨酸延伸到770位天冬酰胺，并且该产物包括一个APP695所不具有的氨基酸序列部分(从289位谷氨酸延伸到363位赖氨酸的75个氨基酸)。除该内嵌的氨基酸序列外，该分子具有与APP695完全一样的氨基酸序列。除APP695和APP770之外，还有一种称为APP751的同工型，总共由751个氨基酸组成，其中缺失了APP770中从345位蛋氨酸延伸到363位赖氨酸的19个氨基酸。通常嵌入APP751和APP770的一个氨基酸序列(在APP770氨基酸序列中从289位谷氨酸到334位丙氨酸的56个氨基酸)具有Kunitz型蛋白酶抑制剂的活性，并被认为在除神经细胞之外的细胞中表达。
由于在实验上证实下述假说，即对神经细胞的毒性是淀粉样蛋白的一个生理活性[Yanker，-B-A；Dawes，-L-R；Fisher，-S；Villa-Komaroff，-L；Oster-Granite，-M-L；Neve，-R-L；与阿尔茨海默氏病相联系的淀粉样前体片断的神经毒性，(1989)，Science.245(4916)：417-20；和Yanker，-B-A；Duffy，-L-K；Kirschner，-D-A.β-淀粉样蛋白的神经营养性和神经中毒效应：利用速激神经肽的逆转，(1990)，Science.1990250(4978)：279-82]，因而淀粉样蛋白被认为是阿尔茨海默氏病发作的一个关键分子。对于由淀粉样前体蛋白产生淀粉样蛋白而言，必须发生两个重要的反应步骤。第一个步骤是通过β-分泌酶来切掉从淀粉样蛋白部分的N-末端延伸出的部分。在第二个步骤，通过γ-分泌酶的作用，在淀粉样蛋白的羧基末端发生裂解，从而导致淀粉样蛋白的释放，而分离开的APP细胞内片断则留下。根据常规发现，第二步骤中的裂解被认为发生在γ位，这是在淀粉样蛋白的羧基末端(根据APP770氨基酸残基的编号方式，在711位缬氨酸和712位异亮氨酸之间，在713位丙氨酸和714位苏氨酸之间，或者在714位苏氨酸和715位缬氨酸之间)。然而，在近来的发现中，据报道裂解发生在ε位，下游再5-10个氨基酸残基处(以羧基末端的方向)，因而更接近于细胞质(根据APP770氨基酸残基的编号方式，在719苏氨酸和720位亮氨酸之间，或者在720位亮氨酸和721缬氨酸之间)。
在阿尔茨海默氏病中，异常临床症状比如定向障碍、衰弱性记忆损失、健忘症、判断恶化、和行为失常等出现之前，大脑中的神经元损伤发生了。神经元损伤包括淀粉样蛋白的沉积、神经纤维缠结、和退化型细胞损失，其中淀粉样蛋白沉积是最早的病变。
对于阿尔茨海默氏病的进展而言，淀粉样蛋白假说被认为是重要的，根据此假说，淀粉样蛋白的产生和沉积确实引起该疾病。家族性阿尔茨海默氏病的研究已经为该假说提供了基础。
还有一个推测有待证实，即γ-分泌酶是早老素1的基因产物[Sherrington，-R；Rogaev，-E-I；Liang，-Y；Rogaeva，-E-A；Levesque，-G；Ikeda，-M，Chi，-H；Lin，-C；Li，-G；Holman，-K；等人，早发家族性阿尔茨海默氏病中产生错义突变的基因的克隆，(1995)，Nature，375(6534)，754-760]和早老素2[Levy-Lahad，-E；Wasco，-W；Poorkaj，-P；Romano，-D-M；Oshima，-J；Pettingell，-W-H；Yu，-C-E；Jondro，-P-D；Schmidt，-S-D；Wang，-K；等人，家族性阿尔茨海默氏病基因座染色体1的候选基因，(1995)Science，269(5226)，973-977，和Rogaev，-E-I；Sherrington，-R；Rogaeva，-E-A；Levesque，-G；Ikeda，-M；Liang，-Y；Chi，-H；Lin，-C；Holman，-K；Tsuda，-T；等人，家族中的家族性阿尔茨海默氏病——与阿尔茨海默氏病3型基因相联系的染色体1上基因的错义突变，(1995)Nature 376(6543)，775-778]，其在染色体14上被发现为早发家族性阿尔茨海默氏病的引发基因。
APP也是早发家族性阿尔茨海默氏病的引发基因(Coate，A.等人，Nature 1991)，这意味着在称为阿尔茨海默氏病的这一类痴呆中，有众多的基因作为引发因子。
如上文中所指出的，淀粉样蛋白包含两个成分。其一是较短的淀粉样蛋白成分，此成分开始于天冬氨酸并终止于40位的缬氨酸，而另一种则是较长的淀粉样蛋白，该成分由42或43个氨基酸构成，起始于与40个氨基酸的成分一样的缬氨酸，但终止于42位的丙氨酸(因而长出2个氨基酸残基)或43位的苏氨酸(因而长出3个氨基酸残基)。后面较长的成分更具疏水性，因而更不易溶解。通过在作为核心的较长成分周围添加较短成分，淀粉样纤维得以形成，这是一种具有大约5-6nm直径的纤维状结构。
现已揭示，当在早老素1或早老素2中发生遗传突变时，较长淀粉样蛋白的产生增加了。因此认为，这种突变的效应引起了较长淀粉样蛋白成分的形成增加，这被认为是决定淀粉样蛋白多聚化的阈水平，并从而加速了致病反应。
APP中的一些遗传突变已被证实，其中典型的可大致分为瑞典突变(Met670Asn，Lys671Leu，根据AP770中氨基酸残基的编号方式，并同样应用于下面所述的突变)、荷兰(Dutch)型突变(Glu693Gln)、伦敦突变(Val717Ile)和澳大利亚突变(Leu723Pro)，所述突变正位于淀粉样蛋白氨基酸末端相应的位置之前。虽然在瑞典突变中发现淀粉样蛋白的两种成分的产生都有增加，但是，在伦敦突变和澳大利亚突变中，只有较长淀粉样蛋白成分的产生有增加。荷兰型突变的作用现仍在探讨中，并还没有获得结论。
等位基因E4是一种与载脂蛋白E相联系的危险因子。统计分析显示，当一对染色体上只有1个等位基因是E4时，阿尔茨海默氏病的发作要提前8-10年，而染色体上的等位基因是E4/E4时，阿尔茨海默氏病的发作要提前16-20年[Corder，-E-H；Roses，-A-D；Haines，-J-L；Pericak-Vance，-M-A，载脂蛋白E的4型等位基因的基因剂量和晚发家族性阿尔茨海默氏病的风险，(1993)Science，261(5123)：913-3]。
据推测，β-分泌酶和γ-分泌酶活性的抑制会抑制淀粉样蛋白的产生，这导致能中断或减缓阿尔茨海默氏病发展的治疗药物。除β-分泌酶外，α-分泌酶也涉及APP水解的第一步骤，第二步骤中γ-分泌酶反应的抑制可望产生更广谱的效果，因为该反应通常跟随任一类型的第一步骤反应。
虽然γ-分泌酶的最终识别尚有待获得，但已揭示的是，早老素1起着重要作用。根据动物试验或细胞培养试验，早老素1的功能丧失据称引起脑神经发育或脊柱形成的异常，或者淋巴细胞发育的异常。因此，除与淀粉样蛋白相联系的功能外，早老素1被认为具有众多的功能。
必须要考虑的是，γ-分泌酶活性的非特异性抑制能引发一些严重的副作用，比如癌症的诱发[Hardy，J.，Israel，A.阿尔茨海默氏病、γ-分泌酶的研究，(1999)Nature.398(6727)466-7]。
现在公知的γ-分泌酶抑制剂是：为多肽模拟物的抑制剂，其基于有关基质APP的位于淀粉样蛋白部分的羧基末端的γ位点的报告，酶在该位置上起作用[Mori H，Takio K，Ogawara M，和Selkoe.D.J.j，纯化的阿尔茨海默氏病的β-淀粉样蛋白的质谱分析，(1992)J.Biol.Chem.267，17082-17086；Roher A.E.，Lowenson J.D.，Clarke S.，Wolkow C.，Wang R.，Cotter R.J.，Reardon I.M，Zurcher-Neely H.A.，Heinrikson R.L.，Ball M.J.等人，β-淀粉样核心蛋白的肽架中的结构改变可导致其在阿尔茨海默氏病中的沉积和稳定性，(1993)J BiolChem.268(5)，3072-3083]；和基于指出天冬氨酸活性位点重要性的报告的酶抑制剂[Wolfe M.S.，Xia W.，Ostaszewski B.L.，Diehl.T.S.Kimberly W.T.，Selkoe D.J.，早老素1中为早老素内蛋白酶解和γ-分泌酶活性所需的两个跨膜的天冬氨酸，(1999)Nature 398(6727)，513-517]。
关于多肽模拟物，DFK-167是公知的[Wolfe M.S.，Citron M，DiehlT.S.，Xia W.，Donkor I.C.和Selkoe D.J.：基于基质的二氟酮选择性抑制阿尔茨海默氏病的g-分泌酶活性，(1998)J.Med.Chem.，41(1)，6-9]
关于酶抑制剂，从公知的抑制剂中筛选出的化合物已被报道。它们是：L-685458，其在AIDS药物开发的过程中制得[Shearman，M.S.，Beher，D.，Charke，E.E.，Lewis，H.D.，Harrison，T.，Hunt.P.，Nadin.A.，Smith.，A.L.，Stevenson，G.，Castro，J.L.，L-685458、一种天冬氨酰蛋白酶过渡态模拟物(transtion state mimic)，是β-淀粉样蛋白前体γ-分泌酶活性的有效抑制剂，(2000)Biochemistry39(30)，8698-8704]；和JLK-6，其是一种α-胰凝乳蛋白酶抑制剂[Nakejima，K.，Powers.J.C.，Ashe，B.M.，Zimmerman，M.，绘制组织蛋白酶G和人白细胞弹性蛋白酶的扩展的底物结合位点，用与α1蛋白酶抑制剂的反应活性部位相联系的肽底物的研究，(1979)J.Biol.Chem.254(10)，4027-32]。
基于底物APP的γ位点而开发多肽模拟物型抑制剂，和基于酶的活性部位而开发的抑制剂，虽然上述两种抑制剂都是淀粉样蛋白产生的有效抑制剂，但是，每一种都有明显的缺点。第一，DFK-167是一种为γ位点而设计的抑制剂，并且是一种与近来在ε位点上的发现全然无关的化合物，因此，关于抑制剂的设计，其有着不同的目标。抑制剂L-685458和JLK-6并不是原来就开发为涉及从APP中产生淀粉样蛋白的γ-分泌酶的特异性抑制剂的化合物。除了作为γ-分泌酶抑制剂的特定性问题以外，有关在靶组织的功效也有其他的问题。
发明的公开
本发明的一个目的是提供一种新的抑制γ-分泌酶的化合物。
本发明的另一个目的是提供γ-分泌酶抑制剂化合物，其专注于底物APP的氨基酸序列，而不是γ-分泌酶本身。
本发明的另一个目的是提供基于有关ε位点最新发现的γ-分泌酶抑制剂化合物。
本发明的再一个目的是提供诊断方法，有用的治疗药物和治疗方法，和用于开发阿尔茨海默氏病和其他相关疾病的有用药物的筛选方法。此处所指的相关疾病包括其中淀粉样蛋白被知晓或怀疑直接或间接作为病原的疾病，比如唐氏综合征，以及其中淀粉样蛋白在神经病理学损伤中被观察到的疾病。
依据相关研究的发现，由关注于APP的ε位点(与γ位点相对)的独创性(ingenuity)重复试验，结果发现，通过一类肽样的化合物获得了γ-分泌酶的抑制和淀粉样蛋白生产的抑制，所述肽样化合物的化学结构与由包括APP的ε位点在内的一些氨基酸构成的序列相似，但其中ε位点上Leu和紧位于其之前或之后的氨基酸这两者间的肽键被一个对酶稳定的键所代替。基于该发现，本发明得以完成。
因此，本发明提供了：
(1)一种由一氨基酸序列组成的化合物或者其药物上可接受的盐，所述序列由氨基酸序列Val-Val-Ile-Ala-Thr-Val-Ile-Val-Ile-Thr-Leu-Val-Met-LeU-Lys-Lys-Lys(SEQ ID NO：1)的包括11位Leu的至少3个连续的氨基酸所组成，其中在Leu与紧接其前或后的一个或前后两个氨基酸之间的肽键-CO-NH-被羟亚乙基-CHOH-CH2-所取代，而任何其他的中间氨基酸间的键是肽键，其中，N末端具有基于C1-10烷基的烷氧羰基，所述烷基可带有苯基或萘基作为取代基，其中C末端被转化成基于C1-10烷基的烷基酯或烷基酰胺，所述烷基可带有苯基或萘基作为取代基，并且其中第10位Thr的羟基的氢原子可被C1-4疏水基团或Z基团所取代。
(2)上面(1)中所述的化合物或其药物上可接受的盐，其中氨基酸序列的第14位Leu被可以是Ile的疏水性氨基酸或被Pro所取代，11位Leu被可以是Ile的疏水性氨基酸所取代，或者10位Thr被Ser所取代，或者9位Ile被可以是Leu的疏水性氨基酸所取代。
(3)一种由氨基酸序列组成的化合物或者其药物上可接受的盐，所述序列由氨基酸序列Ile-Thr-Leu-Val-Met-Leu(SEQ ID NO：2)的包括3位Leu的3、4、5或6个连续的氨基酸所组成，其中在Leu与紧接其前或后的一个或前后两个氨基酸之间的肽键-CO-NH-被羟亚乙基-CHOH-CH2-所取代，而任何其他中间的氨基酸间的键是肽键，其中N末端具有基于C1-10烷基的烷氧羰基，所述烷基可带有苯基或萘基作为取代基，其中C末端被转化成基于C1-10烷基的烷基酯或烷基酰胺，所述烷基可带有苯基或萘基作为取代基，并且其中Thr的羟基的氢原子可被C1-4疏水基团或Z基团所取代。
(4)一种由氨基酸序列Leu-Val-Met-Leu(SEQ ID NO：3)所组成的化合物或者其药物上可接受的盐，其中在1位Leu与2位Val之间的肽键-CO-NH-被羟亚乙基-CHOH-CH2-所取代，而任何其他中间的氨基酸间的键是肽键，其中N末端具有基于C1-10烷基的烷氧羰基，所述烷基可带有苯基或萘基作为取代基，其中C末端被转化成基于C1-10烷基的烷基酯或烷基酰胺，所述烷基可带有苯基或萘基作为取代基。
(5)一种由氨基酸序列Thr-Leu-Val-Met(SEQ ID NO：4)所组成的化合物或者其药物上可接受的盐，其中在1位Thr与2位Leu之间的肽键-CO-NH-被羟亚乙基-CHOH-CH2-所取代，而任何其他的中间氨基酸间的键是肽键，其中N末端具有基于C1-10烷基的烷氧羰基，所述烷基可带有苯基或萘基作为取代基，其中C末端被转化成基于C1-10烷基的烷基酯或烷基酰胺，所述烷基可带有苯基或萘基作为取代基，并且其中Thr的羟基的氢原子可被C1-4疏水基团或Z基团所取代。
(6)上面(3)中所述的化合物或者其药物上可接受的盐，其中紧接Val前的Leu被可以是Ile的疏水性氨基酸所取代，或者N末端的Leu被可以是Ile的疏水性氨基酸或被Pro所取代。
(7)上面(4)中所述的化合物或者其药物上可接受的盐，其中紧接Val前的Leu被可以是Ile的疏水性氨基酸所取代，或者N末端的Leu被可以是Ile的疏水性氨基酸或被Pro所取代。
(8)上面(5)中所述的化合物或者其药物上可接受的盐，其中紧接Val前的Leu被可以是Ile的疏水性氨基酸所取代。
(9)上面(3)中所述的化合物或者其药物上可接受的盐，其中，Thr被Ser所取代。
(10)上面(3)中所述的化合物或者其药物上可接受的盐，其中Ile被可以是Leu的疏水性氨基酸所取代。
(11)上面(5)中所述的化合物或其药物上可接受的盐，其中Thr被Ser所取代。
(12)上面(1)-(11)中任一项的化合物或其药物上可接受的盐，其中烷氧羰基是Boc基团。
(13)上面(1)-(12)中任一项所述的化合物或其药物上可接受的盐，其中由Tyr-Gly-Arg-Lys-Lys-Arg-Arg-Gln-Arg-Arg-Arg(SEQID NO：5)组成的多肽代替烷氧羰基融合。
(14)含有上面(1)-(13)中任一项化合物的γ-分泌酶抑制剂。
(15)针对上面(1)-(13)中任一项所述化合物的抗体。
(16)上面(1)-(13)中任一项化合物作为γ-分泌酶抑制剂在淀粉样蛋白生产抑制剂的筛选中的用途。
本发明的化合物和其药物上可接受的盐可应用于阿尔茨海默氏病和其相关疾病的治疗，和上述病的治疗药物的筛选，所述疾病例如是其中知晓或怀疑淀粉样蛋白直接或间接作为该疾病引发因子的那些疾病，例如唐氏综合症，和在神经病理损伤位置观察到淀粉样蛋白的那些疾病。此外，本发明的抗体可应用于，比如，在对人给药治疗中测定本发明化合物的血液水平。
附图的简要说明
图1表示的是表述合成过程的流程图的第一部分。
图2表示的是根据图1的流程图的部分。
图3表示的是根据图2的流程图的部分。
图4表示的是根据图3的流程图的部分。
图5表示的是根据图2的流程图的最后部分。
图6表示的是化合物5合成的步骤。
图7表示的是表述另一个化合物合成过程的流程图的第一部分。
图8表示的是根据图7的流程图的部分。
图9表示的是根据图8的流程图的部分。
图10表示的是根据图9的流程图的部分。
图11表示的是根据图10的流程图的部分。
图12表示的是根据图11的流程图的最后部分。
实施本发明的最佳方式
在本发明中，与烷氧羰基有关的“烷基”是C1-10、优选C1-7、更优选C1-5的烷基。这种烷基可以是线性的或者有支链的，并可以是，比如，甲基、乙基、丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、异戊基、2-甲基丁基、2，2-二甲基丙基、叔戊基、己基、庚基、辛基、壬基、癸基等。特别优选的一个实例是叔丁基。它们的一个或多个氢原子可以被苯基或萘基所取代。这种取代基的一个特别优选的实例是苄氧羰基。
在本发明中，所指的与“转化成烷基酯或烷基酰胺”有关的“烷基”是C1-10、优选C1-7、更优选C1-5的烷基。这种烷基可以是线性的或者有支链的，并可以是，比如，甲基、乙基、丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、异戊基、2-甲基丁基、2，2-二甲基丙基、叔戊基、己基、庚基、辛基、壬基、癸基等。甲基和叔丁基是特别优选的实例。它们的一个或多个氢原子可以被苯基或萘基所取代。这种取代基的一个特别优选的实例是苄氧羰基。
在本发明中，如果Thr的羟基上的氢原子被C1-4疏水性基团或Z基团(即苄酯基)所取代，C1-4疏水性基团的实例包括疏水性保护基团，比如甲基、乙基、丙基、正丁基、仲丁基、叔丁基等。
在本发明中，“氨基酸”指L-氨基酸。
基于根据APP降解产物的深入研究所建立起的假说，即稳定化的ε位点能抑制γ-分泌酶，本发明的多肽模拟化合物通过试图制备一种具有与ε位点相似的结构但对于酶稳定的化合物而获得，本发明化合物的抑制效应不仅在散发性阿尔茨海默氏病的淀粉样蛋白生产中的得以证实，同时也在涉及早发家族性阿尔茨海默氏病的淀粉样蛋白生产中得以证实。
多种肽样化合物具有与γ-分泌酶裂解的APPε位点周围的氨基酸序列相似的氨基酸序列，但被改性从而使该位点稳定、并具有γ-分泌酶抑制活性，这样的肽样化合物可用于本发明的目的。这种化合物的一个实例是如下化合物：其中ε位点邻近的氨基酸残基-NH-CHR-CO-被R性质相似的不同氨基酸残基所取代(疏水性/亲水性、酸度/碱度、是否存在硫原子、是否存在羟基等)，并且该化合物具有γ-分泌酶抑制活性。举例而言，Ile，Val，Ala和Gly是可用来取代Leu的氨基酸，相应地，Leu，Val，Ala和Gly可用来取代Ile；Ser可用来取代Thr；Ala可用来取代Met；Gly，Val，Ile和Leu用来取代Ala；Arg和His用来取代Lys。此外，SEQ ID NO：1第14位的Leu(与SEQ ID NO：2第6位的Leu以及SEQ ID NO：3第4位的Leu相同)可以用Pro来取代，因为现已报道Aβ42淀粉样蛋白成分在该氨基酸被Pro取代的变异体中增加，(这意味着这种变异体蛋白对γ-分泌酶具有更高的亲和力)[Kwok，-J-B；Li，-Q-X；Hallupp，-M；Whyte，-S；Ames，-D；Beyreuther，-K；Masters，-C-L；Schofield，-P-R；新的Leu723Pro淀粉样前体蛋白突变体增加淀粉样β42(43)肽水平并诱发细胞凋亡，Ann-Neurol.2000年2月；47(2)：249-53]。
用于合成本发明化合物的原材料和合成中每一步骤所采用的方法都是公知的，本领域普通技术人员能通过根据需要实施合成、分离、纯化等来制备所需的化合物。也可应用基因重组技术来制备本发明化合物的多肽部分，所述基因重组技术利用本身公知的宿主，比如埃希氏大肠杆菌、酵母菌、枯草杆菌、昆虫细胞、动物细胞或植物细胞。虽然化学合成可根据例如下文中所述的实施例来进行，但是，任何其他的方法都可应用，只要其能产生所需的化合物。例如，合成可根据需要采用公知方法的结合来进行，比如Boc(叔丁氧羰基)-羰基化反应、DMSO氧化、碱性反应、酸性反应、环氧化、硅胶柱层析法、烷基化、皂化、通过加热的反应、脱羧作用、缩合反应、逆相柱层析法等。优选地，所采用的方法是这样的：本发明化合物的每一结构成分是顺续起反应的，并且在所需步骤中对收率和反应物的纯度进行分析。
本发明的化合物可包括如下修饰：那些使合成或纯化更容易的修饰；那些有助于物理/化学稳定性的修饰；那些用于机体内活化的修饰，所述活化与稳定性和不稳定性或与新陈代谢调节相关；和用来调节的修饰，所述调节引起向器官运输的效率上升或下降，上述运输包括跨越血-脑屏障的运输。此处“用来调节的修饰”指的是由11个氨基酸，Tyr-Gly-Arg-Lys-Lys-Arg-Arg-Gln-Arg-Arg-Arg(SEQ ID NO：3)组成的序列的修饰[Schwarze，S.R.，Ho，A.，Vocero-Akbani，A.& Dowdy.，S.F.，体内蛋白质转导：对小鼠给予生物活性蛋白，Science285：1569-1572]。通过以肽键连接N末端的调节序列，该化合物能更有效地通过血脑障碍运输到达大脑中的靶点。
本发明化合物的其他修饰包括：乙酰化，酰化，ADP-核糖基化，酰胺化，通过共价键连接核黄素化合物，通过共价键连接血红素部分，通过共价键连接核苷酸或核苷酸衍生物，通过共价链连接脂或脂衍生物，通过共价键连接磷脂酰肌醇，交联，环化，二硫键形成，脱甲基化，交联共价键的形成，胱氨酸形成，焦谷氨酸形成，甲酰化，γ羧基化，糖基化，GPI-锚形成，羟基化，碘化，甲基化，肉豆寇酸化，氧化，蛋白质水解处理，磷酸化，异戊二烯化，外消旋化，连接脂，硫酸化，selenoylation，以转移RNA介导的向蛋白质添加氨基酸，比如精氨酰化，和泛素化作用。
此外，为了使本发明的化合物或其抗体的检测或纯化更容易以及增加任何其他功能，而实施结构添加、改变或取代在技术上是容易的，因此，任何通过这种处理而获得的产品都将落入本发明的范围内。通过添加，例如，FLAG标记物、β-半乳糖苷酶、碱性磷酸酶、如IgG等免疫球蛋白的Fc片断及GFP来修饰的基因工程产物也将落入本发明的范围内。
[抗体]
抗体可使用任何选自本发明化合物、其衍生物和/或分解产物的化合物作为抗原来纯化。抗原可以是该化合物或其衍生物，并由例如20或更少氨基酸残基所组成，优选5或更少氨基酸残疾，更优选3、最优选2个氨基酸残基。纯化也可使用这些抗原的组合来实施。抗原不必是本发明化合物自身或其衍生物或者分解产物，但可以是如下的结构：其在APP的ε位点邻近具有向外暴露的一级序列。此处术语“邻近”指的是从ε位点往羧基末端延伸达4个氨基酸的区域。
为制备对本发明的化合物或其衍生物或者分解化合物的免疫特异性抗体，ε位点邻近含有前述氨基酸序列的化合物优选用作抗原。优选抗体的实例包括：
(1)识别Val-Val-Ile-Ala-Thr-Val-Ile-Val-Ile-Thr(SEQ IDNO：10)羧基末端的苏氨酸的抗体，
(2)识别位于Val-Val-Ile-Ale-Thr-Val-Ile-Val-Ile-Thr-Leu(SEQ ID NO：11)羧基末端的亮氨酸的抗体，
(3)识别Leu-Val-Met-Leu-Lys-Lys-Lys(SEQ ID NO：12)氨基末端的亮氨酸的抗体，
(4)识别Val-Met-Leu-Lys-Lys-Lys(SEQ ID NO：13)氨基末端的缬氨酸的抗体，
(5)通过使用抗原而制得的抗体，所述抗原含有至少两列氨基酸，所述氨基酸包括上面(1)-(4)中所述序列中识别的氨基酸。
这些抗体不限制于特定的类或量范围，只要它们免疫结合或者识别目的位点。抗体的结合或者识别通过公知的抗原-抗体反应来确定。术语“免疫特异性”指的是相对于其他相关的本领域已知的蛋白质或化合物，对于目的化合物具有实质上大得多的亲和力。
使用本发明化合物或其衍生物或者分解产物作抗原，单独或者结合或混合载体一起使用，以及在助剂存在或不存在下使用，通过诱导针对抗原的体液和/或细胞免疫反应来制备抗体。另外，可通过免疫刺激培养的淋巴细胞或其祖细胞，来引发免疫反应。在没有特别的限制，只要其自身对宿主没有不利效应的范围内，载体的实例包括但不限于，纤维素、生理盐水、缓冲生理盐水、葡萄糖、水、甘油、乙醇、聚氨基酸、清蛋白或其混合物。用于免疫作用的合适的动物是小鼠、大鼠、兔子、山羊、马、牛等。多克隆抗体可通过公知的方法以血清的形式获得，或者通过从血清中回收抗体的方法来获得。优选方法的实例包括免疫亲和层析法。
单克隆抗体的生产可通过以下方式实施：首先，从动物中获得含有抗体活性的组织(例如，脾或淋巴结)，或者获得如上经免疫的培养细胞，然后，将转化引入公知的永生化细胞中(例如，骨髓瘤系，比如P3X63Ag8)。例如，克隆由上面产生抗体的细胞以及永生化细胞制得的杂交瘤细胞，选择生产专门识别本发明新化合物的抗体的特异性杂交瘤细胞，并从杂交瘤细胞培养基中收集抗体。为实施上述，可列举出多种技术，比如那些称为杂交瘤细胞方法[Kohler G.和Milstein C.(1975)Nature 256，495-497]、trioma方法[Kozbor等人，Immunology Today(1983)4：72]、和EBV方法[Cole等人，单克隆抗体和癌症治疗，AlanR.Liss，Inc.，(1985)：77-96]的技术。
上述抗体可用于本发明化合物或其衍生物或者分解化合物的鉴定、检测和定量测定，或者用于利用亲和色谱法制备和纯化化合物。上述抗体可使用公知的技术来转化为人型抗体。
特别地，本发明化合物或其衍生物或者分解化合物，和具有增强本发明化合物或其衍生物或者分解化合物的效果的特异性抗体，可作为标准化合物来在淀粉样蛋白抑制剂药物的研究中用于筛选化合物。
通过对阿尔茨海默氏病或其相关疾病的病人给药有效量的药物，及药物上可接受的载体或没有使用载体，本发明的化合物被用来控制淀粉样蛋白产生的量，从而防止或治疗这些疾病或者改善它们的症状。本发明的化合物可以以合适的制剂形式提供，这种形式增强了该化合物到脑组织的运输中的效率。
虽然一些本发明的化合物可单独使用，但多数也可联合使用。而且，允许和其他有益于治疗的化合物伴随使用。含有本发明化合物的用于全身给药的药物组合物的优选形式是注射，尤其是静脉注射。也可采用其他注射的途径，比如皮下、肌肉和腹膜内途径。另外的全身给药方法是透粘膜或透皮肤给药，其利用诸如胆汁盐、酸性品红或其他表面活性剂等穿透增强剂。此外，如果恰当配制成肠溶衣制剂或者胶囊，口服给药是可能的。这种药物组合物的局部给药也是可能的，其可以是膏药、糊剂或凝胶剂的形式。
使用针对本发明化合物、其衍生物或分解产物的抗体的分析方法的实例包括：放射免疫测定，竞争性结合试验，高性能液相色谱法，蛋白质印迹分析和ELISA等，以及它们的组合。
[实施例]
虽然参考实施例将对本发明做出更详细的表述，但须指出的事，本发明不限制于那些实施例。
[实施例1]化合物Boc-Leu*-Val-Met-Leu-OMe的合成
Boc-Leu*Val-Met-Leu-OMe(其中，“*”指的是Leu和Val之间的肽键“-CO-NH-”被羟亚乙基“-CHOH-CH2-”所取代)根据图1-5中所示的合成方案合成。选择其中羟亚乙基的α碳原子周围的构型表示为R型的化合物。该化合物的结构见分子式(1)。
将L-亮氨醇盐酸(2)(9.87g，64.2mmol)溶解于100ml丙酮和50ml水中，并在加入三乙胺(21.5ml，128ml)后，冷冻到-10℃。在-10℃下逐滴加入Boc2O(20g，92mmol)，然后持续搅拌过夜而不冷却。蒸发去丙酮，并在加入大约500ml的0.1M盐酸后，用500ml乙酸乙酯实施萃取。依次用0.1M盐酸、水、和然后饱和的盐溶液来洗涤有机层，并用无水硫酸钠进行干燥。除去干燥剂后，浓缩有机层。用硅胶空心柱(250g，乙酸乙酯/己烷＝1/3)来实施纯化，从而获得目标化合物Boc-亮氨醇(3)，产量：12.88g(92％)。
用甲苯冲洗Boc-亮氨醇(3)(12.88g，58.9mmol)，然后用氩气进行净化。其溶解于二甲亚砜(脱水的，200ml)，并在加入三乙胺(22ml，158mmol)之后，在15℃的水浴中冷却。同时，在另一烧瓶中，将三氧化硫-吡啶复合物(25.3g，159mmol)溶解于脱水DMSO(100ml)中，并在氩气流下搅拌10分钟。将三氧化硫溶液在15℃下冷却，并逐滴(4分钟)加入Boc-亮氨醇(3)中，并且在另外搅拌8分钟后，将该反应混合物倒入1500ml的冷水中，从而终止反应。在用乙酸乙酯萃取之后，依次用0.1M盐酸和水、以及饱和的盐溶液来洗涤有机层，并用无水硫酸钠进行干燥，以及除去干燥剂后，浓缩有机层。用硅胶空心柱(250g，乙酸乙酯/己烷＝1/5)来实施纯化，从而获得目标化合物Boc-Leu-H(醛)(4)，产量：10.9g(85.8％)。
氢化钠(62.6％在矿物油中)在除去0.53g矿物油后，用氩气来净化。往该物中加入DMSO(脱水的，50ml)，然后将该混合物加热到50℃，搅拌1小时，并在往该物中加入THF(脱水的，50ml)之后，在冰上冷却。逐滴加入(CH3)SI(3.1g，15.2mmol)在DMSO(15ml)中的溶液，并在添加开始后的1分钟时，逐滴加入Boc-Leu-H(醛)(4)(2.0g，9.3mmol)在THF(10ml)中的溶液。在这种逐滴添加完成之后，将该混合物搅拌1小时而不冷却。将该反应混合物倒入1000ml冷水中，从而终止反应，并用乙酸乙酯萃取，依次用水和饱和盐溶液冲洗，并用无水硫酸钠干燥。在用过滤法除去干燥剂之后，实施浓缩，获得2.2g粗制品。此外，相同条件下Boc-Leu-H(醛)(4)(4.58g，21.3mmol)的反应给出了4.81g粗制品(5a和5b)。将来自这些重复反应的粗制品混合，并用硅胶空心柱(乙酸乙酯/己烷＝1/2)来纯化。产量：5.6g(80％)。这用硅胶空心柱(三氯甲烷/丙酮＝100/1)来分离，纯化非对映异构体，并分别收集在5a和5b富集的部分。非对映异构体5a和5b间的测定通过NMR来完成。5a富集的片断(5a/5b＝5/1)应用于下面的处理中。
将环氧化合物5a(0.96g，4.2mmol)和丙二酸二乙酯(0.76ml，1.2当量)溶解于3ml乙醇(脱水的)中，并在冷却的同时，往该混合物中逐滴加入2ml的20％乙醇钠(3当量)。然后终止冷却，将该混合物在室温下搅拌20小时，然后倒入冷的10％柠檬酸水溶液中，从而终止反应。用乙酸乙酯萃取，用水及然后饱和盐溶液洗涤，用无水硫酸盐干燥，通过过滤除去干燥剂，并在硅胶柱(乙酸乙酯/己烷＝1/5)纯化，从而获得化合物6a。产量：1.2g(83％)。
在氩气流下，将化合物6a(1.13g，3.29mmol)溶解于10ml脱水乙醇。在冰上冷却时，往该物质中加入20％乙醇钠(1.4ml，1.2当量)和异丙碘(1.8ml，3当量)。在60℃下搅拌5小时后，在室温下继续搅拌过夜，然后在第二天在60℃下搅拌7小时。通过将混合物倒入冷的10％柠檬酸水溶液中，来终止反应。用乙酸乙酯萃取，洗涤有机层，用硫酸钠干燥，通过过滤除去干燥剂并蒸发去溶剂，从而获得粗制品。使用硅胶柱纯化(20g，乙酸乙酯/己烷＝1/3)纯化，从而获得目标化合物7。产量：0.8g(63％)。
将内酯-酯(7)(0.78g，2.0mmol)溶解于大约10ml二氧杂环己烷中。在冰上冷却，将1N氢氧化钠(4ml)逐滴加入，并在室温下搅拌该混合物。在搅拌1.5小时后，蒸发去二氧杂环己烷，并将残留物倒入冷的0.2N HCl水溶液中，并用乙酸乙酯萃取。用饱和盐溶液洗涤有机层，并用硫酸钠干燥。过滤并且浓缩，从而产生内酯-羧酸的粗制品(8)。将该物质直接用甲苯溶解，然后在95℃的油浴上加热(3小时)，冷却过夜，并在次日再在95℃下加热。1.5小时后，蒸发去甲苯，并用硅胶柱(乙酸乙酯/己烷＝1/5)完成纯化。产物的TLC上两个空间接近的点中，获得0.4g的化合物(9a)对应于较低点，0.2g的化合物(9b)对应于较高的点。产量分别为：63％和32％。
将化合物(9a)(0.37g，1.18mmol)溶解于2.5ml二氧杂环己烷中，并在冰冷却下逐滴加入1N的氢氧化钠水溶液，并在室温下搅拌2小时。然后加入20％的柠檬酸水溶液来终止反应，并用乙酸乙酯萃取。先后用水和饱和盐溶液洗涤有机层，用硫酸钠干燥，过滤和浓缩，从而产生羟基羧酸(10)。将该物溶解于脱水DMF中，并在相继加入咪唑(1.7g，25mmol)、叔丁基二甲基甲硅烷基氯(1.8g，12mmol)和DMAP(25mg，0.2mmol)之后，在室温下搅拌过夜。往该物中加入大约1ml的甲醇，并搅拌30分钟来终止反应。将混合物倒入20％的柠檬酸溶液中，并用乙酸乙酯萃取。先后用水、饱和盐溶液洗涤有机层，用硫酸钠干燥，过滤并浓缩。将该物(二甲硅烷基化合物)溶解于乙酸中，并在室温下搅拌4小时(通过反应混合物的TLC和MS，证实了甲硅烷酯的开裂)。在减压下除去乙酸，用硅胶柱(乙酸乙酯/己烷＝1/2)纯化，从而产生化合物11。产量：0.5g(96％)。
[化合物11的异构体的合成]
以9b起始，按上面同样的方法，产生甲硅烷基化合物11的异构体。产量：0.2g(88％)。
[Leu-OMe的盐酸盐的合成]
将无水甲醇(150ml)置于烧瓶中，并冷却(-15℃)。往该物中逐滴添加SOCl2(40ml)，并在10分钟后直接加入L-亮氨酸粉末，并且终止冷却，在室温下进行搅拌。大约10分钟后，再次加入100ml无水甲醇，并继续搅拌过夜。20小时后，在减压下蒸发去溶剂，并在用甲醇冲洗两次后，往结晶残留物中加入二乙醚。经过滤收集沉淀物，并在减压下用氢氧化钠干燥。产量：24.23g(87.8％)。
[Boc-Met-Leu-OMe的合成]
秤取HCl、Leu-OMe(5.3g，29.2mmol)、Boc-Met(7.64g，30.6mmol)和1-羟基-1H-苯并三唑(HOBt)(4.34g，32mmol)放入500ml的烧瓶中，并用DMF溶解。在冷却的同时，逐滴加入WSCD(5.88ml，32mmol)。两小时后，将该混合物倒入冷的2％碳酸氢钠水溶液中，经过滤收集沉淀的结晶，并用水洗涤。将它们溶解在300ml乙酸乙酯中，并先后用0.2N盐酸、水以及饱和盐溶液洗涤，并用硫酸钠干燥。在蒸发去溶剂以后，通过使用己烷过滤来收集沉淀的结晶。用五氧化二磷干燥后，获得目标化合物(13)。产量：10.4g(94.6％)。
[除去Boc的处理]
在冷却期间，将TFA加入Boc-Met-Leu-OMe(1.09g，2.89mmol)，并在10分钟之后，终止冷却，并在室温下继续搅拌50分钟。蒸发去TFA，并加入4.9N的盐酸/二氧杂环己烷(0.71ml)。在用己烷倾析几次后，在减压下浓缩至干燥状态，从而产生一种固体。产量：0.8g(90％为氢氯化物)。
[缩合反应]
往上面的氢氯化物(0.29g，0.93mmol)中加入化合物11(0.34g，0.76mmol)和HOOBt(150mg，0.92mmol)，并将该混合物溶解于DMF(10ml)。在冷却期间，逐滴加入WSCD(170μl，0.93mmol)，终止冷却，并在室温下继续搅拌。20小时后，将该混合物倒入冷的2％碳酸氢钠水溶液中，从而终止反应。用乙酸乙酯对该混合物进行萃取，并先后用10％柠檬酸溶液、水和饱和盐溶液洗涤。在用硫酸钠干燥后，用硅胶柱(乙酸乙酯/己烷＝1/4)进行浓缩和纯化，从而产生化合物14。产量：0.5g(93％)。
将受保护的化合物14(0.5g，15-02011221)溶解于无水THF中。通过加入TBAF-3H2O(330mg，1.05mmol)、接着在室温下搅拌24小时来对上述物质去硅烷化。在蒸发去THF之后，用硅胶柱(乙酸乙酯/己烷＝1/1-1/2)进行纯化，从而产生0.25g目标化合物(1)的粗制品，同时回收0.14g起始材料。通过反相HPLC(YMC-ODS，乙腈/水/0.1％TFA)的纯化，以及冷冻干燥，从而产生目标化合物。产量：106mg(25％)。ESI-MS：590.3(M+H，计算值590.38)，612.3(M+Na)。
[化合物1的异构体的合成]
使用前述化合物11的异构体(0.18g)，以相同的方式缩合、除去保护基团以及纯化，从而产生46mg化合物1的异构体。ESI-MS：590.3(M+H，计算值590.38)，612.3(M+Na)。
[实施例2]溶解度的检验
在视觉上以及通过显微镜，对实施例1中合成的化合物进行溶解度的检验。结果见下表。
                                        表1
化合物的溶解度
  溶剂   浓度(10ng/ml)   浓度(1μg/ml)   浓度(100μg/ml)
  生理盐水   +   +/-   -
  磷酸盐缓冲液   +   +/-   -
  含有10％胎牛培养基血清的DMEM   +   +/-   -
  DMSO   +   +   +
+，溶解；+/-，几乎溶解；-，不溶解
[实施例3]抑制活性的测定
本实施例中所用的人APP695基因(在其编码区的核苷酸序列表示为SEQ ID NO：6)是已从cDNA文库中筛选出的，所述文库通过常规方法从正常人的死亡大脑中制得，并且，所述基因完整的核苷酸序列经常规的方法加以证实。简要地，大约1g的冷冻脑组织经苯酚处理，并收集上层水溶液。重复这种处理后，通过加入乙醇来沉淀mRNA。在溶解于20mM的Tris-盐酸、pH 8、0.1mM EDTA之后，用逆转录酶来合成cDNA，并用寡聚dT引物以及mRNA为模板。残余RNA用核糖核酸酶消化后，使用由此获得的单股cDNA作为模板，用DNA聚合酶合成双股cDNA。然后将该双股cDNA用T4 DNA聚合酶来平整末端。使用EcoR1甲基酶将甲基化引入EcoR1限制位点之后，使用连接酶来连接EcoR1连接接头。在通过凝胶过滤除去未反应的游离接头之后，用DNA连接酶来实现向λgt11载体的连接，从而用包装试剂盒将被连接的产物整合入λ噬菌体。琼脂平板上的大肠杆菌被所获得的噬菌体感染，并将由此含有增殖的噬菌体的溶液作为cDNA文库。对于APP cDNA克隆而言，那些基于淀粉样蛋白的寡核苷酸用γ32P-ATP和DNA激酶进行放射标记，从而提供作为探针的经标记的核苷酸。用106pfu(斑块形成单位)的噬菌体在琼指平板上形成斑块，并与尼龙薄膜接触。通过对尼龙薄膜的碱处理，将附于薄膜的斑块DNA变性为单股DNA，然后中和该薄膜，在含有鲑鱼精子DNA的溶液中培养之后，加入32P放射标记的核苷酸探针，并杂交12小时。在这一阶段，当目标APP基因整入噬菌体并且一个寡核苷酸在其序列中互补时，它们将形成双股DNA。然后将尼龙薄膜暴露于X射线膜，琼脂平板上与暴露的点相对应的斑块被鉴定为与带有APP基因(片断)的噬菌体相一致。重复这种处理，最终获得单一的噬菌体。整合入噬菌体的APP基因的核苷酸序列通过公知的Sanger方法来测定。
根据其规程使用Lipofectamine Plus试剂(Invitrogen K.K.)，有效率地将APP基因从外部引入COS细胞，这是一种猿肾起源的培养细胞系。简要地，将1μg的APP基因溶解于100μl的OPTI-MEM中，与6μl的Plus试剂混合，并在室温下静置15分钟。并行地，将41的Lipofectamine溶解于100μl的OPTI-MEM中。然后将该物与APP基因溶液混合，并再静置15分钟。提供6孔培养平板，每孔提前装有800μl的培养物，所述培养物由以下方式制备：在含10％牛胎儿血清的DMEM培养基中细胞密度为75％-85％下培养COS细胞，然后，用OPTI-MEM培养基代替该培养基。将200μl含有该基因的反应混合物加入每个孔中。在引入该基因之后的12个小时，从含有该引入基因的OPTI-MEM培养基转变为10％牛胎儿血清补充的、不含该引入的基因的DMEM培养质。往这种培养集中加入实施例1中获得的化合物。在36-48小时后，收集培养基上清液，转移至离心管，并在室温下以10000r.p.m离心5分钟。该上清液被用作含有淀粉样蛋白的样本。使用市售的用于淀粉样蛋白测定的ELISA试剂盒(KHB3441：Signal SelectTMHuman βAmyloid1-42 ELISA Kit，或者KHB3481：Signal SelectTMHuman βAmyloid1-40 ELISA Kit，BioSource International，Inc.CA，USA)可分别测定包含于每一样本中的较短和较长淀粉样蛋白。那些用于淀粉样测定的ELISA试剂盒包括涂有这两种淀粉样蛋白的初级抗体的96孔ELISA平板。通过普通的非特异性封闭反应，来消除非特异性抗原-抗体反应，之后将含有需测定的淀粉样蛋白的样本培养基反应。常规洗涤后，加入二级抗体。二次级抗体由能不引起非交叉反应地区别两类淀粉样蛋白的两种不同抗体所组成，两种淀粉样蛋白其一是较短的淀粉样蛋白，另一则是较长的淀粉样蛋白。这两种淀粉样蛋白的区别是在它们的羧基末端是否存在两个氨基酸残基(异亮氨酸和丙氨酸)。检测前者的抗体被认为识别羧基末端的缬氨酸，而检测后者的抗体被认为识别丙氨酸。
使用试剂盒的淀粉样蛋白测定的结果见下面的表。
                                        表2
化合物的抑制活性-1
                   DMSO                     抑制剂(100μM)
  Aβ42(43)(pg/ml)   Aβ40(pg/ml)   Aβ42(43)/Aβ40的比例   Aβ42(43)(pg/ml)   Aβ40(pg/ml)   Aβ42(43)/Aβ40的比例
  1   模拟处理   0   0   -   0   0   -
  2   野生型APP695   1415   9656   0.147   415   218   1.90
  3   伦敦型APP695   2845   6623   0.430   855   151   5.66
  4   瑞典型APP695   2503   17002   0.147   1311   1726   0.76
                            表3
化合物的抑制活性-2
                            抑制率(％)
  Aβ42(43)   Aβ42   总Aβ
  1   模拟处理   -   -   -
  2   野生型APP695   71   98   98
  3   伦敦型APP695   70   98   89
  4   瑞典型APP695   48   90   84
表1和2中显然的是，该抑制剂展示了对Aβ42(43)生产而言大约71％的抑制活性，和对Aβ40生产而言几乎100％，即大约98％的抑制活性。即使在总淀粉样蛋白上也取得了大约98％的抑制。因此，这说明本抑制剂具有有效的活性。
虽然家族性早发阿尔茨海默氏病仅占总阿尔茨海默氏病的百分之几，这是很少的一类疾病，但也检测了对这种病中淀粉样蛋白产生的抑制。根据结果，对称为伦敦突变的淀粉样蛋白Val717Ile突变，观察到几乎与野生型序列中所见的相同水平的抑制活性。另一方面，在瑞典型，Met670Arn和Lys671Leu中发现的双突变上，抑制活性对于Aβ40为大约90％，对于Aβ42(43)为大约48％。在家族性疾病的每一突变上，对于总淀粉样蛋白产生而言，观察到超过大约80％的抑制。
[实施例4]抑制活性的测定
在检测3中，采用全长人APP基因。淀粉样蛋白通过蛋白酶解而形成，所述蛋白酶解由使用α-或β-分泌酶的APP的第一步骤裂解和使用γ-分泌酶的第二步骤裂解所组成。除γ-分泌酶抑制外，第一步骤中的抑制能导致淀粉样蛋白合成的压制。为了直接地证明本发明化合物的抑制效应是由于γ-分泌酶的抑制(而不是由于β-分泌酶的抑制)，除用APP人工片段(称为C100)来代替APP695外(所述APP人工片段缺少一个在第一阶段中被切除的多肽部分)以与实施例4中相同的方式来实施一实验，并测定由此产生的淀粉样蛋白。结果见下表4
                                        表4
化合物的抑制活性-3
               DMSO           抑制剂(100μM)                抑制率(％)
  Aβ42(43)(pg/ml)   Aβ40(pg/ml)   总Aβ(pg/ml)   Aβ42(43)(pg/ml)   Aβ40(pg/ml)   总Aβ   Aβ42(43)   Aβ40   总Aβ
  1   C100   127   944   1071   62   100   162   51   89   85
在使用C-100 APP(野生型)的实验中，观察到几乎与瑞典型突变中相同的抑制活性，即对于Aβ40而言大约90％抑制和对于Aβ42(43)而言大约50％抑制。在每一存在家族性疾病型突变的情况中，观察到在淀粉样蛋白总产生上超过80％的抑制。
[实施例5]化合物t-But-OCO-Thr*-Leu-Val-Met-NH-Bzl的合成
T-But-OCO-Thr*-Leu-Val-Met-NH-Bzl(其中，“*”指的是Thr和Leu之间的肽键“-CO-NH-”用羟亚乙基“-CHOH-CH2-”取代，并且，Thr的羟基转化成叔丁基醚)按下述根据图7-12所示来合成。R和S型化合物的合成都涉及化合物的羟亚乙基的α碳的构型。其中，R型化合物的分子式(1a)如下。
醛3’的合成：
将2’的DCHA盐(49.5g，100.88mmol)(Bachem 123400)溶解于乙酸乙酯(500ml)中，并用20％的柠檬酸水溶液除去矿物质。用水洗涤(3次)有机层，然后用饱和盐溶液洗涤，用Na2SO4干燥，在用过滤出去干燥剂后，浓缩从而产生油性残留物。然后将该残留物溶解于无水THF(500ml)中，冷却到-15℃，逐滴加入氯甲酸异丁酯(15.7ml，121mmol)。在-15℃搅拌10分钟后，加入NaBH4，在-15℃继续搅拌10分钟，然后冷却到-50℃，并逐滴加入甲醇(500ml)。在逐滴加入1N的盐酸(200ml)之后，将该混合物搅拌30分钟，同时让其恢复到室温。蒸发去溶剂之后，用乙酸乙酯萃取，依次用0.2N的盐酸、水(3次)以及饱和纯净水洗涤，用Na2SO4干燥并蒸发去溶剂，从而产生一种醇(39g)。将39g的这种醇分成3部分，每份13g，并同时经受氧化反应。简要地，在经受2次用甲苯溶解再蒸发去溶剂这样的处理之后，将Z-Thr(tBu)-醇(13g，33mmol)溶解于无水DMSO(120ml)中，并在加入三乙胺(13.9ml，100mmol)之后，在15℃的水浴中冷却。在另一烧瓶中，将三氧化硫-吡啶复合物(15.9g，100mmol)溶解于DMSO(70ml)中，在2分钟期间将该溶液逐滴加入到Z-Thr(tBu)-醇溶液中。在15℃的水浴中搅拌8分钟后，通过将该混合物倒入冰冷的水中来终止反应。用乙酸乙酯实施萃取。醇的剩余部分以同样的方式经受该反应。合并所有乙酸乙酯萃取物，先后用水与饱和盐溶液洗涤，用Na2SO4干燥，浓缩，并用硅胶柱(AcOEt/Hex＝1/4)纯化，从而产生目标醛(3’)。产量：24.1g(81％来自羧酸)。
环氧化合物(4’)的合成：
将醛(3’)分成两半，并分两次接受反应。将DMSO(无水，200ml)加入1.9g氢化钠中(油中62.6％)，并加热到50℃，搅拌1小时。往由此形成的二甲基亚硫酰阴离子溶液中加入THF(无水，200ml)，并将该混合物在冰上冷却。往该物中逐滴(20秒期间)加入(CH3)SI(10g，49mmol)的DMSO溶液(50ml)，并在逐滴添加开始后的1分钟，逐滴(在1分钟期间)加入Z-Thr(tBu)-H(12.0g，40.9mmol)的THF溶液(510ml)。在逐滴添加完成后，在室温(20℃)下继续搅拌1小时，然后将该混合物倒入1500ml冷水中来终止反应。用乙酸乙酯萃取，依次用水以及饱和盐溶液洗涤，用无水硫酸钠干燥，并浓缩，从而产生10g粗制品。以同样的方式实施第二系列的反应，从而产生10g粗制品。将这两系列反应的产物合并，用硅胶柱(AcOEt/Hex＝1/2)纯化，并再用硅胶柱(AcOEt/Hex＝1/4)纯化，从而产生目标环氧化合物(4’)。产量：6.3g(25％)。
化合物(5’)的合成：
将环氧化合物(4’)(6.3g，20.5mmol)溶解于无水乙醇(10ml)中，并在加入丙二酸二乙酯(3.8ml，25mmol)之后，在冰上冷却。在用冰冷却期间，逐滴加入20％的NaOEt(9.6ml，24.5mmol)，搅拌3小时后，加入10％柠檬酸水溶液。用乙酸乙酯实施萃取，并先后用水以及饱和盐溶液洗涤乙酸乙酯层，用Na2SO4干燥，浓缩，用硅胶柱(AcOEt/Hex＝1/2)纯化，从而产生(5’)。产量：7.66g(89％)。
化合物(6’)的合成：
将乙酯5’(7.38g，17.5mmol)溶解于甲醇(35ml)中，并在用冰冷却期间往该混合物中逐滴加入1N的NaOH(35ml)。在室温下搅拌2小时后，将该混合物导入20％柠檬酸水溶液中，并用乙酸乙酯萃取。用水以及饱和盐溶液来洗涤有机层，用硫酸钠干燥，并浓缩。然后将该物溶解于甲苯(50ml)中，并在油浴中加热到90℃，在6小时后，减压蒸发去甲苯。用硅胶柱(AcOEt/Hex＝1/2)纯化，从而产生化合物(6’)。产量：0.95g(15％来自乙酯)。
化合物(7’)的合成：
将内酯化合物(6’)(0.95g，2.72mmol)溶解于无水THF(20ml)中，并冷却到-78℃，然后逐滴加入1.1N的LiHMDS(5.4ml)。在-78℃下搅拌30分钟后，加入3-溴-2-甲基-丙烯(550μL，5.45mmol)，并在-78℃下继续搅拌40分钟。通过加入饱和的氯化铵水溶液来终止反应，并用乙酸乙酯完成萃取。用饱和盐溶液洗涤，用Na2SO4干燥并用硅胶柱纯化，从而产生0.29g的目标烯(7’)，并且回收0.17g的起始材料。回收的起始材料再在相同的等价条件下经受反应，产生作用，纯化，并将产物与第一次反应获得的产物相混合。产量：0.37g(34％)。
化合物(8’)的合成：
将烯(7’)(0.37g，0.92mmol)溶解于甲醇(10ml)中，并加入5％Pd-C，以及引入氢气来完成催化还原。4小时后，引入氮气来终止反应。在经过滤除去催化剂然后浓缩之后，将残留物溶解于甲醇(20ml)中，并往该物中依次加入三乙胺(TEA)(256μL，1.84mmol)和Boc2O(400mg，1.84mmol)，然后在室温下搅拌该混合物过夜。在浓缩之后，用硅胶柱(AcOEt/Hex＝1/4)纯化，从而产生目标化合物(8’)。产量：0.48g。
化合物(9’)、(10’，1’b，11’，1’a)的合成：
将内酯(8’)用氢氧化钠在甲醇中进行皂化。用酸沉淀和提取之后，在DMF中用烷基甲硅烷氯、咪唑和DMAP将该物转化成甲硅烷基醚，并用硅胶柱纯化，从而产生羧酸(9’)。使用EDC和HOBt将该羧酸(9’)和氨基部分(二肽H-Val-Met-NHBzl)在DMF溶剂中缩合。反应之后，进一步处理包括萃取、洗涤等，然后用硅胶柱纯化，从而产生(10’)。将甲硅烷基醚(10’)在THF溶剂中进行TBAF处理。反应之后，浓缩并联合使用硅胶柱和ODS-HPLC的纯化产生(1b’：TLVM-2)。使用三氧化硫-吡啶复合物和三乙胺，使该物在DMSO中经受Swern氧化。在包括萃取的进一步处理之后，通过ODS-HPLC分离来除去诸如硫酸酯等副产品，从而产生酮化合物(11’)。将该酮(11’)溶解于甲醇中，并用NaBH4还原来产生一种醇。该还原反应产生了一种(1’a)和(1’b)的混合物。由于它们容易通过ODS-HPLC分离，因而用HPLC分离法加以纯化，从而产生(1’a：TLVM-2)。
顺便地，以这种化合物为起始，以Z基团除去或取代其保护基团为开始，或者在合成过程中的恰当阶段用Z基团来取代叔丁氧羰基，相似的反应流程和叔丁基的除去将产生下面所示的化合物。
Figure C0381189600311
[实施例6]抑制活性-3的测定
通过实施例3中同样的方法来测定上面获得的化合物(1’a)和(1’b)的抑制活性。然而，IMR 32，一种人源的神经系统细胞系，在将人APP695基因引入这种细胞系之后，其被作为用来评价的系统，而所述人APP695基因中已经整合入了瑞典突变。
                            表5
  Aβ40(pg/ml)   抑制率(％)
  化合物1’a   100μM   0   100
  10μM   31   73
  化合物1’b   100μM   26   78
  10μM   72   38
工业实用性
本发明提供了新的多肽模拟物，其涉及阿尔茨海默氏病和相关疾病的病理。新药物组合物的提供，以及利用该化合物的特性的诊断方法，在本化合物相关的疾病、特别是阿尔茨海默氏病及其相关疾病的临床和医学领域中都是有用的。
                        序列表
<110>Hiroshi MORI
<120>γ-分泌酶抑制剂
<130>GP59-PCT
<150>JP 2002-121983
<151>2002-04-14
<160>13
<210>1
<211>17
<212>PRT
<213>人
<400>1
Val Val Ile Ala Thr Val Ile Val Ile Thr Leu Val Met Leu Lys Lys
  1               5                  10                  15
Lys
<210>2
<211>6
<212>PRT
<213>人
<400>2
Ile Thr Leu Val Met Leu
  1               5
<210>3
<211>4
<212>PRT
<213>人
<400>3
Leu Val Met Leu
<210>4
<211>4
<212>PRT
<213>人
<400>4
Thr Leu Val Met
<210>5
<211>11
<212>PRT
<213>人
<400>5
Tyr Gly Arg Lys Lys Arg Arg Gln Arg Arg Arg
  1               5                  10
<210>6
<211>2088
<212>DNA
<213>人
<400>6
atg ctg ccc ggt ttg gca ctg ctc ctg ctg gcc gcc tgg acg gct cgg     48
Met Leu Pro Gly Leu Ala Leu Leu Leu Leu Ala Ala Trp Thr Ala Arg
  1               5                  10                  15
gcg ctg gag gta ccc act gat ggt aat gct ggc ctg ctg gct gaa ccc     96
Ala Leu Glu Val Pro Thr Asp Gly Asn Ala Gly Leu Leu Ala Glu Pro
             20                  25                  30
cag att gcc atg ttc tgt ggc aga ctg aac atg cac atg aat gtc cag    144
Gln Ile Ala Met Phe Cys Gly Arg Leu Asn Met His Met Asn Val Gln
         35                  40                  45
aat ggg aag tgg gat tca gat cca tca ggg acc aaa acc tgc att gat    192
Asn Gly Lys Trp Asp Ser Asp Pro Ser Gly Thr Lys Thr Cys Ile Asp
     50                  55                  60
acc aag gaa ggc atc ctg cag tat tgc caa gaa gtc tac cct gaa ctg    240
Thr Lys Glu Gly Ile Leu Gln Tyr Cys Gln Glu Val Tyr Pro Glu Leu
65                  70                  75                  80
cag atc acc aat gtg gta gaa gcc aac caa cca gtg acc atc cag aac    288
Gln Ile Thr Asn Val Val Glu Ala Asn Gln Pro Val Thr Ile Gln Asn
                 85                  90                  95
tgg tgc aag cgg ggc cgc aag cag tgc aag acc cat ccc cac ttt gtg    336
Trp Cys Lys Arg Gly Arg Lys Gln Cys Lys Thr His Pro His Phe Val
            100                 105                 110
att ccc tac cgc tgc tta gtt ggt gag ttt gta agt gat gcc ctt ctc    384
Ile Pro Tyr Arg Cys Leu Val Gly Glu Phe Val Ser Asp Ala Leu Leu
        115                 120                 125
gtt cct gac aag tgc aaa ttc tta cac cag gag agg atg gat gtt tgc    432
Val Pro Asp Lys Cys Lys Phe Leu His Gln Glu Arg Met Asp Val Cys
    130                 135                 140
gaa act cat ctt cac tgg cac acc gtc gcc aaa gag aca tgc agt gag    480
Glu Thr His Leu His Trp His Thr Val Ala Lys Glu Thr Cys Ser Glu
145                 150                 155                 160
aag agt acc aac ttg cat gac tac ggc atg ttg ctg ccc tgc gga att    528
Lys Ser Thr Asn Leu His Asp Tyr Gly Met Leu Leu Pro Cys Gly Ile
                165                 170                 175
gac aag ttc cga ggg gta gag ttt gtg tgt tgc cca ctg gct gaa gaa    576
Asp Lys Phe Arg Gly Val Glu Phe Val Cys Cys Pro Leu Ala Glu Glu
            180                 185                 190
agt gac aat gtg gat tct gct gat gcg gag gag gat gac tcg gat gtc    624
Ser Asp Asn Val Asp Ser Ala Asp Ala Glu Glu Asp Asp Ser Asp Val
        195                 200                 205
tgg tgg ggc gga gca gac aca gac tat gca gat ggg agt gaa gac aaa    672
Trp Trp Gly Gly Ala Asp Thr Asp Tyr Ala Asp Gly Ser Glu Asp Lys
    210                 215                 220
gta gta gaa gta gca gag gag gaa gaa gtg gct gag gtg gaa gaa gaa    720
Val Val Glu Val Ala Glu Glu Glu Glu Val Ala Glu Val Glu Glu Glu
225                 230                 235                 240
gaa gcc gat gat gac gag gac gat gag gat ggt gat gag gta gag gaa    768
Glu Ala Asp Asp Asp Glu Asp Asp Glu Asp Gly Asp Glu Val Glu Glu
                245                 250                 255
gag gct gag gaa ccc tac gaa gaa gcc aca gag aga acc acc agc att    816
Glu Ala Glu Glu Pro Tyr Glu Glu Ala Thr Glu Arg Thr Thr Ser Ile
            260                 265                 270
gcc acc acc acc acc acc acc aca gag tct gtg gaa gag gtg gtt cga    864
Ala Thr Thr Thr Thr Thr Thr Thr Glu Ser Val Glu Glu Val Val Arg
        275                 280                 285
gtt Gct aca aca gca gcc agt acc cct gat gcc gtt gac aag tat ctc     912
Val Pro Thr Thr Ala Ala Ser Thr Pro Asp Ala Val Asp Lys Tyr Leu
    290                 295                 300
gag aca cct ggg gat gag aat gaa cat gcc cat ttc cag aaa gcc aaa     960
Glu Thr Pro Gly Asp Glu Asn Glu His Ala His Phe Gln Lys Ala Lys
305                 310                 315                 320
gag agg ctt gag gcc aag cac cga gag aga atg tcc cag gtc atg aga    1008
Glu Arg Leu Glu Ala Lys His Arg Glu Arg Met Ser Gln Val Met Arg
                325                 330                 335
gaa tgg gaa gag gca gaa cgt caa gca aag aac ttg cct aaa gct gat    1056
Glu Trp Glu Glu Ala Glu Arg Gln Ala Lys Asn Leu Pro Lys Ala Asp
            340                 345                 350
aag aag gca gtt atc cag cat ttc cag gag aaa gtg gaa tct ttg gaa    1104
Lys Lys Ala Val Ile Gln His Phe Gln Glu Lys Val Glu Ser Leu Glu
        355                 360                 365
cag gaa gca gcc aac gag aga cag cag ctg gtg gag aca cac atg gcc    1152
Gln Glu Ala Ala Asn Glu Arg Gln Gln Leu Val Glu Thr His Met Ala
    370                 375                 380
aga gtg gaa gcc atg ctc aat gac cgc cgc cgc ctg gcc ctg gag aac    1200
Arg Val Glu Ala Met Leu Asn Asp Arg Arg Arg Leu Ala Leu Glu Asn
385                 390                 395                 400
tac atc acc gct ctg cag gct gtt cct cct cgg cct cgt cac gtg ttc    1248
Tyr Ile Thr Ala Leu Gln Ala Val Pro Pro Arg Pro Arg His Val Phe
                405                 410                 415
aat atg cta aag aag tat gtc cgc gca gaa cag aag gac aga cag cac    1296
Asn Met Leu Lys Lys Tyr Val Arg Ala Glu Gln Lys Asp Arg Gln His
            420                 425                 430
acc cta aag cat ttc gag cat gtg cgc atg gtg gat ccc aag aaa gcc    1344
Thr Leu Lys His Phe Glu His Val Arg Met Val Asp Pro Lys Lys Ala
        435                 440                 445
gct cag atc cgg tcc cag gtt atg aca cac ctc cgt gtg att tat gag    1392
Ala Gln Ile Arg Ser Gln Val Met Thr His Leu Arg Val Ile Tyr Glu
    450                 455                 460
cgc atg aat cag tct ctc tcc ctg ctc tac aac gtg cct gca gtg gcc    1440
Arg Met Asn Gln Ser Leu Ser Leu Leu Tyr Asn Val Pro Ala Val Ala
465                 470                 475                 480
gag gag att cag gat gaa gtt gat gag ctg ctt cag aaa gag caa aac    1488
Glu Glu Ile Gln Asp Glu Val Asp Glu Leu Leu Gln Lys Glu Gln Asn
                485                 490                 495
tat tca gat gac gtc ttg gcc aac atg att agt gaa cca agg atc agt    1536
Tyr Ser Asp Asp Val Leu Ala Asn Met Ile Ser Glu Pro Arg Ile Ser
            500                 505                 510
tac gga aac gat gct ctc atg cca tct ttg acc gaa acg aaa acc acc    1584
Tyr Gly Asn Asp Ala Leu Met Pro Ser Leu Thr Glu Thr Lys Thr Thr
        515                 520                 525
gtg gag ctc ctt ccc gtg aat gga gag ttc agc ctg gac gat ctc cag    1632
Val Glu Leu Leu Pro Val Asn Gly Glu Phe Ser Leu Asp Asp Leu Gln
    530                 535                 540
ccg tgg cat tct ttt ggg gct gac tct gtg cca gcc aac aca gaa aac    1680
Pro Trp His Ser Phe Gly Ala Asp Ser Val Pro Ala Asn Thr Glu Asn
545                 550                 555                 560
gaa gtt gag cct gtt gat gcc cgc cct gct gcc gac cga gga ctg acc    1728
Glu Val Glu Pro Val Asp Ala Arg Pro Ala Ala Asp Arg Gly Leu Thr
                565                 570                 575
act cga cca ggt tct ggg ttg aca aat atc aag acg gag gag atc tct    1776
Thr Arg Pro Gly Ser Gly Leu Thr Asn Ile Lys Thr Glu Glu Ile Ser
            580                 585                 590
gaa gtg aag atg gat gca gaa ttc cga cat gac tca gga tat gaa gtt    1824
Glu Val Lys Met Asp Ala Glu Phe Arg His Asp Ser Gly Tyr Glu Val
        595                 600                 605
cat cat caa aaa ttg gtg ttc ttt gca gaa gat gtg ggt tca aac aaa    1872
His His Gln Lys Leu Val Phe Phe Ala Glu Asp Val Gly Ser Asn Lys
    610                 615                 620
ggt gca atc att gga ctc atg gtg ggc ggt gtt gtc ata gGg aca gtg    1920
Gly Ala Ile Ile Gly Leu Met Val Gly Gly Val Val Ile Ala Thr Val
625                 630                 635                 640
atc gtc atc acc ttg gtg atg ctg aag aag aaa cag tac aca tcc att    1968
Ile Val Ile Thr Leu Val Met Leu Lys Lys Lys Gln Tyr Thr Ser Ile
                645                 650                 655
cat cat ggt gtg gtg gag gtt gac gcc gct gtc acc cca gag gag cgc    2016
His His Gly Val Val Glu Val Asp Ala Ala Val Thr Pro Glu Glu Arg
            660                 665                 670
cac ctg tcc aag atg cag cag aac ggc tac gaa aat cca acc tac aag    2064
His Leu Ser Lys Met Gln Gln Asn Gly Tyr Glu Asn Pro Thr Tyr Lys
        675                 680                 685
ttc ttt gag cag atg cag aac tag                                    2088
Phe Phe Glu Gln Met Gln Asn
    690                 695
<210>7
<211>695
<212>PRT
<213>人
<400>7
Met Leu Pro Gly Leu Ala Leu Leu Leu Leu Ala Ala Trp Thr Ala Arg
  1               5                  10                  15
Ala Leu Glu Val Pro Thr Asp Gly Asn Ala Gly Leu Leu Ala Glu Pro
             20                  25                  30
Gln Ile Ala Met Phe Cys Gly Arg Leu Asn Met His Met Asn Val Gln
         35                  40                  45
Asn Gly Lys Trp Asp Ser Asp Pro Ser Gly Thr Lys Thr Cys Ile Asp
     50                  55                  60
Thr Lys Glu Gly Ile Leu Gln Tyr Cys Gln Glu Val Tyr Pro Glu Leu
65                  70                  75                   80
Gln Ile Thr Asn Val Val Glu Ala Asn Gln Pro Val Thr Ile Gln Asn
                 85                  90                  95
Trp Cys Lys Arg Gly Arg Lys Gln Cys Lys Thr His Pro His Phe Val
            100                 105                 110
Ile Pro Tyr Arg Cys Leu Val Gly Glu Phe Val Ser Asp Ala Leu Leu
        115                 120                 125
Val Pro Asp Lys Cys Lys Phe Leu His Gln Glu Arg Met Asp Val Cys
    130                 135                 140
Glu Thr His Leu His Trp His Thr Val Ala Lys Glu Thr Cys Ser Glu
145                 150                 155                 160
Lys Ser Thr Asn Leu His Asp Tyr Gly Met Leu Leu Pro Cys Gly Ile
                165                 170                 175
Asp Lys Phe Arg Gly Val Glu Phe Val Cys Cys Pro Leu Ala Glu Glu
            180                 185                 190
Ser Asp Asn Val Asp Ser Ala Asp Ala Glu Glu Asp Asp Ser Asp Val
        195                 200                 205
Trp Trp Gly Gly Ala Asp Thr Asp Tyr Ala Asp Gly Ser Glu Asp Lys
    210                 215                 220
Val Val Glu Val Ala Glu Glu Glu Glu Val Ala Glu Val Glu Glu Glu
225                 230                 235                 240
Glu Ala Asp Asp Asp Glu Asp Asp Glu Asp Gly Asp Glu Val Glu Glu
                245                 250                 255
Glu Ala Glu Glu Pro Tyr Glu Glu Ala Thr Glu Arg Thr Thr Ser Ile
            260                 265                 270
Ala Thr Thr Thr Thr Thr Thr Thr Glu Ser Val Glu Glu Val Val Arg
        275                 280                 285
Val Pro Thr Thr Ala Ala Ser Thr Pro Asp Ala Val Asp Lys Tyr Leu
    290                 295                 300
Glu Thr Pro Gly Asp Glu Asn Glu His Ala His Phe Gln Lys Ala Lys
305                 310                 315                 320
Glu Arg Leu Glu Ala Lys His Arg Glu Arg Met Ser Gln Val Met Arg
                325                 330                 335
Glu Trp Glu Glu Ala Glu Arg Gln Ala Lys Asn Leu Pro Lys Ala Asp
            340                 345                 350
Lys Lys Ala Val Ile Gln His Phe Gln Glu Lys Val Glu Ser Leu Glu
        355                 360                 365
Gln Glu Ala Ala Asn Glu Arg Gln Gln Leu Val Glu Thr His Met Ala
    370                 375                 380
Arg Val Glu Ala Met Leu Asn Asp Arg Arg Arg Leu Ala Leu Glu Asn
385                 390                 395                 400
Tyr Ile Thr Ala Leu Gln Ala Val Pro Pro Arg Pro Arg His Val Phe
                405                 410                 415
Asn Met Leu Lys Lys Tyr Val Arg Ala Glu Gln Lys Asp Arg Gln His
            420                 425                 430
Thr Leu Lys His Phe Glu His Val Arg Met Val Asp Pro Lys Lys Ala
        435                 440                 445
Ala Gln Ile Arg Ser Gln Val Met Thr His Leu Arg Val Ile Tyr Glu
    450                 455                 460
Arg Met Asn Gln Ser Leu Ser Leu Leu Tyr Asn Val Pro Ala Val Ala
465                 470                 475                 480
Glu Glu Ile Gln Asp Glu Val Asp Glu Leu Leu Gln Lys Glu Gln Asn
                485                 490                 495
Tyr Ser Asp Asp Val Leu Ala Asn Met Ile Ser Glu Pro Arg Ile Ser
            500                 505                 510
Tyr Gly Asn Asp Ala Leu Met Pro Ser Leu Thr Glu Thr Lys Thr Thr
        515                 520                 525
Val Glu Leu Leu Pro Val Asn Gly Glu Phe Ser Leu Asp Asp Leu Gln
    530                 535                 540
Pro Trp His Ser Phe Gly Ala Asp Ser Val Pro Ala Asn Thr Glu Asn
545                 550                 555                 560
Glu Val Glu Pro Val Asp Ala Arg Pro Ala Ala Asp Arg Gly Leu Thr
                565                 570                 575
Thr Arg Pro Gly Ser Gly Leu Thr Asn Ile Lys Thr Glu Glu Ile Ser
            580                 585                 590
Glu Val Lys Met Asp Ala Glu Phe Arg His Asp Ser Gly Tyr Glu Val
        595                 600                 605
His His Gln Lys Leu Val Phe Phe Ala Glu Asp Val Gly Ser Asn Lys
    610                 615                 620
Gly Ala Ile Ile Gly Leu Met Val Gly Gly Val Val Ile Ala Thr Val
625                 630                 635                 640
Ile Val Ile Thr Leu Val Met Leu Lys Lys Lys Gln Tyr Thr Ser Ile
                645                 650                 655
His His Gly Val Val Glu Val Asp Ala Ala Val Thr Pro Glu Glu Arg
            660                 665                 670
His Leu Ser Lys Met Gln Gln Asn Gly Tyr Glu Asn Pro Thr Tyr Lys
        675                 680                 685
Phe Phe Glu Gln Met Gln Asn
    690                 695
<210>8
<211>2313
<212>DNA
<213>人
<400>8
atg ctg ccc ggt ttg gca ctg ctc ctg ctg gcc gcc tgg acg gct cgg     48
Met Leu Pro Gly Leu Ala Leu Leu Leu Leu Ala Ala Trp Thr Ala Arg
  1               5                  10                  15
gcg ctg gag gta ccc act gat ggt aat gct ggc ctg ctg gct gaa ccc     96
Ala Leu Glu Val Pro Thr Asp Gly Asn Ala Gly Leu Leu Ala Glu Pro
             20                  25                  30
cag att gcc atg ttc tgt ggc aga ctg aac atg cac atg aat gtc cag    144
Gln Ile Ala Met Phe Cys Gly Arg Leu Asn Met His Met Asn Val Gln
         35                  40                  45
aat ggg aag tgg gat tca gat cca tca ggg acc aaa acc tgc att gat    192
Asn Gly Lys Trp Asp Ser Asp Pro Ser Gly Thr Lys Thr Cys Ile Asp
     50                  55                  60
acc aag gaa ggc atc ctg cag tat tgc caa gaa gtc tac cct gaa ctg    240
Thr Lys Glu Gly Ile Leu Gln Tyr Cys Gln Glu Val Tyr Pro Glu Leu
65                  70                  75                   80
cag atc acc aat gtg gta gaa gcc aac caa cca gtg acc atc cag aac    288
Gln Ile Thr Asn Val Val Glu Ala Asn Gln Pro Val Thr Ile Gln Asn
                 85                  90                  95
tgg tgc aag cgg ggc cgc aag cag tgc aag acc cat ccc cac ttt gtg    336
Trp Cys Lys Arg Gly Arg Lys Gln Cys Lys Thr His Pro His Phe Val
            100                 105                 110
att ccc tac cgc tgc tta gtt ggt gag ttt gta agt gat gcc ctt ctc    384
Ile Pro Tyr Arg Cys Leu Val Gly Glu Phe Val Ser Asp Ala Leu Leu
        115                 120                 125
gtt cct gac aag tgc aaa ttc tta cac cag gag agg atg gat gtt tgc    432
Val Pro Asp Lys Cys Lys Phe Leu His Gln Glu Arg Met Asp Val Cys
    130                 135                 140
gaa act cat ctt cac tgg cac acc gtc gcc aaa gag aca tgc agt gag    480
Glu Thr His Leu His Trp His Thr Val Ala Lys Glu Thr Cys Ser Glu
145                 150                 155                 160
aag agt acc aac ttg cat gac tac ggc atg ttg ctg ccc tgc gga att    528
Lys Ser Thr Asn Leu His Asp Tyr Gly Met Leu Leu Pro Cys Gly Ile
                165                 170                 175
gac aag ttc cga ggg gta gag ttt gtg tgt tgc cca ctg gct gaa gaa    576
Asp Lys Phe Arg Gly Val Glu Phe Val Cys Cys Pro Leu Ala Glu Glu
            180                 185                 190
agt gac aat gtg gat tct gct gat gcg gag gag gat gac tcg gat gtc    624
Ser Asp Asn Val Asp Ser Ala Asp Ala Glu Glu Asp Asp Ser Asp Val
        195                 200                 205
tgg tgg ggc gga gca gac aca gac tat gca gat ggg agt gaa gac aaa    672
Trp Trp Gly Gly Ala Asp Thr Asp Tyr Ala Asp Gly Ser Glu Asp Lys
    210                 215                 220
gta gta gaa gta gca gag gag gaa gaa gtg gct gag gtg gaa gaa gaa    720
Val Val Glu Val Ala Glu Glu Glu Glu Val Ala Glu Val Glu Glu Glu
225                 230                 235                 240
gaa gcc gat gat gac gag gac gat gag gat ggt gat gag gta gag gaa    768
Glu Ala Asp Asp Asp Glu Asp Asp Glu Asp Gly Asp Glu Val Glu Glu
                245                 250                 255
gag gct gag gaa ccc tac gaa gaa gcc aca gag aga acc acc agc att    816
Glu Ala Glu Glu Pro Tyr Glu Glu Ala Thr Glu Arg Thr Thr Ser Ile
            260                 265                 270
gcc acc acc acc acc acc acc aca gag tct gtg gaa gag gtg gtt cga    864
Ala Thr Thr Thr Thr Thr Thr Thr Glu Ser Val Glu Glu Val Val Arg
        275                 280                 285
gag gtg tgc tct gaa caa gcc gag acg ggg ccg tgc cga gca atg atc    912
Glu Val Cys Ser Glu Gln Ala Glu Thr Gly Pro Cys Arg Ala Met Ile
    290                 295                 300
tcc cgc tgg tac ttt gat gtg act gaa ggg aag tgt gcc cca ttc ttt     960
Ser Arg Trp Tyr Phe Asp Val Thr Glu Gly Lys Cys Ala Pro Phe Phe
305                 310                 315                 320
tac ggc gga tgt ggc ggc aac cgg aac aac ttt gac aca gaa gag tac    1008
Tyr Gly Gly Cys Gly Gly Asn Arg Asn Asn Phe Asp Thr Glu Glu Tyr
                325                 330                 335
tgc atg gcc gtg tgt ggc agc gcc atg tcc caa agt tta ctc aag act    1056
Cys Met Ala Val Cys Gly Ser Ala Met Ser Gln Ser Leu Leu Lys Thr
            340                 345                 350
acc cag gaa cct ctt ggc cga gat cct gtt aaa ctt cct aca aca gca    1104
Thr Gln Glu Pro Leu Gly Arg Asp Pro Val Lys Leu Pro Thr Thr Ala
        355                 360                 365
gcc agt acc cct gat gcc gtt gac aag tat ctc gag aca cct ggg gat    1152
Ala Ser Thr Pro Asp Ala Val Asp Lys Tyr Leu Glu Thr Pro Gly Asp
    370                 375                 380
gag aat gaa cat gcc cat ttc cag aaa gcc aaa gag agg ctt gag gcc    1200
Glu Asn Glu His Ala His Phe Gln Lys Ala Lys Glu Arg Leu Glu Ala
385                 390                 395                 400
aag cac cga gag aga atg tcc cag gtc atg aga gaa tgg gaa gag gca    1248
Lys His Arg Glu Arg Met Ser Gln Val Met Arg Glu Trp Glu Glu Ala
                405                 410                 415
gaa cgt caa gca aag aac ttg cct aaa gct gat aag aag gca gtt atc    1296
Glu Arg Gln Ala Lys Asn Leu Pro Lys Ala Asp Lys Lys Ala Val Ile
            420                 425                 430
cag cat ttc cag gag aaa gtg gaa tct ttg gaa cag gaa gca gcc aac    1344
Gln His Phe Gln Glu Lys Val Glu Ser Leu Glu Gln Glu Ala Ala Asn
        435                 440                 445
gag aga cag cag ctg gtg gag aca cac atg gcc aga gtg gaa gcc atg    1392
Glu Arg Gln Gln Leu Val Glu Thr His Met Ala Arg Val Glu Ala Met
    450                 455                 460
ctc aat gac cgc cgc cgc ctg gcc ctg gag aac tac atc acc gct ctg    1440
Leu Asn Asp Arg Arg Arg Leu Ala Leu Glu Asn Tyr Ile Thr Ala Leu
465                 470                 475                 480
cag gct gtt cct cct cgg cct cgt cac gtg ttc aat atg cta aag aag    1488
Gln Ala Val Pro Pro Arg Pro Arg His Val Phe Asn Met Leu Lys Lys
                485                 490                 495
tat gtc cgc gca gaa cag aag gac aga cag cac acc cta aag cat ttc    1536
Tyr Val Arg Ala Glu Gln Lys Asp Arg Gln His Thr Leu Lys His Phe
            500                 505                 510
gag cat gtg cgc atg gtg gat ccc aag aaa gcc gct cag atc cgg tcc    1584
Glu His Val Arg Met Val Asp Pro Lys Lys Ala Ala Gln Ile Arg Ser
        515                 520                 525
cag gtt atg aca cac ctc cgt gtg att tat gag cgc atg aat cag tct    1632
Gln Val Met Thr His Leu Arg Val Ile Tyr Glu Arg Met Asn Gln Ser
    530                 535                 540
ctc tcc ctg ctc tac aac gtg cct gca gtg gcc gag gag att cag gat    1680
Leu Ser Leu Leu Tyr Asn Val Pro Ala Val Ala Glu Glu Ile Gln Asp
545                 550                 555                 560
gaa gtt gat gag ctg ctt cag aaa gag caa aac tat tca gat gac gtc    1728
Glu Val Asp Glu Leu Leu Gln Lys Glu Gln Asn Tyr Ser Asp Asp Val
                565                 570                 575
ttg gcc aac atg att agt gaa cca agg atc agt tac gga aac gat gct    1776
Leu Ala Asn Met Ile Ser Glu Pro Arg Ile Ser Tyr Gly Asn Asp Ala
            580                 585                 590
ctc atg cca tct ttg acc gaa acg aaa acc acc gtg gag ctc ctt ccc    1824
Leu Met Pro Ser Leu Thr Glu Thr Lys Thr Thr Val Glu Leu Leu Pro
        595                 600                 605
gtg aat gga gag ttc agc ctg gac gat ctc cag ccg tgg cat tct ttt    1872
Val Asn Gly Glu Phe Ser Leu Asp Asp Leu Gln Pro Trp His Ser Phe
    610                 615                 620
ggg gct gac tct gtg cca gcc aac aca gaa aac gaa gtt gag cct gtt    1920
Gly Ala Asp Ser Val Pro Ala Asn Thr Glu Asn Glu Val Glu Pro Val
625                 630                 635                 640
gat gcc cgc cct gct gcc gac cga gga ctg acc act cga cca ggt tct    1968
Asp Ala Arg Pro Ala Ala Asp Arg Gly Leu Thr Thr Arg Pro Gly Ser
                645                 650                 655
ggg ttg aca aat atc aag acg gag gag atc tct gaa gtg aag atg gat    2016
Gly Leu Thr Asn Ile Lys Thr Glu Glu Ile Ser Glu Val Lys Met Asp
            660                 665                 670
gca gaa ttc cga cat gac tca gga tat gaa gtt cat cat caa aaa ttg    2064
Ala Glu Phe Arg His Asp Ser Gly Tyr Glu Val His His Gln Lys Leu
        675                 680                 685
gtg ttc ttt gca gaa gat gtg ggt tca aac aaa ggt gca atc att gga    2112
Val Phe Phe Ala Glu Asp Val Gly Ser Asn Lys Gly Ala Ile Ile Gly
    690                 695                 700
ctc atg gtg ggc ggt gtt gtc ata gcg aca gtg atc gtc atc acc ttg    2160
Leu Met Val Gly Gly Val Val Ile Ala Thr Val Ile Val Ile Thr Leu
705                 710                 715                 720
gtg atg ctg aag aag aaa cag tac aca tcc att cat cat ggt gtg gtg    2208
Val Met Leu Lys Lys Lys Gln Tyr Thr Ser Ile His His Gly Val Val
                725                 730                 735
gag gtt gac gcc gct gtc acc cca gag gag cgc cac ctg tcc aag atg    2256
Glu Val Asp Ala Ala Val Thr Pro Glu Glu Arg His Leu Ser Lys Met
            740                 745                 750
cag cag aac ggc tac gaa aat cca acc tac aag ttc ttt gag cag atg    2304
Gln Gln Asn Gly Tyr Glu Asn Pro Thr Tyr Lys Phe Phe Glu Gln Met
        755                 760                 765
cag aac tag                                                        2313
Gln Asn
    770
<210>9
<211>770
<212>PRT
<213>人
<400>9
Met Leu Pro Gly Leu Ala Leu Leu Leu Leu Ala Ala Trp Thr Ala Arg
  1               5                  10                  15
Ala Leu Glu Val Pro Thr Asp Gly Asn Ala Gly Leu Leu Ala Glu Pro
             20                  25                  30
Gln Ile Ala Met Phe Cys Gly Arg Leu Asn Met His Met Asn Val Gln
         35                  40                  45
Asn Gly Lys Trp Asp Ser Asp Pro Ser Gly Thr Lys Thr Cys Ile Asp
     50                  55                  60
Thr Lys Glu Gly Ile Leu Gln Tyr Cys Gln Glu Val Tyr Pro Glu Leu
65                  70                  75                   80
Gln Ile Thr Asn Val Val Glu Ala Asn Gln Pro Val Thr Ile Gln Asn
                 85                  90                  95
Trp Cys Lys Arg Gly Arg Lys Gln Cys Lys Thr His Pro His Phe Val
            100                 105                 110
Ile Pro Tyr Arg Cys Leu Val Gly Glu Phe Val Ser Asp Ala Leu Leu
        115                 120                 125
Val Pro Asp Lys Cys Lys Phe Leu His Gln Glu Arg Met Asp Val Cys
    130                 135                 140
Glu Thr His Leu His Trp His Thr Val Ala Lys Glu Thr Cys Ser Glu
145                 150                 155                 160
Lys Ser Thr Asn Leu His Asp Tyr Gly Met Leu Leu Pro Cys Gly Ile
                165                 170                 175
Asp Lys Phe Arg Gly Val Glu Phe Val Cys Cys Pro Leu Ala Glu Glu
            180                 185                 190
Ser Asp Asn Val Asp Ser Ala Asp Ala Glu Glu Asp Asp Ser Asp Val
        195                 200                 205
Trp Trp Gly Gly Ala Asp Thr Asp Tyr Ala Asp Gly Ser Glu Asp Lys
    210                 215                 220
Val Val Glu Val Ala Glu Glu Glu Glu Val Ala Glu Val Glu Glu Glu
225                 230                 235                 240
Glu Ala Asp Asp Asp Glu Asp Asp Glu Asp Gly Asp Glu Val Glu Glu
                245                 250                 255
Glu Ala Glu Glu Pro Tyr Glu Glu Ala Thr Glu Arg Thr Thr Ser Ile
            260                 265                 270
Ala Thr Thr Thr Thr Thr Thr Thr Glu Ser Val Glu Glu Val Val Arg
        275                 280                 285
Glu Val Cys Ser Glu Gln Ala Glu Thr Gly Pro Cys Arg Ala Met Ile
    290                 295                 300
Ser Arg Trp Tyr Phe Asp Val Thr Glu Gly Lys Cys Ala Pro Phe Phe
305                 310                 315                 320
Tyr Gly Gly Cys Gly Gly Asn Arg Asn Asn Phe Asp Thr Glu Glu Tyr
                325                 330                 335
Cys Met Ala Val Cys Gly Ser Ala Met Ser Gln Ser Leu Leu Lys Thr
            340                 345                 350
Thr Gln Glu Pro Leu Gly Arg Asp Pro Val Lys Leu Pro Thr Thr Ala
        355                 360                 365
Ala Ser Thr Pro Asp Ala Val Asp Lys Tyr Leu Glu Thr Pro Gly Asp
    370                 375                 380
Glu Asn Glu His Ala His Phe Gln Lys Ala Lys Glu Arg Leu Glu Ala
385                 390                 395                 400
Lys His Arg Glu Arg Met Ser Gln Val Met Arg Glu Trp Glu Glu Ala
                405                 410                 415
Glu Arg Gln Ala Lys Asn Leu Pro Lys Ala Asp Lys Lys Ala Val Ile
            420                 425                 430
Gln His Phe Gln Glu Lys Val Glu Ser Leu Glu Gln Glu Ala Ala Asn
        435                 440                 445
Glu Arg Gln Gln Leu Val Glu Thr His Met Ala Arg Val Glu Ala Met
    450                 455                 460
Leu Asn Asp Arg Arg Arg Leu Ala Leu Glu Asn Tyr Ile Thr Ala Leu
465                 470                 475                 480
Gln Ala Val Pro Pro Arg Pro Arg His Val Phe Asn Met Leu Lys Lys
                485                 490                 495
Tyr Val Arg Ala Glu Gln Lys Asp Arg Gln His Thr Leu Lys His Phe
            500                 505                 510
Glu His Val Arg Met Val Asp Pro Lys Lys Ala Ala Gln Ile Arg Ser
        515                 520                 525
Gln Val Met Thr His Leu Arg Val Ile Tyr Glu Arg Met Asn Gln Ser
    530                 535                 540
Leu Ser Leu Leu Tyr Asn Val Pro Ala Val Ala Glu Glu Ile Gln Asp
545                 550                 555                 560
Glu Val Asp Glu Leu Leu Gln Lys Glu Gln Asn Tyr Ser Asp Asp Val
                565                 570                 575
Leu Ala Asn Met Ile Ser Glu Pro Arg Ile Ser Tyr Gly Asn Asp Ala
            580                 585                 590
Leu Met Pro Ser Leu Thr Glu Thr Lys Thr Thr Val Glu Leu Leu Pro
        595                 600                 605
Val Asn Gly Glu Phe Ser Leu Asp Asp Leu Gln Pro Trp His Ser Phe
    610                 615                 620
Gly Ala Asp Ser Val Pro Ala Asn Thr Glu Asn Glu Val Glu Pro Val
625                 630                 635                 640
Asp Ala Arg Pro Ala Ala Asp Arg Gly Leu Thr Thr Arg Pro Gly Ser
                645                 650                 655
Gly Leu Thr Asn Ile Lys Thr Glu Glu Ile Ser Glu Val Lys Met Asp
            660                 665                 670
Ala Glu Phe Arg His Asp Ser Gly Tyr Glu Val His His Gln Lys Leu
        675                 680                 685
Val Phe Phe Ala Glu Asp Val Gly Ser Asn Lys Gly Ala Ile Ile Gly
    690                 695                 700
Leu Met Val Gly Gly Val Val Ile Ala Thr Val Ile Val Ile Thr Leu
705                 710                 715                 720
Val Met Leu Lys Lys Lys Gln Tyr Thr Ser Ile His His Gly Val Val
                725                 730                 735
Glu Val Asp Ala Ala Val Thr Pro Glu Glu Arg His Leu Ser Lys Met
            740                 745                 750
Gln Gln Asn Gly Tyr Glu Asn Pro Thr Tyr Lys Phe Phe Glu Gln Met
        755                 760                 765
Gln Asn
    770
<210>10
<211>10
<212>PRT
<213>人
<400>10
Val Val Ile Ala Thr Val Ile Val Ile Thr
  1               5                  10
<210>11
<211>11
<212>PRT
<213>人
<400>11
Val Val Ile Ala Thr Val Ile Val Ile Thr Leu
  1               5                  10
<210>12
<211>7
<212>PRT
<213>人
<400>12
Leu Val Met Leu Lys Lys Lys
  1               5
<210>13
<211>6
<212>PRT
<213>人
<400>13
Val Met Leu Lys Lys Lys
  1               5

Claims (16)

1.一种由氨基酸序列组成的化合物或其药物上可接受的盐，所述序列由氨基酸序列Val-Val-Ile-Ala-Thr-Val-Ile-Val-Ile-Thr-Leu-Val-Met-Leu-Lys-Lys-Lys(SEQ ID NO：1)的包括11位的Leu的至少3个连续的氨基酸所组成，其中在Leu与紧接其前或后的一个氨基酸之间的肽键“-CO-NH-”被羟亚乙基-CHOH-CH2-取代，而任何其他的中间氨基酸间的键是肽键，其中N末端具有基于C1-10烷基的烷氧羰基，所述烷基可带有苯基或萘基作为取代基，其中C末端被转化成基于C1-10烷基的烷基酯或烷基酰胺，所述烷基可带有苯基或萘基作为取代基，并且其中第10位的Thr的羟基的氢原子可被C1-4疏水基团或Z基团所取代。
2.权利要求1的化合物或其药物上可接受的盐，其中氨基酸序列的第14位的Leu被Ile或其他的疏水性氨基酸或被Pro所取代，第11位的Leu被Ile或其他的疏水性氨基酸所取代，或者第10位的Thr被Ser所取代，或者第9位的Ile被Leu或其他的疏水性氨基酸所取代。
3.一种由氨基酸序列组成的化合物或其药物上可接受的盐，所述序列由氨基酸序列Ile-Thr-Leu-Val-Met-Leu(SEQ ID NO：2)的包括第3位的Leu的3、4、5或6个连续的氨基酸所组成，其中在Leu与紧接其前或后的一个氨基酸之间的肽键“-CO-NH-”被羟亚乙基-CHOH-CH2-所取代，而任何其他的中间氨基酸间的键是肽键，其中N末端具有基于C1-10烷基的烷氧羰基，所述烷基可带有苯基或萘基作为取代基，其中C末端被转化成基于C1-10烷基的烷基酯或烷基酰胺，所述烷基可带有苯基或萘基作为取代基，并且其中第10位的Thr的羟基的氢原子可被C1-4疏水基团或Z基团所取代。
4.一种由氨基酸序列Leu-Val-Met-Leu(SEQ ID NO：3)所组成的化合物或其药物上可接受的盐，其中在第1位的Leu与第2位的Val之间的肽键“-CO-NH-”被羟亚乙基-CHOH-CH2-所取代，而任何其他的中间氨基酸间的键是肽键，其中N末端具有基于C1-10烷基的烷氧羰基，所述烷基可带有苯基或萘基作为取代基，其中C末端被转化成基于C1-10烷基的烷基酯或烷基酰胺，所述烷基可带有苯基或萘基作为取代基。
5.一种由氨基酸序列Thr-Leu-Val-Met(SEQ ID NO：4)所组成的化合物，其中在第1位的Thr与第2位的Leu之间的肽键“-CO-NH-”被羟亚乙基-CHOH-CH2-所取代，而任何其他的中间氨基酸间的键是肽键，其中N末端具有基于C1-10烷基的烷氧羰基，所述烷基可带有苯基或萘基作为取代基，其中C末端被转化成基于C1-10烷基的烷基酯或烷基酰胺，所述烷基可带有苯基或萘基作为取代基，并且其中Thr的羟基的氢原子可被C1-4疏水基团或Z基团所取代。
6.权利要求3的化合物或其药物上可接受的盐，其中紧接Val前的Leu被Ile或其他的疏水性氨基酸所取代，或者N末端的Leu被Ile或其他的疏水性氨基酸或被Pro所取代。
7.权利要求4的化合物或其药物上可接受的盐，其中紧接Val前的Leu被Ile或其他的疏水性氨基酸所取代，或者N末端的Leu被Ile或其他的疏水性氨基酸或被Pro所取代。
8.权利要求5的化合物或其药物上可接受的盐，其中紧接Val前的Leu被Ile或其他的疏水性氨基酸所取代。
9.权利要求3的化合物或其药物上可接受的盐，其中Thr被Ser所取代。
10.权利要求3的化合物或其药物上可接受的盐，其中Ile被Leu或其他的疏水性氨基酸所取代。
11.权利要求5的化合物或其药物上可接受的盐，其中Thr被Ser所取代。
12.权利要求1-11中任一项的化合物或其药物上可接受的盐，其中烷氧羰基是Boc基团。
13.权利要求1-11中任一项的化合物或其药物上接受的盐，其中由Tyr-Gly-Arg-Lys-Lys-Arg-Arg-Gln-Arg-Arg-Arg(SEQ ID NO：5)所组成的多肽来代替烷氧羰基融合。
14.含有权利要求1-13中任一项化合物的γ-分泌酶抑制剂。
15.权利要求1-13中任一项化合物的抗体。
16.权利要求1-13中任一项化合物作为γ-分泌酶抑制剂在筛选淀粉样蛋白生产的抑制剂中的用途。
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