CN1299869A - 从咸蛋清中提取溶菌酶方法 - Google Patents
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Abstract
咸蛋黄被广泛应用于食品加工中,而咸蛋(鸭蛋或鸡蛋)取黄后留下的咸蛋清因含有极高浓度的食盐和异味限制了应用而常被废弃。本发明经普查表明咸蛋清中尚含有丰富的溶菌酶含量,可以作为生产溶菌酶的原料;进而采用脱氨酰化壳聚糖凝胶亲和吸附法,直接从咸蛋清中仅经一步便纯化得溶菌酶,所得纯化酶的比活力大于70000U/mg蛋白,回收率可达70%。
Description
本发明是属于生物技术领域，特别涉及以咸蛋清为原料提取溶菌酶的技术。
溶菌酶在医药、食品和化工等领域具广泛的用途，广泛存在于动物、植物和微生物中，但多数材料中溶菌酶的含量很低，不适于大规模生产，其中以蛋清中的含量最为丰富，因此目前商品化的溶菌酶均来源于新鲜的鸡蛋清，但新鲜蛋清价格昂贵，导致生产成本居高，且又与副食品争夺蛋白原料。随着溶菌酶应用范围的扩大，酶的需求量将不断增加，因而寻找廉价而丰富的溶菌酶新酶源具有重要的意义。众所周知，在我国咸蛋黄被大量地用来制造月饼等各类食品，咸蛋取黄后留下的咸蛋清因含有高浓度的食盐和具有异味等原因限制了应用，而常被废弃，这不仅浪费了蛋白资源，而且对环境造成严重伤害。据估算仅粤港澳地区每年因制作蛋黄月饼而产生的咸蛋清就可达2000吨以上，其中大部分被废弃。我们经普查的结果表明咸蛋清中所含的溶菌酶活力与新鲜的蛋清相当(见表一)，是潜在的溶菌酶生产原料。咸
表一：咸鸭蛋清与新鲜鸭蛋清中溶菌酶含量的比较
注：所抽取的8个批次蛋清均从广州天河区各农贸市场随机购买。蛋清来源丰富，以其为原料生产溶菌酶不仅可变废为宝，而且可减少对环境的污染。目前溶菌酶的分离纯化大多采用离子交换层析法，该法存在操作繁琐设备复杂等问题，如：树脂使用后必须再生和平衡、层析时需采用梯度(或分段)洗脱等操作过程；另外尚存在回收率、纯化倍数和浓缩倍数均不高等缺点。若以咸蛋清为原料，蛋清中高浓度的食盐必将严重影响离子交换层析这一工艺流程，因而必须先经脱盐处理，这使得本来就十分繁琐的操作变得更为复杂。
本发明的目的是利用廉价的咸蛋清为酶源，并建立一套简便又高效的从咸蛋清中提取溶菌酶的方法。
本法以咸蛋(咸鸭蛋或咸鸡蛋)蛋清为原料，将咸蛋清用pH值大于5的溶液稀释以降低蛋清粘度，搅拌均匀并过滤除去固形残渣，于滤液中加入抽干并已经平衡好的脱氨酰化壳聚糖凝胶亲和吸附介质(本介质的制备方法已向中国知识产权局专利局申请专利，申请号为：001 14272.0)，开放搅拌吸附或在柱上静态吸附，吸附完全后用上述的稀释溶液充分洗涤凝胶颗粒除去其表面粘附的杂蛋白，待洗涤流出液在280nm波长下的吸光度小于0.1时改用pH值小于4的稀酸溶液洗脱被亲和吸附的溶菌酶，收集活性部分，即为纯化的溶菌酶。使用后凝胶的再生和平衡只要用相应的蛋清稀释溶液洗涤至洗涤流出液的pH值与稀释液一致即可。
蛋清稀释溶液：可用NaHCO3溶液、pH值大于5的磷酸缓冲液、蒸馏水或自来水等。
稀酸洗脱溶液：可用0.1mol/L的HAc、0.1mol/L的HCl等。
本法所得的溶菌酶比活力大于70000U/mg蛋白，远远超过食品级及医药级的要求；并且回收率可达70％以上。
实施例：
将50ml咸鸭蛋清用5mmol/L NaHCO3溶液稀释至400mL，搅拌均匀，两层纱布过滤，于滤液中加入床体积为100ml的抽干的凝胶吸附剂，该凝胶吸附剂预先已经5mmol/L NaHCO3溶液平衡，室温下开放搅拌100分钟，于尼龙布上用5mmol/L NaHCO3溶液洗涤凝胶吸附剂直至洗涤流出液在280nm波长下的吸光度小于0.1时，装柱(2.0×22.0cm)，用0.1mol/L HAc洗脱，收集活性部分，即为纯化的咸蛋清溶菌酶。
本法与原有的生产技术相比，采用了废弃的咸蛋清作为原料，不仅变废为宝，而且可减少对环境的危害；同时所建立的分离纯化方法具高效简便等特点，可直接从含高浓度盐的咸蛋清中仅经亲和吸附法一步便获得高纯度的溶菌酶，而不受原料中高浓度食盐的影响；并且在纯化过程中不需要对原料进行加热调酸碱度和盐析分部等任何处理，因而经纯化操作后留下的蛋清其物化特性几乎没有改变，这为后续的进一步综合开发与利用提供了极大的方便。
Claims (3)
1、一种从咸蛋清中提取溶菌酶的方法：其特征在于以咸蛋清为原料，将咸蛋清用pH值大于5的溶液稀释，搅拌均匀后过滤以除去固形残渣，于滤液中加入已经平衡好的脱氨酰化壳聚糖凝胶介质为亲和吸附剂，开放搅拌吸附或在柱上静态吸附，待吸附完全后用稀释溶液充分洗涤凝胶颗粒除去其表面粘附的杂蛋白，至洗涤流出液在280nm波长下的吸光度小于0.1时改用pH值小于4的稀酸溶液洗脱被亲和吸附的溶菌酶，收集活性部分，即为纯化的溶菌酶。
2、根据权利要求1所说的溶菌酶提取方法，其特征在于咸蛋清稀释液可选用NaHCO3溶液、磷酸缓冲液、蒸馏水或自来水等。
3、根据权利要求1所说的溶菌酶提取方法，其特征在于稀酸洗脱液可选用0.1mol/L的HAc、0.1mol/L的HCl等。
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| CN 01107411 CN1299869A (zh) | 2001-01-04 | 2001-01-04 | 从咸蛋清中提取溶菌酶方法 |
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| CN 01107411 CN1299869A (zh) | 2001-01-04 | 2001-01-04 | 从咸蛋清中提取溶菌酶方法 |
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Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103394338A (zh) * | 2013-06-20 | 2013-11-20 | 江南大学 | 一种新型磁性纳米颗粒的制备及其分离蛋清溶菌酶的方法 |
| CN109287840A (zh) * | 2018-07-11 | 2019-02-01 | 安徽靳氏食品有限公司 | 一种破碎鸭蛋蛋黄和蛋清分离回收工艺 |
| CN111088241A (zh) * | 2019-03-18 | 2020-05-01 | 江南大学 | 基因工程改造的高活力人溶菌酶 |
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2001
- 2001-01-04 CN CN 01107411 patent/CN1299869A/zh active Pending
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