CN1292250C - 庆大霉素、链霉素、新霉素分子印迹整体分离柱及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了应用于测定动物源食品中庆大霉素、链霉素、新霉素残留量的高选择性分离的分子印迹整体柱及其制备方法。以庆大霉素、链霉素、新霉素作分子模板，在空柱中进行原位结合，制备庆大霉素、链霉素、新霉素分子印迹整体柱，柱中填料是一种有固定孔穴大小和形状及有确定排列功能基团的交联聚合物，它对庆大霉素、链霉素、新霉素模板分子的立体结构具有“记忆”功能。用于此分子印迹整体柱可对残留分析样品溶液中庆大霉素、链霉素、新霉素进行高选择性分离。本印迹整体柱较普通反相C18分离柱有更强的保留，不需离子对试剂参与分离，流动相可与质谱很好的兼容。

Description

庆大霉素、链霉素、新霉素分子印迹整体分离柱及其制备方法

                           技术领域

本发明涉及分析化学领域，具体地说是应用于测定动物性食品中庆大霉素、链霉素、新霉素残留量的高选择性分离的分子印迹整体柱及其制备方法。

                           背景技术

氨基糖苷类抗生素是一类应用广泛，需进行治疗药物监测的广谱抗菌药物，主要包括庆大霉素(GM)、链霉素(SM)、卡那霉素(KM)、巴龙霉素(PM)、新霉素(NM)等。此类抗生素的基本结构都是氨基环醇和氨基糖缩合而成的苷，含氨基或其它碱性基团。抗生素在兽医和畜牧业生产中均有大量应用，大部分抗生素作为兽药添加剂用于动物疾病预防、降低死亡率和促生长。但抗生素存在耐药性、过敏和稳定性等问题，对人有毒害作用，因此是各国兽药残留监控的重要内容。测定动物性食品中庆大霉素、链霉素、新霉素残留量的方法目前主要采用离子对反相液相色谱法，这种方法需使用离子对试剂，这些离子对试剂大多为不挥发盐，且价格昂贵，对色谱柱寿命影响较大，同时使得分离流动相与具有定性能力的质谱联用非常困难，限制了方法的专一性；且不能与国际要求和标准接轨。

                           发明内容

本发明的目的在于提供一种应用于测定动物源食品中庆大霉素、链霉素、新霉素残留量的高选择性分离的分子印迹整体柱及其制备方法。

本发明的技术方案是这样实现的：

庆大霉素、链霉素、新霉素分子印迹整体分离柱是用庆大霉素、链霉素、新霉素作为聚合原料模板分子与功能单体甲基丙烯酸和交联剂二甲基丙烯酸乙二醇酯，按模板分子∶功能单体∶交联剂＝1～5∶4～10∶20～100，在柱管直径为0.20mm～20mm，长度为1cm～30cm的空柱管中采用原位聚合方式制备的整体分离柱。

其制备方法：包括以下步骤

(1).庆大霉素、链霉素、新霉素印迹分子聚合物反应体系：将聚合原料模板分子(庆大霉素、链霉素、新霉素)功能单体甲基丙烯酸(MAA)、交联剂二甲基丙烯酸乙二醇酯(EDMA)，按模板分子∶功能单体∶交联剂＝1～5∶4～10∶20～100，依次加入到圆底烧瓶中，再加入引发剂偶氮二异丁腈(AIBN)、致孔剂水、甲醇、乙腈、四氢呋喃、乙醇、氯仿、乙醚等中的几种构成的混合物，超声5～30min，真空条件下通氮气5～40min；

(2)将反应混合物吸入空柱管，柱管尺寸直径为0.20mm～20mm，长度为1cm～30cm，柱管材料可用不锈钢、石英玻璃、及高聚物材料，如聚丙烯等；柱管两头密封后，在40～90℃水浴中反应聚合5～48h；

(3)聚合完成后，开启柱两端封口，分别用水、甲醇洗柱，体积分别为3～20个柱体积。

由于庆大霉素、链霉素、新霉素印迹分子聚合物是一种有固定孔穴大小和形状及有确定排列的功能基团的交联聚合物，它对庆大霉素、链霉素、新霉素模板分子的立体结构具有“记忆”功能，可应用于用于测定动物性食品中庆大霉素、链霉素、新霉素残留量的高选择性分离。

本印迹整体分离柱较普通离子对反相高效液相色谱法法更为简单、快速、高效。其所用流动相与电喷雾质谱完全兼容，庆大霉素、链霉素、新霉素在该柱上分离后可同时用质谱进行定性、定量。

                           附图说明

图1为未加模板分子进行原位聚合后的聚合物内部扫描电镜图；

图2为以庆大霉素、链霉素、新霉素为模板分子进行原位聚合后聚合物内部扫描电镜图。

                           具体实施方式

以下通过具体实施方式对本发明作进一步说明。

实施例1：

庆大霉素、链霉素、新霉素分子印迹整体分离柱的制备：

向细颈带磨口的10ml试管中加入庆大霉素、链霉素、新霉素0.060、0.076、0.078g、甲基丙烯酸0.16ml，用9ml混合有机溶剂(水1.5ml、甲醇1ml、乙腈6ml、四氢呋喃0.5ml)溶解，加入二甲基丙烯酸乙二醇酯2.4ml真空脱气15min后加19.6mg偶氮二异丁腈超声振荡1min密封，低温保存。

将上述溶液吸入毛细管内，并密封小柱两端后置于60℃水浴中聚合24h。以上所得的聚合物柱先用水冲洗，再用甲醇洗脱。经扫描电镜对整体柱中填料聚合物内部进行观察，分子印迹聚合物空隙度远大于不含模板分子进行聚合而成的空白聚合物的空隙度，证明模板分子形成了有效吸附空腔。

Claims (2)

1.庆大霉素、链霉素、新霉素分子印迹整体分离柱，其特征在于是用庆大霉素、链霉素、新霉素作为聚合原料模板分子与功能单体甲基丙烯酸和交联剂二甲基丙烯酸乙二醇酯，按模板分子∶功能单体∶交联剂＝1～5∶4～10∶20～100，在柱管直径为0.20mm～20mm，长度为1cm～30cm的空柱管中采用原位聚合方式制备的整体分离柱。

2.庆大霉素、链霉素、新霉素分子印迹整体分离柱的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

(1).用庆大霉素、链霉素、新霉素作为聚合原料模板分子，用甲基丙烯酸作功能单体，用二甲基丙烯酸乙二醇酯作交联剂，按模板分子∶功能单体∶交联剂＝1～5∶4～10∶20～100，依次加入到圆底烧瓶中，再加入引发剂偶氮二异丁腈AIBN、致孔剂水、甲醇、乙腈、四氢呋喃、乙醇、氯仿、乙醚，超声5～30min，通氮气5～40min，真空；

(2)将反应混合物吸入用不锈钢、石英玻璃或高聚物材料制成的空柱管，柱管直径为0.20mm～20mm，长度为1cm～30cm，柱管两头密封后，在40～90℃水浴中反应聚合5～48h；

(3)聚合完成后，开启柱两端封口，分别用水、甲醇洗柱，体积分别为3～20个柱体积。