CN102735780B

CN102735780B - 一种监测3，2’，6’-三-N-乙酰基庆大霉素Cla含量的方法

Info

Publication number: CN102735780B
Application number: CN201210216280.0A
Authority: CN
Inventors: 姜艳; 封成军; 周长清; 李兴刚; 谢立成
Original assignee: Wuxi Suke Biological Technology Co ltd; Changzhou University
Current assignee: Wuxi Suke Biological Technology Co ltd; Changzhou University
Priority date: 2012-06-27
Filing date: 2012-06-27
Publication date: 2014-07-30
Anticipated expiration: 2032-06-27
Also published as: CN102735780A

Abstract

本发明涉及一种监测3，2’，6’-三-N-乙酰基庆大霉素Cla及其相关物质的分析方法。本发明采用高效液相色谱法，色谱条件为：YMC–Pack CN色谱柱，粒径5μm,柱规格（150～250mm）×（4.6mm）；流动相组分为的氨水和甲醇体积比为40～10:60～90，氨水中氨的含量为0.04～0.06mol/L；流速：0.8～1.0mL/min；进样量：10μL；检测器：SPD-M20A，检测波长220nm；本发明采用简单方便的分析方法就可跟踪反应进程。

Description

一种监测3,2’,6’-三-N-乙酰基庆大霉素Cla含量的方法

技术领域

本发明涉及一种监测方法，特别是涉及一种利用高效液相色谱法监测3，2’，6’-三-N-乙酰基庆大霉素Cla的分方法。

背景技术

硫酸依替米星是拥有自主知识产权的国家一类新药，该药是以庆大霉素C1a为起始原料，采用过渡金属络合物催化方法保护庆大霉素C1a中部分氨基，得中间体3，2’，6’-三-N-乙酰基庆大霉素Cla，经硅烷化羟基保护、缩合、还原、N-乙基化等反应，将中间体转化为1-N-乙基庆大霉素C1a，即依替米星，再用大孔树脂进行层析分离纯化，然后成盐得成品硫酸依替米星。

目前所有的文献和专利中在中间体3，2’，6’-三-N-乙酰基庆大霉素Cla的生产过程中，均未报到3，2’，6’-三-N-乙酰基庆大霉素Cla的检测方法。由于原料庆大霉素C1a中有五个氨基，在乙酰化反应时，容易产生保护不足或过保护等副产物，使得中间体3，2’，6’-三-N-乙酰基庆大霉素Cla收率不高，最终导致产品的合成转化率偏低。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明提供一种高效、快速的监测方法，能够在线跟踪反应进程，以便最大收率的合成中间体3，2’，6’-三-N-乙酰基庆大霉素Cla，提高最终产品硫酸依替米星的合成转化率。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案实现：

一种监测3，2’，6’-三-N-乙酰基庆大霉素Cla含量的方法，选用YMC–PackCN色谱柱，以甲醇和氨水为流动相，限定流动速度在0.8～1.0mL/min范围内，选用SPD检测器，分析中间体3，2’，6’-三-N-乙酰基庆大霉素Cla的含量。

所述的YMC–Pack CN色谱柱选用：球形硅胶微粒为基质的氰基型色谱柱。

所述的YMC–Pack CN色谱柱选用：其规格为（150～250mm）×（4.6mm），粒径5μm的YMC–Pack CN色谱柱。

所述的甲醇与氨水的体积比为60～90:40～10。

所述的流动相中氨水中氨的含量为0.04～0.06mol/L。

所述的流速，其进样量为10μL，柱温为25℃。

所述的SPD检测器选用：检测波长220nm为SPD-M20A检测器。

本发明的技术方案中，采用如下的技术参数：

（1）高聚物色谱柱：YMC–Pack CN色谱柱，（150～250mm）×（4.6mm），粒径5μm。

（2）流动相：流动相组份为甲醇与氨水的体积比为60～90:40～10，氨水中氨的含量为0.04～0.06mol/L。

（3）流速：0.8～1.0Ml/min，进样量：10μL，柱温：25℃。

（4）检测器：SPD-M20A，检测波长220nm。

本发明的采用如下的实验器材及试剂

（1）实验仪器

Prominence高效液相色谱仪（岛津公司），由LC-20AB泵、SPD-M20A、CTO-20A；工作站（岛津LCsolution workstation）

（2）实验试剂

含中间体3，2’，6’-三-N-乙酰基庆大霉素Cla的供试品反应液(企业提供)；3，2’，6’-三-N-乙酰基庆大霉素Cla纯品（企业提供），甲醇（美国Merck公司）；氨水（国产分析纯）；高效液相去离子水（自制）。

与现有检测方法相比，本发明的有益效果在于：

1、原生产工艺中没有针对中间体3，2’，6’-三-N-乙酰基庆大霉素Cla含量的分析方法，是根据反应时间来判断反应结束，不能准确确定乙酰化反应的终点，造成中间体收率的波动较大。

2、本发明通过选择合适的色谱柱，调整流动相的比例，建立了对中间体3，2’，6’-三-N-乙酰基庆大霉素Cla的先进高效的分析方法，改变了原有生产工艺中跟踪反应的粗放式操作，大大减少了五乙酰化副产物的含量。

3、本发明首次采用高效液相色谱法对中间体3，2’，6’-三-N-乙酰基庆大霉素Cla进行分析。

4、本发明操作方便，为企业在硫酸依替米星生产过程的在线检测提供技术支持。

具体实施方式

下面通过具体的实施例，对本发明做详细的描述：

实施例1

色谱条件：检测仪器：岛津Prominence高效液相色谱仪；色谱柱：YMC–PackCN色谱柱，粒径5μm,柱规格（150mm×4.6mm）；检测器：SPD-M20A；检测波长：220nm；流动相：氨水和甲醇体积比为10:90，氨水中氨的含量为0.04mol/L；流速：0.8mL/min；进样量：10μL；进样物质：供试品溶液与对照品溶液。结果：3，2’，6’-三-N-乙酰基庆大霉素Cla与相关物质均达到基线分离。

实施例2

色谱条件：检测仪器、检测器、检测波长、进样量、流动相、流速、进样物质同实例1，色谱柱：YMC–Pack CN色谱柱，粒径5μm,柱规格（250mm×4.6mm），结果：3，2’，6’-三-N-乙酰基庆大霉素Cla与相关物质均达到基线分离。

实施例3

色谱条件：检测仪器、检测器、检测波长、进样量、进样物质同实例1，色谱柱：YMC–Pack CN色谱柱，粒径5μm,柱规格（250mm×4.6mm），流动相氨水和甲醇体积比为10:90，氨水中氨的含量为0.04mol/L；流速：0.8mL/min；结果：3，2’，6’-三-N-乙酰基庆大霉素Cla与相关物质均达到基线分离。

实施例4

色谱条件：检测仪器、检测器、检测波长、进样量、进样物质同实例1，色谱柱：YMC–Pack CN色谱柱，粒径5μm,柱规格（250mm×4.6mm），流动相氨水和甲醇体积比为30:70，氨水中氨的含量为0.06mol/L；流速：0.8mL/min；结果：3，2’，6’-三-N-乙酰基庆大霉素Cla与相关物质均达到基线分离。

实施例5

色谱条件：检测仪器、检测器、检测波长、进样量、进样物质同实例1，色谱柱：YMC–Pack CN色谱柱，粒径5μm,柱规格（250mm×4.6mm），流动相氨水和甲醇体积比为30:70，氨水中氨的含量为0.06mol/L；流速：1.0mL/min；结果：3，2’，6’-三-N-乙酰基庆大霉素Cla与相关物质均达到基线分离。

实施例6

色谱条件：检测仪器、检测器、检测波长、进样量、进样物质同实例1，色谱柱：YMC–Pack CN色谱柱，粒径5μm,柱规格（250mm×4.6mm），流动相氨水和甲醇体积比为30:70，氨水中氨的含量为0.06mol/L；流速：1.2mL/min；结果：3，2’，6’-三-N-乙酰基庆大霉素Cla与相关物质均达到基线分离。

Claims

1.一种监测3，2’，6’-三-N-乙酰基庆大霉素Cla含量的方法，其特征在于：选用YMC–Pack CN色谱柱，以甲醇和氨水为流动相，甲醇与氨水的体积比为60～90:40～10，所述的流动相中氨水中氨的含量为0.04～0.06mol/L，限定流动速度在0.8～1.0mL/min范围内，选用SPD检测器，分析中间体3，2’，6’-三-N-乙酰基庆大霉素Cla的含量。

2.根据权利要求1所述的一种监测3，2’，6’-三-N-乙酰基庆大霉素Cla含量的方法，其特征在于：所述的YMC–Pack CN色谱柱选用：球形硅胶微粒为基质的氰基型色谱柱。

3.根据权利要求1或2中的任一项所述的一种监测3，2’，6’-三-N-乙酰基庆大霉素Cla含量的方法，其特征在于：所述的YMC–Pack CN色谱柱选用：长度为150～250mm，直径为4.6mm，粒径为5μm的YMC–Pack CN色谱柱。

4.根据权利要求1所述的一种监测3，2’，6’-三-N-乙酰基庆大霉素Cla含量的方法，其特征在于：其进样量为10μL，柱温为25℃。

5.根据权利要求1所述的一种监测3，2’，6’-三-N-乙酰基庆大霉素Cla含量的方法，其特征在于：所述的SPD检测器选用M20A检测器，其检测波长220nm。