CN1276723A - 用作抗肿瘤剂的二硫杂环戊烯并吡咯酮及其相应的一氧化物和二氧化物 - Google Patents

用作抗肿瘤剂的二硫杂环戊烯并吡咯酮及其相应的一氧化物和二氧化物 Download PDF

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Abstract

从伯氏致病杆菌分离出的、具有式(1)或(2)或(3)的化合物或其盐具有抗肿瘤活性,式(1):其中R1=氢、取代或未取代的烷基、环烷基、芳基、芳烷基或杂环基;R2=氢、取代或未取代的烷基、环烷基、芳基、芳烷基、杂环基或酰基;R3=氢、烷基、环烷基、芳烷基、芳基或杂环基;式(2):其中R1=氢、取代或未取代的烷基、环烷基、芳基、芳烷基或杂环基;R2=氢、取代或未取代的烷基、环烷基、芳基、芳烷基、杂环基或酰基;R3=氢、烷基、环烷基、芳烷基、芳基或杂环基;式(3):其中R1=氢、取代或未取代的烷基、环烷基、芳基、芳烷基或杂环基;R2=氢、取代或未取代的烷基、环烷基、芳基、芳烷基、杂环基或酰基;R3=氢、烷基、环烷基、芳烷基、芳基或杂环基。本发明提供了含有该化合物的药物组合物,和将它们用作药物的方法,尤其是用于治疗人和动物的癌症。

Description

用作抗肿瘤剂的二硫杂环戊烯并吡咯酮 及其相应的一氧化物和二氧化物
本发明的领域
本发明涉及具有抗肿瘤活性的二硫杂环戊烯并吡咯酮(dithiolopyrrolone)衍生物、其相应的一氧化物(xenomins)和二氧化物(xenorxides)。本发明还提供了含有这些化合物、它们的盐的抗肿瘤组合物，以及本发明化合物用作抗肿瘤剂的方法。本发明的概述
本发明涉及具有抗肿瘤活性的二硫杂环戊烯并吡咯酮衍生物、其相应的一氧化物(xenomins)和二氧化物(xenorxides)。本发明还提供了含有这些化合物、它们的盐的抗肿瘤组合物，以及本发明化合物用作抗肿瘤剂的方法。附图的简要说明
下述图1、图2和图3分别代表二硫杂环戊烯并吡咯酮、其相应的一氧化物(xenomins)和二氧化物(xenorxides)的结构式，图1其中R1＝氢、取代或未取代的烷基、环烷基、芳基、芳烷基或杂环基；R2＝氢、取代或未取代的烷基、环烷基、芳基、芳烷基或杂环基，酰基；R3＝氢、烷基、环烷基、芳烷基、芳基或杂环基。图2其中R1＝氢、取代或未取代的烷基、环烷基、芳基、芳烷基或杂环基；R2＝氢、取代或未取代的烷基、环烷基、芳基、芳烷基或杂环基或酰基；R3＝氢、烷基、环烷基、芳烷基、芳基或杂环基。
Figure A9881032800082
图3其中R1＝氢、取代或未取代的烷基、环烷基、芳基、芳烷基或杂环基；R2＝氢、取代或未取代的烷基、环烷基、芳基、芳烷基、杂环基或酰基；R3＝氢、烷基、环烷基、芳烷基、芳基或杂环基。
癌症是人和动物的主要死因之一。每年世界上有数百万人被诊断为患有癌症，这些人中的大部分随后死于癌症。尽管已经做了很大努力，但癌症仍然属于难以治疗的疾病。对有效抗癌药物的急需是不会停止的。
土壤有机体是用于药学和土壤化学工业的生物活性物质的传统来源。最近的一个发现是土壤生存的线虫-细菌的组合体用作有害昆虫的生物控制剂的商业化。这种生物控制剂的一个重要特征在于线虫的细菌共生生物(致病杆菌种或光杆状菌种)可产生范围很广的生物活性代谢物，并且已分离、定义了这些特殊化合物中的一些化合物，阐明了其结构(Fors和Nealson，1996)。在这些被定义的化合物中，有几个是二硫杂环戊烯并吡咯酮衍生物。二硫杂环戊烯并吡咯酮最初是在40年代的链霉菌属分离的，而且从那以后，从其它有机体也已分离出来。这些化合物包括金丝菌素、硫藤黄菌素、全霉素和xenorhabdins(Hamao等，1948；Eisenman等，1953；Celmer和Solomons，1995；von Daehne等，1969；Mclnerney等，1991)。这些化合物对大范围微生物具有抗微生物活性。近来，还从致病杆菌种的细菌培养物中发现了叫做xenorxides的新的抗微生物物质(Webster等，1996)。对这些致病杆菌的代谢物的潜在作用的不断开发，结果发现xenorxides、xenomins和二硫杂环戊烯并吡咯酮对动物和人的癌细胞具有很高的活性，这也是本发明的主题。
当动物细胞受到不同化学因素影响时，通常会经受各种酶促变化和生物化学改变。例如，当动物细胞受到致癌剂的攻击时，可以启动许多酶促的和生物化学的活性，其中一些被启动的活性可通过实验检测。在二硫杂环戊烯并吡咯酮及其衍生物中，硫藤黄菌素是已得到广泛研究者之一。硫藤黄菌素可抑制酵母中的RNA聚合酶合成(Jimenez等，1973；Tipper，1973)、具有膜稳定活性并且可抑制大鼠的血小板聚集(Yasuyuki等，1980)。有报道(Menta和Moon，1991；Sharma等，1994；Arnoid等，1995)硫藤黄菌素抑制一些这类活性的启动可能与接触致癌剂的哺乳动物细胞的致癌有关。这提示硫藤黄菌素可能参与了细胞转移的起始或癌症前期细胞向恶性癌症细胞的发展。然而这种活性没有通过实验确定。虽然对二硫杂环戊烯并吡咯酮的研究已不断进行了约50年，但至今从未对有关硫藤黄菌素和其它二硫杂环戊烯并吡咯酮对哺乳动物细胞的抗癌活性进行评价和报道。新近发现了Xenorxides和xenomins，而在现有技术中没有有关它们的抗癌活性的报道。
虽然本发明的化合物可以通过化学合成，但从微生物中可得到初始化合物。用于本发明的生物体包括伯氏致病杆菌，它是一种与昆虫病原性线虫有关的共生细菌。已从英国、哥伦比亚、加拿大的土壤中收集到用于本发明的伯氏致病杆菌及其线虫共生生物steinernema feltiae。简而言之，用带有伯氏致病杆菌A21株的被感染保幼(IJ)线虫以25IJs/幼虫的速度感染大蜡蛀虫的最后龄幼虫Galleria mellonella。24-48小时后，将死亡的昆虫幼虫浸在95％乙醇中进行表面消毒，并灼烧。对尸体进行无菌解剖，将血淋巴在琼脂培养基中进行划线培养，并在室温避光培养。在1升蒸馏水中，该琼脂培养基具有下列组成：牛肉提取物                        3g胨                                5g溴百里酚蓝                        0.025g2，3，5-三苯基四唑                0.04g琼脂                              15g在121℃灭菌15分钟。
保持所得到的伯氏致病杆菌的初级形式，并每隔14天对其进行传代培养。为了前后一致，常常将贮存于-20℃的细菌的14％蔗糖冻干粉末用作培养的起始物质。伯氏致病杆菌A21株的培养物具有下列表1和表2的特性，由此培养物可得到本发明的化合物：
表1.伯氏致病杆菌A21株的生化特性
革兰氏反应细胞大小(μm)迁移率周毛细胞 *5.3×2.2++
色素形成过氧化氢酶氧化酶脲酶卵磷脂酶脂肪酶(吐温80) 黄色---+-
*+阳性；-阴性。
表2.酸性产物和由伯氏致病杆菌A21株得到的碳源的利用
酸性产物* 碳源的利用
D-阿拉伯糖       +/-七叶灵           -D-果糖           +D-半乳糖         -D-葡萄糖         +肌醇             +/-菊糖             -D-乳糖           -D-麦芽糖         +D-甘露糖醇       -D-甘露糖         +D-棉籽糖         -D-山梨糖醇       +/-L-山梨糖         -D-木糖           - 天冬酰胺       +胱氨酸         -甘氨酸         -酪氨酸         +烟酸           -乙醇           -甲醇           -肌醇           +/-甘露糖         +D-半乳糖       -D-葡萄糖       +D-乳糖         -D-甘露糖醇     -D-山梨糖醇     -核糖           +
*+阳性；+/-：弱阳性；-阴性。
这些特性与Akhurst，R.J.和N.E.Boemare(1988)对伯氏致病杆菌的描述是一致的，由此，确定了生物体伯氏致病杆菌的同一性。按照布达佩斯条约将可从中分离出的本发明化合物的这种菌株存放在美国典型培养物保藏中心(ATCC)，Rochville，MD，保藏号为ATCC55743。
微生物伯氏致病杆菌的培养可得到生物活性物质xenomins、xenorxides和二硫杂环戊烯并吡咯酮。例如，可以将伯氏致病杆菌在约25℃、深层有氧条件下，在含水营养培养基中进行培养(发酵)，这种培养基含有可同化的碳(碳水化合物)源和氮源，从而得到xenomins、xenorxides和二硫杂环戊烯并吡咯酮。这种发酵可进行长达约48-96小时，最终形成这些化合物，而且可从发酵培养基中分离这些化合物，然后纯化。
发酵完成后，可以将被发酵的肉汤进行过滤或离心，通过加入盐酸将滤液的pH调至7.0，或者保持原状。然后用不与水混合的有机溶剂提取这种滤液，例如用乙酸乙酯或氯仿提取这种滤液。在真空(如约30℃)下，可将被结合的有机层(如混合乙酸乙酯或氯仿提取物)浓缩成一种油状残余物。可将这种油状残余物与少量有机溶剂混合，并在硅胶柱上进行层析。采样后，可将氯仿或其它有机溶剂用于洗脱该生物活性部分。通过高效液相层析(HPLC)、用有机和/或含水溶液可进一步纯化这种生物活性部分。
常规的培养中，由伯氏致病杆菌所产生的主要化合物是二硫杂环戊烯并吡咯酮，而xenorxides和xenomins的形成量相对较少。或者，可通过化学方法和/或两种方法的结合从其它微生物中制备二硫杂环戊烯并吡咯酮。
通过生物或化学方法可分别将相应二硫杂环戊烯并吡咯酮的一氧化物和二氧化物即xenorxides和xenomins从其相应的二硫杂环戊烯并吡咯酮衍生物中转化，而相应的二硫杂环戊烯并吡咯酮是从伯氏致病杆菌分离的。采用生物方法，可以将伯氏致病杆菌的培养肉汤进行过滤或离心，这种肉汤存在有相应的二硫杂环戊烯并吡咯酮衍生物。可以将无细胞滤液与空气长时间接触一周至一个月，同时在室温或其它温度下搅拌或不搅拌。这种方法可使所有或部分相应的二硫杂环戊烯并吡咯酮衍生物氧化成xenomins和xenorxides。用化学方法氧化相应的二硫杂环戊烯并吡咯酮衍生物可获得xenorxides和xenomins。可在丙酮和水的混合物中将纯二硫杂环戊烯并吡咯酮衍生物或其混合物溶解，然后可在混合物中加入氧化剂如过一硫酸钾和碳酸氢钾。令该混合物反应几分钟至1小时以上。使反应混合物与水混合，并用有机溶剂提取。将提取物合并、干燥，并通过柱层析或高效液相层析纯化，从而得到相应的xenorxides和xenomins。从不同的微生物中可得到二硫杂环戊烯并吡咯酮的另外的一氧化物和二氧化物，并可通过化学合成和/或通过生物方法和化学方法的结合而制备，并且有几个实例已经公开了(Takahashi，等，1995；Fujimoto，等，1996)。
本发明的化合物包括二硫杂环戊烯并吡咯酮、其相应的一氧化物如xenomins、其相应的二氧化物如xenorxides及其盐。本文所用的术语“盐”是指酸性和/或碱性盐，其是由无机和/或有机酸和碱形成的，适合的酸包括如盐酸、硫酸、硝酸、苯磺酸、乙酸、马来酸、酒石酸等，这些酸都是药物上可接受的。对于本领域技术人员来说，众所周知是根据物理和化学稳定性、可流动性、吸湿性和溶解性来选择适合的盐。优选药学上可接受的盐，尤其是当本发明化合物用作药物时，可用于加工这些化合物、或者非药物型用途的其它盐也可考虑。抗肿瘤剂及其用途。
本发明涉及含有这些化合物的活性成分或其药物上可接受的盐的药物制剂。本领域技术人员可选择剂型、给药方式和剂量。成人的典型日剂量为约2.5mg-约2,000mg/天。对哺乳动物人可以例如口服、非肠道或局部给药。
当这些化合物或其盐用来治疗时，可以将它们单独给药，或者以药物上适合的制剂形式给药，该制剂除含有活性成分外，还含有一种或多种常见载体。根据疾病的性质和/或给药途径，本发明组合物可通过已知方法配制。
药物组合物的实例包括任何适合于口服、局部或非肠道给药的固体(片剂、丸剂、胶囊、颗粒剂、粉剂等)或液体(溶液、悬浮液或乳剂)组合物，它们可含有纯化合物、或其盐、或与任何载体或其它药物活性化合物相结合。这些组合物经非肠道给药时应是无菌的。
使用本技术领域能够获得的药物物质可以很容易将用作治疗动物和人的疾病的抗肿瘤剂的本发明治疗组合物制备成这种单位剂型，也可通过常规方法制备。可以选择适合的固体或液体赋形剂或稀释剂，用本领域技术人员已知的方法制备本组合物。使用国家癌症研究会(NCI)的公认方案，给予任何本发明化合物和/或其具有药理活性的和生理学上相容的衍生物，都可用于对患有肿瘤疾病的动物或人进行治疗，这些疾病例如结肠癌、宫颈(cevercal)癌、乳腺癌、白血病、肺癌、卵巢癌、中枢神经系统癌、肾癌、前列腺癌等。给药剂量是根据肿瘤疾病的特性、所涉及的患者的类型，包括年龄、健康和体重、同时进行的治疗类型以及治疗次数和治疗率来确定。举例来说，所给予的活性成分的剂量为：按患者每kg体重计，静脉内0.1-约200mg/kg；肌肉内1-约500mg/kg；和口服5-约1000mg/kg。以浓度表示，本发明组合物中活性成分的浓度含量为：局部使用时，活性成分占组合物的约0.01-约50％w/w，优选约1-约20％w/w；非肠道给药时，活性成分占组合物的约0.05-约50％w/v，优选约5-约20％w/v。使用本技术领域能够获得的药物物质可以很容易将用作抗肿瘤剂的本发明活性成分制备成这种单位剂型，也可通过常规方法制备。实施例1.xenorxides、xenomins和二硫杂环戊烯并吡咯酮的制备A.选择性二硫杂环戊烯并吡咯酮的制备。
迄今为止，已报道了几种二硫杂环戊烯并吡咯酮，包括金丝菌素、硫藤黄菌素、全霉素xenorhabdins和thiomarinol。金丝菌素最初是由Umezawa等(1948)报道的，由Celmer和Solomons(1955)将其结构完全公开。硫藤黄菌素是由几个菌种制成的，这些菌种包括灰肉色链轮丝菌，它可从美国曲型培养物保藏中心(ATCC)，Rockville，MD获得，保藏号为ATCC33049。通过化学合成的硫藤黄菌素和全霉素已由Schmidt和Geiger(1962)，Hagio，K.和Yoneda，N.(1974)和Stachel，H.D.等(1992)公布。xenorhabdins的制备已经有报道，并且Mclnerney等(1991)和Li等(1995)已做了全面报道。其它带有二硫杂环戊烯并吡咯酮环的另外不同化合物的制备最近由Baggaley等(1994a，b)和Takahashi等(1994)公开。可通过引用的参考文献中所述的方法来制备用于本发明的二硫杂环戊烯并吡咯酮，并根据NMR光谱确定每种二硫杂环戊烯并吡咯酮衍生物的结构。熟练的药剂师能应用本文所述的方法，另外，能从可得到的现有物质获得这些二硫杂环戊烯并吡咯酮。在实现这些操作时，本领域技术人员可以采用任何适合的过滤、层析和其它纯化技术。对于本领域这些技术人员来说，显然实现这些操作的物质和试剂能从化学公司买到，因此不对有关细节进行描述。B.通过微生物发酵由二硫杂环戊烯并吡咯酮制备相应的二氧化物。
Xenorxides：在25℃将伯氏致病杆菌的培养物在Eberbach转动摇床上以180rpm摇动24小时。在2,000ml烧瓶中，将100ml这种细菌培养物加入900ml胰蛋白酶大豆肉汤中，开始细菌发酵。在25℃将此烧瓶置于转动摇床上进行避光培养。96小时后，立即将培养物离心(12,000g，20分钟，4℃)以制备细菌细胞。然后用乙酸乙酯提取该无细胞肉汤4次。用无水硫酸钠干燥这些混合提取物，再通过滤纸过滤。在30℃以下、真空中将滤液在旋转式蒸发器上进行浓缩，得到棕色油状物。重复上述实验10次后，得到大约3g油状物。然后将粗提取物加装在硅胶(200g硅胶60，40cm×5cm，EM Sinence，Darmstadt，德国)色谱柱上。用乙醚或乙酸乙酯洗脱出黄色的生物活性部分。然后将这种生物活性部分在C18制备柱(Spherisorb 10(ODS(1))，250×10mm，10micro，Phenomenex，Torrance，CA)上以2.5ml/分、按程序(在水中的10％乙腈中等度5分钟，然后在35分钟内逐渐增加至85％乙腈，等度5分钟，再在2分钟内减回到10％)进行HPLC。在254nm监测洗脱物。33.6分钟时洗脱出XENORXIDE 1(约0.3mg/l培养肉汤)，此后在35.2分钟时洗脱出XENORXIDE 2(约0.2mg/l)。C.通过微生物发酵由二硫杂环戊烯并吡咯酮制备相应的一氧化物。
Xenomins：为了纯化xenomins，培养和提取的条件与xenorxides相同。提取后，用乙酸乙酯作为洗脱液，通过硅胶层析柱处理被浓缩的粗提取物。洗脱出极性较小的生物活性物质后，用甲醇洗脱可得到极性较大的生物活性部分。在真空下浓缩该极性较大的生物活性部分，再通过C18层析柱分离，首先用水作为洗脱液，然后用含水的25％甲醇、50％甲醇、75％甲醇，最后用纯甲醇。大多数生物活性部分是用含水的75％甲醇洗脱。然后将此生物活性部分浓缩，并在C18制备柱(Spherisorb 10(ODS(1))，250×10mm，10micro，Phenomenex，Torrance，CA)上以2.0ml/分、按程序(在水中的30％MeCN中等度1分钟，然后在24分钟内逐渐增加至70％MeCN，等度5分钟)进行HPLC。在254nm监测洗脱物。收集活性峰1(25.4分钟)和峰2(25.8分钟)。浓缩活性峰1，并用二氯甲烷中的60％乙酸乙酯作为洗脱液、通过制备硅胶TLC进一步分离，从而得到xenomin 1(Rf＝0.32)。浓缩活性峰2，并用二氯甲烷中的60％乙酸乙酯作为洗脱液、通过制备硅胶TLC进一步分离，从而得到xenomin 2(Rf＝0.31)。D.通过生物转化由其相应的二硫杂环戊烯并吡咯酮衍生物制备xenorxides。
用上述同样的方法得到无细胞肉汤，然后在4℃至室温下贮存3-6周。再用乙酸乙酯提取该含水肉汤，用上述同样的方法分离混合提取物。在33.6分钟时洗脱出XENORXIDE 1(2mg/l)，在35.2分钟时洗脱出XENORXIDE 2(1.5mg/l)。E.通过化学氧化由二硫杂环戊烯并吡咯酮制备相应的二氧化物。
将152mg 6-(己酰氨基)-4-甲基-4，5-二氢-1，2-二硫杂环戊烯并(dithiolo)[4，3-b]吡咯-5-酮(XN1)溶解在20ml丙酮和15ml水的混合物中，然后用冰将其冷却至0℃。在0℃时将过一硫酸钾(510mg)加入该溶液中。将反应混合物在0℃搅拌1小时。然后在0℃下将5ml碳酸氢钾的饱和溶液加入反应混合物中，同时连续搅拌半小时。加入水后，用乙酸乙酯提取该反应混合物3次。合并这些提取物，在Na2SO4上干燥，蒸发得到粗产物，然后用己烷∶乙酸乙酯(2∶1)、经硅胶柱层析进一步纯化，从而得到纯xenorxide 1(78mg，51％产率)。与此类似，由6-(5’-甲基己酰氨基)-4，5-二氢-1，2-二硫杂环戊烯并[4，3，-b]吡咯-5-酮可制备xenorxide 3，产率为50％。实施例2.活性成分的鉴定
在Bruker WM400分光计上于CDCl3中记录NMR光谱，用残余的CDCl3(～7.25)作为内标。在以70eV操作的Hewlett-Packrad 5985B GC/MS系统上，使用同向探针得到低分辨质谱。在Kratos MS80仪器上记录高分辨质谱。用Perkin-Elmer 599B分光计将红外光谱记录为在Nacl上的净膜。(所使用的缩写如下：EI＝电子碰撞，M＝分子离子，t＝三重峰，J＝偶联常数，Hz＝赫兹，d＝双峰，m＝多重峰，bs＝宽峰)。
6-(乙酰氨基)-4-甲基-4，5-二氢-1，2-二硫杂环戊烯并[4，3，-b]吡咯-5-酮(硫藤黄菌素)(XN0)：1HNMR(DMSO-d6)δ2.05(3H，s)，3.92(3H，s)，7.19(1H，s)和9.85(1H，宽峰)；EIMS m/e228(M-)，186.
6-(己酰氨基)-4-甲基-4，5-二氢-1，2-二硫杂环戊烯并[4，3，-b]吡咯-5-酮(XN1)：1HNMR(CDCl3)δ0.90(3H，t，J＝6.9Hz)，1.35(4H，m)，1.70(2H，m)，2.35(2H，t，J＝74Hz)，3.35(3H，s)，6.63(1H，s)和7.43(1H，宽峰)；EIMS m/e 284(M+)，186.
6-(5’-甲基己酰氨基)-4，5-二氢-1，2-二硫杂环戊烯并[4，3，-b]吡咯-5-酮(XN3)：1HNMR(CDCl3)δ0.89(6H，d，J＝6.6Hz)，1.24(3H，m)，1.70(2H，m)，2.32(2H，t，J＝76Hz).6.74(1H，s)，7 44(1H，宽峰)和7.94(1H，宽峰)；EIMS m/e 284(M+)，172
XENORXIDE 1(XO1)：EIMS：317(2)，316(M+，13)，220(9)，219(9)，218(100)，186(23)，154(16)，99(40)，71(39)；HRMS：316.0555(C12H16N2O4S2的计算值：316.0551，20)，217.9824(C6H6N2O3S2的计算值：217.9820，100)，154.0197(C6H6N2OS的计算值：154.0201，16)；IR(KBr)：3448，3298，3275，1720，1686，1654，1637，1560，1522，1310，1139，551cm-1；1HNMR(CDCl3)δ：7.56(1H，bs，CO-NH)，6.35(1H，s，H-3)，3.20(3H，s，N-Me)，2.38(2H，t，CO-CH2，J＝7.4Hz)，1.67(2H，m，CH2)，1.32(4H，m，CH2CH2)，0.89(3H，t，J＝7.0Hz)；13CNMR(CDCl3)δ：171.6(s，CON)，164.7(s，CO)，145.4(s，C7)，121.3(s，C6)，116.2(s，C8)，109.2(d，C3)，36.4，31.2，27.8，24.6，22.3，13.8.
XENORXIDE 2(XO2)：EIMS：330(M+，10)，218(100)；HRMS：330.0707(C13H18N2O4S2的计算值：330.0708，18)，217.9829(C6H6N2O3S2的计算值：217.9820，100)，154.0213(C6H6N2OS的计算值：154.0201，16)；IR(KBr)：3438，3298，1719，1686，1654，1637，1560，1522，1400，1310，1142，551cm-1；1HNMR(CDCl3)δ：7.56(1H，bs，CO-NH)，6.35(1H，s，H-3)，3.20(3H，s、N-Me)，2.36(2H，t，CO-CH2，J＝7.4Hz)，1.67(2H，m，CH2)，1.2-1.6(1H，m，CH)，1.22(2H，m，CH2)，0.89(6H，d，J＝6.6Hz)；不同的NOE实验显示了6.35ppm与3.20ppm的峰值之间的NOE作用；13CNMR(CDCl3)δ：171.6(s，CON)，164.7(s，CO)，145.4(s，C7)，121.3(s，C6)，116.2(s，C8)，109.2(d，C3)，38.2(t，CH2)，36.7(t，CH2)，28.0(q，CH3)，27.8(d，CH)，22.8(t，CH2)，22.4(q，CH3)
XENORXIDE 3(XO3)：EIMS：316(M+，7.5)，218(9)，204(65)185(7)，172(15)，105(25)，95(95)，69(100)，43(70)；1HNMR(CDCl3)δ：10.10(1H，bs)，9.32(1H，bs)，6.85(IH，s，H-3)，2.53(2H，t，CO-CH2，J＝7.5Hz)，1.66(2H，m，CH2)，1.58(1H，m)，1.2I(2H，m，)，0.87(6H，d，J＝6.6Hz).
Xenomin 1(XM1)：EIMS：300(M+，13)，202(36)，186(44)，185(41)，85(62)，69(100)；HRMS：300.0605(C12H16N2O3S2的计算值：300.0602，12)，201.9871(C6H6N2O2S2的计算值：201.9871，30)；1HNMR(CDCl3)d：7.52(1H，bs，CO-NH)，6.46(1H.s，H-3).3.30(3H，s.N-Me).2.49(2H，t，CO-CH2，J＝7.4Hz)，1.79(2H，m.CH2)，1.41(4H，m，CH2-CH2)，0.90(3H，t，J＝6.9).
Xenomin 2(XM2)：EIMS：314(M+，21)，218(15)，202(59)，187(18)，186(98)，185(73)，69(100)；HRMS：314.0759(C13H18N2O3S2的计算值：314.0759，12)，201.9871(C6H6N2O2S2
的计算值：201.9871，45)；1HNMR(CDCl3)d：7.43(1H，bs，CO-NH)，6.46(1H，s，H-3)，3.30(3H，s，N-Me)，2.48(2H，t，CO-CH2，J＝7.6Hz)，1.71(2H，m，CH2)，1.29(3H，m，CH和CH2)，0.88(6H，d，J＝7.0).实施例3.用作抗肿瘤剂的二硫杂环戊烯并吡咯酮、相应的一氧化物和二氧化物。
可以通过标准测定法来证实一种特殊化合物的抗癌活性。美国国家癌症研究会(NCI)通常使用的、用于证明一种化合物的功效的方法是依据LC50。LC50是指该化合物杀死半数癌细胞种群的浓度。本领域技术人员通常使用这种测定法，并且可表示在哺乳动物中的抗癌活性。试验动物的癌细胞可从ATCC、NCI和其它组织得到。使用稍做修改的标准NCI方法、在各种人的癌细胞的细胞培养物中已测定了本发明化合物的抗癌活性(见下表)。Skehan等(1990)对该方法进行了说明。简言之，使癌细胞在含谷氨酰胺和10％胎牛血清的RPMI-1640培养基中生长，并从指数期维持培养基中收获癌细胞。对被收获的细胞进行计数，并将其分散在体积为180μl的复制式96孔培养盘中，其中每一孔的细胞密度多达2,500细胞/孔。在37℃将这些细胞沉降约4小时。然后将20μl含有这种试验化合物的培养基加入每一孔中，得到适合的最终试验化合物的浓度。然后将此试验盘在37℃培养。在每一孔中加入到50μl 50％冷三氯乙酸中培养后，终止该试验。将细胞在4℃固定1小时，然后用自来水冲洗5次。风干被冲洗的盘，并用溶解在1％乙酸中的0.4％(wt/体积)sulforhodamine B(SRB)染色30分钟。染色结束时，去除SRB，用1％乙酸将盘快速漂洗5次。漂洗后，将盘风干，在每一孔中加入100μl 10mM三碱(tris base)(pH 10.5)以溶解与细胞结合的染料。将盘置于转动摇床上并摇动(100rpm)10分钟。最后，将盘在570nm用微量滴定板读数器进行读数。所有试验的化合物对这些癌细胞都具有很强的抗肿瘤活性(见下表)。
抗肿瘤活性：
                                    LC50(10-6M)
癌细胞   XN0   XN1   XN3   XO1  XO2  XM1  XM2
HT29   0.13   0.11   0.11   0.22  0.85  0.47  0.11
MCF-7   0.35   0.56   0.39   0.89  0.95  0.47  0.55
Hela   0.31   0.46   0.32   0.16  0.13  0.80  0.21
P388   -*   -   -   0.66  0.28  -  -
NCl-H460   -   -   0.03   0.28  0.22  -  -
Sk-Mel-28   -   -   0.24   0.19  0.73  -  -
LNCap   -   -   -   0.54  0.19  -  -
DU-145(前列腺)   -   -   0.14   1.80  1.60  -  -
UO-31(肾癌)   -   -   0.18   1.85  6.0  -  -
SF-295(CNS癌)   -   -   0.04   1.58  2.12  -  -
*未试验。
从前面的实施方案和实施例显然可以看出本文已经对发明进行了描述和举例说明。虽然上面的说明包含许多特殊性，但不应将这些看作是对本发明范围的限定，而应视为优选的实施方案。因此，我们不应该根据所例举的实施方案来确定本发明的保护范围，而应根据所附的权利要求书及其合法的等同要求来决定。引用的参考文献1.Akhyrst，R.J.和N.E.Boemare，1988.《基因微生物杂志》134卷，1835-1845。2.Amold，J.T.等，1995.《癌症研究》55：537-543。3 Baggaley，K.H.等，1994a.WO 94/26750。4 Baggaley，K.H.等，1994b.WO 94/28001。5.Celmer，W.D.和I.A.Solomons 1995.《美国化学会杂志》77：2861-2865。6.Eisenman，W.等，1953.《抗生素和化疗》3：385-392。7.Forst，S.和K.Nealson，1996.《微生物研究》60：21-43。8 Fujimoto，K.等，1996.WO 96/23795。9.Hagio，K.和Yoneda，N.1974.《日本化学会公报》47：1484-1489。10.Jimenez，A.等，1973.《抗微生物剂化疗》729-738。11.Li，等，1995.《环境微生物应用》61：4329-4333。12.Li，J.等，1995.《天然产物杂志》58：1081-1085。13.Mclnerney，B.V.等，1991.《天然产物杂志》54：774-784。14.Menta R.G.和R.C.Moon，1991.《抗癌研究》11：593-596。15.Monks等，1991.《国家癌症研究会杂志》83：757-766。16.Ninomiya，Y.T.等，1980.《化学药物公报》28：3157-3162。17.Sharma，S.等，1994.《癌症研究》54：5848-5855。18.Shroeder等，1981.《医药化学杂志》24：1078-1083。19.Shehan，P.等，1990.《国家癌症研究会杂志》82：1107-1118。20.Stachel，H.D.等，1992.《Liebigs化学年刊》473-480。21.Takahashi S.等，1994.美国专利5,292,892。22.Takahashi S.等，1995.美国专利5,399,711。23.Tipper D.J.1973.《细菌学杂志》116：245-156。24.Umezawa，H.等，1948.《日本医学杂志》1：512-517。25 Webster等，WO：96/32396。26.von Daehne，W.等，1969.《抗生素杂志》22：233-235。

Claims (18)

1.一种用于治疗肿瘤疾病的药物组合物，它包括具有下列结构式的化合物或其药物上可接受的盐，以及药物载体或稀释剂，
Figure A9881032800021
其中R1＝氢、取代或未取代的烷基、环烷基、芳基、芳烷基或杂环基；R2＝氢、取代或未取代的烷基、环烷基、芳基、芳烷基或杂环基，酰基；R3＝氢、烷基、环烷基、芳烷基、芳基或杂环基。
2.一种用于治疗肿瘤疾病的药物组合物，它包括具有下列结构式的化合物或其药物上可接受的盐，以及药物载体或稀释剂，
Figure A9881032800022
其中R1＝氢、取代或未取代的烷基、环烷基、芳基、芳烷基或杂环基；R2＝氢、取代或未取代的烷基、环烷基、芳基、芳烷基或杂环基，酰基；R3＝氢、烷基、环烷基、芳烷基、芳基或杂环基。
3.一种用于治疗肿瘤疾病的药物组合物，它包括具有下列结构式的化合物或其药物上可接受的盐，以及药物载体或稀释剂，
Figure A9881032800031
其中R1＝氢、取代或未取代的烷基、环烷基、芳基、芳烷基或杂环基；R2＝氢、取代或未取代的烷基、环烷基、芳基、芳烷基或杂环基，酰基；R3＝氢、烷基、环烷基、芳烷基、芳基或杂环基。
4.一种用于治疗肿瘤疾病的药物组合物，它包括权利要求1所述的化合物或其药物上可接受的盐，以及药物载体或稀释剂，其中R1＝氢；R2＝酰基；R3＝氢、甲基。
5.一种用于治疗肿瘤疾病的药物组合物，它包括权利要求2所述的化合物或其药物上可接受的盐，以及药物载体或稀释剂，其中R1＝氢；R2＝酰基；R3＝氢、甲基。
6.一种用于治疗肿瘤疾病的药物组合物，它包括权利要求3所述的化合物或其药物上可接受的盐，以及药物载体或稀释剂，其中R1＝氢；R2＝酰基；R3＝氢、甲基。
7.一种用于治疗肿瘤疾病的药物组合物，它包括权利要求1所述的化合物或其药物上可接受的盐，以及药物载体或稀释剂，其中R1＝氢；R2＝具有直链或支链的1-10个碳链的酰基；R3＝氢或甲基。
8.一种用于治疗肿瘤疾病的药物组合物，它包括权利要求2所述的化合物或其药物上可接受的盐，以及药物载体或稀释剂，其中R1＝氢；R2＝具有直链或支链的1-10个碳链的酰基；R3＝氢或甲基。
9.一种用于治疗肿瘤疾病的药物组合物，它包括权利要求3所述的化合物或其药物上可接受的盐，以及药物载体或稀释剂，其中R1＝氢；R2＝具有直链或支链的1-10个碳链的酰基；R3＝氢或甲基。
10.一种抑制哺乳动物肿瘤生长的方法，它包括对需要这种治疗的患者施用有效抗肿瘤量的下面所示结构式的化合物或其药物上可接受的盐，以及药物载体或稀释剂，
Figure A9881032800041
其中R1＝氢、取代或未取代的烷基、环烷基、芳基、芳烷基或杂环基；R2＝氢、取代或未取代的烷基、环烷基、芳基、芳烷基或杂环基，酰基；R3＝氢、烷基、环烷基、芳烷基、芳基或杂环基。
11.一种抑制哺乳动物肿瘤生长的方法，它包括对需要这种治疗的患者施用有效抗肿瘤量的下面所示结构式的化合物或其药物上可接受的盐，以及药物载体或稀释剂，
Figure A9881032800042
其中R1＝氢、取代或未取代的烷基、环烷基、芳基、芳烷基或杂环基；R2＝氢、取代或未取代的烷基、环烷基、芳基、芳烷基或杂环基，酰基；R3＝氢、烷基、环烷基、芳烷基、芳基或杂环基。
12.一种抑制哺乳动物肿瘤生长的方法，它包括对需要这种治疗的患者施用有效抗肿瘤量的下面所示结构式的化合物或其药物上可接受的盐，以及药物载体或稀释剂，
Figure A9881032800051
其中R1＝氢、取代或未取代的烷基、环烷基、芳基、芳烷基或杂环基；R2＝氢、取代或未取代的烷基、环烷基、芳基、芳烷基或杂环基，酰基；R3＝氢、烷基、环烷基、芳烷基、芳基或杂环基。
13.一种抑制哺乳动物肿瘤生长的方法，它包括对需要这种治疗的患者施用有效抗肿瘤量的权利要求10所述的化合物或其药物上可接受的盐，以及药物载体或稀释剂，其中R1＝氢；R2＝酰基；R3＝氢、甲基。
14.一种抑制哺乳动物肿瘤生长的方法，它包括对需要这种治疗的患者施用有效抗肿瘤量的权利要求11所述的化合物或其药物上可接受的盐，以及药物载体或稀释剂，其中R1＝氢；R2＝酰基；R3＝氢、甲基。
15.一种抑制哺乳动物肿瘤生长的方法，它包括对需要这种治疗的患者施用有效抗肿瘤量的权利要求12所述的化合物或其药物上可接受的盐，以及药物载体或稀释剂，其中R1＝氢；R2＝酰基；R3＝氢、甲基。
16.一种抑制哺乳动物肿瘤生长的方法，它包括对需要这种治疗的患者施用有效抗肿瘤量的权利要求10所述的化合物或其药物上可接受的盐，以及药物载体或稀释剂，其中R1＝氢；R2＝具有直链或支链的1-10个碳链的酰基；R3＝氢或甲基。
17.一种抑制哺乳动物肿瘤生长的方法，它包括对需要这种治疗的患者施用有效抗肿瘤量的权利要求11所述的化合物或其药物上可接受的盐，以及药物载体或稀释剂，其中R1＝氢；R2＝具有直链或支链的1-10个碳链的酰基；R3＝氢或甲基。
18.一种抑制哺乳动物肿瘤生长的方法，它包括对需要这种治疗的患者施用有效抗肿瘤量的权利要求12所述的化合物或其药物上可接受的盐，以及药物载体或稀释剂，其中R1＝氢；R2＝具有直链或支链的1-10个碳链的酰基；R3＝氢或甲基。
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