CN1276255C - 肾病检查试剂以及检查肾病及其组分的方法 - Google Patents

Abstract

提供一种简便的肾病的检查手段。着眼于与肾病相关的尿中脂肪球和椭圆形脂肪体含有的脂肪颗粒，发现这些脂肪颗粒含有的脂蛋白或其类似物、或者其中含有的成分的量显著提示与肾病的相关性，从而完成了本发明的肾病的检查手段。

Description

肾病检查试剂以及检查肾病及其组分的方法

技术领域

本发明涉及肾病的检查，涉及测定尿中的脂蛋白或其类似物或者其中含有的成分的检查手段。

背景技术

尿沉渣中含有的成分有来源于肾的成分、由尿路混入的成分以及在尿中析出的结晶性成分等多种。检测沉渣的种类、量对于鉴别肾、尿路疾病以及获知其程度是非常重要的。这种检测通常通过利用染色法的镜检进行。另外，已经公开指明检测尿中巨噬细胞的表面抗原，可以诊断IgA肾病的病态(临床检查，42卷，588～590，1998)，通过尿沉渣脂肪染色鉴别尿中脂肪球和椭圆形脂肪体(以下有时也简称为脂肪体)，可以检查肾病(检查与技术，26卷，441-446，1998)。

而且，已经公开了尿中出现的大型巨噬细胞是白血球的表面抗原CD14为阴性，25F9为阳性，通常的巨噬细胞是CD14为阳性，25F9为阴性，存在较大的差异，而且大型巨噬细胞属于脂肪球、椭圆形脂肪体，并指出对其进行测定作为肾病的检查是有用的(临床病理，47卷，73，1999)。

但是，这些测定均通过利用染色的镜检、使用单克隆抗体利用荧光标识免疫染色的镜检或流式流式细胞计等进行。采用这些方法，由于对每1个检体通过镜检或流式流式细胞计等进行检查，操作烦杂且难以进行多数检体的测定。

发明公开

本发明的目的在于提供一种肾病的简便的检查手段。

本发明人等认为通过微量胆固醇(mCHO)能够测定上述大型巨噬细胞，测定mCHO后，发现存在即使大型巨噬细胞为低水平，mCHO的值也很高的检体。另外，出现脂蛋白的患者其疾病发展迅速，转成肾衰的概率高。因此反复悉心研究，结果发现脂蛋白或其类似物、或者其中含有的成分，特别是Apo蛋白质的量显著提示了与肾病的相关性，从而完成了本发明的肾病的检查手段。

也就是说，本发明包括：

1、肾病的检查手段，其特征在于，测定尿中的脂蛋白或其类似物、或者它们中含有的成分。

2、如上述第1项所述的检查手段，其特征在于，脂蛋白或其类似物是含有抗人ApoA-I抗体能够反应的蛋白质或抗人ApoA-II抗体能够反应的蛋白质中任意1方或双方的物质。

3、如上述第1项或第2项所述的检查手段，其特征在于，脂蛋白或其类似物是高密度脂蛋白或其类似物。

4、如上述第1～3项中任意一项所述的检查手段，其特征在于，测定作为脂蛋白或其类似物中含有的成分的Apo蛋白质。

5、如上述第1～4项中任意一项所述的检查手段，其特征在于，测定作为脂蛋白或其类似物中含有的成分的，从抗人ApoA-I抗体能够反应的蛋白质或抗人ApoA-II抗体能够反应的蛋白质中选择的1方或双方。

6、肾病的检查手段，其特征在于，测定尿中的白细胞的表面抗原。

7、如上述第1～6项中任意一项所述的检查手段，其特征在于，进一步测定尿中的脂质成分。

8、如上述第7项所述的检查手段，其特征在于，脂质成分为胆固醇。

9、一种检查用试剂，将上述第1～8项中任意一项所述的检查中所必要的试剂制成试剂盒，或者由单品构成。

附图说明

图1是表示尿中脂质相关标识物(油红阳性粒子)与疾病的关系的图。(实施例3)

图2是表示尿中脂质相关标识物(游离胆固醇)与疾病的关系的图。(实施例3)

图3是表示尿中脂质相关标识物(ApoA-I)与疾病的关系的图。(实施例3)

图4是表示尿中脂质相关标识物(磷脂)与疾病的关系的图。(实施例3)

图5是表示尿中脂质相关标识物(总胆固醇)与疾病的关系的图。(实施例3)

图6是表示胆固醇标准品的HPLC分析结果的图。(实施例5)

图7是表示浓缩正常尿的HPLC分析结果的图。(实施例5)

图8是表示肾病患者尿的HPLC分析结果的图。(实施例5)

图9是表示肾病患者治疗前、治疗后尿中的mCHO和血清中的肌酸酐测定值的图。(实施例6)

图10是表示肾病患者治疗前、治疗后尿中的mCHO和尿中N-乙酰基β-D-葡糖胺酶的测定值的图。(实施例6)

图11是表示肾病患者治疗前、治疗后尿中的mCHO和尿中蛋白质的测定值的图。(实施例6)

图12是表示肾病患者治疗前、治疗后尿中的mCHO和尿中白蛋白的测定值的图。(实施例6)

图13是表示肾病患者治疗前、治疗后尿中的mCHO和尿中ApoA-I的测定值的图。(实施例6)

符号的说明

(对于图1～5)

1：IgA肾病

2：糖尿病性肾病

3：肾小球硬化症

4：膜性肾病

5：膜性增殖性肾小球肾炎

6：急进性肾病

7：微小变化型肾变病综合症

8：灶性肾小球硬化症

9：慢性肾衰

10：正常

(对于图9～13)

●：对ApoA-I阴性患者的测定值

○：对ApoA-I阳性患者的测定值

发明的最佳实施方式

本发明是肾病的检查手段，其特征在于，测定尿中的脂蛋白或其类似物、或者它们中含有的成分。其中，手段是指用于实现目的的方法和/或介质。

也就是说，本发明的肾病的检查手段通过测定尿中的脂蛋白或其类似物、或者它们中含有的成分实现。而且，还提供一种肾病的检查手段，其特征在于除上述物质以外，还测定尿中的脂质成分。

作为尿中的脂质成分，以脂肪滴、脂肪体和/或脂肪球中含有的物质以及高密度脂蛋白样(HDL样)的脂蛋白为主要测定对象。特别是新发现了在肾病中，尿中出现HDL样脂蛋白。在血清中，脂质作为脂蛋白存在，但是在尿中大多形成用显微镜才可以看见的粒子(脂肪滴、脂肪体和/或脂肪球)。对于这些形成不溶性的脂肪块的物质，在本发明中对于其脂质成分量可以采用酶反应进行定量。

(对象脂蛋白或其类似物、或者它们中含有的成分)

本发明中，主要作为测定对象的尿中脂蛋白或其类似物、或者它们中含有的成分如下所述。

含有一定比例的脂质和蛋白质的复合体称为脂蛋白，例如乳糜微粒、VLDL、IDL、LDL、HDL等，但并不限于此。脂质成分与下述(作为对象的脂质成分)记载的内容几乎相同，主要可以例举胆固醇、三酰甘油、磷脂、游离脂肪酸等。由于这些脂质的一部分疏水性非常强，形成称为脂蛋白的特殊结构体，在表面配置称为Apo蛋白质的特殊蛋白质。Apo蛋白质在确定脂蛋白的结构方面显示出重要的作用，同时在脂蛋白代谢方面也发挥重要的功能。

作为各种脂蛋白的主要Apo蛋白质，对于乳糜微粒，已知A-I、B、C-I、II、III作为构成成分，对于VLDL，已知B、C-I、II、III、E作为构成成分，对于IDL，已知B、E作为构成成分，对于LDL，已知B作为构成成分，对于HDL2和HDL3，已知A-I、II作为构成成分。

本发明中脂蛋白的类似物例如电荷不同的类似物、用糖和其它物质修饰的类似物、分子量不同的类似物、氨基酸序列类似的类似物。

本发明中抗人ApoA-I抗体能够反应的蛋白质或抗人ApoA-II抗体能够反应的蛋白质是指除人ApoA-I蛋白质或人ApoA-II蛋白质本身以外，还包括其它与这些蛋白质具有共同的结构，能够与上述抗体反应的蛋白质。

(脂质成分)

本发明中作为测定对象的尿中脂质成分，是选自例如中性脂肪及其衍生物、磷脂及其衍生物、过氧化脂质、固醇类、脂肪酸、脂肪酸盐、脂肪酸酯、脂肪族醇、脂肪族醛、糖脂、鞘脂、前列腺素、类胡萝卜素等中的1种或2种以上脂质成分，使对这些脂质成分作用的酶发挥作用测定其浓度或含量。脂质成分中特别重要的对象是胆固醇类和/或磷脂。

(测定试样的处理)

尿试样可以是尿自身，也可以是将尿离心分离得到的尿沉渣级分或其上清级分。本发明的脂质成分的测定方法不仅能够直接测定尿试样，不需进行任何处理，而且也能够将尿离心分离分级成尿沉渣，测定该级分的脂质成分。

(测定方法)

尿中含有的脂蛋白或其类似物、或者它们中含有的成分的测定可以采用能够检测这些物质的测定方法进行测定，并没有特别的限定。该测定可以不使用表面活性剂，也可以使用表面活性剂。例如测定脂蛋白或其类似物时，优选不使用表面活性剂进行测定，测定其中含有的成分时，优选使用表面活性剂进行测定。

(脂蛋白的测定方法)

脂蛋白的测定可以通过例如HPLC、超离心、利用聚乙二醇的凝集法等将脂蛋白分级，采用重量法测定分级得到的脂蛋白。

(Apo蛋白质的测定方法)

另一方面，关于Apo蛋白质的测定，可以适用能够通过抗原抗体反应进行测定的免疫比浊法、粒子凝集免疫测定法、酶免疫测定法等公知的测定方法，例如对于ApoA-I蛋白质，使用抗ApoA-I蛋白质抗体。作为其他Apo蛋白质的实例，有ApoA-II、ApoB、ApoC、ApoE、ApoLP(a)等。

(表面活性剂的添加)

表面活性剂只要是具有下述作用的物质即可，并没有特别的限定，所述作用包括使尿中的测定对象物溶解或分散达到均一，将测定对象物匀化，以便能够采集尿的任何部分，和/或使之达到通过酶或抗体等能够定量的状态，优选具有使脂肪滴、脂肪体、脂肪球和脂蛋白溶解的作用，能够使其中包含的脂肪成分、蛋白质、不溶性的脂质等溶解、分散、游离达到均一的表面活性剂。另外，也可以单独进行超声波处理，或者将超声波处理和表面活性剂处理组合。

本发明的具体实例中，作为非离子表面活性剂，例如Triton X-100，对此并没有特别的限定。本领域技术人员以本发明公开的结果为基础，通过单纯的实验性重复，进行效果比较，能够选择表面活性剂。除非离子表面活性剂以外，当然也可以适当使用阳离子表面活性剂、阴离子表面活性剂、两性离子表面活性剂或糖苷。而且，通过同时使用2种以上表面活性剂，可以使之更确实地溶解或分散，实现匀化效果。

表面活性剂的添加量一般为0.1～5w/v％，考虑溶解或分散产生的匀化程度，可以适当增量、减量进行选择。作为处理条件的温度、时间等可以通过单纯的实验性重复进行确定。另外，优选作为预处理，预先向尿中添加表面活性剂，使之溶解或分散进行匀化处理。这时，在10～40℃的温度下，处理数秒至数分钟就足够了。当然，该表面活性剂处理也可以与酶反应处理同时进行处理。处理也可以适当进行阶段性处理，更优选在自动化的条件下进行一元处理。

(使用酶的脂质成分的定量)

尿中含有的脂质成分的测定可以采用能够检测尿中脂质成分的测定方法进行测定。尿中的脂质成分与血清中的脂质成分相比仅为约1/1000～1/100，采用血清脂质测定用试剂难以测定。

如上所述通过添加表面活性剂等使之溶解或分散达到匀化后的尿中脂质成分的测定采用使用酶对脂质进行定量的方法，但是其方法只要是公知的方法并没有特别的限定。例如，可以例举HPLC法、气相色谱法、电泳法、化学方法、使用酶的方法。其中，使用酶的方法在操作性、灵敏度等方面优选采用。本发明的脂质成分的测定方法中，象下述具体例所示的那样，利用从催化分解反应、脱氢反应或氧化反应的酶中选择的1种或2种以上酶，能够进行脂质成分的测定。尿中脂质成分与血清中的脂质成分相比仅仅是微量存在，通过使用酶能够高灵敏度地进行测定。

具体而言，作为测定中性脂肪的实例，用脂肪酶将中性脂肪分解成甘油和脂肪酸，通过酶反应测定生成的甘油。通过酶反应测定甘油可以采用下述方法，使甘油激酶和甘油-3-磷酸脱氢酶作用，测定由辅酶NAD转变为NADH的变化速度的方法；使甘油激酶和甘油磷酸氧化酶作用，测定生成的过氧化氢的方法；使甘油激酶和甘油-3-磷酸脱氢酶以及甘油磷酸氧化酶作用，通过环化反应测定甘油的高灵敏度测定法；使甘油脱氢酶作用进行测定的方法等。

测定磷脂时，可以采用下述方法，使磷脂酶和甘油磷酰胆碱二酯酶作用，生成甘油-3-磷酸，与中性脂肪的场合同样测定该甘油-3-磷酸的方法；其他通过酶测定磷脂的公知方法。

测定机体中代表性的固醇即胆固醇已知下述方法，使胆固醇氧化酶作用，生成过氧化氢，通过过氧化物酶测定该过氧化氢的方法；或者使胆固醇脱氢酶作用，测定辅酶NAD向NADH转变的变化速度或变化量的方法；以及同样使用胆固醇脱氢酶，通过使用辅酶NADH和硫代NAD的2种辅酶进行平衡扩增反应，高灵敏度地测定胆固醇的方法(特开平08-70894公报)，在将通过胆固醇氧化酶等转变的氧化型辅酶再生为还原型辅酶的第二脱氢酶的还原型基质存在下，以胆固醇作为基质使之进行环化反应，进行测定的方法(特开平11-18797公报)等。

胆固醇的脂肪酸酯的场合，可以通过使胆固醇酯酶等分解酶作用，转变为游离的胆固醇，按照上述方法进行测定。

脂肪酸的场合，可以采用使脂酰辅酶A合成酶和脂酰辅酶A氧化酶作用，测定生成的过氧化氢的方法。

对于前列腺素，可以使前列腺素脱氢酶作用进行测定。

糖脂的场合，可以使糖脂分解脂酶以及其他脂酶作用，生成甘油进行测定。

鞘脂的场合，也可以使鞘脂分解脂酶作用进行测定。

脂质成分的测定方法并不限于以上例举的方法，可以根据已知的脂质成分的测定方法进行适当的改变、追加。

本发明中，提供将上述本发明的尿中脂蛋白或其类似物、或者它们中含有的成分的测定方法所必要的试剂制成试剂盒，或者由单项产品构成的试剂。本发明的试剂中也可以包含用于使尿中不溶性脂肪溶解或分散达到匀化的表面活性剂、以及用于定量脂质成分的试剂。另外，也可以是使载体中含有测定所必要的试剂的简单型测定用装置。

(肾病的检查手段)

本发明的另一个解决课题的手段是一种肾病的检查手段，其特征在于，将尿中含有的脂蛋白或其类似物、或者它们中含有的成分、脂质成分适当组合，进行测定。以前，用于检查肾病的尿中脂肪球等的检查是通过显微镜所见等繁杂的手段进行。在本发明中，发现采用上述本发明的简便的尿中脂质成分的测定方法得到的尿中含有的脂蛋白或其类似物、或者它们中含有的成分、脂质成分的测定结果显著提示与肾病的相关性，实现了简便的肾病的检查手段。另外，将尿中的上述物质的量分值化，根据分值能够判断受检者的肾病的程度。

本发明的肾病的检查手段中，可以利用上述本发明的尿中的脂蛋白或其类似物、它们中含有的成分、或者脂质成分的测定方法，也可以将其适当组合。作为测定对象的尿中含有的脂质成分，主要包含在尿中的脂肪滴、脂肪体和/或脂肪球、HDL样脂蛋白中。而且，至少以选自中性脂肪及其衍生物、磷脂及其衍生物、过氧化脂质、固醇类、脂肪酸、脂肪酸盐、脂肪酸酯、脂肪族醇、脂肪族醛、糖脂、鞘脂、前列腺素、类胡萝卜素中的1种或2种以上脂质成分作为测定对象。另外，作为脂蛋白或其类似物中含有的成分，除了上述脂质以外，还可以例举抗人ApoA-I抗体可以反应的蛋白质、抗人ApoA-II抗体可以反应的蛋白质、其他Apo蛋白质，可以作为测定的对象。另外，作为脂蛋白或其类似物，也可以是包含脂质和蛋白质的复合体，可以例举乳糜微粒、VLDL、IDL、HDL等及其类似物。

在试验例中，测定了肾病患者的胆固醇值和磷脂值，这些值具有显著性差异，与正常人相比为高值，根据该结果，判断出对尿中含有的脂质成分，至少胆固醇和/或磷脂进行定量，对于肾病的发现是有用的。另外，对肾病患者治疗前后的ApoA-I和各种尿中成分进行了测定。该结果确认治疗后ApoA-I减少，提示对于肾病的诊断有用。

而且，本发明还提供肾病的检查手段，通过测定尿中的脂蛋白或其类似物、或者它们中含有的成分、脂质成分，对其结果进行解析，能够检查肾病，并判断其程度。

本发明还公开下述内容，即为了检查肾病并判断其程度，除了测定上述物质以外，还组合利用测定或检测尿中含有的白细胞的表面抗原的方法。特别是仅对于上述物质显示高值(例如脂质、脂蛋白类和/或Apo蛋白质类的测定结果或其分值)的试样，也可以引入测定或检测尿中含有的白细胞的表面抗原的方法。通过这种组合，能够更好地检查肾病。也就是说，通过将尿中脂质成分的测定与尿中含有的白细胞的表面抗原的测定或检测组合，能够更好地检查肾病并判断其程度。

将尿中的上述物质的测定与尿中含有的白细胞的表面抗原的测定或检测组合检查肾病时，可以将尿的一部分用于上述物质的测定，同时将一部分离心分离分级成尿沉渣级分，通过公知的镜检或者流式流式细胞计等测定检测白细胞的表面抗原，例如CD14、CD16、25F9等。另外，也可以使用尿沉渣级分的一部分，测定上述物质，用残留的一部分通过镜检或流式流式细胞计等检测测定白细胞的表面抗原。而且，也可以将尿的一部分离心分离分级成尿沉渣，测定检测白细胞表面抗原，另一方面使用经过下述步骤得到的尿检体进行测定，所述步骤包括将尿的一部分通过单独或组合利用冷冻融解和/或表面活性剂处理等，破坏尿中的细胞和粒子状物质。

将通过本发明的肾病的检查手段所包含的尿中脂质的测定、尿中脂蛋白类和/或尿中Apo蛋白质类的测定、或者这些测定以及尿中含有的白细胞表面抗原的测定或检测得到的结果随时组合进行解析，能够更好地判断肾病。例如能够以胆固醇和磷脂的比作为指标，也可以将该比值与CD14的测定检测结果组合。尿中含有的白细胞的表面抗原的测定检测结果也可以组合多种结果。

实施例

以下结合实施例进一步说明本发明，但是本发明并不受这些实施例的限定。

实施例1

对于正常人的尿和肾病患者的尿，测定胆固醇浓度。尿预先与10％Triton X-100以9∶1的比例混合，制成尿检体。

胆固醇的测定通过下述方法进行。配制下述组成的2种测定试剂，取尿检体10μL，添加到250μL的试剂-1中，在37℃下反应5分钟后，添加100μL的试剂-2，求出添加后第1分钟至第3分钟在波长415nm处的每1分钟的吸光度变化量，求出胆固醇浓度。

其结果如表1所示。

试剂-1

PIPES                     20mmol/L

KCl                       150mmol/L

Triton X-100              0.3w/v％

胆酸钠                    0.3w/v％

硫代NAD                   1.25mmol/L

牛血清白蛋白              0.1w/v％

胆固醇脱氢酶              3U/ml

胆固醇酯酶                5U/ml

PH                        7.0

试剂-2

CHES                      175mmol/L

Triton X-100              0.3w/v％

胆酸钠                    0.3w/v％

β-NADH                   3.5mmol/L

PH                        9.1

实施例2

对于实施例1配制的尿检体，测定磷脂浓度。磷脂的测定通过下述方法进行。配制下述组成的2种测定试剂，取尿检体10μL，添加到250μL的试剂-1中，在37℃下反应5分钟后，添加100μL的试剂-2，求出添加后第1分钟至第3分钟在波长546nm处的每1分钟的吸光度变化量，求出磷脂浓度。

其结果如表1所示。

试剂-1

HEPES                      50mmol/L

CaCl₂                     1.0mmol/L

Triton X-100               0.2w/v％

甘油-3-磷酸脱氢酶          1.5U/ml

磷脂酶A1                   2.0U/ml

磷脂酶A2                   2.0U/ml

甘油磷酰胆碱磷酸二酯酶     0.6U/ml

NADH                       0.5mM

苯酚                       0.05％

抗坏血酸氧化酶             3U/L

PH                         8.0

试剂-2

磷酸缓冲液                 20mmol/L

甘油-3-磷酸氧化酶          200U/ml

POD                        10U/ml

4-氨基安替比林             2.0mM

PH                         7.5

其结果判断出肾病患者的尿中胆固醇和磷脂浓度与正常人相比其值明显高，提示通过至少测定尿中的胆固醇和/或磷脂，能够检查肾病。

                     表1  正常人与肾病患者的尿中胆固醇和磷脂的测定

尿检体	胆固醇(mg/dL)	磷脂(mg/dL)
			正常人尿	0.07	0.6
肾病患者尿1	1.74	8.7
			肾病患者尿2	0.24	12.8
肾病患者尿3	0.19	1.5
			肾病患者尿4	0.16	8.7

实施例3

测定122例的尿检体(IgA肾病[IgAN]51例、糖尿病性肾病[DMN]10例、肾小球硬化症[Nephroscrelosis]9例、膜性肾病[MN]6例、膜性增殖性肾小球肾炎[MPGN]7例、急进性肾病[RPGN]12例、微小变化型肾变病综合症[MCN]3例、灶性肾小球硬化症[FGS]12例、慢性肾衰[CRF]5例、正常7例)中的磷脂、游离胆固醇、胆固醇、ApoA-I的浓度。

其结果如图1～5所示。判断出这些脂质相关标识物均在上述肾病的任意一种疾病组中显示比正常尿显著高的值，明确了通过测定尿中的脂质成分，能够检查、诊断肾病。另外，还测定了崛田等报道的油红阳性粒子(尿中脂肪球)的个数(5mL中)(Takashi Oda，Osamu Hottaet al.，Kidney International，Vol.53，1190-1200，1998.)。

尿中脂肪球在IgAN、RPGN、FGS中显示特别高的值，但是在MCN等中与正常尿无异。与此相比，采用本发明的方法不仅能够高灵敏度地检测出IgAN、RPGN、FGS，而且也能够高灵敏度地检测出其他肾病，确认了本发明的有用性。

另外，胆固醇的测定采用实施例1所示的方法，磷脂的测定采用实施例2所示的方法，游离胆固醇的测定除了从实施例1所示的试剂-1中除去胆固醇酯酶以外，按照与实施例1同样的操作进行测定。

ApoA-I的测定使用ApoA-I自动·N“第一”进行测定。

尿预先与10％Triton X-100以9∶1的比例进行混合，制成尿检体。除了以尿检体10μL、160μL第一试剂、40μL第二试剂的试剂检体比进行测定以外，按照操作说明书进行操作。

实施例4

使用由定期健康诊断的就诊者采集的尿检体175例，按照实施例1记载的方法测定尿中胆固醇，求出健康正常人的尿中胆固醇的参照值。健康正常人的血清中的胆固醇值通常为130～250ml/dL，而尿中胆固醇的值为血清胆固醇值的1000分之1以下，为0.01～0.25mg/dL。

作为对照，使用市售的血清中胆固醇测定试剂盒进行测定，但是任何检体均不能测定胆固醇。由此可知，尿中胆固醇的测定有必要采用本发明的实施例1记载的方法等高灵敏度测定方法。

实施例5

对于正常人的尿和肾病患者的尿中胆固醇，采用HPLC和电泳进行分析。

(试样的配制)

采用超滤对尿进行浓缩。正常尿浓缩至约130倍，患者尿浓缩至约10倍。

(试验例1：采用HPLC的分析)

柱以串连方式使用Superose 6(直径1.0cm×30cm)以及Superose12(直径1.0cm×30cm)(フアルマシア)。另外，缓冲液使用10mM Tris-HCl buf.pH7.5(含有0.14M NaCl、1.0mM EDTA-2Na、0.1％ NaN₃)，以0.3mL/min的流速进行送液。注入上述配制的试样100μL，另外作为标准品注入血清30μL。按照每2分钟分级，测定各级分的胆固醇浓度。测定按照实施例1所示的方法进行测定。

其结果如图6～8所示。如图6和8所示，肾病患者的尿在与血清HDL级分相同保留时间的位置可以见到峰，因此提示含有与HDL相同分子大小的脂质级分。另外，如图6和图7所示，正常尿在比血清VLDL级分更大的分子大小处具有峰，确认了由细胞的剥离等。

(试验例2：采用电泳的分析)

作为系统使用ヘレナ研究所的コレトリコンボ，使用琼脂糖凝胶进行电泳。

正常和患者尿由原点进行泳动。这意味着没有表面电荷，确认了表面蛋白质的修饰。

肾小球的基底膜通过电荷屏障抑制血中蛋白质等漏出。但是，考虑到HDL由于疾病受到修饰从而丧失电荷，则能够通过基底膜。认为这种修饰大多是以氧化为主要因素，氧化脂蛋白与肾小管上皮细胞接触，显示细胞毒性。

实施例6

(治疗前、治疗后的尿成分的比较)

测定肾病患者(RPGN)治疗前、治疗后尿中的微量胆固醇(mCHO)和尿中成分或血清中的肌酸酐。另外，对尿中的成分进行肌酸酐补正。

胆固醇采用实施例1所示的方法进行测定，ApoA-I的测定采用ApoA-I自动·N“第一”进行，白蛋白采用m-ALB免疫试剂(国际试剂社制)进行测定，蛋白质的测定采用m-TP试剂(国际试剂社制)进行，N-乙酰基β-D-葡糖胺酶(NAG)采用N-分析NAG“ニツトボ-”(日东纺织社制)进行测定，肌酸酐采用CRE试剂·LB“コクサイ”(国际试剂社制)进行测定。

另外，尿预先与20％Triton X-100以50∶1的比例混合。

其结果如图9～图13所示。ApoA-I在治疗后未检测出，但是其他肾病标识物肌酸酐、NAG、TP、ALB即使在治疗后也能检测出，提示ApoA-I能够从与其他标识物不同的侧面检查肾病。

工业实用性

如上说明，采用本发明的检查手段，能够更确实地检查肾病。

Claims (8)

1.肾病检查试剂，其特征在于，在测定尿中脂蛋白或者其中含有的成分的肾病检测试剂中，含有选自抗人ApoA-I抗体和抗人ApoA-II抗体中的至少一种抗体。

2.如权利要求1所述的肾病检查手段，其特征在于，脂蛋白是高密度脂蛋白。

3.用于检查肾病的尿中成分的测定方法，其特征在于，测定选自抗人ApoA-I抗体和抗人ApoA-II抗体中的至少一种抗体能反应的蛋白质。

4.如权利要求3所述的尿中成分的测定方法，其特征在于，抗人ApoA-I抗体能反应的蛋白质是ApoA-I。

5.如权利要求3所述的尿中成分的测定方法，其特征在于，抗人ApoA-II抗体能反应的蛋白质是ApoA-II。

6.如权利要求3所述的尿中成分的测定方法，其特征在于，通过测定所述蛋白质，测定高密度脂蛋白。

7.如权利要求3所述的尿中成分的测定方法，其特征在于，测定尿中的白血球表面抗原。

8.如权利要求3所述的尿中成分的测定方法，其特征在于，测定尿中的脂质成分。

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