CN1274807C - 蜡蚧轮枝菌及其培养方法与应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了蜡蚧轮枝菌及其培养方法与应用，目的是提供一种防虫效果好的蜡蚧轮枝菌产品。本发明所提供的菌株为蜡蚧轮枝菌(Verticillium lecanii)VerleBj085-1 CGMCC №1187，该菌株的培养方法是将菌株接种于煮半熟的大米固体培养基中，在温度为23-25℃，相对湿度为85%-90%的条件下培养得到蜡蚧轮枝菌产品。可以将培养所得产品制成以该菌株为活性成分的杀虫剂。本发明的蜡蚧轮枝菌菌株对我国温室白粉虱和蚜虫有良好的防治效果。
Description
技术领域
本发明涉及蜡蚧轮枝菌及其培养方法与应用，特别是涉及蜡蚧轮枝菌及其培养方法与在杀虫剂中的应用。
背景技术
蜡蚧轮枝菌(Verticillium lecanii)既可寄生于白粉虱、蚜虫、蚧、鞘翅目、鳞翅目等害虫，还可以寄生于锈病、立枯病病菌、白粉病等植物病菌，并且遗传稳定性较好，对人、植物、畜、禽均未发现有毒害，对天敌昆虫安全，因此在防治保护地菜虫中具有重要潜力。
发明内容
本发明的目的是提供一种新的蜡蚧轮枝菌及其培养方法。
本发明所提供的蜡蚧轮枝菌(Verticillium lecanii)Verle(Bj085-1)已于2004年07月12日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC)，保藏号为CGMCC № 1187。
在光学显微镜(400倍)可以看到在该菌株的菌丝上长着分生孢子梗，分生孢子梗直立，锥形瓶梗轮生于菌丝体中间或顶部。分生孢子呈椭圆形，大小为2.3-6.4×1.5微米。在马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)培养基上菌株的菌落为圆形、白色，菌落中央隆起呈笠状。本发明的菌株Bj085-1与现有的已知菌株相比，更耐低温，温度范围在10-15摄氏度，分生孢子萌发率可达43-89％(24小时)。该菌株以5百万个孢子接种2龄温室白粉虱，7天后，致死率为87％以上，比未经单孢分离的原菌株致病力提高15-20％。
蜡蚧轮枝菌Verle(Bj085-1)的培养方法，是将菌株接种于固体培养基中，在温度为23-25℃，相对湿度为85％-90％的条件下培养得到蜡蚧轮枝菌产品。所述固体培养基优选的是煮半熟的大米。
其中，优选培养温度为23℃；相对湿度优选为90％。
本发明的另一个目的是提供一种以本发明菌株为活性成分的杀虫剂。
将培养得到的产品经粉碎、包装为孢子粉产品保存于0℃-15℃环境中，保存时间可达6个月左右。作为杀虫剂使用时，将该孢子粉配制为液体后喷雾使用。
本发明固体培养蜡蚧轮枝菌的工艺流程如图1所示。本发明的蜡蚧轮枝菌菌株是分离得到的新菌株，对温室白粉虱和蚜虫有良好的防治效果。该蜡蚧轮枝菌固体发酵工艺简单，所用原料便宜、来源广，而且生产过程无污染性废料、废渣和废气产生，环保。用该产品防治温室白粉虱和蚜虫等害虫，可以减少化学农药对蔬菜和环境的污染，而且对人畜十分安全，保证蔬菜的无公害生产。温室白粉虱和蚜虫是我国蔬菜特别是保护地蔬菜生产中的主要害虫，发生面积广大、危害严重，因此本发明的杀虫剂产品具有广阔的应用前景。
附图说明
图1为固体培养蜡蚧轮枝菌的工艺流程图。
具体实施方式
实施例1、筛选蜡蚧轮枝菌(Verticillium lecanii)Verle(Bj085-1)CGMCC №1187
将患有蜡蚧轮枝菌病的北京地区温室中的白粉虱尸体经过70％酒精浸泡表面消毒后，放于100％相对湿度、23℃条件下培养，长出菌丝体后，用接种针挑出菌丝并接种在PDA培养基上，在23℃下继续培养15天-20天，按常规方法进行单孢分离、培养，得到纯的、致病力强的菌株蜡蚧轮枝菌(Verticillium lecanii)Verle(Bj085-1)CGMCC №1187。
对得到的菌株进行生物测定，在实验室种群中挑选3-4龄无病的温室白粉虱若虫作为试虫。把若虫接在番茄幼苗上，并用扎眼透气的塑料口杯罩住，防止试虫外逃。按生物测定的实验规则，将蜡蚧轮枝菌产品用无菌水稀释为5个浓度，分别为104、105、106、107、108；以无菌水为阴性对照。孢子悬浮液和对照中均加入1％吐温-20。每个剂量进行3次重复，每次重复30头试虫，按下述方法进行接种：用微量注射器吸取0.1ml的蜡蚧轮枝菌孢子悬浮液，滴于虫体表面，待虫体表面干后，放回番茄苗上，盖好塑料口杯，放于相对湿度为90％以上的光照培养箱中，在23℃-25℃下每天光照培养12小时，暗培养12小时。每天记录观察试虫的死亡率。
结果表明，接种9天后，各处理的校正死亡率分别为，74.07％±4.15；60.71％±4.75；55.71％±9.81；48.57％±8.21；38％±5.58。
实施例2、培养蜡蚧轮枝菌(Verticillium lecanii)Verle(Bj085-1)CGMCC №1187
采用固体酵大量生产蜡蚧轮枝菌：首先将大米煮半熟，风干后装于30×20cm耐高压塑料袋中，每袋装200克，在100℃和15磅压力条件下灭菌0.5h。将活化后的蜡蚧轮枝菌Verle(Bj085-1)用无菌水稀释至浓度为107孢子/毫升孢子悬浮液，无菌条件下将150毫升悬浮液接种在灭菌处理后的大米上，在23℃、相对湿度为90％条件下培养20天。
将培养所得菌株置于阴凉处干燥3天，之后将带有蜡蚧轮枝菌菌丝和分生孢子的培养基放于粉碎机中，粉碎后过80目筛，装于塑料袋中，之后保存于0℃-15℃环境中，可保存6个月。
实施例3、培养蜡蚧轮枝菌(Verticillium lecanii)Verle(Bj085-1)CGMCC №1187
培养方式同实施例2，不同之处在于培养温度为25℃、相对湿度为85％，培养15天后得到蜡蚧轮枝菌产品。
实施例4、蜡蚧轮枝菌(Verticillium lecanii)Verle(Bj085-1)CGMCC №1187防治温室白粉虱
在温室白粉虱发生时，将实施例2所得蜡蚧轮枝菌产品取出，在室温下用水配置成5×107孢子/毫升孢子悬浮液，以清水为对照，分两次喷雾，间隔7天，每次喷雾1000ml/亩。第二次喷雾后10天，喷本发明杀虫剂的，害虫大量死亡，较对照高出80％。
实施例5、蜡蚧轮枝菌(Verticillium lecanii)Verle(Bj085-1)CGMCC №1187防治蚜虫
在蚜虫发生时，将实施例2所得蜡蚧轮枝菌产品取出，在室温下用水配置成5×107孢子/毫升孢子悬浮液，以清水为对照，分两次喷雾，间隔7天，每次喷雾1000/亩ml。第二次喷雾后10天，喷本发明杀虫剂的，害虫大量死亡，较对照高出76％。
Claims (5)
1、蜡蚧轮枝菌(Verticillium lecanii)Verle Bj085-1 CGMCC №1187。
2、一种培养权利要求1所述的蜡蚧轮枝菌的方法，是将菌株接种于煮半熟的大米固体培养基中，在温度为23-25℃，相对湿度为85％-90％的条件下培养得到蜡蚧轮枝菌产品。
3、根据权利要求2所述的方法，其特征在于：所述培养温度为25℃。
4、根据权利要求2所述的方法，其特征在于：所述培养的相对湿度为90％。
5、以权利要求1所述蜡蚧轮枝菌为活性成分的杀虫剂。
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