CN109907073B - 一种防治粉虱的生物农药以及用途 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及环保生物农药领域，尤其涉及一种防治粉虱的生物农药以及用途。蜡蚧轮枝菌和乙基多杀菌素组合。所述的蜡蚧轮枝菌菌株为JMC‑01，菌株保藏号为CCTCC No：M 2018303。有益效果：本发明适应了有机食品生产的需求，对环境无污染、无残留，有利于延缓抗药性产生。本发明复配杀虫剂具有显著的增效作用，对的防治效果优于单一种药剂的防治效果，对粉虱有很好的防治效果。
Description
技术领域
本发明涉及环保生物农药领域，尤其涉及一种防治粉虱的生物农药以及用途。
背景技术
蜡蚧轮枝菌Lecanicillium lecanii(Zimmermann)是一种昆虫病原真菌，作为一种活体生物农药，具有不同于现有化学杀虫剂的全新作用机理、对环境无污染、无残留等特征，可以作为防治某些对化学药剂产生抗药性的昆虫的替代防治药物，开发利用蜡蚧轮枝菌具有重要的经济意义。蜡蚧轮枝菌分布广、对烟粉虱、温室白粉虱、蚜虫、蓟马等有很好的防治效果，具有广阔的应用前景。但是病原真菌通过孢子等侵染体感染，作用过程缓慢，杀虫率不高，为弥补这一缺陷，专家学者在真菌制剂中添加低剂量生物学相容的高效、低毒、低残留的化学生物农药，既缩短孢子侵染昆虫的潜伏期，增强杀虫效果又减少了化学药剂的用量。
乙基多杀菌素(spinetoram)是一种大环内酯类杀虫剂，主要作用于昆虫神经系统中烟碱型乙酰胆碱受体和γ氨基丁酸受体，致使虫体对兴奋性或抑制性的信号传递反应不敏感，直至死亡。乙基多杀菌素具有胃毒和触杀作用，主要用于防治棉花、果蔬、茶叶等作物上鳞翅目、缨翅目、双翅目，及部分鞘翅目、半翅目和直翅目，具有高效、广谱、低毒、药效持效期长、对作物无药害、使用安全、与常规生物农药无交互抗性等优点，是替代高毒有机磷生物农药的又一品种。
近年来，随着消费者安全意识的提高，对种植业安全用药提出了更高要求。降低生物农药残留，努力开发新型生物农药已经成为当务之急。
发明内容
发明的目的：为了提供一种效果更好的防治粉虱的生物农药以及用途，具体目的见具体实施部分的多个实质技术效果。
为了达到如上目的，本发明采取如下技术方案：
一种防治粉虱的生物农药，其特征在于，蜡蚧轮枝菌和乙基多杀菌素组合。
本发明进一步技术方案在于，所述的蜡蚧轮枝菌菌株为JMC-01，分离于宁夏银川地区被侵染的粉虱虫体上，菌株保藏号为CCTCC No：M2018303。
一种防治粉虱的生物农药，其特征在于，其制备方法如下：
组分A：利用含0.05％吐温80的无菌水配制7、13、20、33、53mg/L的乙基多杀菌素；
组分B：用含0.05％吐温80的无菌水充分洗脱蜡蚧轮枝菌孢子，制成浓度为1×106cfu/mL、1×107cfu/mL、1×105cfu/mL、1×104cfu/mL的孢子悬浮液；
将组分A和组分B二者混合即可。
蜡蚧轮枝菌和乙基多杀菌素的协同物在制备防治粉虱的生物农药中的用途。
菌株保藏号为CCTCC No：M 2018303的蜡蚧轮枝菌菌株在制备防治粉虱的农药中的用途。
一中新型菌株，其特征在于，菌株为蜡蚧轮枝菌菌株为JMC-01，菌株保藏号为CCTCC No：M 2018303。
采用如上技术方案的本发明，相对于现有技术有如下有益效果：本发明适应了有机食品生产的需求，对环境无污染、无残留，有利于延缓抗药性产生。本发明复配杀虫剂具有显著的增效作用，对的防治效果优于单一种药剂的防治效果，对粉虱有很好的防治效果。
附图说明：
图1为部分计算公式；
图2为表1；
图3为表2；
图4为表3；
图5为测试结果的折线图；
图6为保藏证明和存活证明；
本专利的蜡蚧轮枝菌菌株为JMC-01，分离于宁夏银川地区被侵染的粉虱虫体上，菌株保藏号为CCTCC No：M 2018303；保藏日为2018年5月22日；保藏单位全称为中国典型培养物保藏中心，缩写CCTCC。保藏单位代码：CCTCC；地址：武汉市武昌珞珈山中国典型培养物保藏中心(武汉大学)；存活：是；保藏日期：2018年05月22日；保藏编号：CCTCC No：M2018303；分类命名蜡蚧轮枝菌JMC-01Lecanicillium lecanii JMC-01。
具体实施方式
本专利提供多种并列方案，不同表述之处，属于基于基本方案的改进型方案或者是并列型方案。每种方案都有自己的独特特点。
发明人通过大量的室内筛选试验，发现蜡蚧轮枝菌和乙基多杀菌素的混配对粉虱具有协同增效作用。为了更好的理解发明的实质，下面结合实例对本发明的技术内容作详细的说明，但本发明的内容并不局限如此，不能因此而理解为对本发明专利范围的限制。
以下实施例中所述百分比均为质量百分比。所述的蜡蚧轮枝菌菌株为JMC-01，菌株保藏号为CCTCC No：M 2018303，2018年5月22日在中国典型培养物保藏中心保藏。乙基多杀菌素(60g/L悬浮剂)由美国陶氏益农公司提供。
实施例1：蜡蚧轮枝菌和乙基多杀菌素相容性试验
1.孢子萌发的测定
用含0.05％吐温80的无菌水充分洗脱蜡蚧轮枝菌孢子，制成浓度为1×107cfu/mL的孢子悬浮液。利用无菌水将乙基多杀菌素配制成田间推荐用量、5倍稀释浓度、10倍稀释浓度，并以0.05％吐温80的无菌水为对照组，分装至1.5mL离心管中，各处理5个重复。摇床震荡24h后，观察其孢子萌发量，计算孢子萌发抑制率。
2.菌丝生长的测定
吸取100ul三个浓度梯度的乙基多杀菌素于PDA培养基上制成含毒平板，取20ul孢子悬浮液置于含毒平板中央，以0.05％吐温80的无菌水作为对照，在培养皿底部画互相垂直的直线，培养10d，每隔2d测量其直径，计算菌丝生长抑制率。
3.产孢的测定
用0.5cm的打孔器在(2)中蜡蚧轮枝菌的菌落中心至边缘1/2处，制出2个菌饼，20ml含0.05％吐温80的无菌水充分洗脱孢子，4层纱布过滤，磁力悬浮器充分混匀，血球计数板计数，得出孢子浓度，计算产孢抑制率。
4.结果如表1所示
表1乙基多杀菌素与蜡蚧轮枝菌相容性试验结果
如表1所示，乙基多杀菌素在10倍稀释浓度下对菌丝生长、产孢、孢子萌发抑制率均低于5倍稀释浓度和田间推荐浓度，由此可见低浓度的乙基多杀菌素与蜡蚧轮枝菌具有较好的相容性。
实施例2：乙基多杀菌素与蜡蚧轮枝菌对烟粉虱若虫的联合毒力
1.试验方法
利用含0.05％吐温80的无菌水配制7、13、20、33、53mg/L的乙基多杀菌素。浸液法测定对烟粉虱的毒力，取带有2～3龄若虫的叶片，每个叶片保留30头，浸泡10s，晾干后用保湿棉球包住叶柄，置于培养皿中，保鲜膜封口，膜上扎一些小孔，置光照培养箱(25±1)℃，相对湿度80％，L:D＝14h:10h下培养48h，记录若虫死亡数，计算LC50。同样的方法将蜡蚧轮枝菌配制成浓度为1×107、1×106、1×105、1×104cfu/mL的孢子悬浮液。测定方法及培养条件，同上。培养5d后，记录若虫死亡数，计算LC50。
由此得到蜡蚧轮枝菌对烟粉虱若虫的LC50与乙基多杀菌素对烟粉虱若虫的LC50，以此浓度为基准，进行烟粉虱的室内毒力测定。用于实验的蜡蚧轮枝菌、乙基多杀菌素及两者不同浓度比如表2所示，5d后记录死亡粉虱数，计算LC50、置信区间、毒力回归方程及共毒系数。
表2用于实验的蜡蚧轮枝菌、乙基多杀菌素及两者不同浓度比
注：Sp＝Spinetoram；L＝Lecanicillium lecanii；其中15+5×106(8:2)，30+1×107(5:5)，45+5×107(2:8)。
混剂的共毒系数(CTC值)按下列公式计算：
ATI＝S/M×100
式中：ATI为混剂实测毒力指数；S为标准杀虫剂的LC50，单位为mg/L；M为混剂的LC50，单位为mg/L。
TTI＝TIA×PA+TIB×PB
式中：TTI为混剂理论毒力指数；TIA为A药剂毒力指数；PA为A药剂在混剂中的百分含量，单位为百分率；TIB为B药剂毒力指数；PB为B药剂在混剂中的百分含量，单位为百分率。
CTC＝ATI/TTI×100
式中：CTC为共毒系数；ATI为混剂实测毒力指数；TTI为混剂理论毒力指数。
CTC≥120表现为增效作用；CTC≤80表现为拮抗作用；80≤CTC≤120表现为相加作用。
2.结果如表3所示
表3乙基多杀菌素与蜡蚧轮枝菌对烟粉虱若虫的联合毒力
乙基多杀菌素与蜡蚧轮枝菌对烟粉虱若虫的联合毒力从表3可看出：乙基多杀菌素与蜡蚧轮枝菌不同体积比混合使用后，共毒系数均大于120，说明混合药剂都存在明显的增效作用。其中当30mg/L乙基多杀菌素与1×107cfu/mL蜡蚧轮枝菌以5:5混配时CTC达到最高值281，增效作用最显著。
实施例3：不同时间间隔对不同处理的烟粉虱的乙酰胆碱酯酶活性测定
1.试验方法
用不同浓度的蜡蚧轮枝菌(5×106、1×107和5×107cfu/mL)、乙基多杀菌素(15、30、45mg/L)和蜡蚧轮枝菌+乙基多杀菌素组合(15mg/L+5×106cfu/mL、30mg/L+1×107cfu/mL、45mg/L+5×107cfu/mL)处理烟粉虱若虫。运用浸渍法处理带有烟粉虱若虫的番茄叶片，方法同实例2。运用分光光度计在412nm下测定其吸光值。
样本处理：称取0.03g烟粉虱若虫，按照重量(g)：体积(mL)＝1:9的比例，加入9倍生理盐水，冰水浴条件下机械匀浆，2500转/分，离心10分钟，取上清液待测。主要操作步骤根据南京建成生物工程研究所提供的乙酰胆碱酯酶测试盒操作。
结果如图5所示
由图5可知，随着处理天数的增加，用乙基多杀菌素和蜡蚧轮枝菌混剂的三组组合处理烟粉虱若虫时乙酰胆碱酯酶活性均高于单独使用乙基多杀菌素和蜡蚧轮枝菌处理粉虱若虫时乙酰胆碱脂酶的活性，由此说明这两种试剂都可以靶向乙酰胆碱受体，从而形成协同增效作用。其中，45mg/L+5×107cfu/mL处理的乙酰胆碱酯酶活性最高，说明该处理协同增效作用最好。因此，我们的研究结果为乙基多杀菌素和蜡蚧轮枝菌的协同作用提供理论依据。
采用生物农药复配技术或混合施用技术可以减少生产实际中化学生物农药的使用量，采用亚剂量的化学生物农药与生物农药混合是提高微生物杀虫剂的速效性和减少化学生物农药残留的一个重要方法，筛选蜡蚧轮枝菌与乙基多杀菌素的最佳复配比例，具有重要意义。目前国内尚未发现有相关的蜡蚧轮枝菌与乙基多杀菌素复配的杀虫剂的相关报道。
本发明使用的菌株是从宁夏银川地区被侵染的粉虱虫体上分离获得，为中国本土的菌株，并非从国外引进，能很好地适应本地的自然环境。
JMC-01对各龄期若虫均有较高致病力，孢子浓度为1×108孢子/mL时，接种7d，1、2、3龄若虫的死亡率分别为：70％、85.56％、75.56％，各龄若虫的死亡率均在70％以上，JMC-01对2龄若虫的致病力最强。烟粉虱若虫接种JMC-01后7d，LC50为3.18×105孢子/mL，单独利用蜡蚧轮枝菌Vp28、V16063接种烟粉虱若虫7d后，LC50分别为7.76×105孢子/mL、1.17×105孢子/mL，JMC-01与这两株菌相比，LC50较低，在较低浓度下也能保持较高的致病力。JMC-01的孢子浓度为1×105孢子/mL时，对烟粉虱若虫接种7d后，若虫死亡率为41.11％，单独利用孢子浓度为1×105孢子/mL的球孢白僵菌Bb84对烟粉虱若虫进行接种，死亡率为31.03％。
需要说明的是，本专利提供的多个方案包含本身的基本方案，相互独立，并不相互制约，但是其也可以在不冲突的情况下相互组合，达到多个效果共同实现。
以上显示和描述了本发明的基本原理、主要特征和本发明的优点。本领域的技术人员应该了解本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理，在不脱离本发明精神和范围的前提下，本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进都落入要求保护的范围内。
Claims (2)
1.一种防治粉虱的生物农药，其特征在于，所述防治粉虱的生物农药为蜡蚧轮枝菌和乙基多杀菌素的组合；
所述蜡蚧轮枝菌为JMC-01，菌株保藏号为CCTCC No：M 2018303；
所述防治粉虱的生物农药中所述蜡蚧轮枝菌和所述乙基多杀菌素的配比为5×106cfu/mL:15mg/L、1×107cfu/mL:30mg/L、5×107cfu/mL:45mg/L中的一种。
2.权利要求1所述的防治粉虱的生物农药在制备防治粉虱的生物农药中的用途。
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