CN101485336A - 一种防治作物土传病害的木霉菌制剂 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种防治作物土传病害的木霉菌制剂及其制备方法。该制剂的组成是，在载体中含有有效量的哈茨木霉(Trichoderma harzianum)菌株Th－192CGMCC NO.2634。制备方法包括菌株Th－192的扩大培养、液体和固体发酵培养及添加促进剂等步骤。该制剂具有原料来源广、生产周期短、成本低，产孢量大，使用方便，适用作物广；且其促生增产作用显著。

Description

一种防治作物土传病害的木霉菌制剂
所属技术领域
本发明涉及用于防治作物土传病害的木霉菌制剂及其制备方法。
背景技术
根腐病、白绢病、立枯病、菌核病、黑胫病等作物土传病害，常年造成的产量损失在20％以上，严重影响了农作物的产量和品质。由于土传病害的病原菌可以在土壤中长期成活，并伴田间农事活动而随土传播，需要长期使用化学药剂进行防治。而化学农药的使用会造成农药残留超标。这已成为我国农产品进入国际市场的主要障碍。因此，农业种植生产上迫切需要无公害的防治技术，以提高农业产业可持续发展能力。
生物防治以其具有高效、安全的特点而越来越受到世界各国的重视。自90年代以来，全球生物农药的产量每年以10％～20％的速度递增。生物农药中的微生物杀菌剂主要以开发和利用拮抗微生物为主，在目前已发现的拮抗微生物中，研究最多的是具有很好的生防活性的木霉菌。目前，国内外针对灰霉病、立枯病、白绢病、纹枯病、枯萎病等作物病害的生物防治，分离筛选出了一些具有一定防病效果的木霉菌株，并进行了相应的扩大培养研究。但还存在一些问题，如生产出的制剂具有单一特定的适用作物，防病范围窄；或者生产原料的来源受地域限制；或者生产工序复杂、生产成本高；或者用量较大，往往每亩需用几公斤到几十公斤。而对于专门用于土传病害的防治，还少有文献报道。如公开号为CN1337164A的中国专利申请“一种微生物杀菌剂及其制备方法”，其微生物杀菌剂仅适用于烟草，仅对烟草立枯病、猝倒病、黑胫病、赤星病有效；而其生产原料烟梗的来源地域性强，并且生产过程中需要使用专用设备发酵罐。中国发明专利“用于植物土传性根病防治的木霉菌菌株及其发酵、粉粒剂制备工艺”(022143649.5)，仅用于小麦全蚀病、蔬菜土传性根病防治。中国发明专利“一种微生物杀菌剂及其制备方法”(200510136781.8)，提供了一种用于植物真菌病害生物防治的木霉菌Tr01及其制备方法，是一种用于防治蔬菜灰霉、叶霉和白粉病等叶部病害的生物农药及其制备方法。又如中国专利申请“速效抗病真菌有机肥料及其生产方法”，公开号CN1283599，该抗病真菌有机肥用量较大，每亩需施用40kg-50kg。中国专利申请“一种防治植物土传病害的方法”(公开号：CN1559213A)，该方法为用剧毒高残留化学药剂甲基溴37.5g原药/m2或威百亩75g/m2进行土壤消毒，再覆VIF膜，不但用药量大，容易造成农药残留，污染环境，而且成本高。
发明内容
本发明的目的是提供一种防治作物土传病害的木霉菌制剂。该制剂具有原料来源广、生产周期短、成本低，产孢量大，使用方便，适用作物广；且其促生增产作用显著。
本发明另一目的是提供一种制备上述木霉菌制剂的方法。
本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：一种防治作物土传病害的木霉菌制剂，其组成是：在载体中含有有效量的哈茨木霉(Trichoderma harzianum)菌株Th-192 CGMCC NO.2634。
制备上述的一种防治作物土传病害的木霉菌制剂的方法，其步骤依次为：
一种制备权利要求1所述的防治作物土传病害的木霉菌制剂的方法，其步骤依次为：
A、菌种的扩大培养
将马铃薯200g，葡萄糖20g，琼脂17～20g，浓度为1×104mg/L的PCNB(五氯硝基苯)母液5ml混合后，加水至1000ml制得斜面培养基；再将哈茨木霉菌株Th-192的菌种接种于斜面培养基中，在20℃～30℃温度下，培养2～3天，得哈茨木霉菌株Th-192的扩大培养物；
B、液体发酵培养
用玉米粉、链霉素和水，配制成质量含量为：玉米粉3～5％、链霉素40～60ppm、余量为水的液体培养基，再将液体培养基进行消毒处理；然后将A步得到的扩大培养物接种在液体培养基中，自然光照下，25℃～28℃恒温振荡培养3～5天，得液体发酵物；
C、固体发酵培养
用麦麸、玉米粉、谷壳和水，配制成质量含量为：麦麸3～5％、玉米粉15～20％、谷壳20～30％、余量为水的固体培养基；再将固体培养基进行消毒处理；然后B步的液体发酵物接种于固体培养基中，接种时液体发酵物与固体培养基的质量比为1:10～15；接种后，在25℃～30℃、相对湿度90％以上、自然光照下、通气培养2～3天，得固体发酵物；
D、制剂的制备：
用硅藻土、硫磺和米糠，配制成质量含量为：硅藻土20～30％、硫磺：0.1％、余量为米糠的促进剂；将C步得到的固体发酵物，在35～40℃温度下，干燥24～48小时后，按固体培养物:促进剂＝10:2～3的质量比加入促进剂，混匀后，粉碎过60目筛，测定孢子含量，菌株Th-192的孢子含量达到1×108个/克即为合格的木霉木霉菌制剂。
上述的液体培养基进行消毒处理的具体做法为：121℃、15磅下高温加压消毒30～40分钟；固体培养基进行消毒处理的具体做法为121℃、15磅下高温加压消毒120～150分钟。
本发明采用的哈茨木霉(Trichoderma harzianum)菌株Th-192，是从四川省彭州市的药用植物川芎根际土壤中，利用引起土传病害的主要病原菌尖孢镰刀菌作诱饵分离筛选而得。即采用尼龙网片作载体，先让尖孢镰刀菌长满，再将尼龙网片置于土样表面，培养3～4天后，拮抗木霉菌即可寄生到尼龙网片的病原菌上，揭下尼龙网片放在马铃薯葡萄糖琼脂固体(PDA)培养基上，选取木霉菌株纯化培养，就可获得具有拮抗作用的木霉菌株；通过对这些菌株与多种土传病害的病原菌的拮抗试验，从中筛选出拮抗作用显著的哈茨木霉菌株Th-192。该菌株对引起包含蔬菜、花生、中药材、烟草在内农作物的根腐病、白绢病、枯萎病、黑胫病等病害的尖孢镰刀菌、立枯丝核菌、齐整小核菌等病原菌的拮抗指数达I级，对病原菌菌丝生长抑制率均在85％以上。
本发明采用的哈茨木霉菌株Th-192具有以下微生物学特性：
1、培养学特性：菌落在PDA平板上生长快，菌丝丛茂密，菌落初期白色，老熟时暗绿色，反面同色，具有同心轮纹。
2、形态学特性：孢子梗丛束疏松，环状排列，分生孢子梗从菌丝的侧枝上长出，主分枝呈树状，其上次级分枝多，常2～3个一组，呈直角伸出，整个分枝系统呈金字塔状。瓶颈短，基部变细，中间膨大，以直角伸出，终极瓶颈长而细，瓶颈近似轮状排列。分生孢子球形、近球形或卵圆形，基部平截，孢子小，2.8～3.2μm×2.8～3.2μm。
该哈茨木霉菌株Th-192已于2008年08月04日，在中国微生物菌种管理委员会普通微生物中心保藏，其保藏登记号为CGMCC NO.2634。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：
(1)生产周期短，操作简易。从菌种培养到制剂的生产全程仅需5～9天。
(2)生产成本低：液体和固体发酵所需的培养料分别为玉米粉、麦麸、谷壳等，其来源十分丰富，价格低廉。
(3)产品保藏期长，经检验其结论如下：pH：5.5～7.2，水分含量10～12％，孢子含量在1×108～5×108个/克，保存期12～14个月。
(4)能够防治多种作物难于防治的土传病害，具有防病效果好，促生增产作用显著的特点。适用作物包括川芎、丹参、麦冬、附子、烟草、花生、茄子、辣椒、西瓜等农作物和中药材，防病对象包括由镰刀菌、立枯丝核菌、菌核菌、齐整小核菌和疫菌等病原菌引起的根腐病、立枯病、菌核病、白绢病、黑胫病等化学农药难于防治的土传病害，防治效果显著，且可使作物显著增产。达到提高种植效益、减轻污染，为生产和发展优质无公害农产品提供技术保证。
本发明的木霉制剂对多种作物土传病害的防病增产效果由下面对比实验证明：
用于川芎的试验表明，将川芎插穗用木霉菌制剂孢子悬浮液处理后栽插。川芎的出苗率为83.33％，显著高于空白对照的73.33％和化学农药多菌灵500倍浸种处理的79.63％，对川芎根腐病的防治效果为68.94％，显著高于多菌灵处理的防治效果(48.54％)。川芎产量为比空白对照增产18.24％，比多菌灵浸种处理的增产5.28％。
用于烟草试验表明，在烟草移栽时将木霉菌制剂(1.0kg/亩)与烟草专用肥混匀施于移栽窝内，可以有效控制烟草黑胫病的发生。对烟草黑胫病的防治效果为52.90％，与72％甲霜灵锰锌可湿性粉剂0.8kg/亩移栽时灌窝处理的59.35％和50％多菌灵1.0kg/亩处理的防效51.60％相当。并使烟草增产9.89％。
用于花生上的试验表明，在花生播种时将该木霉菌制剂0.2kg/亩与底肥一起施用，对花生白绢病的防治效果达69.45％，显著高于多菌灵处理(1.0kg/亩)的防治效果(50.38％)，木霉菌制剂处理的花生增产17.89％，高于多菌灵处理的增产率(9.87％)。
西瓜试验表明，在移栽前施用木霉菌制剂0.5g/窝，对西瓜枯萎病的防治效果为65.43％，显著高于多菌灵(0.5g/窝)处理的48.75％，并使西瓜增产18.76％。
用于茄子的试验表明，茄子移栽前施用木霉菌制剂0.2g/窝，能有效地减轻茄子黄萎病的发生，对其黄萎病的防治效果为64.77％，比目前常用的化学农药多菌灵的防治效果(42.39％)好，并使茄子增产14.58％。
用于辣椒的试验表明，辣椒移栽时施用木霉菌制剂0.1g/窝，对辣椒根腐病的防治效果为70.53％，能使辣椒增产18.35％。
用于丹参的试验表明，丹参栽插时将上述木霉菌制剂按0.5kg/亩的量混入底肥中，能有效控制丹参根腐病的发生，对丹参根腐病的防治效果达67.83％，显著高于化学农药多菌灵的防效(53.40％)，木霉菌制剂处理区的丹参增产7.58％。
附子试验表明，在附子种根栽种时施用上述木霉菌制剂0.5kg/亩，对附子白绢病的防治效果为60.75％，显著高于多菌灵处理的48.33％。处理区附子比对照增产10.78％，高于多菌灵处理的4.55％。
在麦冬上的应用试验表明，亩用木霉菌制剂0.75kg/，麦冬栽插前将其与底肥混合，对麦冬根腐病的防治效果达70.20％，显著高于化学农药多菌灵的52.25％，处理区麦冬产量比对照增产23.34％，显著高于多菌灵处理的11.57％。
川红花的应用试验表明，播种时施用木霉菌孢子悬浮液，红花出苗率达90.47％，显著高于空白对照76.78％和多菌灵处理的79.54％，对红花菌核病的防治效果为63.48％，显著高于多菌灵的50.66％。
下面结合实施例对本发明进一步说明。
具体实施方式：
实施例一
本例的防治作物土传病害的木霉菌制剂，其制备方法如下：
A、菌种的扩大培养
将马铃薯200g，葡萄糖20g，琼脂18g，浓度为1×104mg/L的PCNB(五氯硝基苯)母液5ml混合后，加水至1000ml制得斜面培养基；再将哈茨木霉菌株Th-192的菌种接种于斜面培养基中，在25℃温度下，培养3天，得哈茨木霉菌株Th-192的扩大培养物。
B、液体发酵培养
用玉米粉、链霉素和水，配制成质量含量为：玉米粉3％、链霉素50ppm、余量为水的液体培养基，再将液体培养基进行消毒处理即将液体培养基混匀装于三角瓶中，在121℃、15磅下高温加压消毒30分钟；冷却后，将A步得到的扩大培养物接种在三角瓶中，自然光照下，25℃温振荡培养4天，得液体发酵物。
C、固体发酵培养
用麦麸、玉米粉、谷壳和水，配制成质量含量为：麦麸3％、玉米粉18％、谷壳25％、余量为水的固体培养基；再将固体培养基进行消毒处理；即将固体培养基在121℃、15磅下高温加压消毒120分钟，冷却后倒入已消毒的培养床中，然后B步的液体发酵物接种于培养床即固体培养基中，接种时液体发酵物与固体培养基的质量比为1:15；接种后，在28℃、相对湿度90％以上、自然光照下、通气培养2天，得固体发酵物。
D、制剂的制备：
用硅藻土、硫磺和米糠，配制成质量含量为：硅藻土20％、硫磺：0.1％、余量为米糠的促进剂；将C步得到的固体发酵物，在40℃温度下，干燥36小时后，按固体培养物:促进剂＝10:3的质量比加入促进剂，混匀后，粉碎过60目筛，测定孢子含量，菌株Th-192的孢子含量达到1×108个/克即为合格的木霉木霉菌制剂。
采用本例方法制得的防治作物土传病害的木霉菌制剂，其组成是：在载体中含有有效量(1×108个/克以上)的哈茨木霉(Trichoderma harzianum)菌株Th-192 CGMCC NO.2634。本例制剂中菌株Th-192的载体为：加入的促进剂及三步培养步骤中加入的培养基中，未被菌株消耗掉的物质及菌株的代谢产物。
实施例二
本例的防治作物土传病害的木霉菌制剂，其制备方法如下：
A、菌种的扩大培养
将马铃薯200g，葡萄糖20g，琼脂17g，浓度为1×104mg/L的PCNB(五氯硝基苯)母液5ml混合后，加水至1000ml制得斜面培养基；再将哈茨木霉菌株Th-192的菌种接种于斜面培养基中，在28℃温度下，培养2天，得哈茨木霉菌株Th-192的扩大培养物。
B、液体发酵培养
用玉米粉、链霉素和水，配制成质量含量为：玉米粉5％、链霉素55ppm、余量为水的液体培养基，再将液体培养基进行消毒处理即将液体培养基混匀装于三角瓶中，在121℃、15磅下高温加压消毒30分钟；冷却后，将A步得到的扩大培养物接种在三角瓶中，自然光照下，27℃温振荡培养3天，得液体发酵物。
C、固体发酵培养
用麦麸、玉米粉、谷壳和水，配制成质量含量为：麦麸5％、玉米粉20％、谷壳30％、余量为水的固体培养基；再将固体培养基进行消毒处理；即将固体培养基在121℃、15磅下高温加压消毒150分钟，冷却后倒入已消毒的培养床中，然后B步的液体发酵物接种于培养床即固体培养基中，接种时液体发酵物与固体培养基的质量比为1:10；接种后，在25℃、相对湿度90％以上、自然光照下、通气培养2天，得固体发酵物。
D、制剂的制备：
用硅藻土、硫磺和米糠，配制成质量含量为：硅藻土25％、硫磺：0.1％、余量为米糠的促进剂；将C步得到的固体发酵物，在35℃温度下，干燥48小时后，按固体培养物:促进剂＝10:2的质量比加入促进剂，混匀后，粉碎过60目筛，测定孢子含量，菌株Th-192的孢子含量达到1×108个/克即为合格的木霉木霉菌制剂。
采用本例方法制得的防治作物土传病害的木霉菌制剂，其组成是：在载体中含有有效量(1×108个/克以上)的哈茨木霉(Trichoderma harzianum)菌株Th-192 CGMCC NO.2634。本例制剂中菌株Th-192的载体为：加入的促进剂及三步培养步骤中加入的培养基中，未被菌株消耗掉的物质及菌株的代谢产物。
实施例三
本例的防治作物土传病害的木霉菌制剂，其制备方法如下：
A、菌种的扩大培养
将马铃薯200g，葡萄糖20g，琼脂18g，浓度为1×104mg/L的PCNB(五氯硝基苯)母液5ml混合后，加水至1000ml制得斜面培养基；再将哈茨木霉菌株Th-192的菌种接种于斜面培养基中，在20℃温度下，培养3天，得哈茨木霉菌株Th-192的扩大培养物。
B、液体发酵培养
用玉米粉、链霉素和水，配制成质量含量为：玉米粉4％、链霉素50ppm、余量为水的液体培养基，再将液体培养基进行消毒处理即将液体培养基混匀装于三角瓶中，在121℃、15磅下高温加压消毒40分钟；冷却后，将A步得到的扩大培养物接种在三角瓶中，自然光照下，28℃温振荡培养4天，得液体发酵物。
C、固体发酵培养
用麦麸、玉米粉、谷壳和水，配制成质量含量为：麦麸4％、玉米粉15％、谷壳30％、余量为水的固体培养基；再将固体培养基进行消毒处理；即将固体培养基在121℃、15磅下高温加压消毒140分钟，冷却后倒入已消毒的培养床中，然后B步的液体发酵物接种于培养床即固体培养基中，接种时液体发酵物与固体培养基的质量比为1:12；接种后，在29℃、相对湿度90％以上、自然光照下、通气培养2天，得固体发酵物。
D、制剂的制备：
用硅藻土、硫磺和米糠，配制成质量含量为：硅藻土30％、硫磺：0.1％、余量为米糠的促进剂；将C步得到的固体发酵物，在38℃温度下，干燥40小时后，按固体培养物:促进剂＝10:2的质量比加入促进剂，混匀后，粉碎过60目筛，测定孢子含量，菌株Th-192的孢子含量达到1×108个/克即为合格的木霉木霉菌制剂。
采用本例方法制得的防治作物土传病害的木霉菌制剂，其组成是：在载体中含有有效量(1×108个/克以上)的哈茨木霉(Trichoderma harzianum)菌株Th-192 CGMCC NO.2634。本例制剂中菌株Th-192的载体为：加入的促进剂及三步培养步骤中加入的培养基中，未被菌株消耗掉的物质及菌株的代谢产物。
实施例四
本例的防治作物土传病害的木霉菌制剂，其制备方法如下：
A、菌种的扩大培养
将马铃薯200g，葡萄糖20g，琼脂19g，浓度为1×104mg/L的PCNB(五氯硝基苯)母液5ml混合后，加水至1000ml制得斜面培养基；再将哈茨木霉菌株Th-192的菌种接种于斜面培养基中，在27℃温度下，培养2天，得哈茨木霉菌株Th-192的扩大培养物。
B、液体发酵培养
用玉米粉、链霉素和水，配制成质量含量为：玉米粉5％、链霉素60ppm、余量为水的液体培养基，再将液体培养基进行消毒处理即将液体培养基混匀装于三角瓶中，在121℃、15磅下高温加压消毒35分钟；冷却后，将A步得到的扩大培养物接种在三角瓶中，自然光照下，26℃温振荡培养4天，得液体发酵物。
C、固体发酵培养
用麦麸、玉米粉、谷壳和水，配制成质量含量为：麦麸3％、玉米粉20％、谷壳20％、余量为水的固体培养基；再将固体培养基进行消毒处理；即将固体培养基在121℃、15磅下高温加压消毒150分钟，冷却后倒入已消毒的培养床中，然后B步的液体发酵物接种于培养床即固体培养基中，接种时液体发酵物与固体培养基的质量比为1:10；接种后，在27℃、相对湿度90％以上、自然光照下、通气培养3天，得固体发酵物。
D、制剂的制备：
用硅藻土、硫磺和米糠，配制成质量含量为：硅藻土25％、硫磺：0.1％、余量为米糠的促进剂；将C步得到的固体发酵物，在40℃温度下，干燥36小时后，按固体培养物:促进剂＝10:2.5的质量比加入促进剂，混匀后，粉碎过60目筛，测定孢子含量，菌株Th-192的孢子含量达到1×108个/克即为合格的木霉木霉菌制剂。
采用本例方法制得的防治作物土传病害的木霉菌制剂，其组成是：在载体中含有有效量(1×108个/克以上)的哈茨木霉(Trichoderma harzianum)菌株Th-192 CGMCC NO.2634。本例制剂中菌株Th-192的载体为：加入的促进剂及三步培养步骤中加入的培养基中，未被菌株消耗掉的物质及菌株的代谢产物。
实施例五
本例的防治作物土传病害的木霉菌制剂，其制备方法如下：
A、菌种的扩大培养
将马铃薯200g，葡萄糖20g，琼脂20g，浓度为1×104mg/L的PCNB(五氯硝基苯)母液5ml混合后，加水至1000ml制得斜面培养基；再将哈茨木霉菌株Th-192的菌种接种于斜面培养基中，在30℃温度下，培养2.5天，得哈茨木霉菌株Th-192的扩大培养物。
B、液体发酵培养
用玉米粉、链霉素和水，配制成质量含量为：玉米粉4％、链霉素40ppm、余量为水的液体培养基，再将液体培养基进行消毒处理即将液体培养基混匀装于三角瓶中，在121℃、15磅下高温加压消毒40分钟；冷却后，将A步得到的扩大培养物接种在三角瓶中，自然光照下，28℃温振荡培养5天，得液体发酵物。
C、固体发酵培养
用麦麸、玉米粉、谷壳和水，配制成质量含量为：麦麸5％、玉米粉15％、谷壳30％、余量为水的固体培养基；再将固体培养基进行消毒处理；即将固体培养基在121℃、15磅下高温加压消毒140分钟，冷却后倒入已消毒的培养床中，然后B步的液体发酵物接种于培养床即固体培养基中，接种时液体发酵物与固体培养基的质量比为1:13；接种后，在30℃、相对湿度90％以上、自然光照下、通气培养2.5天，得固体发酵物。
D、制剂的制备：
用硅藻土、硫磺和米糠，配制成质量含量为：硅藻土22％、硫磺：0.1％、余量为米糠的促进剂；将C步得到的固体发酵物，在40℃温度下，干燥24小时后，按固体培养物:促进剂＝10:3的质量比加入促进剂，混匀后，粉碎过60目筛，测定孢子含量，菌株Th-192的孢子含量达到1×108个/克即为合格的木霉木霉菌制剂。
采用本例方法制得的防治作物土传病害的木霉菌制剂，其组成是：在载体中含有有效量(1×108个/克以上)的哈茨木霉(Trichoderma harzianum)菌株Th-192 CGMCC NO.2634。本例制剂中菌株Th-192的载体为：加入的促进剂及三步培养步骤中加入的培养基中，未被菌株消耗掉的物质及菌株的代谢产物。
本发明的微生物制剂的制备步骤中：
1、菌种的扩大培养的适宜温度为25℃～28℃，在此温度条件下1.5天菌丝即可布满培养基表面；在20℃以下，菌丝生长较慢，需5～6天才能布满培养基表面，在30℃以上时，菌丝需6～7天才能布满培养基表面。
2、液体发酵培养的适宜温度为25℃～28℃，其培养时间一般为72～80小时即可满足要求；培养温度在25℃以下或高于30℃，菌株Th-192孢子含量较小。
3、固体发酵培养的适宜温度为25℃-30℃，培养时间一般为36～60小时，在20℃以下时，需培养4天以上，在35℃以上时，木霉生长明显受阻，也需培养5天以上，在25℃需培养1天菌丝才能布满固体发酵物表面，在28℃时，菌丝1.5天即可布满固体发酵物表面。
本发明的木霉菌制剂，在制备时，除可采用以上实施例的培养基和促进剂以外，还可采用其它的木霉菌类的现有培养基，只要能够提供菌株生长所必需的营养物质即可；促进剂也可采用常用的其它的促进剂，只要能满足使菌株分散和存活生长的需要即可。

Claims (3)

1、一种防治作物土传病害的木霉菌制剂，其组成是：在载体中含有有效量的哈茨木霉(Trichoderma harzianum)菌株Th-192 CGMCC NO.2634。
2、一种制备权利要求1所述的防治作物土传病害的木霉菌制剂的方法，其步骤依次为：
A、菌种的扩大培养
将马铃薯200g，葡萄糖20g，琼脂17～20g，浓度为1×104mg/L的PCNB(五氯硝基苯)母液5ml混合后，加水至1000ml制得斜面培养基；再将哈茨木霉菌株Th-192的菌种接种于斜面培养基中，在20℃～30℃温度下，培养2～3天，得哈茨木霉菌株Th-192的扩大培养物；
B、液体发酵培养
用玉米粉、链霉素和水，配制成质量含量为：玉米粉3～5％、链霉素40～60ppm、余量为水的液体培养基，再将液体培养基进行消毒处理；然后将A步得到的扩大培养物接种在液体培养基中，自然光照下，-25℃～28℃恒温振荡培养3～5天，得液体发酵物；
C、固体发酵培养
用麦麸、玉米粉、谷壳和水，配制成质量含量为：麦麸3～5％、玉米粉15～20％、谷壳20～30％、余量为水的固体培养基；再将固体培养基进行消毒处理；然后B步的液体发酵物接种于固体培养基中，接种时液体发酵物与固体培养基的质量比为1∶10～15；接种后，在25℃～30℃、相对湿度90％以上、自然光照下、通气培养2～3天，得固体发酵物；
D、制剂的制备：
用硅藻土、硫磺和米糠，配制成质量含量为：硅藻土20～30％、硫磺：0.1％、余量为米糠的促进剂；将C步得到的固体发酵物，在35～40℃温度下，干燥24～48小时后，按固体培养物：促进剂＝10:2～3的质量比加入促进剂，混匀后，粉碎过60目筛，测定孢子含量，菌株Th-192的孢子含量达到1×108个/克即为合格的木霉木霉菌制剂。
3、根据权利要求2所述的一种制备防治作物土传病害的木霉菌制剂的方法其特征在于，所述的液体培养基进行消毒处理的具体做法为：121℃、15磅下高温加压消毒30～40分钟；固体培养基进行消毒处理的具体做法为121℃、15磅下高温加压消毒120～150分钟。
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