CN1244683C - 短枝束孢霉菌 - Google Patents
短枝束孢霉菌 Download PDFInfo
- Publication number
- CN1244683C CN1244683C CN 200310116787 CN200310116787A CN1244683C CN 1244683 C CN1244683 C CN 1244683C CN 200310116787 CN200310116787 CN 200310116787 CN 200310116787 A CN200310116787 A CN 200310116787A CN 1244683 C CN1244683 C CN 1244683C
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- present
- fermentation
- brachyplast
- bundle
- bundle spore
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
Images
Landscapes
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
本发明涉及微生物技术领域，特别是涉及一种其发酵物具有药用、保健功能的微生物。本发明所述的短枝束孢霉菌命名为短枝束孢霉Ym 35852Calcarisporium sp.Ym 35852，现保藏在国家知识产权局指定的保藏单位，保藏编号为CCTCC NO：M203064。本发明是采用萝芙木植物体中的内生真菌作为发酵获取神经酰胺化合物的出发菌株。该菌株是寻找人类抗肿瘤及皮肤疾病药用成分生物资源的重要微生物。
Description
技术领域
本发明涉及微生物技术领域，特别是涉及一种其发酵物具有药用、保健功能的微生物。
背景技术
神经酰胺(Ceramide)类化合物，是一类具有药用、保健功能的化合物，其中部分化合物能够保湿和抑制黑色素生成、防止皮肤粗糙，用于化妆或皮肤学方面对皮肤、毛发、指甲和睫毛进行处理或治疗和保护。此类化合物用微生物发酵方式获得尚未见报道。
发明内容
本发明的目的是提供一种其发酵物具有药用、保健功能的微生物一短枝束孢霉菌。
本发明所述的短枝束孢霉菌命名为短枝束孢霉Ym 35852 Calcarisporiumsp.Ym 35852，现保藏在国家知识产权局指定的保藏单位，保藏编号为CCTCC NO：M203064。
本发明所述的短枝束孢霉菌系从夹竹桃科植物云南萝芙木Rauwolfiayunnanaensis Tsiang植物活体中分离获得的。现保藏在国家知识产权局专利局保藏单位保藏，保藏单位名称：中国典型培养物保藏中心，保藏日期为2003年8月6日，保藏编号为M203064。
本发明所述的YM35852菌株的显微形态特征：
1、无性世代 菌丝无色有隔膜。分生孢子梗粗糙、无色或有色素。较大的梗轮枝状分枝，初生的分枝通常变成细长的造孢细胞；分生孢子(合轴孢子)无色光滑，单孢，长圆形，单个着生分生孢子梗分枝顶部的瘤状齿上，形成疏散的簇。5.0～6.25×2.5～3.75微米。
2、有性世代 未发现。
本发明所述的短枝束孢霉菌的固体培养特征：
1、PDA培养基28℃培养4天，菌落直径47mm，7天蔓延。菌落圆形，灰褐色，中央稍带黄色，绒絮状，后期有粉状，致密较厚，边缘整齐，有隆起。背面黑褐色。
2、麦芽汁培养基28℃培养4天，菌落直径38mm，7天49mm，11天蔓延。菌落圆形，灰白色，带少量黑色颗粒，绒粉状，边缘不整齐，扁平较紧密。背面黑色。
3、察贝克培养基28℃培养4天，菌落直径38mm，7天54mm，11天蔓延。菌落近圆形，边缘不整齐，灰褐色，绒絮状，紧密。背面褐色。
本发明所述的短枝束孢霉菌YM35852菌株液体发酵培养：
1、培养基PDA摇瓶培养时间5～7天。培养温度28℃±2℃。
2、发酵培养特征：培养第1天，菌种有零星的白色菌丝点；培养第2天，长满白色菌丝；培养第3天，发酵液菌丝体密集，菌丝体呈淡褐色；培养第4天，长满深黑褐色菌丝体，发酵液粘稠，培养第5～7天，发酵液菌丝体密集成块状，黑褐色菌丝体。
3、YM35852菌株液体发酵5～7天后，对发酵液进行化学提取、柱层析分离纯化，得到1个抗皮肤致病菌及人骨髓白细胞肿瘤细胞活性化合物。所得化合物目前结构尚不明确。
本发明所述的短枝束孢霉菌YM35852菌株液体发酵提取工艺为：菌种→试管斜面→种子培养→发酵培养→发酵物提取→柱层析→混合化合物→纯化→单体化合物。
上述步骤中，发酵原料为马铃薯葡萄糖培养基(PDA)。本工艺适合于半知菌类丛梗孢科丝状真菌类微生物。
上述的YM35852液态发酵工艺中，发酵条件参数如下：
(1)发酵方式：液态发酵。
(2)菌种斜面：试管斜面菌种培养采用马铃薯葡萄糖固体培养基(固体PDA)。
(3)种子培养：种子培养为马铃薯葡萄糖液体培养基(液体PDA)。
马铃薯葡萄糖培养基(PDA)制备：取新鲜马铃薯200克，去皮切成小块，加水1升煮沸30分钟，过滤弃马铃薯，滤夜加水补足至1升，加入葡萄糖20克，PH自然。
上述马铃薯葡萄糖培养基中加入琼脂15克，即为固体PDA培养基。
(4)发酵培养：发酵的培养基为马铃薯葡萄糖液体培养基(液体PDA)，PH自然。
(5)培养时间：试管斜面菌种活化培养5天，种子摇床培养时间72～96小时，发酵培养时间5～7天。
(6)培养温度：试管斜面菌种培养温度28℃±1℃，种子摇床培养温度28℃±2℃，发酵培养温度为28℃±2℃。
(7)发酵物提取：发酵完毕，分别收集发酵液和菌体。按常规化学提取方法，用工业己酸己酯分别提取3次合并抽干，得膏状粗提化合物。
(8)分离化合物：采用硅胶(Silica G)柱层析方法分离纯化获得神经酰胺(Ceramide)化合物。
本发明是采用萝芙木植物体中的内生真菌作为发酵获取神经酰胺化合物的出发菌株。它是以马铃薯葡萄糖培养基(PDA)为原料，通过液态发酵方式，采用组合化学手段，分离提取神经酰胺(Ceramide)有效成分的优良菌株YM35852短枝束孢霉属(Calcarisporium sp.)。该菌株是寻找人类抗肿瘤及皮肤疾病药用成分生物资源的重要微生物。用本菌株发酵液分离提取的神经酰胺是新开发出来的高效持久的补水保湿成分，与现在通用的保湿成分原理完全不同，它能与皮肤角质层结构相近，能很快渗入皮肤，和角质层中的水分结合，形成网状结构，在皮肤表面形成一层保水膜，在为细胞体供水份和养份的同时锁住水份，特别适合干性、成熟或被阳光损伤的皮肤。可以通过使用含神经酰胺的外用膏类产品，达到防止过敏性皮肤病的目的和抑制黑色素褐斑的效果。能诱导肝肿瘤Be17402细胞凋亡：采用MTT法、荧光染色、流式细胞术、琼脂糖凝胶电泳、Western blot.方法，结果表明：所提取的神经酰胺对Be17402细胞生长抑制的IC50值为14.28μmol-L-1。细胞核浓缩，荧光明显增强；DNA呈现典型″梯型″变化；p53蛋白表达呈下降趋势；Bcl-2蛋白表达明显降低；Bax蛋白表达无明显改变。
附图说明
图1为YM35852真菌菌丝体及分生孢子梗(200X)。
图2为YM35852真菌分生孢子形态(400X)。
具体实施方式
本发明实施例：
取编号YM35852菌种，在无菌条件下(无菌室或超净工作台)，用接种针挑取少许菌种，转接于已灭菌的固体PDA培养基试管(18×180mm)中，置培养箱内28℃±1℃活化培养5天。
取出活化5天的菌种，在无菌条件下，以同样方式接入活化好的菌种到已灭菌的种子液体PDA培养基中，在28℃±2℃下摇床培养72～96小时，即为YM35852种子。
发酵采用500毫升玻璃三角瓶，装入配制好的液体PDA培养基100毫升，15磅灭菌30分钟后，取出待冷却至30℃。在无菌条件下，取YM35852种子，接种于装有100毫升液体PDA培养基的500毫升玻璃三角瓶中，种子接种量为5～10％(v/w)，置28℃±2℃通气培养5～7天。在发酵期间，注意发酵室温度变化，检查有无染菌现象。
发酵完毕，分别收集发酵液和菌体。用工业己酸己酯萃取发酵液3次，合并抽干；菌体用工业己酸己酯浸泡过夜3次，合并抽干。得膏状粗提化合物。
分离化合物：粗提化合物采用硅胶(Silica G)柱层析，分别用三氯甲烷：甲醇和石油醚∶己酸己酯＝95∶5洗脱，分离纯化获得神经酰胺(Ceramide)化合物。该化合物按0.2mg/ml剂量，对人骨髓白血病细胞生长抑制率达到73.33％。
本发明所述菌株的18SRNA部分序列分析如下(700bp)：
TGTTACGAACACCGCAACAGCTTTCGCTGGCGGACGGACTATATCTTAGGCCTGCGTGCGCAAGCCCA
CCCCTATCTAGTCTCTGAACCTTCCCCCTATAACGAGGGGGCTTGGCTGCGAGTGGCCCAACCCTCCA
GCAGTGTTACCGTACCCGGAGCAGTTACGCCCGGCCGCCGCGCCTATTTCTAGGGCGGTTTGGTCGCT
GGAGGTTTAAGGGTTTTCCCGCACTTTAGGGATGTCGCCGCTCCGTCTAGGGGAGCGACTAGCGGTCT
TAGGTACACCACCTTCCTGTAGACACAGGCCGCTTTCGGGGGCAGAGACGCTGCGGAATCTTGTTTAC
CCCTGGTGGTGCCCTTCCGTCAATTTCTTTAAGTTTCAGCCTTGCGACCATACTCCCCCCAGAACCCA
AAGACTTTGATTTCTCGTAAGGTGCCGAACGAGTCAAAAAATAACATCGTCCGATCCCTAGTCGGCAT
AGTTTATGGTTAAGACTACGACGGTATCTGCAGGTACCCCGCGGCTTTTCAGCGGCGGCTCGACTATA
TTTTAAGGGCGCTACAGCGGAGCGCTCCCACCGACATTTAGTCTGTGAACTGCATCCTGGCGCCCCGA
GGCGCCGTACGGACTTGGCTGCGGATTGTCCAATCCCTCACACTATTACGACTCGCCGCTATTTCTAG
CCGCGAGGTGTGGTGAGGGC。
Claims (1)
1、一种短枝束孢霉菌，其特征是命名为短枝束孢霉Ym 35852Calcarisporium sp.Ym 35852，现保藏在国家知识产权局指定的保藏单位，保藏编号为CCTCC NO：M203064。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN 200310116787 CN1244683C (zh) | 2003-11-21 | 2003-11-21 | 短枝束孢霉菌 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN 200310116787 CN1244683C (zh) | 2003-11-21 | 2003-11-21 | 短枝束孢霉菌 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN1618951A CN1618951A (zh) | 2005-05-25 |
| CN1244683C true CN1244683C (zh) | 2006-03-08 |
Family
ID=34760771
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN 200310116787 Expired - Fee Related CN1244683C (zh) | 2003-11-21 | 2003-11-21 | 短枝束孢霉菌 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN1244683C (zh) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP2630961B1 (en) * | 2006-11-02 | 2014-11-26 | Aureo Co., Ltd. | Agent for promoting healing of a wound of a living body |
-
2003
- 2003-11-21 CN CN 200310116787 patent/CN1244683C/zh not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN1618951A (zh) | 2005-05-25 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| de Azeredo et al. | Yeast communities associated with sugarcane in Campos, Rio de Janeiro, Brazil | |
| CN114410481B (zh) | 一株棘孢木霉及其应用 | |
| CN107974427B (zh) | 一株具有抑菌活性的海洋链霉菌 | |
| Rai et al. | Antimicrobial activity of four wild edible mushrooms from Darjeeling hills, West Bengal, India | |
| CN106497852B (zh) | 一种防治植物真菌病害的伯克霍尔德氏菌菌株es-89及培养方法和应用 | |
| CN113801808B (zh) | 一株阿比科恩链霉菌及其应用 | |
| CN1232632C (zh) | 蝉拟青霉新菌株apc－20及其人工培养发酵方法 | |
| CN117887591B (zh) | 楚雄牛肝菌促生菌株CxBeF11及应用 | |
| CN101265451A (zh) | 蛇足石杉(Huperzia Serrata (Thunb.)Trev)的一种内生真菌 | |
| CN108220211B (zh) | 一株嗜油不动杆菌nmb17及其在植物病害防治中的应用 | |
| CN105349431A (zh) | 一种丹参内生真菌及其应用 | |
| CN1244683C (zh) | 短枝束孢霉菌 | |
| CN100412186C (zh) | 木蹄层孔菌及液体深层发酵制备木蹄层孔菌菌体的方法 | |
| CN111440731B (zh) | 一种枸杞内生轮状镰刀菌菌株及其应用 | |
| CN115197853A (zh) | 内生菌Epicoccum thailandicumLF-28菌株及其应用 | |
| CN1244682C (zh) | 镰孢霉菌 | |
| CN114940948A (zh) | 一种松口蘑、松茸菌丝体发酵培养基及发酵液的制备方法 | |
| CN104830695B (zh) | 具有诱导丹参毛状根酚酸积累作用的内生菌及其用途 | |
| CN101177666A (zh) | 产紫杉醇的新菌种及其选育和制备紫杉醇的方法 | |
| CN1168820C (zh) | 灯盏细辛内生真菌 | |
| CN100497589C (zh) | 尖镰孢霉 | |
| CN1256424C (zh) | 元江黑孢菌 | |
| CN1209462C (zh) | 一种抗结核分枝杆菌的黑蛋巢菌代谢产物及其制备方法 | |
| CN108707555A (zh) | 高产富含莫纳可林k的红曲霉菌株及其应用 | |
| CN115820425B (zh) | 一种能提高甘草生长及耐盐性的dse菌株及其应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| C19 | Lapse of patent right due to non-payment of the annual fee | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |