CN1243768C - 甾体皂甙防治老年性痴呆的用途及新的甾体皂甙 - Google Patents
甾体皂甙防治老年性痴呆的用途及新的甾体皂甙 Download PDFInfo
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Abstract
本发明涉及式II甾体皂甙及含有所述式II甾体皂甙的药物组合物。
Description
发明领域
本申请是1997年9月26日向中国国家知识产权局提交的中国专利申请号为97119680.X的分案申请。本发明涉及新的甾体皂甙类化合物，含有它们的药物组合物及其医药用途。
背景技术
老年性痴呆是老年人多发性疾病，是神经病学中一组原因未明的进行性精神功能衰退性疾患。其主要包括阿尔茨海默氏痴呆(Alzheimer′sDisease)、血管性痴呆、混合型和其他型痴呆。据报道，国外老年性痴呆的患病率，在65岁以上的老人中占3-8％，在80岁以上的老年人中高达20％。最近上海与美国协作进行的老年性痴呆调查结果表明，上海地区65岁以上的老人中的痴呆总患病率为4.36％。随着社会的进步，人类的寿命延长，世界各国将先后进入老龄化社会，患病人数也将大大增加。老年痴呆已成为一个亟待解决的医学和社会问题。
近年，研究开发防治老年性痴呆的药物受到广泛的重视。现在研究开发的防治老年性痴呆的药物主要为胆碱酯酶抑制剂(如四氢氨基吖啶、石杉碱甲)、血管扩张剂(如麦角溴烟酯)、钙通道阻滞剂(如尼莫地平)和神经生长因子等；虽有新药不断问世，但尚未得到理想的治疗药物。研究开发防治老年性痴呆的有效药物，将具有重大的社会意义和经济效益。
甾体皂甙是一类由螺甾烷类化合物衍生的寡糖甙。甾体皂甙在植物界分布很广泛，单子叶植物和双子叶植物中均有分布，尤以薯蓣科、百合科、玄参科、菝葜科、龙舌兰科等植物中分布较普遍，如植物穿龙薯蓣(Dioscorea nipponica Makino)、黄山药(Dioscorea panthaica Prainet Burk)、大蒜(Allium sativum L.)、知母(Anemarrhena asphodeloidesBge.)、重楼(Paris polyphylla)、玉竹(polygonatum odoratum(Mill)Drace)、麦冬(Ophiopogon japonicus)、番麻(Agave americana L.)等。甾体皂甙以其甙元作为合成甾体避孕药和激素类药物的原料而著名，比其直接作为药用更为重要。但某些甾体皂甙也具有抗肿瘤、降血糖、免疫调节、降胆固醇、抗菌、防治心血管疾病等活性，如中药重楼中的皂甙I和皂甙IV对P388、L-1210、KB细胞有细胞毒作用；知母中伪原知母皂甙AIII和原知母皂甙AIII对四氢吡啶糖尿病模型和链脲佐菌素糖尿病模型的小鼠口服给药有降低血糖的作用；山麦冬中的皂甙可增加小鼠的免疫功能；前苏联学者发现甾体皂甙可降低胆固醇，其中螺甾皂甙比呋甾皂甙的活性强；由于甾体皂甙能与细菌细胞膜中胆甾醇形成复合物而具抗菌活性；盾叶薯蓣水溶性皂甙可减轻心绞痛、调节新陈代谢，治疗冠心病有效。
发明目的
本发明的目的是提供一类新的防治老年性痴呆的药物，其具有优良的疗效且副作用很低。
发明简述
本发明人经广泛深入的研究，出人意料地发现下面式I所代表的甾体皂甙可以扩张脑基底动脉，改善脑循环代谢；可以明显地增加烟碱样乙酰胆碱受体(N受体)的数量；可以促进神经细胞生长；可以清除自由基。尤其是通过SY-SY5Y及M10两个细胞系的培养实验发现，本发明化合物能有效地增加N受体的数量，其作用强度与烟碱类似，且具有量效关系。由此该式I化合物可用作防治痴呆药物。本发明基于上述发现得以完成。
本发明第一方面涉及通式(I)甾体皂甙化合物及其立体异构体用于防治老年性痴呆
通式I
其中
R1为氢，-OH，-O--xyl，-O-Ara-Rha，-O-Fuc-Rha，-O-Ara-Rha，
R2为氢，-OH，-O-Fuc，-O-Rha，或-O-Glu；
R3为-OH，-OCOCH3，-OCOC15H31，或氧代(＝O)，或
-O-Gal，
-O-Glu，
-O-Gal-Glu，
-O-Glu-Glu，
-O-Glu-Ara，
-O-Fuc-Glu，
-O-Rha，
-O-Rha-Glu，
-O-Glu-Glu-Glu，
-O-Glu-Rha，
-O-Man-Glu
-O-Gal-Glu-Glu
-O-Gal-Glu-Gal，
R4为氢，-OH，或-OSO3Na，
R5为氢，羟基，-O-Glu，或不存在，
R6为氢，OH，氧代(＝O)，-O-Qui-Rha，或-O-Qui-Xyl；
R12为氢，-OH，或氧代(＝O)；
R14为氢，或-OH；
R15为氢，或-OH；
R22为-OH，O(CH2)nCH3，n＝0～3，或不存在
R23为氢，或-OH；
R27为-CH3，-CH2OH，或＝CH2；
X为O，或NH；
表示单键或双键，
Y为一根直键或不存在，
Z为Glu或不存在。
条件是不包括R1＝R2＝R4＝R6＝R12＝R14＝R15＝R23＝H，R3＝β-OH，R5＝β-H，X＝O，为单键，Y为一直键，R22不存在，Z不存在，R27为-CH3，C25为S构型的式I化合物。
本发明第二方面涉及的是由通式(II)代表的新的甾体皂甙化合物
通式II
其中
5-6位虚线表示不存在双键，5位为βH
C25为S构型
R＇15为氢
R＇2为α-OH或β-OH
R＇3为
R＇22为OH，或O(CH2)nCH3，n＝0～3，或R＇22不存在同时20-22位虚线表示存在双键；
或
R＇2为氢
R＇3为-O-Gal-Glu，
5-6位虚线表示不存在双键，5位为βH
C25为S构型
R＇15为α-OH或β-OH
R＇22为OH，或O(CH2)nCH3，n＝0-3，或R＇22不存在同时20-22位虚线表示存在双键；
或
R＇2为氢
5-6位虚线表示存在双键
R＇15为氢
C25为R，或S构型
R＇22为O(CH2)nCH3，n＝0-3，或R＇22不存在同时20-22位虚线表示存在双键
R＇3为-O-Gal，
-O-Glu，
或
本发明再一方面涉及的是用于防治老年性痴呆的药物组合物，其包括作为活性成分的通式(I)化合物及与其混合的药用载体。
本发明再一方面涉及通式(I)化合物在制备用于防治老所性痴呆药物中的用途。
本发明再一方面涉及防治老年性痴呆的方法，该方法包括：将防治有效量的通式(I)化合物或含有它的药物组合物给药于需防治的宿主。
本发明详细描述
附图说明：
图1表示本发明化合物III对KCl引起的大鼠主动脉收缩的影响。
图2表示本发明化合物III对大鼠脑血流量的影响。
图3表示本发明化合物III对N受体的影响。
图4表示本发明化合物III对N受体的影响。
根据本发明，本发明首先涉及通式(I)化合物及其立体异构体用于防治老年性痴呆，
通式I
其中
R1为氢，-OH，-O-β-xyl，-O-Ara-Rha，-O-Fuc-Rha，-O-Ara-Rha，
R2为氢，-OH，-o-Fuc，-o-Rha，或-o-Glu；
R3为-OH，-OCOCH3，-OCOC15H31或氧代(＝O)，或
-O-Gal，
-O-Glu，
-O-Gal-Glu，
-O-Glu-Glu，
-O-Glu-Ara，
-O-Fuc-Glu，
-O-Rha，
-O-Rha-Glu，
-O-Glu-Glu-Glu，
-O-Glu-Rha，
-O-Man-Glu，
-O-Gal-Glu-Glu，
-O-Gal-Glu-Gal，
R4为氢，-OH，或-OSO3Na，
R5为氢，羟基，-O-Glu，或不存在
R6为氢，OH，氧代(＝O)，-O-Qui-Rha，或-O-Qui-xyl；
R12为氢，-OH，或氧代(＝O)；
R14为氢，或-OH；
R15为氢，或-OH；
R22为-OH，或O(CH2)nCH3，n＝0-3，或不存在；
R23为氢或-OH；
R27为-CH3，-CH2OH，或＝CH2；
X为O或NH；
Y为一根直键或不存在，
Z为Glu或不存在；
表示单键或双键；
条件为不包括R1＝R2＝R4＝R6＝R12＝R14＝R15＝R23＝H，R3为β-OH，R5为β-H，X＝O，Y为一直键，R22不存在，Z不存在，R27为-CH3，为单键，C25为S构型的式I化合物。
根据本发明，本发明再一方面涉及的是通式(II)化合物
通式II
其中
5-6位虚线表示不存在双键，5位为βH
C25为S构型
R＇15为氢
R＇2为α-OH或β-OH
R＇22为OH，或O(CH2)nCH3，n＝0～3，或R＇22不存在同时20-22位虚线表示存在双键；
或
R＇2为氢
R＇3为-O-Gal-Glu
5-6位虚线表示不存在双键，5位为βH
C25为S构型
R＇15为α-OH或β-OH
R＇22为OH，或O(CH2)nCH3，n＝0-3，或R＇22不存在同时20-22位虚线表示存在双键；
或
R＇2为氢
5-6位虚线表示存在双键
R＇15为氢
C25为R，或S构型
R＇22为O(CH2)nCH3，n＝0-3，或R＇22不存在同时20-22位虚线表示存在双键
R＇3为-O-Gal，
-O-Glu，
应理解，通式(I)和(II)化合物中存在着手性碳原子，由此产生的通式(I)和(II)化合物的立体异构体也包括在本发明通式(I)化合物范围内。
在通式(I)和(II)中，出现的缩写如下定义：
Glu：葡萄糖(glucose)
Gal：半乳糖(galactose)
Rha：鼠李糖(rhamnose)
Xyl：木糖(xylose)
Ara：阿拉伯糖(arabinose)
Fuc：夫糖(fucose)
Man：甘露糖(mannose)
Qui：鸡纳糖(quinovose)
Api：芹糖(apiose)
根据本发明，优选式(I)化合物为其中R1＝R2＝R4＝R6＝R12＝R14＝R15＝R23＝H，R3为-O-β-Gal2-β-Glu，R5＝β-H，R27＝-CH3，C25为S构型，X为O，Z为-β-Glu，Y不存在，R22不存在，C20-C22位为一个双键，其它为单键的化合物。
根据本发明，优选式(I)化合物为其中R1＝R2＝R4＝R6＝R12＝R14＝R15＝R23＝H，R3为-O-β-Glu2-β-Glu，R5＝β-H，R27＝-CH3，C25为S构型，X为O，Z为-β-Glu，Y不存在，R22不存在，C20-C22位为一个双键，其它为单键的化合物。
根据本发明，优选式(I)化合物为其中R1＝R2＝R4＝R6＝R12＝R14＝R15＝R23＝H，R22为OH，R3为-O-β-Gal2-β-Glu，R5＝β-H，C25为S构型，R27＝-CH3，X为O，Z为-β-Glu，Y不存在，为单键化合物。
根据本发明，优选式(I)化合物为其中R1＝R2＝R4＝R6＝R12＝R14＝R15＝R23＝H，R22为-OCH3，R3为-O-β-Gal2-β-Glu，R5＝β-H，C25为S构型，R27＝-CH3，X为O，Z为-β-Glu，Y不存在，为单键的化合物。
根据本发明，优选式(I)化合物为其中R1＝R2＝R4＝R6＝R12＝R14＝R15＝R23＝H，R3为
R5＝α-H，R22不存在，R27＝-CH3，X＝O，Y为一根直键，Z不存在，皆为单键，C-25住为R构型的化合物。
根据本发明，优选式(I)化合物为其中R1＝R2＝R4＝R6＝R12＝R14＝R15＝R23＝H，R3为
R5＝α-H，R22不存在，R27＝-CH3，X＝O，Y为一根直键，Z不存在，皆为单键，C-25位为S构型的化合物。
根据本发明(I)化合物为其中R1＝R4＝R6＝R12＝R14＝R15＝R23＝H，R2＝-α-OH，R3为
R5＝α-H，R22不存在，R27＝-CH3，X＝O，Y为一根直键，皆为单键，Z不存在，C-25位为R构型的化合物。
根据本发明，优选式(I)化合物为其中R1＝R4＝R6＝R12＝R14＝R15＝R23＝H，R2＝α-OH，R3为
R5＝α-H，R22不存在，R27＝-CH3，X＝O，Y为一根直键，皆为单键，Z不存在，C-25位为S构型化合物。
根据本发明，优选式(I)化合物为其中R1＝R2＝R4＝R6＝R12＝R14＝R15＝R23＝H，R3为
R22不存在，R27＝-CH3，X＝O，Y为一根直键，Z不存在，C-25位为R构型，R5不存在，C5-6位为一个双键，其它为单键的化合物。
根据本发明，优选式(I)化合物为其中R1＝R2＝R4＝R6＝R12＝R14＝R15＝R23＝H，R5不存在，R22不存在，R27＝-CH3，R3为
X＝O，Y为一根直键，Z不存在，C-25位为S构型，C5-6位为一个双键，其它
为单键的化合物。
根据本发明，优选式(I)化合物为其中R1＝R4＝R6＝R12＝R14＝R15＝R23＝H，R2＝-α-OH，R3为
R22不存在，R27＝-CH3，X＝O，Y为一根直键，Z不存在，C-25位为R构型，R5不存在，C5-6位为一个双键，其它为单键的化合物。
根据本发明，优选式(I)化合物为其中R1＝R4＝R6＝R12＝R14＝R15＝R23＝H，R2＝α-OH，R3为
R22不存在，R27＝-CH3，X＝O，Y为一根直键，Z不存在，C-25位为S构型，R5不存在，C5-6位为一个双键，其它为单键的化合物。
根据本发明，本发明还涉及下面的式II化合物及其在制备用于预防和/或治疗老年性痴呆产品中的用途，
通式II
其中
5-6位虚线表示不存在双键，5位为βH
C25为S构型
R＇15为氢
R＇2为α-OH或β-OH
R＇3为
R＇22为OH，或O(CH2)nCH3，n＝0～3，或R＇22不存在同时20-22位虚线表示存在双键；
或
R＇2为氢
5-6位虚线表示存在双键
R＇15为氢
C25为R，或S构型
R＇22为O(CH2)nCH3，n＝0-3，或R＇22不存在同时20-22位虚线表示存在双键
R＇3为-O-Gal，
-O-Glu，
或
根据本发明，具体优选如下的通式(I)化合物：
(25S)-26-O-β-D-吡喃葡萄糖基-22-羟基-5β-呋甾-3β、26-二醇-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基(1→2)-β-D-吡喃半乳糖甙；
(25S)-26-O-β-D-吡喃葡萄糖基-22-羟基-5β-呋甾-2β、3β、26-三醇-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基(1→2)-β-D-吡喃半乳糖甙；
(25R)-26-O-β-D-吡喃葡萄糖基-22-羟基-5-烯-呋甾-3β、26-二醇-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)[β-D-葡萄吡喃糖基(1→3)]-β-D-吡喃葡萄糖甙；
(25R)-26-O-β-D-吡喃葡萄糖基-22-羟基-5-烯-呋甾-3β、26-二醇-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)[α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)]-β-D-吡喃葡萄糖甙；
(25R)-26-O-β-D-吡喃葡萄糖基-22-羟基-5-烯-呋甾-3β、26-二醇-3-O-β-D-吡喃半乳糖基(1→2)[β-D-吡喃半乳糖基(1→3)]-β-D-吡喃葡萄糖甙；
(25R)-26-O-β-D-吡喃葡萄糖基-22-羟基-5-烯-呋甾-3β、26-二醇-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)-β-D-吡喃葡萄糖甙；
(25S)-26-O-β-D-吡喃葡萄糖基-5β-呋甾-20(22)-烯-3β、26-二醇-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基(1→2)-β-D-吡喃半乳糖甙；
根据本发明，具体优选如下的通式(II)化合物：
(25S)-26-O-β-D-吡喃葡萄糖基-22-羟基-5β-呋甾-2β，3β，26-三醇-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基(1→2)-β-D-吡喃半乳糖甙；
(25S)-26-O-β-D-吡喃葡萄糖基-22-甲氧基-5β-呋甾-2β，3β，26-三醇-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基(1→2)-β-D-吡喃半乳糖甙；
(25S)-26-O-β-D-吡喃葡萄糖基-5β-呋甾-20(22)-烯-2β，3β，26-三醇-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基(1→2)-β-D-吡喃半乳糖甙。
(25R)-26-O-β-D-吡喃葡萄糖基-22-羟基-5-烯-呋甾-3β，26-二醇-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基(1→4)-β-D-吡喃半乳糖甙；
(25R)-26-O-β-D-吡喃葡萄糖基-22-甲氧基-5-烯-呋甾-3β，26-二醇-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基(1→4)-β-D-吡喃半乳糖甙；
(25R)-26-O-β-D吡喃葡萄糖-5-烯-呋甾-20(22)-烯-3β，26-二醇-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基(1→4)-β-D-吡喃半乳糖甙。
根据本发明，本发明还涉及药物组合物，其包括作为活性成分的通式(I)化合物或其立体异构体及与其混合的药用载体。
根据本发明，本发明还涉及药物组合物，其包括作为活性成分的通式(II)化合物及与其混合的药用载体。
根据本发明，本发明再一方面涉及通式(I)化合物或其立体异构体在制备用于防治老年性痴呆疾病或症状的药物中的用途。
根据本发明，本发明还涉及防治老年性痴呆疾病或症状的方法，其包括将治疗有效量的通式(I)化合物或其立体异构体给药于需治疗的患者。
本发明中所用术语“老年性痴呆”是指阿耳茨海默病，血管性痴呆、混合型或其它型痴呆。
本发明的通式(I)或通式(II)化合物来自于植物，如知母，黄山药，大蒜，重楼，玉竹，麦冬，番麻等。其可通过从上述植物中提取得到或通过结构修饰得到。
工业实用性
由通式(1)化合物制成的常规药物剂型可用作药物。所述药物的制剂用常用的稀释剂(例如填料、疏松填料、粘合剂、湿润剂、崩解剂，表面活性剂、润滑剂)或赋性剂配制。药物制剂可以根据治疗目的从各种给药剂型中进行选择。一般的给药剂型是，例如片剂、丸剂、粉剂、溶液剂、悬浮剂、乳剂、颗粒剂、胶囊、栓剂、注射用制剂(例如溶液剂、悬浮剂等)等。为了将给药单元剂型制成片剂，可以广泛使用本领域公知的各种载体。关于载体的例子是，例如赋性剂，如乳糖、白糖、氯化钠、葡萄糖、尿素、淀粉、碳酸钙、高岭土、结晶纤维素、硅酸等；粘合剂，如水、乙醇、丙醇、普通糖浆、葡萄糖溶液、淀粉溶液、明胶溶液、羧甲基纤维素、紫胶、甲基纤维素、磷酸钾、聚乙烯吡咯烷酮等；崩解剂，例如干燥淀粉、藻酸钠、琼脂粉、褐藻淀粉、碳酸氢钠、碳酸钙、聚氧乙烯山梨糖醇酐脂肪酸酯、十二烷基硫酸钠、单硬脂酸甘油酯、淀粉、乳糖等；崩解抑制剂，例如白糖、三硬脂酸甘油酯、可可脂、氢化油等吸收促进剂，例如季铵盐、十二烷基硫酸钠等；湿润剂，例如甘油、淀粉等；吸附剂，例如淀粉、乳糖、高岭土、膨润土、胶体硅羧酸等；润滑剂，例如精细滑石、硬脂酸盐、硼酸粉、聚乙二醇等。还可以将片状制剂进一步制成由常规的片剂包衣所包衣的片，例如糖包衣片、明胶膜包衣片、肠溶包衣片、膜包衣片、或双层片和多层片。为了将给药单元制成丸剂，可以广泛使用本领域公知的各种载体。关于载体的例子是，例如赋性剂，如葡萄糖、乳糖、淀粉、可可脂、氢化植物油、高岭土、滑石等；粘合剂，如粉末状阿拉伯胶、粉末状黄蓍胶、明胶、乙醇等；崩解剂，如褐藻淀粉、琼脂等。为了将给药单元制成栓剂，可以广泛使用本领域公知的各种载体。关于载体的例子是，例如聚乙二醇、可可脂、高级醇、高级醇的酯、明胶、半合成甘油酯等。为了将给药单元制成胶囊，将有效成分通式(I)化合物与上述的各种载体混合，并将由此得到的混合物置于硬的明胶胶囊或软胶囊中。为了将给药单元制成注射用制剂，将溶液剂。乳剂和悬浮剂灭菌，这些制剂最好是与血液等渗的，并且还可以使用本领域常用的所有稀释剂，例如，水、乙醇、聚乙二醇、1，3-丙二醇、乙氧基化的异硬脂醇、多氧化的异硬脂醇、聚氧乙烯山梨糖醇酐脂肪酸酯等。另外，为了制备等渗注射液，可以向注射用制剂中添加适量氯化钠、葡萄糖或甘油，此外，还可以添加常规的溶解添加剂、缓冲剂、局部麻醉剂等。此外，如需要，也可以向药物制剂中添加着色剂、防腐剂、香料、矫味剂、甜味剂或其它材料。
在本发明的药物制剂中，活性成分通式(I)化合物的含量并没有特别的限制，可以从大的范围内进行适当地选择。
本发明的药物制剂的给药方法没有限制，可以根据剂型、病人的年龄、性别和其它条件的差异、症状的程度等进行给药。例如，片剂、丸剂、溶液剂、悬浮剂、乳剂、颗粒剂和胶囊进行口服给药。而注射用制剂可以单独地或与常规的输液用溶液(例如葡萄糖或氢基酸溶液)混合进行血管内给药，如需要，可将它们单独地进行肌肉内、皮内、皮下、或腹膜内给药。栓剂进行直肠给药。
本发明的药物制剂的剂量可以根据用途、病人的年龄、性别和其它条件的差异、症状的程度等进行适当的选择。
本发明通过下面实施例和药理实验进行进一步详细阐述，但这不意味着对本发明任何限制。
中药知母为百合科(Liliaceae)植物知母Anemarrhenaasphodeloides Bge.的根茎，是临床常用清热泻火、生津润燥中药。我们对知母中的甾体皂甙进行了较系统的提取分离、结构鉴定和活性研究。
实施例I
知母3Kg，以90％EtOH回流提取3次，减压回收EtOH，得浸膏700g。浸膏加水溶解，过滤，得水溶液和水不溶部分。水溶部分浓缩，n-BuOH萃取，减压回收n-BuOH，得浸膏90g。n-BuOH萃取物进行硅胶柱层析，以CHCl3-MeOH-H2O(60∶35∶10下层)洗脱，每份150ml，其中极性较大的流份54-62合并，再进行硅胶柱层析，以溶剂系统CHCl3-MeOH-H2O(60∶30∶10下层)、CHCl3-MeOH-H2O(55∶35∶10下层)依次洗脱，每份100ml，合并流份45-48，除溶剂得1.2g。经制备型HPLC反复分离、纯化，减压蒸除MeOH，冰冻干燥剩余的水，得化合物I(28.0mg)、I(11.8mg)、III(57.4mg)和IV(20.0mg)。
浸膏的水不溶部分用MeOH-CHCl3(1∶1)回流，溶液浓缩得干浸膏38g。此浸膏进行硅胶柱层析，以CHCl3-MeOH-H2O溶剂系统洗脱，粗分为9个组分，其中组分4再进行硅胶柱层析，以CHCl3-MeOH-H2O(60∶30∶10下层)洗脱，TLC检查相同者合并，得13个组分(Fr.1 to Fr.13)。Fr.7中析出白色结晶，此结晶用HPLC(C18柱，MeOH-H2O(90∶10))分得物质V(13.0mg)和VII(11.5mg)，Fr.9中析出的结晶用HPLC(C18柱，MeOH-H2O(80∶20))分为物质VI(10.6mg)和VIII(11.7mg)。物质V、VI、VII、VII1分别为四对差向异构体的混合物，a为25R异构体系列，b为25S异构体。
I：R3＝O-Gal2-Clu Va：25R，R2＝H
II：R3＝O-Clu2-Clu Vb：25S，R2＝H
VIa：25R，R2＝OH
VIb：25S，R2＝OH
III：R3＝O-Gal2-Clu，R22＝OH VIIa：25R，R2＝H
IV：R3＝0-Gal2-Clu，R22＝OCH3 VIIb：25S，R2＝oH
VIIIa：25R，R2＝OH
VIIIb：25S，R2＝OH
实施例II
知母2Kg，水煮提取4次，提取液减压浓缩为流浸膏，加乙醇至含醇75％，静置沉淀。上清液减压回收乙醇，再用n-BuOH萃取，减压回收n-BuOH，得干浸膏550g。n-BuOH萃取物进行反复硅胶柱层析，以CHCl3-MeOH-H2O溶剂系统洗脱，TLC检查合并含化合物III的流份。此流份用Sephadex LH-20进行多次纯化，得化合物III 7.1g。
二.结构鉴定：
化合物I 白色无定形粉末，mp＞226℃(dec)。Liebermann-Burchard反应和Molish反应呈阳性，对Ehrlich试剂亦呈阳性反应。IR(漫反射)cm-1：3368(OH)，2925，1692(Δ20，22)，1075，1039(甙键C-O)。1H-NMR(C5D5N)δ：0.66(3H，S，18-CH3)，0.96(3H，S，19-CH3)，1.01(3H，d，J＝6.8Hz，27-CH3)，1.60(3H，S，21-CH3)，4.82(1H，d，J＝7.8Hz，Glc 1-H)，4.92(1H，d，J＝7.8Hz，Gal 1-H)，5.27(1H，d，J＝7.8Hz，Glc 1-H)，2.46(1H，d，J＝10.3Hz，17-H)。13C-NMR谱数据见表1。化合物I为(25S)-26-O-β-D-葡萄吡喃糖基-5β-呋甾-20(22)-烯-3β、26-二醇-3-O-β-D-葡萄吡喃糖基(1→2)-β-D-吡喃半乳糖甙(知母皂甙B)。
化合物II 白色无定形粉末，mp＞212℃(dec)。Liebermann-Burchard反应和Molish反应呈阳性，对Ehrlich试剂亦呈阳性反应。元素分析：C45H74O18·2.5H2O，计算值(％)：C 57.02，H 8.34；实验值(％)：C56.90，H 8.03。IR(漫反射)cm-1：3354(OH)，2929，2850，1691(Δ20，22)，1075，1037(甙键C-O)。FAB-MS m/z 925(M+Na)+，903(M+H)+，741(M+H-Glc)+，579(M+H-Glc×2)+，417(M+H-Glc×3)+，399(甙元+H-H2O)+，255，185，145。EI-MS m/z 416(甙元)+，398(甙元-H2O)+，344，343，325，287，273，255，217，201，181(基峰)，163，139，109，95。1H-NMR(C5D5N+D2O)δ：0.71(3H，S，18-CH3)，1.01(3H，S，19-CH3)，1.08(3H，d，J＝6.8Hz，27-CH3)，1.68(3H，S，21-CH3)，2.54(1H，d，J＝10.3Hz，17-H)，4.86(1H，d，J＝7.8Hz，Glc 1-H)，4.99(1H，d，J＝7.3Hz，Glc 1-H)，5.49(1H，d，J＝7.3Hz，Glc 1-H)。13C-NMR谱数据见表1。化合物II为(25S)-26-O-β-D-葡萄吡喃糖基-5β-呋甾-20(22)-烯-3β、26-二醇-3-O-β-D-葡萄吡喃糖基(1→2)-β-D-葡萄吡喃糖甙(知母皂甙C)。
化合物III 白色无定形粉末，mp＞243℃(dec)。Liebemann-Burchard反应和Molish反应呈阳性，对Ehrlich试剂亦呈阳性反应。IR(漫反射)cm-1：3348(OH)，2930，2850，1075，1044(甙键C-O)。FAB-MS m/z 943(M+Na)+，903(M+H-H2O)+，741(M+H-H2O-Glc)+，579(M+H-H2O-Glc×2)+，417(M+H-H2O-Glc×2-Gal)+，399(甙元+H-H2O×2)+，255，185，145。EI-MS m/z 740(M-H2O-Glc)+，578(M-H2O-Glc×2)+，416(甙元-H2O)+，415(甙元-H-H2O)+，357，273，217，181，139。1H-NMR(C5D5N)δ：0.85(3H，S，18-CH3)，0.96(3H，S，19-CH3)，1.00(3H，d，J＝6.4Hz，27-CH3)，1.30(3H，d，J＝6.8Hz，21-CH3)，4.79(1H，d，J＝7.8Hz，Glc 1-H)，4.90(1H，d，J＝7.8Hz，Gal 1-H)，5.27(1H，d，J＝7.8Hz，Glc 1-H)。13C-NMR谱数据见表1。化合物III为(25S)-26-O-β-D-葡萄吡喃糖基-22-羟基-5β-呋甾-3β、26-二醇-3-O-β-D-葡萄吡喃糖基(1→2)-β-D-半乳吡喃糖甙(prototimosaponin AIII)。
化合物IV 白色无定形粉末，mp 244℃。Liebermann-Burchard反应和Molish反应呈阳性，对Ehrlich试剂亦呈阳性反应。FAB-MS m/z957(M+Na)+，933(M-H)+，903(M+H-MeOH)+，741(M+H-MeOH-Glc)+，579(M+H-MeOH-Glc×2)+，417(M+H-MeOH-Glc×2-Gal)+，399(甙元+H-MeOH-H2O)+。1H-NMR(C5D5N)δ：0.78(3H，S，18-CH3)，0.95(3H，S，19-CH3)，1.03(3H，d，J＝6.0Hz，27-CH3)，1.16(3H，d，J＝6.6Hz，21-CH3)，3.25(3H，s，22-OCH3)，4.82(1H，d，J＝7.7Hz，Glc 1-H)，4.90(1H，d，J＝7.1Hz，Gal 1-H)，5.27(1H，d，J＝7.7Hz Glc 1-H)。13C-NMR谱数据见表1。化合物IV为(25S)-26-O-β-D-葡萄吡喃糖基-22-甲氧基-5β-呋甾-3β、26-二醇-3-O-β-D-葡萄吡喃糖基(1→2)-β-D-半乳吡喃糖甙(知母皂甙E)。
物质V 白色无定形粉末，mp 271℃(dec)。Liebermann-Burchard反应和Molish反应呈阳性，对Ehrlich试剂呈阴性反应。IR νmax cm-1：3394，2930，1070，988，919，896，847.FAB-MS(positive)m/z 1057(M+Na)+，1035(M+H)+，925(M-Xyl+Na)+，901(M-Xyl-H)+，873(M-Glc+H)+，741(M-Glc-Xyl+H)+，579(M-Xyl-Glc×2+H)+，417(aglycone+H)+，399(aglycone-H2O+H)+.EI-MS m/z 416(aglycone)+，398(aglycone-H2O)+，357，347，344，302，287，273，181，139.
Va：1H-NMR(C5D5N)δ：0.80(s，C-18 CH3)，0.60(s，C-19 CH3)，1.12(d，J＝6.7Hz，C-21 CH3)，0.67(d，J＝5.5HZ，C-27 CH3)，4.86(d，J＝7.3Hz，Gal1-H)，5.17(d，J＝7.9Hz，Glc(inner)1-H)，5.21(d，J＝7.9Hz Xyl 1-H)，5.55(d，J＝7.3Hz，Glc(terminal)1-H).1 3C-NMR谱数据见表2。化合物Va为替告皂甙元-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基(1→2)[β-D-吡喃木糖基(1→3)]-β-D-吡喃葡萄糖基(1→4)-β-D-吡喃半乳糖甙(degalactotigonin)。
Vb：1H-NMR(C5D5N)δ：0.79(s，C-18 CH3)，0.60(s，C-19 CH3)，1.12(d，J＝6.7Hz，C-21 CH3)，1.05(d，J＝7.3Hz，C-27 CH3)，4.86(d，J＝7.3Hz，Gal1-H)，5.17(d，J＝7.9Hz，Glc(inner)1-H)5.21(d，J＝7.9Hz Xyl 1-H)，5.55(d，J＝7.3Hz，Clc(terminal)1-H).1 3C-NMR谱数据见表2。化合物Vb为新替告皂甙元-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基(1→2)[β-D-吡喃木糖基(1→3)]-β-D-吡喃葡萄糖基(1→4)-β-D-吡喃半乳糖甙(diuranthoside A)。
物质VI 白色无定形粉末，mp 247℃(dec)。Liebermann-Burchard反应和Molish反应呈阳性，对Ehrlich试剂呈阴性反应。IR νmax cm-1：3408，2931，2875，1072，987，922，897，847.FAB-MS(positive)m/z1073(M+Na)+，1051(M+H)+，595(M-Xyl-Glc×2+H)+，433(aglycone+H)+，415(aglycone-H2O+H)+.EI-MS m/z 432(aglycone)+，415(aglycone-H2O+H)+，414(aglycone-H2O)+，373，363，360，342，318，303，300，289，271，139，126，115.
VIa：1H-NMR(C5D5N)δ：0.78(s，C-18 CH3)，0.67(s，C-19 CH3)，1.10(d，J＝6.6Hz，C-21 CH3)，0.67(C-27 CH3)，4.90(d，J＝7.7Hz，Gal 1-H)，5.20(d，J＝7.7Hz，Glc(inner)1-H)，5.23(d，J＝7.7Hz Xyl 1-H)，5.57(d，J＝7.7Hz，Glc(terminal)1-H).1 3C-NMR谱数据见表2。化合物VIa为支脱皂甙元-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基(1→2)[β-D-吡喃木糖基(1→3)]-β-D-吡喃葡萄糖基(1→4)-β-D-吡喃半乳糖基(F-gitonin)。
VIb：1H-NMR(C5D5N)δ：0.77(s，C-18 CH3)，0.67(s，C-19 CH3)，1.10(d，J＝6.6Hz，C-21 CH3)，1.05(d，J＝7.1Hz，C-27 CH3)，4.90(d，J＝7.7Hz，Gal1-H)，5.20(d，J＝7.7Hz，Glc(inner)1-H)，5.23(d，J＝7.7Hz Xyl 1-H)，5.57(d，J＝7.7Hz，Glc(terminal)1-H).1 3C-NMR谱数据见表2。化合物VIb为新支脱皂甙元-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基(1→2)[β-D-吡喃木糖基(1→3)]-β-D-吡喃葡萄糖基(1→4)-β-D-吡喃半乳糖甙(知母皂甙F)。
物质VII 白色无定形粉末，mp 242℃。Liebermann-Burchard反应和Molish反应呈阳性，对Ehrlich试剂呈阴性反应。IR νmax cm-1：3394，2934，1069，985，919，896，847.FAB-MS(positive)m/z 1055(M+Na)+，1033(M+H)+，737(M-Glc-Xyl-H)+，577(M-Xyl-Glc×2+H)+，415(aglycone+H)+，397(aglycone-H2O+H)+.EI-MS m/z 414(aglycone)+，396(aglycone-H2O)+，355，345，342，300，282，271，139.
VIIa：1H-NMR(C5D5N)δ：0.79(s，C-18 CH3)，0.85(s，C-19 CH3)，1.13(d，J＝6.7Hz，C-21 CH3)，0.67(d，J＝5.5HZ，C-27 CH3)，4.87(d，J＝7.4Hz，Gal1-H)，5.16(d，J＝7.9Hz，Glc(inner)1-H)，5.22(d，Xyl 1-H)，5.55(d，J＝7.9Hz，Glc(terminal)1-H).1 3C-NMR谱数据见表2。化合物VIIa为薯蓣皂甙元-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基(1→2)[β-D-吡喃木糖基(1→3)]-β-D-吡喃葡萄糖基(1→4)-β-D-吡喃半乳糖甙(aspidistrin)。
VIIb：1H-NMR(C5D5N)δ：0.79(s，C-18 CH3)，0.85(s，C-19 CH3)，1.13(d，J＝6.7Hz，C-21 CH3)，1.05(d，J＝6.7Hz，C-27 CH3)，4.87(d，J＝7.4Hz，Gal1-H)，5.16(d，J＝7.9Hz，Glc(inner)1-H)5.22(d，Xyl 1-H)，5.55(d，J＝7.9Hz，Glc(terminal)1-H).1 3C-NMR谱数据见表2。化合物VIIb为亚莫皂甙元-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基(1→2)[β-D-吡喃木糖基(1→3)]-β-D-吡喃葡萄糖基(1→4)-β-D-吡喃半乳糖甙(3-O-β-lycotetrasoyl yamogenin)。
物质VIII 白色无定形粉末，mp 258℃(dec)。Liebermann-Burchard反应和Molish反应呈阳性，对Ehrlich试剂呈阴性反应。IR νmax cm-1：3414，2940，2902，1071，988，920，895，849.FAB-MS(positive)m/z1071(M+Na)+，1049(M+H)+，855(M-Glc-H)+，753(M-Glc-Xyl-H)+，593(M-Xyl-Glc×2+H)+，431(aglycone+H)+，413(aglycone-H2O+H)+，395(aglycone-H2O×2+H)+.EI-MS m/z 430(aglycone)+，413(aglycone-H2O+H)+，412(aglycone-H2O)+，371，361，358，316，298，287，269，139，126，115.
VIIIa：1H-NMR(C5D5N)δ：0.78(s，C-18 CH3)，0.91(s，C-19 CH3)，1.11(d，J＝6.6Hz，C-21 CH3)，0.67(d，J＝5.5Hz，C-27 CH3)，4.91(d，J＝7.7Hz，Gal 1-H)，5.20(d，J＝7.7Hz，Glc(inner)1-H)，5.23(d，J＝7.7Hz Xyl 1-H)，5.57(d，J＝7.7Hz，Glc(terminal)1-H).1 3C-NMR谱数据见表2。化合物VIIIa为丝兰皂甙元-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基(1→2)[β-D-吡喃木糖基(1→3)]-β-D-吡喃葡萄糖基(1→4)-β-D-吡喃半乳糖甙(karatavioside A)。
VIIIb：1H-NMR(C5D5N)δ：0.78(s，C-18 CH3)，0.91(s，C-19 CH3)，1.11(d，J＝6.6Hz，C-21 CH3)，1.05(d，J＝7.1Hz，C-27 CH3)，4.91(d，J＝7.7Hz，Gal 1-H)，5.20(d，J＝7.7Hz，Glc(inner)1-H)，5.23(d，J＝7.7Hz Xyl 1-H)，5.57(d，J＝7.7Hz，Glc(terminal)1-H).1 3C-NMR谱数据见表2。化合物VIIIb为利拉皂甙元-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基(1→2)[β-D-吡喃木糖基(1→3)]-β-D-吡喃葡萄糖基(1→4)-β-D-吡喃半乳糖甙(知母皂甙G)。
表1.化合物I-IV的13C-NMR化学位移(C5D5N)
| 碳 | I | II | III | IV |
| 甙元12345678910111213 | 30.926.975.130.936.926.826.835.140.135.221.240.043.8 | 30.726.975.230.936.826.826.835.140.135.121.340.043.8 | 30.927.075.030.936.926.726.735.440.235.221.140.441.2 | 30.927.075.231.036.926.726.735.540.235.221.040.541.2 |
| 1415161718192021222324252627OCH3 | 54.731.384.564.614.624.0103.511.8152.334.423.633.775.217.1 | 54.731.384.564.614.324.0103.511.8152.334.323.633.675.217.1 | 56.432.481.264.016.724.040.616.4110.637.128.334.475.317.4 | 56.432.181.464.416.524.041.216.4112.630.928.234.475.217.547.3 | |
| 半乳糖或葡萄糖(3位内侧) | |||||
| 123456 | 102.681.876.969.876.662.1 | 101.983.178.571.778.262.8 | 102.581.876.969.876.562.1 | 102.581.776.969.876.662.1 | |
| 葡萄糖(3位末端) | |||||
| 123456 | 106.175.578.071.678.462.7 | 105.977.077.971.578.562.6 | 106.175.578.071.678.462.7 | 106.075.478.071.778.562.8 | |
| 葡萄糖(26位) | |||||
| 123456 | 105.175.278.571.678.562.7 | 105.175.278.571.678.262.8 | 105.175.278.571.678.462.7 | 105.075.078.671.778.462.8 |
表2 化合物Va-VIIIb的13C-NMR化学位移(100MHz，in C5D5N)
| Va | Vb | VIa | VIb | VIIa | VIIb | VIIIa | VIIIb | |
| 甙元123456789101112131415161718 | 37.129.877.434.844.628.832.335.254.335.721.240.140.756.432.181.162.916.5 | 81.262.816.3 | 45.570.784.234.044.528.032.134.554.336.821.440.040.756.232.181.262.916.6 | 16.4 | 37.530.178.339.2141.0121.632.331.850.337.021.139.940.456.632.181.162.916.3 | 81.262.7 | 45.770.784.437.6140.0121.932.131.050.137.921.139.740.456.432.181.162.616.3 | |
| 192021222324252627 | 12.241.915.0109.231.829.230.566.817.3 | 42.414.8109.726.326.127.565.016.2 | 13.441.915.0109.231.729.230.566.817.3 | 42.414.8109.726.326.227.565.016.2 | 19.442.015.0109.331.629.330.666.917.3 | 42.514.9109.826.426.227.565.116.3 | 20.441.915.0109.231.729.230.566.817.3 | 42.414.9109.726.326.127.565.016.3 | |
| 半乳糖 | |||||||||
| 123456 | 102.473.175.079.875.360.6 | 103.272.575.179.375.760.6 | 102.773.175.179.875.360.6 | 103.372.675.179.275.660.6 | |||||
| 葡萄糖(内) | |||||||||
| 123456 | 104.781.286.770.478.562.4 | 104.681.186.970.478.162.6 | 104.881.386.870.478.663.3 | 104.681.186.970.078.162.8 | |||||
| 葡萄糖(末端) | |||||||||
| 123456 | 104.875.578.570.777.563.0 | 104.775.478.471.378.762.9 | 104.975.578.870.877.662.9 | 104.775.478.471.378.762.9 | |||||
| 木糖12345 | 105.076.177.771.067.2 | 104.976.077.570.467.3 | 105.176.277.171.067.3 | 104.976.077.570.367.3 |
按实施例I或II的方法，由植物中得到如下所示的化合物及其光谱。
1*(25S)-26-O-β-D-吡喃葡萄糖基-22-羟基-5β-呋甾-2β，3β，26-三醇-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基(1→2)-β-D-吡喃半乳糖甙；
2*(25S)-26-O-β--吡喃葡萄糖基-22-甲氧基-5β-呋甾-2β，3β，26-三醇-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基(1→2)-β-D-吡喃半乳糖甙；
3*(25S)-26-O-β-D-吡喃葡萄糖基-5β-呋甾-20(22)-烯-2β，3β，26-三醇-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基(1→2)-β-D-吡喃半乳糖甙。
化合物1*：R22＝OH，C20-C22间为一单键
化合物2*：R22＝OCH3，C20-C22间为一单键
化合物3*：R22不存在，C20-C22间为一双键
13C-NMR
碳 1* 2* 3* 1* 2* 3*
1 40.6 40.6 40.6 Gal 1 106.1 106.1 106.1
2 67.2 67.2 67.2 2 75.2 75.1 75.2
3 81.8 81.8 81.8 3 78.1 78.1 78.1
4 31.9 31.9 31.9 4 71.9 71.9 71.8
5 36.6 36.6 36.6 5 78.4 78.5 78.4
6 26.6 26.6 26.6 6 62.9 62.9 62.9
7 26.3 26.3 26.3 Glu 1 103.3 103.3 103.3
8 35.6 35.6 35.6 2 81.7 81.6 81.7
9 41.5 41.5 41.5 3 77.0 77.0 77.0
10 37.1 37.1 37.1 4 69.8 69.9 69.9
11 21.4 21.4 21.5 5 76.9 76.9 76.9
12 40.4 40.4 40.0 6 62.0 62.1 62.0
13 41.3 41.3 43.9 Glu 1 105.1 105.0 105.0
14 56.3 56.3 54.6 (26位)2 75.2 75.1 75.2
15 32.4 32.1 31.3 3 78.6 78.6 78.6
16 81.2 81.4 84.5 4 71.8 71.7 71.8
17 64.0 64.4 64.6 5 78.4 78.4 78.4
18 16.7 16.5 14.5 6 62.9 62.8 62.9
19 23.9 24.0 23.9
20 40.7 41.2 103.5
21 16.4 16.4 11.8
22 110.7 112.6 152.3
23 37.1 30.9 34.4
24 28.3 28.2 23.6
25 34.4 34.4 33.6
26 75.4 75.2 75.2
27 17.5 17.5 17.1
OCH3 47.3
FAB-MS：
1*FAB-MS m/z：919(M+H-H2O)+，757(M+H-H2O-Glu)+，595(M+H-H2O-Glu×2)，433(M+H-H2O-Glu×2-Gal)+，415(甙元+H-H2O×2)+，271，255，145
2*FAB-MS m/z：951(M+H)+，919(M+H-MeOH)+，757(M+H-MeOH-Glu)+，595(M+H-MeOH-Glu×2)+，433(M+H-MeOH-Glu×2-Gal)+，415(甙元+H-MeOH-H2O)
3*FAB-MS m/z：919(M+H)+，757(M+H-Glu)+，595(M+H-Glu×2)+，433(M+H-Glu×2-Gal)+，415(甙元+H-H2O)+
1**(25R)-26-O-β-D-吡喃葡萄糖基-22-羟基-5-烯-呋甾-3β，26-二醇-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基(1→4)-β-D-吡喃半乳糖甙；
2**(25R)-26-O-β-D-吡喃葡萄糖基-22-甲氧基-5-烯-呋甾-3β，26-二醇-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基(1→4)-β-D-吡喃半乳糖甙；
3**(25R)-26-O-β-D-吡喃葡萄糖基-5-烯-呋甾-20(22)-烯-3β，26-二醇-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基(1→4)-β-D-吡喃半乳糖甙。
化合物1**：R22＝OH，C20-C22间为一单键
化合物2**：R22＝OCH3，C20-C22间为一单键
化合物3**：R22不存在，C20-C22间为一双键
13C-NMR
1** 2** 3** 1** 2** 3**
1 37.6 37.6 37.6 Gal 1 103.0 103.0 103.0
2 30.4 30.4 30.4 2 73.5 73.5 73.4
3 78.4 78.4 78.4 3 75.4 75.4 75.3
4 39.4 39.4 39.4 4 79.8 79.8 79.8
5 141.2 141.2 141.2 5 75.9 75.8 75.9
6 121.6 121.6 121.6 6 61.0 61.0 61.0
7 32.4 32.4 32.4 Glu 1 107.O 107.1 107.0
8 31.9 31.9 31.9 2 75.2 75.2 75.2
9 50.5 50.5 50.5 3 78.4 78.4 78.2
10 37.2 37.2 37.2 4 72.4 72.6 72.4
11 21.3 21.3 21.4 5 78.7 78.7 78.6
12 40.1 40.1 40.0 6 63.1 63.1 63.2
13 40.6 40.6 43.2 Glu(26位) 104.6 104.9 104.7
1
14 56.8 56.8 55.1 2 75.0 75.1 75.1
15 32.4 32.4 31.3 3 78.3 78.6 78.3
16 80.9 81.2 84.2 4 71.6 71.9 71.6
17 63.6 64.2 64.2 5 78.0 78.2 77.9
18 16.5 16.3 14.3 6 62.8 63.1 62.9
19 19.4 19.5 19.4
20 40.6 40.6 103.2
21 16.2 16.2 11.6
22 110.9 112.8 152.1
23 37.0 30.9 34.3
24 28.3 28.3 23.5
25 34.2 34.3 33.4
26 75.3 75.3 75.2
27 17.4 17.2 17.1
OCH3 47.4
药理实验：
老年性痴呆是神经病学中一组原因未明的进行性精神功能衰退性疾患，其病因较复杂。发明人从多个角度观察了知母皂甙，其中主要是化合物III，防治老年性痴呆的活性。
一.对动物脑循环代谢的影响：
研究开发抗痴呆药物主要应根据其发病机制考虑。针对血管性痴呆，我们观察了知母皂甙对脑基底动脉的扩张作用及对整体动物脑血流的影响。
1.知母皂甙的脑基底动脉扩张实验：
实验方法
(1)、称取化合物I、II、III、IV各1mg，溶于1ml生理盐水中，取50μl再溶于5ml生理盐液。
(2)、用新鲜脑去大脑、小脑，取基底动脉中段。
(3)、调节换能器、放大器，使笔回零。
(4)、将基底动脉悬挂于换能器上，浸于浴槽。
实验结果：
(1)、加入化合物III 50μl后脑基底动脉轻微扩张，加入血管收缩剂KCl后未见血管收缩。
(2)、在此剂量下化合物I、II、IV未见明显作用。
(3)、此实验重复两次，均得同样结果。
以上结果表明，化合物III在10-5g/ml(0.01mM)浓度下具有一定的脑血管扩张作用，并拮抗收缩剂引起的脑血管收缩。此剂量比同样实验条件下的阳性药川芎嗪的有效浓度还低两个数量级。
2.大鼠主动脉扩张实验
实验方法：大鼠处死，取胸主动脉，去除结缔组织、血，浸入Krebs-Henseleit液，通氧，挂于换能器上，测定径向张力。结果见图1。
由图I可见，化合物III在0.04mM浓度时，亦可抑制KCl引起的大鼠主动脉的收缩。
3.氢清除法测定对大鼠脑血流量的影响：
在离体实验的基础上，我们进一步通过整体动物实验，观察了化合物III对大鼠脑血流量的影响。
1.方法：氢清除法。
2.仪器：LS-III型组织血流仪。
3.动物：Wister大鼠，雄性。
实验方法步骤：
1.动物用10％水合氯醛麻醉，分离股总静脉，插管。
2.用大鼠颅骨圆形开孔钻在脑皮层顶叶部位打开一颅窗，放置氢电极。
3.动物手术完成后与血流仪、计算机连接，稳定30min后给药，测定，结果见下表及图2。
化合物III(50μg/Kg)对大鼠脑血流量(rCBF)的影响
| 时间(min) | 大鼠1(ml/mg/min) | 大鼠2(ml/mg/min) | 大鼠3(ml/mg/min) | 大鼠4(ml/mg/min) | rCBF平均值(ml/mg/min) | rCBF变化率(％) |
| 011020304050 | 114.17133.30147.99158.46164.61176.90176.77 | 130.86150.05143.41136.33182.96202.46193.57 | 144.25139.55162.10177.59171.42165.94163.08 | 135.97143.35145.64121.24135.00113.38131.17 | 131.3125141.5625149.7850148.4050163.4975164.6700166.1475 | 07.80581014.0675913.0166624.5102325.4031426.52832 |
结论与讨论：
1.实验结果显示，化合物III能够增加大鼠的脑血流量，其在50μg/Kg浓度时，可使大鼠脑血流量(rCBF)增加26.5％。此结果说明化合物III可改善脑循环代谢，对老年性痴呆，尤其是脑血管性痴呆有一定的作用。
2.皂甙类化合物最大的问题是溶血问题。本实验通过静脉给药，观察到化合物III在此有效浓度下没有溶血作用。
二.化合物III对N受体的影响：
最新研究结果表明，老年性痴呆与N受体具有密切关系。80年代后期以来，众多的实验几乎一致显示，阿尔茨海默氏痴呆(AD)病人的脑组织N受体较正常人减少约50％；痴呆病人脑N受体高、低亲和力结合位点比例失调，高亲和力位点相对下降；AD病人外周N受体数目亦降低。烟碱可以增加N受体的数量，所以人们开始通过对烟碱的结构改造来寻找作用于N受体的抗痴呆药物。由于烟碱类的化合物为N受体的激动剂，具有较大的毒副作用，难以作为抗痴呆药物应用。通过SY-SY5Y及M10两个细胞系，我们观察了化合物III对N受体的作用。
SY-SY5Y为人的神经母细胞瘤细胞，它表达天然的N和M受体，而M10细胞则表达重组的鸡N受体的a4b2亚型。用一系列不同浓度的化合物III分别处理两个细胞系，三天后测定N受体的量。结果如图3、图4所示。
SY-SY5Y及M10两个细胞系的实验结果均显示，化合物III能有效地增加N受体的数量，且有良好的量效关系，其作用强度与烟碱类似。化合物III为常用中药知母的主要成分之一，一般认为是低毒的，由此可能找到作用于N受体的非烟碱类的抗痴呆药物。
三.胚胎大鼠海马神经细胞培养实验：
实验方法：
1.取胚胎大鼠海马神经细胞做原代培养。
2.将细胞用不同的条件进行培养，每个条件有3或5个平行孔。
3.MTT染色，测OD值。
实验结果：
化合物III对胚胎大鼠海马神经细胞培养的作用
| 样品浓度(μg/ml) | 化合物III | |
| OD平均值 | 细胞增殖率 | |
| 空白对照0.11 | 0.06240.07730.0663 | 023.878216.25000 |
| 10501005001000 | 0.08600.08070.07500.09030.0673 | 37.8205129.3269220.1923144.711547.85256 |
可见，化合物III对胚胎大鼠海马神经细胞培养有一定促进作用。
四.知母皂甙的清除自由基作用：
自由基反应，现被认为是造成中枢神经细胞膜结构及其功能损伤的重要因素，人们也在开发一些自由基清除剂作为抗痴呆药物。用顺磁方法观察了知母皂甙对自由基的清除作用。
1、材料和方法：
接照Fenton反应产生羟自由基(·OH)：5μl 2mM FeSO4、10μl 0.8mMDMPO、加入5μl 50mM EDTA，混合后加入5μL H2O2，再加25μl双重水或知母皂甙，混匀后立即装入石英毛细管，1分钟后测定。
测量在ESP300型ESR(自旋共振)波谱仪上完成。条件：室温，CF(中心磁场)＝3470GS，SWW(扫宽)＝200GS MF(调制频率)＝25KHz，MA(调制幅度)＝1GS，CT(时间常数)＝84S，P(功率)＝10mw。
分别称取化合物I、II、III、VI、V、VI、VII、VII，加入双蒸水配制成10mg/ml浓度，分别以1∶1(V∶V)的比例加入羟自由基体系，以同样比例的双蒸水作为空白对照，测定ESR波谱信号的幅度。
清除率以下式计算：E(％)＝(ho-hx)/ho×100
ho是对照体系ESR波谱峰高，hx是加药后对应峰的高度。
2、实验结果：
知母皂甙对羟自由基的清除作用
| 组别对照 | 浓度(mg/ml)0 | 清除率(％)0.0 |
| IIIIIIIVVVIVIIVIII | 55555555 | 23.340.056.733.323.30.0-20.00.0 |
从以上的结果可以看出，知母皂甙I、II、III、IV对羟自由基均有一定清除作用，其中化合物III的作用最强(5mg/ml浓度下清除率为56.7％)。本实验显示：物质V、VI、VII、VIII对·OH无清除作用，这可能与它们在水中不溶解有关。化合物III清除羟自由基的活性，也提示它对痴呆的防治活性。
Claims (5)
1.下式化合物
通式II
其中
5-6位虚线表示不存在双键，5位为βH
C25为S构型
R′15为氢
R′2为α-OH或β-OH
R′3为
R′22为OH，或O(CH2)nCH3，n＝0～3，或R′22不存在同时20-22位虚线表示存在双键；
或
R′2为氢
5-6位虚线表示存在双键
R′15为氢
C25为R，或S构型
R′22为O(CH2)nCH3，n＝0-3，或R′22不存在同时20-22位虚线表示存在双键
R′3为-O-Gal，
-O-Glu，
或
2.权利要求1的化合物，其选自：
(25S)-26-O-β-D-吡喃葡萄糖基-22-羟基-5β-呋甾-2β，3β，26-三醇-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基(1→2)-β-D-吡喃半乳糖甙；
(25S)-26-O-β-D-吡喃葡萄糖基-22-甲氧基-5β-呋甾-2β，3β，26-三醇-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基(1→2)-β-D-吡喃半乳糖甙；
(25S)-26-O-β-D-吡喃葡萄糖基-5β-呋甾-20(22)-烯-2β，3β，26-三醇-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基(1→2)-β-D-吡喃半乳糖甙；
(25R)-26-O-β-D-吡喃葡萄糖基-22-羟基-5-烯-呋甾-3β，26-二醇-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基(1→4)-β-D-吡喃半乳糖甙；
(25R)-26-O-β-D-吡喃葡萄糖基-22-甲氧基-5-烯-呋甾-3β，26-二醇-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基(1→4)-β-D-吡喃半乳糖甙；
(25R)-26-O-β-D-吡喃葡萄糖基-5-烯-呋甾-20(22)-烯-3β，26-二醇-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基(1→4)-β-D-吡喃半乳糖甙。
3.药物组合物，其包括作为活性成分的式II化合物，式中各基团定义同权利要求1，及制药领域中常用的药用载体。
4.权利要求3的组合物，其中所述化合物选自
(25S)-26-O-β-D-吡喃葡萄糖基-22-羟基-5β-呋甾-2β，3β，26-三醇-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基(1→2)-β-D-吡喃半乳糖甙；
(25S)-26-O-β-D-吡喃葡萄糖基-22-甲氧基-5β-呋甾-2β，3β，26-三醇-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基(1→2)-β-D-吡喃半乳糖甙；
(25S)-26-O-β-D-吡喃葡萄糖基-5β-呋甾-20(22)-烯-2β，3β，26-三醇-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基(1→2)-β-D-吡喃半乳糖甙；
(25R)-26-O-β-D-吡喃葡萄糖基-22-羟基-5-烯-呋甾-3β，26-二醇-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基(1→4)-β-D-吡喃半乳糖甙；
(25R)-26-O-β-D-吡喃葡萄糖基-22-甲氧基-5-烯-呋甾-3β，26-二醇-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基(1→4)-β-D-吡喃半乳糖甙；
(25R)-26-O-β-D-吡喃葡萄糖基-5-烯-呋甾-20(22)-烯-3β，26-二醇-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基(1→4)-β-D-吡喃半乳糖甙。
5.权利要求1或2的化合物在制备用于预防和/或治疗老年性痴呆产品中的用途。
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| CN 200310102512 CN1243768C (zh) | 1997-09-26 | 1997-09-26 | 甾体皂甙防治老年性痴呆的用途及新的甾体皂甙 |
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