CN1241588C - 一种广枣冻干粉针剂及其制备方法 - Google Patents
一种广枣冻干粉针剂及其制备方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开了一种广枣冻干粉针剂及其制备方法,其特征在于该粉针剂是由广枣的有效部位和冻干赋形剂组成;其中广枣有效部位是通过乙醇提取、大孔吸附树脂法和超滤法有机结合的方法进行纯化得到的,本发明还公开了一种广枣冻干粉针剂的制备方法,其特征是将提取纯化的广枣有效部位与药物辅料混合,冷冻干燥制备成中药粉针剂,药理实验结果表明,该冻干粉针剂对心血管疾病具有很好的疗效,与同类药物比较,具有更强的药理作用。
Description
所属技术领域
本发明属于中药制药领域,具体涉及一种广枣冻干粉针剂及其制备方法。
背景技术
心血管疾病因其发病因素繁多,病理机制复杂,多因久病体虚、劳神过度损伤心气心阳所至,治疗甚为棘手,而被现代医学称为人类死亡的主要原因之一。心悸是自觉心慌不安,不能自主,或脉象不齐的一种证候,临床多见于心脏病、心绞痛,是冠状动脉供血不足,心肌急剧的暂时缺血和缺氧所引起的临床综合症。研究治疗心脏病的药有很多,如硝酸甘油,其特点是起效迅速,但具有一定的毒副作用;还有一些中成药,例如复方丹参注射液、藻酸双酯钠注射液、脉络宁注射液等,虽然对心脏病、冠心病、心绞痛等有较好的疗效,改变了固体制剂起效慢的不足,但其不良反应的报道也逐年增多,其中报道复方丹参注射液有过敏反应58例、药疹23例、死亡2例等共131例不良反应,藻酸双酯钠注射液有过敏反应31例、白细胞减少25例、胃肠反应23例、死亡1例等共128例不良反应,脉络宁注射液有过敏反应28例、过敏性休克18例等共68例不良反应。尽管引起不良反应的因素较多,机制也未完全清楚,但临床迫切的需要安全有效的治疗药物是确定的。
广枣为漆树科植物南酸枣Choerospondias axillaries(Roxb.)Burtt et Hill的干燥成熟果实,系蒙古族习用行气活血、养心安神的药材,在我国蒙医药中应用非常广泛,主产于广东。广枣味甘、酸,性平、腻、重、柔;有清心火行气活血,养心,安神功能。主要用于气滞血瘀,胸痹作痛,心悸气短,心神不安等病症。现代药理学研究证实,广枣总黄酮,能明显降低鼠耗氧速度和耗氧量,提高耐缺氧能力,扩张冠状动脉;改善血液流变学各项指标,清除自由基,提高心脏组织中SOD的活性[包保全等.广枣总黄酮抗氧化作用的实验研究。中国药理与临床。2001,17(2):8]。广枣总黄酮对心肌缺血有明显保护作用,明显缩小心肌梗死范围,减轻心肌缺血损伤程度,推测其作用机理可能与调节机体各种酶活性有关[唐丽等.广枣对大鼠急性心肌缺血保护作用研究.中医药学报.2003,31(3):50]。广枣水溶性多糖对急梗犬有改善心肌收缩功能,缩小心肌梗塞面积,减轻心肌损伤的作用,对垂体后叶素引起的大鼠心肌缺血有明显的保护作用,能明显对抗BaCl2诱发的大鼠心律失常和CHCL3诱发的小鼠室颤,减慢心率。广枣在中医药中应用广泛,临床上多配方使用如广枣七味丸、复方广枣注射液等;中国专利中涉及到广枣应用的专利较多,但绝大多数为复方固体制剂,无涉及到广枣注射制剂的药物,CN93110427公开了广枣的提取液和广枣粗粉混合制成的固体制剂,尚属一种比较原始的药物制剂,有关报道中虽然有广枣注射液的研究报道,但未见有临床应用报道,到目前为止尚未见广枣有效成分制成的冻干粉针剂报道。
发明内容
基于以上因素,本发明采用乙醇提取、大孔吸附树脂法和超滤法有机结合的方法对广枣有效部位进行提取纯化后,与药物辅料混合后,经过冷冻干燥制备中药粉针剂,药理实验结果表明,该冻干粉针剂对心血管疾病具有很好的疗效,与同类药物比较,具有更强的药理作用。
一.工艺制法
取广枣,放入中药多功能提取罐中,用6-10倍的50%-80%乙醇提取,提取2-4次,每次1-3小时,提取液合并,回收乙醇至尽,得到无醇清膏,备用,滤渣干燥备用;取无醇清膏,干燥,上HP型大孔吸附树脂柱,用8-12倍柱体积的蒸馏水洗脱,洗脱液备用,再用浓度20%-80%、6-8倍柱体积乙醇洗脱,收集洗脱液,回收乙醇至尽,得到广枣总黄酮原料,备用;取干燥滤渣与水洗脱液合并,放入中药多功能提取罐中,加入6-8倍水,提取2-4次,每次2-4小时,合并提取液,减压浓缩至相对密度为1.15-1.20(50℃),加入乙醇使醇度达到50%-70%(V/V),静置沉淀,过滤,滤液再加乙醇使醇浓度达到75%-90%,静置沉淀,过滤,合并沉淀,沉淀用蒸馏水溶解,使溶液中每毫升折合生药材1克,过滤后,用截留分子量3000的超滤膜超滤3-5次,每次超滤1/2-1/3时,加蒸馏水至原体积,得浓缩液,浓缩液再用截留分子量为10万的超滤膜超滤3-5次,每次超滤1/2-1/3时,加蒸馏水至原体积,收集超滤液,真空浓缩,使溶液糖度为2%-5%,得到广枣水溶性多糖浓缩液,备用。取广枣总黄酮和冻干赋形剂溶解于广枣水溶性多糖浓缩液中,用0.45um微孔滤膜进行过滤,分装西林瓶中,按中药冻干粉针剂的要求冷冻干燥制备成广枣冻干粉针制剂。
二.药理实施例
实施例1
对大鼠离体心脏缺氧性心律失常的影响
药物:本发明冻干粉针剂(北京乾露春科技有限公司实验室提供)
复方广枣注射液(内蒙古中医药研究院提供)
生理盐水(北京乾露春科技有限公司实验室提供)
实验方法:大鼠24只,体重256±23g,随机分为3组。制备离体心脏,用容积导电法引导并观察和记录心电变化,稳定20分钟。缺氧对照组改用含纯氮K-H灌流液,给药组用本发明冻干粉针剂注射液、复方广枣注射液、纯氮K-H灌流液,连续观察20分记录心律失常出现时间和心脏停搏时间。
本发明冻干粉针剂对大鼠离体心脏缺氧性心律失常的影响:对照组8例心脏全部出现心律失常和心脏停搏。本发明冻干粉针剂和可复方广枣注射液明显对抗缺氧性心律失常,并呈良好量效关系,可显著延长心律失常出现时间,明显降低心律失常发生率,实验结果还表明本发明冻干粉针剂组与复方广枣注射液组比较有显著性差异。实验结果见表1:
表1各组制剂对大鼠离体心脏缺氧性心律失常的影响
组别 | 心律失常出现时间(分) | 心律失常发生率(%) | 心脏停搏时间(分) | 心脏停搏率(%) |
生理盐水 | 11.01 | 100 | 12.33 | 100 |
复方广枣注射液 | 14.02** | 33 | 5.50 | 50 |
本发明冻干粉针剂 | 17.13**[*] | 17 | - | - |
**P<0.01:[*]P<0.05,处理组与阳性对照组比较。
实施例2
对大鼠急性心肌缺血保护作用
药物:本发明冻干粉针剂(北京乾露春科技有限公司实验室提供)
复方丹参注射液(上海第一生物药业有限公司)
生理盐水(北京乾露春科技有限公司实验室提供)
材料与方法:动物Wister大白鼠60只,雄性,体重(300±20)g,由北京中医药大学实验动物中心提供。大鼠按体重随机分成3组,每组20只。分为模型组,复方丹参阳性药对照组,本发明冻干粉针剂组。各组均静脉注射,按文献方法结扎大鼠的左冠状动脉前降支造成急性心肌缺血模型。20%乌拉坦(1g/kg,ip)麻醉,分离颈总动脉,并行气管插术,连接动物呼吸机。左侧第四肋间开胸,剪开心包,分离左冠状动脉前降支,平右心耳作结扎部位。取出心脏称重,-10℃冰冻30~50min,在心脏结扎线下,平行冠状沟将心室横切成5片,生理盐水冲洗后,置于pH值8.0磷酸缓冲液配制的浓度为1%的氯化三苯基四氮唑(TTC)溶液中,在38℃恒温水浴中染色10min,正常心肌染色成暗红色,梗死心肌染成灰黄色,剪去心肌片被染色的部分,把未被染色的缺血梗死区心肌称重,计算缺血范围(缺血梗死面积占全心重的百分比,结果见表2。
表2各组制剂对大鼠急性心肌缺血保护作用
组别 | 心脏重(g) | 心脏梗死重(g) | 心脏梗死百分率(%) |
生理盐水 | 0.985 | 0.122 | 12.34 |
复方丹参注射液 | 0.843 | 0.087 | 10.29** |
本发明冻干粉针剂 | 0.865 | 0.057 | 6.64**[*] |
**P<0.01;[*]P<0.05,处理组与阳性对照组比较。
结论:以上药理实验表明,本发明冻干粉针剂对心血管疾病具有很好的药理作用,与同类药品比较,具有更好的药理药效。
三.制备实施例
实施例1
取广枣1000克,放入中药多功能提取罐中,用6倍的50%乙醇提取,提取2次,每次1小时,提取液合并,回收乙醇至尽,得到无醇清膏,备用,滤渣干燥备用;取无醇清膏,干燥,上HP-10型大孔吸附树脂柱,用8倍柱体积的蒸馏水洗脱,洗脱液备用,再用浓度20%、6倍柱体积乙醇洗脱,收集洗脱液,回收乙醇至尽,得到广枣总黄酮68.97克,备用:取干燥滤渣与水洗脱液合并,放入中药多功能提取罐中,加入6倍水,提取2次,每次2小时,合并提取液,减压浓缩至相对密度为1.15(50℃),加入乙醇使醇度达到50%(V/V),静置沉淀,过滤,滤液再加乙醇使醇浓度达到75%,静置沉淀,过滤,合并沉淀,沉淀用蒸馏水溶解,使溶液中每毫升折合生药材1克,过滤后,用截留分子量3000的超滤膜超滤3次,每次超滤至1/2时,加蒸馏水至原体积,得浓缩液,浓缩液再用截留分子量为10万的超滤膜超滤3次,每次超滤至1/2时,加蒸馏水至原体积,收集超滤液,真空浓缩,使溶液糖度为2%,得到广枣水溶性多糖浓缩液172.41克,备用。取广枣总黄酮和冻干赋形剂甘露醇7135.42克溶解于广枣水溶性多糖浓缩液中,用0.45um微孔滤膜进行过滤,分装西林瓶中,按中药冻干粉针剂的要求冷冻干燥制备成广枣冻干粉针制剂。
实施例2
取广枣500克,放入中药多功能提取罐中,用10倍的80%乙醇提取,提取4次,每次3小时,提取液合并,回收乙醇至尽,得到无醇清膏,滤渣干燥备用;取无醇清膏,干燥,上HP-10型大孔吸附树脂柱,用12倍柱体积的蒸馏水洗脱,洗脱液备用,再用浓度80%、8倍柱体积乙醇洗脱,收集洗脱液,回收乙醇至尽,得到广枣总黄酮34.49克,备用;取干燥滤渣与水洗脱液合并,放入中药多功能提取罐中,加入8倍水,提取4次,每次4小时,合并提取液,减压浓缩至相对密度为1.20(50℃),加入乙醇使醇浓度达到70%(V/V),静置沉淀,过滤,滤液再加乙醇使醇浓度达到90%(V/V),静置沉淀,过滤,合并沉淀,沉淀用蒸馏水溶解,使溶液中每毫升折合生药材1克,过滤后,用截留分子量3000的超滤膜超滤5次,每次超滤至1/3时,加蒸馏水至原体积,得浓缩液,浓缩液再用截留分子量为10万的超滤膜超滤5次,每次超滤至1/3时,加蒸馏水至原体积,收集超滤液,真空浓缩,使溶液糖度为5%,得到广枣水溶性多糖浓缩液86.21克,备用。取广枣总黄酮和冻干赋形剂蔗糖404.08克溶解于广枣水溶性多糖浓缩液中,用0.45um微孔滤膜进行过滤,分装西林瓶中,按中药冻干粉针剂的要求冷冻干燥制备成广枣冻干粉针制剂。
实施例3
取广枣800克,放入中药多功能提取罐中,用7倍的60%乙醇提取,提取3次,每次3小时,提取液合并,回收乙醇至尽,得到无醇清膏,滤渣干燥备用;取无醇清膏,干燥,上HP-20型大孔吸附树脂柱,用9倍柱体积的蒸馏水洗脱,洗脱液备用,再用浓度40%、7倍柱体积乙醇洗脱,收集洗脱液,回收乙醇至尽,得到广枣总黄酮55.18克,备用;取干燥滤渣与水洗脱液合并,放入中药多功能提取罐中,加入7倍水,提取3次,每次3小时,合并提取液,减压浓缩至相对密度为1.16(50℃),加入乙醇使醇度达到55%(V/V),静置沉淀,过滤,滤液再加乙醇使醇浓度达到80%,静置沉淀,过滤,合并沉淀,沉淀用蒸馏水溶解,使溶液中每毫升折合生药材1克,过滤后,用截留分子量3000的超滤膜超滤4次,每次超滤至1/2时,加蒸馏水至原体积,得浓缩液,浓缩液再用截留分子量为10万的超滤膜超滤4次,每次超滤至1/2时,加蒸馏水至原体积,收集超滤液,真空浓缩,使溶液糖度为3%,得到广枣水溶性多糖浓缩液137.94克,备用。取广枣总黄酮和冻干赋形剂乳糖1013.88克溶解于广枣水溶性多糖浓缩液中,用0.45um微孔滤膜进行过滤,分装西林瓶中,按中药冻干粉针剂的要求冷冻干燥制备成广枣冻干粉针制剂。
实施例4
取广枣100克,放入中药多功能提取罐中,用8倍的70%乙醇提取,提取2次,每次1小时,提取液合并,回收乙醇至尽,得到无醇清膏,备用,滤渣干燥备用;取无醇清膏,干燥,上HP-20型大孔吸附树脂柱,用10倍柱体积的蒸馏水洗脱,洗脱液备用,再用浓度50%、8倍柱体积乙醇洗脱,收集洗脱液,回收乙醇至尽,得到广枣总黄酮6.90克,备用;取干燥滤渣与水洗脱液合并,放入中药多功能提取罐中,加入8倍水,提取4次,每次2小时,合并提取液,减压浓缩至相对密度为1.17(50℃),加入乙醇使醇度达到60%(V/V),静置沉淀,过滤,滤液再加乙醇使醇浓度达到85%,静置沉淀,过滤,合并沉淀,沉淀用蒸馏水溶解,使溶液中每毫升折合生药材1克,过滤后,用截留分子量3000的超滤膜超滤3次,每次超滤至1/2时,加蒸馏水至原体积,得浓缩液,浓缩液再用截留分子量为10万的超滤膜超滤5次,每次超滤至1/3时,加蒸馏水至原体积,收集超滤液,真空浓缩,使溶液糖度为4%,得到广枣水溶性多糖浓缩液17.24克,备用。取广枣总黄酮和冻干赋形剂蔗糖109.97克溶解于广枣水溶性多糖浓缩液中,用0.45um微孔滤膜进行过滤,分装西林瓶中,按中药冻干粉针剂的要求冷冻干燥制备成广枣冻干粉针制剂。
实施例5
取广枣300克,放入中药多功能提取罐中,用9倍的75%乙醇提取,提取4次,每次1小时,提取液合并,回收乙醇至尽,得到无醇清膏,备用,滤渣干燥备用;取无醇清膏,干燥,上HP-10型大孔吸附树脂柱,用11倍柱体积的蒸馏水洗脱,洗脱液备用,再用浓度75%、8倍柱体积乙醇洗脱,收集洗脱液,回收乙醇至尽,得到广枣总黄酮20.70克,备用;取干燥滤渣与水洗脱液合并,放入中药多功能提取罐中,加入7倍水,提取4次,每次2小时,合并提取液,减压浓缩至相对密度为1.18(50℃),加入乙醇使醇度达到65%(V/V),静置沉淀,过滤,滤液再加乙醇使醇浓度达到85%(V/V),静置沉淀,过滤,合并沉淀,沉淀用蒸馏水溶解,使溶液中每毫升折合生药材1克,过滤后,用截留分子量3000的超滤膜超滤5次,每次超滤1/2时,加蒸馏水至原体积,得浓缩液,浓缩液再用截留分子量为10万的超滤膜超滤5次,每次超滤1/2时,加蒸馏水至原体积,收集超滤液,真空浓缩,使溶液糖度为2%,得到广枣水溶性多糖浓缩液51.72克,备用。取广枣总黄酮和冻干赋形剂乳糖256.76克溶解于广枣水溶性多糖浓缩液中,用0.45um微孔滤膜进行过滤,分装西林瓶中,按中药冻干粉针剂的要求冷冻干燥制备成广枣冻干粉针制剂。
实施例6
取广枣1500克,放入中药多功能提取罐中,用10倍的75%乙醇提取,提取4次,每次2小时,提取液合并,回收乙醇至尽,得到无醇清膏,备用,滤渣干燥备用;取无醇清膏,干燥,上HP-10型大孔吸附树脂柱,用12倍柱体积的蒸馏水洗脱,洗脱液备用,再用浓度55%、7倍柱体积乙醇洗脱,收集洗脱液,回收乙醇至尽,得到广枣总黄酮103.46克,备用;取干燥滤渣与水洗脱液合并,放入中药多功能提取罐中,加入8倍水,提取2次,每次4小时,合并提取液,减压浓缩至相对密度为1.19(50℃),加入乙醇使醇度达到50%(V/V),静置沉淀,过滤,滤液再加乙醇使醇浓度达到90%,静置沉淀,过滤,合并沉淀,沉淀用蒸馏水溶解,使溶液中每毫升折合生药材1克,过滤后,用截留分子量3000的超滤膜超滤5次,每次超滤1/2时,加蒸馏水至原体积,得浓缩液,浓缩液再用截留分子量为10万的超滤膜超滤5次,每次超滤1/2时,加蒸馏水至原体积,收集超滤液,真空浓缩,使溶液糖度为2%,得到广枣水溶性多糖浓缩液258.62克,备用。取广枣总黄酮和冻干赋形剂乳糖1212.16克溶解于广枣水溶性多糖浓缩液中,用0.45um微孔滤膜进行过滤,分装西林瓶中,按中药冻干粉针剂的要求冷冻干燥制备成广枣冻干粉针制剂。
实施例7
取广枣1200克,放入中药多功能提取罐中,用10倍的80%乙醇提取,提取2次,每次1小时,提取液合并,回收乙醇至尽,得到无醇清膏,备用,滤渣干燥备用;取无醇清膏,干燥,上HP-10型大孔吸附树脂柱,用12倍柱体积的蒸馏水洗脱,洗脱液备用,再用浓度65%、6倍柱体积乙醇洗脱,收集洗脱液,回收乙醇至尽,得到广枣总黄酮82.76克,备用;取干燥滤渣与水洗脱液合并,放入中药多功能提取罐中,加入7倍水,提取3次,每次3小时,合并提取液,减压浓缩至相对密度为1.16(50℃),加入乙醇使醇度达到70%(V/V),静置沉淀,过滤,滤液再加乙醇使醇浓度达到75%,静置沉淀,过滤,合并沉淀,沉淀用蒸馏水溶解,使溶液中每毫升折合生药材1克,过滤后,用截留分子量3000的超滤膜超滤4次,每次超滤1/2时,加蒸馏水至原体积,得浓缩液,浓缩液再用截留分子量为10万的超滤膜超滤4次,每次超滤1/3时,加蒸馏水至原体积,收集超滤液,真空浓缩,使溶液糖度为3.5%,得到广枣水溶性多糖浓缩液206.89克,备用。取广枣总黄酮和冻干赋形剂甘露醇1779.29克溶解于广枣水溶性多糖浓缩液中,用0.45um微孔滤膜进行过滤,分装西林瓶中,按中药冻干粉针剂的要求冷冻干燥制备成广枣冻干粉针制剂。
Claims (5)
1.一种广枣冻干粉针剂,其特征在于它是由经广枣乙醇提取、大孔吸附树脂乙醇洗脱得到广枣总黄酮68.97-69.00重量份,广枣乙醇提取的滤渣和大孔吸附树脂水洗液混合提取、醇沉、超滤得到广枣水溶性多糖为3.45-8.62重量份,冻干粉赋形剂808.11-1482.74重量份制备而成。
2.如权利要求1所述的一种广枣冻干粉针剂的制备方法,其特征为:
(1)取广枣,用6-10倍的50%-80%乙醇提取,提取2-4次,每次1-3小时,提取液合并,回收乙醇至尽,得到无醇清膏,滤渣干燥备用;
(2)取上述无醇清膏,干燥,上大孔吸附树脂柱,用8-12倍柱体积的蒸馏水洗脱,洗脱液备用,再用浓度20%-80%、6-8倍柱体积乙醇洗脱,收集洗脱液,回收乙醇至尽,得到广枣总黄酮68.97-69.00重量份;
(3)取上述干燥滤渣与大孔吸附树脂水洗脱液合并,提取2-4次,每次2-4小时,合并提取液,50℃减压浓缩至相对密度为1.15-1.20,加入乙醇使醇浓度度达到50%-70%,静置沉淀,过滤,滤液再加乙醇使醇浓度达到75%-90%,静置沉淀,过滤,合并沉淀,用蒸馏水溶解,使溶液中每毫升折合生药材1克,过滤后,得滤液;
(4)取滤液,用截留分子量3000的超滤膜超滤3-5次,得浓缩液;浓缩液再用截留分子量为10万的超滤膜超滤3-5次,收集滤液,真空浓缩得到广枣水溶性多糖浓缩液;
(5)按所述重量配比取广枣总黄酮和冻干赋形剂808.11-1482.74重量份溶于广枣水溶性多糖浓缩液中,用0.45μm微孔滤膜进行过滤,分装西林瓶中,按中药冻干粉针剂的要求冷冻干燥制备成广枣冻干粉针制剂。
3.根据权利要求2的一种广枣冻干粉针剂的制备方法,其特征在于所述的大孔吸附树脂为HP型。
4.根据权利要求2的一种广枣冻干粉针剂的制备方法,其特征在于所述的大孔吸附树脂为HP-10型。
5.根据权利要求2的一种广枣冻干粉针剂的制备方法,其特征在于所述的超滤方法为超滤浓缩液体积为原药液体积的1/2-1/3时,加蒸馏水至原体积,继续超滤。
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