CN1225589A - 钩果草和(或)Harpagophytum zeyheriDENCE的纯化提取物,其制备方法及用途 - Google Patents
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Abstract
从钩果草和/或HZD获得一种纯化提取物,其方法为将水和/或水/醇提取物溶于正丁醇饱和的水,用水饱和的正丁醇提取,以及真空除去正丁醇。此提取物可用以制备药剂,用于治疗支气管哮喘、溃疡性结肠炎、局部性回肠炎、风湿类疾患、以及因药物、其它物质或疾患引起脂加氧酶水平增高的适应症。
Description
钩果草(Harpagophytum procumbens)的茶和提取物在民间医学中已长期被推荐用于多种症候,例如各种消化不良,风湿性疾病、产科、创伤愈合、动脉钙化、过敏性疾患等。
关于这种植物,其组分及化学结构已有大量报告,而关于其药理学、毒理学的工作却少得多。有一篇文献综述载于杂志Errahrungsheilkunde2,1995,74-79页。在杂志Planta Medica的1978,34卷,97-108,页A.Erds等报告了用水、甲醇和正丁醇从次生根得到的各种提取物的研究。这个工作支持早先的发现,即这类提取物具有中等效力的、显著的镇痛作用,但低于乙酰水杨酸的作用。此外,该工作还得出以下结论:钩果草甙(Glykosid Harpagosid)可能不是产生镇痛消炎作用的唯一物质。这一点还可由高度纯化的提取物H25C3的活性来证明,该提取物含有85%的钩果草甙(Harpagosid),但与所有实验模型中的其它提取物相比,并不显示更佳的效力。
在一篇关于钩果草根提取物适于治疗风湿性疾患的综述中(Wenzel,P.,Wegener,T.,DAZ 135,1131-1144)可以看到钩果草提取物具有中等镇痛作用和强消炎作用。对这两种症候而言,其作用机制经实验测定通常认为是抑制了环加氧酶的活力(Simmet等,Thrombosis Res,67,123-134,1992)。
本发明的第一个目的是提供一种纯化的并可能标准化的钩果草提取物,它比高度纯化的钩果草甙可能具有更高的效力。发明的第二个目的是也可使用其它适宜的起始材料。
这两个目的现已惊人地完成,提取物可用以下的方法得到:将水和/或水/醇(C1-C3)的稠提取物和/或干提取物溶于正丁醇饱和的水中,用水饱和的正丁醇提取,真空除去正丁醇。正丁醇被尽可能完全地清除。还进一步确定,除了钩果草外,Harpagophytum zeyheri DENCE(以下简称HZD)也能被同样成功地使用。因此,单独或混合使用这两种起始药物必定都是可以的。
至今还不清楚为什么这种提取物比以往已知的并已应用的提取物更为有效。从文献资料看,不能期望一种能得到高度富含钩果草甙的方法会是成功的,因为这种糖甙本身显然并非有效或仅有弱效。一种尚未被证明的可能的解释是:实际上活性要素并不是钩果草甙,而是在高度纯化时至少部分地与之“搭车”的一种或一组物质。另一种可能的解释是存在一种或一种以上起协同作用的相伴物质,这种协同作用本身是能由多种原因引起的。可能有另一种或一种以上也具效力的物质,或者有一种或一种以上能增加钩果草甙在胃肠道中的生物利用度或稳定性的物质。最后,按本发明的方法可能使具有拮抗作用的物质从多组分的混合物中清除了。
这些解释之一得到以下事实的支持:水提取物、水/醇提取物、正丁醇提取物与本发明的提取物的色谱分析结果是明显不同的。本发明提取物中的钩果草甙的含量与纯正丁醇提取物中的含量相近。然而纯正丁醇提取物的效价明显地低于本发明提取物的效价。水或水/醇(C1-C3)混合物或许能从植物材料高产额地提取实际上的活性要素、或协同作用要素。而在经提取后,这些物质很容易溶于正丁醇并与钩果草甙富集在一起。
虽然至今尚未确定单独的钩果草甙是否有效,然而它的含量可用作本发明中的制备标准。进一步、尚未完成的工件是企图找出本发明提取物更高的消炎镇痛作用的基础。进而可能阐明这种活性是由第二种或一组物质单独贡献的,抑或与钩果草甙有协同作用。
实际上,用钩果草及HZD二者都能制备出一种纯化的、高效价的而且可标准化的提取物,这已是一个重大进展。
用这些提取物首先可以加工成口服剂型,例如,片剂、胶囊、汁、糖浆或溶液。
因此,本发明不仅是关于这些纯化提取物,而且关于它们的制备方法以及关于提取物在制备药剂之中的用途,所述药剂用于治疗支气管哮喘、溃疡性结肠炎、局部性回肠炎、风湿类疾患以及因药物、其它物质或疾患引起脂加氧酶水平增高的适应症。
以下例子可更详细地说明本发明的方法:
例1
用磨碾机将200kg干燥的钩果草和/或HZD的次生储藏根(sekundre Speicherwarzeln)粉碎成小于12mm,最好是8~10mm的颗粒。加水2100kg后,将混合物在70~85℃充分渗透16小时。所获提取物在55℃,150mbar低压下达到干物质含量为65-75%。钩果草甙的含量约为1.0-1.5%。
所得的180kg水稠提取物(初提物)与相当于干含量10倍的正丁醇饱和的水混合。搅拌,使提取物充分溶解,用等体积的水饱和的正丁醇在30℃左右对其进行液/液抽提。然后使之分相。下层水相再用半量正丁醇进行2次液/液抽提。
将三次抽提步骤所得的丁醇相收集在一起,再用丁醇饱和的水洗。然后将收集的丁醇相在50-60℃、150-200mbar低压下进行蒸发,直至获得含有至少50%固体成分的浓缩物。
所得16kg的稠提取物(二次提取物)用喷雾干燥成套设备在60-80℃下自然干燥。正丁醇实际上完全被消除。将所得干燥提取物磨碎。按本发明所得干提取物的钩果草甙含量按高压液相法所测约为15-30%,药物对提取物的比例(DER)约为25~35∶1。
例2
将按例1所得的180kg水稠提取物(初提物)于80℃用喷雾干燥法干燥。在垂直混合器中处理30分然后磨碾成最细的颗粒,<1mm,制成均匀的干提取物(初提物)。将从钩果草和/或HZD得到的这种干燥水提物溶于约10倍的正丁醇饱和的水中(起始溶液)。将起始溶液过滤,与等体积的水饱和正丁醇进行分配。分相。上层丁醇相用丁醇饱和水洗(比例为1∶1v/v)。下层水相再用水饱和的丁醇抽提两次,即总共3次。收集的丁醇相在真空下(200mbar,60℃)蒸发至于。水相也收集。浓缩。将起始溶液、水相和丁醇相作比较检查,结果如下:
参数 | 起始溶液 | 水相 | 丁醇相 |
高压液相测得钩果草甙含量[%] | 0.21 | 未检出 | 2.25 |
干物质含量(DS)[%] | 8.9 | 2.9 | 12.0 |
算出干物质中钩果草甙量m/m[%] | 2.36 | - | 18.75 |
天然提取物量[g] | 17.80 | 15.72 | 2.02 |
提取物质产额[%] | - | 88.4 | 11.4 |
钩果草甙量[g] | 0.42 | - | 0.38 |
钩果草甙产额[%] | - | - | 90.5 |
药物对提取物比例天然 | 1.8∶1 | - | 15.8∶1 |
从上表可以看出用水饱和的丁醇进行液/液提取,使钩果草甙得到选择性的浓集,其浓度与用纯丁醇提取得到的相似。
然而,按本发明的方法,干物质的大部分及其所含的附属物质如糖,保留在水相中,而钩果草甙、其它iridoid化合物及其它活性成分转移到了正丁醇相中。
例3
钩果草DE CANDOLLE和/或HZD的干的次生储藏根200kg在磨碾机中粉碎至颗粒大小为8-10mm。加入90%(v/v)酒精3600kg后,混合物在20-30℃充分渗透16小时。所得提取物在55℃、150mbar低压下使干物质含量为<95%。干提取物产额为20~30kg,DER为6~12∶1。钩果草甙含量约为1-1.5%。用约180kg钩果草所得提取物(erad.spir.sicc.)按例1所述作进一步加工。
钩果草甙含量为11.6m/m[%],天然提取物量为0.9g,提取物产额为8.6%。钩果草甙量为0.112g,产额93.4%。药物对提取物之比DER天然在起始溶液中为3∶1,在丁醇相为32∶1。
因此,此提取物也高度富含钩果草甙。提取物之高压液相色谱与按例1及2所得提取物之色谱极为相似。
Simmet和Loew教授对水提取物、正丁醇提取物与本发明提取物进行比较药理学研究,发现本发明提取物,与含有相应浓度钩果草甙的纯正丁醇提取物相比,具有明显的更高效价。
对以下提取物进行了检验:
提取物编号 | 提取剂 | DER天然 | 钩果草甙含量[%] |
1 | 水 | 2∶1 | 2.4 |
4 | 100%水饱和正丁醇 | 10∶1 | 11.6 |
6 | 1的正丁醇提取物(例2) | 15.8∶1 | 18.8 |
还检测了提取物对半胱酰胺-白三烯(LT)生物合成和血栓烷B2生物合成的影响。从健康男子(20-25岁)提取每份2ml的全血,肝素抗凝,10E/ml(终浓度),与各测试提取物在聚苯乙烯试管中37℃预孵育15分。此后,加入Ionophor A 23187 10μM(最终浓度),继续37℃孵育60分。离心后,吸出血浆,保留一份,用预冷的丙酮沉淀蛋白(-20℃,30分)。样品用旋转蒸发器减压浓缩,重悬于10mM trispH7.4缓冲液中。此材料用于半胱氨酰-LT的放射免疫分析。抗半胱氨酰-LT抗体主要识别LTC4,但与LTD4及LTE4呈70%的交叉反应。用LTC4制作标准曲线。血栓烷(TX)B2用放射免疫法在血浆样品中直接测定。结果总结于图1及2。
结果表明,对血栓烷B2生物合成的效应是相近的,而对半胱氨酰-LT生物合成的效应明显不同,按本发明的6号提取物明显地更为有效、更有选择性。
由此结果得出,本发明提取物可用于支气管哮喘、溃疡性结肠炎、局部性回肠炎、风湿类疾患等适应症以及因药物、其它物质或疾患引起脂加氧酶水平增高的适应症。
用100%甲醇提取物(5号提取物)作进一步药理学研究,却看不出对半胱氨酰-LT生物合成的明显效应,而例3的提取物(8号提取物)具有与例2、6号提取物相似的高活力。
用人工胃液和人工肠液的研究表明,钩果草甙的纯态和稀释状态都是稳定的,至少达二小时。药物动力学研究显示,在摄入例2提取物200-800mg后,血药最高水平是在服药后1至4小时期间。
Claims (3)
1.一种从钩果草和/或Harpagophytum zeyheri DENCE制得的纯化提取物,其获得是通过将水和/或水/醇(C1-C3)的稠和/或干提取物溶于正丁醇饱和的水,用水饱和的正丁醇提取,以及真空除去正丁醇。
2.一种从钩果草和/或Harpagophytum zeyheri DENCE制备纯化提取物的方法,其特征在于将水和/或水/醇的稠和/或干提取物溶于正丁醇饱和的水,所得溶液用水饱和的正丁醇提取,然后真空除去正丁醇。
3.按权利要求1所得钩果草和/或Harpagophytum zeyheri DENCE的纯化提取物在制备药剂中的应用,包括制备用于治疗支气管哮喘、溃疡性结肠炎、局部性回肠炎、风湿类疾患,以及因药物、其它物质或疾患引起脂加氧酶水平增高的适应症的药剂。
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