CN112569294A - 一种用于治疗阿尔茨海默病的中药组合物及其制备工艺 - Google Patents
一种用于治疗阿尔茨海默病的中药组合物及其制备工艺 Download PDFInfo
- Publication number
- CN112569294A CN112569294A CN202011623866.XA CN202011623866A CN112569294A CN 112569294 A CN112569294 A CN 112569294A CN 202011623866 A CN202011623866 A CN 202011623866A CN 112569294 A CN112569294 A CN 112569294A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- extract
- coarse powder
- parts
- ethanol
- solution
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Withdrawn
Links
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
- A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
- A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
- A61K36/73—Rosaceae (Rose family), e.g. strawberry, chokeberry, blackberry, pear or firethorn
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
- A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
- A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
- A61K36/25—Araliaceae (Ginseng family), e.g. ivy, aralia, schefflera or tetrapanax
- A61K36/258—Panax (ginseng)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
- A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
- A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
- A61K36/36—Caryophyllaceae (Pink family), e.g. babysbreath or soapwort
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
- A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
- A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
- A61K36/53—Lamiaceae or Labiatae (Mint family), e.g. thyme, rosemary or lavender
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
- A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
- A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
- A61K36/64—Orobanchaceae (Broom-rape family)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
- A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
- A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
- A61K36/74—Rubiaceae (Madder family)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
- A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
- A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
- A61K36/86—Violaceae (Violet family)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2236/00—Isolation or extraction methods of medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicine
- A61K2236/10—Preparation or pretreatment of starting material
- A61K2236/19—Preparation or pretreatment of starting material involving fermentation using yeast, bacteria or both; enzymatic treatment
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2236/00—Isolation or extraction methods of medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicine
- A61K2236/30—Extraction of the material
- A61K2236/33—Extraction of the material involving extraction with hydrophilic solvents, e.g. lower alcohols, esters or ketones
- A61K2236/333—Extraction of the material involving extraction with hydrophilic solvents, e.g. lower alcohols, esters or ketones using mixed solvents, e.g. 70% EtOH
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2236/00—Isolation or extraction methods of medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicine
- A61K2236/30—Extraction of the material
- A61K2236/39—Complex extraction schemes, e.g. fractionation or repeated extraction steps
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2236/00—Isolation or extraction methods of medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicine
- A61K2236/50—Methods involving additional extraction steps
- A61K2236/51—Concentration or drying of the extract, e.g. Lyophilisation, freeze-drying or spray-drying
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2236/00—Isolation or extraction methods of medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicine
- A61K2236/50—Methods involving additional extraction steps
- A61K2236/53—Liquid-solid separation, e.g. centrifugation, sedimentation or crystallization
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2236/00—Isolation or extraction methods of medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicine
- A61K2236/50—Methods involving additional extraction steps
- A61K2236/55—Liquid-liquid separation; Phase separation
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Botany (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Medical Informatics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Alternative & Traditional Medicine (AREA)
- Mycology (AREA)
- Neurosurgery (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Neurology (AREA)
- Hospice & Palliative Care (AREA)
- Psychiatry (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
Abstract
本发明公开了一种用于治疗阿尔茨海默病的中药组合物,该中药组合物由以下原料药组成:三叶委陵菜10~20重量份,肉苁蓉6‑18重量份,竹节参9‑21重量份,金铁锁9‑21重量份,鸡屎藤9‑15重量份,风轮菜6‑9重量份,紫花地丁3‑9重量份;该中药组合物可用于预防和治疗阿尔茨海默病,且为纯中药制剂,安全低毒、廉价易得;经药理药效学实验证明,与现有技术中常用的西药相比,其治疗效果明显提高。本发明还提供了一种用于治疗阿尔茨海默病的中药组合物的制备工艺,本发明所述的用于治疗阿尔茨海默病的中药组合物的制备方法工艺简单,利于大规模工业化生产操作、污染小。
Description
技术领域
本发明属于医药领域,尤其涉及一种用于治疗阿尔茨海默病的中药组合物及其制备工艺。
背景技术
阿尔茨海默病(AD)患者会出现记忆力下降、行为能力障碍、失语、失用、生活能力下降等症状。长期的病程对病人本身、家庭和社会带来沉重负担。据流行病学研究统计,预计2050年全世界将有1.3-1.5亿老年痴呆症患者。针对Aβ异常沉积的新药研究临床试验全部宣告失败。所以,截止目前还没有完全治愈该疾病的药物,已有的为数不多的改善AD临床症状的药物,不良反应颇多。以多奈哌齐为代表的临床药物虽有效,但仅仅是暂时改善了症状,且副作用多,对已经形成的病理状态不能逆转。目前来看,从中医学伟大宝库中挖掘出疗效好、副作用小的早期预防AD的药物,是理性的选择,为人类最终战胜AD争取宝贵的时间。
中医认为,AD属于“呆病、呆痴、健忘”等范畴,从六经的层面去考量,属少阴病。AD早期是从记忆障碍开始的,并逐渐发展到神志障碍。中医所说“呆症、健记”源于心肾阴虚。记是贮藏过程,与肾的主蛰、封藏相应;忆为提取过程,由心所主。因此,记忆的障碍实际就是由“心肾”功能失调所导致。
近年来,随着对AD的研究不断深入,对其病因有更多的解释。现有的主要假说认为淀粉样β斑块在AD发病中过度积聚,而Tau蛋白过度磷酸化产生神经原纤维缠结则介导了最终的发病过程,这两种AD的基础病理改变特征不能完全解释AD发病中的很多问题。大量研究发现,大脑的固有免疫系统和炎症反应对许多神经退行性疾病的发病机制具有重要影响,是导致认知功能障碍和神经退行性疾病的重要因素,包括阿尔茨海默病(AD)、帕金森病(PD)、缺血性损伤和多发性硬化(MS)。因此,有的学者提出了神经炎症假说在AD中起了重要作用,甚至可能是根本原因。炎症过程促进了Aβ病理学的进展,在阿尔茨海默病中起着关键作用。基于这一发病机制的研究,寻找安全有效的治疗手段具有重要的研究意义。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是,克服以上背景技术中提到的不足和缺陷,提供一种用于治疗阿尔茨海默病的中药组合物,可用于预防和治疗阿尔茨海默病;且为纯中药制剂,安全低毒、廉价易得;经药理药效学实验证明,与现有技术中常用的西药相比,其治疗效果明显提高,可改善阿尔茨海默病的神经炎症状况。
本发明还提供了一种用于治疗阿尔茨海默病的中药组合物的制备工艺,本发明所述的用于治疗阿尔茨海默病的中药组合物的制备方法工艺简单,利于大规模工业化生产操作、污染小。
为解决上述技术问题,本发明提出的技术方案为:
一种用于治疗阿尔茨海默病的中药组合物,由以下原料药组成:三叶委陵菜10~20重量份,肉苁蓉6-18重量份,竹节参9-21重量份,金铁锁9-21重量份,鸡屎藤9-15重量份,风轮菜6-9重量份,紫花地丁3-9重量份。
优选的,由以下原料药组成:三叶委陵菜10~15重量份,肉苁蓉6-9重量份,竹节参9-15重量份,金铁锁9-15重量份,鸡屎藤9-15重量份,风轮菜6-9重量份,紫花地丁3-6重量份。
三叶委陵菜:学名:Potentilla freyniana Bornm.,是蔷薇科委陵菜属植物,根或全草入药,清热解毒,止痛止血,对金黄色葡萄球菌有抑制作用。
肉苁蓉:肉苁蓉,始载于《神农本草经》,列为上品。在我国有两千多年的使用历史,是常用补益类中药。肉苁蓉味甘、咸,性温,具有补肾阳、益精血、润肠通便的功效。主要有苯乙醇苷类、环烯醚萜及其苷类、木脂素类、单萜类、氨基酸和糖类等。现代药理研宄表明,肉苁蓉除具有补肾壮阳、润肠通便的作用外,还具有抗疲劳、抗衰老、增强机体免疫力及增强记忆力等作用,且没有发现不良反应。
紫花地丁:中药紫花地丁为堇菜科植物紫花地丁的干燥带根全草为多年生草本,分布于我国大部分地区,朝鲜、俄罗斯、日本等也有分布。紫花地丁味苦、辛,性寒,归心、肝经;具有清热解毒,凉血消肿等功效;可用于治疗疔疮肿毒、痈疽发背、丹毒、蛇毒咬伤等。其化学成分复杂,含有黄酮及其苷类、香豆素类、糖类、有机酸类等多种有效成分,并富含多种微量元素。现代药理学研究表明其具有抑菌、抗炎、抗内毒素、调节免疫、抗氧化、抑制病毒等作用。紫花地丁主要成分含黄酮及其苷类、香豆素、有机酸、酚类和鞣质、生物碱、氨基酸、蛋白质或多肽、糖类、甾体、挥发油等。
竹节参:竹节参为五加科人参属植物竹节参Panax japonicus C.A.Mey.的干燥根茎,具有滋养强键、活血化瘀、消痛止血等功效。竹节参主要含有三萜皂苷、多糖、氨基酸和挥发油等化学成分,竹节参总皂苷是从竹节参块根中提取分离而得,是竹节参的主要活性成分。竹节参总皂苷主要包括人参皂苷Re、竹节参皂V、竹节参皂苷Ⅳ、竹节参皂苷Ⅳa、竹节参皂苷2等。竹节参的药理研究显示,竹节参及其活性成分具有抗炎、镇痛等多种药理作用。
风轮菜:风轮菜Clinopodium chinense(Benth.)O.Kuntze为唇形科风轮菜属植物,主要分布于浙江、江苏、安徽、江西、福建等地。首载于《救荒本草》(1406年)草部,在我国有悠久的民间药用历史。现已被2015年版《中国药典》收载为断血流药用,具有收敛止血的功效,用于治疗崩漏、尿血、鼻衄,牙龈出血,创伤出血。风轮菜的止血作用对治疗和预防心血管疾病方面具有独特的优势,有着良好的开发前景。
鸡屎藤:鸡屎藤(Paederia scandens)分布广泛,在我国较为常见。干燥的鸡屎藤全草是我国传统中药,也是常用的民间草药,味甘、酸,性平。有祛风,活血消肿,导滞,解毒散结,镇咳平喘,镇静止痛的功效。用于风湿痹痛,急、慢性气管炎,小儿疳积,百日咳,哮喘,痢疾,胆绞痛,跌打损伤,胃肠痉挛,带状疱疹,结核,痈疮肿毒,蛇虫咬伤,肠结核等疾病,全草尚用于食积腹泻(土家族)。主要成分为:挥发油,环烯醚萜苷类,黄酮类,三萜类,甾体及其苷类,苯丙素类,其他包括多糖,脂肪醇等。
金铁锁(Psammosilene tunicoides W.C.Wu et C.Y.Wu)是石竹科(Caryophyllaceace)金铁锁属植物。为中国西南地区特有植物、民间常用草药,作为云南白药的一个重要成分,具有散瘀,消炎,祛风湿,止痛之功效,用于跌打损伤,风湿痹痛,胃寒痛,创伤出血的治疗。现代药理学研究表明金铁锁根中的总皂苷具有镇痛,抗炎作用,对小鼠的免疫功能也有促进和调节作用。现代药理学研究表明金铁锁总皂苷具有镇痛抗炎活性,金铁锁水煎浸膏可以明显提高福氏完全佐剂造的大鼠类风湿性关节炎(Rheumatoidarthritis,RA)疼痛模型的痛阀,减轻皮肤的肿胀度,降低疼痛级别。另两项研究表明金铁锁水煎浸膏不仅可以镇痛,还可以显著提高大鼠脑中5-羟色胺(5-HT),5-羟吲哚乙酸(5-HIAA),5-羟色氨酸(5-HTP)的含量,降低多巴胺,去甲肾上腺素的含量,以及降低血清NO/NOS的含量。中国中医科学院的研究人员认为总皂苷的抗类风湿性关节炎(RA)作用机制与抑制促炎细胞因子白细胞介素(IL-1β),肿瘤坏死因子(TNF-α)的水平有关。并且可以降低炎性组织中的丙二醛(MDA),双向调节大鼠血中的皮质醇(Cor)的水平。另外金铁锁总皂苷对小鼠迟发性超敏反应(DTH)反应、T淋巴细胞增殖反应以及细胞免疫过程中的重要细胞因子IL-1、IL-2的产生都有显著的促进和调节作用,据此可以推论,对小鼠的细胞免疫有增强和调节作用。
一种用于治疗阿尔茨海默病的中药组合物的制备方法,包括以下步骤:
S01取干燥的肉苁蓉,粉碎及过筛后,得肉苁蓉粗粉;取干燥的鸡屎藤,粉碎及过筛后,得鸡屎藤粗粉;将鸡屎藤粗粉放入布袋中,并将肉苁蓉粗粉和装有鸡屎藤粗粉的布袋置于容器中,以30%-50%乙醇溶液为溶媒,第一次加入相当于肉苁蓉粗粉及鸡屎藤粗粉总重的20-40倍溶媒,加热回流提取1.5小时后,取出装有鸡屎藤粗粉的布袋,过滤滤液,得第一次提取液;第二次再加入相当于肉苁蓉粗粉重量的10-20倍溶媒,加热回流提取1.5小时后,过滤滤液,得第二次提取液,合并第一次提取液和第二次提取液,减压回收乙醇至浸膏;浸膏加入相当于肉苁蓉粗粉重量的0.5-1倍水溶解后,再加入相当于肉苁蓉粗粉重量的1-3倍的明胶溶液混合,静置,滤过,滤液减压浓缩至浸膏;浸膏加水溶解至肉苁蓉粗粉重量的0.5-2倍,用大孔吸附树脂柱进行吸附,先用纯水洗脱除杂,再以10-30%乙醇溶液作为洗脱剂进行洗脱,收集洗脱液,浓缩至比重为1.1-1.2g/cm3后,喷雾干燥,即得提取物Ⅰ;
S02将步骤S01中提取后的装有鸡屎藤粗粉的布袋烘干至无醇味后,再将提取后的装有鸡屎藤粗粉的布袋加入发酵液中浸泡发酵,发酵过程为:50-60℃发酵3-12h,再降到37-40℃发酵1-3d,后降到28-30℃发酵1-3d;发酵完后,将提取后的装有鸡屎藤粗粉的布袋置于带有若干圆孔的隔板上,采用隔水蒸馏法提取挥发油,提取6h以上,即得挥发油提取物Ⅴ。
S03取干燥的三叶委陵菜,风轮菜,紫花地丁,分别粉碎及过筛后,将三者混合,得药材粗粉,将药材粗粉置于55-95%乙醇中浸泡0.5-1.5h,再加热回流提取2-3次,每次加入55-95%乙醇的重量相当于药材粗粉重量的10-20倍,每次提取时间为1-3h,合并滤液,得粗粉提取液;将粗粉提取液加入到聚乙二醇和磷酸盐缓冲液中,组成双水相体系;调节双水相体系的pH值为6.5-7.5,搅拌10-20min,在25-30℃条件下静置1-2h,收集上层溶液,过D101大孔吸附树脂柱进行吸附,先用纯水洗脱除杂,再用乙醇水溶液洗脱,得总黄酮洗脱液,将总黄酮洗脱液进一步减压、浓缩、干燥,得提取物Ⅱ;
S04取干燥的竹节参药材,金铁锁药材,分别粉碎及过筛,将两者混合,得药材粉末,将药材粉末中加入相当于药材粉末总重20-40倍的乙醇-氨水的混合水溶液,进行浸提,浸提时间为12-48h,过滤后,得上清液,浓缩至无醇味,得粗提液;滤渣加入纯水,回流提取1-2次,每次提取时间为1.5h,每次加入的纯水量相当于滤渣总重的10-20倍,合并提取液,过滤,浓缩至相当于药材粉末总重的0.5-1倍,加入乙醇进行醇沉,乙醇的加入量为浓缩液总重的20-50倍,过滤,收集醇沉沉淀,干燥,粉碎,即得提取物Ⅳ;醇沉上清液浓缩至无醇味后,与粗提液合并,用HPD100树脂进行吸附,收集30%的乙醇洗脱液,浓缩至药材粉末总重的0.1倍,静置48h,过滤,收集沉淀,干燥,得提取物Ⅲ;
S05将提取物Ⅰ,提取物Ⅱ,提取物Ⅲ和提取物Ⅳ充分混匀后,再加入挥发油提取物Ⅴ二次混匀后,得总提取物。
优选的,步骤S01中大孔吸附树脂的型号为HPD100、HPD300、AB-8、D101中的任意一种。
优选的,步骤S02中的发酵液由水及噻苯隆组成,且每升中水加入5-20mg噻苯隆。
优选的,步骤S02提取后的鸡屎藤粗粉与发酵液的重量比为1:(5-10)。
优选的,所述步骤S03中聚乙二醇的质量浓度范围为15%-25%;所述的磷酸缓冲液的质量浓度范围为15%-20%。
优选的,所述步骤S03的双水相体系中总粗黄酮浓度为50mg/ml。
优选的,所述步骤S04中乙醇-氨水的混合水溶液中氨水的体积百分比含量为2-4%。
优选的,所述步骤S04中醇沉时间为2-6h。
本发明和现有技术相比的有益效果为:
(1)本发明的中药组合物对用于治疗阿尔茨海默病具有显著的作用,可用于预防和治疗阿尔茨海默病;且为纯中药制剂,安全低毒、廉价易得;经药理药效学实验证明,与现有技术中常用的西药相比,其治疗效果明显提高,可改善阿尔茨海默病的神经炎症状况。
(2)本发明采用发酵和隔水蒸馏法提取鸡屎藤中的挥发油成分,显著提高了提取率,减少有效成分残留在水中,提高了活性成分含量;采用乙醇-氨水溶液作为溶媒,浸提竹节参和金铁锁的皂苷有效部位,氨水的加入,有利于药材中的皂苷析出,提高皂苷提取效率;采用双水相萃取法萃取风轮菜和紫花地丁中的黄酮有效部位,双水相萃取法是高效温和的分离技术,容易放大和保持有效成分的生物活性。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案,下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍,显而易见地,下面描述中的附图是本发明的一些实施例,对于本领域普通技术人员来讲,在不付出创造性劳动的前提下,还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为一种用于治疗阿尔茨海默病的中药组合物的药理实验设计示意图。
具体实施方式
为了便于理解本发明,下文将结合说明书附图和较佳的实施例对本发明作更全面、细致地描述,但本发明的保护范围并不限于以下具体的实施例。
除非另有定义,下文中所使用的所有专业术语与本领域技术人员通常理解的含义相同。本文中所使用的专业术语只是为了描述具体实施例的目的,并不是旨在限制本发明的保护范围。除非另有特别说明,本发明中用到的各种原材料、试剂、仪器和设备等均可通过市场购买得到或者可通过现有方法制备得到。
实施例1
1药液配制及给药:
组方灌胃药液的配置:按照表1处方比例混合,加入10倍量的水,煎煮2h,收集滤液,残渣加等量水继续煎煮1h,过滤后合并滤液,浓缩成1g/mL(以生药量计)的药液,冷藏备用。
84只小鼠随机分为7组,空白组对照组:灌胃给予双蒸水,每天一次,连续8周;D-gal模型组:颈部皮下注射D-gal(125mg/kg/d),灌胃给予双蒸水,连续8周;吡拉西坦组:灌胃给予吡拉西坦208mg/kg/d,颈部皮下注射D-gal(125mg/kg/d),连续8周;组方1,2,3,4组:灌胃给予11.18g/kg/d(以生药量计),颈部皮下注射D-gal(125mg/kg/d),连续8周。所有实验动物上午给药,下午注射D-gal(对照组给予同体积的生理盐水),连续8周后进行相关指标检测。
表1为组方的6味药材的不同重量份比例搭配
药材名 | 组方1 | 组方2 | 组方3 | 组方4 |
三叶委陵菜 | 10 | 20 | 15 | 15 |
肉苁蓉 | 6 | 18 | 9 | 9 |
竹节参 | 9 | 21 | 15 | 9 |
金铁锁 | 9 | 21 | 15 | 9 |
鸡屎藤 | 9 | 15 | 15 | 9 |
风轮菜 | 6 | 9 | 9 | 9 |
紫花地丁 | 6 | 9 | 3 | 9 |
2指标检测
2.1行为学实验及结果
2.1.1新物体识别实验(Object Recognition Test,ORT)实验分为三个阶段:熟悉期、训练期和测试期。第一天为熟悉期:试验箱中不放任何物体,让小鼠自由活动5min。训练期和测试期同时进行:训练期将两个形状、大小、颜色完全一样的物体放到一侧壁的两端,将小鼠背朝两物体放入试验箱侧壁中点,让其熟悉5min,并记录其与两物体接触的情况。1h后为测试期,将其中一个换成与原来完全不一样的物体,再将小鼠从原来放入的位置放入试验箱中,记录小鼠5min内对新旧物体的接触情况,分别为对新物体的接触时间Tn和对旧物体的接触时间Tf。用识别指数=(Tn-Tf)/(Tn+Tf)表示小鼠对物体的识别能力。
结果见表2,如表2所示,与空白组组比较,D-gal模型组小鼠识别指数明显减少(P<0.01);与D-gal模型组比较,吡拉西坦组及组方1-4组识别指数明显增加(P<0.01),结果具有统计学差异。
表2组方对D-gal模型小鼠新物体识别实验的影响
注:与空白组比较,**表示P﹤0.01;与D-gal模型组比较,##表示P﹤0.01.
2.1.2 Morris水迷宫实验及结果
水迷宫由自动摄像系统、数据处理系统及圆形水池构成,此实验分为两部分,第一部分周期为4天的定位航行实验,圆形水池分为四个象限,将圆形平台放在第四象限处并没入水面下2cm处,保持平台不动。各组小鼠于第一、第二、第三象限规定的入水点,面向池壁将小鼠放于水迷宫中,规定90s内小鼠找到了平台,则放在平台上停留30s,未能找到平台的小鼠,人为将其放置在平台30s加强记忆,实验记录其逃避潜伏期。第二部分为空间探索实验,撤去平台,于1、2、3象限同一个入水点置于水池中,记录90s内小鼠在目标象限(第四象限)的停留时间及穿越平台的次数。
如表3所示,在空间定位航行实验中随着训练次数的增加,小鼠的学习记忆也在逐渐提高。实验从第1天开始到第3天和第4天,与空白组比较,D-gal模型组小鼠的平均潜伏期明显推迟(P<0.01);与D-gal模型组比较,吡拉西坦组,组方1,组方2,组方3,组方4组平均潜伏期明显缩短(P<0.01),结果具有统计学差异。
表3组方对D-gal模型小鼠定位航行潜伏期的影响
注:与空白组比较,**表示P﹤0.01;与D-gal模型组比较,##表示P﹤0.01.
2)空间探索实验:如表4所示,在小鼠空间探索实验中,D-gal模型组小鼠穿越平台次数和靶象限停留时间明显少于空白对照组(P<0.01),与D-gal模型组比较,吡拉西坦组,组方1,组方2,组方3和组方4组穿越平台次数及靶象限停留时间明显增加(P<0.05或P<0.01),结果具有统计学差异。
表4组方对D-gal模型小鼠空间探索的影响
注:与空白组比较,**表示P﹤0.01;与D-gal模型组比较,#表示P﹤0.05,##表示P﹤0.01。
2.2指标检测
ELISA检测小鼠海马内的TNF-α、IL-1β、IL-18的含量各组小鼠行为学测试后,给予10%乌拉坦0.1mL/10g小鼠进行腹腔注射麻醉,快速断头,剥离脑组织中海马,此步骤在冰上操作,于液氮冷冻,转移至-80℃冰箱中储存备用。按ELISA试剂盒说明书操作,检测炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-18水平。
如表5所示,与空白组比较,D-gal模型组IL-1β、IL-18及TNF-α水平明显升高(P<0.01);与D-gal模型组比较,吡拉西坦组和组方组IL-1β、IL-18及TNF-α水平明显降低,结果具有统计学差异(P<0.01)。
表5组方对D-gal模型小鼠海马中IL-1β、IL-18、TNF-α含量的影响
注:与空白组比较,**表示P﹤0.01;与D-gal模型组比较,##表示P﹤0.01.
神经炎症是AD发病机制中重要的学说。在AD发生早期的患者脑内发现活化的小胶质细胞聚集,可以看到促炎介质IL-1β、TNF-α的大量存在,进一步促进神经元细胞的凋亡,导致神经退行性疾病的发生。研究显示,老年人更易发生中枢炎症反应和认知功能障碍,衰老过程中,免疫系统发生紊乱,生理功能和行为功能逐渐衰退。脑免疫系统中,小胶质细胞是脑内固有的免疫系统成分,在接受和传递炎症信号方面扮演着重要角色,监测免疫系统的稳定。在AD发病早期状态下脑内的胶质细胞更易发生活化,过度活化的MG释放大量的炎症因子,包括TNF-α、IL-1β和补体等。TNF-α、IL-1β是重要的促炎细胞因子,其含量的增加代表炎症的发生。这些炎症因子会通过受损的血脑屏障,介导脑与免疫系统之间的双向互动,导致细胞因子的调节紊乱及一系列神经并发症,激活细胞间黏附因子等毒性物质,从而引起行为认知障碍。本实验通过ELISA试剂盒检测三种炎症因子(TNF-α、IL-1β、IL-18)结果发现,与空白组比较,D-gal模型小鼠的促炎因子含量明显升高。各组方明显降低炎症因子表达量,表明各组方可以改善D-gal模型小鼠的神经炎症状态。
实施例2
一种用于治疗阿尔茨海默病的中药组合物的制备方法:包括以下步骤:
S01取干燥的肉苁蓉6重量份,粉碎及过筛后,得肉苁蓉粗粉;取干燥的鸡屎藤9重量份,粉碎及过筛后,得鸡屎藤粗粉;将鸡屎藤粗粉放入布袋中,并将肉苁蓉粗粉和装有鸡屎藤粗粉的布袋置于容器中,以30%乙醇溶液为溶媒,第一次加入相当于肉苁蓉粗粉及鸡屎藤粗粉总重的40倍溶媒,加热回流提取1.5小时后,取出装有鸡屎藤粗粉的布袋,过滤滤液,得第一次提取液;第二次再加入相当于肉苁蓉粗粉重量的20倍30%乙醇溶液,加热回流提取1.5小时后,过滤滤液,得第二次提取液,合并第一次提取液和第二次提取液,减压回收乙醇至浸膏;浸膏加入相当于肉苁蓉粗粉重量的1倍水溶解后,再加入相当于肉苁蓉粗粉重量的3倍的明胶溶液混合,明胶用于除去杂质,静置,滤过,滤液减压浓缩至浸膏;浸膏加水溶解至肉苁蓉粗粉重量的0.5倍,用HPD100大孔吸附树脂柱进行吸附,以30%乙醇溶液作为洗脱剂进行洗脱(4BV),收集洗脱液,浓缩至比重为1.15g/cm3后,喷雾干燥,即得提取物Ⅰ;经过紫外(UV)方法测定,提取物Ⅰ中的苯乙醇苷类成分的含量为39.3%。
在单独对鸡屎藤粗粉进行醇提实验中发现,鸡屎藤粗粉进行一次醇提,加入相当于鸡屎藤粗粉总重的10倍的30%乙醇溶媒,加热回流提取1.5小时后,其黄酮的提取率就可以达到80%以上,因此,考虑到多次提取,会对鸡屎藤粗粉中挥发油的含量有影响,因此鸡屎藤粗粉只进行一次醇提。
S02将步骤S01中提取后的装有鸡屎藤粗粉的布袋烘干至无醇味后,再将提取后的装有鸡屎藤粗粉的布袋加入发酵液中浸泡发酵,发酵液由水及噻苯隆组成,且每升中水加入20mg噻苯隆;后的鸡屎藤粗粉与发酵液的重量比为1:10,发酵过程为:50℃发酵8h,再降到37℃发酵3d,后降到28℃发酵3d;发酵完后,将提取后的装有鸡屎藤粗粉的布袋置于带有若干圆孔的隔板上,采用隔水蒸馏法提取挥发油,提取6h以上,即得挥发油提取物Ⅴ,经紫外可见光分析仪挥发油收率为1.32%;而采用一般水蒸气蒸馏法提取的挥发油收率为0.97%。
S03取干燥的三叶委陵菜10重量份,风轮菜6重量份,紫花地丁6重量份,分别粉碎及过筛后,将三者混合,得药材粗粉,将药材粗粉置于75%乙醇中浸泡1.5h,再加热回流提取2h,每次加入75%乙醇的重量相当于药材粗粉重量的20倍,共提取2次后进行过滤合并,得粗粉提取液;将粗粉提取液加入到聚乙二醇和磷酸盐缓冲液中,组成双水相体系;聚乙二醇的质量浓度范围为25%;所述的磷酸缓冲液的质量浓度范围为20%,所述磷酸盐缓冲液按照每升水中含有无水磷酸二氢钾(KH2PO4)34.0g及无水磷酸氢二钠(Na2HPO4)35.5g配制而成;加0.1mol/L氢氧化钠调节pH值,调节双水相体系的pH值为7.5,搅拌20min,在30℃条件下静置2h,收集上层溶液,过D101大孔吸附树脂柱进行吸附,先用纯水洗脱除杂(3BV),再用30%乙醇水溶液洗脱(4BV),得总黄酮洗脱液;将总黄酮洗脱液进一步减压、浓缩、干燥,得提取物Ⅱ,经紫外可见光分析仪测定,提取物Ⅱ中总黄酮含量为89%。以药材粗粉重量计,双水相体系中总粗黄酮浓度为50mg/ml;总粗黄酮浓度的计算公式为:药材粗粉总重(mg)/(聚乙二醇和磷酸盐缓冲液(ml)+粗粉提取液(ml))=50mg/ml
S04取干燥的竹节参9重量份,金铁锁9重量份,分别粉碎及过筛,将两者混合,得药材粉末,将药材粉末中加入相当于药材粉末总重40倍的乙醇-氨水的混合水溶液,乙醇-氨水的混合水溶液中氨水的体积百分比含量为4%;进行浸提,浸提时间为36h,过滤后,得上清液,浓缩至无醇味,得粗提液;滤渣烘干至无醇味后,加入纯水,回流提取2次,每次提取时间为1.5h,每次加入的纯水量相当于滤渣总重的10倍,合并提取液,过滤,浓缩至相当于药材粉末总重的0.5倍,加入乙醇进行醇沉,乙醇的加入量为浓缩液总重的50倍,醇沉时间为6h;收集醇沉沉淀,干燥,粉碎,即得提取物Ⅳ,提取物Ⅳ中的多糖含量为51%;醇沉上清液浓缩至无醇味后,与粗提液合并,用HPD100树脂进行吸附,收集30%的乙醇洗脱液(4BV),浓缩至药材粉末总重的0.1倍,静置48h,过滤,收集沉淀,干燥,得提取物Ⅲ,经紫外可见光分析仪测定,提取物Ⅲ中总皂苷含量为87%;乙醇中加入碱溶液,有利于药材中皂苷成分的析出,提高皂苷的提取率,本实验之所以使用氨水,主要是考虑如果使用难于挥发的碱(如氢氧化钠,氢氧化钾等),容易残留在提取物中,导致提取物的重金属超标,而氨水易挥发,因此提取物中氮元素残留量很低,不容易导致提取物的重金属超标。
S05将提取物Ⅰ,提取物Ⅱ,提取物Ⅲ和提取物Ⅳ充分混匀后,再加入挥发油提取物Ⅴ二次混匀后,得总提取物。
实施例3
一种用于治疗阿尔茨海默病的中药组合物的制备方法:包括以下步骤:
S01取干燥的肉苁蓉6重量份,粉碎及过筛后,得肉苁蓉粗粉;取干燥的鸡屎藤9重量份,粉碎及过筛后,得鸡屎藤粗粉;将鸡屎藤粗粉放入布袋中,并将肉苁蓉粗粉和装有鸡屎藤粗粉的布袋置于容器中,第一次以50%乙醇溶液为溶媒,加入相当于肉苁蓉粗粉和鸡屎藤粗粉总重的20倍溶媒,加热回流提取1.5小时后,取出装有鸡屎藤粗粉的布袋,过滤滤液,得第一次提取液;第二次再加入相当于肉苁蓉粗粉重量的10倍50%乙醇溶液,加热回流提取1.5小时后,过滤滤液,得第二次提取液,合并第一次提取液和第二次提取液,减压回收乙醇至浸膏;浸膏加入相当于肉苁蓉粗粉重量的0.5倍水溶解后,再加入相当于肉苁蓉粗粉重量的1倍的明胶溶液混合,静置,滤过,滤液减压浓缩至浸膏;浸膏加水溶解至肉苁蓉粗粉重量的2倍,用HPD300大孔吸附树脂柱进行吸附,以10%乙醇溶液作为洗脱剂进行洗脱(4BV),收集洗脱液,浓缩至比重为1.12g/cm3后,喷雾干燥,即得提取物Ⅰ;经过紫外(UV)方法测定,提取物Ⅰ中的苯乙醇苷类成分的含量为34.5%。
S02将步骤S01中提取后的装有鸡屎藤粗粉的布袋烘干至无醇味后,再将提取后的装有鸡屎藤粗粉的布袋加入发酵液中浸泡发酵,发酵液由水及噻苯隆组成,且每升中水加入5mg噻苯隆;提取后的鸡屎藤粗粉与发酵液的重量比为1:10,发酵过程为:60℃发酵3h,再降到40℃发酵3d,后降到30℃发酵1d;发酵完后,将提取后的装有鸡屎藤粗粉的布袋置于带有若干圆孔的隔板上,采用隔水蒸馏法提取挥发油,提取6h以上,即得挥发油提取物Ⅴ,经紫外可见光分析仪挥发油收率为1.02%。而采用一般水蒸气蒸馏法提取的挥发油收率为0.67%。
S03取干燥的三叶委陵菜10重量份,风轮菜6重量份,紫花地丁6重量份,分别粉碎及过筛后,将三者混合,得药材粗粉,将药材粗粉置于55%乙醇中浸泡1h,再加热回流提取3h,每次加入55%乙醇的重量相当于药材粗粉重量的10倍,共提取3次后进行过滤合并,得粗粉提取液;将粗粉提取液加入到聚乙二醇和磷酸盐缓冲液中,组成双水相体系;聚乙二醇的质量浓度范围为15%;所述的磷酸缓冲液的质量浓度范围为15%,所述磷酸盐缓冲液按照每升水中含有无水磷酸二氢钾(KH2PO4)34.0g及无水磷酸氢二钠(Na2HPO4)35.5g配制而成;调节双水相体系的pH值为6.5,搅拌10min,在25℃条件下静置2h,收集上层溶液,过D101大孔吸附树脂柱进行吸附,先用纯水洗脱除杂(3BV),再用30%乙醇水溶液洗脱(4BV),得总黄酮洗脱液;以药材粗粉重量计,所述双水相体系中总粗黄酮浓度为50mg/ml;将总黄酮洗脱液进一步减压、浓缩、干燥,得提取物Ⅱ,经紫外可见光分析仪测定,提取物Ⅱ中总黄酮含量为85%。
S04取干燥的竹节参9重量份,金铁锁9重量份,分别粉碎及过筛,将两者混合,得药材粉末,将药材粉末中加入相当于药材粉末总重20倍的乙醇-氨水的混合水溶液,乙醇-氨水的混合水溶液中氨水的体积百分比含量为4%;行浸提,浸提时间为48h,过滤后,得上清液,浓缩至无醇味,得粗提液;滤渣烘干至无醇味后,加入纯水,回流提取2次,每次加入的纯水量相当于滤渣总重的10倍,每次提取1.5h,合并提取液,过滤,浓缩至相当于药材粉末总重的1倍,加入乙醇进行醇沉,乙醇的加入量为浓缩液总重的40倍,醇沉时间为5h;收集醇沉沉淀,干燥,粉碎,即得提取物Ⅳ,提取物Ⅳ中的多糖含量为52%;醇沉上清液浓缩至无醇味后,与粗提液合并,用HPD100树脂进行吸附,收集30%的乙醇洗脱液(4BV),浓缩至药材粉末总重的0.1倍,静置48h,过滤,收集沉淀,干燥,得提取物Ⅲ,经紫外可见光分析仪测定,提取物Ⅲ中总皂苷含量为86%;
S05将提取物Ⅰ,提取物Ⅱ,提取物Ⅲ和提取物Ⅳ充分混匀后,再加入挥发油提取物Ⅴ二次混匀后,得总提取物。
实施例4
一种用于治疗阿尔茨海默病的中药组合物的制备方法:包括以下步骤:
干燥的肉苁蓉6重量份,粉碎及过筛后,得肉苁蓉粗粉;取干燥的鸡屎藤9重量份,粉碎及过筛后,得鸡屎藤粗粉;将鸡屎藤粗粉放入布袋中,并将肉苁蓉粗粉和装有鸡屎藤粗粉的布袋置于容器中,第一次以40%乙醇溶液为溶媒,加入相当于肉苁蓉粗粉和鸡屎藤粗粉总重的30倍溶媒,加热回流提取1.5小时后,取出装有鸡屎藤粗粉的布袋,过滤滤液,得第一次提取液;第二次再加入相当于肉苁蓉粗粉重量的10倍的40%乙醇溶液,加热回流提取1.5小时后,过滤滤液,得第二次提取液,合并第一次提取液和第二次提取液,减压回收乙醇至浸膏;浸膏加入相当于肉苁蓉粗粉重量的0.5倍水溶解后,再加入相当于肉苁蓉粗粉重量的2倍的明胶溶液混合,静置,滤过,滤液减压浓缩至浸膏;浸膏加水溶解至肉苁蓉粗粉重量的1倍,用AB-8大孔吸附树脂柱进行吸附,以25%乙醇溶液作为洗脱剂进行洗脱(4BV),收集洗脱液,浓缩至比重为1.19g/cm3后,喷雾干燥,即得提取物Ⅰ;经过紫外(UV)方法测定,提取物Ⅰ中的苯乙醇苷类成分的含量为35.3%。
S02将步骤S01中提取后的装有鸡屎藤粗粉的布袋烘干至无醇味后,再将提取后的装有鸡屎藤粗粉的布袋加入发酵液中浸泡发酵,发酵液由水及噻苯隆组成,且每升中水加入10mg噻苯隆;提取后的鸡屎藤粗粉与发酵液的重量比为1:5,发酵过程为:50℃发酵12h,再降到37℃发酵1d,后降到28℃发酵3d;发酵完后,将提取后的装有鸡屎藤粗粉的布袋置于带有若干圆孔的隔板上,采用隔水蒸馏法提取挥发油,提取6h以上,即得挥发油提取物Ⅴ,经紫外可见光分析仪挥发油收率为1.12%;而采用一般水蒸气蒸馏法提取的挥发油收率为0.86%。
S03取干燥的三叶委陵菜10重量份,风轮菜6重量份,紫花地丁6重量份,分别粉碎及过筛后,将三者混合,得药材粗粉,将药材粗粉置于95%乙醇中浸泡0.5h,再加热回流提取1h,每次加入95%乙醇的重量相当于药材粗粉重量的20倍,共提取3次后进行过滤合并,得粗粉提取液;将粗粉提取液加入到聚乙二醇和磷酸盐缓冲液中,组成双水相体系;聚乙二醇的质量浓度范围为20%;所述的磷酸缓冲液的质量浓度范围为15%,所述磷酸盐缓冲液按照每升水中含有无水磷酸二氢钾(KH2PO4)34.0g及无水磷酸氢二钠(Na2HPO4)35.5g配制而成;调节双水相体系的pH值为7,搅拌20min,在25℃条件下静置2h,收集上层溶液,以药材粗粉重量计,所述双水相体系中总粗黄酮浓度为50mg/ml;过D101大孔吸附树脂柱进行吸附,先用纯水洗脱除杂(3BV),再用30%乙醇水溶液洗脱(4BV),得总黄酮洗脱液;将总黄酮洗脱液进一步减压、浓缩、干燥,得提取物Ⅱ,经紫外测定,提取物Ⅱ中总黄酮含量为86%。
S04取干燥的竹节参9重量份,金铁锁9重量份,分别粉碎,过筛,将两者混合,得药材粉末,将药材粉末中加入相当于药材粉末总重40倍的乙醇-氨水的混合水溶液,乙醇-氨水的混合水溶液中氨水的体积百分比含量为3%;行浸提,浸提时间为36h,过滤后,得上清液,浓缩,干燥,即得提取物Ⅲ;滤渣烘干至无醇味后,加入纯水,回流提取2次,每次加入的纯水量相当于原料总重的15倍,合并提取液,过滤,浓缩至相当于药材粉末总重的0.5倍,加入乙醇进行醇沉,乙醇的加入量为浓缩液总重的50倍,醇沉时间为6h;收集醇沉沉淀,干燥,粉碎,即得提取物Ⅳ,经紫外可见光分析仪测定,提取物Ⅳ中的多糖含量为54%;醇沉上清液浓缩至无醇味后,与粗提液合并,用HPD100树脂进行吸附,收集30%的乙醇洗脱液(4BV),浓缩至药材粉末总重的0.1倍,静置48h,过滤,收集沉淀,干燥,得提取物Ⅲ,经紫外可见光分析仪测定,提取物Ⅲ中总皂苷含量为83%;
S05将提取物Ⅰ,提取物Ⅱ,提取物Ⅲ和提取物Ⅳ充分混匀后,再加入挥发油提取物Ⅴ二次混匀后,得总提取物。
实施例5
一种用于治疗阿尔茨海默病的中药组合物的制备方法:包括以下步骤:S01取干燥的肉苁蓉6重量份,粉碎及过筛后,得肉苁蓉粗粉;取干燥的鸡屎藤9重量份,粉碎及过筛后,得鸡屎藤粗粉;将鸡屎藤粗粉放入布袋中,并将肉苁蓉粗粉和装有鸡屎藤粗粉的布袋置于容器中,以30%乙醇溶液为溶媒,第一次加入相当于肉苁蓉粗粉及鸡屎藤粗粉总重的40倍溶媒,加热回流提取1.5小时后,取出装有鸡屎藤粗粉的布袋,过滤滤液,得第一次提取液;第二次再加入相当于肉苁蓉粗粉重量的15倍溶媒,加热回流提取1.5小时后,过滤滤液,得第二次提取液,合并第一次提取液和第二次提取液,减压回收乙醇至浸膏;浸膏加入相当于肉苁蓉粗粉重量的0.5倍水溶解后,再加入相当于肉苁蓉粗粉重量的2倍的明胶溶液混合,静置,滤过,滤液减压浓缩至浸膏;浸膏加水溶解至肉苁蓉粗粉重量2倍,用D101大孔吸附树脂柱进行吸附,以15%乙醇溶液作为洗脱剂进行洗脱,收集洗脱液(4BV),浓缩至比重为1.18g/cm3后,喷雾干燥,即得提取物Ⅰ;经过紫外(UV)方法测定,提取物Ⅰ中的苯乙醇苷类成分的含量为37.6%。
S02将步骤S01中提取后的装有鸡屎藤粗粉的布袋烘干至无醇味后,再将提取后的装有鸡屎藤粗粉的布袋加入发酵液中浸泡发酵,发酵液由水及噻苯隆组成,且每升中水加入15mg噻苯隆;提取后的鸡屎藤粗粉与发酵液的重量比为1:8,发酵过程为:50℃发酵10h,再降到37℃发酵2d,最后降到30℃发酵2d;发酵完后,将提取后的装有鸡屎藤粗粉的布袋置于带有若干圆孔的隔板上,采用隔水蒸馏法提取挥发油,提取6h以上,即得挥发油提取物Ⅴ,经紫外可见光分析仪挥发油收率为1.22%。而采用一般水蒸气蒸馏法提取的挥发油收率为0.91%。
S03取干燥的三叶委陵菜10重量份,风轮菜6重量份,紫花地丁6重量份,分别粉碎及过筛后,将2h,每次加入80%乙醇的重量相当于药材粗粉重量的20倍,共提取2次后进行过滤合并,得粗粉提取液;将粗粉提取液加入到聚乙二醇和磷酸盐缓冲液中,组成双水相体系;聚乙二醇的质量浓度范围为25%;所述的磷酸缓冲液的质量浓度范围为15%,所述磷酸盐缓冲液按照每升水中含有无水磷酸二氢钾(KH2PO4)34.0g及无水磷酸氢二钠(Na2HPO4)35.5g配制而成;调节双水相体系的pH值为7,搅拌10min,在30℃条件下静置2h,收集上层溶液,以药材粗粉重量计,所述双水相体系中总粗黄酮浓度为50mg/ml;过D101大孔吸附树脂柱进行吸附,先用纯水洗脱除杂(3BV),再用30%乙醇水溶液洗脱(4BV),得总黄酮洗脱液;将总黄酮洗脱液进一步减压、浓缩、干燥,得提取物Ⅱ,经紫外可见光分析仪测定,提取物Ⅱ中总黄酮含量为88%。
S04取干燥的竹节参9重量份,金铁锁9重量份,分别粉碎及过筛,将两者混合,得药材粉末,将药材粉末中加入相当于药材粉末总重30倍的乙醇-氨水的混合水溶液,乙醇-氨水的混合水溶液中氨水的体积百分比含量为2%;行浸提,浸提时间为12h,过滤后,得上清液,浓缩至无醇味,得粗提液;滤渣烘干至无醇味后,加入纯水,回流提取2次,每次加入的纯水量相当于滤渣总重的20倍,每次提取1.5h,合并提取液,过滤,浓缩至相当于药材粉末总重的0.5倍,加入乙醇进行醇沉,乙醇的加入量为浓缩液总重的20倍,醇沉时间为6h;收集醇沉沉淀,干燥,粉碎,即得提取物Ⅳ,提取物Ⅳ中的多糖含量为52%;醇沉上清液浓缩至无醇味后,与粗提液合并,用HPD100树脂进行吸附,收集30%的乙醇洗脱液(4BV),浓缩至药材粉末总重的0.1倍,静置48h,过滤,收集沉淀,干燥,得提取物Ⅲ,经紫外可见光分析仪测定,提取物Ⅲ中总皂苷含量为85%;
S05将提取物Ⅰ,提取物Ⅱ,提取物Ⅲ和提取物Ⅳ充分混匀后,再加入挥发油提取物Ⅴ二次混匀后,得总提取物。
尽管已用具体实施例来说明和描述了本发明,然而应意识到,在不背离本发明的精神和范围的情况下可以作出许多其它的更改和修改。因此,这意味着在所附权利要求中包括属于本发明范围内的所有这些变化和修改。
Claims (10)
1.一种用于治疗阿尔茨海默病的中药组合物,其特征在于,由以下原料药组成:三叶委陵菜10~20重量份,肉苁蓉6-18重量份,竹节参9-21重量份,金铁锁9-21重量份,鸡屎藤9-15重量份,风轮菜6-9重量份,紫花地丁3-9重量份。
2.根据权利要求1所述的一种用于治疗阿尔茨海默病的中药组合物,其特征在于,由以下原料药组成:三叶委陵菜10~15重量份,肉苁蓉6-9重量份,竹节参9-15重量份,金铁锁9-15重量份,鸡屎藤9-15重量份,风轮菜6-9重量份,紫花地丁3-6重量份。
3.一种用于治疗阿尔茨海默病的中药组合物的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:
S01取干燥的肉苁蓉药材,粉碎及过筛后,得肉苁蓉粗粉;取干燥的鸡屎藤药材,粉碎及过筛后,得鸡屎藤粗粉;将鸡屎藤粗粉放入布袋中,并将肉苁蓉粗粉和装有鸡屎藤粗粉的布袋置于容器中,以30%-50%乙醇溶液为溶媒,第一次加入相当于肉苁蓉粗粉及鸡屎藤粗粉总重的20-40倍溶媒,加热回流提取1.5小时后,取出装有鸡屎藤粗粉的布袋,过滤滤液,得第一次提取液;第二次再加入相当于肉苁蓉粗粉重量的10-20倍溶媒,加热回流提取1.5小时后,过滤滤液,得第二次提取液,合并第一次提取液和第二次提取液,减压回收乙醇至浸膏;浸膏加入相当于肉苁蓉粗粉重量的0.5-1倍水溶解后,再加入相当于肉苁蓉粗粉重量的1-3倍的明胶溶液混合,静置,滤过,滤液减压浓缩至浸膏;浸膏加水溶解至肉苁蓉粗粉重量的0.5-2倍,用大孔吸附树脂柱进行吸附,先用纯水洗脱除杂,再以10-30%乙醇溶液作为洗脱剂进行洗脱,收集洗脱液,浓缩至比重为1.1-1.2g/cm3后,喷雾干燥,即得提取物Ⅰ;
S02将步骤S01中提取后的装有鸡屎藤粗粉的布袋烘干至无醇味后,再将提取后的装有鸡屎藤粗粉的布袋加入发酵液中浸泡发酵,发酵过程为:50-60℃发酵3-12h,再降到37-40℃发酵1-3d,后降到28-30℃发酵1-3d;发酵完后,将提取后的装有鸡屎藤粗粉的布袋置于带有若干圆孔的隔板上,采用隔水蒸馏法提取挥发油,提取6h以上,即得挥发油提取物Ⅴ。
S03取干燥的三叶委陵菜药材,风轮菜药材,紫花地丁药材,分别粉碎及过筛后,将三者混合,得药材粗粉,将药材粗粉置于55-95%乙醇中浸泡0.5-1.5h,再加热回流提取2-3次,每次加入55-95%乙醇的重量相当于药材粗粉重量的10-20倍,每次提取时间为1-3h,合并滤液,得粗粉提取液;将粗粉提取液加入到聚乙二醇和磷酸盐缓冲液中,组成双水相体系;调节双水相体系的pH值为6.5-7.5,搅拌10-20min,在25-30℃条件下静置1-2h,收集上层溶液,过D101大孔吸附树脂柱进行吸附,先用纯水洗脱除杂,再用30%乙醇水溶液洗脱,得总黄酮洗脱液;将总黄酮洗脱液进一步减压、浓缩、干燥,得提取物Ⅱ;
S04取干燥的竹节参药材,金铁锁药材,分别粉碎及过筛,将两者混合,得药材粉末,将药材粉末中加入相当于药材粉末总重20-40倍的乙醇-氨水的混合水溶液,进行浸提,浸提时间为12-48h,过滤后,得上清液,浓缩至无醇味,得粗提液;滤渣加入纯水,回流提取1-2次,每次提取时间为1.5h,每次加入的纯水量相当于滤渣总重的10-20倍,合并提取液,过滤,浓缩至相当于药材粉末总重的0.5-1倍,加入乙醇进行醇沉,乙醇的加入量为浓缩液总重的20-50倍,过滤,收集醇沉沉淀,干燥,粉碎,即得提取物Ⅳ;醇沉上清液浓缩至无醇味后,与粗提液合并,用HPD100树脂进行吸附,收集30%的乙醇洗脱液,浓缩至药材粉末总重的0.1倍,静置48h,过滤,收集沉淀,干燥,得提取物Ⅲ;
S05将提取物Ⅰ,提取物Ⅱ,提取物Ⅲ和提取物Ⅳ充分混匀后,再加入挥发油提取物Ⅴ二次混匀后,得总提取物。
4.根据权利要求3所述的一种用于治疗阿尔茨海默病的中药组合物的制备方法,其特征在于,所述步骤S01中大孔吸附树脂的型号为HPD100、HPD300、AB-8、D101中的任意一种。
5.根据权利要求3所述的一种用于治疗阿尔茨海默病的中药组合物的制备方法,其特征在于,所述步骤S02中的发酵液由水及噻苯隆组成,且每升中水加入5-20mg噻苯隆。
6.根据权利要求3所述的一种用于治疗阿尔茨海默病的中药组合物的制备方法,其特征在于,所述步骤S02中提取后的鸡屎藤粗粉与发酵液的重量比为1:(5-10)。
7.根据权利要求3所述的一种用于治疗阿尔茨海默病的中药组合物的制备方法,其特征在于,所述步骤S03中聚乙二醇的质量浓度范围为15%-25%;所述的磷酸缓冲液的质量浓度范围为15%-20%。
8.根据权利要求3所述的一种用于治疗阿尔茨海默病的中药组合物的制备方法,其特征在于,所述步骤S03中双水相体系中总粗黄酮浓度为50mg/ml。
9.根据权利要求3所述的一种用于治疗阿尔茨海默病的中药组合物的制备方法,其特征在于,所述步骤S04中乙醇-氨水的混合水溶液中氨水的体积百分比含量为2-4%。
10.根据权利要求3所述的一种用于治疗阿尔茨海默病的中药组合物的制备方法,其特征在于,所述步骤S04中醇沉时间为2-6h。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202011623866.XA CN112569294A (zh) | 2020-12-31 | 2020-12-31 | 一种用于治疗阿尔茨海默病的中药组合物及其制备工艺 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202011623866.XA CN112569294A (zh) | 2020-12-31 | 2020-12-31 | 一种用于治疗阿尔茨海默病的中药组合物及其制备工艺 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN112569294A true CN112569294A (zh) | 2021-03-30 |
Family
ID=75144633
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN202011623866.XA Withdrawn CN112569294A (zh) | 2020-12-31 | 2020-12-31 | 一种用于治疗阿尔茨海默病的中药组合物及其制备工艺 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN112569294A (zh) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN115282216A (zh) * | 2022-09-15 | 2022-11-04 | 中国科学院兰州化学物理研究所 | 一种具有潜在防治阿尔茨海默病功能的组合物 |
-
2020
- 2020-12-31 CN CN202011623866.XA patent/CN112569294A/zh not_active Withdrawn
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN115282216A (zh) * | 2022-09-15 | 2022-11-04 | 中国科学院兰州化学物理研究所 | 一种具有潜在防治阿尔茨海默病功能的组合物 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN110893197B (zh) | 用于治疗痛风的蔓三七提取物及其制备方法 | |
CN113288925A (zh) | 一种防治痛风的中药组合物 | |
CN112569294A (zh) | 一种用于治疗阿尔茨海默病的中药组合物及其制备工艺 | |
CN103690710A (zh) | 一种治疗痛风、痛风性关节炎的药物组合物 | |
CN101327237A (zh) | 一种植物有效组分的组合物及其制备方法和应用 | |
CN103417630B (zh) | 山鸡椒根提取物及其用途 | |
CN100471865C (zh) | 三七二醇皂苷的制备方法 | |
CN114796392B (zh) | 一种治疗痛风的中药组合物及其应用 | |
CN104491372B (zh) | 一种玄参口含片 | |
CN107569528B (zh) | 一种治疗肝炎的药物组合物、药物制剂及应用和制备方法 | |
CN109674848A (zh) | 一种甘草提取物的制备方法与用途 | |
CN105640970B (zh) | 人参茎叶有效部位及其制备方法和应用 | |
CN101822705A (zh) | 桔梗总皂苷及单体桔梗皂苷d在解酒药物中的应用 | |
CN103705578A (zh) | 具有降血脂与抑制血糖升高作用的中药制剂及其制备方法 | |
CN113244343A (zh) | 一种治疗寒湿蕴肺困脾证候的中药组合物 | |
CN101721450B (zh) | 一种用于治疗腹膜炎的苍耳根氯仿提取物的应用 | |
CN1061264C (zh) | 一种纯中药戒毒药物及其工艺 | |
CN1579485B (zh) | 治疗肠功能紊乱的中药组合物及其制备方法 | |
CN113713046A (zh) | 晶帽石斛、杯鞘石斛的提取物及其两种化学成分作为抗炎制剂的应用 | |
CN1215876C (zh) | 一种抗痛风药物组合物及其制备方法 | |
CN115040585B (zh) | 一种中药组合物及其制备方法和应用 | |
CN116870112B (zh) | 一种治疗变应性鼻炎的中药制剂 | |
CN112402566B (zh) | 一种中药组合物在制备治疗膝关节滑膜炎的药物中的用途 | |
CN112402565B (zh) | 一种治疗膝关节滑膜炎的中药组合物及其制备方法 | |
CN108126134B (zh) | 一种治疗肝损伤的中药复方组合物、制备方法及其应用 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
WW01 | Invention patent application withdrawn after publication | ||
WW01 | Invention patent application withdrawn after publication |
Application publication date: 20210330 |