CN114796392B - 一种治疗痛风的中药组合物及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种治疗痛风的中药组合物,包括桑椹和黄精,按照重量份计,配方选自以下两种方案之一:配方1:桑椹15‑25份、槐花15‑25份、黄精5‑15份、木瓜5‑15份、白扁豆5‑15份、枸杞5‑15份、山药5‑15份、茯苓5‑15份、桃仁5‑15份、栀子5‑15份;配方2:桑椹15‑25份、槐花15‑25份、黄精5‑15份、木瓜5‑15份、白扁豆5‑15份、枸杞5‑15份、山药5‑15份、茯苓5‑15份、食叶草10‑20份、蒿子杆10‑20份、桃仁5‑15份、栀子5‑15份。本发明的中药组合物能够有效治疗通风,且疗效好,疗程短,另外配方2在配方1的基础上可以进一步提高治疗效果,降低药物用量。
Description
技术领域
本发明涉及中药制剂领域,具体涉及一种治疗痛风的中药组合物及其应用。
背景技术
痛风是由于嘌呤代谢紊乱所致血尿酸过高,沉积于关节、软组织、骨骼、软骨及肾脏等处而引起的疾病。临床表现为反复发作的关节炎、痛风性肾病、痛风凝结物沉积、尿酸性泌尿系凝结物生成。高尿酸血症是痛风发生的前期状态,痛风必伴有高尿酸血症。高尿酸血症不仅能引起关节肿胀,而且可诱发和加重脂代谢紊乱、糖尿病及心血管疾病等,增加心脑血管疾病、代谢综合征及肾脏疾病病人的病死率。痛风在我国将成为仅次于糖尿病的第二号代谢病,病情常缠绵难愈,严重影响患者日常生活和工作效率,给社会带来沉重经济负担,其有效防治一直是各国学者致力研究的重点之一。
中医学认为,痛风主要责之于先天禀赋不足、脾肾功能失调为本,湿热、痰浊、瘀血为标,并认为是内因、外因以及诱因作用的结果。①内因为先天禀赋不足、阴阳失调和正气亏虚。先天不足,肝肾亏损,精血不能充养筋脉骨髓;阴阳失衡则脏腑功能失调,尤以脾脏受损为先,脾脏受损,运化功能失调,致痰浊内生则留滞关节,不通则发为本病;化源不足,气血亏虚无以充养经脉亦可导致本病的发生发展。②外因主要为感受风、寒、湿、热之邪,有形之邪留着于肢体、筋脉、经络、关节,闭阻不通发为本病;因感受外邪各异,则邪气偏向不一,也会形成不同的证候。③诱因主要是正虚邪犯,复加过度劳累,或受外邪侵袭,或饮食不洁、不节,损伤中焦,痰浊内生。本病病位主要在肢体、关节,继则影响脏腑。本病属本虚标实,早期若抓住治疗时期并治疗得当,可最大限度地控制病情发展,尽可能地减轻患者痛苦。
西医认为高尿酸血症的病因是由遗传因素和环境因素相互作用所致,遗传因素为先天性嘌呤代谢紊乱或尿酸排泄减少所致的高尿酸血症称为原发性高尿酸血症。环境因素如高嘌呤食物摄入、高脂饮食、饮酒等都是高尿酸血症的病因。此外,随年龄增加,肾脏排泄尿酸的能力也下降。发病病机为:尿酸是一种弱酸、超过溶解度的尿酸盐析出针状结晶,特别易沉积在温度较低的远侧端肢体和酸度较高的组织。主要侵犯部位是关节的滑膜囊、关节软骨、皮下软组织及血管内皮、心脏瓣膜、胰岛、肾脏。目前降尿酸的药物主要有黄嘌呤氧化酶抑制剂、尿酸转运体抑制剂和重组尿酸酶补充剂等,例如秋水仙碱、糖皮质激素和别嘌醇等,但对肝肾毒性较大。随着中药的发展,利用中药治疗高尿酸血症的研究越来越来多,中药越来越成为疗效确切、安全性高的降尿酸药物。
芦丁是一种天然的黄酮苷,属于广泛存在于植物中的黄酮醇配糖体,具有抗炎、抗氧化、抗过敏、抗病毒等功效。芦丁脱去一分子鼠李糖和葡萄糖得到生物活性更强的苷元-槲皮素,槲皮素(Quercetin,3,3’,4’,5,7-五羟基黄酮)是一类黄酮类化合物,广泛存在于各种植物性食物中,具有抗氧化、抗炎等生物活性。已有大量研究表明槲皮素具有降尿酸、治疗痛风性关节炎的作用。槲皮素可通过抑制黄嘌呤氧化酶(XO)活性和促进尿酸排泄降低血尿酸浓度。
经检索,现有技术中已有很多关于治疗痛风的中药组合物,但是均与本发明的配方和制备方法不同。
发明内容
针对现有技术的不足,本发明的目的是提供一种中药组合物及其制备方法和应用,该产品配方独特,制备方法可以提高有效物质含量,产品可以用于制备治疗痛风的药物。
为实现上述发明目的,本发明的技术方案是:
一种中药组合物,包括桑椹和黄精,按照重量份计,配方选自以下两种方案之一:
配方1:桑椹15-25份、槐花15-25份、黄精5-15份、木瓜5-15份、白扁豆5-15份、枸杞5-15份、山药5-15份、茯苓5-15份、桃仁5-15份、栀子5-15份;
配方2:桑椹15-25份、槐花15-25份、黄精5-15份、木瓜5-15份、白扁豆5-15份、枸杞5-15份、山药5-15份、茯苓5-15份、食叶草10-20份、蒿子杆10-20份、桃仁5-15份、栀子5-15份。
制备方法包括以下步骤,按上述配比:
1)将桑椹和槐花加药材质量3-4倍量的60%-65%乙醇溶液回流提取2-3次,每次提取2h-3h,200目-300目过滤,将滤液减压浓缩至相对密度1.21~1.25的清膏,60℃-65℃趁热过滤后取滤液备用;
2)将枯草芽孢杆菌接种于液体培养基中,在pH值为5.3-5.8,接种量4%-5%,30℃-36℃下培养28h-35h,得枯草芽孢杆菌液;将体积比为0.5%-1%的枯草芽孢杆菌液加入到步骤1中的滤液中,在30℃-36℃下培养28h-35h,得发酵液,离心10-15min,取上清液,备用;
3)将配方中的其余原料提取2-3次,每次加6-8倍量水提取2h-3h,200目-300目过滤,合并滤液,将滤液减压浓缩至相对密度1.21~1.25的清膏,60℃-65℃趁热过滤后取滤液备用;
4)加入糖、2-3倍于糖质量的水,辅料,搅匀,微沸2-3小时,得到糖浆备用;
5)将步骤2得到的上清液、步骤3得到的滤液与步骤4得到的糖浆混合,浓缩至相对密度为1.25~1.30的膏剂。
优选的,按照重量份计,配方1和配比如下:桑椹20份、槐花20份、黄精10份、木瓜10份、白扁豆10份、枸杞10份、山药10份、茯苓10份、桃仁10份、栀子10份。
优选的,按照重量份计,配方2和配比如下:桑椹20、槐花20、黄精10、木瓜10、白扁豆10、枸杞10、山药10茯苓10、食叶草15、蒿子杆15、桃仁10、栀子10。
优选的,按照重量份计,配方2和配比如下:桑椹22份、槐花23份、黄精12份、木瓜13份、白扁豆11份、枸杞13份、山药12份、茯苓8份、食叶草12份、蒿子杆14份、桃仁9份、栀子10份。
优选的,所述相对密度是在温度60℃下的相对密度。
优选的,所述滤液减压浓缩是在温度60~80℃,真空度-0.06~-0.08MPa下进行。
优选的,制备方法的步骤(4)中所述糖为低聚异麦芽糖,所述辅料为山梨酸钾。
优选的,本发明还提供了所述中药组合物在制备治疗痛风的药物中的应用。
所述液体培养基为现有技术,可以是市面上可以买到的常规液体培养基。
下面对本发明做进一步解释和说明:
本发明的配方配伍原理如下:
桑椹,甘、酸,寒。归心、肝、肾经,滋阴补血,生津润燥。用于肝肾阴虚,眩晕耳鸣,心悸失眠,须发早白,津伤口渴,内热消渴,肠燥便秘。《新修本草》:“桑椹,味甘,寒,无毒,单食,主消渴。”《医心方》、《证类本草》:“椹,利五脏、关节,通血气。”桑椹生理活性成分为维生素、矿物质、蛋白质和氨基酸、桑椹红色素、桑椹多糖、桑椹籽黄酮。可以降低脂褐素、丙二醛(MDA)和过氧化脂质含量,能够提高抗氧化酶活性。桑椹水提取物具有抑制脂质过氧化的作用,从而具有抗动脉粥样硬化作用,进而能够预防心血管疾病。
黄精,甘,平。归脾、肺、肾经,补气养阴,健脾,润肺,益肾。用于脾胃气虚,体倦乏力,胃阴不足,口干食少,肺虚燥咳,劳嗽咳血,精血不足,腰膝酸软,须发早白,内热消渴。《名医别录》:“补中益气,除风湿,安五脏,久服轻身、延年、不饥。”黄精的活性成分为糖类、皂苷、黄酮、木脂素、氨基酸、醌类化合物、维生素、生物碱等。黄精多糖对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和藤黄球菌均具有明显的抑制作用,对革兰氏阳性菌的抑菌效果尤为明显。
槐花,苦,微寒。归肝、大肠经,凉血止血,清肝泻火。用于便血,痔血,血痢,崩漏,吐血,筑血,肝热目赤,头痛眩晕。《神农本草经》:“久服,明目益气,头不白,延年”。《外医别录》:“槐花,服之令脑满,发不白而长生。”槐花的化学成分有黄酮类、皂苷类、脂肪酸类、多糖类、挥发性成分等。有研究表明,槐花的水提和醇提物均能抑制黄嘌呤氧化酶的活性。
木瓜:酸,温。归肝、脾经。舒筋活络,和胃化湿。用于湿痹拘挛,腰膝关节酸重疼痛,暑湿吐泻,转筋挛痛,脚气水肿。《本草分经》载其酸涩而温,和平理胃、敛肺伐肝、化食止渴、调营卫利筋骨去湿热等功效。现代研究表明,活性成分为三萜类、苯丙素类、黄酮类、有机酸类、氨基酸、油脂类、甾类等多种化学成分,具有镇痛、抗炎、增强免疫、保肝、抗胃溃疡与肠损伤、抗肿瘤等药理活性。
白扁豆:甘,微温。归脾、胃经。健脾化湿,和中消暑。用于脾胃虚弱,食欲不振,大便澹泻,白带过多,暑湿吐泻,胸闷腹胀。炒白扁豆健脾化湿。用于脾虚泄泻,白带过多。现代药理研究表明,其活性成分为蛋白质(胰蛋白酶抑制剂、淀粉酶抑制物、酪氨酸酶、血球凝集素A、B)、糖类(棉子糖、水苏糖、果糖)、甾体(豆甾醇)及苷类(淀粉氰苷)、维生素有维生素A、B、C和矿物质类等。具有抗菌、抗病毒、抗肿瘤、抗氧化活性等作用。
枸杞:甘,平。归肝、肾经。滋补肝肾,益精明目。用于虚劳精亏,腰膝酸痛,眩晕耳鸣,阳萎遗精,内热消渴,血虚萎黄,目昏不明。现代药理研究表明,枸杞子中富含糖类(枸杞多糖)、生物碱类(甜菜碱、莨菪烷类、吲哚类、吡咯类)、黄酮类(芦丁、槲皮素、山奈酚、金丝桃苷)及酚酸类成分,具有调节免疫、抗氧化、抗衰老、降血脂血糖、抗肿瘤等作用。
山药:甘,平。归脾、肺、肾经。补脾养胃,生津益肺,补肾涩精。用于脾虚食少,久泻不止,肺虚喘咳,肾虚遗精,带下,尿频,虚热消渴。鉄炒山药补脾健胃。用于脾虚食少,泄泻便澹,白带过多。现代药理活性表明,山药活性成分为多糖(山药多糖)、18种氨基酸、脂肪酸(18种饱和脂肪酸,9种饱和脂肪酸)、山药素类化合物、尿囊素、微量元素、淀粉等。具有降血糖、降血脂、抗氧化、调节脾胃、抗肿瘤、免疫调节等药理作用。
茯苓,甘、淡,平。归心、肺、脾、肾经。利水渗湿,健脾,宁心。用于水肿尿少,痰饮眩悸,脾虚食少,便澹泄泻,心神不安,惊悸失眠。。《神农本草经》:“茯苓,味甘,平。主胸肋逆气,忧恚,惊邪,悸心下结痛,寒热烦满咳逆,口焦舌干,利小便。久服,安魂、养神,不饥,延年。”《药性论》:“茯苓能开胃,止呕逆,安心神,主肺痿痰癕,并小儿惊痫,疗心腹胀满,妇女热淋,赤者破结气。”现代药理研究表明,茯苓富含蛋白质及茯苓多糖、茯苓聚糖、茯苓酸、脂肪酸、卵磷脂、腺嘌呤、蛋白酶、三萜类化合物等物质。茯苓水提物可以通过抑制黄嘌呤氧化酶(xanthine oxidase,XOD)的活性,发挥降低血尿酸的作用。
桃仁,苦、甘,平。归心、肝、大肠经,活血祛瘀,润肠通便,止咳平喘。用于经闭痛经,癥痕痞块,肺痈肠痈,跌扑损伤,肠燥便秘,咳嗽气喘。《神农本草经》:“主瘀血,血闭瘕邪,杀小虫。”《本草纲目》:“治传尸,尸疰,魇寐。主血滞风痹,骨蒸,肝疟寒热,产后血病。产后阴痛敷之,妇人阴痒塞之。”现代研究表明,其活性成分为挥发油类、氰苷、黄酮类、脂肪酸类、甾醇类、桃仁蛋白等。药理研究表明,桃仁提取物苦杏仁苷能激活ERK1/2通路,使其具有强效神经营养剂功效。桃仁孕激素受体A(PR-A),孕激素受体B(PR-B)蛋白具有抗肉芽肿形成作用。
食叶草:食叶草(蛋白草)一草两用,粮草兼顾。食用之后能起到较好的清热解毒效果。对于上火所引起的咽干喉痛、咳嗽咳痰、扁桃体炎、便秘等热症,都能起到改善作用。经相关研究表明,高含植物蛋白质,富含人体所需的十八种氨基酸、维生素、叶绿素、绿原酸、有益矿物质等,特别是钾、硒、SOD、芦丁、单宁、异黄酮、大黄素等有药用功效的元素,食叶草根中含有一种皂角甙类物质,它有把肠内的胆固醇结合成不易吸收的混合物质而排出。
蒿子杆:辛,甘,归脾、肝、胃经。主治脾胃不和,二便不通,化痰止咳。相关研究表明,其化学成分为黄酮、酚酸、倍半萜内酯、单萜烯、二萜、甘油二酯糖苷、生物碱、植物甾醇、杂环化合物。总黄酮能清除羟基自由基,具有较强的抗氧化活性;蒿子杆甲醇提取物还具有清除NO自由基和超氧化物歧化酶(SOD)样活性。二萜成分Kaurane-3β,16β-diol对多种微生物有很好的抑菌活性。
栀子:苦,寒。归心、肺、三焦经。泻火除烦,清热利湿,凉血解毒;用于热病心烦,湿热黄疸,淋证涩痛,血热吐细,目赤肿痛,火毒疮疡。现代药理研究表明,栀子的活性成分为环烯醚萜类、二萜类、黄酮类和有机酸酯类,活性成分栀子苷能下调促炎细胞因子干扰素-γ、IL-6和IL-17的分泌水平,上调抗炎细胞因子IL-4和转化生长因子-β1水平,恢复促炎/抗炎细胞因子间的动态平衡。
本专利配方根据中医辨证论治的原则,从清热利湿,清血凉血、健脾补肾,活血通络入手组方。方中桑椹滋阴补血清血,槐花凉血止血,清肝泻火,两者性偏寒,均可入肝经,主滋肝阴,清肝火;共为君药;食叶草性偏寒,清热解毒,蒿子杆性凉味甘,清心安神,健脾和胃,栀子清热利湿,凉血解毒,三者协同清热凉血,清心安神,健脾;茯苓,利水渗湿,健脾,白扁豆,健脾化湿,和中消暑;木瓜祛风湿止痛,止咳平喘的功效;共为臣药;山药、枸杞、黄精滋阴补血、补气养阴,补肝肾;桃仁具有活血祛瘀,能发挥其活血止痛、通利关节之药力,同为佐使。诸药合奏滋清热利湿,清血凉血,活血祛瘀、利湿通络。现代药理研究证明,方中桑椹、黄精、槐花、茯苓等都有较好的抗炎、降低尿酸的作用,故用之临床,确有卓效。本方配伍着眼先天兼顾脾肾,共奏清热利湿,清血凉血、健脾补肾,活血通络之功。
与现有技术相比,本发明的优势是:
1、本发明配方独特,配伍合理,本配方提供的中药组合物能够有效治疗通风,且治疗效果好,疗程短,可以能够极大程度减少通风患者的身体痛苦;另外配方中蒿子杆和食叶草与其他药味相配伍,对降尿酸、抗炎、镇痛作用显著,可以进一步降低药物用量。
2、本发明的方法采用一定浓度的乙醇对桑椹和槐花连续回流提取,得到一定浓度的芦丁和槲皮素,再经过枯草芽孢杆菌发酵产生β-葡萄糖苷酶来酶解芦丁转化为槲皮素,增加活性成分的转化,从而调节体内的尿酸,可以有效提高组合物的降尿酸效果。进一步通过将食叶草、蒿子杆、茯苓、桃仁、黄精、木瓜、白扁豆、枸杞、山药、栀子混合提取,可相互作用,促进有效成分的溶出,极大地提高了活性成分的浓度,增强了降尿酸、抗炎、镇痛效果。
附图说明
图1为芦丁的化学结构式;
图2为槲皮素的化学结构式;
图3为桑椹和槐花提取前、后,发酵后芦丁和槲皮素质量分数变化。
具体实施方式
以下结合附图和具体实施方式对本发明的详细结构作进一步描述。
实施例1:中药组合物的配方和制备
1、配方及配比(按重量份):
桑椹20份、槐花20份、黄精10份、木瓜10份、白扁豆10份、枸杞10份、山药10份、茯苓10份、食叶草15份、蒿子杆15份、桃仁10份、栀子10份。
2、制备方法
1)将桑椹和槐花加药材质量3倍量的60%乙醇溶液回流提取3次,每次提取2h,200目过滤,将滤液减压浓缩(温度60~80℃,真空度-0.06~-0.08MPa)至相对密度1.21~1.25(60℃)的清膏,趁热过滤(100目)后取滤液备用。
2)将枯草芽孢杆菌接种于液体培养基中,在pH值为5.5,培养转速200r/min,接种量4%,36℃下培养28h,得枯草芽孢杆菌液;将体积比为0.5%枯草芽孢杆菌液加入到步骤1中的清膏中,在36℃下培养28h,得发酵液。发酵液离心:
5000rpm,离心10min,取上清液,备用;
3)将黄精、食叶草、茯苓、蒿子杆、桃仁、木瓜、白扁豆、枸杞、山药、栀子提取两次,第一次加8倍量水提取2h,200目过滤,第二次加6倍量水提取1h,200目过滤,合并滤液。将滤液减压浓缩(温度60~80℃,真空度-0.06~-0.08MPa)至相对密度1.21~1.25(60℃)的清膏,趁热过滤(100目)后取滤液备用。
4)加入低聚异麦芽糖、2倍于低聚异麦芽糖质量的水,山梨酸钾,搅匀,微沸2小时,得到糖浆备用;
5)将步骤2得到的上清液、步骤3得到的滤液与步骤4得到的糖浆混合,浓缩至相对密度为1.25~1.30的膏剂。
3、桑椹和槐花提取前,提取后,发酵后芦丁和槲皮素质量分数的测定:
色谱柱:SpherisorbODS2(4.6mm*250mm*5um);柱温:25℃;流动相:
甲醇一水(60:40),磷酸(色谱纯)调pH值至3.5;流速:1mL/min;检测器:
紫外检测器;检测波长:365nm;进样量:20uL。
分别配制质量浓度为5、10、15、20、25、30ug/mL芦丁、槲皮素标准品溶液,以质量浓度(Y)对峰面积(X)进行回归计算。
式中:A1:为提取前芦丁质量分数,mg/g;
A2:为发酵后芦丁质量分数,mg/g;
4、结果与分析
芦丁和槲皮素质量分数的测定结果
采用HPLC法测定桑椹和槐花提取前,提取后,发酵后芦丁和槲皮素质量分数的变化.其结果如图3。根据芦丁和槲皮素标准品液相色谱测定结果,芦丁、槲皮素标准品的出峰时间分别在3.1min和5.3min左右.桑椹和槐花样品中第一个峰的保留时间为3.1min左右,第二个峰的保留时间为5.3min左右.出峰时间分别与芦丁、槲皮素标准品出峰时间一致,可以确定这两种物质分别为芦丁和槲皮素.分别以芦丁和槲皮素的质量浓度(Y)对峰面积(X)作回归计算,结果表明:在5~30ug/mL范围内,芦丁和槲皮素均有着良好的线性关系,回归方程分别为Y=0.0746X-1.9799,R2=0.9998;Y=0.0222X+0.4399,R2=0.9996.
从图3可以看出,提取前,发酵前桑葚和槐花样品中芦丁的质量分数较高,槲皮素的质量分数较低,根据芦丁和槲皮素的线性回归方程计算得出,芦丁和槲皮素的质量分数分别为83.62mg/g和3.53mg/g;经乙醇提取后,样品中芦丁的质量分数降低为50.16mg/g,槲皮素的质量分数则提高,达到8.56mg/g;经枯草芽孢杆菌发酵产生β-葡萄糖苷酶后,样品中芦丁的质量分数降低为3.27mg/g,槲皮素的质量分数上升至44.38mg/g,是发酵前的12.57倍,是提取后的5.18倍。
实施例2中药组合物抗痛风及抗高尿酸血症研究
1.试验方法:运用次黄嘌吟、氧嗪酸钾致大鼠高尿酸血症法观察其对尿酸、黄嘌呤氧化酶的影响;运用醋酸扭体法观察其镇痛作用;运用尿酸盐结晶注入踝关节腔,造成踝关节肿胀以观察其抗炎作用;求证中药组合物的抗痛风作用。
2.试验材料
2.1动物SPF级SD大鼠132雌雄各半,体重180±20g,购于湖南安生美药物研究院有限公司
2.2药物:具体如下:
配方SHGQ1:实施例1的产品(全配方产品)
配方SHGQ2:主要成分:桑椹20份、槐花20份(制备方法同实施例1的步骤1、2、4和5,无步骤3的成分)
配方SHGQ3:主要成分:桑椹20份、槐花20份、黄精10份、木瓜10份、白扁豆10份、枸杞10份、山药10份、茯苓10份、桃仁10份、栀子10份(制备方法同实施例1,缺少食叶草、蒿子杆)
栀子以上药材均购于湖南振兴中药有限公司
试剂次黄嘌呤(上海源叶生物科技有限公司);氧嗪酸钾(麦克林);尿酸试剂盒,黄嘌呤氧化酶测试盒(南京建成生物科技有限公司);别嘌醇片(重庆青阳药业有限公司);吲哚美辛肠溶片(赤峰制药集团赤峰蒙欣药业有限公司):冰醋酸(天津市试剂三厂):黄嘌呤(国药集团化学试剂有限公司);二甲苯(天津市试剂六厂):
2.3仪器设备:超净工作台、恒温培养箱、离心机、自动生化分析仪、恒温水浴箱、分光光度计等。
3.实验方法
中药组合物(SHGQ)对给予大量嘌呤类物质及尿酸酶抑制剂致大鼠高尿酸血症模型血清尿酸(UA)、黄嘌吟氧化酶(XOD)影响:取大鼠132只,随机分为正常组、模型组、阳性对照组、SHGQ1高、中、低剂量组、SHGQ2高、中、低剂量组、SHGQ3高、中、低剂量组共12组。除正常组外,其余各组以次黄嘌吟100mg/kg灌胃,腹腔注射氧嗪酸钾100mg/kg,持续2周,中药组合物各剂量组从造模开始予以灌胃,连续14天,第14天取血,测定大鼠血清UA,XOD值。大鼠的镇痛作用(扭体法)观察:大鼠分组同上,每日灌胃1次,连续给药,末次给药后1h,每只大鼠腹腔注射0.6%醋酸溶液2mL。观察并记录注射醋酸后小鼠扭体潜伏期及20min内扭体(腹部内凹躯干与后肢伸张、臀部高起)次数。消肿实验方法:先测各大鼠右踝关节容积(mL)2次(间隔1h),取平均值作为致炎前正常大鼠右踝关节容积,然后每日给药一次,末次给药后1h致炎,即;无菌操作,均用6号注射针在受试大鼠右侧踝关节背侧从45°方向插入胫骨肌键内侧,将0.2mL尿酸钠溶液注入到踝关节腔,形成急性痛风性关节炎模型。采用毛细管放大原理,将动物踝关节容积反映出来。
膏剂的成人临床拟用剂量为30g/日,按体表面积折算,大鼠临床等效剂量=(人的临床剂量为Xmg/kg,换算成大鼠的剂量:大鼠的剂量大鼠的剂量
=Xmg/kgx70kgx0.018/200g=Xmg/kgx70kgx0.018/0.2kg=6.3xmg/kg
膏剂成人临床拟用剂量为30g,大鼠临床等效剂量:6.3x30g/70kg=2.7g/kg,大鼠膏剂低、中、高剂量设定为临床等效剂量的1/2、1、2倍。故本次实验大鼠膏剂低、中、高剂量分别为1.35g/kg、2.70g/kg、5.40g/kg;
4.结果分析
表1中药组合物对大鼠血尿酸水平的影响
注:模型组与空白组:“*”P<0.01;
SHGQ1、SHGQ2、SHGQ3与模型组对照:“△”P<0.05;“△△”P<0.01;
从表1可以看出,模型组与空白组比较,血尿酸值明显升高(P<0.01),表明造模是成功的。SHGQ1、SHGQ2、SHGQ3与模型组对比,血尿酸值均有下降,中药组合物降血尿酸效果为:SHGQ1>SHGQ3>SHGQ2,表明降低血尿酸作用与药物组成及剂量呈相关性。SHGQ1高、中、低剂量组,SHGQ3高剂量组与阳性对照相比有统计学意义,表明其降尿酸作用优于别嘌醇片组,证明SHGQ1对次黄嘌呤合氧嗪酸钾盐法导致的高尿酸血症血症有明显降低尿酸的作用。
表2中药组合物对大鼠黄嘌呤氧化酶(XOD)水平的影响
注:模型组与空白组:“*”P<0.01;
SHGQ1组与模型组对照:“△△”P<0.01;
SHGQ3组模型组对照“△”P<0.05;
模型组与空白组比较黄嘌呤氧化酶浓度值有明显升高,有显著性差别,可能与血尿酸升高后产生的反馈性升高有关。SHGQ1与模型组对比,黄嘌呤氧化酶浓度均有下降(P<0.01)。SHGQ3与模型组对比,黄嘌呤氧化酶浓度均有下降(P<0.05)。SHGQ1(高、中、低剂量组)、SHGQ3高剂量组与阳性对照组比较显著性差异。证明中药组合物对黄嘌呤氧化酶活性的抑制上存在剂量及药物组成的相关性。
表3中药组合物对大鼠醋酸所致扭体次数的影响
注:SHGQ1各组:“**”P<0.01;
SHGQ3(高、中剂量组)“*”P<0.05;
表3结果表明:SHGQ1各组,SHGQ3高、中剂量组与模型组比较有显著性差异。SHGQ2各剂量组与模型组比较无显著性差异.表明SHGQ1及SHGQ3对醋酸致疼痛实验有一定的镇痛作用。
表4中药组合物对大鼠MSU所致肿胀的影响
注:SHGQ1(高、中、低剂量组)“ΔΔ”P<0.01;
SHGQ3高“Δ”P<0.05;
空白组与模型组:“*”P<0.05。
造模后各组大鼠关节肿胀度均有所增高,且24h后达高峰,其中以模型组最为明显。模型组与空白组比较有显著性差异(P<0.05),提示造模成功。药物治疗后,痛风性关节炎大鼠关节肿胀度有不同程度下降,SHGQ1(高、中、低剂量组)下降幅度由低剂量至高剂量依次增加;SHGQ3高剂量组关节肿胀程度逐渐下降,与模型组比较有显著性差异(P<0.05)。
5.实验结论
动物实验显示:SHGQ1、SHGQ2、SHGQ3各剂量组与模型组比较,血尿酸值、黄嘌呤氧化酶(XOD)浓度均有下降。SHGQ1对次黄嘌吟合氧嗪酸钾盐法导致的高尿酸血症,降低尿酸的作用最为明显。三个方中SHGQ1对大鼠动物模型有良好的降尿酸、抑制XOD、镇痛、抗炎作用最好,SHGQ3次之,SHGQ2效果最差。SHGQ1与SHGQ3比较,SHGQ1方中增加了食叶草和蒿子杆,而SHGQ1降尿酸、抑制XOD、镇痛、抗炎的整体效果明显强于SHGQ3,因此揭示食叶草和蒿子杆具有显著的降尿酸、抑制XOD、镇痛、抗炎功效。
实施例3临床研究
1、根据痛风症状的轻重缓急,痛风可分为急性痛风和慢性痛风
(1)急性痛风起病急骤,多在午夜发作,剧痛而不能入睡,多表现为下肢单关节炎部分表现为膝、指、腕、踝、足跟等关节及其周围组织红肿热痛、局部压痛等,患处可现关节积液。反复发作并演变成多关节炎进而进入慢性期。
(2)慢性痛风常常会导致多关节受累,表现为患处畸形、僵硬、关节肿大及活动受限等,并反复发作成急性痛风。
2、A组制备方法(没有发酵处理):
配方按重量份计,桑椹22份、槐花23份、黄精12份、木瓜13份、白扁豆11份、枸杞13份、山药12份、茯苓8份、食叶草12份、蒿子杆14份、桃仁9份、栀子10份。
(一)将桑椹和槐花加药材质量3倍量的60%乙醇溶液回流提取3次,每次提取2h,200过滤,将滤液减压浓缩(温度60~80℃,真空度-0.06~-0.08MPa)至相对密度1.21~1.25(60℃)的清膏,趁热过滤(100目)后取滤液备用。
(二)将黄精、食叶草、茯苓、蒿子杆、桃仁、木瓜、白扁豆、枸杞、山药、栀子提取两次,第一次加8倍量水提取2h,200目过滤,第二次加6倍量水提取1h,200目过滤,将滤液减压浓缩(温度60~80℃,真空度-0.06~-0.08MPa)至相对密度1.21~1.25(60℃)的清膏,趁热过滤(100目)后取滤液备用。
(三)加入低聚异麦芽糖50%的水,山梨酸钾,搅匀,微沸2小时,得到糖浆备用;
(四)将步骤1得到的滤液、步骤2得到的滤液与步骤3得到的糖浆混合,浓缩至相对密度为1.25~1.30的膏剂。
B组制备方法:
配方按重量份计,桑椹25份、槐花24份、黄精12份、木瓜13份、白扁豆12份、枸杞13份、山药10份、茯苓9份、食叶草12份、蒿子杆12份、桃仁8份、栀子8份。
(一)将桑椹和槐花加药材质量3倍量的60%乙醇溶液回流提取3次,每次提取2h,200过滤,将滤液减压浓缩(温度60~80℃,真空度-0.06~-0.08MPa)至相对密度1.21~1.25(60℃)的清膏,趁热过滤(100目)后取滤液备用。
(二)将枯草芽孢杆菌接种于液体培养基中,在pH值为5.5,培养转速200r/min,、接种量4%,36℃下培养28h,得枯草芽孢杆菌液;将体积比为0.5%枯草芽孢杆菌液加入到步骤1中的清膏中,在36℃下培养28h,得发酵液。发酵液离心:5000rpm,离心10min,取上清液,备用;
(三)将黄精、食叶草、茯苓、蒿子杆、桃仁、木瓜、白扁豆、枸杞、山药、栀子提取两次,第一次加8倍量水提取2h,200目过滤,第二次加6倍量水提取1h,200目过滤,合并滤液。将滤液减压浓缩(温度60~80℃,真空度-0.06~-0.08MPa)至相对密度1.21~1.25(60℃)的清膏,趁热过滤(100目)后取滤液备用。
(四)加入低聚异麦芽糖50%的水,山梨酸钾,搅匀,微沸2小时,得到糖浆备用;
(五)将步骤2得到的离心液、步骤3得到的滤液与步骤4得到的糖浆混合,浓缩至相对密度为1.25~1.30的膏剂。
3、临床资料
收集2018年12月至2021年10月湖南谷医堂连锁中医门诊有限公司长沙雨花京豪大厦门诊部病例符合痛风诊断的患者90例.采用随机数字表法将患者随机分为A(乙醇提取)组和B组(发酵),其中男76例,女14例;年龄30~61岁,平均年龄为42.47岁;病程0~10年,病程5年以内者82例,6~10年以内者8例.急性痛风性患者60例,慢性痛风性患者30例.A组45例,男38例,女性7例,年龄30~61岁,平均年龄42.24岁,病程0~10年;B组45例,男38例,女性7例,年龄30~58岁,平均年龄42.71岁,病程0~10年,两组患者性别、年龄、病程等一般资料差异,均无统计学意义(P>0.05),具有可比性。
4、纳入标准
4.1诊断标准西医诊断标准西医诊断标准参照美国风湿病协会于1997年公布的急性痛风性关节炎的诊断标准,具体如下:(1)特异性的尿酸盐结晶存在于关节液中;(2)用偏正振光显微镜或化学方法检出尿酸盐结晶存在于痛风石中;(3)含有以下12项(临床、X线表现及实验室检查)中的6项(包括6项)以上者。①急性关节炎发作在1次以上者;②炎症高峰期在1天以内达到;③单关节炎发作;④关节病灶可见发红;⑤肿胀或疼痛表现于第一跖趾关节;⑥第一跖趾关节单侧受累;⑦跗骨关节单侧受累;⑧可疑痛风石;⑨高尿酸血症;⑩X线显示存在非对称性关节内肿胀;X线示骨皮质下囊肿但无骨侵蚀;/>关节液培养阴性于关节炎症发作期间;满足上述(1)、(2)、(3)中任何一项具备,即可诊断。
4.2排除标准
合并严重并发症如败血症、颅内感染、血液系统疾病及严重心肝肾衰竭患者;不符合纳入标准,本身具有关节炎症表现的疾病;并发症影响到关节者,未按规定服药或对试验药物过敏者或不能耐受试验药物者;无法判断疗效,或资料不全等影响疗效或安全性判断者;未按医嘱,进食高嘌呤饮食或其他降尿酸、止痛药;任何原因不能完成治疗者。
5、治疗方法
每天三次,早中晚各一次,每次10g,治疗期间均进食低盐低嘌呤饮食,每月为1个疗程,2个疗程判断疗效,治疗3月、6月记录复发病例,计算复发率。
6、疗效观察
疗效判断参照《中药新药临床研究指导原则》临床痊愈:症状完全消失,关节功能恢复正常,主要理化检查指标正常;显效:主要症状消失,关节功能恢复正常,主要理化检查指标基本正常;有效:主要症状基本消失,主要关节功能及理化指标有所改善;无效:与治疗前相比,各方面均无改善;
7、统计学方法
统计学方法将采集后的数据建立数据库,并导入到SPSS23.0软件进行统计处理。采用χ2检验。P<0.05为差异有统计学意义。
8、结果
两组临床疗效比较A组总有效率为77.7%,B组总有效率为91.1%,差异有统计学意义(P<0.05),A组治疗效果见表5,B组治疗效果见表6,两组对比治疗效果见表7.
表5.A组治疗效果
表6.B组治疗效果
表7.两组临床数据比较较[n(%)]
注:B组与A组比较P<0.05,有统计学意义。
研究结果显示,A、B组对痛风都一定的治疗效果,均无不良反应。A组治愈痛风患者3例,显效8例,有效24例,无效10例;B组治愈痛风患者上升至5例,显效大幅增到19例,无效减少至4例.;表明B组发酵后有明显提高临床治疗效果的作用。发酵法对有效物质的提取量优于乙醇提取法。本配方制备过程简单,无毒害作用,有效物质转化高,经济价值大。
Claims (7)
1.一种治疗痛风的中药组合物,包括桑椹和黄精,其特征是,按照重量份计,配方:桑椹15-25份、槐花15-25份、黄精5-15份、木瓜5-15份、白扁豆5-15份、枸杞5-15份、山药5-15份、茯苓5-15份、食叶草10-20份、蒿子杆10-20份、桃仁5-15份、栀子5-15份;
制备方法包括以下步骤,按上述配比:
1)将桑椹和槐花加药材质量3-4倍量的60%-65%乙醇溶液回流提取2-3次,每次提取2h-3h,200目-300目过滤,将滤液减压浓缩至相对密度1.21~1.25的清膏,60℃-65℃趁热过滤后取滤液备用;
2)将枯草芽孢杆菌接种于液体培养基中,在pH值为5.3-5.8,接种量4%-5%,30℃-36℃下培养28h-35h,得枯草芽孢杆菌液;将体积比为0.5%-1%的枯草芽孢杆菌液加入到步骤1中的滤液中,在30℃-36℃下培养28h-35h,得发酵液,离心10 -15min,取上清液,备用;
3)将配方中的其余原料提取2-3次,每次加6-8倍量水提取2h-3h,200目-300目过滤,合并滤液,将滤液减压浓缩至相对密度1.21~1.25的清膏,60℃-65℃趁热过滤后取滤液备用;
4)加入糖、2-3倍于糖质量的水,辅料,搅匀,微沸2-3小时,得到糖浆备用;
5)将步骤2得到的上清液、步骤3得到的滤液与步骤4得到的糖浆混合,浓缩至相对密度为1.25~1.30的膏剂。
2.根据权利要求1所述治疗痛风的中药组合物,其特征是,按照重量份计,配方配比如下:桑椹20、槐花20、黄精10、木瓜10、白扁豆10、枸杞10、山药10、茯苓10、食叶草15、蒿子杆15、桃仁10、栀子10。
3.根据权利要求1所述治疗痛风的中药组合物,其特征是,按照重量份计,配方配比如下:桑椹22份、槐花23份、黄精12份、木瓜13份、白扁豆11份、枸杞13份、山药12份、茯苓8份、食叶草12份、蒿子杆14份、桃仁9份、栀子10份。
4.根据权利要求1所述治疗痛风的中药组合物,其特征是,所述相对密度是在温度60℃下的相对密度。
5.根据权利要求1所述治疗痛风的中药组合物,其特征是,所述滤液减压浓缩是在温度60~80℃,真空度-0.06~-0.08MPa下进行。
6.根据权利要求1所述治疗痛风的中药组合物,其特征是,制备方法的步骤(4)中所述糖为低聚异麦芽糖,所述辅料为山梨酸钾。
7.权利要求1-6任意一项所述治疗痛风的中药组合物的应用,其特征是,所述中药组合物在制备治疗痛风的药物中的应用。
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