CN101279002B - 一种止咳化痰的药物及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种由花洲柚花、梗、叶中提取的止咳化痰的药物,同时公开了这种药物的制备方法,包括将化洲柚的花、梗、叶以任意比例混合,粉碎,经过水提取,同时收集挥发油,水提取液滤过,合并滤液,进一步加入有机溶剂分离纯化或不使用有机溶剂,浓缩成化洲柚浸膏。
Description
技术领域
本发明涉及中药领域,具体涉及中药化橘红的花、梗、叶的提取物及其制备方法和用途。
背景技术
化橘红,别名化洲橘红、化红、毛橘红,为芸香科植物化洲柚Citrus grendis Tomentosa或柚Citrus grendis(L)Osbeck的未成熟或近成熟的干燥外层果皮。化橘红包括正毛化橘红和副毛化橘红。性温、辛、苦,具散寒、燥湿、利气、消痰、抗炎之功效。临床上用于风寒咳嗽,喉痒痰多,急慢性支气管炎,慢性阻塞性肺气肿等。化橘红中含有生物碱类,黄酮类,多糖,挥发油等多种化学成分。其中甙类,黄酮类和柚皮甙具有止咳化痰抗炎等多种作用。中国药典将柚皮甙作为化橘红的鉴别特征。过去的研究利用上,大部分都是根据古代的复方方剂,对其中的君药化橘红本身的研究不够,使用效果往往不大理想;要对疾病起疗效,需要较大的剂量,而且起效时间较长。从其使用方法上来看,均为使用化橘红果的皮部,未见有使用化橘红花、果、叶的报道。从其开发利用的方法上,均为复方制剂,与其它中药配置使用,未见单方使用。使用复方,未能对化橘红进行深度开发。由于仅使用皮部,常需采用近成熟的化洲柚作原料,原料来源有限,而且需将皮与肉分开,生产工艺复杂,未能完全利用化橘红的有效部位,导致化橘红这种广东地道药材资源浪费。
发明内容
本发明的目的就是为了克服化洲柚利用程度低,有效成分提取率低的缺点,开发化洲柚花、梗、叶的药用价值,简化生产工艺,提供化洲柚花、梗、叶的提取物及其制备方法。
本发明是这样下述技术方案来实现的。
将化洲柚的花粉碎,经过水提取,同时收集挥发油,水提取液滤过,合并滤液,进一步加入有机溶剂分离纯化或不使用有机溶剂,浓缩成化洲柚的浸膏。
将化洲柚的叶粉碎,经过水提取,同时收集挥发油,水提取液滤过,合并滤液,进一步加入有机溶剂分离纯化或不使用有机溶剂,浓缩成化洲柚的浸膏。
将化洲柚的梗粉碎,经过水提取,同时收集挥发油,水提取液滤过,合并滤液,进一步加入有机溶剂分离纯化或不使用有机溶剂,浓缩成化洲柚的浸膏。
上述方法中花、梗、叶既可以单独提取也可以混合提取,具体的方法如下:
将化洲柚的花、梗、叶以任意比例混合,粉碎,经过水提取,同时收集挥发油,水提取液滤过,合并滤液,进一步加入有机溶剂分离纯化或不使用有机溶剂,浓缩成化洲柚浸膏。
本发明中的水提取可以采用在室温或者在加热沸腾条件下进行。提取次数至少应是一至三次。水的用量为水至少能没过化橘红药材,水用量花、梗、叶过多不限。
本发明加入的有机溶剂可以采用乙醇、氯仿、乙酸乙酯、石油醚等。乙醇可以采用无水乙醇或者各种浓度乙醇,石油醚可以采用石油醚—30、石油醚—60或石油醚—90。
按照上述方法得到化洲柚的花、梗、叶浸膏还可以进一步通过大孔吸附树脂进行分离得到本发明一种化痰止咳的药物,具体的方法如下:
将上述所得化洲柚浸膏用水稀释,上大孔吸附树脂,先用水洗去杂质再用稀氨水洗脱,收集洗脱液,用酸中和后浓缩即可得到本发明药物。
以本发明的药物为活性成分,加入挥发油和药剂学上接受的辅料按照常规的制备方法可以制成药剂学上接受的任一制剂。
所述的制剂包括但不限于胶囊剂、硬胶囊剂、软胶囊剂、注射液、滴注液、粉针剂、颗粒剂、片剂、冲剂、散剂、口服液、糖衣片剂、薄膜衣片剂、肠溶衣片剂、口含剂、颗粒剂、丸剂、膏剂、丹剂、喷雾剂、滴丸剂、口崩片、微丸、气雾剂等。
本发明中可以不收集挥发油,但其使用效果略有下降。
本发明的化橘红花、梗、叶可以单味药作为原料药,也可以与其它中药复合(复合)制成复方制剂。
同时,本发明的化橘红制剂,具有给药方便,服用量小,携带方便,质量稳定等特点。
本发明的化橘红制剂采用化洲柚的花、梗、叶为生药材原料,具备良好的止咳化痰效果,其生产方法简单,有效成份提取率高。本发明的化橘红制剂成人使用剂量相当于6~9克中药材/次,每日2~3次。
以下通过试验例来进一步阐述本发明,但不以任何形式对本发明构成限制。
试验例1化橘红不同有效部分提取物中柚皮甙含量研究
本试验考察了经上述方法制备的化橘红花、梗、叶、皮的提取物中柚皮苷的含量,结果发现,花、梗、叶提取物中柚皮甙的含量高于传统化橘红皮浸膏。表明本发明花、梗、叶的提取率比皮的提取率高。用花、梗、叶能更好的开发利用化橘红原料资源。同时,化橘红花、梗、叶较化橘红皮其原料来源更广泛,原料生产工艺更简单,更便于工业应用。具体试验如下:
1仪器、试药与样品
1.1仪器:德国Dionex P680A型高效液相色谱仪,带自动进样器、二极管阵列检测器及柱温箱;Sartorius110型电子分析天平(德国,0.1mg)。
1.2试药:柚皮苷对照品(购自中国药品生物制品检定所,纯度99.12%);所用甲醇、石油醚、硝酸铝等试剂均为分析纯。
1.3样品:2004年3月采于化州市平定镇化橘红GAP基地,经广东省中药研究所丘金裕主任中药师鉴定,其原植物为化州柚Citrus grandis Tomentosa。毛橘红果直径约为0.4~0.6cm,鲜重约3.83g/个。
2方法
2.1色谱条件:流动相:甲醇:水:乙酸(35:61:4),流速:1.0mL/min;色谱柱:KromasilODS柱(250mm×4.6mm,5μm);检测波长:283nm;柱温:25℃。
2.2供试品溶液的制备
2.2.1果皮供试品溶液制备:按照制备对比例中的方法制备,得化洲柚果皮的提取物。取干燥后样品0.5g,精密称定,置索氏提取器中,加石油醚(60~90℃)100mL,水浴回流提取2.5h,挥尽样品中的石油醚,加甲醇100mL再置水浴锅中回流提取4h,放冷,滤过,滤液转移至100mL容量瓶中,甲醇定容至刻度,再量取1mL于10mL容量瓶中,加甲醇稀释至刻度,制得化洲柚果皮供试品溶液。
2.2.2花供试品溶液制备:按照实施例3中的方法制备,得化洲柚花的提取物。取干燥后样品1g,精密称定,置索氏提取器中,加石油醚(60~90℃)100mL,水浴回流提取2.5h,挥尽样品中的石油醚,加甲醇100mL再置水浴锅中回流提取4h,滤过,滤液转移至100mL容量瓶中,甲醇定容至刻度,再量取1mL于10mL容量瓶中,加甲醇稀释至刻度,制得化洲柚花供试品溶液。
2.2.3梗试品溶液制备:按照实施例2中的方法制备,得化洲柚梗的提取物。取干燥后样品1g,精密称定,置索氏提取器中,加石油醚(60~90℃)100mL,水浴回流提取2.5h,挥尽样品中的石油醚,加甲醇100mL再置水浴锅中回流提取4h,放冷,滤过,滤液转移至100mL容量瓶中,甲醇定容至刻度,制得化洲柚梗的供试品溶液。
2.2.4叶试品溶液制备:按照实施例1中的方法制备,得化洲柚叶的提取物。取干燥后样品1g,精密称定,置索氏提取器中,加石油醚(60~90℃)100mL,水浴回流提取2.5h,挥尽样品中的石油醚,加甲醇100mL再置水浴锅中回流提取4h,放冷,滤过,滤液转移至100mL容量瓶中,甲醇定容至刻度,制得化洲柚叶的供试品溶液。
2.3对照品溶液的制备:精密称取干燥至恒重的柚皮苷对照品20mg于100mL量瓶中,加甲醇溶解并稀释至刻度,再精密量取30mL于50mL量瓶中,加甲醇稀释至刻度,制成0.12mg/mL的对照品溶液。
2.4柚皮苷标准曲线的制备:取柚皮苷对照品分别配成0.024mg/mL、0.048mg/mL、0.072mg/mL、0.096mg/mL、0.120mg/mL、0.144mg/mL,分别进样10μL,按上述条件进行测定,以柚皮苷量为横坐标,峰面积积分值为纵坐标,绘制标准曲线。求得柚皮苷的回归方程为y=308.734x+0.2693,R=0.9999,在0.024~0.144mg范围内,柚皮苷量与色谱峰面积积分值呈良好的线性关系。
2.5样品含量测定:取各供试品溶液分别进样10μL,依法测定,外标峰面积法计算含量,即得。
3结果
各部位样品(n=3)测定结果见表1。
表1化州柚各部位柚皮苷含量(%)
4结论
从表1可以看出,化州柚各部位柚皮苷含量以叶中含量最高,梗和花次之,果皮最低。表明本发明花、梗、叶的提取率比皮的提取率高。
试验例2化橘红总黄酮化痰和抗炎试验
1.材料
1.1实验动物:NIH小鼠,雌雄各半,体重20~23g,广东省医学实验中心提供。合格证:26-2001A008。
1.2实验材料:毛橘红来源于芸香科植物化州柚Citrus grandis‘Tomentosa’,光橘红来源于芸香科植物柚Citrus grandis(L)Osbeck。药材采自广东省化州市,均经广州中医药大学中药资源研究室林励教授鉴定。毛橘红与光橘红花、梗、叶的干品,各称取5g。毛橘红叶按照实施例1的方法制备毛橘红叶的提取物,毛橘红梗按照实施例2的方法制备毛橘红梗的提取物,毛橘红花按照实施例3制备毛橘红花的提取物。光橘红叶按照实施例4的方法制备光橘红叶的提取物,光橘红梗按照实施例5的方法制备光橘红梗的提取物,光橘红花按照实施例6制备光橘红花的提取物。实验时稀释成所需浓度药液。
1.3试剂:试剂氯化铵,北京向阳制药厂生产,批号:990321。酚红,上海化学试剂总厂所属上海试剂三厂生产,批号990607。阿斯匹林肠溶片,徐州恩华药业集团有限责任公司生产,批号990621;氢氧化钠、二甲苯等均为分析纯。
1.4实验仪器:721型分光光度计。
2.方法
2.1化痰实验:小鼠88只,随机分为8组。即毛橘红叶、花、梗组,光橘红叶、花、梗组,氯化铵组和生理盐水组。每组11只,生理盐水组灌胃给予生理盐水,氯化铵组灌胃15%氯化铵,其余各组按20ml/kg灌胃给予相应药液,每天一次,连续4天,于末次给药后30min,按0.1mg/10g腹腔注射5g/dl酚红30min后处死动物,分离气管段,放入盛有生理盐水的试管中。加入1mol/L氢氧化钠0.1ml,用721型分光光度计,于波长546nm处测吸光度A值,并据酚红标准曲线计算酚红含量(μg/ml),与对照比较。
2.2抗炎实验:小鼠88只,随机分为8组,即毛橘红叶、花、梗组,光橘红叶、花、梗组,阿斯匹林组和生理盐水组。每组11只,按20ml/kg灌胃给予相应药液,每天一次,连续4天(阿斯匹林组按0.3g/kg给药)。于末次药后60min。在小鼠右耳上涂二甲苯(正、反面各涂20μl),60min后处死动物,用直径为0.6cm的打孔器在左、右耳相同位置上取相同的面积,称重,计算左右耳重量的差值。
2.3统计学处理以方差分析的q检验进行统计学处理。
3.结果
3.1化痰实验:由表2结果可见:各给药组均能明显促进小鼠气管酚红排出量,与生理盐水组比较有显著性差异;毛橘红花、梗、叶提取物组和光橘红花、梗、叶提取物组组比较,均具有显著性差异。
表2 毛橘红与光橘红花、梗、叶提取物化痰作用的比较(X±s,n=11)
与生理盐水组比较,**P<0.01,与相同剂量组光橘红比较△P<0.05,△△P<0.01。
3.2抗炎作用:由表3结果可见:毛橘红花、梗、叶提取物组及光橘红花、梗、叶提取物组,与生理盐水组比较均有显著性差异;毛橘红与光橘红各提取物比较,均具有显著性差异。
表3 毛橘红与光橘红抗炎作用的比较X±S,
与生理盐水组比较,**P<0.01,与相同剂量组光橘红比较△P<0.05,△△P<0.01。
以上实验可以看出,本发明化橘红花、梗、叶提取物具有良好的化痰止咳和消炎的作用。
具体实施方式
对比例化洲柚皮提取物的制备
取毛橘红皮500g,粉碎,过20目筛,加水提取3次,第一次为药材量的4倍,第二次为药材量的2倍,第三次为药材量的2倍,每次1.5小时,合并提取液,过滤,同时收集挥发油,提取液减压浓缩得相对密度为128(55℃)的浸膏。浸膏用水稀释,上大孔吸附树脂,先用3倍柱体积蒸馏水洗脱除去杂质,再用稀氨水洗脱,收集洗脱液,用1%的盐酸中和至pH值7.0,浓缩得相对密度为1.33(55℃)的提取物。即可得到本发明药物。
下面结合实施例对本发明做进一步说明。
实施例1
取毛橘红叶500g,粉碎,过20目筛,加水提取3次,第一次为药材量的5倍,第二次为药材量的3倍,第三次为药材量的3倍,每次1小时,合并提取液,过滤,同时收集挥发油,提取液减压浓缩得相对密度为1.31(55℃)的浸膏。
实施例2
取毛橘红梗500g,粉碎,过20目筛,加水提取3次,第一次为药材量的5倍,第二次为药材量的3倍,第三次为药材量的3倍,每次1小时,合并提取液,过滤,同时收集挥发油,提取液减压浓缩得相对密度为1.31(55℃)的浸膏。
实施例3
取毛橘红花500g,粉碎,过20目筛,加水提取3次,第一次为药材量的5倍,第二次为药材量的3倍,第三次为药材量的3倍,每次1小时,合并提取液,过滤,同时收集挥发油,提取液减压浓缩得相对密度为1.31(55℃)的浸膏。
实施例4
取光橘红叶500g,粉碎,过20目筛,加水提取3次,第一次为药材量的5倍,第二次为药材量的3倍,第三次为药材量的3倍,每次1小时,合并提取液,过滤,同时收集挥发油,提取液减压浓缩得相对密度为1.31(55℃)的浸膏。
实施例5
取光橘红梗500g,粉碎,过20目筛,加水提取3次,第一次为药材量的5倍,第二次为药材量的3倍,第三次为药材量的3倍,每次1小时,合并提取液,过滤,同时收集挥发油,提取液减压浓缩得相对密度为1.31(55℃)的浸膏。
实施例6
取光橘红花500g,粉碎,过20目筛,加水提取3次,第一次为药材量的5倍,第二次为药材量的3倍,第三次为药材量的3倍,每次1小时,合并提取液,过滤,同时收集挥发油,提取液减压浓缩得相对密度为1.31(55℃)的浸膏。
实施例7
取光橘红花500g,粉碎,过20目筛,加水提取3次,第一次为药材量的5倍,第二次为药材量的3倍,第三次为药材量的3倍,每次1小时,合并提取液,过滤,同时收集挥发油,提取液减压浓缩得相对密度为1.31(55℃)的浸膏。浸膏用水稀释,上大孔吸附树脂,先用3倍柱体积蒸馏水洗脱除去杂质,再用稀氨水洗脱,收集洗脱液,用1%的盐酸中和至pH值7.0,浓缩得相对密度为1.30(55℃)的提取物。即可得到本发明药物。
实施例8
取毛橘红花粉碎,不经过筛,经60℃水煎煮两次,每次一天,过滤,合并滤液,滤液加入氯仿萃取,静置,滤液分为两层,水层和氯仿层,去水层,得氯仿层。挥去氯仿,得墨绿色浸膏,浸膏再加入收集得到的挥发油,混匀,真空干燥或常压烘干(过80—100目筛)。加入适当浓度乙醇制成软材,制颗粒,干燥,加润滑剂,混匀,压片机压片成片剂,包糖衣,分装,即得糖衣片剂。
实施例9
取光橘红梗粉碎,不经过筛,经60℃水煎煮两次,每次一天,过滤,合并滤液,滤液加入氯仿萃取,静置,滤液分为两层,水层和氯仿层,去水层,得氯仿层。挥去氯仿,得墨绿色浸膏,浸膏再加入收集得到的挥发油,混匀,真空干燥或常压烘干(过80—100目筛)。加入适当浓度乙醇制成软材,制颗粒,干燥,加润滑剂,混匀,压片机压片成片剂,包糖衣,分装,即得糖衣片剂。
实施例10
取光橘红叶和梗粉碎,过20目筛,经75℃水煎煮三次,每次2小时,过滤,合并滤液,滤液加入石油醚萃取,静置,滤液分为两层,水层和石油醚层,去水层,得石油醚层。挥去石油醚,得墨绿色浸膏,浸膏再加入收集得到的挥发油,混匀,浸膏自然蒸干,干燥成粉末。过100—120目筛,装胶囊,分装,即得胶囊剂。
实施例11
取毛橘红梗粉碎,过40目筛,经75℃水煎煮三次,每次3小时,过滤,合并滤液,滤液加入乙酸乙酯萃取,静置,滤液分为两层,水层和乙酸乙酯层,去水层,得乙酸乙酯层。旋转蒸发仪挥去乙酸乙酯,得墨绿色浸膏,浸膏加入收集得到的挥发油,混匀后,浸膏再常压烘干,加适量润滑剂制成软材,制粒,干燥,压片机压片成片剂,薄膜包衣,分装,即得包衣片剂。
实施例12
取光橘红花粉碎,不过筛,经超声波用水提取三次,每次1小时,过滤,合并滤液,滤液加入乙醇,静置,滤液沉淀,得水层和沉淀,去沉淀,得水层。加热蒸干水层,得棕黑色浸膏,浸膏加入收集得到的挥发油,混匀。浸膏再喷雾干燥蒸成粉末。加入适量赋形剂后混匀,分装,成散剂。
实施例13
取毛橘红叶粉碎,不过筛,室温下水浸泡提取三次,每次三天,过滤,合并滤液,滤液加入乙醇,静置,滤液沉淀,得水层和沉淀,去水层,得沉淀。沉淀挥干,得浸膏,浸膏加入收集得到的挥发油,混匀。浸膏再直接加入赋形剂,矫味剂等后,混合均匀,制成颗粒,干燥后过8-10目筛,分装,即得颗粒剂。
实施例14
取毛橘红叶和花500g(重量比为1:1),粉碎,过20目筛,加水提取2次,第一次为药材量的5倍,第二次为药材量的3倍,每次1小时,合并提取液,过滤,同时收集挥发油,提取液减压浓缩得相对密度为1.33(55℃)的浸膏。浸膏用水稀释,上大孔吸附树脂,先用3倍柱体积蒸馏水洗脱除去杂质,再用稀氨水洗脱,收集洗脱液,用1%的盐酸中和至pH值7.0,浓缩得相对密度为1.30(55℃)的提取物。即可得到本发明药物。
Claims (2)
1.一种化痰止咳的药物的制备方法,其特征在于,包括下述步骤:
取光橘红花500g,粉碎,过20目筛,加水提取3次,第一次为药材量的5倍,第二次为药材量的3倍,第三次为药材量的3倍,每次1小时,合并提取液,过滤,同时收集挥发油,提取液减压浓缩得55℃相对密度为1.31的浸膏,浸膏用水稀释,上大孔吸附树脂,先用3倍柱体积蒸馏水洗脱除去杂质,再用稀氨水洗脱,收集洗脱液,用1%的盐酸中和至pH值7.0,浓缩得55℃相对密度为1.30的提取物即可。
2.一种化痰止咳的药物的制备方法,其特征在于,包括下述步骤:
取毛橘红叶和花500g重量比为1∶1,粉碎,过20目筛,加水提取2次,第一次为药材量的5倍,第二次为药材量的3倍,每次1小时,合并提取液,过滤,同时收集挥发油,提取液减压浓缩得55℃相对密度为1.33的浸膏,浸膏用水稀释,上大孔吸附树脂,先用3倍柱体积蒸馏水洗脱除去杂质,再用稀氨水洗脱,收集洗脱液,用1%的盐酸中和至pH值7.0,浓缩得55℃相对密度为1.30的提取物,即可。
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