CN1207001C - 用作肌肉和静脉注射的龙胆苦苷粉针剂 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种中药有效成分提纯及制备粉针剂的工艺，特别是秦艽中提纯龙胆苦苷制备粉针剂和用作保肝利胆抗炎药物的应用。其由下述工艺制得：秦艽加水煎煮，水煎液用D101大孔树脂柱吸附并洗脱得残留物，残留物溶于95%乙醇中，过滤，放置，析出结晶，过滤，得龙胆苦苷纯品，龙胆苦苷纯品与注射用甘露醇，用注射用水溶解，过滤，分装后冻干得成品。本发明的提纯工艺成本低，而且没有亲脂性成分，给后续处理带来方便。纯化方法简便，从原料中分离龙胆苦苷，收得率在3%以上。本发明龙胆苦苷制成冻干粉针剂，静脉滴注，具有良好的稳定性，使用也较方便。

Description

用作肌肉和静脉注射的龙胆苦苷粉针剂

技术领域

本发明涉及一种中药有效成分提纯及制备粉针剂的工艺，特别是秦艽中提纯龙胆苦苷制备粉针剂和用作保肝利胆抗炎药物的应用。

背景技术

龙胆苦苷是裂环环烯醚萜类化合物。它主要存在于龙胆科龙胆属植物中。它在陕西产栽培秦艽中含量较高，最高可达18％，一般为5％，是龙胆类植物的主要有效成分，是医药生产的较理想原料。秦艽与其它中药配伍后水煎服用，主要用于治疗关节炎，服用很不方便。秦艽中的总提取物名龙胆总苷，龙胆总苷是混合物，其中主要成分是龙胆苦苷，含量约为50-70％，其它成分无效或有一定的毒性，用Beagle犬进行试验，龙胆总苷注射后会使犬流涎，四肢无力，约20分钟后恢复正常。从秦艽中提取出龙胆总苷制成胶襄剂，用作肠胃道动力药，本申请人已获得了发明专利，专利号为97108434，上述专利提纯工艺中，龙胆总苷是用70％乙醇提取，难免带进亲脂性成分，给后续分离龙胆苦苷带来困难。由于龙胆总苷中包含脂溶性杂质，另外，龙胆苦苷分子周围包围水化膜，所以龙胆苦苷不易结晶。对于单一化合物龙胆苦苷，它即不同于原秦艽药材，也不同于混合物龙胆总苷。龙胆苦苷结构中存在一定的不稳定因素，在碱性条件下易分解，在微酸条件下较稳定。如果口服则在胃肠道分解，尤其是肠道几乎全部分解。在胃中由于酸性环境，使苷中的糖水解下来，在肠中碱性环境，龙胆苦苷不稳，特别是肠道细菌就完全破坏了它。由于存在着苷键，制成水针剂，高温灭菌势必造成苷键水解，析出苷元沉淀。经试验120℃30分钟约有30％的龙胆苦苷分解。龙胆苦苷纯化合物含量在95％以上时，水中溶解度较低，不能直接制成注射用水针剂。

发明内容

本发明的目的是为了解决龙胆苦苷直接制成水针剂时的不稳定性和口服在肠道被破坏问题，提供一种从秦艽中提纯龙胆苦苷制备粉针剂的工艺和其作为制备保肝利胆抗炎药物的应用，同时龙胆苦苷衍生物作为制备保肝利胆抗炎药物的应用。

本发明的目的是以下述方案实现的：用作肌肉和静脉注射的龙胆苦苷粉针剂，其由如下工艺制得：

(1)取秦艽或龙胆草药材加5～20倍量水煎煮3次，每次15分钟～1小时，合并煎煮液，离心取上清液，

(2)水煎液上D101大孔树脂柱，每克树脂上0.2～1毫升药液，大孔树脂用2～6倍量水洗脱，弃去水洗液，大孔树脂再用3～10倍10％～70％乙醇洗脱，回收洗脱液中的乙醇，并减压抽干，得残留物，

(3)将回收洗脱液后的残留物溶于2～5倍量的95％乙醇中，过滤，滤液回收乙醇并抽干，再用95％乙醇溶解，再抽干最后溶于浓乙醇中，放置，析出结晶，过滤，得龙胆苦苷纯品，

(4)取龙胆苦苷纯品与5～20％量注射用甘露醇，用5～15倍注射用水溶解，用G3～G6漏斗过滤，分装后冻干得成品。

所述的龙胆苦苷粉针剂作为制备保肝利胆抗炎药物的应用。

本发明的提纯工艺中，秦艽药材用水煎提取，成本低，而且少含亲脂性成分，给后续处理带来方便。纯化方法简便，从原料中分离龙胆苦苷，收得率在3％以上。本发明龙胆苦苷制成冻干粉针剂，静脉滴注，既可避免酸碱及肠道细菌的影响又可避免高温灭菌的影响，特别是溶解性非常好，成品加入注射用水立即成为澄明液体，符合注射剂要求。龙胆苦苷制成粉针剂，避免了因水针剂灭菌引起过热分解，也避免了水溶液长期放置引起的变化。制成冻干粉针剂，具有良好的稳定性，使用也较方便。本发明中龙胆苦苷是主要成分，起治疗作用。甘露醇为辅料，起到分散和骨架作用，兼有助溶效果。龙胆苦苷用于治疗急性黄疸型肝炎及慢性活动性肝炎，对于急症适合使用注射剂，特别是静脉注射。从药代动力学考虑，药物进入血液后，很快到达肝脏部位，在肝脏中的分布达30μg/g，作成注射剂给药，对于肝病的治疗更显得合适。

具体实施方式

实施例1：

用作肌肉和静脉注射的龙胆苦苷粉针剂，由如下工艺制得：

取秦艽药材1千克加10千克水煎煮3次，每次30分钟，合并煎煮液，离心取上清液，龙胆苦苷易于从药材中煎出。10千克水煎液上10千克已处理好的D101大孔树脂柱，大孔树脂可吸附龙胆苦苷，大孔树脂柱用40千克水洗脱，弃去水洗液，大孔树脂再用80千克30％乙醇洗脱，龙胆苦苷用稀乙醇可解析下来，回收洗脱液中的乙醇，并减压抽干，得残留物。将回收洗脱液后的残留物溶于3倍量的95％乙醇中，过滤，滤液回收乙醇并抽干，再用95％乙醇溶解，再抽干最后溶于浓乙醇中，放置，析出结晶，过滤，得龙胆苦苷纯品。取龙胆苦苷纯品160克，注射用甘露醇原料16克，用2000毫升蒸馏水溶解，加入约0.5克活性炭，6号垂熔玻璃漏斗滤过，测定含量后，滤液无菌条件下，装入2000支冻干瓶中。冻干瓶放入冻干机冻干，冷冻温度为-30℃，3小时，升华温度-20～-10℃，共6小时，抽真空。快速升温干燥，直至40℃，10小时，压盖密封。结果成饼很好，为乳白色均匀的园饼，各项指标均符合规定。试验数据及结果见表1。

表1

实施例2：

秦艽药材1千克加20千克水煎煮3次，每次1小时，合并煎煮液，离心取上清液，10千克水煎液用20千克已处理好的D101大孔树脂柱，大孔树脂用60千克水洗脱，弃去水洗液，大孔树脂柱再用100千克10％乙醇洗脱，回收洗脱液中的乙醇，并减压抽干，得残留物，将回收洗脱液后的残留物溶于5倍量的95％乙醇中，过滤，滤液回收乙醇并抽干，再用95％乙醇溶解，再抽干最后溶于浓乙醇中，放置，析出结晶，过滤，得龙胆苦苷纯品，龙胆苦苷纯品与20％量注射用甘露醇，用5倍注射用水溶解，按与实施例1相同方法制备粉针剂。

实施例3：

取秦艽药材1千克加5千克水煎煮3次，每次15分钟，合并煎煮液，离心取上清液，10千克水煎液用50千克已处理好的D101大孔树脂柱，大孔树脂用20千克水洗脱，弃去水洗液，大孔树脂再用30千克70％乙醇洗脱，回收洗脱液中的乙醇，并减压抽干，得残留物，将回收洗脱液后的残留物溶于2倍量的95％乙醇中，过滤，滤液回收乙醇并抽干，再用95％乙醇溶解，再抽干最后溶于浓乙醇中，放置，析出结晶，过滤，得龙胆苦苷纯品，龙胆苦苷纯品与5％量注射用甘露醇，用15倍注射用水溶解，按与实施例1相同方法制备粉针剂。

实施例4：

龙胆药材碎为粗末，称取3千克，加水30千克，煎煮30分钟，过滤，滤渣再加水24千克，煎煮两次，过滤，合并三次水煎液，10千克水煎液用50千克已处理好的D101大孔树脂柱，大孔树脂用20千克水洗脱，弃去水洗液，大孔树脂再用30千克70％乙醇洗脱，回收洗脱液中的乙醇，并减压抽干，得残留物，将回收洗脱液后的残留物溶于2倍量的95％乙醇中，过滤，滤液回收乙醇并抽干，再用95％乙醇溶解，再抽干最后溶于浓乙醇中，放置，析出结晶，过滤，得龙胆苦苷纯品，龙胆苦苷纯品与5％量注射用甘露醇，用15倍注射用水溶解，按与实施例1相同方法制备粉针剂。

本发明提纯龙胆苦苷为白色粉末或结晶。结构式为C₁₆H₂₀O₉，分子量为356.32，分子式如下图所示：

本发明提纯产物的红外光谱图、紫外光谱图、氢核磁共振谱、碳-13核磁共振谱、质谱都与对照品(中国药品生物制品检定所)一致。

本发明具有保肝利胆和抗炎的作用，用于中医湿热熏蒸症，具有清热燥湿，泻肝利胆的功能。用于治疗急性黄疸型，慢性活动型肝炎的药物。已申报国家一类中药新药。

本发明对动物急性肝损伤模型、慢性肝损伤模型和免疫性肝损伤模型，用龙胆苦苷肌肉注射进行治疗，能显著降低肝损伤动物血清转氨酶活性，组织切片显示能减轻肝组织坏死、肿胀及脂肪变性。促进肝脏蛋白质的合成。本发明对CCl₄引起的急性、慢性肝损伤，对氨基半乳糖引起的损伤及免疫性损伤都有很好的修复作用。本发明在高剂量下显示一定的肝药酶诱导作用。增加肝药酶和活性，使肝细胞代谢增强。

注射龙胆苦苷对大鼠具有明显的利胆作用，给药后动物胆汁量、胆固醇、胆红素都有明显增加，能提高肝细胞Na⁺、K⁺-ATP酶活性，提高率为35.5％。用苯丙醇对照，有很好的利胆作用。

对动物急性炎症，慢性炎症，非特异性炎症病理模型，用龙胆苦苷治疗，呈现量效关系。

一般药理分别用杂种狗、Beagle犬和小白鼠进行试验。杂种狗用肌肉注射，Beagle犬采用静脉注射。用药三天后，动物的精神、活动、毛发、二便等均未发生明显影响，用药期内动物呼吸、血压、心率、心电图等均未发生明显变化。结果表明龙胆苦苷对动物的精神系统、呼吸系统及心血管系统均无明显影响。

急毒：小鼠肌肉注射LD₅₀＝2.5g/kg，静脉注射LD₅₀＝2.4g/kg，大鼠静肪注射LD₅₀＝1.8g/kg。

长期毒性进行了三种动物观察，杂种犬、大鼠未见明显毒性反应，Beagle犬中、小剂量未见明显毒性反应，50倍大剂量动物有流涎、肌无力、呕吐，但30分钟内即可消失。大鼠及Beagle犬大中小三个剂量注射三个月，进行心电图测定，血液学、病理学检查，未见异常。长期毒性显示，本发明安全剂量为100mg/kg。

特殊毒性试验：在中国药品生物制品检定所进行了Ames试验，采用组氨酸营养缺陷型鼠伤寒沙门氏杆菌TA系列四个菌株，用药后各菌株回变菌落数未见明显增多。染色体畸变试验采用中国仓鼠细胞，三个浓度组给药。经培养，染色体畸变率低于3％。微核试验：昆明鼠给药后，24小时取股骨骨髓制片，未见微核细胞增多。致畸试验：第四军医大学药理室经过试验，未见大鼠胎儿畸变。致突变、致癌、致畸胎作用。

动物药代动力学研究：主要分布在肝、肾、肺、心、脾，脑中无分布。通过尿排泄97％，血浆蛋白结合率为46％，符合一房室模型。Beagle犬相对生物利用度F_0-T为104％，F_0-∞为99.6％。预临床研究：在西安传染病院对42例乙肝病人治疗有效率为97.7％。

本发明龙胆苦苷龙胆苦苷衍生物制备粉针剂作为制备保肝利胆抗炎药物的应用。

龙胆苦苷在NABH₄作用下羰基还原所得衍生物制备粉针剂作为制备保肝利胆抗炎药物的应用。

龙胆苦苷在活性镍催化下加氢气双键还原所得衍生物制备粉针剂作为制备保肝利胆抗炎药物的应用。

龙胆苦苷与卤化氢加成所得衍生物制备粉针剂作为制备保肝利胆抗炎药物的应用。

龙胆苦苷衍生物结构式如下所示：

Claims (2)

1、用作肌肉和静脉注射的龙胆苦苷粉针剂，由如下工艺制得：

(1)取秦艽或龙胆草药材加5～20倍量水煎煮3次，每次15分钟～1小时，合并煎煮液，离心取上清液，

(2)水煎液上D101大孔树脂柱，每克树脂上0.2～1毫升药液，大孔树脂用2～6倍量水洗脱，弃去水洗液，大孔树脂再用3～10倍10％～70％乙醇洗脱，回收洗脱液中的乙醇，并减压抽干，得残留物，

(3)将回收洗脱液后的残留物溶于2～5倍量的95％乙醇中，过滤，滤液回收乙醇并抽干，再用95％乙醇溶解，再抽干最后溶于浓乙醇中，放置，析出结晶，过滤，得龙胆苦苷纯品，

(4)取龙胆苦苷纯品与5～20％量注射用甘露醇，用5～15倍注射用水溶解，用G3～G6漏斗过滤，分装后冻干得成品。

2、如权利要求1所述的龙胆苦苷粉针剂作为制备保肝利胆抗炎药物的应用。