CN118382646A

CN118382646A - 用于制备含有透明质酸交联产物的组合物的方法

Info

Publication number: CN118382646A
Application number: CN202280085757.8A
Authority: CN
Inventors: 阿泳昌; 赵完镇; 杨镇孝; 金政垠
Original assignee: Liuying Pharmaceutical Co ltd
Current assignee: Liuying Pharmaceutical Co ltd
Priority date: 2021-11-12
Filing date: 2022-11-11
Publication date: 2024-07-23
Also published as: KR102640893B1; EP4431531A1; WO2023085832A1; KR20230069466A

Abstract

公开了一种用于制备含有透明质酸交联产物的组合物的方法。

Description

用于制备含有透明质酸交联产物的组合物的方法

技术领域

本发明涉及一种用于制备含有交联透明质酸的组合物的方法，其能够控制交联透明质酸的物理性质，而不管在通过化学修饰透明质酸或其盐生产水不溶性凝胶型交联透明质酸的过程中含有透明质酸或其盐以及化学交联剂的混合物的组成如何。

背景技术

透明质酸（HA）指任何已知的透明质酸原材料（单独或组合），如透明质酸、其盐类或其前体。透明质酸是一种天然聚合物材料，其具有优异的生物相容性，并且广泛用于各种应用，包括化妆品或医疗应用。天然存在的透明质酸主要存在于细胞外基质中，并且通过与纤维和胶原蛋白混合形成基质流体，在稳定组织结构方面发挥作用。这是一种存在于所有脊椎动物组织中的物质，并且是非免疫原性的，使其成为用作组织修复目的成分的理想化学物质。

透明质酸是一种广泛应用于化妆品、食品、医疗器械和制药领域的物质。此外，通过化学交联透明质酸生产的水不溶性凝胶型交联透明质酸的特征在于其物理性质易于控制，并且透明质酸在体内停留的时间可以被延长，从一周或更短到几个月或甚至约一年。交联透明质酸的这些特性是交联透明质酸被用作需要长期体内保留的组织修复用生物材料、药物递送支架或骨关节炎治疗剂的原因。将透明质酸转化为交联透明质酸的最广泛使用的化学交联剂包括双环氧化物，诸如1,4-丁二醇二缩水甘油醚（BDDE）和二乙烯基砜（DVS）。为了使用上述化学交联剂将透明质酸转化为交联透明质酸，含有透明质酸的混合物的氢离子浓度（pH）应为13或更高。因此，透明质酸和化学交联剂（BDDE或DVS）应与强碱性溶剂混合，以便可以产生交联透明质酸。

交联透明质酸的物理性质和体内持续时间由透明质酸交联混合物的组成以及生产交联透明质酸的交联过程的具体条件决定，该透明质酸交联混合物是通过混合透明质酸、化学交联剂和强碱性溶剂制得的。根据透明质酸混合物的组成以及交联过程的具体条件，作为透明质酸与化学交联剂之间的键合比的修饰度（等式1）以及作为通过化学交联形成的交联比的交联度（等式2）会有所不同，并且最终交联透明质酸的性质由交联透明质酸的溶胀度表示（等式3）。

[等式1]

修饰度 = 与交联剂结合的重复单元的数目 / 水溶性聚合物中重复单元的数目x 100

[等式2]

交联度 = 形成交联的重复单元的数目 / 水溶性聚合物中重复单元的数目 x100

[等式3]

溶胀度 = 水不溶性凝胶的干重 / 溶胀的水不溶性凝胶的重量

控制透明质酸交联混合物的组成或控制交联过程的具体条件来控制交联透明质酸的溶胀度的方法有两个问题。

第一个问题是开发和管理交联混合物的组成。由于应当根据所需交联透明质酸的物理性质来开发具有特定组成的交联混合物，如果交联透明质酸的目标物理性质发生变化，则应改变交联混合物的组成。虽然已经开发出一种在不改变交联混合物组成的情况下改变交联透明质酸物理性质的交联过程中除去水的技术（韩国专利No. 1316401），但除水的条件是难以精确控制的真空条件，并且通过交联混合物的组成来控制最终交联透明质酸的物理性质的问题仍然存在。此外，还提出了一种技术，其中交联混合物的组成保持不变，但在制备交联混合物后首先进行交联和附加混合，然后进行第二次交联（韩国专利申请公布No. 2019-0059609）。在该技术中，制备的交联混合物的组成仍然决定了交联透明质酸的物理性质。此外，透明质酸的分子量应为数十万或更高，以使得在强碱性条件下能够进行化学交联。然而，分子量为数十万或更高的透明质酸在与水混合时表现出高粘度，使混合困难，并且当透明质酸浓度低时，难以形成交联产物。由于这个问题，交联混合物中的透明质酸含量通常在10至30%内。换言之，改变交联混合物的组成是受限制的。

第二个问题是控制交联过程的具体条件是受限制的。为了在透明质酸和化学交联剂之间形成交联，需要强碱性溶剂。强碱性溶剂通过分解透明质酸表现出降低透明质酸分子量的作用，并且强碱性溶剂对透明质酸的分解随着温度的升高以及随着强碱性溶剂与透明质酸之间接触时间的增加而增加。换言之，为了通过使用具有相同组成的交联混合物来生产具有低溶胀度的交联透明质酸，需要增加交联温度或交联时间。然而，如果交联过程在一定温度或更高温度下或者一定时间或更长时间内进行，就会出现交联透明质酸的溶胀度增加而不是降低的问题，或者如果交联混合物在高温下储存过长的时间段，就会出现由于交联混合物中透明质酸的化学结构改变而发生的严重褐变的问题（韩国专利申请公布No.10-2021-0009916），并最终不能形成交联透明质酸。总之，仅通过控制交联过程来控制交联透明质酸的以溶胀度为代表的物理性质是受限制的。

此外，生产交联透明质酸的过程包括除去杂质的纯化过程，该杂质包括为生产交联透明质酸所加入的化学交联剂。这种纯化过程的实例包括使用水的纯化过程和使用与水相容的有机溶剂的纯化过程。在这些过程中，在使用水的纯化过程的情况下，交联透明质酸在纯化过程中会溶胀，并且如果这种溶胀得不到控制，则无法实现交联透明质酸中的目标透明质酸含量。例如，为了达到交联透明质酸中目标透明质酸含量为2 wt%，即20 mg/g，根据上述等式3的溶胀度应保持在50倍或更低。然而，低弹性模量的交联透明质酸也可能显示出100倍或更高的溶胀度。为了将透明质酸含量保持在2 wt%，同时具有低弹性模量，使用半透膜进行纯化是必不可少的。如果将使用膜制成的袋子进行纯化设置为纯化交联透明质酸的纯化过程，则存在纯化过程所需的时间较长（从几天到30天不等）的缺点，并且从由膜制成的袋子中插入和取出交联透明质酸很麻烦。当然，已经开发了提高交联透明质酸纯化过程效率的技术（韩国专利No. 1922711），但它们是利用渗透压抑制交联透明质酸溶胀的技术，或通过将交联透明质酸捕获在网状物内进行纯化过程的技术，并且在纯化过程中抑制交联透明质酸的溶胀方面存在局限性。

[现有技术文献]

[专利文献]

（专利文献1）韩国专利No. 1316401

（专利文献2）韩国专利申请公布No. 2019-0059609

（专利文献3）韩国专利申请公布No. 10-2021-0009916

（专利文献4）韩国专利No. 1922711

发明内容

技术问题

本发明人试图开发一种生产工艺，该工艺可以很容易地控制交联透明质酸的物理性质，并且可以通过在纯化过程中最大可能程度地抑制交联透明质酸的溶胀度，使用相同的交联透明质酸来生产具有很宽范围内透明质酸含量的含交联透明质酸组合物。

技术方案

本发明人试图通过引入一种经过交联过程的交联透明质酸的物理性质控制工艺来控制交联透明质酸的物理性质，以控制交联透明质酸的物理性质，而不管交联混合物的组成和交联条件如何。该物理性能控制工艺通过使用碱性水溶液达到了其目的。此外，本发明人还介绍了一种交联透明质酸的干燥方法，作为一种用于在纯化过程中抑制交联透明质酸溶胀度的新手段。

有利效果

根据本发明的用于生产含交联透明质酸的组合物的方法能够通过对交联透明质酸进行后处理来以各种方式改变交联透明质酸的物理性质，即使交联混合物的组成和交联过程的具体条件保持不变。因此，无需努力改变交联混合物的组成和交联过程的具体条件，即可产生目标交联透明质酸或含有交联透明质酸的组合物。此外，在纯化过程中发生的交联透明质酸的溶胀可以被有效抑制，而无需使用物理结构，例如由半透膜制成的袋子或压力容器。由于交联透明质酸的溶胀得到有效抑制，并且从交联透明质酸中除去杂质的效率得到最大化，因此降低了纯化过程的成本，并且易于控制含有交联透明质酸的组合物中的透明质酸含量。

本发明的效果并不局限于上述效果，并且各种效果可以包括在从以下描述中对本领域技术人员显而易见的范围内。

附图说明

图1示出了用于生产含有交联透明质酸的组合物的工艺之间的比较。

具体实施方式

在下文中，将对本说明书作更详细的描述。

详细解释如下。本说明书中使用的术语是考虑到它们在本发明中的作用而选择的目前广泛使用的通用术语，但是它们可能会根据本领域技术人员的意图、先例或新技术的出现而改变。此外，在某些情况下，可以存在申请人任意选择的术语，并且在这种情况下，它们的含义在本发明的相应描述部分中描述。因此，本发明中使用的术语应基于该术语的含义和本发明的全部内容来定义，而不是简单的术语名称。

除非另有定义，否则本文中使用的所有术语，包括技术或科学术语，具有与本发明所属的本领域技术人员通常理解的相同含义。诸如一般使用和词典中定义的术语应解释为具有与相关技术上下文中指定的含义相同的含义。除非在本申请中明确定义，否则这些术语不应被解释为具有理想或过度形成的含义。

数值范围包括在范围中定义的数值。本说明书中给出的每个最大数值限制都包括每个较低的数值限制，就好像这些较低的数值限制已明确写在本文中一样。本说明书中给出的每个最小数值限制都将包括每个更高的数值限制，就好像这些更高的数值限制已明确写在本文中一样。本说明书中给出的每个数值范围都将包括落入该较宽数值范围内的每个较窄数值范围，就好像这些较窄数值范围都明确写在本文中一样。

同时，本发明公开的每个描述和实施方式也可以应用于其它描述和实施方式。也就是说，本发明中公开的各种要素的所有组合都落入本发明的范围内。此外，本发明的范围不能被解释为受到下面描述的具体描述的限制。

本说明书中使用的诸如“包含”或“含有”等的表述应理解为隐含包括其它实施方式的可能性的开放式术语，除非在含有这些表述的短语或句子中另有提及。

本发明人发现，通过在纯化过程中最大可能程度地抑制交联透明质酸的溶胀度，使用相同的交联透明质酸，可以容易地控制交联透明质酸的物理性质，并且可以生产透明质酸含量在宽范围内的含交联透明质酸的组合物，从而完成本发明。

在下文中，将更详细地描述本发明。

用于生产含有交联透明质酸的组合物的方法

本发明公开了一种用于生产含有交联透明质酸的组合物的方法，该交联透明质酸是通过下列步骤（S1）至（S6）生产的：

（S1）混合透明质酸或其盐、化学交联剂、和氢离子浓度（pH）为12至14的含碱性物质的水溶液的预交联混合过程；

（S2）形成交联的交联过程；

（S3）将通过交联过程生产的交联透明质酸与含有酸性物质的水溶液混合，从而生产一种氢离子浓度（pH）为9或更低的交联透明质酸的中和过程；

（S4）从通过（S3）制备的中和混合物中除去水的干燥过程；

（S5）将通过（S4）制备的干燥交联透明质酸浸入洗涤溶液中来从透明质酸凝胶中除去水溶性杂质的洗涤过程，该洗涤溶液是使用渗透压调节剂调节至0至600 mOsmol/kg渗透压的水溶液；和

（S6）将通过（S5）纯化的交联透明质酸与碱性物质或含有碱性物质的水溶液和渗透压调节剂混合的溶胀控制过程。

在本发明中，透明质酸的盐可以是透明质酸钠，但不限于此。

在本发明中，在（S6）之后可以进一步包括以下（S7），但不限于此：

（S7）将已通过（S6）控制溶胀的交联透明质酸与酸性物质或含有酸性物质的水溶液、渗透压调节剂、抗氧化添加剂和止痛添加剂混合的最终混合过程。

在本发明中，（S4）可以是从通过（S3）制备的中和混合物中除去水的干燥过程，由此生产水含量为干燥后重量10%或更少的干燥透明质酸凝胶，但不限于此。

在本发明中，（S4）可以包括在循环干燥空气的同时蒸发水的干燥过程，以及通过将中和的交联透明质酸浸入有机溶剂中，然后在循环干燥空气的同时除去水和有机溶剂的干燥过程，而不限于此。

在本发明中，有机溶剂可以是选自由以下组成的组中的至少一种：甲醇、乙醇、丙醇、1,2-丁二醇、1,3-丁二醇、1,5-戊二醇、1,2-己二醇、丙酮、乙醛、乙腈、四氢呋喃、甘油和四乙二醇，但不限于此。

在本发明中，交联剂可以是具有至少两个环氧官能团的双环氧化物类交联剂，或二乙烯基砜类交联剂。具体地，交联剂可以是选自由以下组成的组中的至少一种：1,4-丁二醇二缩水甘油醚、乙二醇二缩水甘油醚、1,6-己二醇二缩水甘油醚、丙二醇二缩水甘油醚、聚乙二醇二缩水甘油醚、聚丙二醇二缩水甘油醚、聚四亚甲基二醇二缩水甘油醚、新戊二醇二缩水甘油醚、聚甘油聚缩水甘油醚、二甘油聚缩水甘油醚、甘油聚缩水甘油醚、三甲基丙烷聚缩水甘油醚、1,2-双(2,3-环氧丙氧基)乙烯、季戊四醇聚缩水甘油醚和山梨糖醇聚缩水甘油醚，但不限于此。

在本发明中，（S1）和（S6）中的碱性物质是金属氢氧化物，并且指元素周期表第1、2和3族中发现的金属的氢氧化物。具体地，碱性物质可以是选自由以下组成的组中的至少一种：氢氧化锂、氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化钙和氢氧化铝，但不限于此。

在本发明中，酸性物质是一种水溶液，其含有在以浓度0.1 mol/L溶解在水中时产生6.0或更低pH的物质。具体地，酸性物质水溶液可以是选自由以下组成的组中的至少一种：磷酸水溶液、醋酸水溶液、盐酸水溶液、硝酸水溶液、硫酸水溶液、硼酸水溶液、二乙基巴比妥酸水溶液、磷酸二氢钠或磷酸二氢钠水合物、磷酸二氢钾或磷酸二氢钾水合物、磷酸二氢铵或磷酸二氢铵水合物、以及醋酸钠或醋酸钠水合物，但不限于此。

在本发明中，（S6）可以是将通过（S5）纯化的交联透明质酸与碱性水溶液混合，以便将氢离子浓度（pH）调节至11.4至12.0的溶胀控制过程，但不限于此。

在本发明中，（S7）可以是将已经通过（S6）控制物理性质的交联透明质酸与酸性物质或含有酸性物质的水溶液、渗透压调节剂、粘度控制添加剂和止痛添加剂混合，从而产生氢离子浓度（pH）为5至9并且透明质酸或其盐含量为0.5至5 wt%的组合物的最终混合过程，但不限于此。

在本发明中，渗透压调节剂可以是选自由以下组成的组中的至少一种：氯化钠（NaCl）、氯化钾（KCl）、氯化钙（CaCl₂）和氯化镁（MgCl₂），但不限于此。

在本发明中，止痛添加剂可以是选自由以下组成的组中的任何一种或多种：利多卡因或其盐和布比卡因或其盐，但不限于此。

在本发明中，抗氧化添加剂可以是选自由以下组成的组中的至少一种：抗坏血酸或其衍生物、谷胱甘肽、硫辛酸或其衍生物、尿酸或其衍生物、生育酚和甘露醇，但不限于此。

在下文中，将通过实施例的方式更详细地描述本发明，但本发明并不限于实施例。

实施例

典型地，为了生产交联透明质酸，进行交联混合物制备过程、交联过程和纯化过程。为了找到一种用于改变通过交联过程获得的交联透明质酸的物理性质的有效方法，本发明人选择热处理，纯化后在碱性溶液中处理，干燥中和的交联透明质酸，然后在碱性溶液中处理交联透明质酸，作为控制交联透明质酸的物理性质的方法，并且使用所选择的方法进行了实验。

为了评价热处理的效果，将经历了纯化过程的交联透明质酸储存在80°C和100°C的不同温度下，并且观察了交联透明质酸的溶胀度随储存时间的变化以及交联透明质酸是否保持其形状。通过将纯化的交联酸浸入pH为11至13.5的碱性溶液中以进行在碱性溶液中的处理，并且观察了交联透明质酸溶胀度的变化以及交联透明质酸是否保持其形状。虽然可以确认这两种后处理方法在一定程度上增加了交联透明质酸的溶胀度，但无法控制交联透明质酸在纯化过程中发生的溶胀。因此，可以看出，这些方法可以应用于交联混合物或交联过程受到控制的情形中，使得纯化过程中发生的溶胀度等于或小于所需的溶胀度。

为了克服上述两种控制交联透明质酸物理性质的方法存在的问题，设计了一种干燥并且然后纯化交联透明质酸的方法。为了干燥交联透明质酸，应调整通过交联过程产生的交联透明质酸的pH。可以看出，当在pH高于9时进行干燥时，交联透明质酸的颜色变为棕色，并且当通过干燥得到的干燥交联透明质酸进入水中时，它被转化为溶液而不是交联透明质酸。因此，中和对于降低通过交联过程获得的交联透明质酸的pH至关重要，并且通过中和将交联透明质酸的pH调节到9或更低。在调节至9或更低的pH下进行干燥，使干燥交联透明质酸中的水含量为10%或更低。在渗透压调节为280至300 mOsmol/kg的洗涤溶液中，以这种方式干燥的交联透明质酸显示出约10至32倍的溶胀度。另一方面，在渗透压调节为280至300 mOsmol/kg的洗涤溶液中，未经过干燥过程的交联透明质酸显示出32至200倍的溶胀度。特别地，当浸入洗涤溶液中时，未经历干燥过程的交联透明质酸在洗涤溶液中显示出199倍的溶胀度，但经历了干燥过程的交联透明质酸显示出31.5倍的溶胀度。这些结果表明，通过干燥过程，能够产生透明质酸含量为至多0.5 wt%的组合物的交联透明质酸被转化为能够产生透明质酸含量按重量计高达3.2%的组合物的交联透明质酸。这表明，通过引入干燥交联透明质酸的过程，可以将透明质酸含量增加6.4倍。

[比较例1至21和实施例1至21]

1. 交联之前的混合过程

通过混合固有粘度为1.8 m³/kg的透明质酸钠（NaHA）、1,4-丁二醇二缩水甘油醚（BDDE）和1% NaOH水溶液（pH = 13.4）来制备交联混合物。基于交联混合物的总重量，透明质酸钠的添加量为10至25 wt%，并且相对于透明质酸的重复单元，将交联剂BDDE调节至3至5 mol%。下表1和2示出了添加的透明质酸钠、BDDE和1% NaOH水溶液的量。

2. 交联过程

在完成交联混合物的制备后，通过将交联混合物储存在25°C的恒温浴中24小时进行交联过程。

3. 中和过程

将通过交联过程产生的交联产物浸入100 g含有2.5 wt%磷酸二氢钠（NaH₂PO₄）的磷酸二氢钠水溶液中进行中和过程，以便使磷酸二氢钠水溶液完全吸收到交联透明质酸中。中和过程用于中和通过交联过程获得的交联透明质酸组合物中存在的强碱性物质，并且通过该中和过程将所获得的交联透明质酸组合物的pH调节至9或更低。

4. 干燥过程

在完成中和过程后，将中和的交联透明质酸的一半浸入到1 L等渗溶液（生理盐水）中2天，以在等渗溶液中测量在交联过程后仅经历中和过程的交联透明质酸的溶胀度。中和过程后在等渗溶液中测量溶胀度的结果分类为比较例1至21，并且总结在下表1中。

使交联透明质酸的剩余一半经历干燥过程，通过将其储存在60°C的对流烘箱中24小时，从交联产物中除去水。在这种情况下，进行干燥过程，以便水含量为干燥后重量的10%或更低。

5. 在等渗溶液中洗涤并测量溶胀度

干燥过程完成后，测量干燥交联透明质酸的重量，并将干燥的透明质酸加入到1 L等渗溶液中，并且溶胀纯化直至未观察到溶胀重量增加。此外，以4小时间隔两次交换1 L等渗溶液以完成纯化，并测量纯化后的交联透明质酸的重量。中和后干燥的交联透明质酸组合物的测试程序和测量结果分类为实施例1至实施例21，并且总结在下表2中。

应用以下“等式4”来计算干燥的交联透明质酸中的固体含量，并且应用以下“等式5”来计算交联透明质酸的溶胀度。

[等式4]

固体含量（%） = HA凝胶中固体的理论重量（g） / 干燥HA凝胶的重量（g） x 100

[等式5]

溶胀度（倍） =HA凝胶的溶胀重量（g） / HA凝胶中HA的理论含量（g）

在比较例1至21中，当仅进行“中和过程”时，发现溶胀度为51.8至199.1倍。这种溶胀度是不能达到2 wt%或更高的透明质酸含量的溶胀度，其最常应用于含有交联透明质酸的组合物中。如果交联透明质酸在纯化过程中的溶胀度高于适合目标透明质酸钠含量的溶胀度，则应将经历交联过程的交联透明质酸置于诸如由半透膜制成的管等工具中进行纯化过程，以防止交联透明质酸在纯化过程中溶胀。使用半透膜的纯化过程抑制了交联透明质酸的溶胀，但存在过程时间长、操作者便利性低等问题。

[表1]

另一方面，经历了“中和过程”和“干燥过程”的实施例1至21均在等渗溶液中显示出远低于50倍的溶胀度，而不管交联混合物中透明质酸和1,4-丁二醇二缩水甘油醚（BDDE）的含量如何。特别地，在实施例1至21中，干燥后交联透明质酸在等渗溶液中的溶胀度为13.7至31.5倍，并且在实施例17至21中，溶胀度为11.9至12.4倍。这意味着在交联过程后通过干燥交联透明质酸可以容易地生产透明质酸含量为8 wt%或更低的交联透明质酸组合物。

[表2]

[实施例22至27和比较例22至25]

制备了34.3 g与实施例12中具有相同组成的交联混合物，并使其经历交联过程、中和过程、干燥过程并且然后经历纯化过程，以得到交联透明质酸（在等渗溶液中的溶胀度：14.3倍）。通过将0.01% NaOH水溶液（其中NaOH溶于生理盐水中）和生理盐水添加到2 g得到的交联透明质酸（140 mg，以HA形式）中以进行控制交联透明质酸的溶胀的过程，并将凝胶溶胀控制组合物的总重量设定为4 g。将所制备的含有交联透明质酸的组合物存储在室温（20至25°C）下，并且在所添加的NaOH水溶液和生理盐水被完全吸收到交联透明质酸中时，使用pH计测量溶胀控制组合物的pH，并且目视检查交联透明质酸是否保持其形状，从而完成控制交联透明质酸溶胀的溶胀控制过程。

在控制交联透明质酸溶胀的过程完成后，加入将40 mmol/kg磷酸二氢钠水溶液（磷酸二氢钠溶解在生理盐水中）和生理盐水，以得到最终组合物。最终组合物的总重量为7g，将其pH调节至6至8，并且将其渗透压调节至300至400 mOsmol/kg。目视检查为制备最终混合物而添加的溶液是否完全吸收到交联透明质酸中，以及交联透明质酸是否保持其形状。

此时，比较例22至25对应于其中仅执行“中和过程”而不执行“干燥过程”的情况，如同比较例1至21。

下表3中总结了实施例22至27和比较例22至25的组成比率和测量结果。

[表3]

通过实施例22至27，证实即使通过应用干燥过程降低了交联透明质酸在等渗溶液中的溶胀度，当溶胀控制混合物的pH调节至11.4至12.0时，溶胀度可以提高到所需的水平，同时保持交联透明质酸的形状。实施例22至27的结果表明，无需努力设计用于交联的透明质酸混合物或控制交联条件即可达到特定的透明质酸含量，并且仅通过调节在溶胀控制过程中添加的溶液量即可自由控制含有交联透明质酸的组合物中交联透明质酸的含量。另一方面，可以看出，当溶胀控制混合物的pH低于11.4时，无法控制交联透明质酸的溶胀度，并且当溶胀控制混合物的pH高于12.0时，则难以保持交联透明质酸的形状。

[实施例29至31和比较例26至29]

制备了34.3 g与实施例12具有相同组成的交联混合物，然后通过将其存储在25°C的恒温浴中24小时进行交联过程。将交联透明质酸浸入100 g含有2.5 wt%磷酸二氢钠的磷酸二氢钠水溶液中，使磷酸二氢钠水溶液完全吸收到交联透明质酸中，从而对通过交联过程得到的交联透明质酸进行中和过程。将134.3 g通过中和过程获得的交联透明质酸组合物分成20 g部分，并且在60°C对流烘箱中经历干燥过程，同时控制干燥时间。每次干燥时间测量干燥的交联透明质酸组合物的重量。基于干燥后的重量计算交联透明质酸组合物中的水含量，并且用肉眼和通过测量溶胀重量来测量计算出的水含量和干燥交联透明质酸组合物在等渗溶液中的溶胀行为。下表4中汇总了结果。

此时，比较例26至29对应于其中仅进行“中和过程”而不进行“干燥过程”的情况，如同比较例1至21。

[表4]

作为观察实施例29至31的在等渗溶液中的溶胀行为的结果，其中干燥交联透明质酸中的水含量为10 wt%或更低，证实交联透明质酸均匀溶胀，并且测得的溶胀度为14.3至14.5。另一方面，在比较例26至29中，其中测得的干燥产物中的水含量高于15 wt%，经证实，当水含量为15 wt%或更高时，与未干燥的交联透明质酸的溶胀度相比，溶胀度降低（实施例12中为14.3倍），但在等渗溶液中的溶胀行为不均匀，表明高溶胀度和低溶胀度区域共存。

尽管已经参照具体特征对本发明进行了详细描述，但对于本领域技术人员显而易见的是，该描述只是其优选实施方式，并不限制本发明的范围。因此，本发明的实质范围将由所附的权利要求及其等同物来界定。

Claims

1.一种用于生产含有通过化学修饰透明质酸产生的透明质酸凝胶型交联透明质酸的组合物的方法，所述方法包括：

（S2）形成交联的交联过程；

（S3）将通过所述交联过程产生的交联透明质酸与含有酸性物质的水溶液混合，从而产生氢离子浓度（pH）为9或更低的交联透明质酸的中和过程；

（S4）从通过（S3）制备的中和混合物中除去水的干燥过程；

（S5）通过将通过（S4）制备的干燥交联透明质酸浸入洗涤溶液中，从透明质酸凝胶中除去水溶性杂质的洗涤过程，所述洗涤溶液是使用渗透压调节剂调节至0至600 mOsmol/kg的渗透压的水溶液；和

（S6）将通过（S5）纯化的所述交联透明质酸与碱性物质或含有碱性物质的水溶液和渗透压调节剂混合的溶胀控制过程。

2.根据权利要求1所述的方法，在（S6）后还包括以下（S7）：

（S7）将通过（S6）控制溶胀的所述交联透明质酸与酸性物质或含有酸性物质的水溶液、渗透压调节剂、抗氧化添加剂和止痛添加剂混合的最终混合过程。

3.根据权利要求1所述的方法，其中（S4）是从通过（S3）制备的中和混合物中除去水，从而产生干燥后具有重量的10%或更低的水含量的干燥透明质酸凝胶的干燥过程。

4.根据权利要求1所述的方法，其中（S4）包括在循环干燥空气的同时蒸发水的干燥过程，以及通过将中和交联透明质酸浸入有机溶剂，并且然后在循环干燥空气的同时除去水和有机溶剂来除去水的干燥过程。

5.根据权利要求4所述的方法，其中所述有机溶剂是选自由以下组成的组中的至少一种：甲醇、乙醇、丙醇、1,2-丁二醇、1,3-丁二醇、1,5-戊二醇、1,2-己二醇、丙酮、乙醛、乙腈、四氢呋喃、甘油和四乙二醇。

6.根据权利要求1所述的方法，其中所述交联剂是选自由以下组成的组中的至少一种：1,4-丁二醇二缩水甘油醚、乙二醇二缩水甘油醚、1,6-己二醇二缩水甘油醚、丙二醇二缩水甘油醚、聚乙二醇二缩水甘油醚、聚丙二醇二缩水甘油醚、聚四亚甲基二醇二缩水甘油醚、新戊二醇二缩水甘油醚、聚甘油聚缩水甘油醚、二甘油聚缩水甘油醚、甘油聚缩水甘油醚、三甲基丙烷聚缩水甘油醚、1,2-双(2,3-环氧丙氧基)乙烯、季戊四醇聚缩水甘油醚和山梨糖醇聚缩水甘油醚。

7.根据权利要求1所述的方法，其中（S1）和（S6）中的所述碱性物质是选自由以下组成的组中的至少一种：氢氧化锂、氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化钙和氢氧化铝。

8.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述酸性物质包括选自由以下组成的组中的至少一种：磷酸水溶液、醋酸水溶液、盐酸水溶液、硝酸水溶液、硫酸水溶液、硼酸水溶液、二乙基巴比妥酸水溶液、磷酸二氢钠或磷酸二氢钠水合物、磷酸二氢钾或磷酸二氢钾水合物、磷酸二氢铵或磷酸二氢铵水合物、和醋酸钠或醋酸钠水合物。

9.根据权利要求1所述的方法，其中（S6）是将通过（S5）纯化的所述交联透明质酸与碱性水溶液混合，使得将氢离子浓度（pH）调节至11.4至12.0的溶胀控制过程。

10.根据权利要求2所述的方法，其中（S7）是将通过（S6）控制物理性质的所述交联透明质酸与酸性物质或含有酸性物质的水溶液、渗透压调节剂、粘度控制添加剂和止痛添加剂混合，从而产生氢离子浓度（pH）为5至9且透明质酸含量为0.5至5 wt%的组合物的最终混合过程。

11.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述渗透压调节剂是选自由以下组成的组中的至少一种：氯化钠（NaCl）、氯化钾（KCl）、氯化钙（CaCl₂）和氯化镁（MgCl₂）。

12.根据权利要求2所述的方法，其中所述止痛添加剂是选自由以下组成的组中的任何一种或多种：利多卡因或其盐和布比卡因或其盐。

13.根据权利要求2所述的方法，其中所述抗氧化添加剂是选自由以下组成的组中的至少一种：抗坏血酸或其衍生物、谷胱甘肽、硫辛酸或其衍生物、尿酸或其衍生物、生育酚和甘露醇。