CN115671388A - 一种性能可调控的丝蛋白的可注射微球凝胶及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
一种性能可调控的丝蛋白的可注射微球凝胶及其制备方法，包括：制备再生丝蛋白溶液，包括桑蚕丝的脱胶、溶解、纯化，并通过分子量筛选得到目标分子量的再生丝蛋白溶液；通过向再生丝蛋白溶液加入乙醇进行冷冻并解冻等步骤，制备丝蛋白微球水溶液；由上述步骤制备的两种溶液经干燥得到丝蛋白微球可再分散粉末；将丝蛋白微球可再分散粉末分散溶剂并加入凝胶诱导剂，制备得到丝蛋白微球凝胶。本发明在整个制备过程中，不涉及有毒化学试剂，保证了材料卓越的力学性能与理想的生物相容性和生物降解性；丝蛋白微球凝胶具有可触变性，可以通过注射器注入皮下组织，注射完成后具有一定自支撑性，由于进行了分子量筛选，其力学性能可调控，可用于不同应用场景中。
Description
技术领域
本发明属于医美整形技术领域，特别涉及一种性能可调控的丝蛋白的可注射微球凝胶及其制备方法。
背景技术
在医美整形领域，使用植入物的目的是重建结构或改善形态。用于面部美容整形的填充水凝胶，有修正皱纹、改善面部轮廓、填平凹陷瘢痕或唇部、修复受伤的组织等作用。
在皮肤填充方面，水凝胶材料应用越来越广泛。水凝胶是一类具有高吸水高保水性的具有三维交联网络结构的聚合物，通常可分为化学交联水凝胶和物理交联水凝胶两类。化学交联水凝胶能通过交联剂交联，辐射交联，光引发交联等形成的水凝胶。而物理交联水凝胶不涉及化学反应，分子链间的交联通过分子间相互作用力(范德华力、氢键等)形成。将水凝胶通过注射的方法将具有一定流动性的生物医用材料植入体内，能够一定程度上避免外科手术风险，降低患者的不适。在市场上水凝胶中以胶原蛋白类水凝胶和透明质酸类水凝胶的相关产品应用较为广泛。胶原蛋白类填充剂主要是从生物体中提取，然后经过纯化、灭菌等工艺而制备，可被用于恢复唇缘、修复面部皱纹和其他软组织轮廓缺失等治疗。由于胶原降解较快，填充效果维持时间短暂，力学强度低，可塑形性差等缺点，一般被用于颈纹等不需要塑形的组织结构部位。如对塑形性有一定要求，通常会选择由透明质酸、聚乳酸以及其他合成类材料制备的填充制剂。透明质酸钠是一种糖胺聚糖类的高分子多糖，作为皮肤填充剂使用时，通常会使用丁二醇缩水甘油醚或二乙烯基砜作为交联剂使其交联以延缓其降解速度。而这些交联剂随着凝胶的降解，慢慢被人体吸收，为透明质酸钠在人体内的应用带来了潜在的风险。并且，低交联度的透明质酸钠降解速度较快，植入面部后维持时间为2-3个月，而高交联度的透明质酸钠弹性不足，硬度较高，植入面部后有块状固体感。
当水凝胶制剂应用于不同的皮肤填充的场景中，我们希望是一种既可以较长时间不降解，并且又与人体组织的力学强度接近的一种凝胶材料，并且具有一定触变性，在受到剪切力时具有流体的流变行为，可以通过注射器注入皮下组织，注射完成后需要具有一定自支撑性。在改善其自支撑性方面，我们发现聚合物微球作为某一材料的微结构单元常常被用来从而达到改善或提高材料性能的效果。聚合物微球是指直径在纳米级至微米级，形状为球形或其它类似球形的几何体的高分子材料或高分子材料。通过制备聚合物微球来提高材料的结构性能，再制成凝胶应用于皮肤填充领域，这种工艺方法很大程度上拓宽了凝胶的应用前景。
丝蛋白(即桑蚕丝脱去丝胶后剩余的部分，又称丝素蛋白，SILK FIBROIN)，是一种具有良好的生物相容性，无免疫原性，以及生物降解产品安全性高的生物材料，广泛应用于生物医用材料领域的产品研究。中国发明专利CN202010659791.4中制备的是将丝蛋白和明胶共混制备的凝胶，但并没有根据不同的应用场景进行考量，制备出适合于目标填充部位的凝胶材料。究其原因是目前仍无法对丝蛋白进行筛分，进行分子量分级，无法精确测量分子量。由于大分子丝蛋白分子在电场作用下容易聚集，用传统的凝胶电泳的测试大分子丝蛋白分子量的方法不能精确给出分子量数值和分子量分布，如图1所示。丝蛋白的组成和构象都会随着分子量的大小不同而产生不同变化。同时，丝蛋白的优点在于无需添加化学交联剂的条件下，既可以形成物理凝胶也可以形成化学凝胶。并且通过调控丝蛋白的分子量、凝胶诱导剂型以及成凝胶的方式，可以调节丝蛋白凝胶的力学性能，进而得到适宜的力学性能的同时还可以保持较长的降解时间。因此通过制备工艺筛分出不同分子量的丝蛋白对制备出适合于不同部位的具有不同力学性能的凝胶材料至关重要。
发明内容
本发明为了解决已有的填充凝胶力学性能与降解速度无法兼得的问题，以及可注射水凝胶领域的交联剂潜在的风险问题，基于丝蛋白微球凝胶具有触变性，在受到剪切力时具有流体的流变行为，在静置状态下又可以具备一定的自支撑性的性状，提出一种性能可调控的丝蛋白的可注射微球凝胶及其制备方法。
本发明的一种性能可调控的丝蛋白的可注射微球凝胶的制备方法包括以下步骤：
S1：制备再生丝蛋白溶液，包括桑蚕丝的脱胶、溶解、纯化步骤，并通过分子量筛选得到目标分子量的再生丝蛋白溶液；
S2：基于步骤S1中得到的具有特定分子量的再生丝蛋白溶液制备丝蛋白微球水溶液；
S3：由步骤S1中制备的丝蛋白溶液和步骤S2中制备的丝蛋白微球水溶液，经由干燥步骤，得到丝蛋白微球可再分散粉末；
S4：由步骤S3得到的丝蛋白微球再分散粉末制备得到性能可调控的丝蛋白微球凝胶。
优选的，所述步骤S1中，所述再生丝蛋白溶液的制备步骤包括：a)脱胶：将桑蚕蚕丝放入碳酸钠、碳酸氢钠的水溶液或者碳酸钠和碳酸氢钠的混合溶液中，加热煮沸，取出后用纯化水清洗，脱去丝胶蛋白，留下丝蛋白，将丝蛋白烘干，获得干燥后的丝蛋白，备用；b)溶解：将上述干燥后的丝蛋白以溶于溴化锂水溶液中，获得含丝蛋白和少量不溶性颗粒组成的混合液；c)纯化和筛选：取混合溶液加入纯净水稀释后，通入超滤系统脱盐，根据凝胶的具体应用场景筛选出相应分子量的再生丝蛋白溶液，将最终溶液的丝蛋白浓度浓缩至5-40wt％。
进一步的，所述步骤S1中，所述再生丝蛋白溶液的制备过程中，所述筛选方式为，将超滤系统选择不同的截留孔径，由此筛选出不同分子量的再生丝蛋白溶液。
优选的，步骤S1中筛选出的再生丝蛋白溶液的重均分子量范围为80-100kDa、100-150kDa、150-200kDa或200-250kDa。
优选的，所述步骤S2中丝蛋白微球水溶液的具体制备方法为：向步骤S1制备的丝蛋白溶液中加入无水乙醇混合均匀，乙醇加入的体积为丝蛋白溶液体积的0.01-2倍，混合后溶液中丝蛋白的固含量为1-10wt％；然后将混合溶液置于-10℃至-40℃环境中，放置1-48小时后解冻，得到丝蛋白微球水溶液并将丝蛋白微球水溶液浓缩至固含量为10-50wt％。
进一步的，所述步骤S2中的丝蛋白微球的直径为30-800nm。
优选的，所述步骤S3中将丝蛋白微球干燥成可再分散的粉末的具体方法为：将步骤S1中制备的丝蛋白溶液和步骤S2中制备的丝蛋白微球水溶液混合均匀，其中，所述丝蛋白溶液的体积为所述丝蛋白微球水溶液体积的0.01-100倍；然后将混合溶液通入喷雾干燥系统喷干，或者用冻干的方式冻干。
进一步的，所述步骤S3中制备的丝蛋白微球干燥成可再分散的粉末，具有便于储存运输的特点，避免了再生丝蛋白溶液在长期存储过程中发生变性，也避免了运输过程中因为剧烈摇晃引起丝蛋白沉淀。并且，混合了再生丝蛋白和丝蛋白微球的干燥粉，溶解时条件更温和，不需要强烈机械搅拌，也不会产生聚集沉淀。如果是纯再生丝蛋白直接进行干燥成粉末，再溶解过程中，丝蛋白链容易聚集，引起β折叠，最终导致很多沉淀的产生。丝蛋白微球的存在起着助溶的作用。它拉开了再生丝蛋白分子链之间的距离，使其再溶解过程更加容易。
优选的，所述步骤S4中丝蛋白微球凝胶的具体制备方法为：将步骤S3中制备的可再分散的粉末加入去离子水并进行机械搅拌，使得所述粉末分散溶解，然后加入凝胶诱导剂混合均匀；将混合溶液置于25-80℃的环境中，保温0.5-3小时，形成均一稳定的丝蛋白微球凝胶。
进一步的，在所述步骤S4中，所述凝胶诱导剂为可诱导丝蛋白成凝胶的化合物以及混合物，包括纤维素类凝胶诱导剂、皂土类凝胶诱导剂或酶类诱导剂，其中，纤维素类诱导剂包括甲基纤维素、羧甲基纤维素、乙基纤维素、羟乙基纤维素、羟丙基纤维素和羟丙基甲基纤维素中的一种或几种，皂土类凝胶诱导剂包括锂皂土，酶类诱导剂包括辣根过氧化酶。纯丝蛋白微球凝胶的弹性模量比较低，通过添加凝胶诱导剂可以将凝胶的弹性模量调整到比较高的状态，更合适用于塑形。
优选的，所述步骤S4中，当使用纤维素类凝胶诱导剂制备丝蛋白微球凝胶时，溶液中丝蛋白的固含量为1-40％，纤维素的固含量为1-40％。
优选的，所述步骤S4中，当使用酶类凝胶诱导剂制备丝蛋白微球凝胶时，溶液中丝蛋白的固含量为1-40wt％，优选为7-15wt％，混合后溶液中酶的含量为1-100U/mL，优选为15-75U/mL。
优选的，所述步骤S4中，当使用锂皂土诱导剂制备丝蛋白微球凝胶时，溶液中丝蛋白的固含量为1-40wt％，优选为5-15wt％，锂皂土的浓度为1-20wt％。
本发明的有益效果：
1)安全性高：本发明制备的丝蛋白微球凝胶产品，在整个制备过程中，不涉及有毒化学试剂，保证了材料卓越的力学性能与理想的生物相容性和生物降解性。
2)可注射性：本发明制备的丝蛋白微球凝胶具有可触变性，在受到剪切力时具有流体的流变行为，可以通过注射器注入皮下组织，注射完成后需要具有一定自支撑性。
3)力学性能可调：本发明制备的丝蛋白微球凝胶力学性能可调，可应用于不同力学性能要求的场景中。
附图说明
图1为用凝胶电泳方法测试大分子丝蛋白分子量的条带图；
图2为本实施例基于丝蛋白的可注射微球凝胶的制备流程图；
图3为实施例1-4制备的丝蛋白微球凝胶的力学性能图；
图4为通过本发明制备的丝蛋白微球凝胶；
图5为实施例1-4制备的丝蛋白微球凝胶采用三阶段触变性测试法测得的实验结果；
图6为实施例1-4制备的丝蛋白微球的扫描电镜图；
图7为实施例1-4制备的丝蛋白微球凝胶的细胞相容性实验图。
具体实施方式
下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的保护范围。此外，应理解，在阅读了本发明所公开的内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本发明所限定的保护范围之内。
实施例1
本实施例提出了一种应用于颈纹填充的可注射微球凝胶的制备方法，如图2所示，包括以下步骤：
S1：制备再生丝蛋白溶液：a)脱胶：将桑蚕蚕丝放入碳酸钠、碳酸氢钠的水溶液或者碳酸钠和碳酸氢钠的混合溶液中，加热煮沸，取出后用纯化水清洗，脱去丝胶蛋白，留下丝蛋白，将丝蛋白烘干，获得干燥后的丝蛋白，备用；b)溶解：将上述干燥后的丝蛋白以溶于溴化锂水溶液中，获得含丝蛋白和少量不溶性颗粒组成的混合液；c)纯化和筛选：取混合溶液加入纯净水稀释后，通入超滤系统脱盐，选择80-100kDa截留孔径的系统，制备出分子量为80-100kDa的再生丝蛋白溶液，将最终溶液的丝蛋白浓度浓缩至5-40wt％。
S2：制备丝蛋白微球溶液：
向步骤S1中制备的再生丝蛋白溶液中加入无水乙醇混合均匀，丝蛋白溶液与乙醇的体积比为5：1，混合后溶液中丝蛋白的固含量为3wt％；然后将混合溶液置于-40℃环境中放置48小时后解冻，得到丝蛋白微球水溶液并将其浓缩至固含量为10wt％。
S3：将丝蛋白微球干燥成可再分散的粉末：将步骤S1中制备的丝蛋白溶液(固含量为10wt％)和步骤S2中制备的丝蛋白微球水溶液(固含量为10wt％)按照体积比1：1混合均匀，然后将混合溶液通入喷雾干燥系统喷干成粉末。
S4：丝蛋白微球凝胶的具体制备方法为：将步骤S3中制备的可再分散的粉末加入去离子水进行机械搅拌，分散溶解，形成固含量为30wt％的分散液，然后加入羟丙基甲基纤维素溶液，混合均匀，混合后溶液中总的固含量为20％，溶液中丝蛋白与羟丙基甲基纤维素的质量比分别为20∶1；然后将混合溶液置于70℃水浴中孵化1小时，即可得到丝蛋白微球凝胶。
如图3所示，实施例1制备的丝蛋白微球凝胶的模量为5.5kPa，适合用于颈纹的填充。
实施例2
本实施例提出了一种应用于太阳穴部位填充的可注射微球凝胶的制备方法，包括以下步骤：
S1：制备再生丝蛋白溶液：同实施例1中的步骤S1，选择100-150kDa截留孔径的超滤系统，制备出分子量为100-150kDa的再生丝蛋白溶液；
S2制备丝蛋白微球溶液：同实施例1中的步骤S2；
S3：将丝蛋白微球干燥成可再分散的粉末：同实施例1中的步骤S3，得到可再分散的粉末；
S4：丝蛋白微球凝胶的具体制备方法为：将步骤S3中制备的可再分散的粉末加入去离子水机械搅拌，分散溶解，形成固含量为15wt％的分散液；向分散液中加入辣根过氧化物酶(HRP酶)和0.5％H2O2(90-360μL/mL)，混合后溶液中酶的含量为18-72U/mL，然后置于37℃环境中2小时形成微凝胶，然后将微凝胶浸泡在乙醇溶液中1小时，即可形成丝蛋白微球凝胶。
如图3所示，实施例1制备的丝蛋白微球凝胶的模量为34.1kPa，适合用于太阳穴部位的填充。
实施例3
本实施例提出了一种应用于苹果肌填充的可注射微球凝胶的制备方法，包括以下步骤：
S1：制备再生丝蛋白溶液：同实施例1中的步骤S1；选择150-200kDa截留孔径的超滤系统，制备出分子量为150-200kDa的再生丝蛋白溶液；
S2：制备丝蛋白微球溶液：同实施例1中的步骤S2；
S3：将丝蛋白微球干燥成可再分散的粉末：同实施例1中的步骤S3，得到可再分散的粉末；
S4：丝蛋白微球凝胶的具体制备方法为：
a)将步骤S3中制备的可再分散的粉末加入去离子水机械搅拌，分散溶解，形成固含量为15wt％的分散液；
b)将锂皂土粉末在去离子水中搅拌分散24小时，然后加入0.06wt％聚丙烯酸钠(分子量2000Da)，继续搅拌2小时，得到均匀分散的锂皂土水溶液；
c)然后将锂皂土水溶液加入步骤a制备的丝蛋白微球水溶液中，混合均匀，向分散液中加入辣根过氧化物酶(HRP酶)和0.5％H2O2(90-360μL/mL)，混合后溶液中酶的含量为18-72U/mL，然后置于37℃环境中1小时形成微凝胶，然后将微凝胶浸泡在乙醇溶液中1小时，即可形成丝蛋白微球凝胶。
如图3所示，实施例3制备的丝蛋白微球凝胶的模量为57.3kPa，适合用于苹果肌部位的填充。
实施例4
本实施例提出了一种应用于鼻梁软骨部位填充的可注射微球凝胶的制备方法，包括以下步骤：
S1：制备再生丝蛋白溶液：同实施例1中的步骤S1；选择200-250kDa截留孔径的超滤系统，制备出分子量为200-250kDa的再生丝蛋白溶液；
S2：制备丝蛋白微球溶液：同实施例1中的步骤S2；
S3：将丝蛋白微球干燥成可再分散的粉末：同实施例1中的步骤S3，得到可再分散的粉末；
S4：丝蛋白微球凝胶的具体制备方法为：
a)将步骤S3中制备的可再分散的粉末加入去离子水机械搅拌，分散溶解，形成固含量为15wt％的分散液；
b)将锂皂土粉末在去离子水中搅拌分散24小时，然后加入0.06wt％聚丙烯酸钠(分子量2000Da)，继续搅拌2小时，得到均匀分散的锂皂土水溶液；
c)然后将锂皂土水溶液加入步骤a制备的丝蛋白微球水溶液中，混合均匀，向分散液中加入辣根过氧化物酶(HRP酶)和0.5％H2O2(90-360μL/mL)，混合后溶液中酶的含量为18-72U/mL，然后置于37℃环境中1小时形成微凝胶，然后将微凝胶浸泡在乙醇溶液中1h，即可形成丝蛋白微球凝胶。
如图3所示，实施例4制备的丝蛋白微球凝胶的模量为152kPa，适合用于鼻梁软骨部位的填充。
从图3中可以看出，通过调控丝蛋白的分子量、凝胶诱导剂等参数，可以制备出不同力学强度的应用于不同场景的填充剂。
将本发明实施例1-4中制备的丝蛋白微球凝胶，如图4所示，采用振荡模式，频率固定为1Hz，结构破坏阶段选取大振幅1000％并持续100s，监测结构恢复选用振幅为1％，重复多次，观察G'和G”随时间的变化。如图5所示，结果表明四种凝胶均有良好的可注射性，并表现一定的自支撑性。
将本发明实施例1-4中制备的丝蛋白微球用电子扫描电镜进行观察，如图6所示，丝蛋白分子量越高，制备的丝蛋白微球的尺寸越大。
将原代成纤维细胞接种在实施例1-4制备的丝蛋白微球凝胶表面，然后用显微镜观察细胞在凝胶表面的铺展情况。如图7所示，细胞在凝胶表面呈现铺展状生长，说明制备的凝胶有利于细胞的粘附和铺展。
Claims (11)
1.一种性能可调控的丝蛋白的可注射微球凝胶的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1：制备再生丝蛋白溶液，包括桑蚕丝的脱胶、溶解、纯化步骤，并通过分子量筛选得到目标分子量的再生丝蛋白溶液；
S2：基于步骤S1中得到的具有特定分子量的再生丝蛋白溶液制备丝蛋白微球水溶液；
S3：由步骤S1中制备的丝蛋白溶液和步骤S2中制备的丝蛋白微球水溶液，经由干燥步骤，得到丝蛋白微球可再分散粉末；
S4：由步骤S3得到的丝蛋白微球再分散粉末制备得到性能可调控的丝蛋白微球凝胶。
2.根据权利要求1所述的性能可调控的丝蛋白的可注射微球凝胶的制备方法，其特征在于，所述步骤S1中，所述再生丝蛋白溶液的制备步骤包括：a)脱胶：将桑蚕蚕丝放入碳酸钠、碳酸氢钠的水溶液或者碳酸钠和碳酸氢钠的混合溶液中，加热煮沸，取出后用纯化水清洗，脱去丝胶蛋白，留下丝蛋白，将丝蛋白烘干，获得干燥后的丝蛋白，备用；b)溶解：将上述干燥后的丝蛋白以溶于溴化锂水溶液中，获得含丝蛋白和少量不溶性颗粒组成的混合液；c)纯化和筛选：取混合溶液加入纯净水稀释后，通入超滤系统脱盐，根据凝胶的具体应用场景筛选出相应分子量的再生丝蛋白溶液，将最终溶液的丝蛋白浓度浓缩至5-40wt％。
3.根据权利要求2所述的性能可调控的丝蛋白的可注射微球凝胶的制备方法，其特征在于，所述步骤S1中，所述再生丝蛋白溶液的筛选方式为，将超滤系统选择不同的截留孔径，由此筛选出不同分子量的再生丝蛋白溶液；优选的，步骤S1中筛选出的再生丝蛋白溶液的重均分子量范围为80-100kDa、100-150kDa、150-200kDa或200-250kDa，制备出适合于不同部位的具有不同力学性能的凝胶材料。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的性能可调控的丝蛋白的可注射微球凝胶的制备方法，其特征在于，所述步骤S2中丝蛋白微球水溶液的具体制备方法为：向步骤S1制备的丝蛋白溶液中加入无水乙醇混合均匀，乙醇加入的体积为丝蛋白溶液体积的0.01-2倍，混合后溶液中丝蛋白的固含量为1-10wt％；然后将混合溶液置于-10℃至-40℃环境中，放置1-48小时后解冻，得到丝蛋白微球水溶液并将丝蛋白微球水溶液浓缩至固含量为10-50wt％。
5.根据权利要求1-4中任一项所述的性能可调控的丝蛋白的可注射微球凝胶的制备方法，其特征在于，所述步骤S3中将丝蛋白微球干燥成可再分散的粉末的具体方法为：将步骤S1中制备的丝蛋白溶液和步骤S2中制备的丝蛋白微球水溶液混合均匀，其中，所述丝蛋白溶液的体积为所述丝蛋白微球水溶液体积的0.01-100倍；然后将混合溶液通入喷雾干燥系统喷干，或者用冻干的方式冻干。
6.根据权利要求1-5中任一项所述的性能可调控的丝蛋白的可注射微球凝胶的制备方法，其特征在于，所述步骤S4中丝蛋白微球凝胶的具体制备方法为：将步骤S3中制备的可再分散的粉末加入去离子水并进行机械搅拌，使得所述粉末分散溶解，然后加入凝胶诱导剂混合均匀；将混合溶液置于25-80℃的环境中，保温0.5-3小时，形成均一稳定的丝蛋白微球凝胶。
7.根据权利要求6所述的性能可调控的丝蛋白的可注射微球凝胶的制备方法，其特征在于，所述凝胶诱导剂为可诱导丝蛋白成凝胶的化合物以及混合物，包括纤维素类凝胶诱导剂、皂土类凝胶诱导剂或酶类诱导剂，其中，纤维素类诱导剂包括甲基纤维素、羧甲基纤维素、乙基纤维素、羟乙基纤维素、羟丙基纤维素和羟丙基甲基纤维素中的一种或几种，皂土类凝胶诱导剂包括锂皂土，酶类诱导剂包括辣根过氧化酶。
8.根据权利要求7所述的性能可调控的丝蛋白的可注射微球凝胶的制备方法，其特征在于，所述步骤S4中，当使用纤维素类凝胶诱导剂制备丝蛋白微球凝胶时，溶液中丝蛋白的固含量为1-40％，纤维素的固含量为1-40％。
9.根据权利要求7所述的性能可调控的丝蛋白的可注射微球凝胶的制备方法，其特征在于，所述步骤S4中，当使用酶类凝胶诱导剂制备丝蛋白微球凝胶时，溶液中丝蛋白的固含量为1-40wt％，优选为7-15wt％，混合后溶液中酶的含量为1-100U/mL，优选为15-75U/mL。
10.根据权利要求7所述的性能可调控的丝蛋白的可注射微球凝胶的制备方法，其特征在于，所述步骤S4中，当使用锂皂土诱导剂制备丝蛋白微球凝胶时，溶液中丝蛋白的固含量为1-40wt％，优选为5-15wt％，锂皂土的浓度为1-20wt％。
11.一种性能可调控的丝蛋白的可注射微球凝胶，其特征在于，采用权利要求1-10所述的方法制备得到。
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