CN118258920A - 一种基于液相色谱的硫酸软骨素钠含量检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种基于液相色谱的硫酸软骨素钠含量检测方法，涉及药品质量检测技术领域，该方法包括制备磷酸缓冲液，将辛烷磺酸钠与磷酸缓冲液混合制备流动相，设置色谱条件后，分别将制备的标准溶液与通过待测样品制得的供试品溶液通过液相色谱仪进行检测，从而得到硫酸软骨素钠含量，通过设定特定的色谱检测条件，将通过研磨后的待检测样品制备的若干组供试品溶液和标准溶液通过液相色谱仪检测，并根据检测结果确定硫酸软骨素含量是否达标，并在不达标情况下对检测过程调整，以进一步确定硫酸软骨素钠含量，一方面实现对硫酸软骨素钠含量的检测，另一方面提高了对检测过程的控制精度。
Description
技术领域
本发明涉及药品质量检测技术领域，尤其涉及一种基于液相色谱的硫酸软骨素钠含量检测方法。
背景技术
硫酸软骨素钠主要是存在于人和动物结缔组织中的酸性黏多糖，主要用于治疗高血脂症及骨关节炎等疾病，而为了保证制备用于治疗上述病症的含有硫酸软骨素钠的药品的药效，就要保证对应药品中的硫酸软骨素钠的含量达标，并且同时需要保证硫酸软骨素钠中的杂质不超标。
中国专利申请公开号：CN109696490A公开了一种鉴别硫酸软骨素来源HPLC检测方法，该检测方法步骤为：
(1)检测波长的测定
取CS标准品溶液适量，以去离子水为参比溶液，用1cm光程长的比色皿扫描测定190-1100nm的紫外可见吸收曲线，得到化合物的紫外可见光谱；
(2)色谱条件
色谱柱：安捷伦Zorbax SAX；流动相A为水溶液，流动相B为2mo l·L-的氯化钠溶液，梯度洗脱；检测波长为232nm；流速为1.0mL·min-；柱温：40℃；
(3)酶解条件
根据称样量及酶活性加入过量的CS ABC酶解液200μL，CS,ABC酶解液反应温度为30-40℃，反应时间2-5h，在进样前先将样品液在100℃加热使其凝固，经离心除去杂质，再经0.45μm滤膜滤过，可得澄清的供试品溶液；
(4)对照品储备液及工作液的制备
适量取硫酸软骨素对照品干燥，精密称取200mg于小烧杯中，加入二乙腈，振荡使其分散均匀，再加入纯水，超声波溶解，转移至100mL容量瓶，加水定容，制成质量浓度为2mg/mL的储备液储于冰箱中；精密量取对照品储备液0.5,1.0,2.0,3.0,4.0,5.0mL，分别置于10mL容量瓶中，加水至刻度并摇匀，在进行高效液相色谱仪测定前用0.45μm滤膜过滤。
由此可见，所述鉴别硫酸软骨素来源HPLC检测方法存在问题：
1、并不适用于对硫酸软骨素钠含量的检测；
2、对检测过程的控制精度不足导致硫酸软骨素钠含量的检测精度低。
发明内容
为此，本发明提供一种基于液相色谱的硫酸软骨素钠含量检测方法，用以克服现有技术中对检测过程的控制精度不足导致硫酸软骨素钠含量的检测精度低的问题。
为实现上述目的，本发明提供一种基于液相色谱的硫酸软骨素钠含量检测方法，包括：
步骤S1、制备磷酸缓冲液
量取800mL水，分别加入磷酸80mL、三乙胺100mL，加水定容至1000mL，混匀即得磷酸缓冲液；
步骤S2、制备流动相
称取0.5g辛烷磺酸钠，加水800mL溶解，分别加入磷酸缓冲液5mL、乙腈40mL，加水定容至1000mL，混匀即得流动相；
步骤S3、设定色谱条件
采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，将所述流动相经Φ0.45um的微孔滤膜过滤后，超声脱气，设定检测波长为195nm、流速为0.60mL/min、进样量20μl；
步骤S4、制备标准溶液
称取预设质量的经105℃干燥4小时后硫酸软骨素对照品，置入100mL瓶中，加80mL的水，超声振荡溶解，然后加水定容至100mL，摇匀，经Φ0.45μm微孔滤膜过滤即得标准溶液；
步骤S5、制备供试品溶液
称取经研磨成粉末状的预设质量的待检测样品，置入100mL量瓶中，加80mL的水，超声振荡溶解，然后加水定容至100mL，经Φ0.45μm微孔滤膜过滤后即得供试品溶液；
步骤S6、液相色谱检测
分别量取若干组所述供试品溶液20μl和标准溶液20μl，然后分别通过液相色谱仪进行检测以确定供试品硫酸软骨素钠含量。
进一步地，在所述步骤S6中，当确定供试品硫酸软骨素钠含量时，通过以下公式计算，设定：
其中，AS为样品的峰面积，AR为对照品的峰面积，MS为样品的质量，MR为对照品的质量，X为对照品含量。
进一步地，在所述步骤S5中，当制备所述供试品溶液完成时，将制备所述供试品溶液的微孔滤膜与制备所述标准溶液的微孔滤膜经烘箱烘干预设时长T后，分别称重，并计算质量差值，并将该质量差值与标准质量差值进行比对以确定所述供试品溶液浓度是否达标，并当所述质量差值大于标准质量差值时确定所述供试品溶液浓度不达标。
进一步地，当确定所述供试品溶液浓度不达标时，计算所述质量差值与标准质量差值的比值，并根据该比值与预设比值的比对结果确定对待测样品质量的补偿。
进一步地，所述确定对待测样品质量的补偿包括以第一补偿系数对所述待测样品进行质量补偿，所述第一补偿系数由所述比值与预设比值确定。
进一步地，所述确定对待测样品质量的补偿包括以第二补偿系数对所述待测样品进行质量补偿，所述第二补偿系数由所述比值与预设比值确定。
进一步地，当对所述待测样本的质量补偿完成时，根据所述公式(1)计算所述硫酸软骨素钠含量，并根据硫酸软骨素钠含量与标准含量进行比对，以根据比对结果确定硫酸软骨素钠含量，当确定所述硫酸软骨素钠含量不达标时，计算所述硫酸软骨素钠含量与标准含量的含量差值，并根据含量差值与预设含量差值的比对结果确定对液相色谱检测参数的调整。
进一步地，所述确定对液相色谱检测参数的调整包括以第一调整方式对所述液相色谱检测参数中的检测波长进行调整。
进一步地，所述确定对液相色谱检测参数的调整包括以第一调整方式对所述液相色谱检测参数中的进样量进行调整。
进一步地，当以相应调整方式对所述液相色谱检测参数调整完成时，对硫酸软骨素钠含量进行二次判定，若硫酸软骨素钠含量不达标，则确定对相应补偿方式的优化。
与现有技术相比，本发明的有益效果在于，本发明通过设定特定的色谱检测条件，将通过研磨后的待检测样品制备的若干组供试品溶液和标准溶液通过液相色谱仪检测，并根据检测结果确定硫酸软骨素含量是否达标，并在不达标情况下对检测过程调整，以进一步确定硫酸软骨素钠含量，一方面实现对硫酸软骨素钠含量的检测，另一方面提高了对检测过程的控制精度。
进一步地，本发明通过初步对供试品溶液和标准溶液过滤后的滤膜进行精密称重，从而初步确定供试品溶液浓度是否达标，以使在确定不达标情况下对待检测样品进行质量补偿，从而进一步提高了对检测过程的控制精度。
进一步地，本发明通过对质量补偿完成的检测结果进行判定，并在判定结果为硫酸软骨素钠含量不达标情况下对检测参数进行调整，并确定调整检测参数后的硫酸软骨素钠含量的达标情况，并当硫酸软骨素钠含量仍不达标时，对待测样本的质量补偿进行优化，进一步提高了对检测过程的控制精度，保证了硫酸软骨素钠含量检测的准确性。
附图说明
图1为本发明实施例基于液相色谱的硫酸软骨素钠含量检测方法的流程图；
图2为本发明实施例第1组供试品的液相色谱图；
图3为本发明实施例第1组对照品的液相色谱图；
图4为本发明实施例第2组供试品的液相色谱图；
图5为本发明实施例第2组对照品的液相色谱图；
图6为本发明实施例第3组供试品的液相色谱图；
图7为本发明实施例第3组对照品的液相色谱图。
具体实施方式
为了使本发明的目的和优点更加清楚明白，下面结合实施例对本发明作进一步描述；应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用于解释本发明，并不用于限定本发明。
下面参照附图来描述本发明的优选实施方式。本领域技术人员应当理解的是，这些实施方式仅仅用于解释本发明的技术原理，并非在限制本发明的保护范围。
需要说明的是，在本发明的描述中，术语“上”、“下”、“左”、“右”、“内”、“外”等指示的方向或位置关系的术语是基于附图所示的方向或位置关系，这仅仅是为了便于描述，而不是指示或暗示所述装置或元件必须具有特定的方位、以特定的方位构造和操作，因此不能理解为对本发明的限制。
此外，还需要说明的是，在本发明的描述中，除非另有明确的规定和限定，术语“安装”、“相连”、“连接”应做广义理解，例如，可以是固定连接，也可以是可拆卸连接，或一体地连接；可以是机械连接，也可以是电连接；可以是直接相连，也可以通过中间媒介间接相连，可以是两个元件内部的连通。对于本领域技术人员而言，可根据具体情况理解上述术语在本发明中的具体含义。
请参阅图1所示，其为本发明实施例基于液相色谱的硫酸软骨素钠含量检测方法的流程图。
本发明实施例基于液相色谱的硫酸软骨素钠含量检测方法，包括：
步骤S1、制备磷酸缓冲液
量取800mL水，分别加入磷酸80mL、三乙胺100mL，加水定容至1000mL，混匀即得磷酸缓冲液；
步骤S2、制备流动相
称取0.5g辛烷磺酸钠，加水800mL溶解，分别加入磷酸缓冲液5mL、乙腈40mL，加水定容至1000mL，混匀即得流动相；
步骤S3、设定色谱条件
采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，将所述流动相经Φ0.45um的微孔滤膜过滤后，超声脱气，设定检测波长为195nm、流速为0.60mL/min、进样量20μl；
步骤S4、制备标准溶液
称取预设质量的经105℃干燥4小时后硫酸软骨素对照品，置入100mL瓶中，加80mL的水，超声振荡溶解，然后加水定容至100mL，摇匀，经Φ0.45μm微孔滤膜过滤即得标准溶液；
步骤S5、制备供试品溶液
称取经研磨成粉末状的预设质量的待检测样品，置入100mL量瓶中，加80mL的水，超声振荡溶解，然后加水定容至100mL，经Φ0.45μm微孔滤膜过滤后即得供试品溶液；
步骤S6、液相色谱检测
分别量取若干组所述供试品溶液20u l和标准溶液20u l，然后分别通过液相色谱仪进行检测以确定供试品硫酸软骨素钠含量。
具体而言，在所述步骤S6中，当确定供试品硫酸软骨素钠含量时，通过以下公式计算，设定：
其中，AS为样品的峰面积，AR为对照品的峰面积，MS为待检测样品的质量，MR为对照品的质量，X为对照品含量。
具体而言，在所述步骤S5中，当制备所述供试品溶液完成时，将制备所述供试品溶液的微孔滤膜与制备所述标准溶液的微孔滤膜经烘箱烘干预设时长T后，分别称重，并计算质量差值，并将该质量差值与标准质量差值进行比对以确定所述供试品溶液浓度是否达标；
当所述质量差值小于等于标准质量差值时，则确定所述供试品溶液浓度达标；
当所述质量差值大于标准质量差值时，则确定所述供试品溶液浓度不达标。
本发明实施例中，标准质量差值的取值为0.05g。
具体而言，当确定所述供试品溶液浓度不达标时，计算所述质量差值与标准质量差值的比值，并根据该比值与预设比值的比对结果确定待测样品质量的补偿方式；
当所述比值小于等于预设比值时，则确定以第一补偿方式对待测样品进行质量补偿；
当所述比值大于预设比值时，则确定以第二补偿方式对待测样品进行质量补偿。
本发明实施例中，预设比值的取值为2，但上述取值并不限于此，本领域技术人员也可根据需要进行预设比值的选取。
具体而言，当确定以第一补偿方式对待测样本进行质量补偿时，计算第一补偿系数以对所述待测样品进行质量补偿，设定：
其中，K1为第一补偿系数，B0为预设比值，B为所述比值。
具体而言，当确定以第二补偿方式对待测样本进行质量补偿时，计算第二补偿系数以对待测样品进行质量补偿，设定：
K2＝1+B/B0(3)
其中，K2为第二补偿系数，B0为预设比值，B为所述比值。
具体而言，当对所述待测样本的质量补偿完成时，根据所述公式(1)计算所述硫酸软骨素钠含量，并根据硫酸软骨素钠含量与标准含量进行比对，以根据比对结果确定硫酸软骨素钠含量是否达标；
若所述硫酸软骨素钠含量小于标准含量，则确定所述硫酸软骨素钠含量不达标；
若所述硫酸软骨素钠含量大于等于标准含量，则确定所述硫酸软骨素钠含量达标。
具体而言，当确定所述硫酸软骨素钠含量不达标时，计算所述硫酸软骨素钠含量与标准含量的含量差值，并根据含量差值与预设含量差值的比对结果确定对液相色谱检测参数的调整方式；
若含量差值小于等于预设含量差值，则确定以第一调整方式对所述液相色谱检测参数进行调整；
若含量差值大于预设含量差值，则确定以第二调整方式对所述液相色谱检测参数进行调整。
具体而言，当确定以第一调整方式对所述液相色谱检测参数调整时，通过修正系数对所述检测波长进行调整，并将调整后的进样量设置为Yx，设定Yx＝Y×X，其中，Yx为调整后的进样量，Y为所述进样量，Y为修正系数。
本发明实施例中，所述调节系数的取值为1～1.3，优选地，本发明实施例所述调节系数的取值为1.2。
具体而言，当确定以第二调整方式对所述液相色谱检测参数调整时，通过调节系数对所述进样量进行调整，并将调整后的进样量设置为Jt，设定Jt＝J×K，其中，Jt为调整后的进样量，J为所述进样量，K为调节系数。
本发明实施例中，所述调节系数的取值为1～2，优选地，本发明实施例所述调节系数的取值为1.5。
具体而言，当以相应调整方式对所述液相色谱检测参数调整完成时，对硫酸软骨素钠含量进行二次判定，若硫酸软骨素钠含量不达标，则确定对相应补偿方式进行优化。
具体而言，当确定对相应补偿方式进行优化时，确定以优化系数对相应补偿方式下的补偿系数进行优化，并将优化后的补偿系数设置为K3，设定K3＝Ki×e，其中，Ki为第i补偿系数，e为优化系数。
本发明实施例中，所述优化系数的取值为1～1.2，优选地，上述优化系数取值为1.1。
请参阅图2-图7，图2为本发明实施例第1组供试品的液相色谱图，图3为本发明实施例第1组对照品的液相色谱图，图4为本发明实施例第2组供试品的液相色谱图，图5为本发明实施例第2组对照品的液相色谱图，图6为本发明实施例第3组供试品的液相色谱图，图7为本发明实施例第3组对照品的液相色谱图。
实施例一、
分别称取0.5g、0.65g和0.8g的对照品和待检测样品，通过步骤S4制备标准溶液和步骤S5制备供试品溶液的方法制备得到3组标准溶液和供试品溶液；
选取色谱柱：C18(5μm*4.6mm*250mm)，流动相：1000mL，检测波长为195nm，流速为0.60mL/min、进样量20μl条件下，采用外标法定量；
设置等度洗脱条件为：流速0.60mL/min；
3组标准溶液和供试品溶液的色谱结果如下表：
将上述数据代入公式(1)中计算得到硫酸软骨素钠含量。
至此，已经结合附图所示的优选实施方式描述了本发明的技术方案，但是，本领域技术人员容易理解的是，本发明的保护范围显然不局限于这些具体实施方式。在不偏离本发明的原理的前提下，本领域技术人员可以对相关技术特征做出等同的更改或替换，这些更改或替换之后的技术方案都将落入本发明的保护范围之内。
以上所述仅为本发明的优选实施例，并不用于限制本发明；对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (10)
1.一种基于液相色谱的硫酸软骨素钠含量检测方法，其特征在于，包括：
步骤S1、制备磷酸缓冲液
量取800mL水，分别加入磷酸80mL、三乙胺100mL，加水定容至1000mL，混匀即得磷酸缓冲液；
步骤S2、制备流动相
称取0.5g辛烷磺酸钠，加水800mL溶解，分别加入磷酸缓冲液5mL、乙腈40mL，加水定容至1000mL，混匀即得流动相；
步骤S3、设定色谱条件
采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，将所述流动相经Φ0.45um的微孔滤膜过滤后，超声脱气，设定检测波长为195nm、流速为0.60mL/min、进样量20μl；
步骤S4、制备标准溶液
称取预设质量的经105℃干燥4小时后硫酸软骨素对照品，置入100mL瓶中，加80mL的水，超声振荡溶解，然后加水定容至1000mL，摇匀，经Φ0.45μm微孔滤膜过滤即得标准溶液；
步骤S5、制备供试品溶液
称取经研磨成粉末状的预设质量的待检测样品，置入100mL量瓶中，加80mL的水，超声振荡溶解，然后加水定容至100mL，经Φ0.45μm微孔滤膜过滤后即得供试品溶液；
步骤S6、液相色谱检测
分别量取若干组所述供试品溶液20μl和标准溶液20μl，然后分别通过液相色谱仪进行检测以确定供试品硫酸软骨素钠含量。
2.根据权利要求1所述的基于液相色谱的硫酸软骨素钠含量检测方法，其特征在于，在所述步骤S6中，当确定供试品硫酸软骨素钠含量时，通过以下公式计算，设定：
其中，AS为样品的峰面积，AR为对照品的峰面积，MS为样品的质量，MR为对照品的质量，X为对照品含量。
3.根据权利要求2所述的基于液相色谱的硫酸软骨素钠含量检测方法，其特征在于，在所述步骤S5中，当制备所述供试品溶液完成时，将制备所述供试品溶液的微孔滤膜与制备所述标准溶液的微孔滤膜经烘箱烘干预设时长T后，分别称重，并计算质量差值，并将该质量差值与标准质量差值进行比对以确定所述供试品溶液浓度是否达标，并当所述质量差值大于标准质量差值时确定所述供试品溶液浓度不达标。
4.根据权利要求3所述的基于液相色谱的硫酸软骨素钠含量检测方法，其特征在于，当确定所述供试品溶液浓度不达标时，计算所述质量差值与标准质量差值的比值，并根据该比值与预设比值的比对结果确定对待测样品质量的补偿。
5.根据权利要求4所述的基于液相色谱的硫酸软骨素钠含量检测方法，其特征在于，所述确定对待测样品质量的补偿包括以第一补偿系数对所述待测样品进行质量补偿，所述第一补偿系数由所述比值与预设比值确定。
6.根据权利要求5所述的基于液相色谱的硫酸软骨素钠含量检测方法，其特征在于，所述确定对待测样品质量的补偿包括以第二补偿系数对所述待测样品进行质量补偿，所述第二补偿系数由所述比值与预设比值确定。
7.根据权利要求6所述的基于液相色谱的硫酸软骨素钠含量检测方法，其特征在于，当对所述待测样本的质量补偿完成时，根据所述公式(1)计算所述硫酸软骨素钠含量，并根据硫酸软骨素钠含量与标准含量进行比对，以根据比对结果确定硫酸软骨素钠含量，当确定所述硫酸软骨素钠含量不达标时，计算所述硫酸软骨素钠含量与标准含量的含量差值，并根据含量差值与预设含量差值的比对结果确定对液相色谱检测参数的调整。
8.根据权利要求7所述的基于液相色谱的硫酸软骨素钠含量检测方法，其特征在于，所述确定对液相色谱检测参数的调整包括以第一调整方式对所述液相色谱检测参数中的检测波长进行调整。
9.根据权利要求8所述的基于液相色谱的硫酸软骨素钠含量检测方法，其特征在于，所述确定对液相色谱检测参数的调整包括以第一调整方式对所述液相色谱检测参数中的进样量进行调整。
10.根据权利要求9所述的基于液相色谱的硫酸软骨素钠含量检测方法，其特征在于，当以相应调整方式对所述液相色谱检测参数调整完成时，对硫酸软骨素钠含量进行二次判定，若硫酸软骨素钠含量不达标，则确定对相应补偿方式的优化。
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| CN107941963A (zh) * | 2017-12-29 | 2018-04-20 | 珍奥集团股份有限公司 | 一种增加骨密度保健食品中盐酸氨基葡萄糖与硫酸软骨素的含量测定方法 |
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