CN1182366A - 一氧化氮的供体或者一氧化氮的抑制剂调节子宫颈扩张和伸展的用途 - Google Patents

Abstract

本发明描述了应用一氧化氮的供体和/或底物或者一氧化氮的抑制剂调节子宫颈的扩张和伸展。可以应用(a)至少一个一氧化氮供体和/或底物制备用于诱导宫颈成熟的由子宫颈内或者阴道内局部给予的药物或者(b)至少一个一氧化氮抑制剂制备用于治疗子宫颈机能不全或者早产的由子宫颈内或者阴道内局部给予的药物。

Description

一氧化氮的供体或者一氧化氮的抑制剂调节子宫颈扩张和伸展的用途

本发明涉及应用一氧化氮的供体和/或底物或者一氧化氮的抑制剂调节子宫颈的扩张和伸展。

分娩(胎儿从子宫内排出体外)需要子宫肌层、子宫平滑肌的收缩，和子宫颈周围组织的软化，使子宫颈能够伸展和扩张到足够程度以便让胎儿排出体外。这种软化被称为″成熟″。

目前优选的使子宫颈成熟的方法是应用前列腺素E₂、把它做成一种阴道用凝胶或者片剂或者做成一种放置在子宫中的凝胶。对应用前列腺素E₂的一个担心是有可能过度刺激子宫，这将导致在子宫颈成熟以前，也就是在舒适或者安全的分娩之前，子宫肌层就超强收缩。理想的制剂将能软化子宫颈、使子宫颈管消失而不引起子宫肌层收缩。这样随后的子宫肌层收缩(如果有必要可用小剂量的前列腺素诱导)能在最小阻力的情况下把婴儿分娩出。有足够的动物实验资料表明抗孕激素药如RU486可以满足这些要求，但该药的问题是它有相关的抗糖皮质激素的活性，而这种活性对胎儿也许是不利的。

在生物学和医学中最令人兴奋的近期进展之一是发现了一氧化氮由内皮细胞产生，它参与调节血管紧张性、血小板聚集、神经传导和免疫反应(Furchgott and Zawadzki，1980；Moncada，Palmer and Higgs，1991；Ignarro，1991)，一氧化氮是一个重要的肌肉平滑肌舒张介质(Montada，Palmer and Higgs，1991)，以前被称为EDRF(内皮衍生舒张因子)(Furchgott and Zawadzki，1980；Moncada，Palmer and Higgs，1991)。

一氧化氮是在至少不同类型的黄素酶(一氧化氮合成酶)的作用下，由L-精氨酸的胍基氮氧化脱氨而合成的(Montada，Palmer and Higgs，1991)。

一氧化氮也可以通过应用不同的一氧化氮供体，如硝普钠、硝酸甘油、甘油三硝酸酯、SIN-1、单硝酸并山梨醇酯、二硝酸异山梨醇酯等产生。

有实验表明，L-精氨酸的同系物：NG-硝基-L-精氨酸甲基酯(L-NAME)、NG-单乙基-L-精氨酸(LMMA)、N-亚氨基乙基-L-鸟氨酸(L-NIO)、L-单甲基-精氨酸(L-NNMA)、L-NG-甲基精氨酸(L-NMA)、Nw-硝基-L-精氨酸(L-NA)和氨基胍可竞争性地抑制一氧化氮的合成。

非妊娠的豚鼠给予L-NAME处理导致子宫收缩增强。因此，刺激子宫收缩的一氧化氮合成酶的抑制表明一氧化氮的强直性释放可维持子宫处于一种静息状态。相似地，妊娠的豚鼠给予L-NAME处理可诱导早产。另一方面，大鼠子宫条用L-精氨酸体外处理可抑制它的收缩。这些研究表明由子宫产生的一氧化氮可抑制子宫的收缩以及一氧化氮合成的阻滞可导致妊娠和非妊娠动物肌肉的收缩增强。因此，一氧化氮的底物或者供体在防止子宫的收缩方面具有治疗使用价值而一氧化氮的抑制剂在刺激子宫的收缩方面是有效的。

在用恒河猴的初步实验的基础上，Jennings等(The Journal ofMaternal Fetal Medicine 2：170-175(1993))已提出在妊娠期间一氧化氮在子宫的静息状态中也许是重要的，外源性的一氧化氮在控制早产方面也许是有用的。

Natuzzi等证明一氧化氮合成酶(NOS)在妊娠大鼠子宫内的多种结构中具有活性(Biochem.and Biophys.Res.Commun.，194，NO.1，(1993))，因此他们得出结论，NOS存在于妊娠大鼠子宫的多种结构中。分娩时NOS活性降低，这提示在妊娠期间一氧化氮可能有助于子宫有收缩力静息状态的维持。

形态学研究也已显示NOS(NADPH-硫锌酰胺脱氢酶，检测所有的一氧化氮合成酶的同工酶的一种组织化学方法)和一氧化氮代谢酶如超氧化物岐化酶在子宫中的存在(Papka et al.，Neuroscience Letters 147(1992)；Shiotani et al.，Acta Histochem Cytochem.26：57-64(1993))。

现已发现妊娠豚鼠在交配后第48～49天(足孕期67+3天)皮下给予L-NAME可出乎预料地导致子宫颈的伸展和扩张减小。

妊娠大鼠分娩时比妊娠18天时子宫颈产生的一氧化氮明显增加(参数，体外检测亚硝酸盐和硝酸盐的释放)。相反在大鼠妊娠的过程中子宫(子宫肌)的一氧化氮的产生却减少。抗孕激素药onapristone增加妊娠大鼠子宫颈中一氧化氮的产生还需进一步证实，但它对子宫(子宫肌层)的一氧化氮的产生具有抑制效应。用相同剂量的onapristone能诱导大鼠的子宫颈成熟。

这些发现表明

●妊娠豚鼠给予一氧化氮的抑制剂例如L-NAME可抑制宫颈成熟但可刺激子宫的收缩；

●妊娠子宫(子宫肌层)中一氧化氮的产生(一氧化氮对子宫肌层具有舒张效应)在妊娠过程期间减少，但在正常和抗孕激素剂诱导的分娩期间子宫颈中一氧化氮的产量却增加；

●一氧化氮的抑制剂如L-NAME对子宫的收缩性和子宫颈的不同效应是由于一氧化氮系统的不同作用或者在子宫肌层和子宫颈中存在不同类型的同工酶所致；

●一氧化氮系统在子宫颈的控制方面起着重要的作用，在子宫颈的成熟过程期间，一氧化氮的产生增加。

因此，可以作如下结论：

(a)一氧化氮的供体和/或底物的局部应用可用于诱导子宫颈成熟或者

(b)一氧化氮的抑制剂的局部应用可用于防止或者抑制子宫颈成熟，例如用于子宫颈机能不全(宫颈成熟太早)或者早产的治疗。

所以，本发明涉及应用一氧化氮的供体和/或底物或者一氧化氮抑制剂制备调节子宫颈的扩张和/或伸展的药物。

本发明涉及以下用途：

(a)应用至少一个一氧化氮的供体制备用于诱导宫颈成熟的局部给药药物(例如子宫颈内或者阴道内)或者

(b)应用至少一个一氧化氮的抑制剂制备用于抑制宫颈成熟从而治疗子宫颈机能不全或者早产的局部给药药物(例如子宫颈内或者阴道内)。

与本发明目的相适合的(a)一氧化氮的供体和/或底物或者(b)一氧化氮的抑制剂是本领域熟练技术人员都知道的具有所需特性的全部化合物。在“相关技术的描述”中提到的化合物是优选的。

一氧化氮的供体和/或底物(a)能进一步地和(i)至少一种抗孕激素剂、前列腺素和/或细胞因子联合应用。

抗孕激素剂的例子有：onapristone(11β-〔4-(二甲氨基)苯基〕-17α-羟基-17β-(3-羟丙基)-13α-雌甾-4，9-二烯-3-酮)、RU486(11β-4-(二甲氨基)苯基〕-17β-羟基-17α-(1-丙炔基)雌甾-4，9-二烯-3-酮)、(z)-11β-〔4-(二甲氨基)苯基〕-17β-羟基-17α-(3-羟基-1-丙烯基)雌甾-4-烯-3-酮(EP-A0404283)、11β-(4-乙酰苯基)-17β-羟基-17α-(1-丙炔基)雌甾-4，9-二烯-3-酮(EP-A0190759)、4′，5′-二氢-11β-〔4-(二甲氨基)苯基〕-6β-甲基螺环〔雌甾-4，9-二烯-17β，2′(3′H)-呋喃〕-3-酮、4′，5′-二氢-11β-〔4-(二甲氨基)苯基〕-7β-甲基螺环〔雌甾-4，9-二烯-17β，2′(3′H)呋喃〕-3-酮、11β-(4-乙酰苯基-19，24-二降-17，23-环氧-17α-胆汁-4，9，20-三烯-3-酮、(E)-11β-〔4-〔〔(乙酰氧基)亚氨基〕甲基〕苯基〕-17β-甲氧基-17α-(甲氧甲基)雌甾-4，9-二烯-3-酮、(E)-11β-〔4-〔〔〔(乙氧羰基)氧〕亚氨基〕甲基〕苯基〕-17β-甲氧基-17α-(甲氧甲基)雌甾-4，9-二烯-3-酮和熟练技术人员非常了解的其它许多具有竞争性拮抗黄体酮活性的化合物。

例如前列腺素前列磺酮(PGE₂)或者前列甲酯可被应用。

细胞因子中最重要的代表性物质是白细胞介素-8或者白细胞介素-1β

上面列举的这些化合物不应被认为是排除其它的化合物。

一氧化氮的抑制剂(b)可进一步和(ii)至少一种孕激素和/或环氧合酶抑制剂(例如COX-1-和COX-2-抑制剂)联合应用。

对于孕激素，天然产生的黄体酮为优选，但也可应用本领域技术人员知道的可用于口服避孕药的许多合成的孕激素中的一个或者更多，例如左旋18-甲基炔诺酮、环丙氯地孕酮、甲地妊娠素、drospirenone、甲烯甲炔诺、3-酮基-甲烯甲炔诺、地诺孕素等。

环氧合酶抑制剂可以阿司匹林(COX-1和COX-2抑制剂)为例。

COX-2抑制剂的其它例子可见Robert Aslanian，Nicholas I.Carruthers，James J.Kaminski；Cyclooxygenase 2：A Novel Targetfor Therapeutic Intervention，EXP.Opin.Invest.Drugs，1994，3(12)，1323-1325中所述，例如化合物Sc-58125(GD Searle)、DuP-697flusolide[6-(2，4-二氟苯氧基)-5-甲磺酰氨基-1-2，3-二氢-1-茚酮〕、Sc-57666(GD Searle)、L-745 337(Merck Frosst)、NS-398(Monsanto)。

一方面(a)本发明提供了将本发明中化合物用于分娩和流产。在妊娠的情况下，子宫颈被预先处理。妊娠期间的各种激素使子宫颈发生变化，然后子宫颈倾向于对其它的刺激物作出有效的应答。

本发明还进一步提供了将本发明的(a)中包括的各种化合物用于外科手术和诊断。因此，本发明的(a)中的化合物能选择性地和(i)中提到的各种化合物联合应用，制备用于以下适应症的药物：

(A)足孕分娩的诱导(正常出生的时间，可与用催产素或者类似的药物的系列处理联合应用)，

(B)与病理的怀孕有关的分娩诱导(例如致死的畸形)；(优选第二个3个月(中孕)流产)，

(C)与子宫内死胎有关的分娩诱导，

(D)流产的诱导(优选第一个3个月(早孕)流产)

(E)早产的诱导，

(F)由于子宫颈难产而造成过期分娩的处理，

(G)非怀孕妇女或者怀孕妇女的宫颈成熟的诱导以帮助外科手术或诊断过程，和

(H)对将进行体外受精的妇女的宫颈成熟的诱导。

另一方面(b)本发明提供了本发明的这些化合物在需要防止太早宫颈成熟或者子宫颈必须保持刚性的适应症中的用途。因此，本发明(b)中的化合物可选择性地与(ii)提到的各种化合物联合应用，制备用于以下适应症的药物：

(I)子宫颈机能不全的治疗和

(K)有危险的早产的治疗

原则上，这些化合物可用于妇女和非人的雌性动物。人是这种治疗的优选群。

一氧化氮的供体和/或底物(a)或者一氧化氮的抑制剂(b)可采用能使药物到达子宫颈的任何方式给药，包括直接或者间接的。因此，可以很方便地在阴道内或者直接送到子宫颈应用，例如典型的是做成一种凝胶或霜剂。也可以把它注入子宫颈组织或者用一钝针注入子宫颈管。也可以在羊膜腔外应用，即用一导管在子宫壁和羊膜腔之间应用。

优选的制剂是一种凝胶或者霜剂，但可把它制成可软化的胶囊、脂质体或者一种缓释制剂，或者做成一种水溶液，例如一种生理盐水或者含蛋白质的溶液。这些制剂用本领域中等程度技术人员知道的方法就能配制成。

如果想要联合应用在(a)和(i)中提到的化合物，可以把抗孕激素药配制成全身或者局部给药的制剂。

前列腺素和细胞因子最好是配制成局部应用的制剂。

如果想要联合应用在(b)和(ii)中提到的化合物，可以把(ii)中的化合物配制成局部或者全身应用的制剂。

在(i)和(ii)中的化合物的制剂可以用本技术领域中熟练技术人员知道的方法配制成。

本发明的(a)中的化合物显示有诱导宫颈成熟的药理活性，因此，它们有可能作为一种药物使用。

本发明的(b)中的化合物显示有防止宫颈成熟的药理活性，因此，它们有可能作为一种药物使用。

宫颈成熟的测定在实施例1中加以描述。

当硝普钠和其它的一氧化氮的供体以浓度为大约0.03mM-100mM(1.8μg-6mg/应用)局部给予妊娠豚鼠时，显示对宫颈成熟有作用。当然，对上面从(A)到(F)中提到的这些适应症，合适的剂量将依一些因素而变化，例如所选用的本发明的化合物、宿主、给药方式和被处理情况的性质和严重性，但是，一般来说，动物局部使用浓度为0.03～100mM之间时将能获得满意的结果，优选浓度大约10mM。

本发明化合物可在子宫颈最后成熟前6小时至48小时给药。宫颈成熟可以通过应用有催产素活性的化合物诱导分娩的方式进行。本发明的化合物可以以几小时或者一天为间隔给予一个或多个剂量。这些化合物可以通过任何常规途径给药，特别是以凝胶，软膏或者局部注射剂(浓度大约为0.03～100mM)的形式给予。

当硝普钠和其它的一氧化氮的供体以浓度为大约0.03mM～100mM(1.8μg-6mmg/应用)给予非妊娠的雌性豚鼠时显示对宫颈成熟有作用。对上面从(G)至(H)中提到的适应症，合适的剂量将依一些因素而发生变化，例如所选用的本发明的化合物、宿主、给药方式和被处理情况的性质和严重性。当然，一般来说，当剂量为大约0.03mM-100mM(1.8μg-6mmg/应用)时，在动物上将能获得满意的结果，优选的浓度为大约10mM。

这些化合物可以在子宫颈最终成熟前24小时或者48小时给予。这些化合物可以以几小时或者一天为间隔给予一个或者多个剂量。本发明的这些化合物可以通过任何常规途径给予，特别是以凝胶，软膏或者局部注射剂的形式给予。

典型的一氧化氮-底物和一氧化氮-供体的人用剂量范围举例如下：

L-精氨酸           500mg-10g/天

硝普钠         范围500-2000μg/kg/天

硝酸甘油            0.5-10mg/天

单硝酸异山梨醇酯    10-100mg/天

二硝酸异山梨醇酯    10-100mg/天

其它的一氧化氮-供体或者一氧化氮-底物是以生物等效量应用。

典型的一氧化氮的抑制剂的剂量范围举例如下：

L-NAME   1至50mg/kg/天

L-NIO    1至50mg/kg/天

L-NA     1至50mg/kg/天

L-MMA    1至50mg/kg/天

L-NG     1至50mg/kg/天

L-NMA    1至50mg/kg/天

氨基胍   0.1至100mg/kg/天

其它的一氧化氮的抑制剂是以生物等效量应用。

RU486的剂量范围：  25-600mg/天，口服。

其它的抗孕激素剂是以生物等效量应用。

前列磺酮剂量范围：100-1000μg/天，肌肉或者静脉注射。

其它的前列腺素如PGE₂是以生物等效量应用。

前列腺素也可以凝胶在子宫颈内、以凝胶在阴道内或者片剂局部应用。

COX-2抑制剂的剂量范围：0.1-100mg/kg/天

IL-8的剂量范围：100ng-500μg/天；IL-1β的剂量范围：100ng-500μg/天。

上面提到的那些化合物以外的其它化合物的生物等效量可以用实施例中公开的对子宫颈引起类似效应的量以及在其它类似的条件下特殊公开的量的测定方法进行测定。

附图支持本发明的结果，其说明如下：

图1表示硝普钠对妊娠豚鼠宫颈成熟的效应。动物按照实施例1中描述的方法进行处理。上图表示在伸展性测定期间的最初扩张(用毫米表示)；下图证明了对伸展性(回归曲线的斜率)的效应。数据用箱图来表示。垂直线表示从最低量到最高量的范围。箱的高度、水平线和星号分别描述内四分范围、中位数和平均数的值。

图2表示L-NAME对妊娠豚鼠子宫颈的效应。上图表示在伸展性测定期间的最初扩张(用毫米表示)；下图证明了对伸展性(回归曲线的斜率[N/mm])的效应。数据用如图1描述的箱图表示。

图3至图5表示大鼠给予L-NAME(500mg/只)或者与未给予时子宫颈的伸展性。

图6表示在给予L-NAME治疗期间，分娩持续时间和幼畜出生间隔(幼畜出生之间的时间)的延长。

图7至图9表示在正常子宫颈扩张期间

，给予黄体酮 ，抗孕激素

和LPS

后的一氧化氮的产量。

实施例1

一氧化氮对妊娠豚鼠子宫颈成熟的影响

(a)一般部分：

子宫颈成熟的测定：

在豚鼠交配后的第44天取出整个子宫颈。伸展性的研究是用改进的DOWNING，S.J.and SHERWOOD，O.D.(1985)Endocrinology 116：1215-1220的方法进行的。

分离出的子宫颈被安装在插入子宫颈管的两钩之间。一个钩固定，向上移动另外一个钩的同时用1Hz的抽样率测定张力和移位。首先每个子宫颈被延伸直到张力达到50mN为止。记录下相关的移位，这个移位将被称为最初扩张。因此，子宫颈的原始的内周是最初扩张的两倍。

通过移动钩0.1毫米使子宫颈被延伸，然后把钩固定，让子宫颈松驰2分钟。重复这种操作直到子宫颈破裂或者至少已经达到了产生点，即负荷的包膜对时间曲线变成了非线性(参见CONRAD，J.T.and UELAND，K.(1979)Am J Obste Gynecol.133：11-13)

(b)分析：

为了测定子宫颈的伸展性，我们研究了张力对伸直率的曲线。这条曲线是由每个延伸阶段采用的最大张力和相应的伸直率得到的。它被定义为用最初扩张除移位。曲线线性部分的回归直线的斜率被用来定量处理对子宫颈伸展性的效应。斜率减小表示子宫颈伸展性增强(成熟效应)。

(c)特殊的部分：

交配后第42天的妊娠豚鼠(每组动物数为6)分别在第42天和第43天由子宫颈内给予含0.03mM硝普钠的凝胶200μl(3％的羟基纤维素)，一天2次(上午9：00和下午3：00)。交配后第44天测定子宫颈的伸展性(参数：回归直线的斜率，原始扩张)。

凝胶用下述方法给予：把阴道窥器引入阴道后，用大约100mm长的钝针把含有或者不含有SNP的纤维素凝胶200μl注入子宫颈管。一部分凝胶沿子宫颈管移动到子宫颈管外口发挥作用。这种凝胶有以下制剂：它包括含3％(w/v)的羟乙基纤维素的于磷酸盐缓冲生理盐水中的本发明的化合物(参见L.HUDSON and F.C.HAY(1980)Practical Immunology，sec.edition)。

对照组给予于磷酸盐缓冲生理盐水中的含3％(w/v)羟乙基纤维素的凝胶。

子宫颈的力学特性用上面描述的方法进行测定。这种方法可在等体积条件下对子宫颈的扩张和子宫颈的伸展性进行定量。

(d)结果：

实施例1的结果表示在图1中。上图表示回归直线的斜率，该斜率是子宫颈的伸展性的参数。下图表明了用毫米表示的子宫颈的扩张。

这些结果证明由局部给予一氧化氮的供体硝普钠(SNP)后能极大地促进妊娠豚鼠的子宫颈成熟。

实施例2：

硝普钠对妊娠豚鼠子宫颈形态学的影响。

在交配后的第42～43天由子宫颈内给予含3％羟基纤维素的于磷酸盐缓冲液0.2ml中的硝普钠(0.1M)，每天两次。交配后第44天用形态学的评价方法测定其效应。对照组动物给予赋形剂。所有用于形态学评价的子宫颈都是在通过血管灌注原位固定后获得的。灌注过程是在交配后第50天上午9～10点由肌肉注射戊巴比妥(60mg/ml)1.5ml引起的麻醉状态下进行的。把一引流管插入位于肾动脉分支下的腹主动脉中，用pH7.4的二甲胂酸盐缓冲液灌注60-90秒，然后用2.5％的戊二醛在pH7.4的二甲胂酸盐缓冲液中在80～100厘米水柱压力下固定6～10分钟。切割和清除子宫颈的邻近组织，然后在4℃下用相同的固定液固定。用缓冲液冲洗后，所需组织用冷的1％O_sO₄二甲胂酸盐缓冲液后固定24小时，用一梯度系列的乙醇脱水，用Araldite环氧树脂包埋。从每一个样本上切下横向半薄观察切片，厚度为1～2μm，用氨基甲苯蓝硼酸钠染色后用光学显微镜进行观察。这样使得能够观察整个子宫颈，因此提供了子宫颈中各种细胞群的分布全貌。此后，从横切子宫颈块上修剪下一些小体积的样本(1～2mm³)，在Reichert O_mU₃切片机上用玻璃刀或者钻石刀切成超薄片，然后安装在单槽包裹Formavar的铜质滤线栅上。用乙酸双氧铀和醋酸铅染色后，用Zeiss EM-10电子显微镜在60-80 kW下进行观察。

电子显微镜研究揭示一个明显的宫颈成熟伴随着胶原纤维的溶解、基质水肿、动脉扩张和巨噬细胞、淋巴细胞和粒细胞的浸润。同时也存在许多肥大细胞。SNP对形态学的影响与在足孕正常宫颈成熟期间或者在用抗孕激素剂Onapristone或者细胞因子IL-8治疗后观察到的相类似。

实施例3：

              L-NAME对妊娠豚鼠子宫颈的影响

妊娠豚鼠在交配后第48天和第49天皮下给予L-NAME(12.5mg/天/只)，在交配后第50天，即在给药开始后的第2天测定子宫颈的伸展性和扩张。测定是按照实施例1描述的方法进行。本实施例的结果表示在图2中。最初扩张和子宫颈的伸展性(斜率增大)与对照组相比都下降。

实施例4：

           L-NAME对妊娠豚鼠分娩的影响

在交配后第50天(孕期＝交配后67+2天)皮下植入含有L-NAME(组1：7毫克；组2：12.5和组3：25毫克/只/天)的微型渗透泵。对照组给予赋形剂：

组3中的全部动物(5/5)和组2中的3只动物(3/5)在给药的8天之内早产(在交配后第65天之前)。

这个研究表明L-NAME是通过子宫收缩的激活引起豚鼠早产。当然，在给予L-NAME的动物上也可观察到持续数小时的过期分娩。这种现象是宫颈成熟不足的间接指征，这在交配后第50天通过利用子宫颈的伸展性测定进行的一个单独的实验中得到了证明(图2)。

实施例5：

               L-NAME对大鼠分娩的影响

基于如实施例4描述的一个类似实验的图6显示在给予妊娠大鼠L-NAME(50毫克/天)期间，分娩的持续时间和幼畜出生的间隔，即单个幼畜出生之间的时间明显延长。这清楚地表明一氧化氮的抑制剂可防止大鼠宫颈成熟。

实施例6：

大鼠在正常子宫颈扩张期间以及给予黄体酮、抗孕激素剂和LPS后一氧化氮的产生。

(a)方法

以体外测定的子宫颈和子宫组织中总的亚硝酸盐的累积表示的一氧化氮产生活性是用Yallampalli C，Garfield RE，Byam-Smith M(1993)：Nitric oxide inhibits uterine contractility during pregnancy but notduring delivery，Endocrinology 133：1899-1902中描述的方法评估的。简言之，从分娩的大鼠(妊娠22天至23天)，给予Onapristone的大鼠(在交配后第18天皮下给予10毫克)和在交配后第18至21天给予赋形剂的大鼠(对照)中获得的小片子宫颈或者子宫组织在含有或者不含有L-NAME的最低基本培养基中37℃孵育24小时。培养基中总的亚硝酸盐的含量用Griess试剂测定。

(b)结果

子宫(子宫肌层)组织中亚硝酸盐的产生：从分娩动物获得的子宫样品中的亚硝酸盐的产生与从妊娠18天的动物获得的相比极大地降低(Yallampalli et al.Loc，cit)。

子宫颈组织中亚硝酸盐的产生(图7)：从分娩大鼠获得的子宫颈中的一氧化氮的产生与在妊娠大鼠交配后第18至22天测定的相比显著增加。

Onapristone对子宫颈中一氧化氮产生的影响(图8)：在交配后第19天测定的一氧化氮的产量与对照组动物相比显著增加到自发分娩动物中可见的水平。

实施例7

       用一氧化氮的供体进行宫颈成熟的前诱导

一位怀孕的妇女(大约30岁，50-80公斤)，在其怀孕的第38周由于先兆子痫而被分类为需要诱导分娩，由子宫颈内给予浓度为0.01～0.1mM的硝普钠凝胶，一天2次，以期获得宫颈成熟。第二天用催产素静脉输注进行分娩诱导。

实施例8

       通过局部应用L-NAME治疗子宫颈机能不全

一位怀孕的妇女(大约30岁，50-80公斤)，在其怀孕的第26周显示子宫颈机能不全(子宫颈的扩张、子宫颈的软化)，由子宫颈内或者阴道内给予浓度为0.1～50毫克/毫升的L-NAME凝胶，一天2至3个剂量，直到子宫颈机能不全的症状改善为止。

Claims (22)

1.应用一氧化氮的供体和/或底物或者一氧化氮的抑制剂制备用于调节子宫颈的扩张和/或伸展的药物。

2.按照权利要求1，应用(a)至少一种一氧化氮供体和/或底物制备用于诱导宫颈成熟的由子宫颈内或者阴道内局部给予的药物，或者(b)至少一种一氧化氮抑制剂制备用于抑制宫颈成熟治疗子宫颈机能不全或者早产由子宫颈内或者阴道内局部给予的药物。

3.权利要求2(a)与至少一种抗孕激素剂、前列腺素和/或细胞因子联合应用。

4.权利要求2(b)与至少一种孕激素和/或环氧合酶抑制剂(COX-1和COX-2抑制剂)的联合应用。

5.权利要求2或3用于诱导足孕分娩的用途。

6.权利要求2或3用于诱导与病理的妊娠有关的分娩的用途。

7.权利要求2或3用于诱导与子宫内死胎有关的分娩的用途。

8.权利要求2或3用于诱导流产的用途。

9.权利要求2或3用于诱导早产的用途。

10.权利要求2或3用于过期分娩处理的用途。

11.权利要求2或3用于诱导非妊娠雌性或者妊娠雌性的宫颈成熟以协助外科手术或者诊断过程的用途。

12.权利要求2或3用于将进行体外受精处理的雌性的宫颈成熟的诱导的用途。

13.权利要求2或4用于治疗子宫颈机能不全的用途。

14.权利要求2或4用于治疗有危险的早产的用途。

15.权利要求2，用L-精氨酸、硝普钠、硝酸甘油、甘油三硝酸酯、SIN-1、单硝酸异山梨醇酯、二硝酸异山梨醇酯中的至少一个作为一氧化氮的底物和/或供体。

16.按照权利要求2，用NG-硝基-L-精氨酸甲基酯(L-NAME)、NG-单乙基-L-精氨酸(L-MMA)、N-亚氨基乙基-鸟氨酸(L-NIO)、L-单甲基-L-精氨酸(L-NNMA)、L-NG-甲基精氨酸(L-NMA)、Nw-硝基-L-精氨酸和氨基胍中的至少一个作为一氧化氮的抑制剂。

17.按照权利要求3，用Onapristone(11β-[4-(二甲氨基)苯基]-17α-羟基-17β-(3-羟丙基)-13α-雌甾-4，9-二烯-3-酮)、RU486(11β-[4-二甲氨基)苯基]-17β-羟基-17α-(1-丙炔基)雌甾-4， 9-二烯-3-酮)、(Z)-11β-[4-(二甲氨基)苯基)]-17β-羟基-17α-(3-羟基-1-丙烯基)雌甾-4-烯-3-酮(EP-A0404283)、11β-(4-乙酰苯基)-17β-羟基-17α-(1-丙炔基)雌甾-4，9-二烯-3-酮(EP-A0190759)、4’-5’-二氢-11β-[4-(二甲氨基)苯基]-6β-甲基螺环[雌甾-4，9-二烯-17β，2’(3’H)-呋喃]-3-酮、4’，5’-二氢-11β-[4-(二甲氨基)苯基]-7β-甲基螺环[雌甾-4，9-二烯-17β，2’(3’H)-呋喃]-3-酮、11β-(4-乙酰苯基)-19，24-二降-17，23-桥氧-17α-胆汁-4，9，20-三烯-3-酮、(E)-11β-[4-[[(乙酰基氧基)亚氨基]甲基]苯基]-17β-甲氧基-17α-(甲氧甲基)雌甾-4，9-二烯-3-酮、(E)-11β-〔4-〔〔〔(乙酯基)氧〕亚氨基〕甲基〕苯基〕-17β-甲氧基-17a-(甲氧甲基)雌甾-4，9-二烯-3-酮中的至少一个作为抗孕激素剂。

18.按照权利要求3，用PGE₂或者前列甲酯作为前列腺素。

19.按照权利要求3，用白细胞介素-8或者白细胞介素-1β作为细胞因子。

20.按照权利要求4，用黄体酮作为一个孕激素。

21.按照权利要求4，用阿司匹林作为环氧合酶的抑制剂。

22.按照权利要求4，用Flusolide作为COX-2的抑制剂。

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