CN118126847A - 球孢白僵菌xjwlmq-1及其在生物防治中的应用 - Google Patents

球孢白僵菌xjwlmq-1及其在生物防治中的应用 Download PDF

Info

Publication number
CN118126847A
CN118126847A CN202410553482.7A CN202410553482A CN118126847A CN 118126847 A CN118126847 A CN 118126847A CN 202410553482 A CN202410553482 A CN 202410553482A CN 118126847 A CN118126847 A CN 118126847A
Authority
CN
China
Prior art keywords
xjwlmq
strain
spore powder
beauveria bassiana
strains
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN202410553482.7A
Other languages
English (en)
Other versions
CN118126847B (zh
Inventor
王海鸿
王萌涵
王登杰
梁兴慧
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Institute of Plant Protection of CAAS
Original Assignee
Institute of Plant Protection of CAAS
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Institute of Plant Protection of CAAS filed Critical Institute of Plant Protection of CAAS
Priority to CN202410553482.7A priority Critical patent/CN118126847B/zh
Publication of CN118126847A publication Critical patent/CN118126847A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN118126847B publication Critical patent/CN118126847B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/14—Fungi; Culture media therefor
    • C12N1/145—Fungal isolates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01G—HORTICULTURE; CULTIVATION OF VEGETABLES, FLOWERS, RICE, FRUIT, VINES, HOPS OR SEAWEED; FORESTRY; WATERING
    • A01G13/00—Protection of plants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01G—HORTICULTURE; CULTIVATION OF VEGETABLES, FLOWERS, RICE, FRUIT, VINES, HOPS OR SEAWEED; FORESTRY; WATERING
    • A01G7/00—Botany in general
    • A01G7/06—Treatment of growing trees or plants, e.g. for preventing decay of wood, for tingeing flowers or wood, for prolonging the life of plants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N63/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing microorganisms, viruses, microbial fungi, animals or substances produced by, or obtained from, microorganisms, viruses, microbial fungi or animals, e.g. enzymes or fermentates
    • A01N63/30—Microbial fungi; Substances produced thereby or obtained therefrom
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01P—BIOCIDAL, PEST REPELLANT, PEST ATTRACTANT OR PLANT GROWTH REGULATORY ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR PREPARATIONS
    • A01P7/00—Arthropodicides
    • A01P7/04—Insecticides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/14—Fungi; Culture media therefor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N3/00—Spore forming or isolating processes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/645—Fungi ; Processes using fungi

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Environmental Sciences (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Forests & Forestry (AREA)
  • Ecology (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Pest Control & Pesticides (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Biodiversity & Conservation Biology (AREA)
  • Insects & Arthropods (AREA)
  • Agronomy & Crop Science (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Dentistry (AREA)
  • Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)

Abstract

本发明涉及一种球孢白僵菌菌株(Beauveria bassiana(Balsamo)Vuillemin)XJWLMQ‑1，由所述菌株制备的孢子粉，以及所述菌株或孢子粉在制备生防制剂中的应用，所述菌株对于西花蓟马、美洲斑潜蝇、番茄潜叶蛾和/或烟粉虱有显著短的致死中时，以及显著提高的侵染率，包含所述菌株或孢子粉的生防制剂可用于上述害虫的防治。

Description

球孢白僵菌XJWLMQ-1及其在生物防治中的应用
技术领域
本发明属于农业生物技术领域，具体涉及一种球孢白僵菌菌株XJWLMQ-1及其在西花蓟马、美洲斑潜蝇、番茄潜叶蛾和/或烟粉虱生物防治上的应用。
背景技术
在农业生产过程特别是蔬菜种植中，有多种害虫为害，危害作物较重的有西花蓟马Frankliniella occidentalis（Pergande）、美洲斑潜蝇Liriomyza sativae（Blanchard）、番茄潜叶蛾Tuta absoluta（Meyrick）、烟粉虱Bemisia tabaci(Gennadius)等世界性入侵害虫，这些害虫寄主广、食性杂、防治难度大，不仅能直接为害寄主植物，导致植物生长不良，造成作物减产，甚至绝收；还能传播多种植物病毒，造成大面积的病毒病，导致巨大的农业经济损失。
目前应用化学药剂防治较多，然而连续使用化学农药防治害虫，虫体会产生抗性，蓟马种群对多种药剂均表现出高水平耐药性、美洲斑潜蝇表现出不同水平的的耐药性、2019—2021年田间烟粉虱种群的耐药性总体呈上升趋势、来自不同地方的番茄潜叶蛾种群在实验室条件下显示对药剂的抗性显著增加 ，防治效率下降，化学农药剂量增加，药剂残毒累积造成环境污染，对人们的健康也有隐患。
随着人们对害虫抗药性，人类健康安全，环境污染等问题的关注，生物防治越来越受到重视，其中生物农药起到重要作用。昆虫病原真菌对寄主的侵染一般要经历10个阶段，即分生孢子的附着，萌发，穿透表皮，增殖，产生毒素，寄主死亡，菌丝入侵所有器官，菌丝穿透表皮，产生分生孢子，分生孢子扩散。球孢白僵菌（Beauveria bassiana）作为一种优良的虫生真菌，对多种害虫具有高致病性，具有对人畜无害、安全、无污染的特点，因此球孢白僵菌被广泛地应用到害虫的综合治理体系中。
发明内容
本申请结合实际生物防治的经验，不同球孢白僵菌菌株间毒力差异很大，而且害虫在接触真菌后到致死前有很长的存活时间，仍然能对作物造成严重为害，因此选择毒力高、致死时间短的菌株尤为重要；其次是菌株的产孢量，一株高毒力菌株必须要有较高的产孢量，从而降低生产成本，才能最终实现大规模的工业化生产和商业应用。因此，本申请针对以上2个方面进行室内评估，以期筛选出高效的球孢白僵菌菌株，最终应用于害虫的综合治理体系中。具体的，
本申请提供一种球孢白僵菌(Beauveria bassiana (Balsamo) Vuillemin) 菌株XJWLMQ-1，所述菌株保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC No.40509，保藏日期为2023年02月27日，属于丛梗孢目，丛梗孢科，球孢白僵菌属。
本发明还提供一种上述菌株的孢子粉的制备方法，所述制备方法包括将上述菌株进行培养。
优选的，所述培养包括以下步骤：
1）、制备活化的孢子粉：将球孢白僵菌XJWLMQ-1接种于萨氏培养基SDAY上，所述萨氏培养基SDAY含有1%的蛋白胨、1%的酵母膏，4%的葡萄糖和2%的琼脂。优选的，培养条件为保持温度25 - 27℃，培养7 - 10 d，生产出活化的XJWLMQ-1的孢子粉。
更优选的，所述孢子粉的制备方法进一步包括：
将上述活化的XJWLMQ-1的孢子粉经过2）、一级种子液培养、3）、二级种子液培养、4）、固相发酵和5）、孢子粉的干燥和收获步骤制备而成。
进一步优选的，
2）、一级种子液的培养
取上述活化的XJWLMQ-1的孢子粉，接入萨氏培养液SDY得到种子液，所述萨氏培养液SDY含有1%的蛋白胨、1%的酵母膏，4%的葡萄糖，种子液的初始孢子浓度为1.0×106个·ml-1，在25℃、120r·min-1条件下振荡培养48 hr，得到一级种子液。
3）、二级种子液的培养
将一级种子液按5%的接种量接入萨氏培养液SDY培养液，在7升液体发酵罐中培养。加入发酵液体积的0.5%豆油，培养温度为25 - 27℃，转速为100 - 200 rpm，初始溶氧量为50%以上。培养40 hr后得到二级种子液。
4）、固相发酵
用开水浸泡大米30分钟，捞出控去多余水份，121℃灭菌30分钟后，按100g 大米加入15 ml二级种子液的比例接菌，发酵器具为20×30 cm的塑料袋。接种后铺放于25 - 26℃的条件下培养7 - 10d。
5）、孢子粉的干燥和收获
固相发酵后的物料置于30℃下干燥3 d，再用孢子收获机，例如MycoharvesterCompany,UK的收获机，收获孢子粉。
本发明还提供一种菌株XJWLMQ-1的孢子粉，所述孢子粉由上述制备方法制备而成。
本发明还提供一种上述活化菌株或孢子粉在制备生防制剂中的应用。优选的，所述孢子粉和其他的杀虫剂联合应用。
本发明还提供一种生防制剂，所述生防制剂包括上述菌株或孢子粉。
优先的，所述生防制剂还包括其他的杀虫剂。
本发明还提供一种上述生防制剂在防治靶标昆虫的应用，所述靶标昆虫为西花蓟马、美洲斑潜蝇、番茄潜叶蛾和/或烟粉虱。
本发明还提供一种防治靶标昆虫的方法，所述方法包括向易感作物喷洒上述生防制剂，所述靶标昆虫为西花蓟马、美洲斑潜蝇、番茄潜叶蛾和/或烟粉虱。
本发明术语“包括”或“包含”是开放式的描述，含有所描述的指定成分或步骤，以及不会实质上影响的其他指定成分或步骤。
本发明的有益效果：
本发明筛选得到的菌株XJWLMQ-1对四种常见世界性入侵害虫，包括西花蓟马、美洲斑潜蝇、番茄潜叶蛾和烟粉虱Bemisia tabaci(Gennadius)的侵染率显著高于其他菌株，可以提高对害虫的致死率，从而减少害虫对农作物的侵害。
本发明筛选得到的菌株XJWLMQ-1对上述四种害虫相对于其他菌株致死时间较短，在侵染率高的同时，致死时间缩短，可以进一步减少害虫对农作物的为害量。
本发明筛选得到的菌株XJWLMQ-1相对于其他菌株有较高的产孢量，从而降低生产成本，最终实现大规模的工业化生产和商业应用。
菌株保藏信息：
保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（CGMCC）；
保藏单位地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号；
保藏号：CGMCC No.40509；
保藏日期：2023年02月27日；
分类命名：球孢白僵菌 Beauveria bassiana
附图说明
图1：高毒力菌株对美洲斑潜蝇成虫毒力。
图2：高毒力菌株对番茄潜叶蛾成虫毒力。
图3：高毒力菌株对烟粉虱成虫毒力。
图4：19株球孢白僵菌产孢量。
具体实施方式
为了使本技术领域的人员更好地理解本发明中的技术方案，下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都应当属于本发明保护的范围。
下述实施例中所用的材料、试剂、仪器等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
实施例1 高毒力致病菌株的筛选
一、材料与方法
1.1供试昆虫
试验所用西花蓟马，采自北京市门头沟碧琨蔬菜种植中心，在实验室内用清洗晾干后的四季豆Phaseolus vulgaris L饲养多代。购自中国农业科学院植物保护研究所幸福荣耀超市。饲养温度为26 ± 1 °C，光照周期L:D=14:10。
美洲斑潜蝇种群2022年采自海南省海口市。室内饲养寄主为矮生菜豆（Phaseolus vulgaris），饲养条件为温度（26 ± 2）℃，相对湿度50%—60%，光周期 L:D = 14 h:10 h。饲养纯化3代以上。
番茄潜叶蛾采自内蒙古自治区呼和浩特市，在室内置于养虫笼（30 cm×30 cm×30 cm）中，在人工气候箱（LTC-1000上海三腾仪器）内用番茄Solanum lycopersicum L.植株继代饲养。
烟粉虱最初从廊坊温室大棚中的烟草上采集。烟粉虱在试验室中用番茄苗Solanum lycopersicum L.进行多代饲养。番茄苗放在养虫笼（40×40×30 cm）中，饲养条件为26 ± 2℃，光周期为12:12（L:D）。
1.2生物测定
菌株对西花蓟马若虫致死中时的测定：首先将西花蓟马用二氧化碳麻醉后，将其倒入配制好的孢子悬浮液中，浸泡3s，倒于滤纸上，吸去多余孢子悬浮液，然后用软毛刷将试虫挑入已放入一根豆角的养虫管（高20 cm，直径3 cm）中，每管接虫20头，用200目纱网和橡皮筋封口。试验设置4次重复，以0.05%吐温-80溶液作为对照。连续记录8天，每天定时记录死亡虫数，计算每个菌株对西花蓟马若虫的致死中时。
菌株对美洲斑潜蝇幼虫致死中时的测定：美洲斑潜蝇幼虫生测试验采用浸叶法，待菜豆长出2片真叶时，将带有美洲斑潜蝇二龄幼虫的叶片浸在已配制好孢子悬浮液中浸泡20 s；待叶片自然晾干后，放入养虫笼内，对照组用0.05%的吐温-80做同样的处理。培养条件为温度26±1°C，相对湿度RH 85%，光周期L:D=14:10的光照，连续观察8 d。试验重复4次，每天定时记录死亡虫数，计算每个菌株对美洲斑潜蝇幼虫的致死中时。
菌株对美洲斑潜蝇成虫死亡率的测定：取5株对美洲斑潜蝇幼虫的高毒力菌株用来对成虫进行生测试验，每株菌株取0.1 g干分生孢子均匀在分布在圆柱形塑料管（70 mm长× 48 mm直径）内侧的棉质的天鹅绒布上。取20头美洲斑潜蝇成虫移入圆筒形塑料管中，在天鹅绒布上行走1分钟，然后将20头成虫从天鹅绒上移入一个干净通风的玻璃笼（150 ×150 × 200 mm）中，在笼的底角放置一个浸有10%糖溶液的棉花球作为食物源。对照组中的成虫接触无干分生孢子的天鹅绒布，然后被转移到相同的笼子。处理以完全随机进行，美洲斑潜蝇的饲养条件维持在25 ℃ ~ 27 ℃、50 ℃ ~ 70%RH、12 L:12 D光周期下，每天记录死亡虫数，每个试验重复4次，连续记录8天，计算每个菌株对美洲斑潜蝇成虫的死亡率。
菌株对番茄潜叶蛾幼虫致死中时的测定：采用浸叶法对番茄叶片上的番茄潜叶蛾二龄幼虫，取2 mL 配制好的孢子悬浮液，将带有二龄幼虫的叶片在悬浮液中浸泡30 s，待其自然晾干或者用灭过菌的滤纸吸走多余的水分。转移到培养皿中（直径×高度= 20 cm×3.5 cm）中，叶柄包裹在湿润的棉球里，然后将培养皿密封。对照组用0.05%的吐温-80做同样的处理。每天记录死亡幼虫数，每个试验重复4次，连续记录8天，计算每个菌株对番茄潜叶蛾幼虫的致死中时。
菌株对番茄潜叶蛾成虫死亡率的测定：取5株对番茄潜叶蛾幼虫的高毒力菌株用来对成虫进行生测试验，每株菌株取0.1 g干分生孢子均匀在分布在圆柱形塑料管（70 mm长× 48 mm直径）内侧的棉质的天鹅绒布上。取20头番茄潜叶蛾成虫移入圆筒形塑料管中，在天鹅绒布上行走1分钟，然后将20头成虫从天鹅绒上移入一个干净通风的玻璃笼（150 ×150 × 200 mm）中，在笼的底角放置一个浸有10%糖溶液的棉花球作为食物源。对照组中的成虫接触无干分生孢子的天鹅绒布，然后被转移到相同的笼子。处理以完全随机进行，番茄潜叶蛾的饲养条件维持在25 ℃ ~ 27 ℃、50 ℃ ~ 70%RH、12 L:12 D光周期下，每天记录死亡虫数，每个试验重复4次，连续记录8天，计算每个菌株对番茄潜叶蛾成虫的死亡率。
菌株对烟粉虱若虫致死中时的测定：挑选单片含有30头烟粉虱4龄若虫的番茄叶片，立即浸入已配制好的1×108孢子/ml悬浮液中10 s，然后取出叶片放在无菌的滤纸上10-20 min自然晾干。对照组用0.05%的吐温-80做同样的处理。晾干后的叶片立即放入含有2%琼脂的培养皿（直径：90 mm）中，培养皿用封口膜密封并带有小孔。放在26±1℃、12:12(L:D)的光照培养箱中培养。每天记录被感染的烟粉虱数，每个试验重复4次，连续记录8天，计算每个菌株对烟粉虱4龄若虫的致死中时。
菌株对烟粉虱成虫死亡率的测定：取5株对烟粉虱若虫的高毒力菌株用来对成虫进行生测试验，每株菌株取0.1 g干分生孢子均匀在分布在培养皿（90 mm直径）底部的棉质的天鹅绒布上。取20头烟粉虱成虫移入培养皿中，在天鹅绒布上行走1分钟，然后将20头成虫从天鹅绒上移入到含有2%琼脂的培养皿中的干净番茄叶片上，对照组中的成虫接触无干分生孢子的天鹅绒布，然后被转移到相同含有2%琼脂的培养皿中的干净番茄叶片上，培养皿用封口膜密封并带有小孔。烟粉虱的饲养条件维持在放在26 ± 1℃、12:12(L:D) 光周期下，每天记录死亡虫数，每个试验重复4次，连续记录8天，计算每个菌株对烟粉虱成虫的死亡率。
1.3供试菌株
供试的19株球孢白僵菌分别采自全国不同地区的僵虫虫体，经室内分离纯化后接种到斜面上，置于4℃进行保存，试验时将球孢白僵菌菌株接种于Goettel产孢培养基上进行活化培养。配方为2% 玉米粉，1% 麦麸，0.5% 蛋白胨，0.3% KH2PO4，0.1%MgSO4.7H2O，0.1%NH4NO3，2% 琼脂，0.5%蝉蜕。选择生物性状良好的菌株用于进一步的生物测定。将在Goettel培养基上培养获得的供试菌株孢子粉，溶于0.05% 的吐温-80 溶液中，配制成最终浓度为1×108孢子/ml的孢子悬浮液；以吐温-80 溶液作为空白对照。
大米培养基上大量生产分生孢子。将大米高压灭菌1小时121 ℃，并接种3天的芽生孢子（Jenkins等，1998）。在20 ℃ ~ 26 ℃，40 ℃ ~ 70%RH条件下培养21 d，然后在室温下干燥5 d。将培养基过筛（295-μm筛目）收获分生孢子，在4 ~ 6 ℃下保存备用。
1.4真菌产孢量的测定
为测定各高毒力菌株的产孢情况，将上述筛选出的高毒力菌株孢子用0.05%吐温-80溶液配制成1×106 孢子/ml的悬浮液。取0.1 ml悬浮液于90 mm的Goettle产孢培养基（玉米粉2%，麸皮1%，蛋白胨0.5%，KH2PO4 0.3%，MgSO4·7H2O 0.1%，NH4NO3 0.1%，琼脂2%）上，用无菌的三角玻璃棒涂布均匀。每个菌株重复4次。培养基在26±1℃黑暗下培养15天，用直径4 mm的无菌打孔器在培养基随机取5个点放入5 ml 0.05%吐温-80溶液中。悬浮液在超声波清洗器中进行超声处理15 min，破坏孢子块结构，然后用漩涡振荡仪振荡10 min，获得均匀分散的孢子悬浮液。悬浮液稀释10倍后用血球计数板测定孢子个数，每个重复计数3次，然后计算每平方厘米的孢子个数。
1.5数据处理
使用 Excel 2016 处理各实验的原始数据，侵染率、致死中时、死亡率、菌株的产孢量用 SAS 9.2 进行差异显著性分析，其中，LT50由 POLO 软件计算得到。
根据生物测定数据
侵染率=受侵染虫数/处理总虫数×100
死亡率=死亡虫数/处理总虫数×100
二、结果与分析
2.1球孢白僵菌对西花蓟马若虫的毒力
表1：19株球孢白僵菌对西花蓟马若虫的毒力
供试球孢白僵菌菌株对西花蓟马都有一定毒力，大多数处理中的虫子均在3-5 d达到死亡高峰。8 d内有JXNC-5菌株、JXNC-11菌株和XJWLMQ-1菌株侵染率在75%以上，致死中时分别为3.51d、3.71d、3.30d。将死亡的虫子保湿培养，可长出白色菌丝，经鉴定是由球孢白僵菌侵染致死。
2.2球孢白僵菌对美洲斑潜蝇的毒力
2.2.1球孢白僵菌对美洲斑潜蝇幼虫的毒力
利用表1中的球孢白僵菌观察对美洲斑潜蝇幼虫的毒力
表2 ：19株球孢白僵菌对美洲斑潜蝇幼虫的毒力
供试球孢白僵菌菌株对美洲斑潜蝇幼虫都有一定毒力，大多数处理中的虫子均在3-5 d达到死亡高峰，潜道不再延长。8 d内侵染率在75%以上的菌株为HNLY-47、SDDZ-20、XJWLMQ-1、XJWLMQ-36，致死中时分别为4.44d、4.08d、3.48d、3.75d。将死亡的幼虫挑出保湿培养，可长出白色菌丝，经鉴定是由球孢白僵菌侵染致死。
2.2.2球孢白僵菌对美洲斑潜蝇成虫的毒力
选择4株对美洲斑潜蝇幼虫侵染率在75%以上的菌株HNLY-47、SDDZ-20、XJWLMQ-1、XJWLMQ-36对美洲斑潜蝇成虫的致病力进行评估。
结果见图1：上述4株菌株均具有较强致病力，接菌5天后，对照组CK的平均死亡率为5.95 ± 1.1%，实验组成虫死亡率范围在85.0%-97.8%。接种菌株XJWLMQ-1菌株的成虫死亡率最高，为97.8%，和其他菌株均有显著性的差异。
2.3球孢白僵菌对番茄潜叶蛾的毒力
2.3.1球孢白僵菌对番茄潜叶蛾幼虫的毒力
表3：19株球孢白僵菌对番茄潜叶蛾幼虫的毒力
供试球孢白僵菌菌株对番茄潜叶蛾幼虫都有一定毒力，大多数处理中的虫子均在4-6 d达到死亡高峰，潜道不再延长。8 d内侵染率在75%以上的菌株为LNTL-3、LNTL-5、XJWLMQ-1、XJWLMQ-36，致死中时分别为4.78d、4.77d、4.42d、4.97d。将死亡的幼虫挑出保湿培养，可长出白色菌丝，经鉴定是由球孢白僵菌侵染致死。
2.3.2球孢白僵菌对番茄潜叶蛾成虫的毒力
选择4株对番茄潜叶蛾幼虫致死中时在5.42 d以内，侵染率在75%以上的菌株LNTL-3、LNTL-5、XJWLMQ-1、XJWLMQ-36对番茄潜叶蛾成虫的毒力进行评估。
结果见图2：4株菌株对番茄潜叶蛾成虫均具有较强致病力，接菌5天后，对照组CK的平均死亡率为5.15 ± 2.4%，实验组成虫死亡率范围在71.5%-95.0%。接种XJWLMQ-1菌株番茄潜叶蛾成虫死亡率最高，为95.0%，和其他菌株均有显著性的差异。
2.4球孢白僵菌对烟粉虱的毒力
2.4.1球孢白僵菌对烟粉虱若虫的毒力
表 4：19株球孢白僵菌对烟粉虱若虫的毒力
供试球孢白僵菌菌株对烟粉虱若虫都有一定毒力，大多数处理中的虫子均在4-6d达到死亡高峰。8d 内菌株的侵染率在75%以上LNTL-5、JXNC-5、HNLY-46、XJWLMQ-1，致死中时分别为4.27d、4.46d、4.15d、3.78d。将死亡的虫子保湿培养，可长出白色菌丝，经鉴定是由球孢白僵菌侵染致死。
2.4.2球孢白僵菌对烟粉虱成虫的毒力
4株对烟粉虱若虫侵染率在75%以上的菌株LNTL-5、JXNC-5、HNLY-46、XJWLMQ-1，比较它们对烟粉虱成虫的毒力。
结果参见图3：4株菌株对烟粉虱成虫均具有较强致病力，接菌5天后，对照组的平均死亡率为5.62 ±0.7%，实验组成虫死亡率范围在75.0% - 91.8%。接种XJWLMQ-1菌株烟粉虱成虫死亡率最高，为91.8%，和其他菌株均有显著性的差异。
综上所述：毒力稳定且致死中时较短的为XJWLMQ-1。
2.5高毒力的菌株产孢量测定
高毒力的19株球孢白僵菌产孢量结果如图4所示。
该19株球孢白僵菌产孢量范围在2.4×108 ~ 3.9×108之间，产孢量的平均值为3.01×108个/cm2。我们人为划分为产孢量低于平均值3.01×108个/cm2的菌株为产孢量较低的菌株，产孢量大于3.01×108个/cm2的菌株为产孢量较高的菌株，以此标准将19株球孢白僵菌进行分类，其分类结果如下表5所示。其中低产孢量的菌株共计10株，高产孢量菌株9株，分别占测定总数的47.3%、52.6%。半数以上的菌株产孢量较低，由此可见进行产孢量的测定对筛选出高产孢量菌株十分有必要。
表5： 依据产孢量将球孢白僵菌分类
根据产孢量将球孢白僵菌分为高产孢量菌株和低产孢量菌株：高产孢量菌株有XJWLMQ-1、LNTL-3、JXNC-11、HNLY-47、JLGZL-1、JLGZL-2、JLGZL-3、JLGZL-9、XJWLMQ-33；低产孢量菌株有LNTL-5、JXNC-4、JXNC-5、JXNC-12、HNLY-46、SDDZ-13、SDDZ-14、SDDZ-20、SDDZ-21、XJWLMQ-36。其中产孢量最高的菌株为XJWLMQ-1，产孢量为3.74×108个/cm2。
一株具有应用潜质的菌株需具有毒力强、产孢量大等指标，其中毒力应作为其首要条件。在对几种害虫的毒力菌株筛选中，XJWLMQ-1的毒力相比其它菌株较强，侵染几种害虫的致死中时较短，且这株菌株是产孢量最高的菌株，为3.74×108个/cm2，高产孢量菌株在应用中的大力生产起重要作用。综上表明：球孢白僵菌XJWLMQ-1是一种对西花蓟马、美洲斑潜蝇、番茄潜叶蛾、烟粉虱具有重大生防应用前景的虫生真菌。
实施例2：制备XJWLMQ-1的孢子粉
（1）制备活化的孢子粉
将球孢白僵菌XJWLMQ-1接种于萨氏培养基SDAY上，所述萨氏培养基SDAY含有1%的蛋白胨、1%的酵母膏，4%的葡萄糖和2%的琼脂。培养条件为保持温度25-27℃，培养7-10d,生产出活化的XJWLMQ-1的孢子粉。
（2）一级种子液的培养
种取活化的菌株XJWLMQ-1的孢子粉，加入到接入萨氏培养液SDY得到种子液，所述萨氏培养液SDY为1%的蛋白胨、1%的酵母膏，4%的葡萄糖，种子液的初始孢子浓度为1.0×106个•ml-1，在25℃、120r•min-1条件下振荡培养48 hr，得到一级种子液。
（3）二级种子液的培养
将一级种子液按5%的接种量接入萨氏培养液SDY培养液，在7升液体发酵罐中培养。加入发酵液体积的0.5%豆油，培养温度为25 - 27，转速为100 - 200 rpm，初始溶氧量为50%以上。培养40 hr后得到二级种子液。
（4）固相发酵
用开水浸泡大米30分钟，捞出控去多余水份，121℃灭菌30分钟后，按100 g大米加入15ml二级种子液的比例接菌，发酵器具为20×30 cm的塑料袋。接种后铺放于25 - 26℃的条件下培养7 - 10d。
（5）孢子粉的干燥和收获
固相发酵后的物料置于30℃下干燥3 d，再用孢子收获机收获孢子粉。
实施例3：田间防治效果
在北京市昌平区的蔬菜生产基地，利用上述生防制品制成1×107个孢子/ml的悬浮液，加入0.05%吐温-80。对蔬菜叶面进行喷洒，进行田间试验，对烟粉虱的田间防效是62%，对西花蓟马的田间防效是72%，对番茄潜叶蛾的田间防效是77%，对美洲斑潜蝇的田间防效是76%。
尽管通过优选实施例的方式对本发明进行了详细描述，但本发明并不限于此。在不脱离本发明的精神和实质的前提下，本领域普通技术人员可以对本发明的实施例进行各种等效的修改或替换，而这些修改或替换都应在本发明的涵盖范围内/任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，可轻易想到变化或替换，都应涵盖在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种球孢白僵菌 (Beauveria bassiana (Balsamo) Vuillemin) 菌株XJWLMQ-1，其特征在于，所述菌株保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC No.40509，保藏日期为2023年02月27日，属于丛梗孢目，丛梗孢科，球孢白僵菌属。
2.一种菌株XJWLMQ-1的孢子粉的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括将权利要求1所述的球孢白僵菌 (Beauveria bassiana (Balsamo) Vuillemin) 菌株XJWLMQ-1进行培养。
3.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述培养包括1）、制备活化的孢子粉：将菌株XJWLMQ-1接种于萨氏培养基SDAY上进行培养，所述萨氏培养基SDAY为1%的蛋白胨、1%的酵母膏，4%的葡萄糖和2%的琼脂。
4.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述步骤1）包括将球孢白僵菌XJWLMQ-1接种于萨氏培养基SDAY上，保持温度25 - 27℃，培养7 - 10 d，生产出活化的XJWLMQ-1的孢子粉。
5.如权利要求3或4所述的制备方法，其特征在于，所述制备方法还包括将活化的XJWLMQ-1的孢子粉经过2）、一级种子液培养、3）二级种子液培养、4）、固相发酵和5）、孢子粉的干燥和收获步骤。
6.一种菌株XJWLMQ-1的孢子粉，其特征在于，所述孢子粉由权利要求2-5任一制备方法制备而成。
7.权利要求1所述的菌株XJWLMQ-1或权利要求6所述的孢子粉在制备生防制剂中的应用。
8.一种生防制剂，其特征在于，所述生防制剂包括权利要求1所述的菌株XJWLMQ-1或权利要求6所述的孢子粉。
9.权利要求8所述生防制剂在防治靶标害虫的应用，其特征在于，所述靶标害虫为西花蓟马、美洲斑潜蝇、番茄潜叶蛾和/或烟粉虱。
10.一种防治靶标害虫的方法，其特征在于，所述方法包括向易感作物喷洒权利要求8所述生防制剂，所述靶标害虫为西花蓟马、美洲斑潜蝇、番茄潜叶蛾和/或烟粉虱。
CN202410553482.7A 2024-05-07 2024-05-07 球孢白僵菌xjwlmq-1及其在生物防治中的应用 Active CN118126847B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202410553482.7A CN118126847B (zh) 2024-05-07 2024-05-07 球孢白僵菌xjwlmq-1及其在生物防治中的应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202410553482.7A CN118126847B (zh) 2024-05-07 2024-05-07 球孢白僵菌xjwlmq-1及其在生物防治中的应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN118126847A true CN118126847A (zh) 2024-06-04
CN118126847B CN118126847B (zh) 2024-07-23

Family

ID=91246090

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202410553482.7A Active CN118126847B (zh) 2024-05-07 2024-05-07 球孢白僵菌xjwlmq-1及其在生物防治中的应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN118126847B (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN118440827A (zh) * 2024-05-07 2024-08-06 绵阳市农业科学研究院 球孢白僵菌lntl-1及其在生物防治中的应用

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20130071425A1 (en) * 2010-03-24 2013-03-21 Stefan Vidal Bio-pesticide and method for pest control
CN104212724A (zh) * 2014-09-01 2014-12-17 中国农业科学院植物保护研究所 一种球孢白僵菌菌株gzgy-1-3及其应用
CN104263655A (zh) * 2014-09-01 2015-01-07 中国农业科学院植物保护研究所 一种球孢白僵菌菌株scwj-2及其应用
CN111165485A (zh) * 2020-02-25 2020-05-19 本生(惠州)生物技术有限公司 一种硅藻土-球孢白僵菌农药组合物及其应用

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20130071425A1 (en) * 2010-03-24 2013-03-21 Stefan Vidal Bio-pesticide and method for pest control
CN104212724A (zh) * 2014-09-01 2014-12-17 中国农业科学院植物保护研究所 一种球孢白僵菌菌株gzgy-1-3及其应用
CN104263655A (zh) * 2014-09-01 2015-01-07 中国农业科学院植物保护研究所 一种球孢白僵菌菌株scwj-2及其应用
CN111165485A (zh) * 2020-02-25 2020-05-19 本生(惠州)生物技术有限公司 一种硅藻土-球孢白僵菌农药组合物及其应用

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
李银平;雷仲仁;王海鸿;: "对西花蓟马高效的球孢白僵菌菌株筛选及产孢特性研究", 中国生物防治学报, no. 02, 8 May 2013 (2013-05-08), pages 219 - 226 *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN118440827A (zh) * 2024-05-07 2024-08-06 绵阳市农业科学研究院 球孢白僵菌lntl-1及其在生物防治中的应用
CN118440827B (zh) * 2024-05-07 2025-03-25 绵阳市农业科学研究院 球孢白僵菌lntl-1及其在生物防治中的应用

Also Published As

Publication number Publication date
CN118126847B (zh) 2024-07-23

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN104212724B (zh) 一种球孢白僵菌菌株gzgy‑1‑3及其应用
CN104263655B (zh) 一种球孢白僵菌菌株scwj‑2及其应用
CN101245319A (zh) 一种球孢白僵菌hfw-05菌株及其应用
CN111961598B (zh) 一种爪哇棒束孢菌株及其在防治黄曲条跳甲方面的应用
CN107881129A (zh) 一株解淀粉芽孢杆菌及其菌剂、菌剂制备方法与应用
CN102021122B (zh) 一种高效杀虫真菌及其用途
CN118126847B (zh) 球孢白僵菌xjwlmq-1及其在生物防治中的应用
CN116656507A (zh) 一株莱氏绿僵菌MrS1Gz1-1及其在植物抗病虫中的应用
CN105670938B (zh) 一种毒杀华北大黑鳃金龟的球孢白僵菌及其应用
CN112375688B (zh) 一种球孢白僵菌及其在生物防治玉米大斑病中的应用
CN117987281A (zh) 一种球孢白僵菌Bbzy230628菌株及其应用
CN103122314B (zh) 玫烟色棒孢霉菌株及其在防治烟粉虱方面的应用
CN103642704B (zh) 棉花内生真菌cef-714及其在棉花黄萎病防治中的应用
CN105274007B (zh) 一株金龟子绿僵菌小孢变种MaTS02及其在防治烟粉虱方面的应用
CN102382775A (zh) 一株杀线虫的绿僵菌及其应用
CN117089463A (zh) 一株爪哇虫草菌（Cordyceps javanica）FJDD-08及其应用
CN111662856A (zh) 一种包含木醋液的复合微生物制剂及其制备方法与应用
CN117603843A (zh) 防治植物根结线虫病害的粘着剑菌、发酵液及其应用
CN118440827B (zh) 球孢白僵菌lntl-1及其在生物防治中的应用
CN111549004B (zh) 马尾松毛虫质型多角体病毒DpCPV与白僵菌的复合生防菌的菌剂及其应用
CN110205262B (zh) 类球红细菌a2菌株、生防菌剂及其制备方法和应用
CN113373067A (zh) 一种可促进植物生长的复合微生物菌剂及其应用
CN1775942A (zh) 一种捕食线虫真菌菌株及制备方法
CN118165841B (zh) 一种莱氏绿僵菌Mrysms2308及其对粘虫生物防治的方法与应用
CN105132295B (zh) 一种拟哈茨木霉菌菌株及其应用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant
OL01 Intention to license declared
OL01 Intention to license declared