CN118126016A - 一种快速提取柘木中氧杂蒽酮类同分异构体化合物的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种快速提取柘木中氧杂蒽酮类同分异构体化合物的方法，涉及中药有效成分的制备技术领域，包括以下步骤：S1、取柘木药材：通过提取溶剂获取柘木药材中可用成分，得到柘木提取液；S2、物料处理：将所述柘木提取液进行处理。该快速提取柘木中氧杂蒽酮类同分异构体化合物的方法，可以制得一种新化合物1，并且，化合物2和化合物3均为首次在柘木中发现，经过试验，3种化合物均具有良好的抗炎活性，化合物对DPPH的清除呈浓度依赖性，在样品浓度为60μM时，3个化合物对DPPH的清除率均达到了80％以上，显示出良好的抗氧化活性，并且，3个化合物对H2O2导致的HepG2细胞损伤具有一定的保护作用。
Description
技术领域
本发明涉及中药有效成分的制备技术领域，具体为一种快速提取柘木中氧杂蒽酮类同分异构体化合物的方法。
背景技术
氧杂蒽酮类化合物是一类重要的含氧杂环化合物，广泛存在多种高等植物和微生物中，有些氧杂蒽酮类化合物具有重要的药物活性，用于抗癌、抗菌、抗氧化、降血压、抑制HIV-1等，例如：普草梭素(Psorospermin)和Paecil oxanthone具有独特的抗肿瘤特性，β-mangostin和calozeyloxanthone在抗菌方面有特殊功效。
柘木为桑科柘属植物Cudraniatricuspidata(Carr.)Bur.落叶灌木或小乔木，柘木药用部位主要为其干燥的根及藤茎，在1977版中国药典中被收录在穿破石项下，味甘性温无毒，具清热、凉血、通络之功效，主治肺结核，湿热黄疸等。
关于氧杂蒽酮类化合物的合成已有文献报道，例如[1]Grover，P.K.；Shah，G.D.；Shah，R.C.J.Chem.Soc.1955，3982.[2]Gobbi，S.；Rampa，A.；Bisi，A.；Belluti，F.；Valenti，P.；Caputo，A.；Zampiron，A.；Carrara，M.J.Med.Chem.2002，45，4931.[3]Wang，S.Z.；Xie，K.；Tan，Z.；An，X.Y.；Zhou，X.J.；Guo，C.C.；Peng，Z.H.Chem.Commun.2009，6469.[4]Wang，P.；Rao，H.H.；Hua，R.M.；Li，C.J.Org.Lett.2012，14，902.[5]Zhao，J.；Yue，D.W.；Campo，M.A.；Larock，R.C.J.Am.Chem.Soc.2007，129，5288.[6]Zhang，H.；Shi，R.Y.；Gan，P.；Liu，C.；Ding，A.X.；Wang，Q.Y.；Lei，A.W.Angew.Chem.Int.Ed.2012，51，5204.[7]Barbero，N.；Martin，R.S.；Dominguez，E.GreenChem.2009，11，830.。
上述合成方法均具有一定的局限性，综合国内外相关文献报道，柘木所含成分种类多，主要包括黄酮、氧杂蒽酮、有机酸、多糖和苯丙素5类成分，其中柘木黄酮类成分和氧杂蒽酮类成分是柘木的代表性成分，具有抗氧化、抗炎、抗肿瘤、保护神经和保肝等作用，目前已分离鉴定出的柘木黄酮类成分157种、氧杂蒽酮类成分99种，柘木具有丰富的药理活性，加大柘木活性成分的研究和生产，有利于推动柘木资源的深层次利用和其制剂产品的开发，因此，提出一种快速提取柘木中氧杂蒽酮类同分异构体化合物的方法，以方便对柘木中氧杂蒽酮类有效成分的快速提取。
发明内容
本发明提供的发明目的在于提供一种快速提取柘木中氧杂蒽酮类同分异构体化合物的方法。通过快速提取柘木中氧杂蒽酮类同分异构体化合物的方法，可以制得一种新化合物1，并且，化合物2和化合物3均为首次在柘木中发现，经过试验，3种化合物均具有良好的抗炎活性，化合物对DPPH的清除呈浓度依赖性，在样品浓度为60μM时，3个化合物对DPPH的清除率均达到了80％以上，显示出良好的抗氧化活性，并且，3个化合物对H2O2导致的HepG2细胞损伤具有一定的保护作用。
为了实现上述抗炎活性良好、抗氧化活性良好和细胞损伤保护的问题，本发明提供如下技术方案：一种快速提取柘木中氧杂蒽酮类同分异构体化合物的方法，包括以下步骤：
步骤一、取柘木药材：通过提取溶剂获取柘木药材中可用成分，得到柘木提取液。
步骤二、物料处理：将所述柘木提取液进行处理，得到浸膏，进行备用。
步骤三、初次分离：将所述浸膏通过硅胶柱层析分离，依次进行梯度洗脱，共得到七部分石油醚-乙酸乙酯洗脱液，进行备用。
步骤四、去除主成分：将所述石油醚-乙酸乙酯洗脱液第三部分采用反溶剂沉淀法除去大部分主成分，得到棕红色母液。
步骤五、二次分离：将所述棕红色母液浓缩后通过硅胶柱层析分离，依次进行梯度洗脱，将洗脱液分别标记为A1和A2。
步骤六、分离A1：将所述A1浓缩后采用快速洗脱HPLC制备法分离，收集可制备得到化合物1、化合物2和一个混合组分C1。
步骤七、分离C1：将所述C1浓缩后采用套针进样HPLC制备法分离，得到化合物3。
进一步的，在步骤一中，所述提取溶剂为80％～95％的乙醇，提取四次，料液比分别为6:1、3:1、3:1和3:1，每次提取时间均为2h。
进一步的，在步骤二中，所述柘木提取液的处理包括过滤、减压浓缩、收集乙酸乙酯萃取液、浓缩和干燥，所述浓缩液分别用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取。
进一步的，在步骤三中，所述浸膏进行梯度洗脱的配比依次为9:1、10:2、10:4、10:8和0：1(v/v)，所述梯度洗脱的试剂为石油醚-乙酸乙酯，收集10:2(v/v)的石油醚-乙酸乙酯洗脱液，收集10:4(v/v)的石油醚-乙酸乙酯洗脱液，按照洗脱顺序依次等量收集七份，分别标记为洗脱液第一部分、洗脱液第二部分、洗脱液第三部分、洗脱液第四部分、洗脱液第五部分、洗脱液第六部分和洗脱液第七部分，收集10:8(v/v)的石油醚-乙酸乙酯洗脱液。
进一步的，在步骤四中，所述石油醚-乙酸乙酯洗脱液的第三部分减压浓缩至干得浅棕色固体，所述浅棕色固体用适量10:2～4(v/v)的石油醚-乙酸乙酯溶解后，继续往溶液中滴加甲醇，直至有大量的白色沉淀析出，过滤除掉白色沉淀即可。
进一步的，在步骤五中，所述棕红色母液浓缩后进行梯度洗脱的配比为10:3和10:4(v/v)，所述梯度洗脱的试剂为石油醚-乙酸乙酯。
进一步的，在步骤六中，所述快速洗脱HPLC制备法分离即采用高比例的有机相将分离度大的化合物1和化合物2快速制备得到，分离度小的化合物3以混合组分得到，再进行二次分离。
进一步的，所述步骤六中，色谱柱为UniSil5-120C18Ultra，流速为：10ml/min，流动相为55:45(v/v)乙腈-0.1％甲酸水，在出峰时间段，即13～14min时，收集可制备得到1,3,6,7-四羟基-4-异戊烯基氧杂蒽酮，即化合物1，纯度≥98％，在出峰时间段，即17～18min时，收集可制备得到1,3,6,7-四羟基-2-异戊烯基氧杂蒽酮，即化合物2，纯度≥97％。
进一步的，所述步骤六中，由于是快速洗脱，在出峰时间段，即13～14min时，收集可制备得到化合物1；在出峰时间段，即17～18min时，收集可制备得到化合物2；在出峰时间段，即19.5～21min时，收集可制备得到一个混合组分C1。
进一步的，所述步骤七中，色谱柱为UniSil5-120C18Ultra，流速为：10ml/min，流动相为48:52(v/v)乙腈-0.1％甲酸水，在每次进样后的第36～39min收集色谱峰可制备得到1,3,6,7-四羟基-8-异戊烯基氧杂蒽酮，即化合物3，纯度≥95％。
本发明提供了一种快速提取柘木中氧杂蒽酮类同分异构体化合物的方法，具备以下有益效果：通过快速提取柘木中氧杂蒽酮类同分异构体化合物的方法，可以制得一种新化合物1，并且，化合物2和化合物3均为首次在柘木中发现，经过试验，3种化合物均具有良好的抗炎活性，化合物对DPPH的清除呈浓度依赖性，在样品浓度为60μM时，3个化合物对DPPH的清除率均达到了80％以上，显示出良好的抗氧化活性，并且，3个化合物对H2O2导致的HepG2细胞损伤具有一定的保护作用。
附图说明
图1为本发明一种快速提取柘木中氧杂蒽酮类同分异构体化合物的方法的流程图；
图2为本发明一种快速提取柘木中氧杂蒽酮类同分异构体化合物的方法的快速洗脱HPLC制备法色谱图；
图3为本发明一种快速提取柘木中氧杂蒽酮类同分异构体化合物的方法的套针进样HPLC制备法色谱图；
图4为本发明一种快速提取柘木中氧杂蒽酮类同分异构体化合物的方法的3个氧杂蒽酮化合物结构式示意图。
具体实施方式
请参阅图1-4，本发明提供一种技术方案：一种快速提取柘木中氧杂蒽酮类同分异构体化合物的方法，包括以下步骤：
步骤一、取柘木药材：通过提取溶剂获取柘木药材中可用成分，得到柘木提取液。
步骤二、物料处理：将柘木提取液进行处理，得到浸膏，进行备用。
步骤三、初次分离：将浸膏通过硅胶柱层析分离，依次进行梯度洗脱，共得到七部分石油醚-乙酸乙酯洗脱液，进行备用。
步骤四、去除主成分：将石油醚-乙酸乙酯洗脱液第三部分采用反溶剂沉淀法除去大部分主成分，得到棕红色母液。
步骤五、二次分离：将棕红色母液浓缩后通过硅胶柱层析分离，依次进行梯度洗脱，将洗脱液分别标记为A1和A2。
步骤六、分离A1：将A1浓缩后采用快速洗脱HPLC制备法分离，收集可制备得到化合物1、化合物2和一个混合组分C1。
步骤七、分离C1：将C1浓缩后采用套针进样HPLC制备法分离，得到化合物3。
具体的，在步骤一中，提取溶剂为80％～95％的乙醇，提取四次，料液比分别为6:1、3:1、3:1和3:1，每次提取时间均为2h。
具体的，在步骤二中，柘木提取液的处理包括过滤、减压浓缩、收集乙酸乙酯萃取液、浓缩和干燥，浓缩液分别用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取。
具体的，在步骤三中，浸膏进行梯度洗脱的配比依次为9:1、10:2、10:4、10:8和0：1(v/v)，梯度洗脱的试剂为石油醚-乙酸乙酯，收集10:2(v/v)的石油醚-乙酸乙酯洗脱液，收集10:4(v/v)的石油醚-乙酸乙酯洗脱液，按照洗脱顺序依次等量收集七份，分别标记为洗脱液第一部分、洗脱液第二部分、洗脱液第三部分、洗脱液第四部分、洗脱液第五部分、洗脱液第六部分和洗脱液第七部分，收集10:8(v/v)的石油醚-乙酸乙酯洗脱液。
具体的，在步骤四中，石油醚-乙酸乙酯洗脱液的第三部分减压浓缩至干得浅棕色固体，浅棕色固体用适量10:2～4(v/v)的石油醚-乙酸乙酯溶解后，继续往溶液中滴加甲醇，直至有大量的白色沉淀析出，过滤除掉白色沉淀即可。
具体的，在步骤五中，棕红色母液浓缩后进行梯度洗脱的配比为10:3和10:4(v/v)，梯度洗脱的试剂为石油醚-乙酸乙酯。
具体的，在步骤六中，快速洗脱HPLC制备法分离即采用高比例的有机相将分离度大的化合物1和化合物2快速制备得到，分离度小的化合物3以混合组分得到，再进行二次分离。
具体的，步骤六中，色谱柱为UniSil5-120C18Ultra，流速为：10ml/min，流动相为55:45(v/v)乙腈-0.1％甲酸水，在出峰时间段，即13～14min时，收集可制备得到1,3,6,7-四羟基-4-异戊烯基氧杂蒽酮，即化合物1，纯度≥98％，在出峰时间段，即17～18min时，收集可制备得到1,3,6,7-四羟基-2-异戊烯基氧杂蒽酮，即化合物2，纯度≥97％。
具体的，步骤六中，由于是快速洗脱，在出峰时间段，即19.5～21min时，收集可制备得到一个混合的组分C1。
具体的，步骤七中，色谱柱为UniSil5-120C18Ultra，流速为：10ml/min，流动相为48:52(v/v)乙腈-0.1％甲酸水，在每次进样后的第36～39min收集色谱峰可制备得到1,3,6,7-四羟基-8-异戊烯基氧杂蒽酮，即化合物3，纯度≥95％。
本发明提供了一种快速提取柘木中氧杂蒽酮类同分异构体化合物的方法，包括以下步骤：步骤一、取柘木药材：通过提取溶剂获取柘木药材中可用成分，得到柘木提取液，提取溶剂为80％～95％的乙醇，提取四次，料液比分别为6:1、3:1、3:1和3:1，每次提取时间均为2h，步骤二、物料处理：将柘木提取液进行处理，得到浸膏，进行备用，柘木提取液的处理包括过滤、减压浓缩、收集乙酸乙酯萃取液、浓缩和干燥，浓缩液分别用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取，步骤三、初次分离：将浸膏通过硅胶柱层析分离，依次进行梯度洗脱，共得到七部分石油醚-乙酸乙酯洗脱液，进行备用，浸膏进行梯度洗脱的配比依次为9:1、10:2、10:4、10:8和0：1(v/v)，梯度洗脱的试剂为石油醚-乙酸乙酯，收集10:2(v/v)的石油醚-乙酸乙酯洗脱液，收集10:4(v/v)的石油醚-乙酸乙酯洗脱液，按照洗脱顺序依次等量收集七份，分别标记为洗脱液第一部分、洗脱液第二部分、洗脱液第三部分、洗脱液第四部分、洗脱液第五部分、洗脱液第六部分和洗脱液第七部分，收集10:8(v/v)的石油醚-乙酸乙酯洗脱液，步骤四、去除主成分：将石油醚-乙酸乙酯洗脱液第三部分采用反溶剂沉淀法除去大部分主成分，得到棕红色母液，石油醚-乙酸乙酯洗脱液的第三部分减压浓缩至干得浅棕色固体，浅棕色固体用适量10:2～4(v/v)的石油醚-乙酸乙酯溶解后，继续往溶液中滴加甲醇，直至有大量的白色沉淀析出，过滤除掉白色沉淀即可，步骤五、二次分离：将棕红色母液浓缩后通过硅胶柱层析分离，依次进行梯度洗脱，将洗脱液分别标记为A1和A2，棕红色母液浓缩后进行梯度洗脱的配比为10:3和10:4(v/v)，梯度洗脱的试剂为石油醚-乙酸乙酯，步骤六、分离A1：将A1浓缩后采用快速洗脱HPLC制备法分离，收集可制备得到化合物1、化合物2和一个混合组分C1，快速洗脱HPLC制备法分离即采用高比例的有机相将分离度大的化合物1和化合物2快速制备得到，分离度小的化合物3以混合组分得到，再进行二次分离，色谱柱为UniSil5-120C18Ultra，流速为：10ml/min，流动相为55:45(v/v)乙腈-0.1％甲酸水，在出峰时间段，即13～14min时，收集可制备得到1,3,6,7-四羟基-4-异戊烯基氧杂蒽酮，即化合物1，纯度≥98％，在出峰时间段，即17～18min时，收集可制备得到1,3,6,7-四羟基-2-异戊烯基氧杂蒽酮，即化合物2，纯度≥97％，由于是快速洗脱，在出峰时间段，即19.5～21min时，收集可制备得到一个混合的组分C1，步骤七、分离C1：将C1浓缩后采用套针进样HPLC制备法分离，得到化合物3，色谱柱为UniSil5-120C18Ultra，流速为：10ml/min，流动相为48:52(v/v)乙腈-0.1％甲酸水，在每次进样后的第36～39min收集色谱峰可制备得到1,3,6,7-四羟基-8-异戊烯基氧杂蒽酮，即化合物3，纯度≥95％。
结构鉴定
对分离得到的单体成分应用Bruker Impact IIQ-TOF质谱仪和Burker 400MHz核磁共振波谱仪分别进行MS，NMR谱的测定，所得数据如下：
化合物1(1,3,6,7-四羟基-4-异戊烯基氧杂蒽酮)
化合物1与化合物2的碳谱、氢谱数据几乎一致，可判断化合物1是带有一个异戊烯基的四羟基氧杂蒽酮类化合物；在HMBC谱中，亚甲基氢信号δ3.36(H-11)与五个碳信号δ105.99(C-4)、δ122.83(C-12)、δ131.01(C-13)、δ154.83(C-4a)、δ162.53(C-3)相关，可判断出异戊烯基连接在C-4上。
浅黄色粉末。ESI-MS：m/z327.0742[M-H]ˉ。1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ:13.11(s,1H，1-OH),7.36(s,1H，H-8),6.87(s,1H，H-5),6.25(s,1H，H-2),5.19(t,J＝7.2Hz,1H，H-12),3.36(d,J＝7.1Hz,2H，H-11),1.83(s,3H，H-14),1.63(s,3H，H-15)。
13C-NMR(100MHz，DMSO-d6)δ:179.60(C-9),162.53(C-3),160.62(C-1),154.83(C-4a),154.63(C-6),151.49(C-10a),144.23(C-7),131.01(C-13),122.83(C-12),111.92(C-8a),108.41(C-8),105.99(C-4),103.00(C-5),102.00(C-
9a),97.61(C-2),25.97(C-15),21.67(C-11),18.19(C-14)。
化合物2(1,3,6,7-四羟基-2-异戊烯基氧杂蒽酮)
浅黄色粉末。ESI-MS：m/z327.0745[M-H]ˉ。1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ:13.44(s,1H，1-OH),7.37(s,1H，H-8),6.84(s,1H，H-5),6.39(s,1H，H-4),5.18(t,J＝7.2Hz,1H，H-12),3.22(d,J＝7.1Hz,2H，H-11),1.73(s,3H，H-14),1.62(s,3H，H-15)。
13C-NMR(100MHz，DMSO-d6)δ:179.36(C-9),162.82(C-3),159.91(C-1),155.52(C-4a),154.73(C-6),151.41(C-10a),144.19(C-7),130.91(C-13),122.92(C-12),112.06(C-8a),109.99(C-2),108.33(C-8),102.97(C-5),101.82(C-
9a),93.34(C-4),25.95(C-15),21.41(C-11),18.16(C-14)。
化合物3(1,3,6,7-四羟基-8-异戊烯基氧杂蒽酮)
白色固体。ESI-MS：m/z329.0812[M+H]ˉ，327.0755[M-H]ˉ。1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ:13.73(s,1H，1-OH),6.70(s,1H，H-5),6.24(s,1H，H-4),6.10(s,1H，H-2),5.20(t,J＝6.2Hz,1H，H-12),4.02(d,J＝6.4Hz,2H，H-11),1.77(s,3H，H-15),1.61(s,3H，H-14)。
13C-NMR(100MHz，DMSO-d6)δ:181.75(C-9),164.68(C-3),163.42(C-1),156.88(C-4a),154.58(C-6),152.84(C-10a),141.91(C-7),130.40(C-13),127.12(C-8),124.33(C-12),109.65(C-8a),102.55(C-9a),100.44(C-5),97.95(C-
2),93.20(C-4),26.09(C-11),25.80(C-14),18.53(C-15)。
药理学实验
1抗炎活性实验
取RAW264.7小鼠巨噬细胞株复苏后，选用对数生长期的贴壁肿瘤细胞，用胰酶消化后，将含10％小牛血清的RPMI1640培养基配制成5×104的细胞悬液，接种在96孔培养板中，每孔100μL，5％CO2，37℃培养24h。抗炎实验设置空白对照组、LPS组、给药组和阳性对照药地塞米松(DEX)组，其中空白对照组细胞只添加培养基，LPS组中只添加1μg/mL LPS，给药组添加1μg/mL的LPS和5个不同浓度的待测样品(60μM，30μM，15μM，7.5μM，3.75μM)，阳性对照药DEX组添加1μg/mL的LPS和5个不同浓度的地塞米松(50μM，25μM，12.5μM，6.25μM，3.125μM)，每组设3个复孔，5％CO2，37℃培养48h。弃去培养板中上清液，用PBS清洗2次，每孔加入100μL新鲜配制的0.5mg/mLMTT的培养基，37℃继续培养4h，再次小心弃去上清液，并加入150μL DMSO，用微型振荡器混匀10min后，用酶标仪在492nm处测定光密度值(OD值)，并计算其IC50值。
结果：采用MTT法测定3个化合物和地塞米松对LPS诱导的RAW264.7小鼠巨噬细胞NO释放的抑制作用，阳性对照药地塞米松的IC50值为4.7μM，化合物1,3,6,7-四羟基-4-异戊烯基氧杂蒽酮(1)、1,3,6,7-四羟基-2-异戊烯基氧杂蒽酮(2)、1,3,6,7-四羟基-8-异戊烯基氧杂蒽酮(3)的IC50值分别为18.1μM，19.2μM和17.1μM。上述结果表明3个化合物均具有良好的抗炎活性。
2抗氧化活性实验
实验设置样品组(As)：取100μL0.1mmoL/L的DPPH乙醇溶液于酶标板孔中，分别加入100μL不同浓度的1,3,6,7-四羟基-4-异戊烯基氧杂蒽酮、1,3,6,7-四羟基-2-异戊烯基氧杂蒽酮、1,3,6,7-四羟基-8-异戊烯基氧杂蒽酮供试品溶液(60μM，30μM，15μM，7.5μM，3.75μM)；样品空白组(Ar)：100μL样品溶液与100μL无水乙醇；溶剂空白组(Ao)：100μL无水乙醇与100μL DPPH乙醇溶液；每个样品做三个复孔。摇匀，暗处静置30min后于517nm条件下测其吸光度，计算DPPH的清除率(Rc)。
DPPH清除率的计算公式：Rc＝(1-(As-Ar)/Ao)×100％
结果：化合物对DPPH的清除呈浓度依赖性。在样品浓度为60μM时，化合物1,3,6,7-四羟基-4-异戊烯基氧杂蒽酮(1)、1,3,6,7-四羟基-2-异戊烯基氧杂蒽酮(2)、1,3,6,7-四羟基-8-异戊烯基氧杂蒽酮(3)对DPPH的清除率均达到了80％以上，显示出良好的抗氧化活性。
3保肝活性实验
HepG2细胞接种于96孔板中，培养24h后加入无毒浓度的样品预孵育12h，设阳性药物对照组(GSH)、溶剂对照组、模型组，每个浓度设3个复孔。12h后在96孔板中避光加入H2O2(终浓度400μM)培养12h，弃去培养液，每孔加入MTT液(0.5mg/mL)100μL，继续培养4h，弃去MTT液，每孔加入DMSO 150μL，混合振荡器振荡，在酶标仪570nm波长处测定光密度(OD)值，计算细胞存活率。
结果：400μMH2O2作用于HepG2细胞12h后，对人肝细胞产生显著损伤，细胞存活率低于空白对照组；化合物1,3,6,7-四羟基-4-异戊烯基氧杂蒽酮(1)、1,3,6,7-四羟基-2-异戊烯基氧杂蒽酮(2)、1,3,6,7-四羟基-8-异戊烯基氧杂蒽酮(3)对H2O2导致的HepG2细胞损伤具有一定的保护作用。见表2。
表2各化合物对H2O2诱导HepG2细胞损伤的保护作用
尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。
Claims (10)
1.一种快速提取柘木中氧杂蒽酮类同分异构体化合物的方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1、取柘木药材：通过提取溶剂获取柘木药材中可用成分，得到柘木提取液；
S2、物料处理：将所述柘木提取液进行处理，得到浸膏，进行备用；
S3、初次分离：将所述浸膏通过硅胶柱层析分离，依次进行梯度洗脱，共得到七部分石油醚-乙酸乙酯洗脱液，进行备用；
S4、去除主成分：将所述石油醚-乙酸乙酯洗脱液第三部分采用反溶剂沉淀法除去大部分主成分，得到棕红色母液；
S5、二次分离：将所述棕红色母液浓缩后通过硅胶柱层析分离，依次进行梯度洗脱，将洗脱液分别标记为A1和A2；
S6、分离A1：将所述A1浓缩后采用快速洗脱HPLC制备法分离，收集可制备得到化合物1、化合物2和一个混合组分C1；
S7、分离C1：将所述C1浓缩后采用套针进样HPLC制备法分离，得到化合物3。
2.根据权利要求1所述的一种快速提取柘木中氧杂蒽酮类同分异构体化合物的方法，其特征在于，在步骤S1中，所述提取溶剂为80％～95％的乙醇，提取四次，料液比分别为6:1、3:1、3:1和3:1，每次提取时间均为2h。
3.根据权利要求1所述的一种快速提取柘木中氧杂蒽酮类同分异构体化合物的方法，其特征在于，在步骤S2中，所述柘木提取液的处理包括过滤、减压浓缩、收集乙酸乙酯萃取液、浓缩和干燥，所述浓缩液分别用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取。
4.根据权利要求1所述的一种快速提取柘木中氧杂蒽酮类同分异构体化合物的方法，其特征在于，在步骤S3中，所述浸膏进行梯度洗脱的配比依次为9:1、10:2、10:4、10:8和0：1(v/v)，所述梯度洗脱的试剂为石油醚-乙酸乙酯，收集10:2(v/v)的石油醚-乙酸乙酯洗脱液，收集10:4(v/v)的石油醚-乙酸乙酯洗脱液，按照洗脱顺序依次等量收集七份，分别标记为洗脱液第一部分、洗脱液第二部分、洗脱液第三部分、洗脱液第四部分、洗脱液第五部分、洗脱液第六部分和洗脱液第七部分，收集10:8(v/v)的石油醚-乙酸乙酯洗脱液。
5.根据权利要求1所述的一种快速提取柘木中氧杂蒽酮类同分异构体化合物的方法，其特征在于，在步骤S4中，所述石油醚-乙酸乙酯洗脱液的第三部分减压浓缩至干得浅棕色固体，所述浅棕色固体用适量10:2～4(v/v)的石油醚-乙酸乙酯溶解后，继续往溶液中滴加甲醇，直至有大量的白色沉淀析出，过滤除掉白色沉淀即可。
6.根据权利要求1所述的一种快速提取柘木中氧杂蒽酮类同分异构体化合物的方法，其特征在于，在步骤S5中，所述棕红色母液浓缩后进行梯度洗脱的配比为10:3和10:4(v/v)，所述梯度洗脱的试剂为石油醚-乙酸乙酯。
7.根据权利要求1所述的一种快速提取柘木中氧杂蒽酮类同分异构体化合物的方法，其特征在于，在步骤S6中，所述快速洗脱HPLC制备法分离即采用高比例的有机相将分离度大的化合物1和化合物2快速制备得到，分离度小的化合物3以混合组分得到，再进行二次分离。
8.根据权利要求1所述的一种快速提取柘木中氧杂蒽酮类同分异构体化合物的方法，其特征在于，所述步骤S6中，色谱柱为UniSil5-120C18Ultra，流速为：10ml/min，流动相为55:45(v/v)乙腈-0.1％甲酸水，在出峰时间段，即13～14min时，收集可制备得到1,3,6,7-四羟基-4-异戊烯基氧杂蒽酮，即化合物1，纯度≥98％，在出峰时间段，即17～18min时，收集可制备得到1,3,6,7-四羟基-2-异戊烯基氧杂蒽酮，即化合物2，纯度≥97％。
9.根据权利要求1所述的一种快速提取柘木中氧杂蒽酮类同分异构体化合物的方法，其特征在于，所述步骤S6中，由于是快速洗脱，在出峰时间段，即19.5～21min时，收集可制备得到一个混合的组分C1。
10.根据权利要求1所述的一种快速提取柘木中氧杂蒽酮类同分异构体化合物的方法，其特征在于，所述步骤S7中，色谱柱为UniSil5-120C18Ultra，流速为：10ml/min，流动相为48:52(v/v)乙腈-0.1％甲酸水，在每次进样后的第36～39min收集色谱峰可制备得到1,3,6,7-四羟基-8-异戊烯基氧杂蒽酮，即化合物3，纯度≥95％。
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- 2024-01-19 CN CN202410082566.7A patent/CN118126016A/zh active Pending
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| PB01 | Publication | ||
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