CN118119848A - 荧光纤维素颗粒 - Google Patents

荧光纤维素颗粒 Download PDF

Info

Publication number
CN118119848A
CN118119848A CN202280070245.4A CN202280070245A CN118119848A CN 118119848 A CN118119848 A CN 118119848A CN 202280070245 A CN202280070245 A CN 202280070245A CN 118119848 A CN118119848 A CN 118119848A
Authority
CN
China
Prior art keywords
fluorescent
cellulose particles
cellulose
particles
mass
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN202280070245.4A
Other languages
English (en)
Inventor
加藤万贵
永井宏和
笹岛义志
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Asahi Kasei Corp
Original Assignee
Asahi Kasei Corp
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Asahi Kasei Corp filed Critical Asahi Kasei Corp
Publication of CN118119848A publication Critical patent/CN118119848A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/531—Production of immunochemical test materials
    • G01N33/532—Production of labelled immunochemicals
    • G01N33/533—Production of labelled immunochemicals with fluorescent label
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/536—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with immune complex formed in liquid phase
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
    • G01N33/544—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals the carrier being organic
    • G01N33/548—Carbohydrates, e.g. dextran

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Investigating Or Analysing Materials By The Use Of Chemical Reactions (AREA)
  • Compositions Of Macromolecular Compounds (AREA)

Abstract

提供用于免疫色谱时维持充分的显色性/分散稳定性、并且免疫色谱展开时的展开性改善、可以减少展开不良的荧光纤维素细颗粒。本发明涉及荧光纤维素颗粒、以及含有荧光纤维素颗粒的诊断药和免疫色谱试剂盒，该荧光纤维素颗粒的特征在于，其含有纤维素颗粒、荧光色素化合物和下述通式(1){式中，R1为与生物物质具有亲和性的官能团，并且R2为与该纤维素颗粒的醚键合部}所示的杂环式化合物，相对于1g荧光纤维素颗粒，该纤维素颗粒的含量为30质量％以上且90质量％以下，该荧光色素化合物的含量为1质量％以上且40质量％以下，并且该杂环式化合物的含量为3质量％以上且50质量％以下。

Description

荧光纤维素颗粒
技术领域
本发明涉及荧光纤维素颗粒、以及使用了其的诊断药和免疫色谱试剂盒。
背景技术
以往，作为利用基于抗原-抗体的特异性反应检出包含特定的抗原或抗体的被检出物质的免疫测定法之一，使试样中的被检出物质与负载于细颗粒的抗体或抗原通过免疫反应而特异性结合、测定通过该结合而产生的细颗粒的聚集状态的聚集法为简便的测定法特别是从能够目视判定的观点考虑被通常使用。另外，作为其他的免疫测定法，也广泛使用放射免疫测定法、酶免疫测定法、免疫荧光测定法等。另外，使用与被检出物质在免疫学上结合的物质、组合免疫反应和色谱的原理、通过目视判定来检出被检出物质的方法被称为免疫色谱法或免疫色谱法(immunochromatography)，近年得到广泛使用。
免疫色谱法指的是，将对于作为被检出物质的抗原(或抗体)的抗体(或抗原)固定化于色谱介质、在色谱介质上制作反应部位、将此部位作为固定相，使负载有能够与上述被检出物质结合的抗体(或抗原)的检出用细颗粒、和含有上述被检出物的试样接触{通过该接触而抗体致敏(或抗原致敏)检出用细颗粒上的该抗体(或该抗原)、和试样中的抗原(或抗体)反应，生成由检出用细颗粒-致敏中使用的抗体(或抗原)-试样中的抗原(或抗体)形成的复合体}，并且在上述色谱介质上移动，由此使前述试样与前述反应部位接触的测定法。由此，在前述反应部位，前述复合体与前述固定化抗体(或固定化抗原)结合，从而捕捉检出用细颗粒，因此通过目视判定该检出用细颗粒的捕捉的有无而可以判定试样中的被检出物质的存在。利用该原理的诊断试剂盒称为免疫色谱试剂盒。
上述的免疫色谱试剂盒、聚集法中，作为检出用细颗粒，为了容易进行目视判定而经常利用有色的细颗粒。作为这种检出用细颗粒，已知根据其粒径、制备条件而自然显色的胶体状金属细颗粒、将由合成高分子形成的胶乳细颗粒着色而成的细颗粒、利用将着色剂和单体一起聚合的方法得到的着色胶乳细颗粒等。另外，以下的专利文献1中报告了将纤维素细颗粒作为原料的显色性高的着色细颗粒。但是这些细颗粒容易褪色，存在显色性的限度等问题，期待性能进一步改善。因此，近年作为新的检出用细颗粒，荧光纳米细颗粒备受关注。
使用了荧光纳米细颗粒的生物体分子的检出、定量等中利用的荧光试剂，显色性高、作为高灵敏度试剂使用。例如以下的专利文献2中公开了，向通过苯乙烯和丙烯酸聚合而得到的胶乳细颗粒导入荧光色素化合物得到的荧光胶乳细颗粒。另外，以下的专利文献3中记载了，通过将荧光色素化合物和硅烷偶联剂、硅烷化合物合成，能够得到含有荧光色素化合物的荧光二氧化硅细颗粒。
但是，这些荧光纳米细颗粒由于荧光色素化合物的导入量少，因此对于免疫色谱试剂盒而言得不到令人满意的显色性，另外，在颗粒的保存中产生颗粒彼此的聚集，存在在免疫色谱试剂盒中展开时产生堵塞、假阳性这种问题。
为了解决这种问题，以下的专利文献4中公开了荧光纤维素细颗粒，报告了特定的形状和粒径的范围的纤维素细颗粒以特定范围的含量含有荧光色素化合物的情况下，形成显色性高、颗粒的分散稳定性良好的荧光纤维素细颗粒，进而达成免疫色谱试剂盒的高灵敏度化。
但是，以下的专利文献4中，对于用于免疫色谱时的颗粒的展开性没有进行充分的研究，对于灵敏度/分散稳定性和展开性的兼顾没有谈及。
现有技术文献
专利文献
专利文献1：国际公开第2011/062157号
专利文献2：日本专利第5317899号公报
专利文献3：日本专利第5416039号公报
专利文献4：日本专利第6148033号公报
专利文献5：日本专利第3401170号公报
专利文献6：国际公开第2018/043687号
发明内容
发明要解决的问题
鉴于上述的现有技术的问题，本申请发明的目的在于，提供用于免疫色谱时维持充分的显色性/分散稳定性、并且免疫色谱展开时的展开性改善、可以减少展开不良的荧光纤维素细颗粒。进而通过改善展开性而展开时的本底着色得到改善，即使在极限检测浓度附近也可以达成良好的S/N比。
用于解决问题的方案
本发明人等为了解决前述问题而深入研究、反复实验，结果惊人地发现，荧光色素化合物以特定范围的含量与纤维素颗粒结合、进而具有杂环式结构的化合物以特定范围的含量与纤维素颗粒结合的情况下，在用于免疫色谱时，维持充分的显色强度/颗粒的分散稳定性，并且免疫色谱展开时的展开性得到改善、进而展开时的本底着色改善、即使在极限检测浓度附近也实现良好的S/N比，基于上述发现完成了本发明。
即，本发明如以下所述。
[1]一种荧光纤维素颗粒，其特征在于，其含有纤维素颗粒、荧光色素化合物和下述通式(1)所示的杂环式化合物，相对于1g荧光纤维素颗粒，该纤维素颗粒的含量为30质量％以上且90质量％以下，该荧光色素化合物的含量为1质量％以上且40质量％以下，并且该杂环式化合物的含量为3质量％以上且50质量％以下。
{式中，R1为与生物物质具有亲和性的官能团，并且R2为与该纤维素颗粒的醚键合部。}
[2]根据前述[1]所述的荧光纤维素颗粒，其中，前述杂环式化合物的R1为Cl和/或OH。
[3]根据前述[1]或[2]所述的荧光纤维素颗粒，其中，前述荧光纤维素颗粒的平均粒径为9nm以上且500nm以下。
[4]根据前述[1]～[3]中任一项所述的荧光纤维素颗粒，其中，前述荧光色素化合物与前述纤维素颗粒的OH基键合，并且前述杂环式化合物与前述纤维素颗粒的OH基键合。
[5]根据前述[1]～[4]中任一项所述的荧光纤维素颗粒，其中，前述荧光色素化合物为铕络合物。
[6]根据前述[1]～[5]中任一项所述的荧光纤维素颗粒，其借助物理吸附负载有生物物质。
[7]根据前述[6]所述的荧光纤维素颗粒，其中，前述生物物质为蛋白质、肽或核酸。
[8]根据前述[7]所述的荧光纤维素颗粒，其中，前述蛋白质为抗原或抗体。
[9]一种诊断药，其含有前述[1]～[8]中任一项所述的荧光纤维素颗粒。
[10]一种免疫色谱试剂盒，其含有前述[1]～[8]中任一项所述的荧光纤维素颗粒。
发明的效果
本发明的荧光纤维素颗粒若作为免疫色谱的显色颗粒使用，则维持显色性/分散稳定性、并且展开性优异。进而通过展开不良和本底着色得到改善，即使在极限检测浓度附近也可以达成良好的S/N比。
附图说明
图1为在显色的判定方法中、作为展开性的评价基准使用的免疫色谱(试验)带的示意图。分别对于展开上游4mm的着色和吸收垫的着色，将没有发现着色的情况设为(-)、将发现着色的情况设为(+)、将发现着色并且强的情况设为(++)。
具体实施方式
以下对本发明进行详细说明。
本发明的1的实施方式为一种荧光纤维素颗粒，其特征在于，其含有纤维素颗粒、荧光色素化合物和下述通式(1)所示的杂环式化合物，相对于1g荧光纤维素颗粒，该纤维素颗粒的含量为30质量％以上且90质量％以下，该荧光色素化合物的含量为1质量％以上且40质量％以下，并且该杂环式化合物的含量为3质量％以上且50质量％以下。
{式中，R1为与生物物质具有亲和性的官能团，并且R2为与该纤维素颗粒的醚键合部。}
本实施方式的荧光纤维素中的纤维素颗粒含量相对于1g荧光纤维素颗粒为30质量％以上且90质量％以下、优选35质量％以上且85％以下。
通式(1)中，优选R1为与生物物质具有亲和性的官能团、R2为与该纤维素颗粒的醚键合部，也可以R1成为与该纤维素颗粒的醚键合部、R2成为与生物物质具有亲和性的官能团。
本实施方式的荧光纤维素颗粒的制造中使用的原料纤维素颗粒的粒径也考虑到通过荧光色素化合物/杂环式化合物的修饰而粒径增大，小于最终得到的荧光纤维素颗粒的粒径，具体而言优选为3nm以上且480nm以下、更优选6nm以上且460nm以下。
本实施方式的荧光纤维素颗粒的原料若为纤维素则纤维素源没有特别限定。在此，若使用纤维素以外的原料，则导入荧光色素化合物时，由于化学的反应性的问题，不能导入充分量的荧光色素化合物。例如上述专利文献5中记载了，若在胶乳颗粒中含有超过12质量％的着色剂，则在免疫色谱试剂盒的细孔部堵塞的可能性增大。另外，专利文献6中公开了含有10质量％以上的聚集性发光材料的诊断药用荧光颗粒，但是可以使用的发光材料被限定。本来向胶乳导入大量的染料、荧光化学物质是极其困难的，即使可以大量导入，也会由于表面的结构走样、而球形度极端变差，因此为了大量导入染料、化学物质，不优选胶乳。与此相反地，纤维素即使含有大量的染料、化学物质，也可以保持结构。因此，正是由于为具有丰富的羟基的纤维素、才可以达成高的反应性和高的含量。因此，作为免疫色谱用的检出用颗粒的原材料，纤维素是合适的。另外，荧光色素化合物的含量可以由荧光色素化合物处理前后的重量变化算出。使用处理后的可以回收的颗粒的重量和处理前的纤维素颗粒的干透后的重量，算出荧光色素化合物成分的比率。
另外，处理前的纤维素颗粒的重量不清楚的情况下，对荧光纤维素颗粒进行纤维素酶处理、酸处理或碱处理而使聚合度降低。然后，将样品溶解于重水、通过FT-NMR利用13C-NMR进行测定，算出取代度。可以由该取代度算出荧光色素化合物的含量。此时，作为所使用的纤维素酶、酸、碱，均没有限定，例如作为纤维素酶，可列举出Onozuka RS(YakultPharmaceutical Industry Co.,Ltd.制)、Cellsoft(Novo Nordisk Pharma ltd制)、Meicelase(明治制果株式会社制)，作为酸，可列举出盐酸、硫酸、硝酸，作为碱，可列举出碱(alkali)。另外，处理前的纤维素颗粒的重量不清楚、并且荧光色素化合物含有氮原子的情况下，可以利用氮定量装置CHN CORDER通过发光分析法测定氮元素含有率，由所测定的氮元素含有率算出所含有的荧光色素化合物的含量。
荧光色素化合物的种类没有特别限定，可列举出例如具有N-羟基丁二酰亚胺酯基、酯基、羧基、马来酰亚胺基、异氰酸酯基、异硫氰酸酯基、氰基、卤素基、醛基、对硝基苯基、二乙氧基甲基、环氧基等活性取代基的荧光素类、罗丹明类、香豆素类、花青类的发荧光的化合物、含有铕的稀土络合物。作为荧光色素化合物，具体而言，可列举出芴、芴-9-乙酸、芴-2甲醛、9-芴-1-羧酸、9-芴-4-羧酸、9-芴肟、9-芴甲基-N-琥珀酰亚胺基碳酸酯、9-芴三苯基溴化磷鎓、5-氨基荧光素、8-氨基-1,3,6-萘三磺酸二钠水合物、磺酰罗丹明B、溴化乙啶、6-氨基荧光素、罗丹明B、罗丹明6G、8-苯胺基-1-萘磺酸铵、8-苯胺基-1-萘磺酸钠、8-苯胺基-1-萘磺酸镁、2,3-萘二醛、钙黄绿素钠、钙黄绿素、香豆素102、香豆素314、香豆素343、AMCA、5-羧基荧光素水合物、6-羧基荧光素水合物、氯化荧光素、2’,7’-二氯荧光素、2’,7’-二氯荧光素钠、2,3-二氨基萘、溴甲菲啶、2,3-二苯基马来K、荧光素、荧光素钠、荧光素二乙酸酯、香豆素-3-羧酸、7-羟基香豆素-3-羧酸、4-二甲基氨基偶氮苯-4’-羧酸、7-甲氧基香豆素-3-羧酸、氯化频哪氰醇、碘化频哪氰醇、溶剂绿7(Pyranine)、N-(1-芘基)马来酰亚胺、罗丹明6G、罗丹明B、磺酰荧光素、7-甲氧基香豆素-3-羧酸N-琥珀酰亚胺基、四溴荧光素钾、酸性红87、2’,4’,5’,7’-四溴-3,4,5,6-四氯荧光素、9H-芴-2-基异氰酸酯、荧光素5-异硫氰酸酯、酸性红92、3,4,5,6-四氯荧光素、四碘荧光素、5-(4,6二氯三嗪基)氨基荧光素(DTAF)、赤藓红B、5-(6-)羧基四甲基罗丹明-NHS酯、DYLIGHT-405-NHS酯、DY550-NHS酯、DY630-NHS酯、DY-631、DY-633、DY-635、DY-636、DY-650、DY-651-NHS酯、DY-777-NHS酯(以上Dy～为Dyomics公司制)、[4’-(4’-氨基-4-联苯基)-2,2’：6’,2”-三联吡啶-6,6”-二基双(甲基亚氨基二乙酸酯)]铕酸(III)钠(ATBTA-Eu3+)、BODYIPY650/665、ROX、TAMRA、CFSE、Cyto350、Cyto405、Cyto415、Cyto488、Cyto500LSS、Cyto505、Cyto510SS、Cyto514LSS、Cyto520LSS、Cyto532、Cyto546S、Cyto555、Cyto590、Cyto610、Cyto610、Cyto633、Cyto647、Cyto670、Cyto680、Cyto700、Cyto750、Cyto770、Cyto780、Cyto800(以上Cyto～为Cytodaiagnostics公司制)、ATTO532、ATTORho6G、ATTO542、ATTO550、ATTO565、ATTORho3B、ATTORho11、ATTORho12、ATTOThio12、ATTORho101、ATTO590、ATTORho13、ATTO594、ATTO610、ATTO620、ATTORho14、ATTO633、ATTO647N、ATTO647、ATTO655、ATTOOxa12、ATTO665、ATTO680、ATTO700、ATTO725、ATTO740(以上ATTO～为ATTO-TEC公司制)。作为这些荧光色素化合物的荧光波长，优选处于检出时不与水、蛋白质的波长重叠的400nm以上的范围内。波长的上限没有特别限定，作为波长越高越优选。更优选为500nm以上的范围的荧光色素化合物。荧光色素化合物进一步优选为铕络合物。
作为荧光纤维素颗粒与荧光色素化合物之间的化学键合，可列举出使纤维素的羟基与荧光色素化合物直接连接的方法、借助作为间隔物的某些化合物连接的方法。含有大量的荧光色素化合物的情况下，仅直接连接时存在极限，但是通过借助间隔物、能够大量导入。使用间隔物连接的情况下，间隔物的种类没有特别限定，可列举出例如氰尿酰氯、表氯醇、2-氯乙胺、11-氯十一烷硫醇、福尔马林、硅烷偶联剂、环氧改性有机硅系交联剂、乙二醛系树脂等具有2个以上的与羟基反应的部分的化合物。
本实施方式的荧光纤维素颗粒的荧光色素化合物的含量相对于1g荧光纤维素颗粒为1％质量以上且40质量％以下。若小于1质量％则作为免疫色谱试剂盒的检出用颗粒得不到充分的显色性。另一方面，通过为40质量％以下，源自荧光色素的浓度猝灭得到抑制、荧光强度良好，作为免疫色谱试剂盒灵敏度优异。优选的下限值为5质量％、优选的上限值为35质量％。
本实施方式的荧光纤维素颗粒中含有的杂环式化合物指的是下述通式(1)所示的杂环式化合物。
{式中，R1为与生物物质具有亲和性的官能团，并且R2为与该纤维素颗粒的醚键合部。}
R1若为与生物物质具有亲和性的官能团则没有特别限定，可列举出例如卤素基、氨基、羧基、巯基、羟基、醚基、酯基、亚胺基、苯基、苄基、芳基等。实际上导入到纤维素时，例如优选使用氰尿酰氯、三聚硫氰酸、2,4-双(苄氧基)-6-氯-1,3,5-三嗪(2,4-Bis(benzyloxy)-6-chloro-1,3,5-triazine)、2,4,6-三氨基-1,3,5-三嗪(2,4,6-Triamino-1,3,5-triazine)、2-氯-4,6-二氨基-1,3,5-三嗪(2-Chloro-4,6-diamino-1,3,5-triazine)、2-氯-4,6-二苯基-1,3,5-三嗪(2-Chloro-4,6-diphenyl-1,3,5-triazine)、2-溴-4,6-二苯基-1,3,5-三嗪(2-Bromo-4,6-diphenyl-1,3,5-triazine)、2,4-二氯-6-吗啉代-1,3,5-三嗪(2,4-Dichloro-6-morpholino-1,3,5-triazine)、2-氯-4,6-二甲氧基-1,3,5-三嗪(2-Chloro-4,6-dimethoxy-1,3,5-triazine)、4-(4,6-二甲氧基-1,3,5-三嗪-2-基)-4-甲基吗啉盐酸盐(4-(4,6-Dimethoxy-1,3,5-triazin-2-yl)-4-methylmorpholinium Chloride)。更优选为氰尿酰氯。R2为与纤维素颗粒的醚键合部。其可以为在与纤维素的OH基之间形成-O-键(O源自纤维素)的单键的部位。本说明书中，为单键的情况下，杂环式化合物的含量(％)基于通式(1)的除了R2之外的结构算出。
本实施方式的荧光纤维素颗粒的杂环式化合物的含量相对于1g荧光纤维素颗粒为3质量％以上且50质量％以下。通过设为3质量％以上，抑制免疫色谱试剂盒中使用的纤维素展开膜与颗粒之间的疏水性相互作用，颗粒在展开膜中的流动性改善，作为免疫色谱试剂盒的检出用颗粒得到充分的显色性。另一方面，通过设为50质量％以下，颗粒彼此不会由于疏水性相互作用而聚集，不会产生展开时的堵塞、假阳性。因此，作为免疫色谱试剂盒，得到充分的灵敏度。杂环式化合物的含量的优选下限值为5％以上、优选上限值为45％以下。
处理前的纤维素颗粒的重量不清楚的情况下，对荧光纤维素颗粒进行纤维素酶处理、酸处理或碱处理而使聚合度降低。然后，将样品溶解于重水、通过FT-NMR利用13C-NMR进行测定，算出取代度。可以由该取代度算出荧光色素化合物和杂环式化合物的含量。此时，作为所使用的纤维素酶、酸、碱，均没有限定，例如作为纤维素酶，可列举出Onozuka RS(Yakult Pharmaceutical Industry Co.,Ltd.制)、Cellsoft(Novo Nordisk Pharma ltd制)、Meicelase(明治制果株式会社制)，作为酸，可列举出盐酸、硫酸、硝酸，作为碱，可列举出碱(alkali)。另外，处理前的纤维素颗粒的重量不清楚、并且荧光色素化合物含有氮原子的情况下，可以利用氮定量装置CHN CORDER通过发光分析法测定氮元素含有率，由所测定的氮元素含有率算出所含有的荧光色素化合物和杂环式化合物的含量。
本实施方式的荧光纤维素颗粒或原料纤维素颗粒的粒径指的是通过对纤维素颗粒分散于液体而成的纤维素颗粒分散液使用颗粒粒度分布测定装置进行测定而得到的粒径。“平均粒径”指的是测定值的体积平均中值粒径的值。粒度分布测定装置存在应用各种测定原理的粒度分布测定装置，本实施方式中使用利用动态光散射法的粒度分布测定装置。如后文所述那样，实施例中使用日机装株式会社制的“NANOTRAC粒度分布测定装置UPA-EX150”。
本实施方式的荧光纤维素颗粒的平均粒径为9nm以上且500nm以下。若平均粒径处于该范围内则不易产生由于长期保存所导致的聚集、也适于免疫色谱试剂盒。作为诊断药使用的情况下，优选为20nm以上且500nm以下。若为20nm以上且500nm以下则可以兼顾并不会聚集的分散稳定性和不会堵塞的展开性。但是，为了改善作为免疫色谱试剂盒的灵敏度，也可以将2种以上的平均粒径的荧光纤维素颗粒混合来使用。
本实施方式的荧光纤维素颗粒可以借助物理吸附负载生物物质来利用。作为物理吸附的一例，可列举出离子键合、配位键合、金属键合、氢键合、亲水键合、疏水键合、范德华键合等，但是不限于它们。利用上述那样的各种力在荧光纤维素颗粒负载生物物质，由此能够制备具有荧光纤维素颗粒没有的功能的颗粒。
负载于本实施方式的荧光纤维素颗粒的“生物物质”指的是由生物体得到的各种物质，其种类没有特别限定。作为它们的一例，可列举出胶原、明胶、丝蛋白、肝素、透明质酸、淀粉、甲壳质、壳聚糖、氨基酸、肽、蛋白质、核酸、碳水化合物、脂肪酸、类萜、类胡萝卜素、四吡咯、辅因子、类固醇、类黄酮、生物碱、聚酮化合物、糖苷、酶、抗体、抗原、羧甲基纤维素、羧乙基纤维素、甲基纤维素等。通过将它们负载于荧光纤维素颗粒，能够实现荧光纤维素颗粒的生物相容性的改善、作为各种生物鉴定(bioassay)、诊断药的利用等。
本实施方式中，通过在荧光纤维素颗粒负载与检查对象物质特异性结合的物质，能够将荧光纤维素颗粒用作诊断药。检查对象物质指的是免疫血清检查、血液检查、细胞检查、基因检查等检查等中的测定对象，其种类没有特别限定。可列举出例如癌标记物、激素、感染症、自身免疫、血浆蛋白、TDM、凝固/纤溶、氨基酸、肽、蛋白、基因、细胞等。更具体而言，可列举出CEA、AFP、铁蛋白、β2微球蛋白、PSA、CA19-9、CA125、BFP、弹性蛋白酶1、胃蛋白酶原12、便潜血、尿β2微球蛋白、PIVKA-2、尿BTA、胰岛素、E3、HCG、HPL、LH、HCV抗原、HBs抗原、HBs抗体、HBc抗体、HBe抗原、HBe抗体、HTLV-1抗体、HIV抗体、弓浆虫抗体、梅毒、ASO、A型流感抗原、A型流感抗体、B型流感抗原、B型流感抗体、轮状病毒抗原、腺病毒抗原、轮状病毒·腺病毒抗原、A群链球菌、B群链球菌、念珠菌抗原、CD菌、隐球菌抗原、霍乱弧菌、脑膜炎球菌抗原、颗粒菌弹性蛋白酶、幽门螺杆菌抗体、O157抗体、O157抗原、钩端螺旋体抗体、曲霉抗原、MRSA、RF、总IgE、LE检查、CRP、IgG,A,M、IgD、转铁蛋白、尿白蛋白、尿转铁蛋白、肌红蛋白、C3·C4、SAA、LP(a)、α1-AC、α1-M、触珠蛋白、微转铁蛋白、APR评分、FDP、D二聚体、血浆素原、AT3、α2PI、PIC、PAI-1、蛋白质C、凝血因子X3、IV型胶原、透明质酸、GHbA1c、各种抗原、各种抗体、各种病毒、各种菌、各种氨基酸、各种肽、各种蛋白质、各种DNA、各种细胞等。
使用本实施方式的荧光纤维素颗粒作为诊断药时，可以在各种溶液中分散荧光纤维素颗粒来使用，优选为分散于pH＝5.0以上且11.0以下的缓冲液中而成的分散液。作为分散荧光纤维素颗粒的溶液，可以使用纯水、有机溶剂。可列举出例如磷酸缓冲液、甘氨酸缓冲液、Tris缓冲液、硼酸缓冲液、柠檬酸缓冲液、MES缓冲液、甲醇、乙醇、丙酮、四氢呋喃等。缓冲液的浓度没有特别限定，可以使用通常作为缓冲液使用的各种浓度的缓冲液。另外，分散液中的荧光纤维素颗粒浓度也没有特别限定，能够根据检查对象物质的种类、性质、浓度等适当调整。若分散液中的荧光纤维素颗粒浓度过低则检出性变差、不能达成高灵敏度化，因此优选为0.001质量％以上、更优选0.002质量％以上。另一方面，若浓度过高则产生由于浓度猝灭或聚集所导致的展开不良，不能期待高灵敏度，因此浓度优选为10质量％以下左右、更优选1.0％质量以下。
使用本实施方式的荧光纤维素颗粒作为诊断药时，为了改善测定灵敏度、促进抗原抗体反应，可以使用各种增敏剂。另外，为了抑制由于存在于检样中的其他物质引起的的非特异吸附，可以使用封闭剂等。本实施方式的荧光纤维素颗粒也可以如诊断药那样分散于任意的液体中来使用，但是也能够分散于其他的任意的固体中来使用、将颗粒固定化于固体表面来使用等。另外，通过将荧光纤维素颗粒着色，也能够改善颗粒的目视确认性、或改善检出灵敏度。
本实施方式的荧光纤维素颗粒中含有的纤维素颗粒的制造方法没有特别限定。可以使用利用湿式粉碎等的力学的手法分级而得到所希望的平均粒径的颗粒，而本实施方式中，将纤维素溶解于其良溶剂，混合水、有机溶剂、氨等得到凝固液，使用该凝固液来制备纤维素颗粒。通过使用该方法得到的纤维素颗粒的粒径能够通过凝固液的组成调整。无意限定本实施方式的荧光纤维素颗粒中含有的纤维素颗粒原材料的制造方法，以下作为制造方法1和2进行例示。
[制造方法1：纤维素颗粒的制作]
将纤维素棉绒溶解于纤维素的良溶剂。作为良溶剂，使用利用公知的方法制造的铜氨溶液。而作为凝固液，主要使用有机溶剂+水+氨混合系。边将该凝固液搅拌、边加入所制备的铜氨纤维素溶液进行凝固。进而加入硫酸进行中和、再生，由此得到含有目标的纤维素颗粒的浆料。此时浆料由于再生中使用的酸的残留而为酸性、进而含有通过中和产生的铵盐等杂质，因此需要纯化为包含纤维素颗粒和介质的纤维素分散液的操作。作为该纯化操作，重复使用离心分离-倾析-利用分散介质液体进行稀释的处理。此时所使用的分散介质液体的种类也没有特别限定，能够根据需要使用前述的各种亲水性溶剂。所得到的纤维素颗粒分散液中的纤维素颗粒也有可能在纯化操作的过程聚集，因此此时可以进行利用剪切等进行的分散处理。作为提供剪切的手段，使用高压均化器。对于如此得到的纤维素颗粒分散体使用粒度分布测定装置测定平均粒径和CV值。CV值为变异系数(Coefficient ofVariation)的省略、以体积基准表示纤维素颗粒分散液的粒度分布中的多分散度、利用以下的式(1)定义。该值越小则表示粒度分布越尖锐，相应地意味着纤维素颗粒的尺寸一致，其单位以(％)表示。
CV值(％)＝(利用粒度分布测定装置求出的体积粒度分布中的标准偏差)/(利用粒度分布测定装置求出的体积平均中值粒径)×100…式(1)
所得到的纤维素颗粒分散体根据需要也可以添加表面活性剂来使用。纤维素颗粒分散液也能够以原样的状态从不干燥来使用，也可以根据需要通过进行干燥而制备为纤维素颗粒。对所得到的纤维素颗粒使用电子显微镜进行观察、由该图像测定球形度和聚集常数。进而将纤维素颗粒溶解于氢氧化镉乙二胺溶液、由其粘度测定平均聚合度。在此，适于荧光纤维素颗粒制造的纤维素颗粒的平均聚合度为30以上且700以下。若平均聚合度为30以上且700以下则可以维持颗粒的均匀性、也可以稳定地含有荧光色素化合物，因此用于免疫色谱试剂盒时品质稳定。由此，荧光纤维素颗粒通过将进行染色前的纤维素颗粒的聚合度和平均粒径控制于本发明的范围内，可以制造适于免疫色谱试剂盒的荧光纤维素颗粒。为了制造荧光纤维素颗粒，纤维素颗粒的平均聚合度的下限值优选为35以上、更优选40以上。另外优选的上限值为650、更优选600。
[制造方法2：荧光纤维素颗粒的制作]
将利用上述制造方法1制作的纤维素颗粒添加到有机溶剂、进行分散。该纤维素颗粒可以被着色。另外，在此，作为有机溶剂，可列举出例如甲醇、乙醇、异丙醇、丁醇、戊醇、己醇、二乙基醚、异丙基醚、二氯甲烷、氯仿、四氯化碳、乙酸乙酯、乙酸甲酯、甲乙酮、环己烷、环戊烷、四氢呋喃、甲苯、己烷、水、苛性钠等，可以根据荧光色素化合物的种类使用1种或以2种以上的混合液形式使用。另外，成为荧光纤维素颗粒的原料的纤维素颗粒由于形成纤维素II晶体型，因此结晶度低，由此与以往的胶乳颗粒、二氧化硅颗粒的荧光色素导入量相比可以大幅增量。另外，为了增加荧光色素导入量，也可以将纤维素在物理上或化学上改质，导入氨基、巯基后与荧光色素化合物反应。
向含有该纤维素颗粒的溶液添加荧光色素化合物后，适当加入添加剂、或调整pH、或加温、冷却。对于浆料，反应中使用的荧光色素化合物等未反应物、副产物残留，需要将荧光纤维素颗粒和介质纯化的操作。作为该纯化操作，重复使用离心分离-倾析-利用分散介质液体进行稀释的处理。此时所使用的分散介质液体的种类也没有特别限定，可以根据需要使用前述的各种的亲水性或亲油性的溶剂或溶液。
进而，向含有该荧光纤维素颗粒的溶液添加杂环式化合物而并非荧光色素化合物后，适当加入添加剂、或调整pH、或加温、冷却。对于浆料，反应中使用的杂环式化合物等未反应物、副产物残留，需要将荧光纤维素颗粒和介质纯化的操作。纯化操作如上所述。
经过以上那样的工序，可以制造本实施方式的荧光纤维素颗粒。
实施例
以下列举出实施例、比较例对本发明进行具体说明，但是本发明不被实施例任何限定。需要说明的是，实施例、比较例中的主要的测定值利用以下的方法测定来得到。
＜荧光色素化合物的含量＞
荧光色素化合物成分相对于荧光纤维素颗粒的比率可以由荧光色素化合物处理前后的重量变化算出。使用处理后的可以回收的颗粒的重量和处理前的纤维素颗粒的干透后的重量由以下的式(2)算出荧光色素化合物成分的比率：
荧光色素化合物含量(％)＝1-{(处理前的纤维素颗粒的重量)/(荧光色素化合物处理后的荧光纤维素颗粒的重量)}×100…式(2)。
(处理前的纤维素颗粒的重量不清楚的情况)
对荧光纤维素颗粒进行纤维素酶处理、酸处理或碱处理后，将样品溶解于重水，制备3～5质量％重水溶液，通过FT-NMR利用13C-NMR(Avance400MHz)进行测定，算出取代度。对于取代度，将纤维素的C1的峰面积设为基准、由荧光色素化合物的峰面积算出。由该取代度和荧光色素化合物的分子量算出荧光色素化合物的含量。
(处理前的纤维素颗粒的重量不清楚、并且荧光色素化合物含有氮原子的情况)
对氮元素含有率使用氮定量装置CHN CORDER(Yanaco Analytical Instruments制)在下述测定条件下利用发光分析法进行测定。由所测定的氮元素含有率算出所含有的荧光色素化合物的含量。
测定方式：自积分方式
载气：氦气
助燃气体：高纯度氧气
助燃方式：氦气、氧气混合方式
＜杂环式化合物的含量＞
杂环式化合物成分相对于荧光纤维素颗粒的比率可以由荧光纤维素颗粒处理前后的重量变化算出。使用处理后的可以回收的颗粒的重量和处理前的纤维素颗粒的干透后的重量由以下的式(3)算出杂环式化合物成分的比率：
杂环式化合物含量(％)＝1-{(处理前的荧光纤维素颗粒的重量)/(杂环式化合物处理后的荧光纤维素颗粒的重量)}×100…式(3)。
(处理前的纤维素颗粒的重量不清楚的情况)
对杂环式化合物处理后的荧光纤维素颗粒进行纤维素酶处理、酸处理或碱处理后，将样品溶解于重水，制备3～5质量％重水溶液，通过FT-NMR利用13C-NMR(Avance400MHz)进行测定，算出取代度。对于取代度，将纤维素的C1的峰面积设为基准、由杂环式化合物的峰面积算出。由该取代度和杂环式化合物的分子量算出杂环式化合物的含量。
(处理前的纤维素颗粒的重量不清楚、并且荧光色素化合物含有氮原子的情况)
对氮元素含有率使用氮定量装置CHN CORDER(Yanaco Analytical Instruments制)在下述测定条件下利用发光分析法进行测定。由所测定的氮元素含有率算出所含有的杂环式化合物的含量。杂环式化合物处理前的荧光色素化合物也含有氮原子的情况下，可以通过与其的相对量算出。
测定方式：自积分方式
载气：氦气
助燃气体：高纯度氧气
助燃方式：氦气、氧气混合方式
＜粒径的测定方法＞
对于含有纤维素颗粒的浆料，以纤维素颗粒成为0.005质量％的方式利用蒸馏水进行稀释、用于测定。作为测定仪器，使用利用动态光散射法进行测定的日机装株式会社制的“NANOTRAC粒度分布测定装置UPA-EX150”进行测定。
＜免疫色谱评价的灵敏度的判定方法＞
显色的判定方法使用Cellmic公司制的荧光免疫色谱读出器“DxCELL系列HRDR-300”评价显色强度。另外，在以下的表1中，作为展开性的评价基准，对展开后的免疫色谱带照射UV灯时，分别对于图1所示的展开上游4mm和吸收垫，将没有发现着色的情况设为(-)、将发现着色的情况设为(+)、将发现着色并且强的情况设为(++)。
[实施例1]
制备纤维素浓度0.37质量％、铜浓度0.13质量％、氨浓度1.00质量％的铜氨纤维素溶液。进而制备四氢呋喃浓度87.5质量％、水浓度12.5质量％的凝固液。边使用磁力搅拌器将凝固液5000g缓慢搅拌，边向其中添加所制备的铜氨纤维素溶液500g。继续5秒左右搅拌后，加入10质量％的硫酸1000g进行中和、再生，得到含有纤维素颗粒的浆料6500g。
将所得到的浆料以10000rpm的速度离心分离10分钟。通过倾析而取出沉淀物，注入超纯水进行搅拌，再次进行离心分离。重复该操作数次直至pH成为6.0～7.0，然后利用高压均化器进行分散处理，得到纤维素颗粒分散液150g。测定所得到的纤维素颗粒的平均粒径，结果为205nm。
向玻璃制螺纹管加入[4’-(4’-氨基-4-联苯基)-2,2’：6’,2”-三联吡啶-6,6”-二基双(甲基亚氨基二乙酸酯)]铕酸(III)钠(ATBTA-Eu3+)(东京化成工业株式会社制)200mg和乙酸钠缓冲液6mL，向其中加入在丙酮2.5mL溶解氰尿酰氯(东京化成工业株式会社制)43mg而成的溶液。室温下反应1小时后，将反应液加入到丙酮100mL，所析出的固体：DTBTA-Eu3+通过离心分离而回收。然后利用丙酮50mL洗涤2次，将干燥物溶解于100mL的碳酸钠缓冲液，得到DTBTA-Eu3+溶液。
向茄型玻璃烧瓶加入含有纤维素颗粒的浆料100g、和所制作的DTBTA-Eu3+溶液100mL，安装玻璃制回流管，边使自来水回流进行冷却，边利用磁力搅拌器在60℃下搅拌3小时。然后使用离心分离机重复倾析-利用去离子水进行的稀释和洗涤数次，进而利用高压均化器进行分散处理，得到荧光纤维素颗粒分散液100g。
将所得到的荧光纤维素颗粒加入到茄型玻璃烧瓶，作为分散介质，加入4质量％氢氧化钠水溶液200g，添加氰尿酰氯(东京化成工业株式会社制)12g，安装玻璃制回流管，边使自来水回流进行冷却，边利用磁力搅拌器在60℃下搅拌3小时。然后使用离心分离机进行倾析-利用去离子水进行的稀释、洗涤3次。然后利用高压均化器进行分散处理，得到浆料状的改质了的荧光纤维素颗粒100g。测定所得到的荧光纤维素颗粒的平均粒径，结果为281nm。
[实施例2]
以成为以下的表1所示的含有率的方式改变对颗粒进行修饰的氰尿酰氯量进行处理，除此之外利用与实施例1相同的方法进行荧光纤维素颗粒的制造。
[比较例1]
利用与实施例1相同的方法进行颗粒染色，不实施氰尿酰氯修饰来进行荧光纤维素颗粒的制造。
[比较例2]
以成为以下的表1所示的含有率的方式改变对颗粒进行修饰的氰尿酰氯量进行处理，除此之外利用与实施例1相同的方法进行荧光纤维素颗粒的制造。
[荧光纤维素颗粒分散液的荧光强度测定]
将所得到的浆料状的荧光纤维素颗粒以纤维素颗粒成为0.002质量％的方式利用蒸馏水稀释，制备荧光强度测定用样品。将样品加入到1cm见方石英皿，利用分光荧光光度计(FP-8300/日本分光株式会社制)以符合荧光物质的激发波长/荧光波长进行测定。
[使用荧光纤维素颗粒制成的测试带中的展开性试验]
荧光纤维素颗粒使用所得到的荧光纤维素颗粒制作测试带，评价颗粒在展开膜中的展开性。
以下对测试带的制作进行说明。
将浓度5mg/ml的荧光纤维素颗粒(实施例1～2、比较例1～2)的分散液20μL(分散介质：蒸馏水)和蒸馏水500μL加入到微型管并轻轻搅拌后，将混合液以20000×g离心分离20分钟，将上清液去除。向其中加入保存用缓冲液(50mM硼酸缓冲液(pH 10.0)、10％海藻糖)526μL，分散颗粒，得到荧光纤维素颗粒分散液(0.038％)。
将上述荧光纤维素颗粒的分散液424μL均匀地涂布于聚酯制结合垫(conjugatepad)(6613、Ahlstrom公司制)(10×160mm)。在干燥机内、37℃下干燥30分钟，制作含有荧光纤维素颗粒而成的结合垫。
在支撑片(商品名AR9020,Adhesives Research公司制)上依次装配样品垫(Microline CBSP097、旭化成株式会社制)、前述结合垫、没有实施抗体固定化的硝基纤维素膜、和吸收垫(Type A/B Extra Thick Glass Fiber 8×10In、PALL公司制)，切断为4mm宽度、长度60mm的带状，得到测试带。需要说明的是，各构成构件分别将其两端与邻接的构件重叠2mm左右来粘贴。
将免疫色谱展开液80μL滴加到所制作的测试带的样品垫部分，放置15分钟后，利用UV灯(波长：375nm)观察测试带，如图1所示那样确认展开上游4mm的着色、和吸收垫中的着色。吸收垫的着色强表示流到吸收垫的颗粒多、即展开性良好。分别对于展开上游4mm、吸收垫，将没有发现着色的情况设为(-)、将发现着色的情况设为(+)、将发现着色并且强的情况设为(++)进行评价。结果如以下的表1所示。
[表1]
由表1所示的结果可知，对于实施例1和2的荧光纤维素颗粒，在展开上游均没有发现着色，吸收垫的着色均强，因此确认了为良好的展开性。与此相反地，比较例1中，在展开上游堵塞、产生展开不良、不能展开更多、几乎没有发现吸收垫的着色。比较例2中，可以确认吸收垫的着色，但是比实施例1、2弱，在展开上游液确认了着色，因此得不到对于免疫色谱而言充分的展开性。
[实施例3、4]
以成为以下的表2所示的含有率的方式改变所添加的荧光色素化合物量、对颗粒进行修饰的氰尿酰氯量进行处理，除此之外利用与实施例1相同的方法进行荧光纤维素颗粒的制造。
[实施例5、6]
将荧光色素化合物改变为5-(4,6二氯三嗪基)氨基荧光素(DTAF)(Sigma-Aldrich公司制)，和以成为以下的表2所示的含量的方式调整所添加的荧光色素化合物量、对颗粒进行修饰的氰尿酰氯量进行处理，除此之外利用与实施例1相同的方法进行荧光纤维素颗粒的制造。
[比较例3]
以成为以下的表2所示的含有率的方式改变对颗粒进行修饰的氰尿酰氯量进行处理，除此之外利用与实施例1相同的方法进行荧光纤维素颗粒的制造。
[比较例4～7]
以成为以下的表2所示的含有率的方式改变所添加的荧光色素化合物量、对颗粒进行修饰的氰尿酰氯量进行处理，除此之外利用与实施例1相同的方法进行荧光纤维素颗粒的制造。
[荧光纤维素颗粒分散液的荧光强度测定]
将所得到的浆料状的荧光纤维素颗粒，以纤维素颗粒成为0.002质量％的方式利用蒸馏水稀释，制备荧光强度测定用样品。将样品加入到1cm见方石英皿，利用分光荧光光度计(FP-8300/日本分光株式会社制)以符合荧光物质的激发波长/荧光波长进行测定。
[使用荧光纤维素颗粒制作的免疫色谱试剂盒中的显色强度试验]
使用所得到的荧光纤维素颗粒制作免疫色谱试剂盒、评价显色强度。
以下对免疫色谱试剂盒的制作进行说明。
将浓度5mg/ml的荧光纤维素颗粒(实施例1～6、比较例1～7)的分散液20μL(分散介质：蒸馏水)和10mM磷酸缓冲液(pH 7.0)180μL加入到5mL管并轻轻搅拌。向前述5mL管加入抗hCG抗体(Anti-hCG clone codes/5008,Medix Biochemica公司制)10μL(5.8mg/mL)，37℃下培养2小时，使抗hCG抗体吸附于前述荧光纤维素颗粒。
培养后，向5mL管加入封闭缓冲液(100mM硼酸(pH 8.5)、1重量％酪蛋白)，37℃下培养1小时，进行封闭。
将封闭后的5mL管以20000×g离心分离15分钟，将上清液去除。接着向其中加入洗涤液(50mM硼酸缓冲液(pH 10.0))，将颗粒分散。分散后，以20000×g离心分离15分钟，将上清液去除。向其中以颗粒重量成为0.038％的方式加入保存用缓冲液(50mM硼酸缓冲液(pH10.0)、10％海藻糖、4％组氨酸、0.4％酪蛋白)分散颗粒，得到荧光纤维素颗粒/生物体分子的复合颗粒的分散液。
将上述复合颗粒的分散液424μL均匀地涂布于聚酯制结合垫(6613、Ahlstrom公司制)(10×160mm)。在干燥机内、37℃下干燥30分钟，制作含有复合颗粒而成的结合垫。
以下对抗体固定化膜的制作方法进行说明。
在膜(长度25mm、商品名：Hi-Flow Plus120 Membrane、MILLIPORE公司制)的中央附近(距离端部约12mm)，作为宽度约1mm的测试线，以0.75μL/cm的涂布量涂布含有抗hCG抗体(alpha subunit of FSH(LH),clone code/6601、Medix Biochemica公司制)1mg/mL的溶液((50mM KH2PO4,pH7.0)+5％蔗糖)。
接着，作为宽度约1mm的对照线，以0.75μL/cm的涂布量涂布含有抗小鼠IgG抗体(Anti Mouse IgG、Dako公司制)1mg/mL的溶液((50mM KH2PO4,pH7.0)无糖)，50℃下干燥30分钟。需要说明的是，测试线与对照线的间隔设为6mm。接着，作为封闭处理，将前述膜整体在室温下浸渍于封闭缓冲液(组成：100mM硼酸(pH 8.5)、1重量％酪蛋白)中30分钟。
将前述膜转移到膜洗涤/稳定缓冲液(组成：10mM KH2PO4(pH 7.5)、1重量％蔗糖、0.1％胆酸钠)，室温下静置30分钟以上。提拉膜，置于纸巾上在室温下干燥一夜，制作抗体固定化膜。
在支撑片(商品名AR9020,Adhesives Research公司制)上依次装配样品垫(Microline CBSP097、旭化成株式会社制)、前述结合垫、前述抗体固定化膜、和吸收垫(Type A/B Extra Thick Glass Fiber 8×10In、PALL公司制)，切断为5mm宽度、长度60mm的带状，得到测试带。
需要说明的是，各构成构件分别将其两端与邻接的构件重叠2mm左右来粘贴。将检测限浓度(LOD)的重组hCG(ROHTO Pharmaceutical Co.,Ltd.制)80μL滴加到所制作的测试带的样品垫部分，放置15分钟后，使用Cellmic公司制的荧光免疫色谱读出器“DxCELL系列HRDR-300”确认测试线的显色强度。进而，滴加不含有抗原的样品80μL，同样地确认测试线的显色强度。由于以不含有抗原的样品确认的显色并非由本来的抗体-抗原反应形成的显色，因此成为非特异显色(噪音)。接着将非特异的显色与检测限浓度时的测试线之比作为S/N比算出。S/N比为信号与噪音的比，值越大于1则表示越能够与噪音区别。也就是说，表示对于检测限浓度的抗原能够检出。此次，S/N比为2以上时判断为能够检出，小于2时判断为不能检出。
另外，如图1所示那样，对展开后的测试带照射UV灯，分别对于展开上游4mm的着色和吸收垫，将没有发现着色的情况设为(-)、将发现着色的情况设为(+)、将发现着色并且强的情况设为(++)进行评价。结果如以下的表2所示。
由以下的表2所示的结果可知，对于实施例1～6的荧光纤维素颗粒，在展开上游均没有发现着色，表现出良好的展开性和S/N比。与此相反地，比较例1中，在展开上游堵塞、产生展开不良、不能检出线。比较例2中，在展开上游稍微产生堵塞、不能检出与其他例子相同的抗原浓度。比较例3中，没有产生展开上游的着色，但是吸收垫的着色比实施例弱，进而测试线强度也弱，不能检出与其他例子相同的抗原浓度，因此不能说具有对于免疫色谱而言充分的展开性。比较例4中，在展开上游产生堵塞，吸收垫的着色比实施例弱，进而测试线强度也弱，S/N比也小，因此不能说具有对于免疫色谱而言充分的展开性。比较例5中，从展开上游到膜整体，着色强，线强度的值高，但是即使为非特异、显色也变强，S/N比减小。比较例6中，颗粒的亮度弱，因此不能检出与其他例子相同的抗原浓度。比较例7中，没有发现展开上游的着色，但是产生浓度猝灭，颗粒的亮度变弱，灵敏度降低，不能检出与其他例子相同的抗原浓度。
[表2]
产业上的可利用性
本发明的荧光纤维素颗粒和使用其的免疫色谱试剂盒，由于可以高灵敏度地检出生物体试样中含有的被检出物质，因此能够合适地用于临床检查等中的免疫测定法。

Claims (10)

1.一种荧光纤维素颗粒，其特征在于，其含有纤维素颗粒、荧光色素化合物和下述通式(1)所示的杂环式化合物，相对于1g荧光纤维素颗粒，该纤维素颗粒的含量为30质量％以上且90质量％以下，该荧光色素化合物的含量为1质量％以上且40质量％以下，并且该杂环式化合物的含量为3质量％以上且50质量％以下，
式(1)中，R1为与生物物质具有亲和性的官能团，并且R2为与该纤维素颗粒的醚键合部。
2.根据权利要求1所述的荧光纤维素颗粒，其中，所述杂环式化合物的R1为Cl和/或OH。
3.根据权利要求1或2所述的荧光纤维素颗粒，其中，所述荧光纤维素颗粒的平均粒径为9nm以上且500nm以下。
4.根据权利要求1或2所述的荧光纤维素颗粒，其中，所述荧光色素化合物与所述纤维素颗粒的OH基键合，并且所述杂环式化合物与所述纤维素颗粒的OH基键合。
5.根据权利要求1或2所述的荧光纤维素颗粒，其中，所述荧光色素化合物为铕络合物。
6.根据权利要求1或2所述的荧光纤维素颗粒，其借助物理吸附负载有生物物质。
7.根据权利要求6所述的荧光纤维素颗粒，其中，所述生物物质为蛋白质、肽或核酸。
8.根据权利要求7所述的荧光纤维素颗粒，其中，所述蛋白质为抗原或抗体。
9.一种诊断药，其含有权利要求1或2所述的荧光纤维素颗粒。
10.一种免疫色谱试剂盒，其含有权利要求1或2所述的荧光纤维素颗粒。
CN202280070245.4A 2021-11-18 2022-10-03 荧光纤维素颗粒 Pending CN118119848A (zh)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP2021-187855 2021-11-18
JP2021187855 2021-11-18
PCT/JP2022/036982 WO2023089972A1 (ja) 2021-11-18 2022-10-03 蛍光セルロース粒子

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN118119848A true CN118119848A (zh) 2024-05-31

Family

ID=86396704

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202280070245.4A Pending CN118119848A (zh) 2021-11-18 2022-10-03 荧光纤维素颗粒

Country Status (5)

Country Link
JP (1) JPWO2023089972A1 (zh)
KR (1) KR20240056640A (zh)
CN (1) CN118119848A (zh)
TW (1) TW202321690A (zh)
WO (1) WO2023089972A1 (zh)

Family Cites Families (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS5416039B1 (zh) 1966-10-24 1979-06-19
BE757008A (fr) 1969-10-03 1971-04-02 Philips Nv Dispositif d'allumage successif de plusieurs lampes eclair a combustio
JPS6148033U (ja) 1984-09-04 1986-03-31 百代 田中 脱臭シ−ト
US20120225496A1 (en) * 2009-11-17 2012-09-06 Satoru Yoshida Organic colored microparticles, diagnostic reagent kit containing the same, and in vitro diagnosis method
JP2012032263A (ja) * 2010-07-30 2012-02-16 Kinki Univ 蛍光微粒子含有免疫測定用試薬
JP6148033B2 (ja) * 2013-02-22 2017-06-14 旭化成株式会社 蛍光色素化合物を含むセルロース微粒子
US20200181486A1 (en) 2016-08-31 2020-06-11 Sekisui Chemical Co., Ltd. Fluorescent particles for diagnostic agent and immunoassay reagent using same
US11353453B2 (en) * 2017-04-06 2022-06-07 Asahi Kasei Kabushiki Kaisha Hydrophilic colored cellulose microparticles
US20210080455A1 (en) * 2017-09-25 2021-03-18 Asahi Kasei Kabushiki Kaisha Organic Colored Microparticles, Diagnostic Reagent Kit, and In Vitro Diagnosis Method

Also Published As

Publication number Publication date
KR20240056640A (ko) 2024-04-30
WO2023089972A1 (ja) 2023-05-25
TW202321690A (zh) 2023-06-01
JPWO2023089972A1 (zh) 2023-05-25

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP6148033B2 (ja) 蛍光色素化合物を含むセルロース微粒子
US4784912A (en) Latex particles incorporating stabilized fluorescent rare earth labels
EP3508851A2 (en) Fluorescent particles for diagnostic agent and immunoassay reagent using same
US9562908B2 (en) Organic colored microparticles, diagnostic reagent kit containing the same, and in vitro diagnosis method
EP0451800A1 (en) Binding of allergens to a solid phase
EP3321684B1 (en) Resin-platinum complex and usage thereof
KR20090100350A (ko) 분석 장치에의 지시약 고정
MXPA05005950A (es) Dispositivos de ensayo de flujo directo autocalibrados.
WO2011096394A1 (ja) アナライト検出プローブおよびこれを用いたアナライトの検出方法
JP5367490B2 (ja) イムノクロマト法用テストストリップ
JP6306292B2 (ja) 水溶性多糖類を含むイムノクロマト用展開液
JP2013120120A (ja) ラテラルフロー型クロマト法用テストストリップ、およびそれを用いたアナライトの検出または定量方法
JP5006459B1 (ja) 標識用複合粒子
EP0070527B1 (en) Method of assaying biologically active substances and labelling agents therefor
Aikawa et al. Polystyrene latex particles containing europium complexes prepared by miniemulsion polymerization using bovine serum albumin as a surfactant for biochemical diagnosis
US5143825A (en) Stabilized substrate for use in an immunoassay
CN110476063B (zh) 亲水化着色纤维素微粒
CN118119848A (zh) 荧光纤维素颗粒
JP4219491B2 (ja) 乾式分析方法及び乾式分析要素
US6548310B1 (en) Particle for diagnostic agent and turbidmetric immunoassay using the same
JPH0472564A (ja) 免疫測定法
WO2010041736A1 (ja) 表面プラズモンを利用したアッセイ法
WO2022163124A1 (ja) イムノクロマトアッセイ用メンブレン、イムノクロマトアッセイ用テストストリップ、および検査方法
JP2000065832A (ja) フィルター状生物学的特異反応測定用担体およびそれを用いた測定方法
WO2022259989A1 (ja) 検体検査用偏光発光粒子

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination