JP2012032263A - 蛍光微粒子含有免疫測定用試薬 - Google Patents
蛍光微粒子含有免疫測定用試薬 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2012032263A JP2012032263A JP2010171689A JP2010171689A JP2012032263A JP 2012032263 A JP2012032263 A JP 2012032263A JP 2010171689 A JP2010171689 A JP 2010171689A JP 2010171689 A JP2010171689 A JP 2010171689A JP 2012032263 A JP2012032263 A JP 2012032263A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- immunoassay
- reagent
- fine particles
- antibody
- fluorescent
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 239000010419 fine particle Substances 0.000 title claims abstract description 27
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 title claims abstract description 25
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 claims abstract description 37
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 26
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims abstract description 19
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims abstract description 19
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims abstract description 19
- 229910052761 rare earth metal Inorganic materials 0.000 claims abstract description 11
- 239000010955 niobium Substances 0.000 claims abstract description 10
- 229910052693 Europium Inorganic materials 0.000 claims abstract description 5
- 229910052688 Gadolinium Inorganic materials 0.000 claims abstract description 5
- OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N Phosphorus Chemical compound [P] OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 5
- 229910052771 Terbium Inorganic materials 0.000 claims abstract description 5
- OGPBJKLSAFTDLK-UHFFFAOYSA-N europium atom Chemical compound [Eu] OGPBJKLSAFTDLK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 5
- UIWYJDYFSGRHKR-UHFFFAOYSA-N gadolinium atom Chemical compound [Gd] UIWYJDYFSGRHKR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 5
- 229910052746 lanthanum Inorganic materials 0.000 claims abstract description 5
- FZLIPJUXYLNCLC-UHFFFAOYSA-N lanthanum atom Chemical compound [La] FZLIPJUXYLNCLC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 5
- 229910052758 niobium Inorganic materials 0.000 claims abstract description 5
- GUCVJGMIXFAOAE-UHFFFAOYSA-N niobium atom Chemical compound [Nb] GUCVJGMIXFAOAE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 5
- 229910052698 phosphorus Inorganic materials 0.000 claims abstract description 5
- 239000011574 phosphorus Substances 0.000 claims abstract description 5
- GZCRRIHWUXGPOV-UHFFFAOYSA-N terbium atom Chemical compound [Tb] GZCRRIHWUXGPOV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 5
- LEONUFNNVUYDNQ-UHFFFAOYSA-N vanadium atom Chemical compound [V] LEONUFNNVUYDNQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 5
- 229910052727 yttrium Inorganic materials 0.000 claims abstract description 5
- VWQVUPCCIRVNHF-UHFFFAOYSA-N yttrium atom Chemical compound [Y] VWQVUPCCIRVNHF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 5
- 239000002245 particle Substances 0.000 claims description 8
- BTBUEUYNUDRHOZ-UHFFFAOYSA-N Borate Chemical compound [O-]B([O-])[O-] BTBUEUYNUDRHOZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 238000003317 immunochromatography Methods 0.000 claims description 4
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims description 4
- 229910052684 Cerium Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 229910052779 Neodymium Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 229910052775 Thulium Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 229910052769 Ytterbium Inorganic materials 0.000 claims description 3
- GWXLDORMOJMVQZ-UHFFFAOYSA-N cerium Chemical compound [Ce] GWXLDORMOJMVQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- QEFYFXOXNSNQGX-UHFFFAOYSA-N neodymium atom Chemical compound [Nd] QEFYFXOXNSNQGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- FRNOGLGSGLTDKL-UHFFFAOYSA-N thulium atom Chemical compound [Tm] FRNOGLGSGLTDKL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- NAWDYIZEMPQZHO-UHFFFAOYSA-N ytterbium Chemical compound [Yb] NAWDYIZEMPQZHO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 abstract description 7
- 230000004520 agglutination Effects 0.000 abstract description 6
- 230000008901 benefit Effects 0.000 abstract description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 abstract description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 10
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 8
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 7
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 7
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 7
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 6
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 4
- 239000011859 microparticle Substances 0.000 description 4
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 3
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 3
- 206010022000 influenza Diseases 0.000 description 3
- 239000004816 latex Substances 0.000 description 3
- 229920000126 latex Polymers 0.000 description 3
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 3
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 3
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 3
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 206010039101 Rhinorrhoea Diseases 0.000 description 2
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 2
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 2
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 2
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 2
- 238000012744 immunostaining Methods 0.000 description 2
- 239000002105 nanoparticle Substances 0.000 description 2
- 239000004081 narcotic agent Substances 0.000 description 2
- 208000010753 nasal discharge Diseases 0.000 description 2
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 2
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 2
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 2
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- 238000010992 reflux Methods 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- 241000712461 unidentified influenza virus Species 0.000 description 2
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 230000005526 G1 to G0 transition Effects 0.000 description 1
- 229910002422 La(NO3)3·6H2O Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 description 1
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 244000052616 bacterial pathogen Species 0.000 description 1
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000000601 blood cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 description 1
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 description 1
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 229920002301 cellulose acetate Polymers 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 1
- 230000005284 excitation Effects 0.000 description 1
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 239000003365 glass fiber Substances 0.000 description 1
- ZBKIUFWVEIBQRT-UHFFFAOYSA-N gold(1+) Chemical compound [Au+] ZBKIUFWVEIBQRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000035931 haemagglutination Effects 0.000 description 1
- 208000006454 hepatitis Diseases 0.000 description 1
- 231100000283 hepatitis Toxicity 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- 230000008105 immune reaction Effects 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 210000004880 lymph fluid Anatomy 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 239000004570 mortar (masonry) Substances 0.000 description 1
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 description 1
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 230000004962 physiological condition Effects 0.000 description 1
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 1
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 1
- 230000001235 sensitizing effect Effects 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 1
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 1
- QWVYNEUUYROOSZ-UHFFFAOYSA-N trioxido(oxo)vanadium;yttrium(3+) Chemical class [Y+3].[O-][V]([O-])([O-])=O QWVYNEUUYROOSZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UXBZSSBXGPYSIL-UHFFFAOYSA-K yttrium(iii) phosphate Chemical class [Y+3].[O-]P([O-])([O-])=O UXBZSSBXGPYSIL-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
Landscapes
- Investigating, Analyzing Materials By Fluorescence Or Luminescence (AREA)
- Investigating Or Analysing Materials By The Use Of Chemical Reactions (AREA)
Abstract
【課題】感度のよい蛍光免疫測定用試薬、測定方法、測定用キットを提供する。
【解決手段】本発明者等は、凝集反応の簡便性を生かしたまま、感度を向上させる研究を行ったところ、蛍光を発する微粒子を用いる方法を見出した。即ち、本発明は、ユーロピウム（Ｅｕ）、テルビウム（Ｔｂ）等の希土類元素が付活されたＭIＭIIＯ4又はＭIＡｌ5Ｏ12（ＭIはイットリウム（Ｙ）、ランタン（Ｌａ）又はガドリニウム（Ｇｄ）、ＭIIはニオブ（Ｎｂ）、リン（Ｐ）又はバナジウム（Ｖ））からなる蛍光微粒子を含有する免疫測定用試薬に関するものであり、好適には、蛍光微粒子は抗体または抗原と結合している。
【選択図】なし
【解決手段】本発明者等は、凝集反応の簡便性を生かしたまま、感度を向上させる研究を行ったところ、蛍光を発する微粒子を用いる方法を見出した。即ち、本発明は、ユーロピウム（Ｅｕ）、テルビウム（Ｔｂ）等の希土類元素が付活されたＭIＭIIＯ4又はＭIＡｌ5Ｏ12（ＭIはイットリウム（Ｙ）、ランタン（Ｌａ）又はガドリニウム（Ｇｄ）、ＭIIはニオブ（Ｎｂ）、リン（Ｐ）又はバナジウム（Ｖ））からなる蛍光微粒子を含有する免疫測定用試薬に関するものであり、好適には、蛍光微粒子は抗体または抗原と結合している。
【選択図】なし
Description
本発明は、蛍光微粒子を用いることを特徴とする免疫測定用試薬、それを用いた蛍光免疫測定方法および蛍光免疫測定用キットに関する。
ウイルス、細菌、タンパク質、ホルモン、麻薬、癌関連抗原などの検出には、早くて感度の高い抗原抗体反応が用いられる。そのための免疫反応試薬としては、酵素抗体法、ラテックス凝集法、金コロイド凝集法、血球凝集法などが知られている。
いずれも、抗体（または抗原）をプラスチック反応容器、ラテックス微粒子、金コロイド、血球などの固体に固定したものを用いる。
いずれも、抗体（または抗原）をプラスチック反応容器、ラテックス微粒子、金コロイド、血球などの固体に固定したものを用いる。
酵素抗体法では、プラスチック製の反応容器に抗体を固定させたものが一般的である。この容器の中で検体と反応させた後に、酵素を結合させた2次抗体を反応させ、さらに酵素の基質を添加して、基質から生成する色素の量を観察する。抗体を検査する時には、抗原を固定した容器を用いる。酵素を固定した2次抗体の代わりに、アイソトープを固定した2次抗体を用い、アイソトープの結合量をカウントするRIA法もある。両方法とも感度は高く定量性に優れている半面、途中で洗浄したり、2次抗体や基質を添加するなど、工程の多いのが欠点である。
凝集反応法では、これらの固体に抗体（または抗原）を固定し、検体と反応させた時の凝集の有無を観察する。凝集の有無は、肉眼的に凝集を観察する簡便な方法から、光透過の変化で計測判断する方法、更には、凝集バンドの出現を見るインムノクロマト法などが広く用いられている。上記の酵素抗体法に比べて、定量性と感度はやや低いものの、工程数が少ないのが特長である。特にインムノクロマト法は、簡便で肉眼判定もし易いため、麻薬、インフルエンザウイルス、肝炎ウイルスなどの、検体（または患者）の近くで迅速な測定が必要な時に便利である。
本願発明者等は、ユーロビウム付活リン酸イットリウムナノ粒子およびユーロビウム付活バナジウム酸イットリウムナノ粒子およびその製造方法について特許出願している（特許文献１）。また、希土類元素含有微粒子およびこれを用いる蛍光プローブについては、特許文献２に記載があるが、具体的に試薬を作製するに至っていない。
本発明が解決しようとする課題は、感度のよい蛍光免疫測定用試薬、測定方法、測定用キットを提供することである。
本発明者等は、凝集反応の簡便性を生かしたまま、感度を向上させる研究を行ったところ、蛍光を発する微粒子を用いる方法を見出した。即ち、本発明は以下からなる。
１．希土類元素が付活されたＭIＭIIＯ4又はＭIＡｌ5Ｏ12（ＭIはイットリウム（Ｙ）、ランタン（Ｌａ）又はガドリニウム（Ｇｄ）、ＭIIはニオブ（Ｎｂ）、リン（Ｐ）又はバナジウム（Ｖ））からなる蛍光微粒子を含有する免疫測定用試薬。
２．希土類元素がユーロピウム（Ｅｕ）、テルビウム（Ｔｂ）、ネオジム（Ｎｄ）、ツリウム（Ｔｍ）、イッテルビウム（Ｙｂ）またはセリウム（Ｃｅ）である前項１に記載の免疫測定用試薬。
３．蛍光微粒子が抗体または抗原と結合していることを特徴とする前項１または２に記載の免疫測定用試薬。
４．蛍光微粒子の粒径が５〜３００ｎｍであることを特徴とする前項１〜３のいずれか一に記載の免疫測定用試薬。
５．前項１〜４のいずれか一に記載の免疫測定用試薬を用いることを特徴とする免疫測定方法。
６．免疫測定方法が、イムノクロマトグラフィー法である前項５に記載の免疫測定方法。
７．ホウ酸緩衝液を展開溶媒とすることを特徴とする前項６に記載の免疫測定方法。
８．前項１〜４のいずれか一に記載の免疫測定用試薬を含む免疫測定用キット。
１．希土類元素が付活されたＭIＭIIＯ4又はＭIＡｌ5Ｏ12（ＭIはイットリウム（Ｙ）、ランタン（Ｌａ）又はガドリニウム（Ｇｄ）、ＭIIはニオブ（Ｎｂ）、リン（Ｐ）又はバナジウム（Ｖ））からなる蛍光微粒子を含有する免疫測定用試薬。
２．希土類元素がユーロピウム（Ｅｕ）、テルビウム（Ｔｂ）、ネオジム（Ｎｄ）、ツリウム（Ｔｍ）、イッテルビウム（Ｙｂ）またはセリウム（Ｃｅ）である前項１に記載の免疫測定用試薬。
３．蛍光微粒子が抗体または抗原と結合していることを特徴とする前項１または２に記載の免疫測定用試薬。
４．蛍光微粒子の粒径が５〜３００ｎｍであることを特徴とする前項１〜３のいずれか一に記載の免疫測定用試薬。
５．前項１〜４のいずれか一に記載の免疫測定用試薬を用いることを特徴とする免疫測定方法。
６．免疫測定方法が、イムノクロマトグラフィー法である前項５に記載の免疫測定方法。
７．ホウ酸緩衝液を展開溶媒とすることを特徴とする前項６に記載の免疫測定方法。
８．前項１〜４のいずれか一に記載の免疫測定用試薬を含む免疫測定用キット。
今回発明者らは、蛍光微粒子を選ぶことで、従来のラテックスや金コロイド粒子を用いた試薬よりも、感度を向上させることに成功し、より正確な診断を行うことが可能となった。
本発明で用いられる蛍光微粒子は、ＭIＭIIＯ４又はＭIＡｌ5Ｏ12（ＭIはイットリウム（Ｙ）、ランタン（Ｌａ）又はガドリニウム（Ｇｄ）、ＭIIはニオブ（Ｎｂ）、リン（Ｐ）又はバナジウム（Ｖ））に、希土類元素が付活された蛍光微粒子である。希土類元素は限定されないが、ユーロピウム（Ｅｕ）、テルビウム（Ｔｂ）、ネオジム（Ｎｄ）、ツリウム（Ｔｍ）、イッテルビウム（Ｙｂ）またはセリウム（Ｃｅ）が好適である。ユーロピウム（Ｅｕ）、テルビウム（Ｔｂ）がさらに好適である。
ＭIＭIIＯ4又はＭIＡｌ5Ｏ12（ＭIはイットリウム（Ｙ）、ランタン（Ｌａ）又はガドリニウム（Ｇｄ）、ＭIIはニオブ（Ｎｂ）、リン（Ｐ）又はバナジウム（Ｖ））は、ＬａＰＯ４、ＬａＶＯ４、ＬａＮｂＯ４、ＹＰＯ４、ＹＶＯ４、ＹＮｂＯ４、Ｙ３Ａｌ5Ｏ12、Ｇｄ３Ａｌ5Ｏ12が好適に用いられる。
ＭIＭIIＯ4又はＭIＡｌ5Ｏ12（ＭIはイットリウム（Ｙ）、ランタン（Ｌａ）又はガドリニウム（Ｇｄ）、ＭIIはニオブ（Ｎｂ）、リン（Ｐ）又はバナジウム（Ｖ））は、ＬａＰＯ４、ＬａＶＯ４、ＬａＮｂＯ４、ＹＰＯ４、ＹＶＯ４、ＹＮｂＯ４、Ｙ３Ａｌ5Ｏ12、Ｇｄ３Ａｌ5Ｏ12が好適に用いられる。
ＭIＭIIＯ４又はＭIＡｌ5Ｏ12に、希土類元素が付活された蛍光微粒子の製造方法は限定されるものではない。例えば、特開２００７−２８４３０４号公報に記載の方法が挙げられる。
本発明で用いられる蛍光微粒子の粒径は５〜３００ｎｍ、好ましくは、５０〜１００ｎｍである。
本発明で用いられる蛍光微粒子における希土類元素の付活量（ドープ量）（モル）は、特に限定されないが、０．０１〜６％、好ましくは、０．５〜３％とされる。この理由は、希土類元素イオンのドープ量が６％以上となると蛍光強度が減少するため好ましくないからである。
本発明で用いられる蛍光微粒子は、紫外部で励起し可視部で発光する。特に、１５０ｎｍ〜３００ｎｍの紫外線を照射することにより発光するものである。可視部の発光は、目視または各種検出機器によって検出される。
本願発明の免疫測定用試薬に含まれる蛍光微粒子は、好適には抗体または抗原と結合している。当該抗体または抗原が被検物質に直接または間接に結合することにより、被検物質を測定することが可能になる。例えば、蛍光微粒子標識抗体は、被検物質に対する抗体であってもよいし、被検物質に対する抗体の抗体（二次抗体）であってもよい。
本発明の免疫測定用試薬は、通常の免疫測定法に用いられる。例えば、抗体または抗原を固相に結合させて、周知の１ステップ法、２ステップ法等のサンドイッチ法、競合法等に用いられ、免疫反応により、固相上の抗体等との間に免疫複合体を形成した蛍光標識物の蛍光強度を測定することで、免疫測定を実施できる。
本発明の試薬は、好ましくは、イムノクロマトグラフィー法、免疫染色法に用いられる。
本発明の試薬は、好ましくは、イムノクロマトグラフィー法、免疫染色法に用いられる。
被検物質は、前記蛍光微粒子で標識された抗体または抗原と反応あるいは相互作用する物質であり、蛋白質、ペプチド、糖類、脂質、核酸、微生物等が挙げられ、具体的には、例えば、ウイルス抗原・抗体、病原菌由来抗原・抗体、毒素抗原・抗体、腫瘍マーカー、生理活性物質、酵素、受容体、核酸、ヌクレオチド、薬剤等が挙げられる。
これら抗原、抗体等を含む検体としては、例えば全血、血清、血漿、尿、鼻汁、リンパ液等の体液、便抽出液、組織片等を挙げることができる。
これら抗原、抗体等を含む検体としては、例えば全血、血清、血漿、尿、鼻汁、リンパ液等の体液、便抽出液、組織片等を挙げることができる。
蛍光微粒子で標識される抗体または抗原としては、所望の被検物質に対する抗体または抗原である。好ましい抗体は、モノクローナル抗体である。
蛍光微粒子と抗体または抗原との結合方法は限定されるものではない。例えば、蛍光粒子含有溶液に抗体または抗原を含有する溶液を添加して、数時間感作することにより結合させることができる。
本発明は、さらに当該免疫測定用試薬を用いることを特徴とする免疫測定方法に関する。免疫測定方法については、限定されるものではないが、好ましい免疫測定方法としては、イムノクロマトグラフィー法、免疫染色法である。
クロマトグラフィー用担体としては、好ましくは、セルロースアセテート膜、ニトロセルロース等が挙げられる。
展開溶媒としては、好適には、ホウ酸緩衝液が用いられる。好ましいｐＨは、生理的な条件であれば、特に限定されるものではない。
クロマトグラフィー用担体としては、好ましくは、セルロースアセテート膜、ニトロセルロース等が挙げられる。
展開溶媒としては、好適には、ホウ酸緩衝液が用いられる。好ましいｐＨは、生理的な条件であれば、特に限定されるものではない。
本発明はまた、当該免疫測定用試薬を含む免疫測定用キットに関する。本キットには、適宜、展開溶媒、プレート、担体、測定に必要な補助試薬等を含むことができる。
以下、実施例を挙げて本発明を詳細に説明するが、本発明の範囲はこれらの実施例により限定されるものではない。
実施例１ 蛍光微粒子の製造
（ＬａＮｂＯ４：Ｔｂ３＋微粒子の作製）
La(NO3)3・6H2O (2.5mmol) とNbCl5(2.5mmol)を、モル比が1：1になるようにエタノール20mLに溶解させた。さらに、この溶液にLa源に対してTbCl3・6H2O(1〜5 mol%)を加えた。その後、NaOH(18.5 mmol)を溶解させたエタノール100mLを、常圧下、系の沸点温度で加熱還流しながら1時間かけて滴下した後、さらに1時間加熱還流を行った。その後、室温まで放冷し、遠心分離（回転数13,000r.p.m)、洗浄（蒸留水、メタノール) を行い、2日間真空乾燥させた。得られた物質をメノウ乳鉢で粉砕後、600℃〜900℃で1時間熱処理を行い試料とした。
（ＬａＮｂＯ４：Ｔｂ３＋微粒子の作製）
La(NO3)3・6H2O (2.5mmol) とNbCl5(2.5mmol)を、モル比が1：1になるようにエタノール20mLに溶解させた。さらに、この溶液にLa源に対してTbCl3・6H2O(1〜5 mol%)を加えた。その後、NaOH(18.5 mmol)を溶解させたエタノール100mLを、常圧下、系の沸点温度で加熱還流しながら1時間かけて滴下した後、さらに1時間加熱還流を行った。その後、室温まで放冷し、遠心分離（回転数13,000r.p.m)、洗浄（蒸留水、メタノール) を行い、2日間真空乾燥させた。得られた物質をメノウ乳鉢で粉砕後、600℃〜900℃で1時間熱処理を行い試料とした。
（ＹＰＯ４：Ｅｕ微粒子およびＹＶＯ４：Ｅｕ微粒子の作製）
YPO4:Eu微粒子およびYVO4:Eu微粒子を特開2007-284304の方法に従い作製し、試料とした。
YPO4:Eu微粒子およびYVO4:Eu微粒子を特開2007-284304の方法に従い作製し、試料とした。
実施例２ 免疫測定用試薬の調製
実施例１で得た蛍光微粒子の試料0.25 %に対し抗インフルエンザウイルス抗体100μgを添加し、37℃で2時間感作した。さらにウシ血清アルブミン10%を含む緩衝液を用いて37℃で約16時間ブロッキングを行った後、7%のシュークロースおよび2%のウシ血清アルブミンを含む緩衝液を用いて0.5%の粒子濃度に調整したものを抗インフルエンザウイルス抗体感作粒子とした。感作粒子をさらにグラスファイバー上に塗布し、真空乾燥したものを試験に用いた。また、固定相には、2mg/mLの抗インフルエンザウイルス抗体を感作しウシ血清アルブミンを含む緩衝液でブロッキングし、さらに、界面活性剤を含む緩衝液で洗浄したメンブレンを試験に用いた。
インフルエンザウイルス感染者の鼻汁を被検試料として用いた。これをホウ酸緩衝液で希釈したものを測定試料とし、本試験試料をメンブレン上で展開させた。励起波長254nmを照射し、蛍光を目視で観察した。
実施例１で得た蛍光微粒子の試料0.25 %に対し抗インフルエンザウイルス抗体100μgを添加し、37℃で2時間感作した。さらにウシ血清アルブミン10%を含む緩衝液を用いて37℃で約16時間ブロッキングを行った後、7%のシュークロースおよび2%のウシ血清アルブミンを含む緩衝液を用いて0.5%の粒子濃度に調整したものを抗インフルエンザウイルス抗体感作粒子とした。感作粒子をさらにグラスファイバー上に塗布し、真空乾燥したものを試験に用いた。また、固定相には、2mg/mLの抗インフルエンザウイルス抗体を感作しウシ血清アルブミンを含む緩衝液でブロッキングし、さらに、界面活性剤を含む緩衝液で洗浄したメンブレンを試験に用いた。
インフルエンザウイルス感染者の鼻汁を被検試料として用いた。これをホウ酸緩衝液で希釈したものを測定試料とし、本試験試料をメンブレン上で展開させた。励起波長254nmを照射し、蛍光を目視で観察した。
Claims (8)
- 希土類元素が付活されたＭIＭIIＯ4又はＭIＡｌ5Ｏ12（ＭIはイットリウム（Ｙ）、ランタン（Ｌａ）又はガドリニウム（Ｇｄ）、ＭIIはニオブ（Ｎｂ）、リン（Ｐ）又はバナジウム（Ｖ））からなる蛍光微粒子を含有する免疫測定用試薬。
- 希土類元素がユーロピウム（Ｅｕ）、テルビウム（Ｔｂ）、ネオジム（Ｎｄ）、ツリウム（Ｔｍ）、イッテルビウム（Ｙｂ）またはセリウム（Ｃｅ）である請求項１に記載の免疫測定用試薬。
- 蛍光微粒子が抗体または抗原と結合していることを特徴とする請求項１または２に記載の免疫測定用試薬。
- 蛍光微粒子の粒径が５〜３００ｎｍであることを特徴とする請求項１〜３のいずれか一に記載の免疫測定用試薬。
- 請求項１〜４のいずれか一に記載の免疫測定用試薬を用いることを特徴とする免疫測定方法。
- 免疫測定方法が、イムノクロマトグラフィー法である請求項５に記載の免疫測定方法。
- ホウ酸緩衝液を展開溶媒とすることを特徴とする請求項６に記載の免疫測定方法。
- 請求項１〜４のいずれか一に記載の免疫測定用試薬を含む免疫測定用キット。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2010171689A JP2012032263A (ja) | 2010-07-30 | 2010-07-30 | 蛍光微粒子含有免疫測定用試薬 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2010171689A JP2012032263A (ja) | 2010-07-30 | 2010-07-30 | 蛍光微粒子含有免疫測定用試薬 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2012032263A true JP2012032263A (ja) | 2012-02-16 |
Family
ID=45845844
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2010171689A Pending JP2012032263A (ja) | 2010-07-30 | 2010-07-30 | 蛍光微粒子含有免疫測定用試薬 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2012032263A (ja) |
Cited By (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2014181863A1 (ja) | 2013-05-10 | 2014-11-13 | デンカ生研株式会社 | 蛍光色素で標識された可視域着色不溶性担体粒子の調製とそれを用いたイムノアッセイ法 |
| WO2015016310A1 (ja) | 2013-08-02 | 2015-02-05 | デンカ生研株式会社 | イムノクロマト法における光反射材を用いた検出光の増強方法 |
| JP2017515130A (ja) * | 2014-05-07 | 2017-06-08 | エヌプレックス・ピーティーワイ・リミテッド | 合成糸をベースとする側方流動イムノアッセイ |
| JP2020115139A (ja) * | 2020-03-11 | 2020-07-30 | 国立大学法人千葉大学 | 血管炎の検査方法 |
| WO2021095790A1 (ja) * | 2019-11-14 | 2021-05-20 | インターメディック株式会社 | 固相反応チップを用いた測定方法 |
| EP3824286A1 (fr) * | 2018-07-18 | 2021-05-26 | Ecole Polytechnique | Test a diffusion capillaire mettant en oeuvre des nanoparticules inorganiques photoluminescentes |
| WO2023089972A1 (ja) * | 2021-11-18 | 2023-05-25 | 旭化成株式会社 | 蛍光セルロース粒子 |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2003262637A (ja) * | 2002-03-08 | 2003-09-19 | Nitto Denko Corp | 検査片及び検査方法 |
| JP2007284304A (ja) * | 2006-04-18 | 2007-11-01 | Univ Kinki | ユーロピウム付活リン酸イットリウムナノ粒子、ユーロピウム付活バナジウム酸イットリウムナノ粒子及びこれら粒子からなる蛍光体並びにこれらの製造方法 |
| JP2009084576A (ja) * | 2002-03-05 | 2009-04-23 | Dainippon Printing Co Ltd | 希土類元素含有微粒子およびそれを用いた蛍光プローブ |
| WO2010016289A1 (ja) * | 2008-08-06 | 2010-02-11 | コニカミノルタエムジー株式会社 | 量子ドットを含有する蛍光標識剤 |
-
2010
- 2010-07-30 JP JP2010171689A patent/JP2012032263A/ja active Pending
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2009084576A (ja) * | 2002-03-05 | 2009-04-23 | Dainippon Printing Co Ltd | 希土類元素含有微粒子およびそれを用いた蛍光プローブ |
| JP2003262637A (ja) * | 2002-03-08 | 2003-09-19 | Nitto Denko Corp | 検査片及び検査方法 |
| JP2007284304A (ja) * | 2006-04-18 | 2007-11-01 | Univ Kinki | ユーロピウム付活リン酸イットリウムナノ粒子、ユーロピウム付活バナジウム酸イットリウムナノ粒子及びこれら粒子からなる蛍光体並びにこれらの製造方法 |
| WO2010016289A1 (ja) * | 2008-08-06 | 2010-02-11 | コニカミノルタエムジー株式会社 | 量子ドットを含有する蛍光標識剤 |
Cited By (13)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2014181863A1 (ja) | 2013-05-10 | 2014-11-13 | デンカ生研株式会社 | 蛍光色素で標識された可視域着色不溶性担体粒子の調製とそれを用いたイムノアッセイ法 |
| WO2015016310A1 (ja) | 2013-08-02 | 2015-02-05 | デンカ生研株式会社 | イムノクロマト法における光反射材を用いた検出光の増強方法 |
| KR20160036574A (ko) | 2013-08-02 | 2016-04-04 | 덴카 세이켄 가부시키가이샤 | 면역크로마토그래피법에서의 광 반사재를 사용한 검출광의 증강 방법 |
| US10345294B2 (en) | 2013-08-02 | 2019-07-09 | Denka Seiken Co., Ltd. | Method of amplifying detection light using light-reflecting material in immunochromatography |
| US11371987B2 (en) | 2013-08-02 | 2022-06-28 | Denka Company Limited | Method of amplifying detection light using light-reflecting material, in immunochromatography |
| JP2017515130A (ja) * | 2014-05-07 | 2017-06-08 | エヌプレックス・ピーティーワイ・リミテッド | 合成糸をベースとする側方流動イムノアッセイ |
| US10379119B2 (en) | 2014-05-07 | 2019-08-13 | Lumos Diagnostics IP Pty Ltd | Synthetic thread based lateral flow immunoassay |
| JP2021530700A (ja) * | 2018-07-18 | 2021-11-11 | エコール ポリテクニックEcole Polytechnique | フォトルミネッセンス無機ナノ粒子を使用した毛細管現象試験 |
| EP3824286A1 (fr) * | 2018-07-18 | 2021-05-26 | Ecole Polytechnique | Test a diffusion capillaire mettant en oeuvre des nanoparticules inorganiques photoluminescentes |
| JP7438183B2 (ja) | 2018-07-18 | 2024-02-26 | エコール ポリテクニック | フォトルミネッセンス無機ナノ粒子を使用した毛細管現象試験 |
| WO2021095790A1 (ja) * | 2019-11-14 | 2021-05-20 | インターメディック株式会社 | 固相反応チップを用いた測定方法 |
| JP2020115139A (ja) * | 2020-03-11 | 2020-07-30 | 国立大学法人千葉大学 | 血管炎の検査方法 |
| WO2023089972A1 (ja) * | 2021-11-18 | 2023-05-25 | 旭化成株式会社 | 蛍光セルロース粒子 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN109975557B (zh) | Il-6/pct联合检测时间分辨检测试剂盒及方法 | |
| JP2012032263A (ja) | 蛍光微粒子含有免疫測定用試薬 | |
| KR100804202B1 (ko) | 크로마토그래피 측정 시스템 | |
| CN102359958B (zh) | 一种检测降钙素原的试剂盒及降钙素原的检测方法 | |
| US20140287527A1 (en) | Method and apparatus for time-resolved fluorescence immunoassay testing | |
| EP3605091B1 (en) | Kit, method and reagent for measuring measurement target substance | |
| CN112034160B (zh) | 一种基于稀土纳米材料荧光放大的循环肿瘤细胞检测试剂盒及其应用 | |
| JP2015230280A (ja) | 分析対象物の検出方法及びラテラルフロー用テストストリップ | |
| Xu et al. | EuNPs-mAb fluorescent probe based immunochromatographic strip for rapid and sensitive detection of porcine epidemic diarrhea virus | |
| Liao et al. | Lanthanide chelate-encapsulated polystyrene nanoparticles for rapid and quantitative immunochromatographic assay of procalcitonin | |
| US11674966B2 (en) | Kit and method for measuring measurement target substance in biological sample | |
| CN103575902B (zh) | 一种时间分辨荧光法四项综合检测卵巢癌试剂盒及其应用 | |
| Li et al. | NIR-II emitting rare-earth nanoparticles for a lateral flow immunoassay in hemolysis | |
| EP2573570B1 (en) | Cortisol immunoassay using fluorescent particles | |
| EP3614146B1 (en) | Method of detecting aldosterone and renin | |
| Aikawa et al. | Polystyrene latex particles containing europium complexes prepared by miniemulsion polymerization using bovine serum albumin as a surfactant for biochemical diagnosis | |
| US11486879B2 (en) | Kit and method for measuring measurement target substance in biological sample | |
| Zhang et al. | Second near-infrared fluorescent dye for lateral flow immunoassays rapid detection of influenza A/B virus | |
| CN101864291A (zh) | 荧光纳米粒子Ru(bpy)3/SiO2、其制备方法及应用 | |
| CN105181958A (zh) | 一种基于间接竞争酶联免疫法定量检测80nmAuNPs的方法 | |
| CN103983622A (zh) | 基于两种量子点之间能量转移的赭曲霉毒素a检测方法 | |
| CN101377499A (zh) | 神经特异性烯醇化酶化学发光免疫分析测定试剂盒及其制备方法 | |
| WO2019223691A1 (zh) | 一种化学发光分析测定方法及使用该方法的系统、试剂盒 | |
| WO2020252871A1 (zh) | 一种用于均相化学发光检测的受体试剂及其应用 | |
| CN116559429B (zh) | 一种检测HIV p24抗原浓度与CD4+T细胞数量的侧向层析试剂盒 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20130712 |
|
| A521 | Written amendment |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20130807 |
|
| A977 | Report on retrieval |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A971007 Effective date: 20131220 |
|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20140107 |
|
| A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20140508 |