CN118033148A - 一种用于检测抗mda5抗体的荧光免疫层析试纸条 - Google Patents
一种用于检测抗mda5抗体的荧光免疫层析试纸条 Download PDFInfo
- Publication number
- CN118033148A CN118033148A CN202410437745.8A CN202410437745A CN118033148A CN 118033148 A CN118033148 A CN 118033148A CN 202410437745 A CN202410437745 A CN 202410437745A CN 118033148 A CN118033148 A CN 118033148A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- antibody
- fluorescent
- mda
- mda5
- nitrocellulose membrane
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 238000012360 testing method Methods 0.000 title claims abstract description 69
- 238000003317 immunochromatography Methods 0.000 title claims abstract description 21
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims abstract description 61
- 239000004005 microsphere Substances 0.000 claims abstract description 61
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims abstract description 49
- 101001082073 Homo sapiens Interferon-induced helicase C domain-containing protein 1 Proteins 0.000 claims abstract description 46
- 102100027353 Interferon-induced helicase C domain-containing protein 1 Human genes 0.000 claims abstract description 45
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims abstract description 41
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims abstract description 41
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims abstract description 41
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 claims abstract description 35
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 claims abstract description 35
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 claims abstract description 29
- 238000003908 quality control method Methods 0.000 claims abstract description 21
- 239000002250 absorbent Substances 0.000 claims abstract description 11
- 230000002745 absorbent Effects 0.000 claims abstract description 11
- 102000006382 Ribonucleases Human genes 0.000 claims abstract description 6
- 108010083644 Ribonucleases Proteins 0.000 claims abstract description 6
- 108010067755 dinitrophenyl-bovine serum albumin Proteins 0.000 claims abstract 5
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 24
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 claims description 21
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 claims description 21
- 239000011521 glass Substances 0.000 claims description 21
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 claims description 18
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 17
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 claims description 16
- 238000000576 coating method Methods 0.000 claims description 16
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 15
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims description 14
- 238000005507 spraying Methods 0.000 claims description 13
- HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N α-D-glucopyranosyl-α-D-glucopyranoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(O)C(O)C(O)C(CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 12
- HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N Trehalose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N 0.000 claims description 12
- HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N alpha,alpha-trehalose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N 0.000 claims description 12
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 claims description 12
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 12
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 9
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 claims description 9
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 claims description 8
- 238000007789 sealing Methods 0.000 claims description 8
- 239000005018 casein Substances 0.000 claims description 7
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 claims description 7
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 claims description 7
- 239000002184 metal Substances 0.000 claims description 7
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 7
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 6
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 claims description 5
- 239000002981 blocking agent Substances 0.000 claims description 5
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 claims description 5
- 239000002245 particle Substances 0.000 claims description 5
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 claims description 5
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 claims description 5
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 238000009472 formulation Methods 0.000 claims description 4
- 229910052693 Europium Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 claims description 3
- 239000013522 chelant Substances 0.000 claims description 3
- OGPBJKLSAFTDLK-UHFFFAOYSA-N europium atom Chemical compound [Eu] OGPBJKLSAFTDLK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 102000040650 (ribonucleotides)n+m Human genes 0.000 claims description 2
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 239000010931 gold Substances 0.000 claims description 2
- 229910052737 gold Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 150000007523 nucleic acids Chemical group 0.000 claims description 2
- 238000002791 soaking Methods 0.000 claims 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 abstract description 13
- 230000029087 digestion Effects 0.000 abstract description 4
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 abstract description 4
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 46
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 18
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 10
- 239000007987 MES buffer Substances 0.000 description 8
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 7
- 201000002481 Myositis Diseases 0.000 description 6
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 6
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 6
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 6
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 6
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 5
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 5
- 230000008569 process Effects 0.000 description 5
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 4
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 4
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 4
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 4
- 208000029523 Interstitial Lung disease Diseases 0.000 description 3
- 230000008859 change Effects 0.000 description 3
- 230000000875 corresponding effect Effects 0.000 description 3
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 3
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 3
- 201000001981 dermatomyositis Diseases 0.000 description 3
- 230000002250 progressing effect Effects 0.000 description 3
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 3
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 3
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000709687 Coxsackievirus Species 0.000 description 2
- 241000710188 Encephalomyocarditis virus Species 0.000 description 2
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 2
- 241001325464 Rhinovirus A Species 0.000 description 2
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 239000012470 diluted sample Substances 0.000 description 2
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 238000010166 immunofluorescence Methods 0.000 description 2
- 239000003761 preservation solution Substances 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- 238000000527 sonication Methods 0.000 description 2
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 2
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 2
- 238000002604 ultrasonography Methods 0.000 description 2
- 239000013026 undiluted sample Substances 0.000 description 2
- 238000012795 verification Methods 0.000 description 2
- UFBJCMHMOXMLKC-UHFFFAOYSA-N 2,4-dinitrophenol Chemical compound OC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1[N+]([O-])=O UFBJCMHMOXMLKC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 241000709677 Coxsackievirus B1 Species 0.000 description 1
- 241000709675 Coxsackievirus B3 Species 0.000 description 1
- 241000709661 Enterovirus Species 0.000 description 1
- 208000010201 Exanthema Diseases 0.000 description 1
- 241000710842 Japanese encephalitis virus Species 0.000 description 1
- 208000010428 Muscle Weakness Diseases 0.000 description 1
- 208000021642 Muscular disease Diseases 0.000 description 1
- 206010028372 Muscular weakness Diseases 0.000 description 1
- 201000009623 Myopathy Diseases 0.000 description 1
- 108020002230 Pancreatic Ribonuclease Proteins 0.000 description 1
- 102000005891 Pancreatic ribonuclease Human genes 0.000 description 1
- 108090000944 RNA Helicases Proteins 0.000 description 1
- 102000004409 RNA Helicases Human genes 0.000 description 1
- 241000711975 Vesicular stomatitis virus Species 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 230000003127 anti-melanomic effect Effects 0.000 description 1
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 230000002596 correlated effect Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 238000013399 early diagnosis Methods 0.000 description 1
- 201000005884 exanthem Diseases 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 208000013643 idiopathic inflammatory myopathy Diseases 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000011065 in-situ storage Methods 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 238000004393 prognosis Methods 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 description 1
- 229910052761 rare earth metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 206010037844 rash Diseases 0.000 description 1
- 238000013112 stability test Methods 0.000 description 1
- 238000011269 treatment regimen Methods 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Landscapes
- Investigating Or Analysing Materials By The Use Of Chemical Reactions (AREA)
Abstract
本发明提供一种用于检测抗MDA5抗体的荧光免疫层析试纸条。本发明的荧光免疫层析试纸条包括底板和依次搭载在所述底板上的样本垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水纸，结合垫上包被有荧光微球标记的MDA5抗原和荧光微球标记的DNP‑BSA，硝酸纤维素膜上设有抗体检测线和质控线。本发明中使用的MDA5抗原标记的荧光微球相比常规技术工艺，在微球标记时引入特定RNA序列共同反应并于标记完成后使用核糖核酸酶消解，使得最终得到的试纸条对抗MDA5抗体的检测敏感性更高，进一步降低了漏检阳性样本的风险。
Description
技术领域
本发明属于体外诊断生化检测技术领域，具体涉及一种用于检测抗MDA5抗体的荧光免疫层析试纸条。
背景技术
时间分辨荧光免疫分析技术( time-resolved fluoroimmunoassay，TRFIA) 是依赖于稀土元素独特的荧光性质而发展起来的一种免疫检测技术，它集合了放射免疫技术、酶联免疫技术以及普通荧光免疫技术的优点，具有灵敏度高、特异性强、稳定性好，且线性范围宽，荧光寿命长，操作简单和非放射性等特点。基于时间分辨荧光免疫分析技术发展的免疫层析技术较传统的酶联免疫法，除了具有操作简易、反应迅速和时耗较短等特点外，还兼具低成本和高特异性，尤其适用于临场检测。
抗黑色素瘤分化相关基因5（MDA5）抗体是2005 年日本学者Sato提出的一种肌炎特异性抗体，抗 MDA5 抗体的自身抗原为一种由 MDA5 基因编码的RNA解旋酶，在抵抗病毒的固有免疫中起着关键作用。抗MDA5抗体阳性的皮肌炎是一种罕见的特发性炎症性肌病亚型，临床上通常表现为对称性近端肌无力、特征性皮肌炎皮疹等。抗 MDA5 抗体阳性的患者可能提示有更高的风险患快速进展的间质性肺炎，抗 MDA5 抗体滴度与快速进展的间质性肺炎严重度呈正相关，因此对于易患快速进展的间质性肺炎的患者来说，早期的诊断和治疗至关重要。综合来看，抗MDA5抗体的检测适用于辅助诊断临床无肌病皮肌炎、预测预后和指导制定治疗方案。
目前市面上测试抗MDA5抗体的方法主要是ELISA，还未见基于荧光免疫层析技术检测抗MDA5抗体的荧光免疫层析试纸条。由于抗MDA5抗体对MDA5阳性的肌炎具有极高的诊断价值，选用合适的检测方法来确定结果的准确性至关重要。因此，检测该指标使用的试剂需要保证极高的敏感性和特异性。然而常规的基于ELISA平台开发的抗MDA5抗体检测试剂，往往检测成本高，耗时长，且易受自身抗体、嗜异性抗体等干扰而产生假阳，而以荧光免疫层析试纸条的方式进行开发，虽然易满足操作简易、反应迅速和时耗较短等特点，但想要保证足够高的检测敏感性、特异性和准确度，依然存在不小的挑战。
发明内容
本发明所要解决的问题是提供一种能够提高抗MDA5抗体检测敏感度和检测结果准确度的荧光免疫层析试纸条。
为解决上述技术问题，本发明采用如下技术方案：
本发明第一方面提供一种用于检测抗MDA5抗体的荧光免疫层析试纸条，包括底板和依次搭载在所述底板上的样本垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水纸，所述结合垫上包被有荧光微球标记的MDA5抗原和荧光微球标记的DNP-BSA，所述硝酸纤维素膜上设有抗体检测线和质控线，其中，所述荧光微球标记的MDA5抗原由荧光微球和MDA5抗原在RNA存在的条件下进行偶联反应，然后经RNA酶消解RNA所得，所述RNA为序列如SEQ ID NO：1~6所示的RNA中的任意一种或多种。
优选地，所述RNA为序列如SEQ ID NO：1所示的RNA。
优选地，所述荧光微球为铕螯合荧光微球。
优选地，所述荧光微球的粒径为100nm~300nm。
进一步优选地，所述荧光微球的粒径为150nm~250nm。
更进一步优选地，所述荧光微球的粒径为180nm~220nm。
优选地，所述样本垫采用的是玻璃纤维素膜，其上包被有酪蛋白、吐温、海藻糖和异嗜性抗体阻断剂。
优选地，所述结合垫采用玻璃纤维素膜，其上包被的荧光微球标记的MDA5抗原和荧光微球标记的DNP-BSA的体积比为（10~30）:1，进一步优选为（10~20）:1，更进一步优选为（10~15）:1。
优选地，所述检测线由包被在所述硝酸纤维素膜上的鼠抗人IgG抗体形成。
优选地，所述质控线由包被在所述硝酸纤维素膜上的DNP抗体形成。
本发明第二方面还提供上述用于检测抗MDA5抗体的荧光免疫层析试纸条的制备方法，所述制备方法包括：
采用样本垫封闭液处理第一玻璃纤维素膜制得样本垫；
将含有荧光微球标记的MDA5抗原和荧光微球标记的DNP-BSA的喷金液喷涂到第二玻璃纤维素膜上，经烘干制得所述结合垫；
将鼠抗人IgG抗体包被在硝酸纤维素膜上形成检测线，将DNP抗体包被在硝酸纤维素膜上形成质控线；
将样本垫、结合垫、硝酸纤维素膜、吸水纸以及底板组装得到所述用于检测抗MDA5抗体的荧光免疫层析试纸条。
优选地，所述样本垫封闭液的配方为：0.1~0.5wt%酪蛋白、0.5~1.5wt%吐温、3~8wt%海藻糖、0.05~0.2mg/mL异嗜性抗体阻断剂，其余为pH值为8~9、浓度为40~60mM的Tris缓冲液。
优选地，采用样本垫封闭液浸润第一玻璃纤维素膜，然后在30℃~60℃下烘干，制得所述样本垫。
优选地，在所述喷金液中，在所述喷金液中，所述荧光微球标记的MDA5抗原的体积占比为30~50%，所述荧光微球标记的DNP-BSA的体积占比为1~5%。
优选地，将所述喷金液喷涂到所述第二玻璃纤维素膜上，在30℃~60℃下烘干，制得所述结合垫。
优选地，使用含有2~8wt% 海藻糖的pH值为7.2~7.8的浓度为8~12mM的 PB缓冲液，混合鼠抗人IgG抗体得到终浓度为0.5~3mg/mL的检测线包被液；使用含有2~8wt% 海藻糖的pH值为7.2~7.8的浓度为8~12mM的 PB缓冲液，混合DNP抗体得到终浓度为0.5~3mg/mL的质控线包被液；将所述检测线包被液和所述质控线包被液同时在所述硝酸纤维素膜上划线，在30℃~60℃下烘干，形成包被好的硝酸纤维素膜。
本发明第三方面还提供一种用于检测抗MDA5抗体的试剂盒，其包括上述用于检测抗MDA5抗体的荧光免疫层析试纸条和样本稀释液。
优选地，所述样本稀释液配方为：40~60mg/mL氯化钠，0.3~0.8wt%防腐剂和0.5~3wt%吐温，其余为pH值为7.2~7.6、浓度为5~15mM的PB缓冲液。
进一步优选地，所述防腐剂为Proclin 300，所述吐温为吐温-20。
本发明第四方面还提供一种基于荧光免疫分析的抗MDA5抗体定量检测系统，其包括荧光免疫分析仪、上述荧光免疫层析试纸条和样本稀释液，所述荧光免疫层析试纸条上设有ID卡，所述ID卡中存储有标定数据和/或标准曲线。
优选地，所述样本稀释液配方为：40~60mg/mL氯化钠，0.3~0.8wt%防腐剂和0.5~3wt%吐温，其余为pH值为7.2~7.6、浓度为5~15mM的PB缓冲液。
进一步优选地，所述防腐剂为Proclin 300，所述吐温为吐温-20。
本发明第五方面还提供一种使用上述抗MDA5抗体检测系统进行抗MDA5抗体检测的方法，其包括以下步骤：
（1）将所述荧光免疫层析试纸条插入所述荧光免疫分析仪，读取所述ID卡上的标定数据和/或标准曲线；
（2）取出所述荧光免疫层析试纸条，将未稀释或稀释后的待测样本滴加到所述荧光免疫层析试纸条上，静置反应5min~15min，未稀释或稀释后的待测样本依次经过所述样本垫、所述结合垫、所述硝酸纤维素膜到达所述吸水纸上；
（3）将静置反应后的荧光免疫层析试纸条再次插入所述荧光免疫分析仪，读取所述抗体检测线和所述质控线的荧光强度，根据所述标定数据和/或标准曲线计算并输出待测样本的抗MDA5抗体浓度。
本发明与现有技术相比具有如下优势：
本发明通过在荧光微球标记MDA5抗原时，引入特定RNA共同反应，使得抗原产生构象改变，在偶联荧光微球时保护了抗原的识别表位，偶联后通过RNA酶消解RNA的操作，提高了结合垫对样本中抗MDA5抗体的捕获效率，进而使得制备的荧光免疫试纸条对抗MDA5抗体的检测敏感性提高，降低阳性漏检风险。本发明的荧光免疫层析试纸条可以兼顾敏感性、特异性、重复性和稳定性等性能，实现对待测样本中抗MDA5抗体的快速检测。
附图说明
图1为实施例1中用于检测抗MDA5抗体的荧光免疫层析试纸条的结构示意图；
图中：1、底板；2、样本垫；3、结合垫；4、硝酸纤维素膜；5、吸水纸；6、质控线；7、抗MDA5抗体检测线。
具体实施方式
本发明中的免疫荧光层析试纸条基于免疫荧光间接法，其检测原理是：如果待测样本中含有抗MDA5抗体，那么待测样本中的抗MDA5抗体会与样品垫中的荧光微球标记的MDA5抗原结合并通过毛细作用沿着硝酸纤维素膜层析，当达到检测区后，被对应检测线（T线）上固定的鼠抗人IgG抗体捕获，检测线上结合的荧光微球标记的MDA5抗原的量与样品中抗MDA5抗体的量成正比，通过荧光免疫分析仪根据荧光强度和标准曲线计算得到待测样本中抗MDA5抗体的含量。
基于上述检测原理，本申请人常规采用现有荧光免疫层析试纸条的制备工艺，按照常规工艺，直接采用荧光微球标记天然或重组MDA5抗原，制备的荧光免疫层析试纸条存在阳性漏检的问题。因此试纸条的检测敏感性有待提高，而提高荧光微球标记的MDA5抗原对抗MDA5抗体的识别能力是提高检测敏感性的关键。
为此，本申请人针对荧光微球标记MDA5抗原条件及方法进行了深入的研究和大量实验验证，最终确定采用在标记过程中引入能够与MDA5特异性结合的RNA共同反应，并在标记后通过RNA酶消解去除RNA的方式。在标记时，选用的RNA与MDA5特异性结合使得MDA5抗原产生构象改变，在MDA5抗原与偶联时保护了MDA5抗原的识别表位，偶联后通过RNA酶消解去除RNA使MDA5抗原的识别表位露出，便于结合待测样本中的抗MDA5抗体，从而提高了对样本中抗MDA5抗体的捕获效率，进而使得制备的荧光免疫试纸条对抗MDA5抗体的检测敏感性提高，降低阳性漏检风险。
在本发明中，已经实验验证确认能够明显提高检测敏感性，降低阳性漏检风险的RNA包括：脑心肌炎病毒RNA（GenBank：X74312.1，序列如SEQ ID NO：1所示），B 型柯萨奇病毒（CVB1：NCBI：NC_001472.1，序列如SEQ ID NO：2所示；CVB3： GenBank：M88483.1，序列如SEQ ID NO：3所示），鼻病毒（鼻病毒A：GenBank：LC789193.1，序列如SEQ ID NO：4所示；鼻病毒B：GenBank：LC495296.1，序列如SEQ ID NO：5所示；鼻病毒C：NCBI： NC_009996.1，序列如SEQ ID NO：6所示）。
下面结合实施例对本发明作进一步描述。但本发明并不限于以下实施例。实施例中采用的实施条件可以根据具体使用的不同要求做进一步调整，未注明的实施条件为本行业中的常规条件。本发明各个实施方式中所涉及到的技术特征只要彼此之间未构成冲突就可以相互组合。
以下实施例和对比例中的实验方法，若无特殊说明，均为常规方法，所用的实验材料，如无特殊说明，均为自常规生化试剂厂商购买得到的。
实施例中所用的试剂和仪器设备的来源：荧光免疫分析仪为迪亚莱博（张家港）生物科技有限公司生产的干式荧光免疫分析仪DL300；鼠抗人IgG抗体购自北京博尔西生物科技有限公司，货号B1423；荧光微球为铕螯合荧光微球，粒径为200nm，货号EU0200C1，购自杭州博岳生物技术有限公司；MDA5抗原购自北京爱博生生物技术有限公司，货号Q9BYX4；硝酸纤维素膜购自德国赛多利斯公司；玻璃纤维素膜购自奥斯龙公司，货号1UN14ER100025NT；异嗜性抗体阻断剂购自宝德康体（北京）生物科技有限公司，货号3KC028；二硝基苯酚偶联牛血清白蛋白（DNP-BSA），货号T112505R和DNP单克隆抗体，货号T112505M均购自南京拂晓生物科技有限公司；核糖核酸酶（RNase A）采购自NEB，货号T3018L。
以下实施例和对比例的荧光免疫层析试纸条的结构均如图1所示，包括底板1和依次搭接在底板1上的样本垫2、结合垫3、硝酸纤维素膜4和吸水纸5，其中硝酸纤维素膜4上设置有质控线6和抗MDA5抗体检测线7。底板1的材质为PVC，样本垫2和结合垫3的材质均为玻璃纤维素膜。荧光免疫层析试纸条上设置有加样孔（图中未显示），荧光免疫层析试纸条的结构设置包括加样孔的设置都是本领域的常规技术手段，此处不赘述。
实施例1
本实施例提供一种用于检测抗MDA5抗体的荧光免疫层析试纸条，其制备方法如下：
1.制备样本垫2：
1.1配制样本垫封闭液：0.3wt%酪蛋白、1wt%吐温-20、5wt%海藻糖、0.1mg/mL异嗜性抗体阻断剂，其余为50mM Tris缓冲液（pH值为8.5）。
1.2使用样本垫封闭液均匀湿润玻璃纤维素膜，然后放置在湿度小于30%的环境下，37℃下烘15h，裁切备用。
2.制备结合垫3：
2.1制备荧光微球标记的MDA5抗原：在1mL 50mM MES缓冲液（pH值为 6.0）中加入荧光微球至固含量为0.1%，混匀，离心清洗一次。加入0.5mL 50mM MES缓冲液（pH值为6.0），超声混匀后，加入50μL 10mg/mL NHS溶液和25μL 10mg/mL EDC溶液，活化30min，离心去除上清。加入1mL 50mM MES缓冲液（pH值为 6.0），超声混匀后，离心清洗一次。再次加入0.5mL 50mM MES缓冲液（pH值为 6.0），超声混匀后，加入终浓度为100μg/mL 的MDA5抗原和终浓度为10μg/mL脑心肌炎病毒的RNA（序列如SEQ ID NO:1所示，由生工生物工程（上海）股份有限公司合成），上摇床，25℃，250r/min，孵育2h。离心去上清，加入0.5mL封闭液（含有1wt% BSA的50mM HEPES缓冲液，pH值为8.5），上摇床，25℃，250r/min，孵育0.5h。离心去上清，加入0.5mL 的消解液（含有10μg/mL核糖核酸酶的10mM PBS缓冲液，pH值为7.4），上摇床，25℃，250r/min，孵育0.5h，离心去上清后再次加入1mL封闭液离心洗涤得到荧光微球标记的MDA5抗原。将荧光微球标记的MDA5抗原保存于保存液（含有150mmol/L NaCl、10wt% 海藻糖、0.5wt%吐温-20和0.5wt% 酪蛋白的50mM Tris缓冲液，pH值为8.5）中，超声混匀，备用。
2.2制备荧光微球标记的DNP-BSA：在1mL 50mM MES缓冲液（pH值为6.0）中加入荧光微球至固含量为0.1%，混匀，离心清洗一次。加入0.5mL 50mM MES缓冲液（pH值为6.0），超声混匀后，加入50μL 10mg/mL NHS溶液和25μL 10mg/mL EDC溶液，活化30min，离心去除上清。加入1mL 50mM MES缓冲液（pH值为6.0），超声混匀后，离心清洗一次。再次加入0.5mL50mM MES缓冲液（pH值为6.0），超声混匀后，加入终浓度为100μg/mL 的DNP-BSA，上摇床，25℃，250r/min，孵育2h。离心去上清，加入0.5mL封闭液（含有1wt%BSA的50mM HEPES缓冲液，pH值为8.5），上摇床，25℃，250r/min，孵育1h。离心去上清后再次加入1mL封闭液离心洗涤得到荧光微球标记的DNP-BSA。将荧光微球标记的DNP-BSA保存于保存液（含有150mmol/LNaCl、10wt% 海藻糖、0.5wt% 吐温-20和0.5wt% 酪蛋白的50mM Tris缓冲液，pH值为8.5）中，超声混匀，备用。
2.3将玻璃纤维素膜裁切得到所需规格。配制喷金液：荧光微球标记的MDA5抗原体积占比40%、荧光微球标记的DNP-BSA体积占比3%，保存液体积占比57%。用喷金仪将喷金液按照2μL /cm均匀喷涂到玻璃纤维素膜上，放入37℃烘烤15h，置于干燥箱中待用。
3.制备硝酸纤维素膜4：采用含有5wt% 海藻糖的10mM PB缓冲液（pH值为 7.4）分别稀释鼠抗人IgG抗体和DNP抗体，得到终浓度为2mg/mL的鼠抗人IgG抗体包被液和DNP抗体包被液。
采用划膜仪按照1μL /cm分别将鼠抗人IgG抗体包被液和DNP抗体包被液划线在硝酸纤维素膜上，然后将硝酸纤维素膜放入37℃的烘箱中干燥1h~2h，再转入干燥箱于60℃干燥形成检测线和质控线，置于干燥箱中待用。
4.荧光免疫层析试纸条组装：在底板1上的特定位置依次搭接样本垫2、结合垫3、硝酸纤维素膜4和吸水纸5，组装好后以3.9mm的固定宽度裁切，得到用于检测抗MDA5抗体的荧光免疫层析试纸条。
5.制备样本稀释液：45mg/mL氯化钠、0.5wt% Proclin 300、0.5wt% 吐温-20，其余为pH 7.4的10mM PB缓冲液。
6.制备ID卡：
抗MDA5抗体标准曲线：
配制抗MDA5抗体的6个浓度的校准品，其浓度分别为0U/mL、10U/mL、25U/mL、50U/mL、100U/mL、200U/mL，每个浓度校准品重复测试3次，测试方法为：用样本稀释液20倍稀释每一个浓度梯度，分别取80μL加入到加样孔中，计时15min后，用荧光免疫分析仪检测抗MDA5抗体检测线的荧光强度值T值和质控线的荧光强度C值，通过T/C值拟合抗MDA5抗体标准曲线：y=(A-D)/[1+(x/C^B)]+D，其中A=15.61098，B=-1.86938，C=82.90574，D=-0.03182，该方程中y为T/C值，x为抗MDA5抗体的浓度值，r2=0.99971。
将抗MDA5抗体标准曲线烧录在ID卡中，将ID卡装入检测抗MDA5抗体的试纸条中，荧光免疫分析仪的处理器能够读取ID卡的内容并处理样本检测结果。
实施例2
本实施例提供另一种用于检测抗MDA5抗体的荧光免疫层析试纸条，其制备方法基本同实施例1，区别仅在于荧光微球标记MDA5抗原时所用的RNA不同，本实施例中采用的是B型柯萨奇病毒CVB1（序列如SEQ ID NO:2所示，由生工生物工程（上海）股份有限公司合成）。
实施例3
本实施例提供另一种用于检测抗MDA5抗体的荧光免疫层析试纸条，其制备方法基本同实施例1，区别仅在于荧光微球标记MDA5抗原时所用的RNA不同，本实施例中采用的是鼻病毒A（序列如SEQ ID NO:4所示，由生工生物工程（上海）股份有限公司合成）。
对比例1
本对比例提供另一种用于检测抗MDA5抗体的荧光免疫层析试纸条，其结构同实施例1，其制备方法基本同实施例1，区别在于荧光微球标记MDA5抗原时，所用标记方法同DNP-BSA，仅加终浓度为100μg/mL 的MDA5抗原，未加入RNA序列。
对比例2
本对比例提供一种用于检测抗MDA5抗体的荧光免疫层析试纸条，其制备方法基本同实施例1，区别仅在于荧光微球标记MDA5抗原时所用的RNA不同，本实施例中采用的是日本乙型脑炎病毒（序列如SEQ ID NO:7所示，由生工生物工程（上海）股份有限公司合成）。
对比例3
本对比例提供一种用于检测抗MDA5抗体的荧光免疫层析试纸条，其制备方法基本同实施例1，区别仅在于荧光微球标记MDA5抗原时所用的RNA不同，本实施例中采用的是单股负链RNA的水疱性口炎病毒（序列如SEQ ID NO:8所示，由生工生物工程（上海）股份有限公司合成）。
性能测试
1.灵敏度测试
取6个浓度的抗MDA5抗体校准品，分别使用实施例1~3和对比例1~3的用于检测抗MDA5抗体的荧光免疫层析试纸条进行信号强度验证。抗MDA5抗体校准品其浓度分别为0U/mL、10U/mL、25U/mL、50U/mL、100U/mL、200U/mL；每个浓度重复检测2次，记录抗MDA5抗体信号强度T值的均值和质控线的荧光强度C值的均值，检测方法参见上文实施例1中标准曲线的步骤，具体测试结果见表1。
以上各实施例和对比例的标准曲线见表2。
2.重复性测试
用实施例1~3和对比例1~3的抗MDA5抗体检测试纸条分别检测浓度为20U/mL 和100U/mL的 MDA5质控品检测（每种试纸条分别对两种浓度的质控品重复检测10次），然后根据表2中标准曲线计算出对应的浓度，并计算结果的变异系数（CV），结果见表3。
表3显示，对比例3的变异系数相较于其他组更大些，其他组的变异系数均小于10%；实施例1~3与由常规微球标记工艺制备试纸条的对比例1相比，重复性相差不大，说明实施例1~3优化后的微球标记工艺并未影响到试纸条的重复性性能。
3.稳定性测试
分别将实施例1~3和对比例1~3的试纸条置于37℃烘箱中进行加速热稳定性验证。按烘烤时间依次取出4天、7天、10天和14天的试纸条，准备好所有检测所需的试纸条后，分别两个浓度的抗MDA5抗体两个条件质控品（浓度为20U/mL和100U/mL）进行测试，每个处理设置10个平行，浓度计算采用37℃烘烤0天（未烘烤）的试纸条的标准曲线，统计烘烤4天、7天、10天和14天的试纸条相对未烘烤的试纸条的平均值偏差，以确定各组别的试纸条的稳定性，结果见表4。
4.阴阳性符合率测试：
使用实施例1~3和对比例1~3的抗MDA5抗体检测试纸条和行业认可的欧蒙医学诊断(中国)有限公司的抗肌炎抗体谱IgG检测试剂盒(印迹法，含有MDA5项目)分别进行血清样本检测。
实施例1~3和对比例1~3的抗MDA5抗体检测试纸条进行血清样本检测的步骤分别为：
（1）将抗MDA5抗体检测试纸条插入荧光免疫分析仪，荧光免疫分析仪读取ID卡中的标准曲线，然后拔出抗MDA5抗体检测试纸条。
（2）使用样本稀释液将血清样本稀释20倍后，取80μL加入抗MDA5抗体检测试纸条的加样孔，静置15min。
（3）插入荧光免疫分析仪测试抗MDA5抗体检测线荧光强度（T值）和质控线荧光强度（C值），荧光免疫分析仪可通过ID卡内的标准曲线信息，自动将T/C值换算为相对应的抗MDA5抗体浓度。
欧蒙医学诊断（中国）有限公司的抗肌炎抗体谱IgG检测试剂盒的检测方法参考其说明书。
根据欧蒙医学诊断（中国）有限公司的抗肌炎抗体谱IgG检测试剂盒中抗MDA5抗体的检测结果（以下简称欧蒙），比对分析实施例1~3和对比例1~3的抗MDA5抗体检测试纸条的测试结果的阴阳符合率，测试结果见表5，阴阳符合率见表6。
表5、表6结果显示：所有实施例和对比例的阴符合率一致，均为100%，但阳性符合率存在明显差异，实施例1的阳性符合率最优，其次是实施例2和实施例3。
以上结果显示，在荧光微球标记MDA5抗原时，引入特定RNA共同反应，使得抗原产生构象改变，偶联微球时保护了抗原的识别表位，偶联后通过RNA酶消解RNA，通过此操作提高了试纸条的检测敏感性，在保证试纸条各项基础性能的前提下使得检测结果更准确。
Claims (10)
1.一种用于检测抗MDA5抗体的荧光免疫层析试纸条，包括底板和依次搭载在所述底板上的样本垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水纸，其特征在于，所述结合垫上包被有荧光微球标记的MDA5抗原和荧光微球标记的DNP-BSA，所述硝酸纤维素膜上设有抗体检测线和质控线，
其中，所述荧光微球标记的MDA5抗原由荧光微球和MDA5抗原在RNA存在的条件下进行偶联反应，然后经RNA酶消解RNA所得，所述RNA为序列如SEQ ID NO：1~6所示的RNA中的任意一种或多种。
2.根据权利要求1所述的用于检测抗MDA5抗体的荧光免疫层析试纸条，其特征在于，所述RNA为序列如SEQ ID NO：1所示的RNA。
3.根据权利要求1所述的用于检测抗MDA5抗体的荧光免疫层析试纸条，其特征在于，所述荧光微球为铕螯合荧光微球；
和/或，所述荧光微球的粒径为100nm~300nm；
和/或，所述样本垫采用的是玻璃纤维素膜，其上包被有酪蛋白、吐温、海藻糖和异嗜性抗体阻断剂；
和/或，所述结合垫采用的是玻璃纤维素膜，其上包被的荧光微球标记的MDA5抗原和荧光微球标记的DNP-BSA的体积比为（10~30）:1；
和/或，所述检测线由包被在所述硝酸纤维素膜上的鼠抗人IgG抗体形成，所述质控线由包被在所述硝酸纤维素膜上的DNP抗体形成。
4.一种如权利要求1至3中任一项所述的用于检测抗MDA5抗体的荧光免疫层析试纸条的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括：
采用样本垫封闭液处理第一玻璃纤维素膜制得样本垫；
将含有荧光微球标记的MDA5抗原和荧光微球标记的DNP-BSA的喷金液喷涂到第二玻璃纤维素膜上，经烘干制得所述结合垫；
将鼠抗人IgG抗体包被在硝酸纤维素膜上形成检测线，将DNP抗体包被在硝酸纤维素膜上形成质控线；
将样本垫、结合垫、硝酸纤维素膜、吸水纸以及底板组装得到所述用于检测抗MDA5抗体的荧光免疫层析试纸条。
5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述样本垫封闭液的配方为：0.1~0.5wt%酪蛋白、0.5~1.5wt%吐温、3~8wt%海藻糖、0.05~0.2mg/mL异嗜性抗体阻断剂，其余为pH值为8~9、浓度为40~60mM的Tris缓冲液；
和/或，采用样本垫封闭液浸润第一玻璃纤维素膜，然后在30℃~60℃下烘干，制得所述样本垫。
6.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，在所述喷金液中，所述荧光微球标记的MDA5抗原的体积占比为30~50%，所述荧光微球标记的DNP-BSA的体积占比为1~5%；
和/或，将所述喷金液喷涂到所述第二玻璃纤维素膜上，在30℃~60℃下烘干，制得所述结合垫。
7.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，使用含有2~8wt% 海藻糖的pH值为7.2~7.8的浓度为8~12mM的 PB缓冲液，混合鼠抗人IgG抗体得到终浓度为0.5~3mg/mL的检测线包被液；
使用含有2~8wt% 海藻糖的pH值为7.2~7.8的浓度为8~12mM的 PB缓冲液，混合DNP抗体得到终浓度为0.5~3mg/mL的质控线包被液；
将所述检测线包被液和所述质控线包被液同时在所述硝酸纤维素膜上划线，在30℃~60℃下烘干，形成包被好的硝酸纤维素膜。
8.一种用于检测抗MDA5抗体的试剂盒，其特征在于，所述用于检测抗MDA5抗体的试剂盒包括权利要求1至3中任一项所述的用于检测抗MDA5抗体的荧光免疫层析试纸条和样本稀释液。
9.一种基于荧光免疫分析的抗MDA5抗体定量检测系统，其特征在于，所述抗体定量检测系统包括荧光免疫分析仪、权利要求1至3中任一项所述的荧光免疫层析试纸条和样本稀释液，所述荧光免疫层析试纸条上设有ID卡，所述ID卡中存储有标定数据和/或标准曲线。
10.根据权利要求8所述的用于检测抗MDA5抗体的试剂盒或权利要求9所述的基于荧光免疫分析的抗MDA5抗体定量检测系统，其特征在于，所述样本稀释液配方为：40~60mg/mL氯化钠，0.3~0.8wt%防腐剂和0.5~3wt%吐温，其余为pH值为7.2~7.6、浓度为5~15mM的PB缓冲液。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202410437745.8A CN118033148A (zh) | 2024-04-12 | 2024-04-12 | 一种用于检测抗mda5抗体的荧光免疫层析试纸条 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202410437745.8A CN118033148A (zh) | 2024-04-12 | 2024-04-12 | 一种用于检测抗mda5抗体的荧光免疫层析试纸条 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN118033148A true CN118033148A (zh) | 2024-05-14 |
Family
ID=90991518
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202410437745.8A Pending CN118033148A (zh) | 2024-04-12 | 2024-04-12 | 一种用于检测抗mda5抗体的荧光免疫层析试纸条 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN118033148A (zh) |
Citations (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103336133A (zh) * | 2013-07-09 | 2013-10-02 | 上海交通大学医学院附属瑞金医院 | 一种用于检测抗mda5抗体的试剂盒及其检测方法 |
| CN106520790A (zh) * | 2016-11-24 | 2017-03-22 | 河北农业大学 | 一种猪脑心肌炎病毒bd2株全长感染性克隆的构建方法及应用 |
| CN110869514A (zh) * | 2017-03-30 | 2020-03-06 | 小利兰·斯坦福大学托管委员会 | 多重同型特异性抗体检测 |
| CN111239392A (zh) * | 2020-02-26 | 2020-06-05 | 浙江诺迦生物科技有限公司 | 一种新型冠状病毒肺炎(covid-19)血清学诊断试剂盒 |
| CN114441766A (zh) * | 2021-12-27 | 2022-05-06 | 迪亚莱博（张家港）生物科技有限公司 | 一种定量检测抗pla2r抗体的荧光免疫层析试纸条及其制备方法 |
| CN115420892A (zh) * | 2022-10-31 | 2022-12-02 | 迪亚莱博（张家港）生物科技有限公司 | 联合检测IgG型抗心磷脂抗体和IgM型抗心磷脂抗体的荧光免疫层析试纸条的制备方法 |
| CN115980360A (zh) * | 2022-12-15 | 2023-04-18 | 珠海丽珠试剂股份有限公司 | 抗黑色素瘤分化相关基因5抗体检测试剂盒及其应用 |
| CN116466078A (zh) * | 2023-03-07 | 2023-07-21 | 世纪一束(杭州)医学诊断科技有限公司 | 抗mda5抗体的检测试剂盒及其制备方法 |
| CN117233378A (zh) * | 2023-11-14 | 2023-12-15 | 迪亚莱博（张家港）生物科技有限公司 | 用于抗体定量检测的荧光免疫层析试纸条及其制备方法 |
| CN117470819A (zh) * | 2023-09-21 | 2024-01-30 | 深圳市亚辉龙生物科技股份有限公司 | 自身免疫性肌炎病检测试剂盒及其检测方法 |
-
2024
- 2024-04-12 CN CN202410437745.8A patent/CN118033148A/zh active Pending
Patent Citations (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103336133A (zh) * | 2013-07-09 | 2013-10-02 | 上海交通大学医学院附属瑞金医院 | 一种用于检测抗mda5抗体的试剂盒及其检测方法 |
| CN106520790A (zh) * | 2016-11-24 | 2017-03-22 | 河北农业大学 | 一种猪脑心肌炎病毒bd2株全长感染性克隆的构建方法及应用 |
| CN110869514A (zh) * | 2017-03-30 | 2020-03-06 | 小利兰·斯坦福大学托管委员会 | 多重同型特异性抗体检测 |
| CN111239392A (zh) * | 2020-02-26 | 2020-06-05 | 浙江诺迦生物科技有限公司 | 一种新型冠状病毒肺炎(covid-19)血清学诊断试剂盒 |
| CN114441766A (zh) * | 2021-12-27 | 2022-05-06 | 迪亚莱博（张家港）生物科技有限公司 | 一种定量检测抗pla2r抗体的荧光免疫层析试纸条及其制备方法 |
| CN115420892A (zh) * | 2022-10-31 | 2022-12-02 | 迪亚莱博（张家港）生物科技有限公司 | 联合检测IgG型抗心磷脂抗体和IgM型抗心磷脂抗体的荧光免疫层析试纸条的制备方法 |
| CN115980360A (zh) * | 2022-12-15 | 2023-04-18 | 珠海丽珠试剂股份有限公司 | 抗黑色素瘤分化相关基因5抗体检测试剂盒及其应用 |
| CN116466078A (zh) * | 2023-03-07 | 2023-07-21 | 世纪一束(杭州)医学诊断科技有限公司 | 抗mda5抗体的检测试剂盒及其制备方法 |
| CN117470819A (zh) * | 2023-09-21 | 2024-01-30 | 深圳市亚辉龙生物科技股份有限公司 | 自身免疫性肌炎病检测试剂盒及其检测方法 |
| CN117233378A (zh) * | 2023-11-14 | 2023-12-15 | 迪亚莱博（张家港）生物科技有限公司 | 用于抗体定量检测的荧光免疫层析试纸条及其制备方法 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| KATHY TRIANTAFILOU 等: "Visualisation of direct interaction of MDA5 and the dsRNA replicative intermediate form of positive strand RNA viruses", 《JOURNAL OF CELL SCIENCE》, 31 December 2012 (2012-12-31), pages 4761 - 4769 * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US20230296601A1 (en) | Novel coronavirus antibody detection kit based on magnetic particle chemiluminescence | |
| US11959912B2 (en) | Fluorescence immunochromatographic detection card and a preparation method therefor and use thereof | |
| CN111398583A (zh) | 一种检测新型冠状病毒n蛋白的试剂盒及其应用 | |
| CN111638332B (zh) | 一种新型冠状病毒IgA/IgM/IgG抗体ELISA检测试剂盒 | |
| CN108398550B (zh) | 一种组合物、芯片及其制备方法和包含有该芯片的检测装置 | |
| WO2022170977A1 (zh) | 一种抗真菌1,3-β-D-葡聚糖单克隆抗体及其应用 | |
| CN115420892B (zh) | 联合检测IgG型抗心磷脂抗体和IgM型抗心磷脂抗体的荧光免疫层析试纸条的制备方法 | |
| CN112014577B (zh) | 一种提高gpc3检测灵敏度的试剂盒及其制备方法 | |
| CN115469105B (zh) | 一种一步法非洲猪瘟elisa抗体快速检测试剂盒 | |
| CN117233378B (zh) | 用于抗体定量检测的荧光免疫层析试纸条及其制备方法 | |
| CN115639367A (zh) | 一种检测抗角蛋白抗体IgG的化学发光免疫试剂盒及应用 | |
| CN113125753B (zh) | 一种用于检测尘螨组分特异性抗体的试剂盒 | |
| CN110672850A (zh) | 甲型肝炎病毒抗体IgM检测试剂盒及其制备方法 | |
| CN114544934A (zh) | 一种曲霉半乳甘露聚糖检测试纸条及其应用 | |
| CN111650369A (zh) | 一种幽门螺旋杆菌磁微粒化学发光检测试剂盒及其制备方法 | |
| CN118033148A (zh) | 一种用于检测抗mda5抗体的荧光免疫层析试纸条 | |
| US4140581A (en) | Immunoassay of Neisseria bacteria via (NH4)2 SO4 precipitation | |
| AU2021104366A4 (en) | KIT FOR DETECTING DUST MITE COMPONENT-SPECIFIC IMMUNOGLOBULIN E (sIgE) | |
| CN110244042B (zh) | 羊腐败梭菌的间接elisa检测试剂盒 | |
| CN112485441A (zh) | 一种抗链球菌溶血素o检测试剂盒 | |
| CN113109325A (zh) | 一种胃蛋白酶原i酶促化学发光检测试剂盒及其制备方法与应用 | |
| CN111208292A (zh) | 肺炎支原体抗体IgM的免疫检测试剂盒、其制备方法及使用方法 | |
| CN112904018B (zh) | 一种检测病毒中和抗体的试剂盒、方法和用途 | |
| CN108896538A (zh) | 一种肌酐化学发光免疫检测试剂盒及各组分配制方法 | |
| CN109187953A (zh) | EB病毒Zta IgA抗体磁微粒化学发光检测试剂盒 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination |