CN117999084A - 一种含有葡萄愈伤组织培养液作为有效成分的用于抗菌和抗氧化的组合物 - Google Patents
一种含有葡萄愈伤组织培养液作为有效成分的用于抗菌和抗氧化的组合物 Download PDFInfo
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Abstract
本发明涉及一种含有葡萄愈伤组织培养液作为有效成分的用于抗菌和抗氧化的组合物，所述葡萄愈伤组织培养液包括ε‑葡萄素、δ‑葡萄素、以及白藜芦醇等，具体地，本发明的葡萄愈伤组织、其培养液、以及其提取液无细胞毒性，并表现出明显的抗氧化效果以及对痤疮细菌的抗菌效果，特别是相较于纯葡萄素具有显着的抗氧化效果和抗菌效果，因此所述葡萄愈伤组织、其培养液、以及其提取液可有效用作用于抗氧化和抗菌的组合物的有效成分。
Description
技术领域
本发明涉及一种含有葡萄愈伤组织培养液作为有效成分的用于抗菌和抗氧化的组合物，所述葡萄愈伤组织培养液包括ε-葡萄素(ε-viniferin)、δ-葡萄素(δ-viniferin)以及白藜芦醇(resveratrol)等。
背景技术
在全世界，人类健康已成为工业社会向服务社会转型过程中的热点话题。以石油类物质为基础的工业社会的极速扩张给人类带来了便利，但极速发展的后果不仅污染了居住环境，还导致对人类自身健康引起危害的状况。因此，围绕与日常生活密切相关的产品，人们对环保物质的关注和需求正在增加。
氧气作为维持生命的必要元素，通过人体呼吸过程用于产生能量，但氧气给我们提供的不仅仅有能量。氧气在体内与食物结合的过程中产生有害的氧气，即活性氧，活性氧成为引起人体疾病的原因，近年来医学界认为其为人体衰老的主要原因。因此，正在持续研发可保护人体免受活性氧毒性的天然产物来源抗氧化剂。
痤疮是一种发病于所有年龄段的大多数人，并且引起粉刺或脓疱等的皮肤病。痤疮由皮脂分泌过度、荷尔蒙失调、毛囊内角化异常、痤疮丙酸杆菌增殖以及炎症反应等复杂因素引起。作为痤疮致病菌的痤疮丙酸杆菌是厌氧皮肤常居菌，其在毛囊内增殖，脂肪酶水解皮脂中的甘油三酯而产生的游离脂肪酸以及以此刺激毛囊而产生的趋化因子引起炎症反应。通常治疗由痤疮丙酸杆菌感染引起的痤疮的方法是施用抗生素，但是治疗效果有可能因抗生素耐药性而降低。因此，围绕针对痤疮治疗不具有副作用和耐药性的生药来源物质的研究非常活跃。
此外，许多研究尝试通过生物技术方法生产植物来源的各种有用物质(例如，次生代谢产物)。其中最有效的生产方法是植物细胞培养法。该方法通过培养基、培养环境以及各种诱导子的处理，可以有效生产次生代谢产物。此外，可在不受种植或自然环境限制(高/剧毒性农药、重金属污染、季节影响、气候条件等)的情况下连续且稳定地批量生产植物来源有用物质，因此在商业性方面非常重要。
此外，作为相关的现有文献，韩国注册专利第10-1253374号(用于改善痤疮皮肤的化妆品组合物)将韩国泡菜乳酸菌发酵提取物和大豆发酵提取物用作用于改善痤疮皮肤的化妆品组合物，韩国注册专利第10-0879032号(具有天然抗菌和抗炎效果的抗菌、抗氧化、抗炎抑制剂以及含有其的化妆品组合物)利用药材甘草、知母、独活、黄白、黄莲、苦参、黄芩、槐花、紫草混合提取物提供具有抗菌效果的化妆品组合物，但是葡萄愈伤组织对痤疮细菌的抗菌效果和抗氧化效果知之甚少。
因此，本发明人建立了批量生产植物来源有用物质的方法，并致力于研发利用该方法的功能性化妆品、保健功能食品以及药物材料，最终发现本发明的葡萄愈伤组织培养液表现出明显的抗氧化与抗菌效果，尤其相较于纯葡萄素表现出显着的抗氧化与抗菌效果，因此可将所述葡萄愈伤组织培养液有效用作天然产物来源抗氧化与抗菌药物组合物、化妆品组合物以及保健食品，由此完成了本发明。
发明内容
技术问题
本发明的目的在于提供一种用于抗氧化和抗菌的组合物，所述组合物含有选自由葡萄愈伤组织、愈伤组织破碎物、愈伤组织培养液以及愈伤组织提取物组成的组中的任意一种或多种作为有效成分。
此外，本发明的另一目的在于提供一种预防、改善或治疗氧化应激的方法，其包括将药学有效量的组合物施用于个体，所述组合物含有选自由葡萄愈伤组织、愈伤组织破碎物、愈伤组织培养液以及愈伤组织提取物组成的组中的任意一种或多种作为有效成分。
此外，本发明的另一目的在于提供一种预防、改善或治疗细菌感染的方法，其包括将药学有效量的组合物施用于个体，所述组合物含有选自由葡萄愈伤组织、愈伤组织破碎物、愈伤组织培养液以及愈伤组织提取物组成的组中的任意一种或多种作为有效成分。
此外，本发明的另一目的在于提供一种预防、改善或治疗痤疮的方法，其包括将药学有效量的组合物施用于个体，所述组合物含有选自由葡萄愈伤组织、愈伤组织破碎物、愈伤组织培养液以及愈伤组织提取物组成的组中的任意一种或多种作为有效成分。
此外，本发明的另一目的在于提供一种含有选自由葡萄愈伤组织、愈伤组织破碎物、愈伤组织培养液以及愈伤组织提取物组成的组中的任意一种或多种作为有效成分的组合物用作用于预防、改善或治疗氧化应激的组合物的用途。
此外，本发明的另一目的在于提供一种含有选自由葡萄愈伤组织、愈伤组织破碎物、愈伤组织培养液以及愈伤组织提取物组成的组中的任意一种或多种作为有效成分的组合物用作用于预防、改善或治疗细菌感染的组合物的用途。
此外，本发明的另一目的在于提供一种含有选自由葡萄愈伤组织、愈伤组织破碎物、愈伤组织培养液以及愈伤组织提取物组成的组中的任意一种或多种作为有效成分的组合物用作用于预防或治疗痤疮的药物组合物的用途。
此外，本发明的另一目的在于提供一种含有选自由葡萄愈伤组织、愈伤组织破碎物、愈伤组织培养液以及愈伤组织提取物组成的组中的任意一种或多种作为有效成分的组合物用作用于预防和改善痤疮的化妆品组合物的用途。
技术方案
为解决本发明的目的，本发明提供一种用于抗氧化和抗菌的药物组合物，所述药物组合物含有选自由葡萄愈伤组织、愈伤组织破碎物、愈伤组织培养液以及愈伤组织提取物组成的组中的任意一种或多种作为有效成分。
此外，本发明提供一种用于预防和治疗痤疮的药物组合物，所述药物组合物含有选自由葡萄愈伤组织、愈伤组织破碎物、愈伤组织培养液以及愈伤组织提取物组成的组中的任意一种或多种作为有效成分。
此外，本发明提供一种用于抗氧化和抗菌的化妆品组合物，所述化妆品组合物含有选自由葡萄愈伤组织、愈伤组织破碎物、愈伤组织培养液以及愈伤组织提取物组成的组中的任意一种或多种作为有效成分。
此外，本发明提供一种用于预防和改善痤疮的化妆品组合物，所述化妆品组合物含有选自由葡萄愈伤组织、愈伤组织破碎物、愈伤组织培养液以及愈伤组织提取物组成的组中的任意一种或多种作为有效成分。
此外，本发明提供一种用于抗氧化和抗菌的保健食品，所述保健食品含有选自由葡萄愈伤组织、愈伤组织破碎物、愈伤组织培养液以及愈伤组织提取物组成的组中的任意一种或多种作为有效成分。
此外，本发明提供一种预防或改善氧化应激的方法，所述方法包括将药学有效量的组合物施用于个体，所述组合物含有选自由葡萄愈伤组织、愈伤组织破碎物、愈伤组织培养液以及愈伤组织提取物组成的组中的任意一种或多种作为有效成分。
此外，本发明提供一种治疗氧化应激的方法，所述方法包括将药学有效量的组合物施用于个体，所述组合物含有选自由葡萄愈伤组织、愈伤组织破碎物、愈伤组织培养液以及愈伤组织提取物组成的组中的任意一种或多种作为有效成分。
此外，本发明的另一目的在于提供一种预防、改善细菌感染的方法，所述方法包括将药学有效量的组合物施用于个体，所述组合物含有选自由葡萄愈伤组织、愈伤组织破碎物、愈伤组织培养液以及愈伤组织提取物组成的组中的任意一种或多种作为有效成分。
此外，本发明的另一目的在于提供一种治疗细菌感染的方法，所述方法包括将药学有效量的组合物施用于个体，所述组合物含有选自由葡萄愈伤组织、愈伤组织破碎物、愈伤组织培养液以及愈伤组织提取物组成的组中的任意一种或多种作为有效成分。
此外，本发明提供一种预防或改善痤疮的方法，所述方法包括将组合物施用于个体，所述组合物含有选自由葡萄愈伤组织、愈伤组织破碎物、愈伤组织培养液以及愈伤组织提取物组成的组中的任意一种或多种作为有效成分。
此外，本发明提供一种治疗痤疮的方法，所述方法包括将组合物施用于个体，所述组合物含有选自由葡萄愈伤组织、愈伤组织破碎物、愈伤组织培养液以及愈伤组织提取物组成的组中的任意一种或多种作为有效成分。
此外，本发明提供一种含有选自由葡萄愈伤组织、愈伤组织破碎物、愈伤组织培养液以及愈伤组织提取物组成的组中的任意一种或多种作为有效成分的组合物用作用于预防、改善或治疗氧化应激的组合物的用途。
此外，本发明提供一种含有选自由葡萄愈伤组织、愈伤组织破碎物、愈伤组织培养液以及愈伤组织提取物组成的组中的任意一种或多种作为有效成分的组合物用作用于预防、改善或治疗细菌感染的组合物的用途。
此外，本发明提供一种含有选自由葡萄愈伤组织、愈伤组织破碎物、愈伤组织培养液以及愈伤组织提取物组成的组中的任意一种或多种作为有效成分的组合物用作用于预防或治疗痤疮的药物组合物的用途。
此外，本发明提供一种含有选自由葡萄愈伤组织、愈伤组织破碎物、愈伤组织培养液以及愈伤组织提取物组成的组中的任意一种或多种作为有效成分的组合物用作用于预防和改善痤疮的化妆品组合物的用途。
发明效果
本发明的葡萄愈伤组织、其培养液以及其提取液无细胞毒性，并表现出明显的抗氧化以及针对痤疮细菌的抗菌效果，尤其比纯葡萄素具有显着的抗氧化效果和抗菌效果，因此所述葡萄愈伤组织、其培养液以及其提取液可有效用作用于抗氧化和抗菌的组合物的有效成分。
附图说明
图1是在MNT-1细胞中确认葡萄素和葡萄愈伤组织培养液(试样名称A)细胞毒性的图。为了比较葡萄愈伤组织培养液(试样名称A)和葡萄素，以ε-葡萄素含量为标准稀释试样后在孔中进行处理。
图2是在Raw 264.7细胞中确认葡萄素和葡萄愈伤组织培养液(试样名称A)细胞毒性的图。为了比较葡萄愈伤组织培养液(试样名称A)和葡萄素，以ε-葡萄素含量为标准稀释试样后在孔中进行处理。
图3是为了确认葡萄愈伤组织培养液(试样名称A)和葡萄愈伤组织培养液的提取物(试样名称a)的抗氧化效果而进行DPPH分析的图。
图4是用3种痤疮丙酸杆菌处理葡萄愈伤组织培养液(试样名称A和试样名称C)72小时后确认阻碍痤疮丙酸杆菌生长的最低浓度的图。
图5是用3种痤疮丙酸杆菌处理葡萄愈伤组织培养液(试样名称A和试样名称C)72小时后确认抑制痤疮丙酸杆菌生长的最低浓度的图。
图6是用3种痤疮丙酸杆菌处理葡萄愈伤组织培养液(试样名称A和试样名称C)48小时后确认抑制痤疮丙酸杆菌生长的最低浓度的图。
图7是利用纸片扩散法确认葡萄愈伤组织培养液提取物(试样名称a)的抗菌效果的图。
具体实施方式
以下，详细描述本发明。
本发明提供一种用于抗氧化和抗菌组合物，所述组合物含有选自由葡萄愈伤组织、愈伤组织破碎物、愈伤组织培养液以及愈伤组织提取物组成的组中的任意一种或多种作为有效成分。
在本发明中，所述愈伤组织是失去了形成正常器官的功能或者引起组织分化功能的无定形的组织或细胞团，其大多为薄壁细胞，并且是指在含有生长调节剂的组织培养基中培养从植物切割的组织或者用生长调节剂处理植物受损部位或植物的上部球茎时产生的特殊组织或细胞团。
此外，所述破碎物是指通过利用常规洗涤剂等的化学方法或者利用弗氏压碎器(French Press)等的物理方法等破碎细胞而得到的细胞裂解物，其可以通过所属领域已知的常规方法来制造，该方法不受特别限制。
此外，所述培养液是指在经所属领域已知的常规方法进行培养的过程后利用离心、滤网过滤等物理方法去除沉淀的其余培养液(条件培养基)，其可以通过所属领域已知的常规方法来制造，该方法不受特别限制。
所述提取物是指通过所属领域已知的常规方法提取愈伤组织本身、愈伤组织粉末、愈伤组织破碎物、或愈伤组织培养液而得到的产物，其可以通过所属领域已知的常规方法来制造，该方法不受特别限制。例如，包括冷浸提取、热水提取、超声波提取、以及回流冷却提取等。提取溶剂，可以使用水、碳原子数1至4的无水或含水低级醇、丙酮、乙酸乙酯、乙酸丁酯、1，3-丁二醇等常规使用的溶剂。
此外，所述葡萄愈伤组织及其培养液优选如下制造，但不限于此。
1)从葡萄组织中诱导愈伤组织；以及
2)添加活性诱导剂和增溶剂后培养所述诱导的葡萄愈伤组织。
所述步骤1)的葡萄可以是选自由葡萄的花、叶、茎、枝、果以及根组成的组中的任意一种或多种部位，更具体地，优选地是葡萄的花，所述葡萄的品种可以是青水、红丹、Tamnara、红露、黑珠、黑宝石、水玉、Thunuri、Tamkumchu、Hong Alam、Narsha、Hong Sodam、Alden、早熟坎贝尔(Campbell Early)、德拉瓦尔(Delaware)、Ductchess、金麝香(GoldenMuscat)、希姆劳德(Himrod Seedless)、斯凯勒(Schuyler)、Beniizu、巨峰(Kyoho)、先锋(Pione)、Super Hamburg、Tano Red、汉堡麝香(Muscat Hamburg)、西贝尔9110(Seibel9110)，但不限于此。
在所述步骤1)中，通过在用于组织培养的培养基中培养植物的组织或其切片来诱导愈伤组织。所述用于组织培养的培养基可以使用MS(Murashige and Skoog，1962)培养基、N6(Chu et al.，1975)、B5(Gamborg et al.，1968)、NN(Nitsch and Nitsch，1967)培养基、WHITE培养基等各种植物的基本培养基。此外，所述用于组织培养的培养基优选使用添加有植物生长调节剂的培养基。所述植物生长调节剂可以使用所属领域已知的物质，优选包括2，4-D(2,4-dichlorophenoxyacetic acid)、2，4，5-T(2,4,5-trichlorophenoxyacetic acid)、Dicamba(2-methoxy-3,6-dichlorobenzoic acid)、IAA(indole-3-acetic acid)、IBA(indole-3-butyric acid)、MCPA(2-methyl-4-chlorophenoxyacetic acid)、NAA(1-naphthylacetic acid)、NOA(2-naphthyloxyaceticacid)、Picloram(4-amino-2,5,6-trichloropicolinic acid)等生长素类；BAP(6-benzylaminopurine)、2iP(N6-(2-isopentyl)adenine)、Kinetin(6-furfurylaminopurine)、Thidiazuron(1-phenyl-3-(1,2,3-thiadiazol-5-yl)urea)、Zeatin(4-hydroxy-3-methyl-trans-2-butenylaminopurine)等的细胞分裂素类及其衍生物。除此之外，用于组织培养的培养基还可以另外添加作用于细胞分化和增殖的生物碱类、萜类、胡萝卜素类、酚类化合物以及天然提取物等。更优选地可以添加IAA、NAA、2,4-D以及激动素，还更优选地可以添加0.05mg/L至0.2mg/L的IAA、0.05至0.2mg/L的NAA、1mg/L至2mg/L的2，4-D、以及0.2mg/L至0.3mg/L的激动素，但不限于此。
在所述步骤2中，活性诱导剂可以是茉莉酸甲酯、SA或Flagelin 22，更优选地可以是茉莉酸甲酯，但不限于此。此外，增溶剂可以是环糊精、甲基环糊精或甜菊苷，更优选地可以是甜菊苷，但不限于此。所述茉莉酸甲酯和甜菊苷优选地能够分别添加50μM至350μM以及40mM至60mM的浓度，更优选地能够分别添加100μM和50mM的浓度，但不限于此。
此外，所述组合物优选对选自由痤疮丙酸杆菌(Propionibacterium acnes)、表皮葡萄球菌(Staphylococcus epidermis)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、腐生葡萄球菌(Staphylococcus saprophyticus)、绿脓杆菌(Pseudomonas aeruginosa)、粪肠球菌(Enterococcus faecalis)、鲍曼放线菌(Actinomyces baumannii)、蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)、枯草芽胞杆菌斯氏亚种(Bacillus subtilis subsp.spizizenii)、克雷伯杆菌(Klebsiella pneumonia)、产酸克雷伯氏菌(Klebsiella oxytoca)、以及藤黄微球菌(Micrococcus luteus)所组成的组中的任意一种或多种细菌具有抗菌活性，特别地对痤疮丙酸杆菌表现出明显的抑菌和杀菌活性，因此所述组合物优选用作用于预防和治疗痤疮的药物组合物。
此外，本发明提供一种含有选自由葡萄愈伤组织、愈伤组织破碎物、愈伤组织培养液以及愈伤组织提取物组成的组中的任意一种或多种作为有效成分的组合物用作用于预防或治疗痤疮的药物组合物的用途。
在本发明的具体实施例中，本发明人在诱导葡萄愈伤组织并制造其培养液和其提取物后确认了细胞毒性，结果证实ε-葡萄素仅在20μg/ml内无细胞毒性，但葡萄愈伤组织培养液包括100μg/ml的ε-葡萄素也未表现出细胞毒性(参照图1和图2)。
此外，本发明人为了确认葡萄愈伤组织培养液的抗氧化效果进行了DPPH分析，结果证实ε-葡萄素和δ-葡萄素与500μg/ml的对照组相比被去除了25％左右的自由基，但本发明的葡萄愈伤组织培养液(试样名称A)和葡萄愈伤组织培养液的提取物(试样名称a)在500μg/ml(以ε-葡萄素含量为准)下被去除60％或更多自由基(参照图3)。
此外，本发明人确认了葡萄愈伤组织培养液的抗菌效果，结果证实本发明的葡萄愈伤组织培养液对痤疮细菌表现出明显的杀菌和抑菌效果，特别是与纯葡萄素相比表现出显着的抗菌效果(参照图4至图7)。
因此，本发明的葡萄愈伤组织、其培养液以及其提取液无细胞毒性并表现出明显的抗氧化效果，且对痤疮细菌表现出显着的抗菌效果，因此可以有效用作用于抗氧化和抗菌组合物的有效成分。
根据本发明的药物组合物除有效成分之外可以包括药学上可接受的载体。本发明的药物组合物包括的药学上可接受的载体是常规用于配制的载体，包括碳水化合物类化合物(例如，乳糖、直链淀粉、右旋糖、蔗糖、山梨醇、甘露醇、淀粉、纤维素等)、阿拉伯树胶、磷酸钙、海藻酸盐、明胶、硅酸钙、微晶纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、纤维素、水、糖浆、盐溶液、醇、阿拉伯树胶、植物油(例如，玉米油、棉籽油、豆奶、橄榄油、椰子油)、聚乙二醇、甲基纤维素、羟基苯甲酸甲酯、羟基苯甲酸丙酯、滑石、硬脂酸镁以及矿物油等，但不限于此。
除上述成分外，本发明的药物组合物可以进一步包括润滑剂、湿润剂、甜味剂、增香剂、乳化剂、悬浮剂、保护剂等。适当的药学上可接受的载体和制剂详细描述于Remington's Pharmaceutical Sciences(第19版，1995)。
本发明的药物组合物可以通过口服或肠胃外等各种途径施用，并且可以预期所有方式，例如可通过口服、直肠或静脉、肌肉、皮下注射来施用。此时，肠胃外途径优选为经皮施用，其中最优选的是通过涂布来局部施用。
本发明药物组合物的适当的剂量根据配制方法、施用方式、患者的年龄、体重、性别、患病状态、饮食、施用时间、施用途径、排泄速率以及反应敏感性等因素而不同地进行处方。本发明药物组合物的口服剂量以成人为准在0.001㎎/kg至100㎎/kg(体重)范围。此外，当其为外用制剂时，能够以成人为准每天涂布1次至5次1.0ml至3.0ml的量，并持续1个月或更长时间。但是，所述剂量不限于本发明的范围。
本发明的药物组合物根据本发明所属领域技术人员能够容易实施的方法，通过利用药学上可接受的载体和/或赋形剂来配置，从而以单位剂量形式制造或者装入多容量容器中来制造。此时，剂型可以是在油或水性介质中的溶液、悬浮液、糖浆剂或乳液形式，或者也可以是提取物、散剂、粉末剂、颗粒、片剂或胶囊剂形式，并且可以进一步包括分散剂或稳定剂。
此外，本发明提供一种用于抗氧化和抗菌的化妆品组合物，所述化妆品组合物含有选自由葡萄愈伤组织、愈伤组织破碎物、愈伤组织培养液以及愈伤组织提取物组成的组中的任意一种或多种作为有效成分。
此外，本发明提供一种含有选自由葡萄愈伤组织、愈伤组织破碎物、愈伤组织培养液以及愈伤组织提取物组成的组中的任意一种或多种作为有效成分的组合物用作用于预防或改善痤疮的化妆品组合物的用途。
所述葡萄愈伤组织、愈伤组织破碎物、愈伤组织培养液以及愈伤组织提取物、其效果以及痤疮的描述与上述用于抗氧化和抗菌的组合物的描述相同，具体描述引用上述内容，以下仅对化妆品组合物特殊的技术特征进行描述。
根据本发明的化妆品组合物除有效成分之外可以进一步包括常规用于化妆品组合物的成分。例如，可以包括抗氧化剂、稳定剂、增溶剂、维生素、颜料以及香料等常规辅助剂和载体。
本发明的化妆品组合物可以制造成所属领域常规制造的任何剂型，例如可以配制成溶液、悬浮液、乳剂、糊剂、凝胶、乳霜、乳液、粉剂、香皂、含表面活性剂的清洁剂、油、粉底、乳液粉底、蜡粉底以及喷雾等，但不限于此。更具体地，可以制造成营养霜、收敛水、柔肤水、乳液、精华、营养凝胶或按摩霜等剂型。
当所述化妆品组合物的剂型为糊剂、乳霜或凝胶时，可以使用动物油、植物油、蜡、石蜡、淀粉、黄蓍胶、纤维素衍生物、聚乙二醇、有机硅、膨润土、二氧化硅、滑石粉或氧化锌等作为载体成分。
当所述化妆品组合物的剂型为粉剂或喷雾时，可以使用乳糖、滑石粉、二氧化硅、氢氧化铝、硅酸钙或聚酰胺粉末作为载体成分，特别地，当其剂型为喷雾时，可以进一步包括氯氟氰、丙烷/丁烷或二甲醚等推进剂。
当所述化妆品组合物的剂型为溶液或乳剂时，可以使用溶剂、增溶剂或乳化剂作为载体成分，例如，水、乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苯甲醇、苯甲酸苄酯、丙二醇、1，3-丁二醇油、甘油脂肪族酯、聚乙二醇或山梨聚糖的脂肪酸酯。
当所述化妆品组合物的剂型为悬浮液时，可以使用水、乙醇或丙二醇等液体稀释剂，乙氧基化异硬脂醇、聚氧乙烯山梨糖醇酯和聚氧乙烯山梨糖醇酯等悬浮剂，微晶纤维素、偏氢氧化铝、膨润土、琼脂或黄蓍胶等作为载体成分。
当所述化妆品组合物的剂型为含表面活性剂的清洁剂时，可以使用脂肪醇硫酸盐、脂肪醇醚硫酸盐、磺基琥珀酸单酯盐、羟乙基磺酸盐、咪唑啉衍生物、甲基牛磺酸盐、肌氨酸盐、脂肪酸酰胺醚硫酸盐、烷基酰胺甜菜碱、脂族醇、脂肪酸甘油酯、脂肪酸二乙醇酰胺、植物油、羊毛脂衍生物、乙氧基化甘油脂肪酸酯等作为载体成分。
此外，本发明提供一种用于抗氧化和抗菌的保健食品，所述保健食品含有选自由葡萄愈伤组织、愈伤组织破碎物、愈伤组织培养液以及愈伤组织提取物组成的组中的任意一种或多种作为有效成分。
对所述葡萄愈伤组织、愈伤组织破碎物、愈伤组织培养液以及愈伤组织提取物、其效果的描述与上述用于抗氧化和抗菌的组合物的描述相同，具体描述引用上述内容，以下仅对保健食品组合物特殊的技术特征进行描述。
根据本发明的保健食品除了有效成分外，可以包括食品制造过程中常规添加的成分。例如，包括蛋白质、碳水化合物、脂肪、营养素、调味剂和增香剂。所述碳水化合物的实例可举出单糖，例如葡萄糖、果糖等；二糖，例如麦芽糖、蔗糖、寡糖等；以及多糖，例如糊精、环糊精等普通糖以及木糖醇、山梨醇、赤藓糖醇等糖醇。增香剂可使用天然增香剂[索马甜、甜菊提取物(例如莱苞迪甙A、甘草糖苷等)]和合成增香剂(糖精、阿斯巴甜等)。
有效成分的混合量可以根据使用目的适当确定。通常，保健食品中所述有效成分的量能够以食品总重量的0.01重量至15重量来添加，并且保健饮料组合物能够以100ml为准添加0.02g至5g，优选能够以0.3g至1g的比例添加。然而，在出于健康和卫生目的或者调节健康的目的而长期摄入时，所述量可以小于或等于上述范围，并且因不存在安全性方面的问题而能够以大于或等于上述范围的量来使用有效成分。
当本发明的保健食品制造为保健饮料组合物时，除了本发明的有效成分之外，可以进一步包括柠檬酸、液体果糖、糖、葡萄糖、乙酸、苹果酸等。
此外，所述保健食品除上述成分外可以含有各种营养素、维生素、电解质、调味剂、着色剂、果胶酸及其盐、海藻酸及其盐、有机酸、保护胶体增稠剂、pH调节剂、稳定剂、防腐剂、甘油、醇、以及用于碳酸饮料的碳酸化剂等。除此之外，本发明的保健食品可以含有用于制造天然果汁、饮料以及蔬菜饮料的果肉。这种成分可以单独或组合使用。
此外，本发明提供一种预防或改善氧化应激的方法，所述方法包括将药学有效量的组合物施用于个体，所述组合物含有选自由葡萄愈伤组织、愈伤组织破碎物、愈伤组织培养液以及愈伤组织提取物组成的组中的任意一种或多种作为有效成分。
此外，本发明提供一种治疗氧化应激的方法，所述方法包括将药学有效量的组合物施用于个体，所述组合物含有选自由葡萄愈伤组织、愈伤组织破碎物、愈伤组织培养液以及愈伤组织提取物组成的组中的任意一种或多种作为有效成分。
此外，本发明的另一目的在于提供一种预防、改善细菌感染的方法，所述方法包括将药学有效量的组合物施用于个体，所述组合物含有选自由葡萄愈伤组织、愈伤组织破碎物、愈伤组织培养液以及愈伤组织提取物组成的组中的任意一种或多种作为有效成分。
此外，本发明的另一目的在于提供一种治疗细菌感染的方法，所述方法包括将药学有效量的组合物施用于个体，所述组合物含有选自由葡萄愈伤组织、愈伤组织破碎物、愈伤组织培养液以及愈伤组织提取物组成的组中的任意一种或多种作为有效成分。
此外，本发明提供一种预防或改善痤疮的方法，所述方法包括将药学有效量的组合物施用于个体，所述组合物含有选自由葡萄愈伤组织、愈伤组织破碎物、愈伤组织培养液以及愈伤组织提取物组成的组中的任意一种或多种作为有效成分。
此外，本发明提供一种治疗痤疮的方法，所述方法包括将药学有效量的组合物施用于个体，所述组合物含有选自由葡萄愈伤组织、愈伤组织破碎物、愈伤组织培养液以及愈伤组织提取物组成的组中的任意一种或多种作为有效成分。
所述葡萄愈伤组织、愈伤组织破碎物、愈伤组织培养液以及愈伤组织提取物以及痤疮与针对所述用于抗氧化和抗菌的组合物的描述相同，具体描述引用上述内容。
另一方面，已证实通过本发明的方法制造的用于抗氧化和抗菌的组合物无细胞毒性，并表现出明显的抗氧化效果以及对痤疮细菌的抗菌效果，特别是相较于纯葡萄素具有显着的抗氧化和抗菌效果，因此本发明的用于抗氧化和抗菌的组合物可有效用于预防、改善或治疗痤疮。
以下，通过实施例和实验例详细描述本发明。
但是，以下实施例和实验例仅示出本发明，本发明的内容不限于以下实施例和实验例。
<实施例1>制造葡萄愈伤组织培养液
<1-1>诱导葡萄愈伤组织
葡萄品种利用了早熟坎贝尔(Vitis vinifera L.cv Campbell Early)，从葡萄组织诱导愈伤组织后进行增殖。
具体地，剪切葡萄的花后用水洗净，浸入70％乙醇溶液1分钟进行表面杀菌。表面灭菌通过在无菌工作台上将葡萄的花组织装入玻璃瓶后用市售含氯漂白剂(约1％次氯酸钠)溶液实施15分钟，并用灭菌蒸馏水清洗3次。用灭菌滤纸去除已完成表面杀菌的组织中残留的水分，并将其用于培养。用手术刀切割已完成表面杀菌的葡萄的花组织，然后将各个组织(花瓣、花药、雄蕊)置于培养基。用于诱导葡萄愈伤组织的培养基示于[表1]，使用了添加有作为生长调节剂的0.1mg/L的IAA、0.1mg/L的NAA、1.5mg/L的2，4-D、以及0.25mg/L的激动素的培养基。培养条件为在25℃恒温箱中进行暗培养。将培养后形成的白色的愈伤组织以约4周的间隔在相同组成的固体培养基中进行继代培养。
[表1]
<1-2>回收葡萄愈伤组织培养液
培养通过上述实施例<1-1>被诱导和稳定的葡萄愈伤组织，从而回收了葡萄愈伤组织培养液。
具体地，将通过上述实施例<1-1>被诱导和稳定的葡萄愈伤组织以每100ml的MS1D(MS 4.4g、蔗糖30g、MES 0.5g、肌醇0.1g、盐酸硫胺素0.4mg、2，4-D 1mg/L)液体培养基10g的量分别接种到3个培养瓶后，以25℃、90rpm培养14天，其中，MS1D是指包括1mg/L的2，4-D的MS(Murashige&Skoog)培养基。利用预先灭菌并干燥的3L生物反应器对全部培养14天而增殖的愈伤组织进行继代培养后，添加1.2L的MS1D液体培养基。培养7天后，用100μM的MeJA(methyl jasmonate)和50mM的甜菊苷一同进行处理，然后在培养第5天时通过滤网过滤试样而分离为愈伤组织和愈伤组织培养液，从而得到葡萄愈伤组织培养液(试样名称A)。
此外，在上述制造的葡萄愈伤组织培养液中存在的ε-葡萄素、δ-葡萄素、以及白藜芦醇的含量的测量结果如表2所示。
另一方面，如下测量了ε-葡萄素、δ-葡萄素、以及白藜芦醇的含量：在20ml的所述葡萄愈伤组织培养液(试样名称A)中放入相同体积的乙酸乙酯并混合均匀后，回收乙酸乙酯层，用蒸发器去除乙酸乙酯。最后用1ml的乙醇溶解后稀释至适量，用高效液相色谱(HPLC)分析ε-葡萄素、δ-葡萄素、以及白藜芦醇各自的含量。
<1-3>制造葡萄愈伤组织培养液的提取物
用乙酸乙酯提取通过上述实施例<1-2>得到的葡萄愈伤组织培养液(试样名称A)，从而制造葡萄愈伤组织培养液的提取物(试样名称a)。
具体地，在20ml的通过上述实施例<1-2>得到的葡萄愈伤组织培养液(试样名称A)中放入相同体积的乙酸乙酯并混合均匀后，回收乙酸乙酯层，用蒸发器去除乙酸乙酯。最后用1ml的乙醇溶解，从而制造愈伤组织培养液的提取物(试样名称a)。
此外，通过与上述<1-2>相同的方法测量了愈伤组织培养液的提取物(试样名称a)中的ε-葡萄素、δ-葡萄素、以及白藜芦醇的含量，并将其结果示于下表2。
<1-4>制造试样C
用预先灭菌并干燥的培养瓶取代生物反应器，对在上述实施例<1-2>中接种至培养瓶中培养14天而增殖的愈伤组织进行继代培养后，添加300ml的MS1D液体培养基。培养7天后，用100μM的MeJA(methyl jasmonate)和50mM的甜菊苷一同进行处理，然后在培养第5天时通过滤网过滤试样而分离愈伤组织和愈伤组织培养液，从而得到葡萄愈伤组织培养液(命名为试样名称C)。
[表2]
<1-5>δ-葡萄素的分离纯化
用水和乙酸乙酯对通过上述<1-2>中制造的葡萄愈伤组织培养液进行分配提取，并减压浓缩所得乙酸乙酯层。利用MPLC仪器对所得浓缩物(15g)进行反相柱(10×30cm)第一阶段分离。此时，洗脱溶剂使用水-乙腈，通过将水-乙腈混合溶液的极性从100:1降低至100％乙腈进行洗脱，从而得到7个级分(A-G)。通过浓缩大量含有目标化合物葡萄素(trance-d-viniferin，下化学式1)的级分C得到1.3g的浓缩物。利用Recylcing LC设备在水-乙腈(2：2)混合溶剂条件下对1.3g所得浓缩物进行反向柱色谱，从而得到160㎎纯度大于或等于80％的葡萄素。进行用95％甲醇洗脱所得级分的凝胶色谱(Sephadex LH-20)，从而得到12mg纯度为98％的葡萄素。利用1H-NMR、13C-NMR、2D-NMR、DEPT以及质谱仪鉴定所得化合物的结构。
trans-δ-Viniferin：1H-NMR(400MHz，Acetone-d6)δ7.45(1H、dd、J＝8.5、2.0Hz、H-14b)、7.27(1H、s、H-10b)、7.25(2H、d、J＝8.5Hz、H-2(6)a)、7.07(1H、d、J＝16.5Hz、H-7b)、6.92(1H、d、J＝16.5Hz、H-8b)、6.88(1H、d、J＝8.1Hz、H-13b)、6.86(2H、d、J＝8.5Hz、H-3(5)a)、6.55(2H、d、J＝2.0Hz、H-2(6)b)、6.29(1H、t、J＝2.0Hz、12a)、6.27(1H、t、J＝2.0Hz、H-4b)、6.21(2H、d、J＝2.0、H-10(14)a)、5.47(1H、d、J＝8.0Hz、H-7a)、4.48(1H、d、J＝8.0Hz、H-8a)；13C-NMR(100MHz、Acetone-d6)δ159.7(C-12b)、158.8(C-11(13)a)、158.6(C-3(5)b)、157.5(C-4a)、144.3(C-9a)、139.8(C-1b)、131.6(C-11b)、131.2(C-1a)、130.8(C-9b)、128.2(C-7b)、127.7(C-14b)、127.6(C-2(6)a)、126.3(C-8b)、123.0(C-10b)、115.2(C-3(5)a)、109.2(C-13b)、106.4(C-10(14)a)、104.7(C-2(6)b)、101.8(C-4b)、101.4(C-12a)、93.1(C-7a)、56.9(C-8a)。
[化学式1]
<1-6>ε-葡萄素的分离纯化
用水和乙酸乙酯对通过上述<1-2>中制造的葡萄愈伤组织培养液进行分配提取，并减压浓缩所得乙酸乙酯层。利用MPLC仪器对所得浓缩物(10g)进行反相柱(10×30cm)第一阶段分离。此时，洗脱溶剂使用水-乙腈，通过将水-乙腈混合溶液的极性从70:1降低至100％乙腈进行洗脱，从而得到5个级分(A-E)。通过浓缩大量含有目标化合物葡萄素(trance-ε-viniferin，下化学式2)的级分B得到1.5g的浓缩物。利用Recylcing LC设备在水-乙腈(2：1)混合溶剂条件下对1.5g所得浓缩物进行反向柱色谱，从而得到100㎎纯度大于或等于85％的葡萄素。进行用95％甲醇洗脱所得级分的凝胶色谱(Sephadex LH-20)，从而得到30mg纯度为98％的葡萄素。利用1H-NMR、13C-NMR、2D-NMR、DEPT以及质谱仪鉴定所得化合物的结构。
trans-ε-viniferin 1H-NMR(400MHz、MeOD)δ7.14(2H、d、J＝8.0Hz、H-2(6)a)、7.03(2H、d、J＝8.0Hz、H-2(6)b)、6.80(1H、d、J＝13.6Hz、H-7b)、6.78(2H、d、J＝8.0Hz、H-3(5)a)、6.65(2H、d、J＝8.0Hz、H-3(5)b)、6.56(1H、d、J＝13.6Hz)、6.28(1H、brs、H-12b)、6.21(1H、brs、H-12a)、6.18(2H、brs、H-10a、14a)、5.37(1H、d、J＝8.0Hz、H-7a)、4.35(1H、d、J＝4.0Hz、H-8a)；13C-NMR(100MHz、MeOD)δ161.3(C-11b)、158.6(C-11a、13a)、158.3(C-13b)、157.1(C-4a)、156.9(C-4b)、146.0(C-9a)、135.6(C-9b)、132.5(C-1a)、129.1(C-1b、7b)、127.5(C-2(6)b)、127.0(C-2(6)a)、122.4(C-8b)、118.8(C-10b)、115.1(C-3(5)b)、115.1(C-3(5)a)、106.3(C-14a、10a)、103.1(C-14b)、101.0(C-12a)、95.6(C-12b)、93.5(C-7a)、56.9(C-8a)。
[化学式2]
<实验例1>确认葡萄愈伤组织培养液的细胞毒性
为了确认葡萄愈伤组织培养液、ε-葡萄素、以及δ-葡萄素的细胞毒性，利用MNT-1和Raw264.7细胞进行MTT assay。
具体地，在添加有10％FBS和1％庆大霉素的DMEM(高葡萄糖)培养基中以37℃、5％的CO2条件培养Raw264.7(鼠巨噬细胞)，并在添加有20％FBS和1％庆大霉素的DMEM/MEM(高葡萄糖)培养基中以37℃、5％的CO2条件培养MNT-1(人黑色素瘤细胞)。然后，分别在96孔中培养MNT-1(104cell/well)、Raw264.7(2x104cell/well)，用培养基稀释试样，在每个孔中进行处理。24小时后以100μg/ml浓度处理MTT溶液，并在37℃、5％的CO2培养机中反应1小时。然后，去除全部培养液，在每个孔中放入100μl的酸-异丙醇，用ELISA reader在570nm下测量吸光度。此外，为了比较试样和葡萄素，以ε-葡萄素含量为标准稀释试样后在孔中进行处理。
结果，如图1和图2所示，确认到ε-葡萄素仅在20μg/ml以内不具有细胞毒性，但葡萄愈伤组织培养液(试样名称A)即使包括100μg/ml的ε-葡萄素也未表现出细胞毒性(图1和图2)。
<实验例2>确认葡萄愈伤组织培养液的抗氧化效果
进行DPPH分析，以确认葡萄愈伤组织培养液的抗氧化效果。
具体地，利用80％甲醇制造0.2mM的DPPH(1,1-Diphenyl-2-picryhydrazyl)溶液，均匀混合180μl的DPPH和20μl的试样并在常温反应10分钟后，用ELISA reader在517nm下测量吸光度。另一方面，为了比较试样和葡萄素，以ε-葡萄素含量为标准稀释试样后在孔中进行处理。此外，取代试样在试样的稀释溶剂中放入DPPH试剂作为对照组。将处理抗坏血酸作为阳性对照组。
结果，如图3所示，确认到ε-葡萄素和δ-葡萄素相较于对照组在500μg/ml下被去除25％左右的自由基，但本发明的葡萄愈伤组织培养液(试样名称A)和愈伤组织培养液的提取物(试样名称a)在500μg/ml下(以ε-葡萄素含量为准)被去除60％或更多自由基(图3)。
<实验例3>确认葡萄愈伤组织培养液的抗菌效果
<3-1>培养痤疮细菌
为了确认葡萄愈伤组织培养液对痤疮细菌的抗菌作用，在RCM(ReinforcedClostridial Medium)中以37℃、厌氧条件培养痤疮丙酸杆菌(KCTC3314、KCTC3320、KCTC5012)。
<3-2>确认对痤疮细菌的MIC(minimuminhibitory concentration)
MIC是测量抗菌物质的抑菌特征的指标，在将本发明的葡萄愈伤组织培养液稀释至500nM至3.91nM之间的浓度后，确认阻碍3种痤疮丙酸杆菌生长的最低浓度。
具体地，利用5ml的RCM培养基以厌氧条件在37℃培养箱中培养72小时通过上述<3-1>培养的3种痤疮丙酸杆菌。此外，在96孔板中用DW以1/2进行稀释，从而制造出8种浓度的母板(Master plate)。然后，将50μl稀释后的每个试样转移至另外的96孔板中。将3种痤疮丙酸杆菌稀释(in 2×RCM)至1x106 cell/50ul，并将50μl的细菌转移后放入分别装有试样的96孔板中。
为了测量MIC，利用酶标仪测量0小时OD600nm。然后，以厌氧条件在37℃培养箱中培养72小时所述96孔板，然后利用酶标仪测量72小时OD600nm，从72小时OD值减去0小时OD值后与对照组比较3种痤疮丙酸杆菌根据试样浓度的生长情况，并通过比较OD值确认抗菌活性。
结果如图4所示，确认到葡萄愈伤组织培养液(试样名称A)分别在平均51.72nM、176.02nM、117.45nM的浓度阻碍痤疮丙酸杆菌3320、3314、5012的生长，并且δ-葡萄素含量高的葡萄愈伤组织培养液(试样名称C)分别在平均88.43nM、133.19nM、80.15nM的浓度阻碍痤疮丙酸杆菌3320、3314、5012的生长。与此相反，确认到纯ε-葡萄素和纯δ-葡萄素不表现出对3种痤疮丙酸杆菌生长的阻碍。
因此，确认到本发明的葡萄愈伤组织培养液相较于纯葡萄素表现出显着的抑菌活性。
<3-3>分析对痤疮细菌的MBC(minimum bactericidal concentration)
MBC是测量抗菌物质的杀菌特征的指标，在将本发明的葡萄愈伤组织培养液稀释至500nM至3.91nM之间的浓度后，确认抑制3种痤疮丙酸杆菌生长的最低浓度。
具体地，利用上述<3-1>中测量MIC的板测量了最低杀菌浓度。
结果如图5所示，通过MBC测量抗菌物质的72小时杀菌后确认到葡萄愈伤组织培养液(试样名称A)分别在125nM对痤疮丙酸杆菌3320、3314、5012具有最高的生长抑制效果。此外，确认到葡萄愈伤组织培养液(试样名称C)在125nM浓度对痤疮丙酸杆菌3320、5012表现出最多的生长抑制，并且在62.5nM浓度对痤疮丙酸杆菌3314表现出最多的生长抑制。
此外，如图6所示，通过MBC测量抗菌物质的48hr杀菌后确认到葡萄愈伤组织培养液(试样名称A)分别在125nM对痤疮丙酸杆菌3320、3314具有最高的生长抑制效果，并且在62.5nM抑制痤疮丙酸杆菌5012的生长。此外，确认到葡萄愈伤组织培养液(试样名称C)在62.5nM浓度对痤疮丙酸杆菌3320、5012表现出最多的生长抑制，并且在125nM浓度对痤疮丙酸杆菌3314表现出最多的生长抑制。
此外，确认到纯ε-葡萄素和纯δ-葡萄素均在48小时、72小时未表现出对3种痤疮丙酸杆菌的生长阻碍。
因此，确认到本发明的葡萄愈伤组织培养液相较于纯葡萄素表现出显着的杀菌活性。
<3-4>通过纸片扩散试验确认抗菌效果
纸片扩散试验是检测细菌对抗菌剂敏感性的方法，当存在抗菌效果时纸盘周围形成透明圈(clear zone)，通过透明圈形成水平可测量抗菌能力。
具体地，利用5ml的RCM培养基以厌氧条件在37℃培养箱中培养72小时痤疮丙酸杆菌3320。然后，用棉签沾湿稀释至5x105至1x106的细菌，并均匀涂抹在RCM琼脂培养基上。将纸盘置于琼脂板上，用原液试样润湿纸盘，以厌氧条件在37℃培养箱中培养72小时，然后用游标卡尺测量透明圈大小。
结果如图7和表3所示，当以ε-葡萄素为准处理5μg和10μg的愈伤组织培养液的提取物(试样名称a)时，表现出对2种痤疮丙酸杆菌(痤疮丙酸杆菌3320、5012)的抗菌性，具体地，在作为对照组的50％ EtOH处理组中出现8㎜透明圈，但当以ε-葡萄素为准处理5μg和10μg的本发明的愈伤组织培养液的提取物(试样名称a)时，出现大于或等于8㎜的透明圈，因此确认到本发明的愈伤组织培养液的提取物(试样名称a)对痤疮细菌表现出抗菌活性。
[表3]
工业实用性
本发明涉及一种含有葡萄愈伤组织培养液作为有效成分的用于抗菌和抗氧化的组合物，所述葡萄愈伤组织培养液包括ε-葡萄素、δ-葡萄素、以及白藜芦醇等，具体地，本发明的葡萄愈伤组织、其培养液、以及其提取液的优点在于无细胞毒性，并表现出明显的抗氧化效果以及对痤疮细菌的抗菌效果，特别是相较于纯葡萄素具有显着的抗氧化和抗菌效果，因此可以有效使用。
Claims (23)
1.一种抗菌药物组合物，其含有选自由葡萄愈伤组织、愈伤组织破碎物、愈伤组织培养液以及愈伤组织提取物组成的组中的任意一种或多种作为有效成分。
2.根据权利要求1所述的抗菌药物组合物，其特征在于，
所述葡萄愈伤组织来源于选自由葡萄的花、叶、茎、枝、果以及根组成的组中的任意一种或多种部位。
3.根据权利要求1所述的抗菌药物组合物，其特征在于，
所述葡萄愈伤组织在添加有活性诱导剂和增溶剂的培养基中被培养。
4.根据权利要求3所述的抗菌药物组合物，其特征在于，
所述活性诱导剂和增溶剂分别为茉莉酸甲酯和甜菊苷。
5.根据权利要求1所述的抗菌药物组合物，其特征在于，
所述组合物对由痤疮丙酸杆菌(Propionibacterium acnes)、表皮葡萄球菌(Staphylococcus epidermis)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、腐生葡萄球菌(Staphylococcus saprophyticus)、绿脓杆菌(Pseudomonas aeruginosa)、粪肠球菌(Enterococcus faecalis)、鲍曼放线菌(Actinomyces baumannii)、蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)、枯草芽胞杆菌斯氏亚种(Bacillus subtilis subsp.spizizenii)、克雷伯杆菌(Klebsiella pneumonia)、产酸克雷伯氏菌(Klebsiella oxytoca)、以及藤黄微球菌(Micrococcus luteus)所组成的组中的任意一种或多种细菌具有抗菌活性。
6.根据权利要求1所述的抗菌药物组合物，其特征在于，
所述组合物具有抑菌活性和杀菌活性。
7.一种用于预防和治疗痤疮的药物组合物，
其含有选自由葡萄愈伤组织、愈伤组织破碎物、愈伤组织培养液以及愈伤组织提取物组成的组中的任意一种或多种作为有效成分。
8.根据权利要求7所述的用于预防和治疗痤疮的药物组合物，其特征在于，
所述组合物对痤疮丙酸杆菌(Propionibacterium acnes)具有抗菌活性。
9.根据权利要求7所述的用于预防和治疗痤疮的药物组合物，其特征在于，
所述组合物对痤疮丙酸杆菌具有抑菌活性和杀菌活性。
10.一种用于抗菌的化妆品组合物，其含有选自由葡萄愈伤组织、愈伤组织破碎物、愈伤组织培养液以及愈伤组织提取物组成的组中的任意一种或多种作为有效成分。
11.一种用于预防和改善痤疮的化妆品组合物，其含有选自由葡萄愈伤组织、愈伤组织破碎物、愈伤组织培养液以及愈伤组织提取物组成的组中的任意一种或多种作为有效成分。
12.一种用于抗氧化的组合物，其含有选自由葡萄愈伤组织、愈伤组织破碎物、愈伤组织培养液以及愈伤组织提取物组成的组中的任意一种或多种作为有效成分。
13.一种用于抗氧化和抗菌的保健食品，其含有选自由葡萄愈伤组织、愈伤组织破碎物、愈伤组织培养液以及愈伤组织提取物组成的组中的任意一种或多种作为有效成分。
14.一种预防或改善氧化应激的方法，其包括：
将药学有效量的组合物施用于个体，所述组合物含有选自由葡萄愈伤组织、愈伤组织破碎物、愈伤组织培养液以及愈伤组织提取物组成的组中的任意一种或多种作为有效成分。
15.一种治疗氧化应激的方法，其包括：
将药学有效量的组合物施用于个体，所述组合物含有选自由葡萄愈伤组织、愈伤组织破碎物、愈伤组织培养液以及愈伤组织提取物组成的组中的任意一种或多种作为有效成分。
16.一种预防或改善细菌感染的方法，其包括：
将药学有效量的组合物施用于个体，所述组合物含有选自由葡萄愈伤组织、愈伤组织破碎物、愈伤组织培养液以及愈伤组织提取物组成的组中的任意一种或多种作为有效成分。
17.一种治疗细菌感染的方法，其包括：
将药学有效量的组合物施用于个体，所述组合物含有选自由葡萄愈伤组织、愈伤组织破碎物、愈伤组织培养液以及愈伤组织提取物组成的组中的任意一种或多种作为有效成分。
18.一种预防或改善痤疮的方法，其包括：
将药学有效量的组合物施用于个体，所述组合物含有选自由葡萄愈伤组织、愈伤组织破碎物、愈伤组织培养液以及愈伤组织提取物组成的组中的任意一种或多种作为有效成分。
19.一种治疗痤疮的方法，其包括：
将药学有效量的组合物施用于个体，所述组合物含有选自由葡萄愈伤组织、愈伤组织破碎物、愈伤组织培养液以及愈伤组织提取物组成的组中的任意一种或多种作为有效成分。
20.一种含有选自由葡萄愈伤组织、愈伤组织破碎物、愈伤组织培养液以及愈伤组织提取物组成的组中的任意一种或多种作为有效成分的组合物在用作用于预防、改善或治疗氧化应激的组合物的用途。
21.一种含有选自由葡萄愈伤组织、愈伤组织破碎物、愈伤组织培养液以及愈伤组织提取物组成的组中的任意一种或多种作为有效成分的组合物用作用于预防、改善或治疗细菌感染的组合物的用途。
22.一种含有选自由葡萄愈伤组织、愈伤组织破碎物、愈伤组织培养液以及愈伤组织提取物组成的组中的任意一种或多种作为有效成分的组合物用作用于预防或治疗痤疮的药物组合物的用途。
23.一种含有选自由葡萄愈伤组织、愈伤组织破碎物、愈伤组织培养液以及愈伤组织提取物组成的组中的任意一种或多种作为有效成分的组合物用作用于预防和改善痤疮的化妆品组合物的用途。
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