CN117986260A - 一类螺环化合物、其制备方法及用途 - Google Patents

一类螺环化合物、其制备方法及用途 Download PDF

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Abstract

本发明涉及一类螺环化合物及其制备方法和用途。所述螺环化合物如式I所示，具有3CL蛋白酶抑制活性，可有效抑制依赖3CL蛋白酶进行蛋白复合物水解的RNA病毒复制，进而用于相关疾病的预防或治疗。

Description

一类螺环化合物、其制备方法及用途
技术领域
本发明属于药物发现和药物化学领域，具体而言，本发明涉及一类螺环化合物、其制备方法及用途。
背景技术
冠状病毒为单链正义RNA(ss-RNA)病毒，可分为四个属：α、β、γ、δ，是许多家畜、宠物、野生动物包括人类疾病的重要病原体，能够引起多种急慢性疾病。冠状病毒在SARS-CoV-2之前有6种冠状病毒被报道感染人类。其中HCoV-229E、HCoV-OC43、HCoV-NL63、HCoV-HKU1只能引起普通的感冒。在人群中大范围传播并引起了严重症状的SARS-CoV、MERS-CoV、SARS-CoV-2均属于套式病毒目冠状病毒科冠状病毒属β亚型。
冠状病毒由结构蛋白和功能蛋白组成。结构蛋白包括核衣壳蛋白(N蛋白)、膜蛋白(M蛋白)、刺突蛋白(S蛋白)和包膜蛋白(E蛋白)，结构蛋白不仅起到保护病毒遗传物质的作用，也参与病毒的感染过程。功能蛋白在病毒的感染、基因表达、免疫逃逸等扮演重要角色。
冠状病毒基因组一般有6-11个开放阅读框(ORF)，其中ORF1ab约占整个基因组的三分之二，编码非结构蛋白(nsps)，而其余的ORF编码结构蛋白和其他辅助蛋白。在宿主细胞内ORF1ab基因先翻译成一个多聚蛋白体，再由3-胰凝乳蛋白酶样蛋白酶(3-chymotrypsin-like protease，3CL蛋白酶)和木瓜蛋白酶样蛋白酶(papain-likeprotease，PL蛋白酶)精确切割成多个功能蛋白。一部分功能蛋白参与病毒转录复制复合体(RTC)的组装，启动病毒复制。因此抑制3CL蛋白酶能够有效抑制冠状病毒的复制。
3CL蛋白酶是由306个氨基酸组成，包含三个结构域(I，II和III)的同源二聚体半胱氨酸蛋白酶。结构域I和结构域II之间His41和Cys145的位置存在四个高度保守的亚位点底物结合域(催化二元组)。不同冠状病毒之间的的3CL蛋白酶结构高度保守，可以作为同源靶点开发广谱抗冠状病毒药物。此外目前没有发现人类具有同源的3CL蛋白酶，其作为靶点开发药物安全性较高。
本发明提供一类具有3CL蛋白酶抑制活性螺环化合物，可有效抑制依赖3CL蛋白酶进行蛋白复合物水解的RNA病毒复制，进而用于相关疾病的预防或治疗。
发明内容
本发明基于3CL蛋白酶的结构特点，设计了一类螺环化合物，所述化合物可以有效抑制包括SARS-CoV-2在内的多种冠状病毒的3CL蛋白酶活性、化合物及其药物组合物可以用于制备冠状病毒诱发疾病的药物。发明人在此基础上完成了本公开。除此之外，本发明提供了制备所述化合物的合成方法。
本发明采用的技术方案为：
本发明涉及式I所示的螺环化合物，或其对映异构体、非对映异构体、外消旋体或药学上可接受的盐：
其中
R1选自氢、C1～C6烷基；
A环选自含1～6个杂原子的单环或并环，特别地选自
R2与R3各自独立地选自H、C1～C10烷基、含1～3个卤原子的C1～C10烷基、含1～3个杂原子的C1～C10烷基、C3-C8环烷基、C3-C8环烷基取代的C1～C6烷基；特别是，R2与R3各自独立地选自H、C1～C6烷基、含1～3个卤原子的C1～C6烷基、含1～3个杂原子的C1～C6烷基、C3-C6环烷基、C3-C6环烷基取代的C1～C6烷基；特别是，R2与R3各自独立地选自H、C1～C4烷基、含1～3个卤原子的C1～C4烷基、含1～3个杂原子的C1～C4烷基、C3-C6环烷基、C3-C6环烷基取代的C1～C4烷基；
R4选自氢、C1～C6烷基、含1～3个卤原子的C1～C6烷基、含1～3个杂原子的C1～C6烷基；特别是，R4选自氢、C1～C4烷基、含1～3个卤原子的C1～C4烷基、含1～3个杂原子的C1～C4烷基；或者
R2与R4可以相连形成含1～4个杂原子的并环、桥环或螺环；特别地，R2与R4和与其分别相连的碳和氮原子相连形成
R5选自-COR6、-SO2R7、喹唑啉基、C1～C6烷基取代的喹唑啉基、含1～5个卤原子的C1～C10烷基取代的喹唑啉基；
R6选自-CR8R9NHR10、-NR11NHR12、取代的5-10元杂芳环并3-8元杂环烷基、取代或未取代的5-10元杂芳基，所述5-10元杂芳环的取代基选自含1～5个卤原子的C1～C10烷基，所述5-10元杂芳基的取代基选自取代的C6-C10芳基、C1～C6烷基，所述C6-C10芳基的取代基选自1～5个卤原子的C1～C10烷基；特别地，R6选自-CR8R9NHR10、-NR11NHR12、取代的5-7元杂芳环并3-6元杂环烷基、取代或未取代的5-7元杂芳基，所述5-7元杂芳环的取代基选自含1～3个卤原子的C1～C10烷基，所述5-7元杂芳基的取代基选自取代的C6-C10芳基、C1～C6烷基，所述C6-C10芳基的取代基选自1～3个卤原子的C1～C6烷基；
R7选自取代或未取代的C6-C10芳基、取代或未取代的5-10元杂芳基、取代的5-10元杂芳环并3-8元杂环烷基、取代的C6-C10芳基并3-8元杂环烷基、取代的苄基，所述5-10元杂芳基的取代基选自取代的C6-C10芳基、含1～5个卤原子的C1～C10烷基，所述C6-C10芳基的取代基选自含1～5个卤原子的C1～C10烷基，苄基的取代基选自含1～5个卤原子的C1～C10烷基；特别地，R7选自取代或未取代的C6-C10芳基、取代或未取代的5-7元杂芳基、取代的5-7元杂芳环并3-6元杂环烷基、取代的C6-C10芳基并3-6元杂环烷基、取代的苄基，所述5-7元杂芳基的取代基选自取代的C6-C10芳基、含1～3个卤原子的C1～C6烷基，所述C6-C10芳基的取代基选自含1～3个卤原子的C1～C6烷基，苄基的取代基选自含1～3个卤原子的C1～C6烷基；
R8与R9各自独立地选自氢、C1～C6烷基、C3～C8环烷基、C1～C8烷氧基取代的C6-C10芳基，其中C1～C8烷氧基为未取代的或被-NR8’R9’取代，R8’R9’各自独立地为氢或C1-C6烷基；特别地，R8与R9各自独立地选自氢、C1～C4烷基、C3～C6环烷基、C1～C4烷氧基取代的C6-C10芳基，其中C1～C4烷氧基为未取代的或被-NR8’R9’取代，R8’R9’各自独立地为氢或C1-C4烷基；或者
R8与R9可以和与其相连的碳原子一起形成3～6元亚环烷基；
R10选自C1～C6烷基取代的甲酰基、含1～5个卤原子的C1～C6烷基取代的甲酰基、C3～C6环烷基取代的甲酰基、苯甲酰基、1～5个卤原子取代的苯甲酰基、C1～C6烷基取代的磺酰基、C3～C8环烷基取代的磺酰基、含1～5个卤原子的C1～C6烷基取代的磺酰基、C1～C6烷基取代的甲酰基羰基、-SO2NR13R14；特别地，R10选自C1～C4烷基取代的甲酰基、含1～3个卤原子的C1～C4烷基取代的甲酰基、C3～C6环烷基取代的甲酰基、苯甲酰基、1～3个卤原子取代的苯甲酰基、C1～C4烷基取代的磺酰基、C3～C6环烷基取代的磺酰基、含1～3个卤原子的C1～C4烷基取代的磺酰基、C1～C4烷基取代的甲酰基羰基、-SO2NR13R14；
R11与R12各自独立地选自氢、C1～C6烷基、C1～C6烷基取代的甲酰基、含1～5个卤原子的C1～C6烷基取代的甲酰基；特别地，R11与R12各自独立地选自氢、C1～C4烷基、C1～C4烷基取代的甲酰基、含1～3个卤原子的C1～C4烷基取代的甲酰基；
R13与R14各自独立地选自氢、C1～C6烷基；或者
R13与R14能够和与之相连的氮原子形成3～8元杂环烷基；
X选自氰基、-COSR15，
R15选自C1～C6烷基、1～5个卤原子取代的C1～C6烷基、C3～C8环烷基、C2～C6烯基、C3～C8环烷基取代的C1～C6烷基；特别地，R15选自C1～C4烷基、1、2或3个卤原子取代的C1～C4烷基、C3～C6环烷基、C2～C4烯基、C3～C6环烷基取代的C1～C4烷基；
每个R’独立地选自氢、卤素、C1～C6烷基、1～5个卤原子取代的C1～C6烷基、C1～C6烷氧基；特别地每个R’独立地选自氢、卤素、C1～C4烷基、1～3个卤原子取代的C1～C4烷基、C1～C4烷氧基；
n为0、1、2、3或4；
卤原子指F、Cl、Br或I；
杂原子指N、O或S。
在一些实施方式中，式I所示的螺环化合物，或其对映异构体、非对映异构体、外消旋体或药学上可接受的盐，其中
X为-COSR15，
R15选自C1～C6烷基、1～5个卤原子取代的C1～C6烷基、C3～C8环烷基、C2～C6烯基、C3～C8环烷基取代的C1～C6烷基；
其它取代基的定义如上所述。
在一些实施方式中，式I所示的螺环化合物，或其对映异构体、非对映异构体、外消旋体或药学上可接受的盐，其中A环选自含1～6个杂原子的并环，特别地选自：
R2与R3各自独立地选自H、C1～C10烷基、C3-C8环烷基、C3-C8环烷基取代的C1～C6烷基；
R4选自氢、C1～C6烷基；
R5选自-COR6、-SO2R7；
其它取代基如之前的定义。
在一些实施方式中，式I所示的螺环化合物，或其对映异构体、非对映异构体、外消旋体或药学上可接受的盐，其中，
R2与R3各自独立地选自H、C1～C4烷基、含1～3个卤原子的C1～C4烷基、含1～3个杂原子的C1～C4烷基(例如甲氧基亚甲基)、C3-C6环烷基、C3-C6环烷基取代的C1～C4烷基(例如环丙基亚甲基)；
其它取代基如之前的定义。
在一些实施方式中，式I所示的螺环化合物可以表示为式I-A～I-E，或其药学上可接受的盐：
其中R2与R3各自独立地选自H、C1～C10烷基、C3-C8环烷基、C3-C8环烷基取代的C1～C6烷基；
R4选自氢、C1～C6烷基；
R5选自-COR6；
其它取代基如之前的定义。
在一些实施方式中，式I所示的螺环化合物可以表示为式I’-A-1至I’-A-4；I’-B-1至I’-B-4；I’-C-1至I’-C-4；I’-D-1至I’-D-4；I’-E-1至I’-E-4：
其中各取代基如之前的定义。
在一些实施方式中，式I所示的螺环化合物可以表示为式II-A，或其药学上可接受的盐：
其中，R2、R4、R6分别如上所述。
在一些实施方式中，式I所示的螺环化合物可以表示为式II-A，或其药学上可接受的盐：
R2选自C1～C10烷基、C3-C8环烷基、C3-C8环烷基取代的C1～C6烷基；
其它取代基如之前的定义。
在一些实施方式中，式I所示的螺环化合物可以表示为式II-A，或其药学上可接受的盐：
R2选自C1～C10烷基、C3-C8环烷基取代的C1～C6烷基；
R6选自-CR8 R9NR10；
R8与R9各自独立地选自氢、C1～C6烷基、C3-C8环烷基；
其它取代基如之前的定义。
在一些实施方式中，式I所示的螺环化合物可以表示为式II-B，或其药学上可接受的盐：
其中，R2、R4、R6分别如上所述。
在一些实施方式中，式I所示的螺环化合物可以表示为式II-C，或其药学上可接受的盐：
其中，R2、R4、R6、R15分别如上所述。
在一些实施方式中，式I所示的螺环化合物可以表示为式II-D，或其药学上可接受的盐：
其中，R2、R4、R6、R15分别如上所述。
在一些实施方式中，式I所示的化合物选自以下化合物：
/>
/>
本发明的另一方面提供了所述螺环化合物的制备方法，该方法选自以下方法1-6之一：
方法1：
步骤1a)：化合物a1和b1发生缩合反应制备化合物c1；
步骤1b)：化合物c1脱去保护基得到化合物d1；
步骤1c)：化合物d1与e1缩合得到化合物f1；
步骤1d)：化合物f1脱去保护基后与羧酸、酰氯或酸酐反应得到化合物g1；
步骤1e)：化合物g1经过脱水，或者水解后缩合，或者水解后硫代再亲核反应得到化合物I；
在方法1中，取代基R1-R5、A和X的定义与上文中相同，
Ra为酰胺或酯，Rb是保护基团；
方法2：
步骤2a)：化合物a2和b2发生缩合反应制备化合物c2；
步骤2b)：化合物c2经过脱水，或者水解后缩合，或者水解后硫代再亲核反应得到化合物I；
在方法2中，取代基R1-R5、A和X的定义与上文中相同，
Ra为酰胺或酯；
方法3：
步骤3a)：化合物a3和b3发生缩合反应制备化合物c3；
步骤3b)：化合物c3脱去保护基后与羧酸、酰氯或酸酐反应得到化合物d3；
步骤3c)：化合物d3经过脱水，或者水解后缩合，或者水解后硫代再亲核反应得到化合物I；
在方法3中，取代基R1-R5、A和X的定义与上文中相同，
Ra是酰胺或酯；
方法4：
步骤4a)：化合物a4和b4发生缩合反应制备化合物c4；
步骤4b)：化合物c4脱去保护后经亲核反应得到化合物d4；
步骤4c)：化合物d4脱水，或者水解后缩合，或者水解后硫代再亲核反应得到化合物I；
在方法4中，取代基R1-R5、A和X的定义与上文中相同，
Ra是酰胺或酯；
方法5：
步骤5a)：化合物a5和b5发生缩合反应制备化合物I；
在方法5中，取代基R1-R5、A和X的定义与上文中相同；
方法6
步骤6a)：化合物a6和b6发生缩合反应制备化合物c6；
步骤6b)：化合物c6脱去保护基后与与羧酸、酰氯或酸酐反应得到化合物I；
在方法6中，取代基R1-R5、A和X的定义与上文中相同；
上述的方法1-6或这些方法中的各个具体步骤可用于本申请的具体化合物或其中间体的制备。
上文中所述的缩合反应、脱除保护基的反应、脱水反应、亲核反应或其他未命名反应是本领域技术人员已知的反应类型，这些反应可以在，例如，“《基础有机化学》(第4版)，邢其毅著，北京大学出版社，2017年1月”、“《有机化学——结构与功能》(第四版)，K.Peter等著，戴立信等译，化学工业出版社，2006年5月”、“《March高等有机化学》(第7版)，MichaelB.Smith编著，李艳梅等译，化学工业出版社，2018年3月”等教科书中找到，其中所使用的保护基(团)、羧酸、酰氯、酸酐、酰胺以及其他试剂是本领域技术人员根据上述公知常识可以适当选用的。
本发明另一方面还提供一种药物组合物，其包含第一活性成分，所述第一活性成分如式I所述的化合物、其外消旋体、对映异构体、非对映异构体，或它们的混合物，或其药学上可接受的盐中的一种或多种，以及任选地，一种或者多种药学上可接收的辅料、稀释剂、载体、赋形剂或佐剂。
本发明再一方面提供一种式I所述的螺环化合物，其外消旋体、对映异构体、非对映异构体、其药学上可接受的盐，或它们的混合物，或药物组合组在制备药物中的用途，所述药物选自用于抑制冠状病毒3CL蛋白酶活性的药物，用于预防和/或治疗冠状病毒感染的药物。
具体实施方式
术语定义
在本发明中，所述“烷基”是指脂肪族烃基团，可以是支链或直链的烷基。根据结构，烷基可以是单价基团或双价基团(即亚烷基)，例如，在“羟基C1-6烷基”中，所述C1-6烷基实际为二价基团(亚烷基)。在本发明中，烷基优选是具有1-6个碳原子的“低级烷基”，甚至更优选具有1-3个碳原子的“低级烷基”。典型的烷基包括但不限于甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、叔丁基、戊基、己基等。
所述“烯基”表示直链或支链的结构中具有至少一个碳碳双键的烃基，例如本发明所述“C2-C6烯基”表示含有2-6个(2、3、4、5、6个)碳原子的结构中具有至少一个碳碳双键的烃基，例如乙烯基、丙烯基、烯丙基、丁烯基等。
所述“卤素”为F、Cl、Br、I；
所述“卤代烷基”为烷基中至少一个氢原子被卤原子置换。在某些实施例方式中，如果两个或更多氢原子被卤原子置换，所述卤原子彼此相同或不同；例如包括但不限于三氟甲基、二氟甲基、1,1-二氟乙基、2-氟-2-甲基丙基等；
所述“杂烷基”为烷基中至少一个骨架C原子被杂原子(N、O、S)置换。在某些实施例方式中，如果两个或更多C原子被杂原子置换，所述杂原子彼此相同或不同；
所述“环烷基”为饱和或不饱和的3-10元单环或多环脂环，例如环原子为3-10个或3-6个的3-10元或3-6元的环烷基，同时可以是单价基团或双价基团(及亚环烷基)；例如包括但不限于环丙基、环丁基、环戊基、环己基等；
所述“杂环烷基”为环上含有选自N、O、S中一个或一个以上杂原子的饱和或不饱和的3-10元单环或多环脂杂环，例如包括但不限于环原子为3-10个或3-6个的3-10元或3-6元杂环烷基，同时可以是单价基团或双价基团(即亚杂环烷基)；
所述“芳基”是指芳香基环中每一个构成环的原子都是碳原子，包括单环或稠环多环，同时可以是单价基团或双价基团(即亚芳基)，或可能带有电荷。在本发明中，芳基优选是具有5-10个碳原子的芳基，或优选是具有6-10个碳原子的芳基，或优选是具有5-7个碳原子的芳基。
所述“芳烷基”是指烷基中一个或多个氢原子被芳基置换。例如苄基、苯乙基。
所述“杂芳基”为环上含有选自N、O、S中一个或一个以上杂原子的芳香基。根据结构，杂芳基可以是单价基团或双价基团(即亚杂芳基)。杂芳基的实施例包括但不限于吡啶基、嘧啶基、咪唑基、吡唑基、吡嗪基、三唑基、四唑基、噻吩基、噻唑基、呋喃基、噁唑基、异噁唑基、吡咯基、喹啉基、异喹啉基、吲哚基、苯并咪唑基、苯并呋喃基、吲唑基、吲嗪基、酞嗪基、哒嗪基、异吲哚基、蝶碇基、嘌呤基、噁二唑基、噻二唑基、呋咱基、苯并呋咱基、苯并噻吩基、苯并噻唑基、苯并噁唑基、喹唑啉基等。
所述“杂环基”为单环或多环，并且至少一个为具有一个或多个杂原子的饱和或部分饱和(非芳香性)环。代表性的杂环基包括以下三种情况：1)每个环均为非芳香环，并且至少一个环具有杂原子；2)至少一个环是包含杂原子的非芳香环，同时至少有另外一个环是芳香性碳环；3)至少一个环是包含杂原子的非芳香性环，同时至少有另一个环是芳杂环。
以下通过实施例进一步描述本公开。在以下的实施例中，原料可商业购买，或者能够通过文献中记载的方法/本领域已知的有机合成方法制备。
实施例1
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步骤一：将1-1(6g)、2-甲基四氢呋喃(50mL)加入到250mL单口瓶中，8℃下缓慢将三乙胺(7.2mL)、水(15.6mL)加入到反应液中，搅拌20min后缓慢将二碳酸二叔丁酯(6mL)加入到反应液中，0-10℃反应30min后，25℃反应1.5h。将1N盐酸(24mL)和2-甲基四氢呋喃(50mL)加入反应液后静置分层，有机相用饱和碳酸氢钠溶液和饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥有机相。过滤后浓缩有机相，得到7.38g化合物1-2，收率87.2％。ESI-MS m/z 344.41[M+H]+.
步骤二：将1-2(7.14g)、2-甲基四氢呋喃(100mL)加入到250mL单口瓶中，3℃条件下将去离子水(50mL)、冰醋酸(16.2mL)加入到反应液中。-1℃条件下分批加入NBS(3.55mg),-4℃反应30min。有机相加入60mL饱和碳酸氢钠溶液分层，有机相饱和食盐水洗后无水硫酸钠干燥。过滤后，浓缩有机相通过柱层析法(SiO2，石油醚:乙酸乙酯＝15:1-1:1)进行纯化，得到3g化合物1-3，收率40％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.52(d,J＝52.7Hz,1H),7.35(d,J＝7.5Hz,1H),7.23(td,J＝7.7,1.2Hz,1H),6.97(td,J＝7.6,1.1Hz,1H),6.83(dd,J＝16.9,8.0Hz,1H),4.53(q,J＝8.6Hz,1H),3.89(q,J＝6.7Hz,1H),3.70(s,3H),2.53(s,1H),2.47-2.37(m,1H),1.37(s,9H),1.29-1.21(m,3H).
步骤三：将3g 1-3、30mL 2-甲基四氢呋喃、20mL水、1.4g氢氧化锂一水合物加入到250mL单口瓶中。40℃反应60min。将30mL 1N盐酸和100mL乙酸乙酯加入反应液中分层。有机相加入30mL水分层，有机相加入30mL饱和食盐水分层，无水硫酸钠干燥有机相。浓缩有机相得到2.83g化合物1-4，收率98.3％。ESI-MS m/z 346.70[M+H]+.
步骤四：将1.32g 1-4、15mL二氧六环、1.2mL二碳酸二叔丁酯、0.5mL吡啶加入到100mL单口瓶中。25℃搅拌10min后，将420mg碳酸氢铵加入到反应液中。25℃反应12h。浓缩有机相通过柱层析法(SiO2，二氯甲烷:甲醇＝200:1～10:1)进行纯化，得到500mg化合物1-5，收率38.2％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.40(s,1H),7.40(d,J＝3.5Hz,1H),7.31(d,J＝7.5Hz,1H),7.22(td,J＝7.7,1.2Hz,1H),7.01(s,1H),6.96(td,J＝7.6,1.1Hz,1H),6.84(d,J＝7.7Hz,1H),4.48(t,J＝8.6Hz,1H),3.88(q,J＝6.7Hz,1H),2.32-2.26(m,2H),1.38(s,9H),1.23(d,J＝6.5Hz,3H).
步骤五：将400mg 1-5、3mL二氧六环、3mL 4N HCl的1，4-二氧六环溶液加入25mL单口瓶中，40℃反应1h，浓缩干反应液。将282mg 1-6、660mg HATU、10mL二氯甲烷加入上述浓缩干的反应液中，25℃反应30min，将0.4mL N,N-二异丙基乙胺滴加至反应液，25℃反应10h。将1mL 1N盐酸和5mL二氯甲烷加入反应液中分层，有机相水洗、饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥。过滤后，浓缩有机相通过柱层析法(SiO2，二氯甲烷:甲醇＝100:1-20:1)进行纯化，得到310mg化合物1-7，收率56.9％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.39(d,J＝58.8Hz,1H),7.47-7.29(m,2H),7.22(t,J＝7.7Hz,1H),6.97(q,J＝7.7,5.4Hz,2H),6.79(dd,J＝14.7,8.0Hz,1H),4.82(t,J＝7.4Hz,1H),4.63(dddd,J＝22.7,13.4,8.5,4.9Hz,1H),4.31-4.10(m,1H),2.61(dd,J＝10.5,5.1Hz,3H),2.40-2.23(m,2H),1.73(dt,J＝15.5,6.5Hz,1H),1.51(td,J＝7.1,3.5Hz,1H),1.44-1.31(m,9H),1.30-1.16(m,3H),0.58-0.46(m,1H),0.36(ddq,J＝17.9,9.8,5.0,4.3Hz,2H),0.15--0.04(m,2H).ESI-MS m/z 470.86[M+H]+.
步骤六:将280mg 1-7、2mL二氧六环、2mL 4N HCl的1，4-二氧六环溶液加入25mL单口瓶中，40℃反应1h，浓缩干反应液。将113mg 1-8、339mg HATU、8mL二氯甲烷加入上述浓缩干的反应液中，25℃反应30min，将0.2mL N,N-二异丙基乙胺滴加至反应液，25℃反应10h。将1mL 1N盐酸和5mL二氯甲烷加入反应液中分层，有机相水洗、饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥。过滤后，浓缩有机相通过柱层析法(SiO2，二氯甲烷:甲醇＝100:1-20:1)进行纯化，得到220mg化合物1-9，收率68.3％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.42(d,J＝56.0Hz,1H),7.46-7.37(m,1H),7.32(d,J＝7.5Hz,1H),7.23(t,J＝7.7Hz,1H),7.03-6.94(m,2H),6.85(dp,J＝15.0,8.2,7.6Hz,2H),5.27(t,J＝7.3Hz,1H),4.58(q,J＝9.9,9.4Hz,1H),4.40-4.24(m,1H),3.88(q,J＝7.0Hz,1H),2.85(d,J＝3.4Hz,3H),2.32(qd,J＝13.2,9.3Hz,2H),1.50(t,J＝7.1Hz,2H),1.33(d,J＝25.1Hz,12H),1.10(t,J＝6.1Hz,3H),0.56(q,J＝6.4,5.4Hz,1H),0.42-0.20(m,2H),0.02(t,J＝6.4Hz,2H).ESI-MS m/z541.92[M+H]+.
步骤七:将180mg 1-9、2mL二氧六环、1mL 4N HCl的1，4-二氧六环溶液加入25mL单口瓶中，40℃反应1h，浓缩干反应液。将上述得到的盐酸盐、6mL二氯甲烷置于25mL单口瓶中，0℃条件下将0.2mL三乙胺缓慢滴加到反应液中，搅拌10min后将0.1mL三氟乙酸酐缓慢滴加到反应液中，25℃反应12h。将1mL 1N盐酸和5mL二氯甲烷加入反应液中分层，有机相水洗、饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥。过滤后，浓缩有机相，通过柱层析法(SiO2，二氯甲烷:甲醇＝200:1-50:1)进行纯化，得到60mg化合物1，收率34.7％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.60(d,J＝50.8Hz,1H),9.59(d,J＝6.7Hz,1H),7.50(dd,J＝24.7,7.9Hz,1H),7.28(t,J＝7.7Hz,1H),7.01(t,J＝7.5Hz,1H),6.85(dd,J＝16.9,8.0Hz,1H),5.29(t,J＝7.3Hz,1H),4.88(q,J＝9.0Hz,1H),4.70(p,J＝7.0Hz,1H),3.94(t,J＝7.7Hz,1H),2.87(d,J＝3.0Hz,3H),2.66(dd,J＝13.4,8.3Hz,2H),1.78(dq,J＝12.9,6.5Hz,2H),1.42(d,J＝6.7Hz,3H),1.26(dd,J＝7.1,4.6Hz,3H),0.53(h,J＝6.3Hz,1H),0.33(dtt,J＝37.2,8.5,4.0Hz,2H),0.05(dtd,J＝20.3,11.1,10.1,5.6Hz,2H).ESI-MS m/z 519.95[M+H]+.
实施例2
步骤一：化合物2-2的合成与实施例1中步骤五的合成方法相同，不同之处在于以2-1代替1-6得到化合物2-2，收率60.3％，1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.47(s,1H),7.49-7.30(m,2H),7.22(t,J＝7.8Hz,1H),6.96(td,J＝7.8,2.6Hz,2H),6.79(dd,J＝14.1,8.0Hz,1H),4.62(dd,J＝11.2,6.5Hz,2H),4.28-4.14(m,1H),2.61(t,J＝4.5Hz,3H),2.42-2.25(m,2H),1.59-1.13(m,15H),0.89(ddd,J＝11.9,9.6,6.5Hz,6H).ESI-MS m/z 472.84[M+H]+.
步骤二：化合物2-3的合成与实施例1中步骤六的合成方法相同，不同之处在于以2-2代替1-7得到化合物2-3，收率60.9％，1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.41(d,J＝55.6Hz,1H),7.60-7.38(m,1H),7.31(d,J＝7.5Hz,1H),7.23(t,J＝7.7Hz,2H),7.04-6.78(m,3H),5.24(dd,J＝9.2,5.0Hz,1H),4.59(q,J＝9.8,9.4Hz,1H),4.27(q,J＝7.1Hz,1H),4.01-3.77(m,1H),2.82(d,J＝3.6Hz,3H),2.38-2.24(m,2H),1.32(s,15H),1.09(dd,J＝7.1,4.7Hz,3H),0.92-0.77(m,6H).ESI-MS m/z 543.97[M+H]+.
步骤三：化合物2的合成与实施例1中步骤七的合成方法相同，不同之处在于以2-3代替1-9得到化合物2，白色固体，收率36.8％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.60(d,J＝50.6Hz,1H),9.60(t,J＝5.9Hz,1H),7.49(dd,J＝24.0,7.9Hz,1H),7.27(t,J＝7.6Hz,1H),7.01(t,J＝7.5Hz,1H),6.85(dd,J＝16.8,8.1Hz,1H),5.24(dd,J＝9.3,5.3Hz,1H),4.88(q,J＝8.9Hz,1H),4.66(p,J＝7.0Hz,1H),3.98(dq,J＝39.2,6.8Hz,1H),2.86(d,J＝3.1Hz,3H),2.65(dd,J＝13.3,8.3Hz,2H),1.68-1.48(m,2H),1.40(t,J＝6.6Hz,4H),1.25(dd,J＝7.5,4.6Hz,3H),0.86(dd,J＝24.3,6.5Hz,6H).ESI-MS m/z 522.32[M+H]+.
实施例3
步骤一：Boc-4-氧代-L-脯氨酸甲酯(243.26mg)，巯基乙酸(110.54mg,)，碳酸铵(115mg)，苯为溶剂，回流5小时，原料少量剩余，继续回流5小时，原料反应完全。后处理：乙酸乙酯、萃取，少量1M HCl调pH，过柱得到化合物3-2共230mg。
步骤二：将化合物3-2溶于7M氨甲醇溶液，室温搅拌，约24小时TLC时原料少量剩余。后处理：浓缩反应液，柱层析纯化，得到化合物3-3。
步骤三：将3-3，溶于二氯甲烷(1.5mL)，加入4M HCl二氧六环溶液(1.5mL)，室温搅拌30分钟，TLC原料基本反应完全,真空下充分浓缩干燥得到化合物3-4。
步骤四：茄形瓶中加入羧酸化合物3-5(182mg)，HATU(19 0mg)，加入二氯甲烷(5mL)，室温搅拌1小时后，加入化合物3-4，DIPEA(0.3mL)，室温搅拌12小时。后处理：1M HCl洗涤，饱和碳酸氢钠洗涤，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，柱层析得到化合物3-6共212mg。
步骤五：将化合物3-6溶于二氯甲烷，加入伯吉斯试剂(185mg)，氮气保护下室温反应3小时TLC显示反应完全。后处理：二氯甲烷、水萃取，饱和碳酸氢钠洗涤，饱和食盐水洗涤，柱层析得到化合物3共30mg。ESI-MS m/z 528.6[M-H]-
实施例4
步骤一：化合物4-2的合成与实施例1中步骤五的合成方法相同，不同之处在于以4-1代替1-5并且以2-1代替1-6得到化合物4-2，白色固体，收率77.6％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.69(d,J＝12.1Hz,1H),7.50(s,1H),7.23(t,J＝7.7Hz,1H),7.06(s,1H),6.97(t,J＝7.5Hz,1H),6.92-6.74(m,2H),4.87-4.49(m,2H),3.97-3.63(m,2H),2.77-2.60(m,3H),2.37-2.13(m,2H),1.50-1.30(m,2H),1.30-1.20(m,1H),1.05(d,J＝3.0Hz,9H),0.87(dd,J＝11.9,6.5Hz,6H).ESI-MS m/z 458.56[M+H]+.
步骤二：化合物4-4的合成与实施例1中步骤六的合成方法相同，不同之处在于以4-2代替1-7并且以4-3代替1-8得到化合物4-4，白色固体，收率55.6％。ESI-MS m/z 555.79[M+H]+.
步骤三:化合物4的合成与实施例1中步骤七的合成方法相同，不同之处在于以4-4代替1-9得到化合物4，白色固体，收率30.8％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.71(s,1H),9.84(d,J＝7.3Hz,1H),7.24(td,J＝7.7,1.2Hz,1H),7.08(d,J＝7.4Hz,1H),6.96(t,J＝7.5Hz,1H),6.89(d,J＝7.7Hz,1H),5.21(t,J＝7.5Hz,1H),5.13(dd,J＝8.7,6.9Hz,1H),4.11-4.02(m,1H),3.81(d,J＝10.5Hz,1H),3.68(d,J＝10.5Hz,1H),2.92(s,3H),2.74-2.59(m,1H),2.46(d,J＝7.0Hz,1H),1.59(t,J＝7.2Hz,2H),1.39(dp,J＝14.4,7.8,7.2Hz,1H),1.31-1.15(m,1H),0.94-0.85(m,4H),0.82(d,J＝6.5Hz,3H),0.27(dq,J＝8.8,4.3Hz,1H),0.25-0.09(m,1H),0.04(tt,J＝9.9,4.7Hz,1H).ESI-MS m/z 534.21[M+H]+.
实施例5
步骤一：将500mg化合物5-1、5mL 1,4-二氧六环、5mL 4N HCl的1，4-二氧六环溶液加入50mL单口瓶中，40℃搅拌30min，TLC监测原料反应完全。旋干后真空干燥，粗品直接投下一步。将370mg 1-8、20mL二氯甲烷、1120mg HATU加入50mL单口瓶中，25℃反应30min，加入到上一步的粗品中，再加入0.8mL N,N-二异丙基乙胺,25℃反应12h，TLC监测原料反应完全。将1mL 1N盐酸和5mL二氯甲烷加入反应液中分层，有机相加入1mL水分层，有机相加入1mL饱和食盐水分层，无水硫酸钠干燥有机相。浓缩有机相通过柱层析法(SiO2，石油醚:乙酸乙酯＝20:1～1:1)进行纯化，得到500mg化合物5-2，收率78.2％。ESI-MS m/z 327.19[M+H]+.
步骤二:将368mg化合物5-2、4mL四氢呋喃、4mL水、氢氧化锂一水合物95mg加入25mL单口瓶中，35℃反应2h，TLC监测原料反应完全。将1mL 1N盐酸和5mL乙酸乙酯加入反应液中分层，有机相水洗，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥。过滤后，浓缩有机相。浓缩有机相通过柱层析法(SiO2，石油醚:乙酸乙酯＝20:1-1:1)进行纯化，得到320mg产物，收率90.9％。浓缩，得粗品320mg。ESI-MS m/z 312.89[M+H]+.
步骤三：化合物5-4的合成与实施例1中步骤六的合成方法相同，不同之处在于以4-1代替1-7并且以5-3代替1-8得到化合物5-4，白色固体，收率47.6％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.67(s,1H),7.42(s,1H),7.23(td,J＝7.7,1.4Hz,2H),7.04(d,J＝7.5Hz,1H),7.00-6.96(m,1H),6.91(d,J＝7.8Hz,2H),4.51(t,J＝8.8Hz,1H),4.31(s,1H),4.25-4.15(m,1H),4.09(t,J＝5.3Hz,2H),3.71(d,J＝10.4Hz,1H),2.17(d,J＝8.8Hz,2H),1.87(d,J＝9.5Hz,1H),1.68-1.57(m,4H),1.43(s,1H),1.33(s,9H),1.25(d,J＝6.0Hz,1H),1.18(d,J＝7.0Hz,3H).ESI-MS m/z 525.90[M+H]+.
步骤四：化合物5的合成与实施例1中步骤七的合成方法相同，不同之处在于以5-4代替1-9得到化合物5，白色固体，收率34.0％。ESI-MS m/z520.79[M+NH4]+.
实施例6
步骤一：将290mg化合物4-4、3mL二氧六环、1.3mL 4N HCl的1，4-二氧六环溶液加入到25mL单口瓶中，35℃反应60min后将反应液真空浓缩。将56mg化合物6-1、298mg HATU、7mL二氯甲烷加入到25ml单口瓶中，25℃搅拌30min。将反应液加入上述浓缩干的反应液中，将0.2mL N,N-二异丙基乙胺滴加至反应液,25℃反应10h。将0.5mL 1N盐酸和10mL二氯甲烷加入反应液中分层。有机相加入4mL饱和碳酸氢钠分层，有机相加入4mL饱和食盐水分层，无水硫酸钠干燥有机相。浓缩有机相通过柱层析法(SiO2，二氯甲烷:甲醇＝200:1～20:1)进行纯化，得到228mg化合物6-2，收率80.6％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.73(s,1H),7.65(dd,J＝8.0,3.4Hz,1H),7.53(s,1H),7.23(t,J＝7.7Hz,1H),7.05(s,1H),6.96(q,J＝8.3,7.9Hz,1H),6.88(t,J＝7.1Hz,2H),5.19(t,J＝7.4Hz,1H),4.57(dd,J＝10.0,7.8Hz,1H),4.14(t,J＝7.4Hz,1H),3.75(d,J＝10.1Hz,1H),3.62(d,J＝10.0Hz,1H),2.89(s,3H),2.19(qd,J＝12.6,9.0Hz,2H),1.61-1.48(m,1H),1.48-1.32(m,7H),1.29-1.17(m,1H),0.84(dd,J＝15.5,6.4Hz,6H),0.68-0.55(m,1H),-0.00(ddd,J＝9.1,5.6,3.2Hz,1H),-0.11(q,J＝7.6Hz,2H),-0.34(qd,J＝5.9,3.9,3.2Hz,1H).ESI-MS m/z 543.84[M+H]+.
步骤二：将200mg化合物6-2、132mg伯吉斯试剂和6mL二氯甲烷加入10mL三口瓶中，25℃反应10h。浓缩有机相通过柱层析法(SiO2，二氯甲烷:甲醇＝200:1～75:1)进行纯化，得到82mg产物，收率42.4％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.71(s,1H),7.83(dd,J＝8.0,3.1Hz,1H),7.23(t,J＝7.7Hz,1H),7.07(d,J＝7.4Hz,1H),6.96(t,J＝7.5Hz,1H),6.88(d,J＝7.7Hz,1H),5.21(t,J＝7.4Hz,1H),5.13(dd,J＝8.6,7.0Hz,1H),4.13(t,J＝7.7Hz,1H),3.79(d,J＝10.5Hz,1H),3.64(d,J＝10.5Hz,1H),2.90(s,3H),2.64(dd,J＝13.3,8.8Hz,1H),2.47(s,1H),1.57(t,J＝7.2Hz,2H),1.47-1.34(m,7H),1.31-1.18(m,1H),0.85(dd,J＝16.6,6.5Hz,6H),0.15--0.05(m,3H),-0.13(q,J＝4.1,3.0Hz,1H).ESI-MS m/z542.78[M+NH4]+.
实施例7
步骤一：化合物7-2的合成与实施例1中步骤六的合成方法相同，不同之处在于以4-1代替1-5并且4-3代替1-8得到化合物7-2，收率42.5％。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.72(s,1H),7.51(s,1H),7.23(t,J＝7.7Hz,1H),7.13-6.97(m,2H),6.97-6.85(m,2H),6.73(d,J＝8.4Hz,1H),5.32-5.17(m,1H),4.56(dd,J＝10.0,7.8Hz,1H),3.90-3.69(m,2H),3.59(d,J＝10.3Hz,1H),2.87(s,3H),2.32-2.09(m,2H),1.60(dt,J＝13.4,6.4Hz,1H),1.44(q,J＝7.1Hz,1H),1.30(s,9H),0.58(s,1H),0.42(d,J＝6.9Hz,2H),0.29(t,J＝8.0Hz,2H),0.03(dt,J＝13.3,5.6Hz,2H),-0.07--0.28(m,2H),-0.44(dd,J＝9.6,5.0Hz,1H).ESI-MSm/z 553.68[M+H]+.
步骤二：化合物7-3的合成与实施例6中步骤一的合成方法相同，不同之处在于以7-2代替4-4得到化合物7-3，收率88.4％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.74(d,J＝12.9Hz,1H),9.20(s,1H),7.65-7.42(m,2H),7.23(ddd,J＝7.7,6.3,1.8Hz,1H),7.10-6.78(m,3H),5.22(dd,J＝8.2,6.4Hz,1H),4.57(dd,J＝10.1,7.9Hz,1H),4.20(t,J＝7.3Hz,1H),3.75(dd,J＝10.6,7.5Hz,1H),3.60(tq,J＝9.7,3.4Hz,1H),3.13(ddt,J＝11.7,7.5,4.5Hz,2H),2.89(s,3H),2.30-2.07(m,2H),1.50-1.36(m,3H),1.28(dd,J＝12.2,6.8Hz,3H),0.65-0.50(m,2H),0.30(dd,J＝7.8,3.9Hz,2H),0.13--0.04(m,3H),-0.04--0.22(m,2H),-0.31--0.41(m,1H).ESI-MS m/z 541.62[M+H]+.
步骤三：化合物7的合成与实施例6中步骤三的合成方法相同，不同之处在于以7-3代替6-2得到化合物7，收率51.6％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.72(s,1H),7.73(dd,J＝8.1,3.3Hz,1H),7.23(t,J＝7.7Hz,1H),7.09(d,J＝7.4Hz,1H),6.96(t,J＝7.5Hz,1H),6.88(d,J＝7.7Hz,1H),5.18(dt,J＝34.9,7.7Hz,2H),4.22(t,J＝7.7Hz,1H),3.86-3.65(m,2H),2.92(s,3H),2.64(dd,J＝13.3,8.8Hz,2H),1.67(dt,J＝13.7,6.7Hz,1H),1.54(dt,J＝14.6,7.7Hz,1H),1.40(t,J＝21.8Hz,6H),0.89-0.76(m,1H),0.58(dq,J＝13.3,6.3,5.7Hz,1H),0.31(tq,J＝9.1,5.5,4.5Hz,2H),0.15--0.03(m,5H),-0.11(p,J＝5.7Hz,1H).ESI-MS m/z 523.75[M+H]+.
实施例8
步骤一：化合物8-2的合成与实施例5中步骤一的合成方法相同，不同之处在于以4-3代替1-8，以8-1代替5-1得到化合物8-2，收率92.7％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ6.94(d,J＝8.0Hz,1H),4.96(dd,J＝10.3,4.9Hz,1H),4.09(t,J＝7.9Hz,1H),3.60(d,J＝3.3Hz,3H),3.00(s,3H),1.83(ddd,J＝14.3,10.4,6.0Hz,1H),1.52(ddd,J＝13.9,8.1,5.2Hz,1H),1.34(s,9H),1.11(qd,J＝8.5,8.0,3.9Hz,1H),0.71-0.55(m,1H),0.47-0.25(m,7H),0.06(ddt,J＝18.5,8.9,4.7Hz,1H).ESI-MS m/z 354.4[M+H]+.
步骤二：将620mg化合物8-2、5mL二氧六环、5mL 4N HCl的1，4-二氧六环溶液加入到25mL单口瓶中，40℃反应1h，浓缩干反应液。在0℃下将8mL二氯甲烷、0.7mL三乙胺、0.2mL甲基磺酰氯加入上述浓缩干的反应液中，降温至-10℃继续反应2h。将5mL 1N盐酸和20mL二氯甲烷加入反应液中分层，有机相加入10mL水分层，有机相加入10mL饱和食盐水分层，无水硫酸钠干燥有机相。过滤后，浓缩有机相通过柱层析法(SiO2，二氯甲烷:甲醇＝200:1-70:1)进行纯化，得到520mg产物8-3，收率89.4％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.39(d,J＝8.8Hz,1H),4.82(dd,J＝10.4,4.9Hz,1H),4.12(dt,J＝7.3,4.4Hz,1H),3.60(s,3H),3.04(s,3H),2.82(s,3H),1.88(ddd,J＝14.4,10.3,6.2Hz,1H),1.57(ddd,J＝14.5,7.9,5.0Hz,1H),1.20-1.08(m,1H),0.70-0.57(m,1H),0.53-0.38(m,5H),0.38-0.28(m,1H),0.08(tdd,J＝9.2,7.8,4.2Hz,2H).ESI-MS m/z 332.8[M+H]+.
步骤三：化合物8-4的合成与实施例5中步骤二的合成方法相同，不同之处在于以8-3代替5-2得到化合物8-4，收率98.1％。ESI-MS m/z 318.8[M+H]+.
步骤四：将390mg化合物4-1、3mL二氧六环、3mL 4N氯化氢二氧六环溶液加入25mL单口瓶中，40℃反应1h，浓缩干反应液。将380mg化合物8-4、680mg 2-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐、10mL二氯甲烷加入上述浓缩干的反应液中，25℃反应30min，将0.4mL N,N-二异丙基乙胺滴加至反应液，25℃反应10h。将5mL 1N盐酸和20mL二氯甲烷加入反应液中分层，有机相加入10mL水分层，有机相加入10mL饱和食盐水分层，无水硫酸钠干燥有机相。过滤后，浓缩有机相通过柱层析法(SiO2，二氯甲烷:甲醇＝150:1-30:1)进行纯化，得到300mg化合物8-5，收率46.1％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.73(s,1H),7.54-7.49(m,1H),7.22(t,J＝7.7Hz,1H),7.12-7.02(m,1H),6.96(t,J＝7.5Hz,1H),6.88(d,J＝7.7Hz,2H),5.28-5.17(m,1H),4.57(dd,J＝10.1,7.8Hz,1H),3.96-3.87(m,1H),3.77(d,J＝10.1Hz,1H),3.62-3.57(m,1H),3.16(s,3H),2.91(s,3H),2.78(s,2H),2.19(qd,J＝12.5,9.0Hz,2H),1.67(dt,J＝13.5,6.5Hz,1H),1.44(dq,J＝15.0,7.6Hz,1H),0.66-0.51(m,1H),0.49-0.33(m,2H),0.16-0.01(m,3H),0.13(ddd,J＝12.5,9.9,5.9Hz,3H).ESI-MS m/z 531.78[M+H]+.
步骤五：将160mg化合物8-5、150mg伯吉斯试剂和4mL二氯甲烷加入25mL单口瓶中，25℃反应10h。浓缩有机相通过柱层析法(SiO2，二氯甲烷:甲醇＝100:1-30:1)进行纯化，得到100mg化合物8，收率62.8％。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.72(s,1H),7.22(q,J＝8.9,8.3Hz,2H),7.06(d,J＝7.4Hz,1H),6.95(t,J＝7.5Hz,1H),6.87(d,J＝7.8Hz,1H),5.18(dt,J＝37.3,7.7Hz,2H),3.97-3.90(m,1H),3.81(d,J＝10.5Hz,1H),3.67(d,J＝10.6Hz,1H),2.95(s,4H),2.81(s,3H),1.99(s,1H),1.68-1.57(m,2H),1.17(t,J＝7.1Hz,1H),0.63(ddd,J＝22.7,10.4,4.7Hz,3H),0.36(dtd,J＝29.3,9.4,8.8,5.4Hz,4H),0.20(q,J＝5.9,4.5Hz,1H),0.11-0.08(m,1H).ESI-MS m/z 530.78[M+NH4]+.
实施例9
化合物9的合成与实施例1中步骤七的合成方法相同，不同之处在于以7-2代替1-9合成化合物9，收率42.8％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.70(s,1H),9.83(s,1H),7.24(s,1H),7.09(s,1H),6.96(s,1H),6.92-6.82(m,1H),5.18(d,J＝43.5Hz,2H),4.10(s,1H),3.86-3.64(m,2H),2.93(s,3H),1.61(d,J＝48.5Hz,2H),1.23(s,2H),0.92(s,1H),0.56(s,1H),0.39-0.01(m,8H).ESI-MS m/z 549.02[M+NH4]+.
实施例10
步骤一:将350mg化合物1-5、3mL的二氧六环、3.5mL的4N氯化氢-二氧六环溶液加入25mL单口瓶中，40℃反应1h。浓缩干反应液。将232mg的化合物10-1、577mg的HATU、3mL的无水二氯甲烷加入上述浓缩干的反应液中，25℃反应30min，将0.4mL的N,N-二异丙基乙胺加入到反应液中，25℃下反应12h。将2mL 1N盐酸和5mL二氯甲烷加入反应液中分层，有机相加入2mL水分层，有机相加入3mL饱和食盐水分层，无水硫酸钠干燥有机相。过滤后，浓缩有机相通过柱层析法(SiO2，二氯甲烷:甲醇＝100:1-30:1)进行纯化。收集浓缩得到化合物10-2，白色固体210mg，收率46.0％。ESI-MS m/z 456.84[M+H]+.
步骤二:将200mg化合物10-2、3mL的二氧六环、2mL的4N氯化氢-二氧六环溶液加入25mL单口瓶中，40℃反应1h。反应液真空下浓缩干。将74mg的化合物10-3、250mg的HATU、3mL的无水二氯甲烷加入上述浓缩干的反应液中。25℃反应30min，将0.2mL的N,N-二异丙基乙胺加入到反应液中，25℃下反应12h。将1mL 1N盐酸和4mL二氯甲烷加入反应液中分层，有机相加入1mL水分层，有机相加入2mL饱和食盐水分层，无水硫酸钠干燥有机相。浓缩有机相通过柱层析法(SiO2，二氯甲烷:甲醇＝100:1-30:1)进行纯化。收集浓缩得到化合物10-4，白色固体90mg，收率40.7％。ESI-MS m/z 506.79[M+H]+.
步骤三:将70mg化合物10-4、5mL无水的二氯甲烷、162mg的伯吉斯试剂加入到25mL单口瓶中，25℃下反应10h。直接浓缩干，制备板分离纯化得到28mg产物10，收率41.2％。1HNMR(400MHz,Chloroform-d)δ9.87(s,1H),8.41(d,J＝41.3Hz,1H),7.73(d,J＝7.6Hz,1H),7.19(d,J＝6.9Hz,1H),6.95(p,J＝7.7Hz,2H),6.78-6.68(m,1H),6.46(d,J＝7.0Hz,1H),5.20(dt,J＝12.8,8.0Hz,2H),4.93(s,1H),2.79(dd,J＝13.2,9.6Hz,1H),2.60(dd,J＝13.5,8.3Hz,1H),2.07-1.80(m,2H),1.68(dd,J＝15.8,6.6Hz,3H),1.32(d,J＝19.8Hz,9H),0.90-0.71(m,1H),0.54(d,J＝8.0Hz,2H),0.30-0.15(m,2H).ESI-MS m/z 488.73[M+H]+.
实施例11
化合物11的合成与实施例5中化合物5-3的合成方法相同，不同之处在于，首先，以11-1代替5-1合成化合物11-3。然后进行以下步骤：
步骤一：将11-3(615mg)溶于二氯甲烷(4.85mL)中，再加入4N HCl二氧六环溶液(4.85mL)，氮气保护，室温搅拌1h，TLC显示原料基本反应完全。上述化合物溶于甲醇(10mL)中，冰浴下依次加入DIPEA(750.8mg)、三氟乙酸乙酯(551.3mg)，加热至50℃，搅拌19h，TLC显示原料基本反应完全。后处理：反应液用EA/H2O萃取，1N HCl调pH，饱和氯化钠水洗，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，柱层析，浓缩得灰色油状物11-4共333mg。ESI-MS m/z 311.1[M-H]-.
步骤二：向反应瓶中加入化合物3-3(322.5mg)、二氯甲烷(2.67mL)、4NHCl二氧六环溶液(2.67mL)，氮气保护，室温搅拌20min，TLC显示原料基本反应完全，浓缩得白色固体。向反应瓶中加入11-4(333mg)、HATU(406.6mg)、二氯甲烷(2mL)，氮气保护，室温搅拌30min，冰浴下加入上述白色固体、DIPEA(414.1mg)，加毕，室温搅拌12h，TLC显示原料基本反应完全。后处理：反应液用DCM/H2O萃取，饱和氯化钠水洗，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤浓缩得黄色油状物11-5共252mg。
步骤三：向反应瓶中加入11-5(232mg)、二氯甲烷(2mL)、伯吉斯试剂(281mg)，室温搅拌1h，TLC显示原料基本反应完全。后处理：反应液用DCM/H2O萃取，饱和氯化钠水洗，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，柱层析，浓缩得化合物11共22mg。ESI-MS m/z 477.5[M-H]-.
实施例12
化合物12的合成与实施例7中化合物7的合成方法相同，不同之处在于化合物12-1代替化合物4-3，最终得到化合物12，收率44.3％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.73(s,1H),7.70(dd,J＝8.8,3.4Hz,1H),7.28(td,J＝7.6,1.5Hz,1H),7.11-6.98(m,2H),6.90(d,J＝7.7Hz,1H),5.26-5.07(m,2H),4.50(t,J＝8.0Hz,1H),3.74(d,J＝10.6Hz,1H),3.58(d,J＝10.6Hz,1H),2.89(s,3H),2.63(dd,J＝13.2,8.6Hz,1H),2.48-2.42(m,1H),2.34(q,J＝7.6Hz,1H),1.95-0.89(m,14H),0.52(d,J＝7.0Hz,1H),0.37-0.24(m,2H),0.12--0.06(m,2H).ESI-MS m/z 537.77[M+H]+.
实施例13
化合物13的合成与实施例7中化合物7的合成方法相同，不同之处在于化合物13-1代替化合物4-3，最终得到化合物13，收率49.6％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.73(s,1H),7.82(dd,J＝9.1,3.3Hz,1H),7.24(td,J＝7.7,1.4Hz,1H),7.04(dd,J＝7.5,1.3Hz,1H),6.97(td,J＝7.5,1.0Hz,1H),6.92-6.84(m,1H),5.26(dd,J＝8.6,6.2Hz,1H),5.14(t,J＝8.1Hz,1H),4.41(t,J＝8.7Hz,1H),3.77(d,J＝10.5Hz,1H),3.68-3.55(m,1H),2.91(s,3H),2.63(dd,J＝13.2,8.6Hz,1H),2.46(dd,J＝13.0,7.5Hz,1H),2.04(td,J＝19.5,17.8,8.3Hz,1H),1.68-1.58(m,1H),1.54(ddd,J＝15.2,8.3,5.9Hz,1H),1.40(dd,J＝21.8,17.1Hz,6H),1.33-1.09(m,7H),1.03(q,J＝8.9Hz,1H),0.55-0.37(m,1H),0.30(dtd,J＝9.9,7.8,6.4,3.7Hz,2H),0.09--0.04(m,2H).ESI-MS m/z551.72[M+H]+
实施例14
/>
化合物14-4的合成方法与实施8中的化合物8-4的合成方法相同，不同之处在于化合物14-1代替化合物8-1，最终得到化合物14-4，收率92.2％。ESI-MS m/z 320.76[M+H]+.
化合物14的合成方法与实施8中的化合物8的合成方法相同，不同之处在于化合物14-4代替化合物8-4，最终得到化合物14，收率68.9％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.71(s,1H),7.23(dt,J＝7.9,3.1Hz,2H),7.05(d,J＝7.4Hz,1H),6.95(t,J＝7.6Hz,1H),6.87(d,J＝7.8Hz,1H),5.22(t,J＝7.5Hz,1H),5.13(t,J＝8.0Hz,1H),3.92(t,J＝7.9Hz,1H),3.81(d,J＝10.5Hz,1H),3.60(d,J＝10.5Hz,1H),2.93(s,3H),2.81(s,3H),2.63(dd,J＝13.0,9.0Hz,1H),2.45(d,J＝7.1Hz,1H),1.59(d,J＝7.7Hz,2H),1.42(dq,J＝13.9,7.0Hz,1H),0.88(dd,J＝14.7,6.5Hz,6H),0.62(p,J＝6.7Hz,1H),0.21(q,J＝5.3Hz,1H),0.06-0.01(m,3H).ESI-MS m/z 532.95[M+NH4]+.
实施例15
化合物15的合成方法与实施8中的化合物8的合成方法相同，不同之处在于化合物14-1代替化合物8-1并且化合物13-1代替化合物4-3，最终得到化合物15，收率54.3％。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.74(s,1H),7.23(td,J＝9.0,8.3,6.6Hz,2H),7.03-6.92(m,2H),6.89(d,J＝7.8Hz,1H),5.23(dd,J＝8.5,6.2Hz,1H),5.13(t,J＝8.1Hz,1H),4.09(dd,J＝9.2,6.1Hz,1H),3.82(d,J＝10.4Hz,1H),3.56(d,J＝10.4Hz,1H),2.94(s,3H),2.78(s,3H),2.62(dd,J＝13.2,8.5Hz,1H),2.48-2.42(m,1H),1.76-0.93(m,12H),0.89(d,J＝6.6Hz,3H),0.85(d,J＝6.4Hz,3H).ESI-MS m/z 560.73[M+NH4]+.
实施例16
步骤一:将380mg化合物4-1、3mL的二氧六环、4mL的4N氯化氢-二氧六环溶液加入25mL单口瓶中，40℃反应1h。浓缩干反应液。将269mg的化合物10-1、671mg的HATU、6mL的无水二氯甲烷加入上述浓缩干的反应液中，25℃反应30min，将0.5mL的N,N-二异丙基乙胺加入到反应液中，25℃下反应12h。将2mL 1N盐酸和7mL二氯甲烷加入反应液中分层，有机相加入2mL水分层，有机相加入3mL饱和食盐水分层，无水硫酸钠干燥有机相。浓缩有机相通过柱层析法(SiO2，二氯甲烷:甲醇＝100:1-30:1)进行纯化。收集浓缩得到化合物16-1白色固体215mg，收率41.2％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.65(d,J＝9.2Hz,1H),7.44(s,1H),7.23(dd,J＝7.6,1.6Hz,1H),7.05(d,J＝7.7Hz,1H),7.03-6.94(m,2H),6.91(t,J＝7.7Hz,2H),4.57(t,J＝8.9Hz,1H),4.16(td,J＝7.9,4.1Hz,1H),4.07(d,J＝10.1Hz,1H),3.74(d,J＝10.1Hz,1H),2.17(d,J＝9.3Hz,2H),1.55(dt,J＝13.4,6.4Hz,1H),1.38(d,J＝7.5Hz,1H),1.27(s,9H),0.84(p,J＝6.1Hz,1H),0.35(dd,J＝8.0,5.1Hz,2H),0.17-0.10(m,1H),0.07-0.01(m,1H).ESI-MS m/z 442.84[M+H]+.
步骤二：将400mg的化合物16-2、10mL的无水二氯甲烷加入到50mL的单口瓶中，降温至0℃下将631mg的三乙胺181mg的三光气(16-3)加入到反应液中，升温至环境温度反应3h。将15mL的氢氧化钠溶液和150mL二氯甲烷加入到反应液中并分层，有机相用16mL的饱和碳酸氢钠和15mL饱和氯化钠溶液洗一遍，无水硫酸钠干燥。过滤，浓缩有机相通过柱层析法(SiO2，石油醚:乙酸乙酯＝10:1-1:2)进行纯化。收集浓缩得到化合物16-4淡绿色固体290mg，收率65.2％。直接投下一步
步骤三：将162mg的化合物16-1、2mL二氧六环和2mL 4N氯化氢二氧六环溶液加入到25mL单口瓶中，40℃反应1h，浓缩干反应液。将6mL二氯甲烷、0.2mL三乙胺加入到上述反应瓶中，25℃反应10min后降温至0℃，将280mg的化合物16-4加至反应液中，反应30min后升温至25℃继续反应1.5h。将1mL 1N盐酸和5mL二氯甲烷加入反应液中分层，有机相加入1mL水分层，有机相加入1mL饱和食盐水分层，无水硫酸钠干燥有机相。浓缩有机相通过柱层析法(SiO2，二氯甲烷:甲醇＝100:1-10:1)进行纯化，收集浓缩得到化合物16-5白色固体140mg，收率67.6％。ESI-MS m/z 560.76[M+H]+.
步骤四:将115mg化合物16-5、3mL无水的二氯甲烷、98mg的伯吉斯试剂加入到10mL单口瓶中，25℃下反应10h。浓缩有机相通过柱层析法(SiO2，二氯甲烷:甲醇＝100:1-20:1)进行纯化，收集浓缩得到化合物16白色固体32mg，收率29.6％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.67(s,1H),7.31-7.15(m,2H),7.08(d,J＝7.5Hz,1H),6.91(dt,J＝16.8,9.5Hz,2H),5.10(t,J＝7.9Hz,1H),4.78(q,J＝16.9Hz,2H),4.35(q,J＝7.3Hz,1H),4.09(ddd,J＝19.0,13.3,8.6Hz,3H),3.84(q,J＝8.1,5.5Hz,3H),2.65-2.41(m,2H),1.56(dddd,J＝30.5,24.3,15.1,6.0Hz,2H),0.91-0.60(m,1H),0.40(d,J＝8.4Hz,2H),0.26-0.04(m,2H).ESI-MS m/z 542.73[M+H]+.
实施例17
化合物17的合成方法与实施8中的化合物8的合成方法相同，不同之处在于三氟甲磺酰氯代替甲基磺酰氯，最终得到化合物17，ESI-MS m/z 568.2[M+H]+.
实施例18
步骤一：反应瓶中加入18-1(500mg)、二氯甲烷(15mL)、吡咯烷-1-磺酰氯(600mg)和三乙胺(911mg)室温反应过夜。后处理：反应液1N盐酸水溶液，饱和碳酸氢钠水溶液洗涤，干燥，浓缩得18-3共400mg。
步骤二：三口瓶中加入18-3(400mg)、THF(10mL)、水(5mL)和一水氢氧化锂(88mg)，室温反应2小时，向反应液加入水/甲基叔丁基醚，分层，有机相弃去，水相用1N盐酸调节pH至4-5，用乙酸乙酯萃取，有机相浓缩干，得化合物18-4共200mg。
步骤三：化合物18-5的合成方法与实施1中的化合物1-9的合成方法相同，不同之处在于化合物7-1代替1-7并且18-4代替化合物1-8，最终得到化合物18-5。
步骤四：反应瓶加入18-5(30mg)，二氯甲烷(3mL)，伯吉斯试剂(25mg)，室温反应2h。反应液用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤，干燥，浓缩，柱层析纯化得化合物18共10mg。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.63(s,1H),7.33-6.85(m,5H),7.25-7.21(q,1H),5.19-5.15(q,1H),5.10-5.06(q,1H),3.79-3.75(q,2H),3.06-3.03(m,4H),2.94(s,3H),2.74-2.54(m,1H),2.47-2.38(m,1H),2.48-2.44(m,1H),1.74-1.69(m,6H),1.44-1.37(m,1H),1.06-1.04(m,1H),0.59-0.02(m,10H).
实施例19
步骤一：反应瓶中加入19-1(5g)，丙酮/水(50mL/50mL)，碳酸氢钠(5.5g)，二碳酸二叔丁酯(7.8g)，室温反应过夜。浓缩，剩余物中加入1N盐酸水溶液和乙酸乙酯，调节pH至水相呈弱酸性，分液萃取，有机相干燥，过滤，浓缩得10g化合物19-2。
步骤二：反应瓶中加入19-2(5g)，二氯甲烷(15mL)，苯甲醇(10mL)，冰水浴降温后向其中加入DCC(7.7g)，DMAP(4.6g)，室温反应2h。后处理：浓缩除去二氯甲烷，剩余物中加入乙酸乙酯，1N盐酸水溶液调节pH至弱酸性，分液萃取，有机相用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤，干燥，浓缩，柱层析纯化得2.8g化合物19-3。
步骤三：反应瓶中加入19-3(2.8g)，2-溴-N,N-二甲基乙胺氢溴酸盐(2.74g)，丙酮(30mL)，碳酸铯(12.8g)，室温反应2h。后处理：浓缩除去丙酮，剩余物中加入乙酸乙酯，用1N盐酸水溶液调节pH至弱酸性，分液萃取，有机相分出，浓缩，柱层析纯化得2g化合物19-4。
步骤四：反应瓶中加入19-4(1g)，甲醇(10mL)，10％钯碳(0.5g)，氢气(35psi)还原，室温反应2h，滤除催化剂，滤液浓缩得0.9g化合物19-5。
步骤五：化合物19-6的合成方法与实施例8中化合物8-2的合成方法相同，不同之处在于化合物19-5代替化合物4-3，最终得到化合物19-6。
步骤六：化合物19的合成与实施例5中的化合物5合成方法相同，不同之处在于化合物19-6代替化合物5-2，最终得到化合物19，ESI-MS m/z655.3[M+H]+.
实施例20
化合物20的合成方法与实施例7中化合物7的合成方法相同，不同之处在于化合物20-1代替化合物6-1，最终得到化合物20。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.93(s,1H),7.74-7.71(q,2H),7.28(m,1H),7.08-7.00(m,3H),6.95-6.88(dd,2H),6.81-6.79(d,1H),5.22-5.20(dd,1H),5.01-4.96(m,2H),4.20-4.17(d,1H),4.05-4.03(d,1H),3.23(s,3H),2.89-2.83(dd,1H),2.55-2.49(dd,1H),1.94-1.89(m,1H),1.68-1.58(m,1H),0.90-0.85(m,1H),0.67(m,1H),0.52-0.49(m,2H),0.32-0.07(m,6H).ESI-MS m/z 558.2[M+H]+.
实施例21
化合物21的合成方法与实施例8中化合物8的合成方法相同，不同之处在于用乙基磺酰氯代替甲基磺酰氯，最终得到化合物21，收率43.8％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.69(d,J＝15.9Hz,1H),7.24(ddd,J＝33.3,17.2,7.7Hz,2H),7.06(d,J＝7.4Hz,1H),6.95(t,J＝7.4Hz,1H),6.87(d,J＝8.0Hz,1H),5.31-5.08(m,2H),4.03-3.86(m,1H),3.84-3.72(m,1H),3.66(d,J＝10.8Hz,1H),3.05-2.75(m,5H),2.63(dd,J＝13.6,8.8Hz,1H),2.48(s,1H),1.63(d,J＝7.7Hz,2H),1.11(tt,J＝7.4,3.1Hz,3H),0.71-0.54(m,2H),0.50-0.28(m,3H),0.21(d,J＝7.5Hz,1H),0.16-0.01(m,4H).ESI-MS m/z 544.74[M+NH4]+.
实施例22
化合物22的合成方法与实施例7中化合物7的合成方法相同，不同之处在于用环丙甲酸代替2-氟异丁酸，最终得到化合物22。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.71(s,1H),8.29(d,J＝8.3Hz,1H),7.24(td,J＝7.7,1.3Hz,1H),7.09(d,J＝7.3Hz,1H),6.97(td,J＝7.6,1.1Hz,1H),6.88(d,J＝7.7Hz,1H),5.22(dd,J＝8.2,6.6Hz,1H),5.12(dd,J＝8.6,7.1Hz,1H),4.20(t,J＝8.0Hz,1H),3.82-3.64(m,2H),2.90(s,3H),2.64(dd,J＝13.3,8.7Hz,1H),2.49-2.40(m,1H),1.76-1.58(m,2H),1.49(dt,J＝14.6,7.7Hz,1H),1.25(d,J＝9.1Hz,1H),0.74(dq,J＝10.7,3.9,2.9Hz,1H),0.66-0.48(m,6H),0.33(ttd,J＝16.7,8.4,3.6Hz,2H),0.16--0.10(m,3H),-0.19(dq,J＝9.6,4.9Hz,1H).ESI-MS m/z503.83[M+H]+.
实施例23
化合物23的合成方法与实施例13中化合物13的合成方法相同，不同之处在于用化合物23-1代替化合物6-1，最终得到化合物23。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.73(s,1H),8.27(d,J＝9.0Hz,1H),7.24(td,J＝7.6,1.4Hz,1H),7.07-6.93(m,2H),6.89(d,J＝7.6Hz,1H),5.28-5.17(m,1H),5.13(t,J＝8.1Hz,1H),4.42(t,J＝8.9Hz,1H),3.77(d,J＝10.6Hz,1H),3.62(d,J＝10.5Hz,1H),2.90(s,3H),2.63(dd,J＝13.2,8.4Hz,1H),2.48-2.40(m,1H),1.96(dq,J＝16.1,8.2Hz,1H),1.72-1.59(m,2H),1.49(dt,J＝14.6,7.9Hz,1H),1.41-1.19(m,8H),1.17-0.97(m,1H),0.94-0.69(m,1H),0.69-0.46(m,3H),0.48-0.23(m,2H),0.09--0.08(m,2H).ESI-MS m/z 531.68[M+H]+.
实施例24
化合物24的合成方法与实施例7中化合物7的合成方法相同，不同之处在于用Boc-L-环己基甘氨酸代替化合物4-3，环丙甲酸代替2-氟异丁酸，最终得到化合物24。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.72(s,1H),8.20(d,J＝9.1Hz,1H),7.25(tt,J＝6.3,3.0Hz,1H),7.00(dt,J＝14.7,7.3Hz,2H),6.88(d,J＝7.7Hz,1H),5.23(dd,J＝8.4,6.4Hz,1H),5.12(t,J＝7.9Hz,1H),4.35(t,J＝9.1Hz,1H),3.79(d,J＝10.5Hz,1H),3.71-3.62(m,1H),2.91(s,3H),2.62(dd,J＝13.2,8.6Hz,1H),2.49-2.40(m,1H),1.76-1.42(m,5H),1.41-1.14(m,2H),0.93(d,J＝11.5Hz,4H),0.80-0.47(m,7H),0.44-0.16(m,3H),0.13--0.10(m,2H).ESI-MS m/z 545.72[M+H]+.
实施例25
化合物25的合成与实施例18中化合物18的合成方法相同，不同之处在于用Boc-L-环己基甘氨酸代替化合物18-1，三氟甲磺酰氯代替18-2，最终得到化合物25，收率30.1％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.70(d,J＝11.5Hz,1H),7.24(d,J＝8.1Hz,1H),7.09-6.83(m,4H),4.23(t,J＝7.5Hz,1H),4.12(t,J＝7.8Hz,1H),3.90(s,1H),3.80(d,J＝11.0Hz,1H),3.65(d,J＝11.0Hz,1H),3.00(d,J＝26.1Hz,3H),2.72-2.55(m,2H),1.84-0.81(m,13H),0.61(d,J＝36.8Hz,1H),0.47-0.25(m,2H),0.06(dd,J＝33.8,16.8Hz,2H).ESI-MS m/z626.57[M+NH4]+.
实施例26
步骤一：化合物16-1(140mg)溶于二氯甲烷(1mL)，加入4M HCl二氧六环溶液(1mL)，室温搅拌2小时，TLC原料基本反应完全，浓缩后溶于DMF。将4-氯-7-三氟甲基喹唑啉(74mg)溶于DMF，冰浴下加入到体系中，加入DIPEA(158uL)，2小时后TLC基本反应完全。后处理：水洗，乙酸乙酯萃取，1M盐酸洗，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，薄层色谱分析，得20-1共70mg。
步骤二:化合物20-1(70mg)溶于二氯甲烷，冰浴加入三乙胺(144uL)，TFAA(72uL)，室温搅拌1小时，原料基本反应完全。后处理：1M盐酸洗涤，碳酸氢钠溶液洗涤，饱和食盐水洗，干燥，过滤，浓缩，薄层色谱分离，得化合物26共39mg。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.78(s,1H),8.80(d,J＝6.4Hz,1H),8.73(d,J＝8.7Hz,1H),8.08(s,1H),8.01(s,1H),7.89(d,J＝8.6Hz,1H),7.28(t,J＝7.7Hz,1H),7.09(d,J＝7.4Hz,1H),6.99-6.93(m,2H),5.19(t,J＝8.3Hz,1H),4.86(q,J＝7.1Hz,1H),4.51(d,J＝10.4Hz,1H),3.97(d,J＝10.4Hz,1H),2.62(dd,J＝13.2,8.2Hz,1H),1.97(dt,J＝13.9,7.2Hz,1H),1.74(dt,J＝14.3,7.5Hz,1H),0.97-0.78(m,2H),0.45(d,J＝8.2Hz,2H),0.27(s,1H),0.20(s,1H)，ESI-LR[M+H]+＝521.4。
实施例27
化合物27-1的合成方法与实施例8中的步骤二方法相同，不同之处在于化合物7-1代替化合物8-2，化合物对三氟甲基苯磺酰氯代替甲基磺酰氯，最终得到化合物27-1，直接用于下一步。
化合物27-1(100mg)溶于二氯甲烷，冰浴加入三乙胺(196uL)，TFAA(98uL)，室温搅拌1小时，原料基本反应完全。后处理：1M盐酸洗涤，碳酸氢钠溶液洗涤，饱和食盐水洗，干燥，过滤，浓缩，薄层色谱分离，得化合物27共48mg。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.68(s,1H),8.06-7.93(m,5H),7.26(td,J＝7.7,1.3Hz,1H),7.15(d,J＝7.4Hz,1H),7.08-6.96(m,1H),6.91(d,J＝7.7Hz,1H),5.11(dd,J＝8.9,6.2Hz,1H),4.65(t,J＝7.5Hz,1H),4.02(s,2H),2.94(s,3H),2.89(d,J＝3.6Hz,1H),2.75-2.59(m,2H),1.48(dt,J＝13.7,8.0Hz,1H),1.36(dt,J＝13.4,6.4Hz,1H),0.51(d,J＝8.1Hz,1H),0.27(dd,J＝8.1,2.3Hz,2H),0.09-0.00(m,2H).
实施例28
化合物28的合成方法与实施例27中化合物27的合成方法相同，不同之处在于化合物16-1代替化合物7-1，最终得到化合物28，1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.67(s,1H),8.61(d,J＝8.2Hz,1H),8.02-7.91(m,4H),7.26(td,J＝7.5,1.7Hz,1H),7.04-6.96(m,2H),6.90(d,J＝7.7Hz,1H),4.98(dd,J＝8.7,6.7Hz,1H),4.13(q,J＝7.3Hz,1H),3.87(s,2H),2.58(dd,J＝13.3,8.8Hz,1H),2.50-2.40(m,3H),1.40(dt,J＝9.4,6.4Hz,2H),0.22(dtd,J＝26.0,8.6,4.2Hz,1H),0.06(dd,J＝9.2,4.7Hz,1H),-0.04(dd,J＝9.1,4.4Hz,1H)。
实施例29
化合物29的合成方法与实施例8中化合物8的合成方法相同，不同之处在于化合物二甲胺基磺酰氯代替化合物甲基磺酰氯，最终得到化合物29，1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.73(s,1H),7.52-6.86(m,5H),5.21-5.15(m,2H),3.83-3.68(m,3H),2.97(s,3H),2.64-2.61(m,1H),2.58(s,3H),2.52(s,3H),2.46-2.43(m,1H),1.72-1.69(m,1H),1.52-1.47(m,1H),0.86-0.84(m,1H),0.63-0.60(m,1H),0.44-0.04(m,8H).
实施例30
步骤一：将400mg 7-1、3mL二氧六环、3mL 4N HCl的1，4-二氧六环溶液加入25mL单口瓶中，40℃反应1h，浓缩干反应液得到化合物30-1粗品。
步骤二：0℃条件下将144mg化合物30-2、0.4mL N,N-二异丙基乙胺和7mL无水二氯甲烷加入25mL单口瓶中，将147mg三光气加入上述溶液中。10℃搅拌2h，TLC显示反应完全。将450mg化合物30-1和0.2mL N,N-二异丙基乙胺加入上述溶液中，25℃继续反应10h。TLC显示反应完全，将10mL二氯甲烷和2mL 1N盐酸加入上述溶液中，搅拌10min，静置分层。有机相经无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩有机相通过柱层析法(SiO2，二氯甲烷:甲醇＝100:1-25:1)，收集浓缩得280mg化合物30-3，收率53.3％。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.65(s,1H),9.08(s,1H),7.46-7.40(m,1H),7.22(ddd,J＝7.7,5.9,3.2Hz,1H),7.02-6.87(m,5H),4.52(dt,J＝20.0,8.2Hz,2H),4.12(d,J＝10.1Hz,1H),3.72(d,J＝10.0Hz,1H),2.85(s,3H),2.59(s,3H),2.16(d,J＝9.0Hz,2H),1.60(s,1H),1.42(s,1H),1.33(s,9H),0.68(s,1H),0.34(s,2H),0.08(s,3H).ESI-MS m/z 528.74[M+H]+.
步骤三：将230mg化合物30-3、2mL 1,4-二氧六环和2mL 4N氯化氢二氧六环溶液加入25mL单口瓶中，25℃搅拌1h。TLC显示反应完全，浓缩干反应液，并将6mL二氯甲烷、0.2mL三乙胺和0.1mL三氟乙酸酐加入上述反应瓶中，25℃搅拌10h。TLC显示反应完全，将10mL二氯甲烷和2mL 1N盐酸加入上述溶液中，搅拌10min，静置分层。有机相经无水硫酸钠干燥，过滤浓缩有机相通过柱层析法(SiO2，二氯甲烷:甲醇＝100:1-25:1)，收集浓缩得50mg产物30，收率22.5％。ESI-MS m/z 507.2[M+H]+.
实施例31
化合物31的合成方法与实施例28中化合物28的合成方法相同，不同之处在于化合物邻三氟甲基苯磺酰氯代替化合物对三氟甲基苯磺酰氯，最终得到化合物31，收率62.5％。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.67(s,1H),8.58(d,J＝8.3Hz,1H),8.11-7.97(m,3H),7.82(t,J＝7.8Hz,1H),7.26(td,J＝7.3,2.0Hz,1H),7.05-6.95(m,2H),6.90(d,J＝7.7Hz,1H),4.96(dd,J＝8.7,6.7Hz,1H),4.15(q,J＝7.4Hz,1H),3.88(d,J＝2.4Hz,2H),2.57(dd,J＝13.4,8.8Hz,1H),2.45(dd,J＝13.4,6.7Hz,1H),1.40(td,J＝7.0,2.2Hz,2H),0.67-0.55(m,1H),0.21(dtd,J＝24.2,8.8,4.2Hz,2H),-0.00(ddq,J＝39.3,9.4,4.8Hz,2H).ESI-MS m/z549.72[M+NH4]+.
实施例32
化合物32的合成方法与实施例28中化合物28的合成方法相同，不同之处在于化合物4-三氟甲基苄基磺酰氯代替化合物对三氟甲基苯磺酰氯，最终得到化合物32，收率36.0％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.71(s,1H),7.78(d,J＝7.5Hz,1H),7.66(d,J＝8.1Hz,2H),7.57(d,J＝8.1Hz,2H),7.27(td,J＝7.7,1.2Hz,1H),7.15(d,J＝7.4Hz,1H),6.98(td,J＝7.6,1.0Hz,1H),6.92(d,J＝7.8Hz,1H),5.20(dd,J＝8.6,7.2Hz,1H),4.43(d,J＝3.9Hz,2H),4.10-4.03(m,1H),3.90-3.75(m,2H),2.62(dd,J＝13.3,8.6Hz,1H),2.49-2.44(m,1H),1.48(dq,J＝17.9,6.7Hz,2H),0.78-0.67(m,1H),0.41(pt,J＝8.3,3.6Hz,2H),0.10(ddp,J＝22.1,8.6,4.3Hz,2H).ESI-MS m/z 546.67[M+H]+.
实施例33
化合物33的合成方法与实施例8中化合物8的合成方法相同，不同之处在于化合物环丙烷基磺酰氯代替化合物甲基磺酰氯，最终得到化合物33，收率55.1％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.72(s,1H),7.23(t,J＝7.7Hz,1H),7.15(d,J＝9.0Hz,1H),7.05(d,J＝7.4Hz,1H),6.95(t,J＝7.5Hz,1H),6.87(d,J＝7.7Hz,1H),5.20(t,J＝7.4Hz,1H),5.14(t,J＝8.0Hz,1H),3.96(dd,J＝9.1,6.3Hz,1H),3.82(d,J＝10.5Hz,1H),3.70(d,J＝10.5Hz,1H),2.98(s,3H),2.63(dd,J＝13.3,8.7Hz,1H),2.47-2.36(m,1H),1.69(dt,J＝14.4,7.2Hz,1H),1.56(dt,J＝14.1,7.1Hz,1H),0.84(q,J＝6.6,5.9Hz,5H),0.70-0.57(m,2H),0.41(dq,J＝8.8,4.8,4.0Hz,1H),0.34(hept,J＝3.7Hz,1H),0.22(dq,J＝9.7,4.9Hz,1H),0.08(dqt,J＝16.0,11.3,6.1Hz,5H).ESI-LCMS m/z 556.7[M+NH4]+.
实施例34
步骤一：化合物邻三氟甲基苯肼盐酸盐(3g)溶于水(1.3mL)和乙醇(1.7mL)，室温下加入浓盐酸(1.4mL)，加入1,1,3,3-四甲氧基丙烷，加毕，转为88℃反应搅拌3小时，直接取样TLC，原料反应完全。后处理：乙酸乙酯/水萃取，碳酸氢钠调pH至弱碱性，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩得34-2。
步骤二:取一干燥的双口瓶，加入氯磺酸1.5mL，氮气置换，冰浴加入34-2(500mg)，加毕，升温至125℃反应。TLC显示4.5小时原料反应完全。后处理：将反应液滴加到冰浴的冰水和氯仿的混合液中。碳酸氢钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩得34-3。
化合物34的合成与实施例28中化合物28的合成方法相同，不同之处在于化合物34-3代替化合物对三氟甲基苯磺酰氯，最终得到化合物34，1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.68(s,1H),8.52(s,1H),8.26(d,J＝7.7Hz,1H),7.96(dd,J＝8.7,1.1Hz,2H),7.87(td,J＝7.7,1.6Hz,1H),7.79(t,J＝7.7Hz,1H),7.61(d,J＝7.8Hz,1H),7.21(td,J＝7.7,1.2Hz,1H),7.09(d,J＝7.4Hz,1H),6.94(td,J＝7.6,1.0Hz,1H),6.86(d,J＝7.7Hz,1H),5.10(dd,J＝8.7,6.8Hz,1H),4.10(q,J＝7.2Hz,1H),4.00-3.86(m,2H),2.62(dd,J＝13.3,8.8Hz,1H),2.49-2.44(m,1H),1.43(ddt,J＝43.7,13.7,7.1Hz,2H),0.73-0.58(m,1H),0.30(dd,J＝8.2,4.0Hz,2H),0.07(dd,J＝9.5,4.3Hz,1H),-0.01(d,J＝12.8Hz,1H).ESI-MS m/z599.3[M+H]+.
实施例35
化合物35的合成与实施例7中化合物7的合成方法相同，不同之处在于化合物30-3代替化合物7-2，最终得到化合物35，收率51.8％。ESI-MS m/z498.79[M+H]+.
实施例36
步骤一:将994mg活性锌粉、3mL N,N-二甲基甲酰胺、77mg碘加入50mL三口瓶中，氮气置换。50℃下将2g 36-1，50℃反应1h。将1.2g 36-2、2mL N,N-二甲基甲酰胺、30mg 2-双环己基膦-2’,6’-二甲氧基联苯加入25mL单口瓶中，将其加入上述制得的有机锌试剂中，再加入50mg三(二亚苄基丙酮)二钯，70℃反应12h。降温至25℃后将30mL乙酸乙酯和5mL水加入反应液中分层，有机相加入10mL饱和食盐水分层，无水硫酸钠干燥有机相。浓缩有机相通过柱层析法(SiO2，石油醚:乙酸乙酯＝40:1-7:1)进行纯化，得到644mg化合物36-3，收率33.2％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.75(s,1H),7.62(dd,J＝7.4,1.5Hz,1H),7.54(d,J＝8.0Hz,1H),7.41-7.20(m,3H),4.29(td,J＝8.9,5.5Hz,1H),3.61(s,3H),3.10(dd,J＝14.8,5.3Hz,1H),2.99(dd,J＝14.7,9.4Hz,1H),1.31(s,9H).
步骤二:将644mg 36-3、5mL二氧六环、5mL 4N氯化氢二氧六环溶液加入50mL单口瓶中，40℃反应2h，浓缩干反应液。将10mL无水甲醇和180mg 37％甲醛水溶液加入上述浓缩干的反应液中，70℃反应2h。降温至25℃后浓缩干反应液，用甲基叔丁基醚打浆进行纯化，得到400mg产物36-4，收率85.8％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.63(dd,J＝18.6,7.7Hz,2H),7.33(dt,J＝19.3,7.3Hz,2H),4.70(dd,J＝9.6,5.3Hz,1H),4.52-4.40(m,2H),3.83(s,3H),3.19-3.02(m,2H).ESI-MS m/z 231.89[M+H]+.
步骤三:将400mg 36-4、4mL 2-甲基四氢呋喃加入25mL单口瓶中，2℃下将0.5mL三乙胺、1mL去离子水加入到反应液中，5℃搅拌20min后将0.4mL二碳酸二叔丁酯加入到反应液中，5℃反应30min后升温至25℃继续反应1.5h。将10mL 2-甲基四氢呋喃和1mL 1N盐酸加入反应液中分层，有机相加入5mL饱和碳酸氢钠溶液分层，有机相加入5mL饱和食盐水分层，无水硫酸钠干燥有机相，浓缩干有机相。将9mL 2-甲基四氢呋喃加入上述浓缩干的反应液中，0℃下将6mL去离子水、1.3mL冰醋酸加入反应液中，-5℃下将285mg N-溴代丁二酰亚胺加入反应液中，-5℃反应1h。将10mL2-甲基四氢呋喃加入反应液中分层，有机相加入5mL饱和碳酸氢钠溶液分层，有机相加入5mL饱和食盐水分层，无水硫酸钠干燥有机相。浓缩有机相通过柱层析法(SiO2，石油醚:乙酸乙酯＝40:1-7:1)进行纯化，得到300mg产物36-5，收率50.0％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.41(d,J＝7.5Hz,1H),7.31(ddd,J＝7.7,6.1,1.4Hz,1H),7.10(t,J＝7.5Hz,1H),7.00(d,J＝8.1Hz,1H),4.73(dd,J＝15.3,8.3Hz,1H),4.43(dtt,J＝24.1,11.6,5.9Hz,1H),3.88(dd,J＝15.3,5.8Hz,1H),3.57(s,3H),2.48-2.37(m,1H),1.98(dt,J＝14.8,10.7Hz,1H),1.40(d,J＝34.4Hz,9H).ESI-MS m/z 347.79[M+H]+.
步骤四:将100mg 36-5、30mg氢氧化锂一水合物、1mL四氢呋喃和1mL水加入10mL单口瓶中，40℃反应2h。降温至25℃后将2mL 1N盐酸滴加至反应液调pH＝3～4，将5mL乙酸乙酯加入中反应液中分层，有机相加入2mL水分层，有机相加入2mL饱和食盐水分层，无水硫酸钠干燥有机相。浓缩有机相得到85mg产物36-6，收率88.5％。ESI-MS m/z 331.75[M-H]+.
步骤五：将85mg 36-6、1mL二氧六环加入10mL单口瓶中，将72mg二碳酸二叔丁酯、0.03mL吡啶加入反应液中，搅拌10min后将26mg碳酸氢铵加入反应液中，25℃反应10h。浓缩干反应液，用二氯甲烷打浆进行纯化，得到50mg产物36-7，收率58.8％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.77(ddd,J＝8.6,7.1,1.5Hz,1H),7.68(dd,J＝7.8,1.4Hz,1H),7.50-7.38(m,1H),7.21(dt,J＝14.9,7.9Hz,2H),7.10(s,1H),4.41(d,J＝7.2Hz,1H),3.67(s,2H),2.58(q,J＝12.4Hz,1H),2.21(dd,J＝13.9,3.2Hz,1H),1.39(s,9H).ESI-MS m/z 332.36[M+H]+.
步骤六：化合物36-8的合成与实施例1中化合物1-9的合成方法相同，不同之处在于用化合物36-7代替化合物1-5，用化合物4-3代替化合物1-8，最终得到化合物36-8，收率84.0％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.78(dddd,J＝8.8,7.3,5.1,1.5Hz,1H),7.73-7.61(m,1H),7.61-7.32(m,1H),7.32-7.15(m,2H),7.15-6.95(m,2H),5.43-5.24(m,1H),4.54(dd,J＝9.8,3.1Hz,1H),3.99-3.66(m,3H),3.05-2.86(m,3H),2.63-2.52(m,1H),2.29-2.12(m,1H),1.57(dd,J＝22.2,6.4Hz,1H),1.41-1.28(m,9H),1.05-0.91(m,1H),0.46-0.34(m,3H),0.33-0.19(m,4H),0.11--0.03(m,3H).ESI-LCMS m/z 554.70[M+H]+.
步骤七：将60mg化合物36-8、1mL二氧六环、0.5mL 4N氯化氢二氧六环溶液加入25mL单口瓶中，40℃反应1h，浓缩干反应液。将上述得到的盐酸盐、1mL二氯甲烷加入25mL单口瓶中，0℃条件下将0.05mL三乙胺缓慢加入到反应液中，搅拌10min后缓慢将0.03mL三氟乙酸酐加入到反应液中，25℃反应12h。将1mL 1N盐酸和5mL二氯甲烷加入反应液中分层，有机相加入1mL饱和食盐水分层，无水硫酸钠干燥有机相。浓缩有机相通过柱层析法(SiO2，二氯甲烷:甲醇＝200:1-50:1)进行纯化，得到10mg化合物36，收率17.4％。ESI-MS m/z549.62.[M+NH4]+.
实施例37
步骤一：将2g化合物37-1、20mL二氯甲烷加入100mL单口瓶中，氮气保护。0℃下将1.6mL三乙胺加入反应液中，0℃搅拌10min后将1.6mL三氟乙酸酐加入反应液中，25℃反应2h。将2mL 1N盐酸和10mL二氯甲烷加入反应液中分层，有机相加入5mL饱和食盐水分层，无水硫酸钠干燥有机相。过滤后浓缩有机相通过柱层析法(SiO2，石油醚:乙酸乙酯＝40:1-10:1)进行纯化，得到3g产物37-2，收率99.7％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.46(t,J＝5.4Hz,1H),7.67-7.46(m,4H),3.47(q,J＝6.6Hz,2H),2.91(t,J＝6.9Hz,2H).ESI-MS m/z285.80[M+H]+.
步骤二:将2.1g化合物37-2、1.3g多聚甲醛加入100mL单口瓶中，将21mL/30mL醋酸/硫酸的混合溶液加入反应液中，氮气保护，25℃反应2h。将50mL冰水和100mL乙酸乙酯加入反应液中分层，有机相加入100mL饱和碳酸氢钠溶液分层，无水硫酸钠干燥有机相。过滤后浓缩有机相通过柱层析法(SiO2，石油醚:乙酸乙酯＝40:1-10:1)进行纯化，得到2g产物37-3，收率91.0％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.67-7.48(m,3H),4.84(d,J＝11.6Hz,2H),3.84(tt,J＝6.0,2.3Hz,2H),3.08-2.94(m,2H).ESI-MS m/z297.20[M+H]+.
步骤三：将2g化合物37-3、65mL乙醇加入100mL单口瓶，将16mL1N氢氧化钠水溶液加入反应液中，90℃反应2h。浓缩干反应液，将10mL水和50mL二氯甲烷加入反应液中分层，有机相加入10mL饱和食盐水分层，无水硫酸钠干燥有机相。浓缩干有机相，将16mL无水二氯甲烷加入浓缩干的有机相中，氮气保护。0℃下将2mL三乙胺加入反应液中，0℃搅拌10min后将1.1mL磺酰氯缓慢滴加至反应液中，0℃反应1.5h。将2mL 1N盐酸和10mL二氯甲烷加入反应液中分层，有机相加入5mL饱和食盐水分层，无水硫酸钠干燥有机相。过滤后浓缩有机相通过柱层析法(SiO2，石油醚:乙酸乙酯＝40:1-10:1)进行纯化，得到1g化合物37-4，收率73.9％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.78-7.46(m,3H),4.72(d,J＝13.0Hz,2H),3.73(dt,J＝17.2,6.1Hz,2H),3.16(dt,J＝11.9,6.2Hz,2H).ESI-MS m/z 299.69[M+H]+.
化合物37的合成方法与实施例28中化合物28的合成方法相同，不同之处在于化合物37-4代替化合物对三氟甲基苯磺酰氯，最终得到化合物37，收率28％。ESI-MS m/z604.62[M+NH4]+.
实施例38
步骤一：在反应瓶中加入38-1(3.276g)，L-环丙基丙氨酸甲酯(1.83g)，HATU(5.1g)，以及二氯甲烷，N2保护，冰浴下滴加DIPEA(4.45mL)，加毕，撤冰浴，环境温度下搅拌，反应液黄色澄清。待反应完全后，依次用1MHCl溶液、饱和碳酸氢钠溶液、饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得化合物38-2共3.2g。ESI-MS m/z 382.2[M+H]+。
步骤二：将化合物38-2(3.1674g)溶于6mL THF中，将氢氧化锂一水合物(511mg)溶于水(3mL)中，加入体系中，再加入3mL甲醇，环境温度下搅拌2h后，TLC显示反应完全。旋走溶剂，加水，逐滴加入1M HCl溶液调pH至3～4，乙酸乙酯萃取，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩得化合物38-3共3g。ESI-MS m/z 382.2[M+H]+。
步骤三：在反应瓶中加入38-4(1g)，冰浴下分别加入二氧六环，Boc酸酐(1.048g)，吡啶(372μL)和碳酸氢铵(380mg)，氮气保护，搅拌三十分钟后，转至室温反应，过夜搅拌，反应液黑色。次日TLC显示反应完全，旋干直接投下一步。
步骤四：在反应瓶中加入氰化锌(511mg)，碳酸铵(6.816g)和水，搅拌至全溶，将化合物38-5溶于乙醇，加入上述体系中，55℃回流，过夜，次日TLC显示反应完全。后处理：加水，乙酸乙酯萃取多次，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得化合物38.6共500mg。
化合物38的合成与实施例3中化合物3的合成方法相同，不同之处在于用化合物38-6代替化合物3-3，用化合物38-3代替化合物3-5，最终得到化合物38。ESI-MS m/z 530.2[M+H]+。
实施例39
步骤一：反应瓶中加入39-1(10g)，吡啶(200mL)，五硫化二磷(9.9g)，加热至90℃反应3h，降至常温后加入乙酸乙酯稀释，冰水浴冷却用1N盐酸溶液调节pH至中性，分液，有机相干燥，浓缩得泡状固体，向其中加入二氯甲烷(100mL)，四甲基胍(5.8g)，冰水浴冷却向其中加入碘甲烷(4.66g)，常温反应2h，浓缩，剩余物中加入水/甲基叔丁基醚溶解，有机相分出，干燥，浓缩得到9g化合物39-2。
步骤二：反应瓶中加入39-2(9g)，甲醇(90mL)，醋酸(0.66g)，冰水浴冷却，加入氰基硼氢化钠(3.5g)，常温反应2h，小心加入1N盐酸淬灭，继续加入水/甲叔醚搅拌，分层，有机相干燥，浓缩，柱层析纯化得8g化合物39-3。
步骤三：反应瓶中加入39-3(8g)，水(40mL)，四氢呋喃(40mL)，碳酸氢钠(3.2g)，冰水浴冷却，加入二碳酸二叔丁酯(5g)，常温反应过夜，浓缩除去四氢呋喃后加入乙酸乙酯萃取，有机相干燥，浓缩，柱层析纯化得7.6g化合物39-4。
步骤四：闷罐中加入39-4(3g)，7M氨甲醇溶液(15mL)，50℃反应2天，浓缩干，柱层析纯化得到1.1g化合物39-5。
步骤五：反应瓶中加入39-5(830mg)，甲醇(15mL)，氮气置换，加入10％钯碳(80mg)，氢气(35psi)常温反应3h，滤除催化剂，滤液浓缩，得到590mg 39-6。
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步骤六：反应瓶中加入2-氟异丁酸(770mg)，18-1(1.6g)，5mL二氯甲烷,冰水浴降温，继续加入HATU(6.7g)，DIPEA(3.8g)，常温反应4-5h，依次用饱和碳酸氢钠水溶液，1N盐酸水洗涤，有机相干燥，浓缩，柱层析纯化得到500mg化合物39-8。
步骤7：反应瓶中加入化合物39-8(1.4g)，四氢呋喃(15mL)，水(7mL)，一水氢氧化锂(0.5g)，常温反应2h，加入1N盐酸调节pH至弱酸性，乙酸乙酯萃取，有机相干燥，浓缩得1.2g化合物39-9。
化合物39-10的合成方法与实施例8中步骤一和步骤三的合成方法相同，不同之处在于化合物39-9代替化合物4-3，最终得到化合物39-10。
化合物39的合成与实施例8中步骤四和步骤五的合成方法相同，不同之处在于化合物39-10代替化合物8-4，并用化合物39-6代替化合物4-1，最终得到化合物39，1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.21(m,1H),7.67(s,1H),7.28(m,1H),7.17-7.15(d,1H),7.11-7.07(t,1H),6.75-6.71(m,2H),4.80-4.76(m,1H),4.48-4.45(m,1H),3.82-3.80(d,1H),3.72(s,3H),3.63-3.61(d,1H),3.56-3.53(d,1H),3.45-3.43(d,1H),2.76-2.64(m,3H),2.22-2.17(m,1H),1.54-1.44(m,7H),0.98(m,1H),0.66-0.64(m,2H),0.50-0.46(m,4H),0.27(m,2H).
实施例40
步骤一:化合物40-1(467mg)溶于甲醇，加入10％的钯碳(46mg)，氯化氢乙醇(1eq)，氢气置换，TLC显示2小时后反应完全，硅藻土助滤，滤液浓缩待用。另取一茄形瓶加入40-2(450mg)，HATU(670mg)，DCM，室温搅拌30分钟后，加入浓缩待用的胺化物，冰浴加入DIPEA(722mg)，室温搅拌10小时，TLC显示原料基本反应完全。后处理：1M盐酸洗涤，水洗，碳酸氢钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，柱层析得化合物40-3共621mg。
步骤二:化合物40-3(621mg)溶于四氢呋喃和水(各5ml)，加入氢氧化锂一水合物(198mg)，升温至40℃搅拌4小时，TLC显示原料少量剩余。后处理：乙酸乙酯/碳酸氢钠水溶液萃取，保留水相，乙酸乙酯萃取水相，并调pH，饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩得化合物40-4共590mg。
步骤三：化合物40-5(3g)溶于吡啶，加入五硫化二磷(1.4g)，90℃搅拌过夜。后处理：二氯甲烷/碳酸氢钠溶液洗，水洗，无水硫酸钠干燥，过滤柱层析得化合物40-6。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ12.95(s,1H),7.36-7.32(m,1H),7.19(t,J＝7.2Hz,1H),7.16-7.13(m,1H),7.09(d,J＝7.8Hz,1H),4.66(ddd,J＝15.1,9.7,7.9Hz,1H),3.73(d,J＝15.1Hz,3H),3.62(t,J＝10.6Hz,1H),3.58-3.50(m,1H),2.47-2.32(m,2H),1.39(d,J＝15.5Hz,9H).
步骤四：化合物40-6(1.050g,)溶于四氢呋喃和水(各8ml)，加入氢氧化锂一水合物(487mg)，40℃搅拌1小时，反应完全。后处理：乙酸乙酯/水萃取，水层调pH至2-3，分液，有机相饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤，直接投下一步，1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ12.93(s,1H),7.37-7.28(m,1H),7.18-7.06(m,3H),4.52(ddd,J＝13.6,9.7,7.9Hz,1H),3.60(dd,J＝14.9,10.3Hz,1H),3.51(ddd,J＝14.9,10.3,1.7Hz,1H),2.48-2.27(m,2H),1.39(d,J＝23.7Hz,9H)。ESI-MS m/z 347.18[M-H]-。
步骤五：化合物40-7溶于二氧六环，向溶液中加入二碳酸二叔丁酯，吡啶(252mg)，碳酸氢铵(252mg)，溶清，室温搅拌4小时，原料大量剩余。搅拌过夜，次日，析出白色固体，直接过滤得到480mg化合物40-8。
步骤六:化合物40-8(225mg)悬浮于二氯甲烷，加入三乙胺(0.7mL)，三氟乙酸酐(0.4mL)，室温搅拌2小时，TLC显示原料反应完全。后处理DCM/1M盐酸洗涤，水洗，碳酸氢钠洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩，直接用于下一步。
步骤七：化合物40-9(200mg)溶于二氯甲烷(1.6mL)，加入4M HCl(1.6mL)二氧六环溶液，室温搅拌30分钟原料反应完全。浓缩得淡黄色固体，待用。另取一反应瓶，加入40-4(198mg)，二氯甲烷，HATU(247mg)，室温搅拌30分钟后加入淡黄色固体的DMF溶液，室温搅拌7小时。后处理：DCM/1M盐酸洗涤，水洗，碳酸氢钠洗涤，无水硫酸钠干燥，柱层析，得到化合物40，ESI-MS m/z 591.58[M-H]-。
实施例41
步骤一；化合物7-2(140mg)溶于二氯甲烷，加入4M氯化氢二氧六环溶液(2mL)，反应1小时，TLC检测反应完全，浓缩。将浓缩物溶于二氯甲烷，加入DIPEA(0.2mL,1mmol)，冰浴滴加丙酮酸酰氯，室温搅拌1.5小时，原料反应完全。后处理：1M HCl洗涤、水洗、饱和碳酸氢钠洗涤，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，薄层色谱分离得到化合物41-1共37mg。
步骤二：化合物41-1(37mg)溶于二氯甲烷，冰浴加入三乙胺(0.08mL)，TFAA(0.04mL)，室温搅拌1小时，原料基本反应完全。后处理：1M盐酸洗涤，碳酸氢钠溶液洗涤，饱和食盐水洗，干燥，过滤，浓缩，薄层色谱分离，得化合物41共7mg。ESI-MS m/z 504.4[M-H]-。
实施例42
化合物42的合成与实施例9中化合物9的合成方法相同，不同之处在于化合物Boc-L-环己基甘氨酸代替化合物4-3，最终得到化合物42，收率38.5％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.73(s,1H),9.73(d,J＝8.6Hz,1H),7.25(q,J＝7.5Hz,1H),7.00(dt,J＝14.9,7.3Hz,2H),6.89(d,J＝7.8Hz,1H),5.25(t,J＝7.4Hz,1H),5.13(t,J＝8.0Hz,1H),4.37(t,J＝9.1Hz,1H),3.82(d,J＝10.5Hz,1H),3.71(d,J＝10.5Hz,1H),2.97(s,3H),2.69-2.56(m,1H),2.45(d,J＝7.4Hz,1H),1.78-1.49(m,7H),1.38(d,J＝9.9Hz,1H),1.11-0.83(m,5H),0.76(q,J＝11.8Hz,1H),0.52(q,J＝6.8,6.3Hz,1H),0.44-0.24(m,3H),0.06(p,J＝5.1,4.2Hz,1H).ESI-MS m/z 573.72[M+H]+.
实施例43
化合物43的合成与实施例9中化合物9的合成方法相同，不同之处在于化合物Boc-L-环戊基甘氨酸代替化合物4-3，最终得到化合物43，1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.73(s,1H),9.80(d,J＝8.6Hz,1H),7.25(t,J＝7.6Hz,1H),7.04(d,J＝7.4Hz,1H),6.97(t,J＝7.5Hz,1H),6.89(d,J＝7.7Hz,1H),5.27(dd,J＝8.7,6.2Hz,1H),5.14(t,J＝8.0Hz,1H),4.41(t,J＝9.1Hz,1H),3.84-3.59(m,2H),2.95(s,3H),2.63(dd,J＝13.2,8.6Hz,1H),2.49-2.43(m,1H),2.17(h,J＝8.3Hz,1H),1.66(dt,J＝13.2,6.3Hz,1H),1.54(dt,J＝14.7,8.0Hz,1H),1.49-1.26(m,4H),1.08(td,J＝13.1,10.6,6.3Hz,2H),0.47(dp,J＝21.3,7.7Hz,3H),0.30(dt,J＝8.2,2.6Hz,2H),0.10--0.06(m,2H).ESI-MS m/z 576.2[M+NH4]+.
实施例44
化合物44的合成方法与实施例6中化合物6的合成方法相同，不同之处在于用化合物44-2代替4-4，最终得到化合物44，ESI-MS m/z 554.2[M+H]+。
实施例45
步骤一：化合物45-2的合成与实施例1中的步骤三合成方法相同，不同之处在于化合物45-1代替化合物1-3，最终得到化合物45-2。
步骤二：冰浴下，化合物45-2溶于10倍当量的甲硫醇中，3倍当量氯化亚砜逐滴加入，5℃继续搅拌3小时，旋干后得到化合物45-3粗品。
化合物45的合成与实施例9中化合物9的合成方法相同，不同之处在于化合物45-3代替化合物4-1脱Boc以后的产物，最终得到化合物45，ESI-MS m/z 581.2[M+H]+。
实施例46
步骤一：化合物46-2(732mg)与化合物46-1(412mg)溶于无水乙腈中，AIBN(1eq)加入，环境温度下搅拌16个小时，过滤浓缩后柱层析得到化合物46-3。
化合物46的合成与实施例9中化合物9的合成方法相同，不同之处在于化合物46-3代替化合物4-1脱Boc以后的产物，最终得到化合物46，ESI-MS m/z 599.2[M+H]+。
实施例47
化合物47的合成与实施例17中化合物17的合成方法相同，不同之处在于化合物45-3代替化合物4-1脱Boc以后的产物，最终得到化合物47，ESI-MS m/z 617.2[M+H]+。
实施例48
化合物48的合成与实施例17中化合物17的合成方法相同，不同之处在于化合物46-3代替化合物4-1脱Boc以后的产物，最终得到化合物48，ESI-MS m/z 635.2[M+H]+。
实施例49
化合物49的合成方法与实施例9中化合物9的合成方法相同，不同之处在于Boc-1-氨基环丙基甲酸代替化合物4-3，最终得到化合物49，收率43.1％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.67(d,J＝6.2Hz,1H),10.03(s,1H),7.29-7.20(m,1H),7.06(dd,J＝13.7,7.4Hz,1H),7.01-6.92(m,1H),6.89(dd,J＝7.8,2.2Hz,1H),5.11(q,J＝7.4Hz,1H),4.95(t,J＝7.6Hz,1H),3.94-3.87(m,1H),3.86-3.75(m,1H),3.04(s,2H),2.61(ddd,J＝13.3,8.7,4.6Hz,1H),2.46(q,J＝6.9Hz,1H),1.82(ddd,J＝14.4,6.9,5.5Hz,2H),1.10-1.00(m,3H),0.63(qq,J＝7.3,4.8,3.7Hz,2H),0.45-0.36(m,3H),0.07(m,2H).ESI-MS m/z 534.87[M+NH4]+.
实施例50
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化合物50的合成方法与实施例8中化合物8的合成方法相同，不同之处在于化合物40-8代替化合物4-1，最终得到化合物50。ESI-MS m/z 584.13[M+H]+。
实施例51
将150mg化合物12-2、0.7mL二氧六环、0.7mL 4N氯化氢二氧六环溶液加入到25mL单口瓶中，35℃反应1h，浓缩干反应液。将上述得到的盐酸盐、10mL二氯甲烷于25mL单口瓶中，0℃条件下缓慢0.2mL三乙胺加入到反应液中，搅拌10min后缓慢将0.1mL三氟醋酸酐加入到反应液中，25℃反应12h。将0.5mL 1N盐酸和5mL二氯甲烷加入反应液中分层，有机相加入2mL水分层，有机相加入2mL饱和食盐水分层，无水硫酸钠干燥有机相。浓缩有机相通过柱层析法进行纯化，最终得到化合物51共110mg，收率76.1％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.73(s,1H),9.62(d,J＝8.3Hz,1H),7.31-7.21(m,1H),7.07(d,J＝7.3Hz,1H),7.01(dd,J＝9.3,5.5Hz,1H),6.94-6.84(m,1H),5.22(dd,J＝8.4,6.4Hz,1H),5.15(t,J＝8.0Hz,1H),4.57(t,J＝8.5Hz,1H),3.76(d,J＝10.6Hz,1H),3.66-3.55(m,1H),2.93(s,3H),2.74-2.56(m,2H),2.45(dd,J＝12.7,5.2Hz,1H),1.74-1.41(m,6H),1.35-1.18(m,1H),1.15-0.99(m,1H),0.52(q,J＝7.9,7.3Hz,1H),0.37-0.26(m,2H),0.06(dt,J＝8.5,4.3Hz,1H),0.03-0.05(m,1H).ESI-MS m/z 562.66[M+NH4]+.
实施例52
化合物52的合成方法与实施例51中化合物51的合成方法相同，不同之处在于三氟甲磺酸酐代替化合物三氟醋酸酐，最终得到化合物52，收率17.4％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.75(s,1H),9.84(d,J＝8.9Hz,1H),7.29(t,J＝7.6Hz,1H),7.03(dt,J＝14.8,7.4Hz,2H),6.92(d,J＝7.8Hz,1H),5.17(dt,J＝21.2,7.8Hz,2H),4.24(q,J＝5.6,5.0Hz,1H),3.80(d,J＝10.4Hz,1H),3.55(d,J＝10.4Hz,1H),2.93(s,3H),2.69-2.61(m,1H),2.15(q,J＝7.7Hz,1H),1.82(q,J＝9.2Hz,1H),1.56(d,J＝22.7Hz,6H),1.32-1.09(m,2H),0.56(q,J＝6.8Hz,1H),0.45-0.26(m,2H),0.10(ddq,J＝18.3,9.5,4.5Hz,2H).ESI-MS m/z582.24[M+H]+.
实施例53
步骤一：将250mg化合物13-2、5mL二氧六环、5mL 4N氯化氢二氧六环溶液加入到25mL单口瓶中，35℃反应1h，浓缩干反应液。将上述得到的盐酸盐、10mL二氯甲烷于25mL单口瓶中，0℃条件下缓慢0.3mL三乙胺加入到反应液中，搅拌10min后缓慢将0.2mL三氟甲磺酸酐加入到反应液中，25℃反应12h。将1mL 1N盐酸和5mL二氯甲烷加入反应液中分层，有机相加入2mL水分层，有机相加入2mL饱和食盐水分层，无水硫酸钠干燥有机相。浓缩有机相后通过柱层析法进行纯化，得到100mg化合物53-1，收率38.0％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.76(d,J＝11.2Hz,1H),9.79(d,J＝8.8Hz,1H),7.51(s,1H),7.27(q,J＝7.5Hz,1H),7.09(d,J＝26.5Hz,1H),6.97(t,J＝7.5Hz,1H),6.92(d,J＝7.6Hz,1H),6.86(d,J＝7.5Hz,1H),5.22(t,J＝7.3Hz,1H),4.58(dd,J＝10.2,7.8Hz,1H),4.24 -4.08(m,1H),3.80(t,J＝11.1Hz,1H),3.61(d,J＝10.0Hz,1H),2.93(s,3H),2.29-2.12(m,2H),1.70(dt,J＝14.1,7.1Hz,1H),1.65-1.51(m,1H),1.41(q,J＝7.5Hz,2H),1.23(q,J＝9.8Hz,5H),1.06-0.91(m,2H),0.61(h,J＝6.9Hz,1H),0.37(dtt,J＝34.7,8.6,3.9Hz,2H),0.07(tdd,J＝19.4,9.8,5.2Hz,2H).ESI-MS m/z 613.50[M+H]+.
步骤二：将40mg化合物53-1、44mg伯吉斯试剂和4mL二氯甲烷加入10mL单口瓶中，25℃反应10h。浓缩有机相通过柱层析法进行纯化，得到24mg化合物53，收率63.1％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.75(s,1H),9.82(d,J＝8.5Hz,1H),7.35-7.16(m,1H),7.00(d,J＝7.3Hz,1H),6.94(t,J＝7.5Hz,1H),6.90(d,J＝7.7Hz,1H),5.22(t,J＝7.3Hz,1H),5.15(t,J。＝8.1Hz,1H),4.22(d,J＝7.6Hz,1H),3.86(d,J＝10.4Hz,1H),3.71(d,J＝10.4Hz,1H),2.98(s,3H),2.71-2.57(m,2H),1.84(d,J＝8.1Hz,1H),1.62(t,J＝7.4Hz,1H),1.47(s,2H),1.31(d,J＝14.5Hz,5H),1.19-1.00(m,2H),0.68-0.47(m,1H),0.38(ddq,J＝29.5,8.9,4.5Hz,2H),0.11(ddp,J＝17.9,8.9,4.6Hz,2H).ESI-MS m/z 596.50[M+H]+.
实施例54
化合物54的合成与实施例36中化合物36的合成方法相同，不同之处在于用化合物40-8代替化合物1-5，用化合物4-3代替化合物1-8，最终得到化合物54。ESI-MS m/z 548.2[M+H]+。
药理实施例
药理实施例1.化合物对SARS-CoV-2 3CL蛋白酶抑制活性测定
参考文献European Journal of Medicinal Chemistry.2022；228:114030中的方法进行基于化合物对SARS-CoV-2 3CL蛋白酶(3CLpro)抑制活性的测定。具体方法如下：荧光的酶抑制试验来评估化合物对SARS-CoV-2 3CL蛋白酶的抑制作用。在含有或不含有每种测试抑制剂的反应混合物中监测Dabcyl-KNSTLQSGLRKE-Edans的水解速率。在96孔板中将3CL蛋白酶与分析物在37℃的缓冲液中预孵育10分钟。然后在添加Dabcyl KNSTLQSGLRKEEdans后继续反应。产生的荧光信号(激发/发射，340nm/490nm)由微孔板阅读器(iD3，Molecular Devices，Austria)进行读数。利用软件GraphPad Prism软件拟合得到IC50值以及抑制率曲线。
实验结果如表1所示。结果表明，本发明化合物对SARS-CoV-2 3CLpro具有抑制作用。IC50值的范围为：A表示<0.2μM，B表示0.2-2μM(包括2μM)，C表示2-20μM(包括20μM)。
表1.化合物对SARS-CoV-2 3CLpro的抑制作用
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药理实施例2.部分化合物对SARS-CoV-2DELTA株复制抑制活性评价
测试化合物用DMSO溶解成40mM母液，测试当天，将化合物母液用DMEM进行连续稀释最终得到1μM。试验使用Vero E6细胞，在48孔板中加入Vero E6细胞(50000个细胞/孔)，加入100μL/孔含梯度浓度化合物的培养基，一小时后加入SARS-CoV-2DELTA株，感染复数(MOI)为0.01。共孵育1小时后，吸走上清，清洗并重新加入200μL/孔含1μM化合物的培养基，37℃培养24小时。24小时后，收集细胞上清，提取上清病毒RNA并利用实时荧光定量PCR的方法检测上清病毒拷贝数，根据病毒拷贝数算出化合物抑制率，实验结果如表2显示，其中A表示70～100％,B表示30～69％,C表示10～29％。
表2.化合物对SARS-CoV-2DELTA株复制抑制活性
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药理实施例3.化合物7的ICR小鼠PK性质测试实验
ICR小鼠灌胃给药组剂量200mg/kg，溶媒:5％二甲亚砜+5％ Solutol HS 15+5％PEG+85％生理盐水,经下颌下静脉采血，0.03mL/时间点。样品置于含有K2-EDTA的试管中，并储存在冰上，直到离心。血液样本在收集后1小时内，在2-8℃下以6800g离心6分钟，并在约-80℃下冷冻储存。将10μL血浆样品的等分试样用190μL 0.1％FA/ACN(其中含有20ng/mLIS)进行蛋白质沉淀。将混合物涡旋3分钟，并在2200rcf下离心15分钟。取120μL上清液注入LC-MS/MS分析。测试结果如表3所示，结果显示化合物7在小鼠体内有较高的血药暴露量。
表3.化合物7在ICR小鼠灌胃给药200mg/kg下的PK参数
药理实施例4.化合物9的ICR小鼠PK性质测试实验
实验方法与药理实施例3相同，测试结果如表4和表5所示，结果显示，同在200mg/kg剂量下，化合物9在小鼠体内有很高的血药暴露量，这也提示我们，这类化合物能够显著改变PK性质进而显著改变体内抗病毒效果。
表4.化合物9在ICR小鼠灌胃给药20mg/kg下的PK参数
表5.化合物9在ICR小鼠灌胃给药200mg/kg下的PK参数
药理实施例5.化合物17的ICR小鼠PK性质测试实验
实验方法与药理实施例3相同，测试结果如表6所示，结果显示化合物17在小鼠体内有比化合物9更高的血药暴露量，
表6.化合物17在ICR小鼠灌胃给药200mg/kg下的PK参数
/>

Claims (10)

1.一种式I所示的螺环化合物，或其对映异构体、非对映异构体、外消旋体或药学上可接受的盐：
其中
R1选自氢、C1～C6烷基；
A环选自含1～6个杂原子的单环或并环，特别地选自
R2与R3各自独立地选自H、C1～C10烷基、含1～3个卤原子的C1～C10烷基、含1～3个杂原子的C1～C10烷基、C3-C8环烷基、C3-C8环烷基取代的C1～C6烷基；
R4选自氢、C1～C6烷基、含1～3个卤原子的C1～C6烷基、含1～3个杂原子的C1～C6烷基；
或者，R2与R4相连形成含1～4个杂原子的并环、桥环或螺环；特别地，R2与R4和与其分别相连的碳和氮原子相连形成
R5选自-COR6、-SO2R7、喹唑啉基、C1～C6烷基取代的喹唑啉基、含1～5个卤原子的C1～C10烷基取代的喹唑啉基；
R6选自-CR8R9NHR10、-NR11NHR12、取代的5-10元杂芳环并3-8元杂环烷基、取代或未取代的5-10元杂芳基，所述5-10元杂芳环的取代基选自含1～5个卤原子的C1～C10烷基，所述5-10元杂芳基的取代基选自取代的C6-C10芳基、C1～C6烷基，所述C6-C10芳基的取代基选自1～5个卤原子的C1～C10烷基；
R7选自取代或未取代的C6-C10芳基、取代或未取代的5-10元杂芳基、取代的5-10元杂芳环并3-8元杂环烷基、取代的C6-C10芳基并3-8元杂环烷基、取代的苄基，所述5-10元杂芳基的取代基选自取代的C6-C10芳基、含1～5个卤原子的C1～C10烷基，所述C6-C10芳基的取代基选自含1～5个卤原子的C1～C10烷基，苄基的取代基选自含1～5个卤原子的C1～C10烷基；
R8与R9各自独立地选自氢、C1～C6烷基、C3～C8环烷基、C1～C8烷氧基取代的C6-C10芳基，其中C1～C8烷氧基为未取代的或被-NR8’R9’取代，R8’R9’各自独立地为氢或C1-C6烷基；或者
R8与R9和与其相连的碳原子一起形成3～6元亚环烷基；
R10选自C1～C6烷基取代的甲酰基、含1～5个卤原子的C1～C6烷基取代的甲酰基、C3～C6环烷基取代的甲酰基、苯甲酰基、1～5个卤原子取代的苯甲酰基、C1～C6烷基取代的磺酰基、C3～C8环烷基取代的磺酰基、含1～5个卤原子的C1～C6烷基取代的磺酰基、C1～C6烷基取代的甲酰基羰基、-SO2NR13R14；
R11与R12各自独立地选自氢、C1～C6烷基、C1～C6烷基取代的甲酰基、含1～5个卤原子的C1～C6烷基取代的甲酰基；
R13与R14各自独立地选自氢、C1～C6烷基，
或者R13与R14和与之相连的氮原子形成3～8元杂环烷基；
X选自氰基、-COSR15，
R15选自C1～C6烷基、1～5个卤原子取代的C1～C6烷基、C3～C8环烷基、C2～C6烯基、C3～C8环烷基取代的C1～C6烷基；
每个R’独立地选自氢、卤素、C1～C6烷基、1～5个卤原子取代的C1～C6烷基、C1～C6烷氧基；
n为0、1、2、3或4；
卤原子指F、Cl、Br或I；
杂原子指N、O或S。
2.根据权利要求1所述的螺环化合物，或其对映异构体、非对映异构体、外消旋体或药学上可接受的盐，其中
X为-COSR15，
R15选自C1～C6烷基、1～5个卤原子取代的C1～C6烷基、C3～C8环烷基、C2～C6烯基、C3～C8环烷基取代的C1～C6烷基；
其它取代基如权利要求1中的定义。
3.根据权利要求1所述的螺环化合物，或其对映异构体、非对映异构体、外消旋体或药学上可接受的盐，其中
A环选自含1～6个杂原子的并环，特别地选自：
R2与R3各自独立地选自H、C1～C10烷基、C3-C8环烷基、C3-C8环烷基取代的C1～C6烷基；
R4选自氢、C1～C6烷基；
R5选自-COR6、-SO2R7；
其它取代基如权利要求1中的定义。
4.根据权利要求1所述的螺环化合物，或其对映异构体、非对映异构体、外消旋体或药学上可接受的盐，
其中式I所示的化合物选自如式I-A～I-E所示的化合物：
其中R2与R3各自独立地选自H、C1～C10烷基、C3-C8环烷基、C3-C8环烷基取代的C1～C6烷基；
R4选自氢、C1～C6烷基；
R5选自-COR6；
其它取代基如权利要求1中的定义。
5.根据权利要求1所述的螺环化合物，或其对映异构体、非对映异构体、外消旋体或药学上可接受的盐，
其中式I所示的化合物如式II-A所示：
R2选自C1～C10烷基、C3-C8环烷基、C3-C8环烷基取代的C1～C6烷基；
其它取代基如权利要求1中的定义。
6.根据权利要求1所述的螺环化合物，或其对映异构体、非对映异构体、外消旋体或药学上可接受的盐，
其中式I所示的化合物如式II-A所示：
R2选自C1～C10烷基、C3-C8环烷基取代的C1～C6烷基；
R6选自-CR8R9NR10；
R8与R9各自独立地选自氢、C3-C8环烷基；
其它取代基如权利要求1中的定义。
7.根据权利要求1所述的化合物，选自如下化合物，或其药学上可接受的盐：
8.根据权利要求1所述的螺环化合物的制备方法，该方法选自以下方法1-6之一：
方法1：
步骤1a)：化合物a1和b1发生缩合反应制备化合物c1；
步骤1b)：化合物c1脱去保护基得到化合物d1；
步骤1c)：化合物d1与e1缩合得到化合物f1；
步骤1d)：化合物f1脱去保护基后与羧酸、酰氯或酸酐反应得到化合物g1；
步骤1e)：化合物g1经过脱水，或者水解后缩合，或者水解后硫代再亲核反应得到化合物I；
在方法1中，取代基R1-R5、A和X的定义与权利要求1中相同，
Ra为酰胺或酯，Rb是保护基团；
方法2：
步骤2a)：化合物a2和b2发生缩合反应制备化合物c2；
步骤2b)：化合物c2经过脱水，或者水解后缩合，或者水解后硫代再亲核反应得到化合物I；
在方法2中，取代基R1-R5、A和X的定义与权利要求1中相同，
Ra为酰胺或酯；
方法3：
步骤3a)：化合物a3和b3发生缩合反应制备化合物c3；
步骤3b)：化合物c3脱去保护基后与羧酸、酰氯或酸酐反应得到化合物d3；
步骤3c)：化合物d3经过脱水，或者水解后缩合，或者水解后硫代再亲核反应得到化合物I；
在方法3中，取代基R1-R5、A和X的定义与权利要求1中相同，
Ra是酰胺或酯；
方法4：
步骤4a)：化合物a4和b4发生缩合反应制备化合物c4；
步骤4b)：化合物c4脱去保护后经亲核反应得到化合物d4；
步骤4c)：化合物d4脱水，或者水解后缩合，或者水解后硫代再亲核反应得到化合物I；
在方法4中，取代基R1-R5、A和X的定义与权利要求1中相同，
Ra是酰胺或酯；
方法5：
步骤5a)：化合物a5和b5发生缩合反应制备化合物I；
在方法5中，取代基R1-R5、A和X的定义与权利要求1中相同；
方法6
/>
步骤6a)：化合物a6和b6发生缩合反应制备化合物c6；
步骤6b)：化合物c6脱去保护基后与与羧酸、酰氯或酸酐反应得到化合物I；
在方法6中，取代基R1-R5、A和X的定义与权利要求1中相同。
9.一种药物组合物，其包含第一活性成分，所述第一活性成分包含选自权利要求1至7中任一项所述的螺环化合物、或其对映异构体、非对映异构体、外消旋体或其药学上可接受的盐中的一种或多种，以及任选地，一种或者多种药学上可接收的辅料、稀释剂、载体、赋形剂或佐剂。
10.根据权利要求1-7任一项所述的螺环化合物或其对映异构体、非对映异构体、外消旋体或其药学上可接受的盐或者根据权利要求9所述的药物组合物在制备药物中的用途，所述药物选自用于抑制冠状病毒3CL蛋白酶活性的药物，用于预防和/或治疗冠状病毒感染的药物。
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