CN117982629B - 一种iii型小分子胶原蛋白肽在改善面部肤质中的应用 - Google Patents
一种iii型小分子胶原蛋白肽在改善面部肤质中的应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN117982629B CN117982629B CN202410182049.7A CN202410182049A CN117982629B CN 117982629 B CN117982629 B CN 117982629B CN 202410182049 A CN202410182049 A CN 202410182049A CN 117982629 B CN117982629 B CN 117982629B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- skin
- collagen peptide
- iii
- type
- seq
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 title claims abstract description 100
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 title claims abstract description 75
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 title claims abstract description 75
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 title claims abstract description 75
- 230000001815 facial effect Effects 0.000 title claims abstract description 28
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 title claims abstract description 24
- 230000006872 improvement Effects 0.000 claims abstract description 23
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims abstract description 21
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims abstract description 21
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims abstract description 14
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims abstract description 14
- 244000144972 livestock Species 0.000 claims abstract description 13
- 244000144977 poultry Species 0.000 claims abstract description 13
- 230000037394 skin elasticity Effects 0.000 claims abstract description 13
- 239000011148 porous material Substances 0.000 claims abstract description 11
- 239000004519 grease Substances 0.000 claims abstract description 10
- 230000005808 skin problem Effects 0.000 claims abstract description 8
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 claims description 39
- 239000004365 Protease Substances 0.000 claims description 39
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 claims description 37
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 26
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 19
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 15
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 15
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 15
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims description 13
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims description 13
- 241000194108 Bacillus licheniformis Species 0.000 claims description 12
- 241000228245 Aspergillus niger Species 0.000 claims description 11
- 244000063299 Bacillus subtilis Species 0.000 claims description 11
- 235000014469 Bacillus subtilis Nutrition 0.000 claims description 11
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims description 11
- 238000001728 nano-filtration Methods 0.000 claims description 10
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims description 9
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 7
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims description 7
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 claims description 6
- 239000008213 purified water Substances 0.000 claims description 6
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 claims description 6
- 238000002791 soaking Methods 0.000 claims description 6
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 claims description 6
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims description 6
- 230000037303 wrinkles Effects 0.000 claims description 6
- 206010051246 Photodermatosis Diseases 0.000 claims description 4
- 230000008845 photoaging Effects 0.000 claims description 4
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 4
- 238000001816 cooling Methods 0.000 claims description 3
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 claims 1
- 230000037311 normal skin Effects 0.000 claims 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 24
- 102000012422 Collagen Type I Human genes 0.000 abstract description 15
- 108010022452 Collagen Type I Proteins 0.000 abstract description 15
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 abstract description 15
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 abstract description 12
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 abstract description 8
- 230000036541 health Effects 0.000 abstract description 6
- 230000003796 beauty Effects 0.000 abstract description 3
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 55
- 239000000047 product Substances 0.000 description 27
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 26
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 20
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 18
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 15
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 15
- 102000001187 Collagen Type III Human genes 0.000 description 13
- 108010069502 Collagen Type III Proteins 0.000 description 13
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 9
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 6
- 102000000503 Collagen Type II Human genes 0.000 description 5
- 108010041390 Collagen Type II Proteins 0.000 description 5
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 5
- 238000000227 grinding Methods 0.000 description 5
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 5
- 238000000034 method Methods 0.000 description 5
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 5
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 4
- BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N methanoic acid Natural products OC=O BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 4
- 238000007873 sieving Methods 0.000 description 4
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 4
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108091005658 Basic proteases Proteins 0.000 description 3
- 108010019160 Pancreatin Proteins 0.000 description 3
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 3
- 238000011161 development Methods 0.000 description 3
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 3
- 230000002500 effect on skin Effects 0.000 description 3
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 3
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 3
- 238000005286 illumination Methods 0.000 description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 3
- 229940055695 pancreatin Drugs 0.000 description 3
- XJMOSONTPMZWPB-UHFFFAOYSA-M propidium iodide Chemical compound [I-].[I-].C12=CC(N)=CC=C2C2=CC=C(N)C=C2[N+](CCC[N+](C)(CC)CC)=C1C1=CC=CC=C1 XJMOSONTPMZWPB-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 3
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 3
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 3
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 3
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 3
- OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 4-(3-methoxyphenyl)aniline Chemical compound COC1=CC=CC(C=2C=CC(N)=CC=2)=C1 OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 description 2
- 102400000888 Cholecystokinin-8 Human genes 0.000 description 2
- 101800005151 Cholecystokinin-8 Proteins 0.000 description 2
- 108010040476 FITC-annexin A5 Proteins 0.000 description 2
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PMMYEEVYMWASQN-DMTCNVIQSA-N Hydroxyproline Chemical compound O[C@H]1CN[C@H](C(O)=O)C1 PMMYEEVYMWASQN-DMTCNVIQSA-N 0.000 description 2
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 2
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 2
- 208000026935 allergic disease Diseases 0.000 description 2
- 230000007815 allergy Effects 0.000 description 2
- 230000003698 anagen phase Effects 0.000 description 2
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 description 2
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000002826 coolant Substances 0.000 description 2
- 239000002537 cosmetic Substances 0.000 description 2
- 238000004042 decolorization Methods 0.000 description 2
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 2
- PMMYEEVYMWASQN-UHFFFAOYSA-N dl-hydroxyproline Natural products OC1C[NH2+]C(C([O-])=O)C1 PMMYEEVYMWASQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 2
- 235000019253 formic acid Nutrition 0.000 description 2
- 229960002591 hydroxyproline Drugs 0.000 description 2
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 2
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 2
- 238000001819 mass spectrum Methods 0.000 description 2
- 238000005374 membrane filtration Methods 0.000 description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 2
- IZTQOLKUZKXIRV-YRVFCXMDSA-N sincalide Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(N)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O)C1=CC=C(OS(O)(=O)=O)C=C1 IZTQOLKUZKXIRV-YRVFCXMDSA-N 0.000 description 2
- 229910001415 sodium ion Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 230000002195 synergetic effect Effects 0.000 description 2
- 210000002435 tendon Anatomy 0.000 description 2
- FGMPLJWBKKVCDB-UHFFFAOYSA-N trans-L-hydroxy-proline Natural products ON1CCCC1C(O)=O FGMPLJWBKKVCDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 2
- 241000251468 Actinopterygii Species 0.000 description 1
- 208000007848 Alcoholism Diseases 0.000 description 1
- 108090000145 Bacillolysin Proteins 0.000 description 1
- 206010010774 Constipation Diseases 0.000 description 1
- 229920000742 Cotton Polymers 0.000 description 1
- 206010013786 Dry skin Diseases 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000000585 Mann–Whitney U test Methods 0.000 description 1
- 208000003351 Melanosis Diseases 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 102000035092 Neutral proteases Human genes 0.000 description 1
- 108091005507 Neutral proteases Proteins 0.000 description 1
- 102000015636 Oligopeptides Human genes 0.000 description 1
- 108010038807 Oligopeptides Proteins 0.000 description 1
- 208000012641 Pigmentation disease Diseases 0.000 description 1
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000013738 Sleep Initiation and Maintenance disease Diseases 0.000 description 1
- 102000005158 Subtilisins Human genes 0.000 description 1
- 108010056079 Subtilisins Proteins 0.000 description 1
- 206010046865 Vaccinia virus infection Diseases 0.000 description 1
- 206010000059 abdominal discomfort Diseases 0.000 description 1
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 1
- 206010000496 acne Diseases 0.000 description 1
- 230000032683 aging Effects 0.000 description 1
- 201000007930 alcohol dependence Diseases 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 230000036528 appetite Effects 0.000 description 1
- 235000019789 appetite Nutrition 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 238000004159 blood analysis Methods 0.000 description 1
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 1
- 210000005252 bulbus oculi Anatomy 0.000 description 1
- 210000000845 cartilage Anatomy 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 230000001276 controlling effect Effects 0.000 description 1
- 238000009295 crossflow filtration Methods 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 238000005238 degreasing Methods 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 230000008034 disappearance Effects 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 238000012137 double-staining Methods 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 206010013663 drug dependence Diseases 0.000 description 1
- 230000037336 dry skin Effects 0.000 description 1
- 230000000547 effect on apoptosis Effects 0.000 description 1
- 230000002900 effect on cell Effects 0.000 description 1
- 230000009982 effect on human Effects 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 230000007071 enzymatic hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006047 enzymatic hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 1
- 210000003608 fece Anatomy 0.000 description 1
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 1
- 108010007119 flavourzyme Proteins 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 210000001061 forehead Anatomy 0.000 description 1
- 230000006870 function Effects 0.000 description 1
- 210000003128 head Anatomy 0.000 description 1
- 235000003642 hunger Nutrition 0.000 description 1
- 239000000413 hydrolysate Substances 0.000 description 1
- 230000003301 hydrolyzing effect Effects 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 206010022437 insomnia Diseases 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 230000006651 lactation Effects 0.000 description 1
- 239000010985 leather Substances 0.000 description 1
- 238000002514 liquid chromatography mass spectrum Methods 0.000 description 1
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 description 1
- 210000003563 lymphoid tissue Anatomy 0.000 description 1
- 210000004373 mandible Anatomy 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 230000004089 microcirculation Effects 0.000 description 1
- 230000003020 moisturizing effect Effects 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 1
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 1
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 1
- 108091011000 phospholipid binding proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000036213 phospholipid binding proteins Human genes 0.000 description 1
- 230000019612 pigmentation Effects 0.000 description 1
- 230000035935 pregnancy Effects 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- 208000020016 psychiatric disease Diseases 0.000 description 1
- 238000012797 qualification Methods 0.000 description 1
- 238000004451 qualitative analysis Methods 0.000 description 1
- 238000007670 refining Methods 0.000 description 1
- 102220013334 rs368367224 Human genes 0.000 description 1
- 238000007665 sagging Methods 0.000 description 1
- 230000035807 sensation Effects 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 208000017520 skin disease Diseases 0.000 description 1
- 230000036548 skin texture Effects 0.000 description 1
- 238000003307 slaughter Methods 0.000 description 1
- 238000001694 spray drying Methods 0.000 description 1
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 1
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 208000011117 substance-related disease Diseases 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 1
- 238000012353 t test Methods 0.000 description 1
- 238000004885 tandem mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 1
- 230000003867 tiredness Effects 0.000 description 1
- 208000016255 tiredness Diseases 0.000 description 1
- 208000007089 vaccinia Diseases 0.000 description 1
- 229940054967 vanquish Drugs 0.000 description 1
- 238000012795 verification Methods 0.000 description 1
- 210000001835 viscera Anatomy 0.000 description 1
- 230000002087 whitening effect Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/39—Connective tissue peptides, e.g. collagen, elastin, laminin, fibronectin, vitronectin, cold insoluble globulin [CIG]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
- A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
- A61K8/30—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds
- A61K8/64—Proteins; Peptides; Derivatives or degradation products thereof
- A61K8/65—Collagen; Gelatin; Keratin; Derivatives or degradation products thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
- A61P17/16—Emollients or protectives, e.g. against radiation
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
- A61P17/18—Antioxidants, e.g. antiradicals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
- A61Q17/00—Barrier preparations; Preparations brought into direct contact with the skin for affording protection against external influences, e.g. sunlight, X-rays or other harmful rays, corrosive materials, bacteria or insect stings
- A61Q17/04—Topical preparations for affording protection against sunlight or other radiation; Topical sun tanning preparations
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
- A61Q19/00—Preparations for care of the skin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
- A61Q19/00—Preparations for care of the skin
- A61Q19/02—Preparations for care of the skin for chemically bleaching or whitening the skin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
- A61Q19/00—Preparations for care of the skin
- A61Q19/08—Anti-ageing preparations
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/78—Connective tissue peptides, e.g. collagen, elastin, laminin, fibronectin, vitronectin or cold insoluble globulin [CIG]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P21/00—Preparation of peptides or proteins
- C12P21/06—Preparation of peptides or proteins produced by the hydrolysis of a peptide bond, e.g. hydrolysate products
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2800/00—Properties of cosmetic compositions or active ingredients thereof or formulation aids used therein and process related aspects
- A61K2800/80—Process related aspects concerning the preparation of the cosmetic composition or the storage or application thereof
- A61K2800/92—Oral administration
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Zoology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Gerontology & Geriatric Medicine (AREA)
- Birds (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
本发明提供一种III型小分子胶原蛋白肽在改善面部肤质中的应用，属于美容保健技术领域。本发明所述的应用包括改善面部皮肤的毛孔、纹理、紫质、水份、油脂、色斑、红血丝或皮肤弹性；所述的III型小分子胶原蛋白肽通过使用特定组合酶对畜禽皮进行酶解后制备。本发明的III型小分子胶原蛋白肽在面部存在的多种肤质问题中，能够起到正向作用，如对面部皮肤的毛孔、纹理、紫质、水份、油脂、色斑、红血丝或皮肤弹性等问题，有明显的改善作用，在人群实验中得到了验证。此外在细胞增殖和细胞凋亡实验中，本发明的III型小分子胶原蛋白肽也表现出比现有常见I型胶原蛋白肽更好的效果。
Description
技术领域
本发明属于美容保健技术领域，具体涉及一种III型小分子胶原蛋白肽在改善面部肤质中的应用。
背景技术
皮肤问题可能有很多种，常见的面部皮肤问题包括：痘痘、黑头、暗沉、细纹/皱纹、色斑/色素沉着、松弛、粗糙、干燥、敏感等。对于面部问题的解决，一方面可以通过外用产品的作用，另一方面可以通过口服产品进行调节。
胶原蛋白肽是一类以富含胶原蛋白的新鲜动物组织（包括皮、骨、筋、腱、鳞等）为原料，经过提取、水解、精制生产的短肽，相对分子质量一般低于10000Da。胶原蛋白肽在皮肤美容方面对肌肤美白、延缓衰老，改善体内微循环、祛斑祛皱、收缩毛孔、补水保湿等有一定的效果。大多用于有美容护肤需求的女性、病后身体虚弱期以及免疫力低下等人群。
胶原蛋白肽根据来源可以分为Ⅰ型、Ⅱ型和III型，分别来自Ⅰ型、Ⅱ型和III型胶原蛋白。Ⅰ型胶原蛋白是胶原蛋白家族中最常见的类型之一。它是由三个多肽链组成的，形成了著名的三螺旋结构。这种三螺旋结构不仅赋予了一型胶原蛋白极高的强度和稳定性，还使得它在维持皮肤、骨骼、肌肉和肌腱等组织的健康方面发挥着重要作用。Ⅱ型是胶原蛋白家族中的另一种重要类型，主要存在于软骨、眼球和椎间盘等关节组织中。与Ⅰ型胶原蛋白相似，Ⅱ型胶原蛋白也由三个多肽链组成，但是它们形成了正交排列的纤维状结构。III型胶原蛋白是胶原蛋白家族中的又一种重要类型，主要存在于血管、淋巴组织和某些内脏器官中。在结构上，III型胶原蛋白同样由三个多肽链组成，但形成了一种网状结构。
三种不同来源的胶原蛋白肽所发挥的作用也不尽相同。在美容产品领域，市场化销售的产品主要是Ⅰ型胶原蛋白肽和Ⅱ型胶原蛋白肽，对于III型胶原蛋白肽产品的开发较少，普遍认为其开发价值不如Ⅰ型胶原蛋白肽和Ⅱ型胶原蛋白肽，且存在一定开发难度。
发明内容
为了解决上述问题，本发明提供了一种III型小分子胶原蛋白肽在改善面部肤质中的应用，对现有技术进行了进一步改进和完善。
本发明提供了一种小分子胶原蛋白肽在改善面部肤质中的应用。
所述的应用包括改善面部皮肤的毛孔、纹理、紫质、水份、油脂、色斑、红血丝或皮肤弹性；
所述的小分子胶原蛋白肽为Ⅲ型胶原蛋白肽（Ⅲ型小分子胶原蛋白肽），其制备方法包括：对畜禽皮使用组合酶酶解，所述的组合酶由以下酶组成：地衣芽孢杆菌来源的蛋白酶、枯草芽孢杆菌来源的蛋白酶和黑曲霉来源的蛋白酶；以重量计，所述的地衣芽孢杆菌来源的蛋白酶：枯草芽孢杆菌来源的蛋白酶：黑曲霉来源的蛋白酶为20-80：60-80：1.5-3。
所述的Ⅲ型小分子胶原蛋白肽制备方法所得产物中含有GEXGYP序列，相对分子量小于10000Da比例≥95%、平均分子量为≤3000Da、所述的Ⅲ型小分子胶原蛋白肽含量＞10%。
本发明所涉及的改善毛孔一般指缩小毛孔；本发明所涉及的改善纹理一般指使纹理趋向消失；本发明所涉及的改善紫质一般指减少皮肤表面紫质；本发明所涉及的改善水份一般指增加皮肤水分含量；本发明所涉及的改善油脂一般指平衡油脂分泌，包括增加或减少油脂分泌；本发明所涉及的改善色斑一般指色斑颜色变淡或消失；本发明所涉及的改善红血丝一般指减少皮肤表明红血丝或红血丝消失；本发明所涉及的改善皮肤弹性一般指增加皮肤弹性。
优选地，所述Ⅲ型小分子胶原蛋白肽制备方法所得产物分子量集中在500-3000Da，相对分子量小于10000Da的比例≥95%。本发明中的分子量相关参数可以参照GB/T22729的方法进行测定。
所述的小分子胶原蛋白肽通过口服实现面部肤质的改善，所述的纹理包括皱纹、细纹；所述的色斑包括紫外线色斑、棕色斑。
在一些具体实施例中，所述的Ⅲ型小分子胶原蛋白肽可以和I型胶原蛋白肽或其他胶原蛋白肽共同应用/联合应用。
所述的I型胶原蛋白肽可以是现有技术中已经公开或未公开的类型，本领域技术人员在本发明公开的基础上，可以选择不同来源的I型胶原蛋白肽对本发明的技术方案进行进一步优化，其优化后的技术方案也在本发明保护范围内。
优选地，所述的Ⅲ型小分子胶原蛋白肽制备方法所得产物的单次单人用量为0.5-6g。
优选地，所述的应用为制备口服胶原蛋白肽产品。
优选地，所述的改善面部肤质为改善光老化引起的皮肤问题。
进一步优选地所述的改善面部肤质为改善UVB引起的皮肤问题。
具体地，所述的Ⅲ型小分子胶原蛋白肽制备方法包括：
（1）畜禽皮前处理，依次包括：
物料与水的质量比为1：4-5进行第一次水洗；
1%-2%氯化钠溶液浸泡1-2h；
2%-3%氢氧化钠溶液浸泡2-3h；
物料与纯化水的质量比为1：4-5第二次水洗，水洗过程中搅拌；
所述的第二次水洗中调节pH为6-7和电导率为230-260us/cm；
（2）步骤（1）处理后畜禽皮使用组合酶酶解，酶解液过滤得清液；
（3）步骤（2）所得清液脱色、过滤、水交换至固形物为0、纳滤得高浓度溶液，所述的高浓度溶液为固形物30%-35%的溶液；
（4）步骤（3）所得高浓度溶液灭菌、干燥得粗粉；
（5）步骤（4）所得粗粉超微粉碎，过筛得成品，即所述III型小分子胶原蛋白肽。
具体地，步骤（2）中：
所述的组合酶由以下酶组成：地衣芽孢杆菌来源的蛋白酶、枯草芽孢杆菌来源的蛋白酶和黑曲霉来源的蛋白酶。
优选地，所述的地衣芽孢杆菌来源的蛋白酶选自：碱性蛋白酶；
所述枯草芽孢杆菌来源的蛋白酶选自：碱性蛋白酶或中性蛋白酶；
黑曲霉来源的蛋白酶选自风味蛋白酶。
优选地，以重量计，所述的地衣芽孢杆菌来源的蛋白酶：枯草芽孢杆菌来源的蛋白酶：黑曲霉来源的蛋白酶为20-80：60-80：1.5-3。
进一步优选地，以重量计，所述的地衣芽孢杆菌来源的蛋白酶：枯草芽孢杆菌来源的蛋白酶：黑曲霉来源的蛋白酶为20：60：1.5。
优选地，所述的组合酶的添加量为畜禽皮重量的0.815%-1.615%。
进一步优选地，所述的组合酶的添加量为畜禽皮重量的0.815%。
具体地，所述的酶解条件包括pH6-6.8，50-55℃酶解2-4h，升温至80-85℃，保温10-15min，降温至50-55℃。
在一些具体的实施例中，所述的步骤（2）可以包括：
将步骤（1）的物料（前处理后的畜禽皮）输送到提取罐中，加入5倍的低温纯化水（＜20℃），然后升温到70-80℃，保持20-40min，板换降温到50-60℃，调节pH6-7，分别加入地衣芽孢杆菌来源的蛋白酶：枯草芽孢杆菌来源的蛋白酶：黑曲霉来源的蛋白酶，酶解后酶解液经过滤筛，过滤掉残留毛发和杂质。
所述的过滤筛可以包括：
三角筛网：上缝隙1-3mm，下缝隙0.1-0.5mm；60-80目方形振动筛。
具体地，步骤（3）中：
所述的脱色可以是活性炭脱色，所述的活性炭为固形物干重3%-5%的活性炭。
所述的过滤为旋转错流膜过滤。
优选地，所述的旋转错流膜过滤采用的错流过滤膜为20-50nm，优选为30nm；过滤压力为0.2-0.3MPa，优选为0.2MPa。所述的过滤后溶液澄清透亮。
所述的水交换固形物使用50-70℃的水。
所述的纳滤目的在于去除钠离子，优选可以使用科式纳滤膜，所述的科式纳滤膜截留分子量优选为80-100KDa。纳滤压力为1.2-1.3MPa。
所述的高浓度溶液为固形物30%-35%的透亮的高浓度Ⅲ型胶原蛋白肽溶液。5%固形物电导率为450-560us/cm。
具体地，步骤（4）中：
所述的的灭菌为脉冲强光灭菌，干燥为真空带式干燥。
所述的脉冲强光灭菌流速600-800L/h，光照一次15-20J，闪照50-60次。
所述的真空带式干燥真空度-0.1MPa。
所述的真空带式干燥可以采用三段式加热，如：Ⅰ段温度70-80℃，Ⅱ段温度60-70℃，Ⅲ段温度40-60℃。进料速度可以是700-800L/h，喷枪喷嘴直径可以是1.6-2.0mm，受热时间总时间可以是60-80min，最终得到水分含量5%-7%的粗粉，如水分含量5.8%-6.3%的粗粉。所述的真空带式干燥中还可以包括过筛，如通过机器自带10-20目筛网。
具体地，步骤（5）中：
所述的超微粉碎冷却介质-10℃~0℃，粉碎时间：10-15min。
所述的过筛为过50-300目筛网，优选过50-80目筛网。
对于以上制备方法中各条件的范围值，本领域技术人员知晓，任意方式的组合均能够实现本发明的技术方案，并达到相同的技术效果。本领域技术人员可以根据以上条件进行任意组合以制备相应产品。
本发明制备的Ⅲ型小分子胶原蛋白肽可以选自以下任一：
（1）SEQ IN NO.1-7；
或（2）SEQ ID NO.4和SEQ ID NO.8；
或（3）SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.4；
或（4）SEQ ID NO.4；
或（5）SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.8和SEQ ID NO.6。
SEQ ID NO.1：GQpGDKGEGGApGVpGIAGPR；
SEQ ID NO.2：GERGEAGSpGIAGPK；
SEQ ID NO.3：GERGGpGGpGPQGPAGKN；
SEQ ID NO.4：GEAGSpGIAGPK；
SEQ ID NO.5：GEGGApGVpGIAGPR；
SEQ ID NO.6：GENGIpGENGApGPMGPR；
SEQ ID NO.7：GPAGANGLPGEKGppGER；
SEQ ID NO.8：GEGGAXGVXGIAGPR；
“p”表示羟脯氨酸（HYP）。
本发明的有益技术效果：
本发明提供了一种III型小分子胶原蛋白肽在改善面部肤质中的应用，在面部存在的多种肤质问题中，能够起到正向作用，如对面部皮肤的毛孔、纹理、紫质、水份、油脂、色斑、红血丝或皮肤弹性等问题，有明显的改善作用，在人群实验中得到了验证。此外在细胞增殖和细胞凋亡实验中，本发明的III型小分子胶原蛋白肽也表现出比现有常见I型胶原蛋白肽更好的效果。
附图说明
图1为受试组的皮肤整体肤质前后对比。
图2为受试组的皮肤紫外线色斑前后对比。
图3为受试组的皮肤紫质前后对比。
图4为受试组的棕色斑前后对比。
图1-图4中，左图均为试验前检测图，右图均为试验后检测图。图1-图4均为皮肤检测仪器直接导出，部分未明确细节不影响效果认定。
图5为实施例2中不同处理条件下的细胞增殖曲线。
图6为实施例2中流式细胞术评估胶原蛋白肽对UVB处理条件下细胞凋亡比例。
图7为对比例中不同处理条件下的细胞增殖曲线。
图8为对比例中流式细胞术评估胶原蛋白肽对UVB处理条件下细胞凋亡比例。
具体实施方式
下面结合具体实施例，对本发明作进一步详细的阐述，下述实施例不用于限制本发明，仅用于说明本发明。以下实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，下述实施例中所使用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
基础实施例III型小分子胶原蛋白肽的制备
通过本基础实施例制备本发明所需III型小分子胶原蛋白肽，并验证本发明所保护的应用方向。参照以下步骤制备：
1、70天屠宰新鲜带毛兔皮（国内正规屠宰场采购）1000kg，去掉头部和腿部，用工业剃毛机剃掉毛，去毛后的皮用切条机和切块机切成2cm*2cm的小块，用25℃自来水，物料（原始去毛皮的重量）（kg）：水（kg）=1：4，清洗一次，然后用25℃ 1.5%的氯化钠溶液浸泡1.5h，物料（kg）：食盐水（kg）=1：4，排水后用25℃的2%的氢氧化钠溶液浸泡3h，物料（kg）：氢氧化钠溶液（kg）=1：4，然后纯化水清洗5次，每次搅拌10min，搅拌电机20HZ，物料（kg）：水（kg）=1：5，清洗过程用6%的食品级盐酸调节pH，清洗结束电导率260us/cm，清洗水pH=6.53。
2、将步骤1的物料输送到提取罐中，加入4倍重量的低温纯化水，然后升温到80℃，保持30min，板换降温到55℃，调节pH6.8，分别加入去毛皮重量0.2%、0.6%、0.015%的市售地衣芽孢杆菌来源的蛋白酶（诺维信，Alcalase，2.4L FG）、枯草芽孢杆菌来源的蛋白酶（沧州夏盛酶生物技术有限公司，FDG-2202，酶活≥20万u/g）、黑曲霉来源的蛋白酶（沧州夏盛酶生物技术有限公司，FDG-2251，酶活≥5000u/g），酶解2h，然后升温到80℃，保温15min，再降温到55℃经过三角过滤筛（三角筛网上缝隙2mm+下缝隙0.5mm）+80目方形振动筛，过滤掉残留毛发和杂质，清液流入下道工序。
3、在上述清液中加入固形物干重3%的活性炭，脱色40min，然后过30nm错流过滤膜，过滤压力0.2MPa，过滤后得澄清透亮的Ⅲ型胶原蛋白肽溶液，过滤浓液用60℃水置换至固形物为0，将过滤后物料经二级截留分子量为100Da的科氏纳滤膜，去除钠离子且得到固形物35%的透亮的高浓度Ⅲ型胶原蛋白肽溶液（此时5%固形物电导率为450us/cm），纳滤过程压力1.2MPa。
4、将步骤3物料进入脉冲强光杀菌设备，流速800L/h，光照一次20J，闪照60次，输送至储罐，然后利用螺杆泵输送到真空带式干燥机，真空度-0.1MPa，三段式加热，Ⅰ段温度80℃，Ⅱ段温度60℃，Ⅲ段温度40℃，进料速度800L/h，喷枪喷嘴直径2.0mm，受热时间总时间60min，自带粉碎机装10目筛网，最终的到水分含量5.8%的粗粉。
5、将步骤4的粗粉利用超微粉碎进行再次破碎，冷却介质-10℃-0℃，粉碎时间：15min，粉碎后过65目筛网得到成品，即Ⅲ型胶原蛋白肽。
本发明中Ⅲ型小分子胶原蛋白肽的测定方法可以参照以下：
液相色谱-质谱为美国Thermo Fisher公司Vanquish液相和Orbitrap Exploris480质谱组成；数据采集与处理软件为Xcalibur4.4；
色谱条件：色谱柱：Peptide BEH C18 130Å；流动相：A-水（0.1 %甲酸）；B-60%乙腈（0.1%甲酸）；梯度：0-60min，5-40%B；60-85min，40-90%B；85-98min，90%B；98-100min，90-5%B；100-110min，5%B；流速：0.2mL/min；柱温：60℃；进样量：5µL。质谱条件：ESI电离；喷雾电压：4.5kV；壳气流速：60arb（约400kPa）；扫描范围（m/z）：400-2000；正离子监测模式；二级质谱扫描（MS/MS）均为数据依赖性扫描；二级质谱碰撞能量为35%。
以上基础实施例中地衣芽孢杆菌来源的蛋白酶：枯草芽孢杆菌来源的蛋白酶：黑曲霉来源的蛋白酶的用量比可以是20-80：60-80：1.5-3，组合酶的添加量为畜禽皮重量的0.815%-1.615%，本领域技术人员可以根据实际情况在比例范围内进行调节。以下实施例中以具体的产品作为示例进行效果验证，但不代表本发明保护的应用范围仅限于特定的产品。
实施例1III型小分子胶原蛋白肽在改善面部肤质中的应用效果（口服实验）
观察含有基础实施例制备Ⅲ型胶原蛋白肽的口服液改善女性面部肤质的有效性和安全性。
试验方法：随机双盲对照试验设计
受试人群：健康女性志愿者60名，年龄28-50岁，平均年龄（37.85±8.63）岁。
1、纳入标准
实验开始前，所有志愿者均签署知情同意书。
排除标准：
（1）：两个月内接受过面部美容治疗者；
（2）一个月内服用过与受试功能有关的药品和保健品者；
（3）妊娠期或哺乳期妇女；
（4）精神疾病患者、嗜酒、吸毒者；
（5）有系统性疾病或严重的皮肤病患者；
（6）有保健品过敏史及其他严重过敏史者。
（7）未按规定服用受试样品而无法判断疗效和安全性者。
2、受试产品与仪器
受试产品：含Ⅲ型胶原蛋白肽（Ⅲ型小分子胶原蛋白肽）口服液（50mL/支，每支含有3g Ⅲ型胶原蛋白肽，基质液为纯净水），仪器：Soft5.5皮肤检测仪（意大利），主要测试皮肤的水分和油脂；Visia数字皮肤分析仪（美国），主要测试皮肤皱纹、毛孔、纹理、资质、紫外线色斑、棕色斑、红血丝、水分、油脂等9项指标。
3、试验分组
随机分为受试组和对照组。受试组30例，口服含有Ⅲ型胶原蛋白低聚肽口服液，1支/d，共三个月；对照组30例，口服不含胶原低聚肽基质液，1支/d，50mL/支，共三个月；对两组志愿者在受试前、后进行问卷调查评分，用Visia数字化皮肤分析仪和Soft5.5皮肤检测仪检测面部皮肤。
用皮肤弹性测定仪测定皮肤弹性 Cutometer MPA580，德国CK公司。
4、测试条件和方法
控制室温22℃，湿度40%-50%，soft 5.5皮肤测试仪测试，60名受试者清洁面部，在测试前30min进入测试环境中安静待测。将检测仪的探头垂直置于额部、双面颊额及下颌部皮肤上，3-5s待测定数值稳定后仪器自动生成数值，共测试5次并取平均值。Visia数字皮肤分析仪测试：受试者首先清洁面部，15min后用Visia拍摄受试者面部图像，经仪器自动分析后得出各项指标的百分比值做数据统计。
皮肤弹性测定仪Cutometer MPA580检测面颊皮肤的弹性指标R2，测量3次取平均值，R2值是指无负压时皮肤的回弹量与有负压时的最大拉伸量之比，R2值越接近1，说明皮肤弹性越好。
5、有效性问卷调查
实验前、后，对两组志愿者进行问卷调查，采用自行设计调查表，内容包括：食欲下降、肠胃不适、便秘、疲倦感、记忆力减退、体力不足、失眠多梦、皮肤粗糙暗淡、皮肤敏感干燥、皮肤松弛下垂感等10个项目，每个项目采用5级评分制，即没有5分、很轻4分、中度3分、偏重2分、严重1分。
6、安全观察
30名受试者前、后进行血、尿、便及血生化指标检查，观察胶原蛋白肽口服液对人体的安全性。
7、统计学处理
所有统计分析均采用统计学软件SPSS1.8处理，计量资料用均数±标准差（x±s）描述，正态分布计量资料比较采用t检验，偏态分布计量资料比较采用Wilcoxon秩和检验；计数资料采用率表示，组间率的比较用x2检验。p＜0.05为差异有统计学意义。
8、仪器测试结果
两组志愿者试验前、后皮肤仪器检测结果见表1。
表1 口服液前后与对照组Visia及Spft5.5检测结果比较
*表示口服前后受试组组内对比；#表示治疗后受试组与对照组组间对比。检测数值为仪器导出，无单位，其含义表示数据优于同一地区同龄人的个体数，例如90表示比90个人都好。
口服口服液后，受试组的皮肤皱纹、毛孔、纹理、紫质（图3）、紫外线色斑（图2）、棕色斑（图4）、红血丝、水分、油脂均有明显的改善，皮肤的弹性也有明显的改善，与受试前和与对照组比较有显著性差异（P＜0.05）；面部整体肤质试验前、后有较明显的改善（图1）。对照组试验前、后皮肤各项指标无明显改善（P＞0.05）。
9、问卷调查结果
受试者问卷评分显示口服液口服后，10项指标均有不同程度的改善，口服前评分均值为20.69±4.95，口服后评分均值为31.84±5.91，差异比较统计学显著（P＜0.05 ）；30例对照组结果显示两次测试结果无统计学差异（P＞0.05）。受试组志愿者各项指标的改善，说明口服液可能对人体具有整体调节作用。
10、安全性观察
受试组口服口服液前后，血、尿、便常规及血生化检查结果均未见明显异常变化。30人中，6例饥饿感下降，3例大便次数增多，1-2次/天，无任何其它不适反应，全部受试者的正常工作及生活均未受到影响。提示口服液对人体健康无明显损害。
对比现有技术（周双琳,王海燕,岳丹霞,et al.小分子鱼胶原蛋白粉对改善女性面部肤质的疗效及安全性观察[J].实用皮肤病学杂志, 2011, 04(3):143-146.DOI:10.3969/j.issn.1674-1293.2011.03.005.）前期实验数据发现：服用Ⅰ型胶原蛋白肽受试者仅面部皮肤的细纹、毛孔、纹理、紫质、水份、油脂改善明显，但服用Ⅲ型胶原蛋白肽，不仅上述指标有所改善，而且受试者皮肤的紫外线色斑、棕色斑、红血丝都有明显改善，且对皮肤弹性也有明显的改善作用。
结论：口服含有Ⅲ型的口服液对皮肤有全面的改善作用，且具有较好的安全性和有效性。
实施例2III型小分子胶原蛋白肽在改善面部肤质中的应用效果（皮肤光老化）
通过细胞模型的细胞凋亡和细胞增殖作为皮肤光老化的衡量指标，验证基础实施例中制备的III型小分子胶原蛋白肽的效果。
1、CCK8评估UBV处理条件下不同多肽就细胞增殖的影响：
(1) 将处于对数生长期的HSF细胞（武汉普诺赛生命科技有限公司，Cat No:CP-H103，人真皮成纤维细胞）使用胰酶消化后铺至12孔板中，过夜培养至细胞汇合率为80%-90%；
(2) 按终浓度500 mg/L分别将Ⅰ型胶原蛋白肽和Ⅲ型胶原蛋白肽加入细胞上清，轻轻混匀后继续培养6h。
Ⅰ型胶原蛋白肽制备方法如下：利用牛皮为原料，使用千分之五的氢氧化钠溶液搅拌脱脂4h，然后清洗之中性后，粉碎成5*5cm的的小块之后备用；
酶解：利用0.022%-1%的碱性蛋白酶酶解，50-60℃，酶解3h；
静置分层：加入千分之五硅藻土静置分层；
棉饼过滤：过滤压力0.2MPa；
脱色：活性炭脱色，固形物干重5%的活性炭脱色，60-75℃，40min；
板框过滤：过滤压力小于0.4MPa，产品浊度＜5NTU；
纳滤：压力1.2-1.3MPa，纳滤至浓度15%-25%；
真空浓缩：真空度-0.08至-0.1，浓缩至40%-50%；
喷雾干燥：进风温度170-190℃，出风温度90-105℃，水分＜7%。
(3) 将细胞在200 mJ·cm-2的UVB照射下处理细胞；
(4) 在加入不同胶原蛋白肽处理后第1-5天分别收集细胞，加入10μL CCK8溶液（碧云天生物，C0038），避光孵育2小时；
(5) 测定450 nm吸光度，并根据吸光度计算细胞增殖曲线。
结果见图5，图5表明本发明的Ⅲ型胶原蛋白肽对细胞的增殖促进作用更好，培养5天时，不仅能够克服UVB的影响（相对于图5中的“处理”组），还能进一步促进增殖（相对于图5中的“未处理组”），优于Ⅰ型胶原蛋白肽。
2、细胞凋亡检测
采用成品试剂盒检测细胞凋亡，本实施例采用的试剂盒为：重庆市华雅干细胞技术有限公司，BD 556547，Annexin V-FITC/PI细胞凋亡双染试剂盒。
(1) 将处于对数生长期的HSF细胞使用胰酶消化后铺至12孔板中，过夜培养至细胞汇合率为80%-90%；
(2) 按终浓度500 mg/L分别将Ⅰ型胶原蛋白肽溶液或Ⅲ型胶原蛋白肽加入细胞上清，轻轻混匀后继续培养6 h。
(3) 将细胞在200 mJ·cm-2的UVB照射下处理细胞；
(4) 处理完成后继续培养24 h，用胰酶消化细胞，室温1500 rpm/min，离心5 min，收集细胞；
(5) 使用预冷PBS重悬细胞一次，1500 rpm/min，离心5 min洗涤细胞；
(6) 每管加入300μL 1×Binding Buffer（用于清除EDTA）悬浮细胞；
(7) 每管加入5μL Annexin V-FITC（磷脂结合蛋白），混匀细胞，室温避光染色20min；
(8) 每管加入5μL PI（碘化丙啶），室温避光染色5 min；
(9) 每管补加200μL 1×Binding Buffer，轻轻混匀后流式细胞仪进行检测。
细胞凋亡比例表示发生凋亡的细胞数量在细胞总数中的占比。
细胞凋亡检测结果见图6，结果表明：Ⅰ型胶原蛋白肽或Ⅲ型胶原蛋白肽对UVB造成的细胞凋亡均有缓解作用，本发明的Ⅲ型胶原蛋白肽效果优于现有的Ⅰ型胶原蛋白肽。
对比例
针对Ⅲ型胶原蛋白肽制备方法中地衣芽孢杆菌来源的蛋白酶、枯草芽孢杆菌来源的蛋白酶和黑曲霉来源的蛋白酶，设置以下对比例，对比例与基础实施例中的总酶量相同：
参照实施例2中的细胞增殖和细胞凋亡实验，验证对比例1-2的效果，结果如下：
（1）增殖曲线：
结果见图7，培养5天时，对比例1和对比例2相对于处理组分别提高了0.18、0.19吸光度，本发明的Ⅲ型小分子胶原蛋白肽相对于处理组提高了0.41吸光度；对比例1-2直到培养第五天与未处理组相当，且本发明的Ⅲ型胶原蛋白肽培养三天时，细胞增值效果已超过未处理的细胞。本发明的Ⅲ型小分子胶原蛋白肽与对比例相比，生产中采用的总酶量相同，实验中采用的产物用量也相同，而本发明的产品效果更好，表明三种不同来源的蛋白酶在制备Ⅲ型小分子胶原蛋白肽方面具有协同作用，在促细胞增殖上起到了更好的效果。
经定性分析，基础实施例中制备的Ⅲ型小分子胶原蛋白肽中包括SEQ ID NO.1-7所示的特征肽：而对比例1-2中的Ⅲ型小分子胶原蛋白肽中不含相应特定序列，推断该原因造成了效果差异。
（2）细胞凋亡比例：
结果如图8所示，图8为流式细胞仪统计的细胞凋亡比例结果。根据图8可知，对UVB造成的细胞凋亡，本发明的Ⅲ型小分子胶原蛋白肽相较于对比例1和对比例2具有更好的效果。在胶原蛋白肽生产过程中，采用的总酶量相同，实验中采用的产物用量也相同，而本发明的产品效果更好，表明三种不同来源的蛋白酶在制备Ⅲ型小分子胶原蛋白肽方面具有协同作用，使产品具有更好的抗UVB效果。
以上实施例仅用于说明本发明，不用于限制本发明，本领域技术人员在以上实施例基础上进行了常规手段的替代和优化，其所获得的技术方案也在本发明保护的范围内。
Claims (10)
1.一种Ⅲ型小分子胶原蛋白肽在制备改善面部肤质的产品中的应用，其特征在于，所述的应用包括改善面部皮肤的毛孔、纹理、紫质、水份、油脂、色斑、红血丝或皮肤弹性；
所述的Ⅲ型小分子胶原蛋白肽制备方法包括：对畜禽皮使用组合酶酶解；
所述的组合酶由以下酶组成：地衣芽孢杆菌来源的蛋白酶、枯草芽孢杆菌来源的蛋白酶和黑曲霉来源的蛋白酶；以重量计，所述的地衣芽孢杆菌来源的蛋白酶：枯草芽孢杆菌来源的蛋白酶：黑曲霉来源的蛋白酶的用量比为20-80：60-80：1.5-3；
所述的组合酶的添加量为畜禽皮重量的0.815%-1.615%；
所述的酶解条件包括pH6-6.8，50-55℃酶解2-4h，升温至80-85℃，保温10-15min，降温至50-55℃；
所述的Ⅲ型小分子胶原蛋白肽制备方法包括：
（1）畜禽皮前处理，依次包括：
物料与水的质量比为1：4-5进行第一次水洗；
1%-2%氯化钠溶液浸泡1-2h；
2%-3%氢氧化钠溶液浸泡2-3h；
物料与纯化水的质量比为1：4-5第二次水洗，水洗过程中搅拌；
所述的第二次水洗中调节pH为6-7和电导率为230-260us/cm；
（2）步骤（1）处理后畜禽皮使用组合酶酶解，酶解液过滤得清液；
（3）步骤（2）所得清液脱色、过滤、水交换至固形物为0、纳滤得高浓度溶液，所述的高浓度溶液为固形物30%-35%的溶液；
（4）步骤（3）所得高浓度溶液灭菌、干燥得粗粉；
（5）步骤（4）所得粗粉超微粉碎，过筛得成品，即所述III型小分子胶原蛋白肽；
所述的畜禽皮为70天新鲜兔皮。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的Ⅲ型小分子胶原蛋白肽制备方法所得产物中含有GEXGYP序列，相对分子量小于10000Da比例≥95%、平均分子量≤3000Da、所述的Ⅲ型小分子胶原蛋白肽含量＞10%。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述的Ⅲ型小分子胶原蛋白肽通过口服实现面部肤质的改善，所述的纹理包括皱纹；所述的色斑包括紫外斑、棕色斑。
4.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述的纹理包括细纹。
5.根据权利要求3或4所述的应用，其特征在于，所述的Ⅲ型小分子胶原蛋白肽制备方法所得产物的单次单人用量为0.5-6g。
6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述的应用为制备口服胶原蛋白肽产品。
7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述的Ⅲ型小分子胶原蛋白肽包括以下任一：
（1）SEQ ID NO.1-7；
或（2）SEQ ID NO.4和SEQ ID NO.8；
或（3）SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.4；
或（4）SEQ ID NO.4；
或（5）SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.8和SEQ ID NO.6。
8.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述改善面部肤质为改善正常皮肤。
9.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的改善面部肤质为改善光老化引起的皮肤问题。
10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述的改善面部肤质为改善UVB引起的皮肤问题。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202410182049.7A CN117982629B (zh) | 2024-02-19 | 2024-02-19 | 一种iii型小分子胶原蛋白肽在改善面部肤质中的应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202410182049.7A CN117982629B (zh) | 2024-02-19 | 2024-02-19 | 一种iii型小分子胶原蛋白肽在改善面部肤质中的应用 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN117982629A CN117982629A (zh) | 2024-05-07 |
| CN117982629B true CN117982629B (zh) | 2024-07-19 |
Family
ID=90897085
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202410182049.7A Active CN117982629B (zh) | 2024-02-19 | 2024-02-19 | 一种iii型小分子胶原蛋白肽在改善面部肤质中的应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN117982629B (zh) |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN116179634A (zh) * | 2023-04-27 | 2023-05-30 | 北京盛美诺生物技术有限公司 | 一种iii型胶原蛋白肽及其制备方法 |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP2970382B1 (en) * | 2013-03-13 | 2019-09-25 | Anteis SA | Peptides for skin rejuvenation and methods of using the same |
-
2024
- 2024-02-19 CN CN202410182049.7A patent/CN117982629B/zh active Active
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN116179634A (zh) * | 2023-04-27 | 2023-05-30 | 北京盛美诺生物技术有限公司 | 一种iii型胶原蛋白肽及其制备方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN117982629A (zh) | 2024-05-07 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US10869948B2 (en) | Composition of collagen peptide and elastin peptide, method of producing the same and use thereof | |
| CN115554220B (zh) | 一种具有护肤作用的微生物发酵原液及其制备方法与应用 | |
| CN112545955B (zh) | 一种抗衰修复组合物及其制备方法和应用 | |
| CN115006295B (zh) | 抗衰老组合物、制备方法及其在制备抗衰老化妆品中的应用 | |
| CN110613644A (zh) | 含大麻二酚纳米乳的护肤乳液及其制备方法 | |
| CN114287631A (zh) | 一种改善皮肤老化、敏感的小分子透明质酸钠、小分子透明质酸钠组合物及其应用 | |
| CN116327674A (zh) | 一种抗皱紧致微纳米精华乳及制备方法 | |
| CN111419760A (zh) | 一种黑老虎鲜叶提取液及其制备方法和应用 | |
| CN111658594A (zh) | 一种具有抗衰老功效的化妆品及其制备工艺 | |
| CN109549216B (zh) | 一种多重蛋白抗衰老美容组合物、制备方法及应用 | |
| CN108977488B (zh) | 皮肤密集修复用弹性蛋白及其制备方法 | |
| CN112190529B (zh) | 羊肠衣胶原蛋白粉及其在制备抗衰老护肤品中的应用 | |
| CN117982629B (zh) | 一种iii型小分子胶原蛋白肽在改善面部肤质中的应用 | |
| CN109453102A (zh) | 一种多肽面部紧致恢复水 | |
| CN112370369A (zh) | 一种抗皮肤衰老的海洋蛋白护肤液 | |
| CN112715815A (zh) | 一种鳕鱼小分子胶原蛋白肽固体饮料 | |
| CN116617138A (zh) | 一种含海洋蛋白的抗皱美白组合物及其制备方法和应用 | |
| CN114159341A (zh) | 一种冻干眼贴及其制备方法 | |
| CN103082169A (zh) | 复合胶原果粉及其制法 | |
| CN111450035A (zh) | 纯天然美白丰胸和防治乳腺疾病的胸膜及其制备方法 | |
| CN109453104A (zh) | 淡斑爽肤精华液及其制备工艺 | |
| CN111700818A (zh) | 一种祛皱抗衰人参多肽化妆水及其制备方法 | |
| CN105734102B (zh) | 胶原蛋白肽的制备方法 | |
| CN117736307B (zh) | 一种能够促进iii型和iv型胶原蛋白分泌的iii型小分子胶原蛋白肽及其制备方法 | |
| CN116747148B (zh) | 一种适用于敏感肌的抗衰化妆品组合物 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |