CN115006295B - 抗衰老组合物、制备方法及其在制备抗衰老化妆品中的应用 - Google Patents

抗衰老组合物、制备方法及其在制备抗衰老化妆品中的应用 Download PDF

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Abstract

本发明涉及化妆品领域，具体为抗衰老组合物、制备方法及其在制备抗衰老化妆品中的应用。采用酵素发酵人参、姜黄、雨生红球藻、红景天、燕麦、蓝莓产生的大量活性酶和抗氧化、肌肤修复物质，其和透明质酸、乙醇酸、羟丙基四氢吡喃三醇协同，即增强了透明质酸、乙醇酸、羟丙基四氢吡喃三醇修复皮肤细胞、淡化皱纹、增加皮肤弹性的能力，还增加了保湿、促进细胞代谢和抵制环境伤害的功能。最终得到的抗衰老组合物，能够促进衰老细胞代谢、有活力的新细胞的再生，提高肌肤活力，修复肌肤屏障，使得肌肤长效水润、有弹性。本发明更是以脂质体包裹发酵得到的酵素粉，避免其在空气中酶和抗氧化物失活，延长了产品的存储期限，更有利于产品的运输和使用。

Description

抗衰老组合物、制备方法及其在制备抗衰老化妆品中的应用
技术领域
本发明涉及化妆品领域，具体为抗衰老组合物、制备方法及其在制备抗衰老化妆品中的应用。
背景技术
随着人们生活水平的不断提高，人们对于皮肤的护养越来越重视，关于肌肤保养和抗衰老的化妆品的需求也日益增长。然而，皮肤老化是一个与皮肤超微结构和生物化学相关的复杂过程，其分为内源性老化和外源性老化。内源性老化是随着年龄增长而发生的老化过程，受每个人的遗传因、生活方式的因素、疾病和重力作用素影响。外源性老化主要受到外界环境因素的影响，如活性氧(ROS)、UV照射、自由基，这些因素对皮肤有积累作用并导致胶原及细胞基质降解。两种老化都会在皮肤水平和细胞水平上进行表现。
肌肤衰老一般表现在表皮层水合作用的下降、屏障功能减弱、氧化作用上升、DNA损伤、修复能力下降、免疫力下降、色素沉着、角质化等，甚至真皮表皮接界的皮肤老化，再到真皮层的炎症、微循环等都会带来肌肤的衰老。
现有的抗衰老化妆品中所采用的抗衰老组分往往只能处理其中1-2个问题，无法对肌肤进行全面的养护，例如CN 107007501 A公开了一种抗衰老组合物，所述抗衰老组合物包含人参提取物、木贼提取物和龙眼肉提取物，产物有明显的自由基清除功效。但是，其不具备加速衰老细胞代谢，修复受损细胞，促进皮肤对营养物质的吸收，修复肌肤屏障功能等作用。本发明认为，一款合格的抗衰老化妆品，应该首先具备加速细胞新陈代谢的作用，能够促进肌肤清除衰老细胞和新细胞的再生，接着能够修复受损细胞，减弱肌肤炎症，促进肌肤对营养物质的吸收，延缓内源性老化的速度；最后，修复肌肤屏障并增强肌肤对外源性老化的抵抗能力。由此，本发明认为开发一款全面有效的抗衰老组合物是十分重要的。
发明内容
针对现有技术存在的缺陷，本发明提供了一种抗衰老组合物、制备方法及其在制备抗衰老化妆品中的应用。
一种抗衰老组合物，按质量份计，由以下原料组成：0.1-0.5份二裂酵母发酵产物溶胞产物、0.1-0.5份乳酸菌发酵溶胞产物、0.1-0.5份乙酰基六肽-8、1-5份羟丙基四氢吡喃三醇、1-5份乙醇酸、1-3份透明质酸、4-6份1,2-丙二醇、1-3份甘油、8-12份植物酵素脂质体、4-6份水。
所述植物酵素脂质体的制备方法，包括以下步骤：
(1)按质量份计，将人参5-10份、姜黄5-10份、雨生红球藻2-5份、红景天3-5份、燕麦5-10份、蓝莓10-20份、水45-70份混合，以3000-6000r/min转速均质10-20min，得到植物均质液；
(2)按质量份计，向步骤(1)制得的植物均质液中加入0.05-0.1份酶制剂，在30-40℃下、以100-200r/min转速搅拌10-20min后，静置酶解3-5h，得到酶解物；
(3)按质量份计，向步骤(2)制得的酶解物中加入0.05-0.15份发酵菌、4-5份蜂蜜，以100-200r/min转速搅拌5-10min，然后在20-30℃无菌环境下发酵7-12天，得到发酵酵素；
(4)用纱布对步骤(3)制备得到的发酵酵素进行一次过滤，纱布孔径150-200目，得到滤液，接着，采用D101大孔吸附树脂对滤液进行纯化，得到二次滤液；然后对二次滤液进行浓缩得到酵素浓浆；采用巴氏杀菌法将所述酵素浓浆加热至62-65℃，恒温25-35min进行杀菌处理，得到酵素浓浆，最后，经冷冻干燥，得到酵素粉；
(5)按质量份计，将10-15份蛋黄卵磷脂、5-7份胆固醇、3-5份司盘80加入25-35份无水乙醇中混合均匀，再通过旋蒸法在25-35℃下去除无水乙醇，然后加入2-4份吐温80、2-4份司盘80、5-7份酵素粉和15-25份无水乙醇、30-50份pH＝7的磷酸缓冲液，最后，超声乳化5-10min，得到植物酵素脂质体乳液；
(6)按质量份计，向90-100份物酵素脂质体乳液中加入4-6份海藻糖，以60-100r/min转速搅拌10-20min，然后经冷冻干燥，得到所述植物酵素脂质体。
所述酶制剂为纤维素酶、半纤维素酶中的一种或两种混合物；优选的，所述酶制剂由纤维素酶、半纤维素酶按质量比(1-2)：(1-3)混合而成。
所述发酵菌为纳豆芽孢杆菌、转化人参皂苷鞘氨醇单胞菌中的一种或两种混合物；优选的，所述发酵菌由纳豆芽孢杆菌、转化人参皂苷鞘氨醇单胞菌按质量比(1-2)：(1-2)混合而成。
步骤(4)中所述浓缩的条件为：温度为46-50℃，真空度为-0.04-(-0.08)MPa，浓缩至原体积的1/10-1/3。
步骤(4)中所述D101大孔吸附树脂(湿态)的质量为滤液质量的3-4倍，树脂柱径高比为1：6-7，上样速度为0.5-1倍柱体积/h；去杂用2-4倍柱体积水以1-2倍柱体积/h的速度洗；洗脱用3-5倍柱体积的75-85wt％乙醇水溶液以1-2倍柱体积/h的速度进行。
步骤(5)中所述超声的条件为：功率为150-160W，频率为30-40KHz。
进一步的，本发明提供了一种抗衰老组合物的制备方法，包括以下步骤：按质量份计，将1-5份羟丙基四氢吡喃三醇、1-3份乙醇酸、3-5份透明质酸、2-4份聚甘油-2异硬脂酸酯、3-5份鲸蜡硬脂醇乙基己酸酯、4-8份16/18醇、4-6份1,2-丙二醇、1-3份甘油、0.1-1份羟乙基纤维素、8-12份植物酵素脂质体、1-3份水混合，并以100-200r/min转速搅拌10-20min，得到所述抗衰老组合物。
再进一步的，本发明还提供了一种具有抗衰老作用的化妆品，该化妆品包含上述抗衰老组合物。化妆品的种类如上所述，可以是化妆水、精华液、乳液、膏霜、面膜等。
本发明首先以羟丙基四氢吡喃三醇、乙醇酸、透明质酸、植物酵素脂质体作为抗衰老物质，以聚甘油-2异硬脂酸酯、鲸蜡硬脂醇乙基己酸酯、甘油为保湿剂，以16/18醇、1,2-丙二醇、水为基质，以羟乙基纤维素为乳化剂，得到了具有抗衰老功能的组合物。
其中，羟丙基四氢吡喃三醇是一种具有抗衰老活性物的木糖衍生物，能够激活粘多糖和氨基葡聚糖的合成，使肌肤更强韧有弹性，改善颈部细纹，预防衰老。我们皮肤的细胞外基质间存在大量的粘多糖，大部分都是由糖醛酸和氨碁糖组成的糖类聚合物，而这些粘多糖，对皮肤起到了非常重要的作用，因为粘多糖能吸湿水分，起到防止肌肤水分散失的作用。同时，由于粘多糖吸收了大量的水分，能够形成一个可以想象成由水组成的胶状体的结构。这些蛋白质粘多糖的分子结构的吸水能力，使得基质网状结构更加有弹性从而有助于提高细胞的紧致性，増强肌肤的弹性。氨基葡聚糖是细胞外基质的主要成分，其中含有的透明质酸是氨基葡聚糖的主要成分之一。透明质酸吸水储水能力强，注入真皮层，可以达到填充及水嫩肌肤的效果，皮肤饱满有弹性。透明质酸也常用填充皮肤的凹陷部位，包括皱纹。再从皮肤结构来说GAGS，皮肤的真皮层主要有胶原蛋白、弹性蛋白、细胞外基质(含GAGs)。因此，羟丙基四氢吡喃三醇具有优异的皮肤的补水、保湿和修复功能。乙醇酸具有优良的抑菌性，还能够促进皮肤细胞的粘附与增殖以及促进成纤维细胞中胶原蛋白的合成；透明质酸更是经常在化妆品中使用，可保持皮肤滋润光滑、细腻柔嫩、富有弹性，具有防皱、抗皱、美容保健和恢复皮肤生理功能的作用。透明质酸、乙醇酸和羟丙基四氢吡喃三醇协同，能够大幅促进皮肤对于透明质酸的吸收能力，修复皮肤受损细胞、淡化皱纹、增加皮肤弹性。
进一步的，本发明还自制了一种植物酵素脂质体，其采用人参、姜黄、雨生红球藻、红景天、燕麦、蓝莓作为发酵的主要原料。人参(Panax ginseng C.A.Meyer)中的人参皂苷能增加人皮肤成纤维细胞中氨基葡聚糖的生成量，同时对皮肤细胞的再生有激活作用，限制了由于皮肤毛细血管血液中胆固醇的增高而产生的动脉硬化，从而防止血液循环的衰退，增进了皮肤毛细血管的血液循环，强化细胞活力以及补充真皮营养的供给。人参皂苷中具有收敛作用的成份较多，对皮肤有收缩效果，并能调节真皮水份平衡，防止皮肤脱水，又可抑止黑色素的产生，使皮肤变得光滑、柔嫩、洁白。姜黄素是姜黄(Curcuma longa L.)中提取的一种植物多酚，也是姜黄发挥药理作用最重要的活性成分，其极强的抗炎、抗氧化、清除氧自由基、抗人类免疫缺陷病毒极其适合用作皮肤保养，而且无明显的毒副作用。蓝莓中富含花青素，天然的蓝莓花青素是最有效的抗氧化剂和雨生红球藻中的虾青素配合，能够极大的提高皮肤的抗氧化能力。红景天(Rhodiola rosea L.)是一种具有很强抗衰老作用的植物或中草药红景天素是其中的主要药效成分，红景天对真皮成纤维，细胞具有刺激作用，能促进纤维细胞分裂及其合成和分泌胶原蛋白，同时也刺激细胞分泌胶原酶，使原有的胶原分解，胶原蛋白在细胞外组成胶原纤维，所以红景天可以使胶原纤维的量增加，红景天与鹿血、人参组成外用制剂还可使皮肤中胶原含量增加，胶原间老化性架桥减少，使皮肤细腻光滑有弹性。
本发明以酶解发酵的手段提取人参、姜黄、雨生红球藻、红景天、燕麦、蓝莓中的人参皂苷、姜黄素、花青素、虾青素、红景天甙等对人体肌肤有益的成分。本发明首先采用均质的手段破坏部分易被破坏的植物细胞，加速其内部物质溶出，同时，混合均匀，有利于发酵。其次，本发明进一步对均质产物进行酶解，采用纤维素酶和半纤维素酶混合酶解的方式，破坏植物的细胞壁，并分解成多糖，为接下来的发酵过程提供碳水化合物，并进一步缩短发酵时间。接着，本发明采用转化人参皂苷鞘氨醇单胞菌和纳豆芽孢杆菌协同发酵，转化人参皂苷鞘氨醇单胞菌能够把人参主皂苷转化为人参稀有皂苷，提升人参皂苷的功效，同时，其还能够产生大量的辅酶Q10，辅酶Q10是一种天然抗氧化剂和细胞代谢激活剂，能保护胶原蛋白、维持皮肤弹性、使皮肤持久保湿，同时抵制环境的破坏和光老化。而纳豆芽孢杆菌通过吞噬植物蛋白来繁殖的时候，产生出的无数酵素纳豆激酶和维生素K，还有大量的氨基酸，有利于皮肤细胞的修复。二者协同，发酵产物能够提高皮肤对营养物质的吸收能力，促进皮肤细胞的代谢和修复，还能抵制环境的破坏和光老化。
同时，酵素发酵产生的大量活性酶能够将皮肤中的老化细胞消化分解，加速其正常的脱落过程。其作用比果酸温和有效，既可清洁皮肤，去除油脂，消除青春痘，淡化皱纹，也能彻底改善肌肤状况，使其紧实、细致、有光泽。人参、姜黄、雨生红球藻、红景天、燕麦、蓝莓的溶出物具有极强的保湿、抵制环境伤害和皮肤修复功能，其和透明质酸、乙醇酸、羟丙基四氢吡喃三醇协同，即增强了透明质酸、乙醇酸、羟丙基四氢吡喃三醇修复皮肤细胞、淡化皱纹、增加皮肤弹性的能力，还增加了保湿、促进细胞代谢和抵制环境伤害的功能。最终得到的抗衰老组合物，能够促进衰老细胞代谢、有活力的新细胞的再生，提高肌肤活力，修复肌肤屏障，使得肌肤长效水润、有弹性。本发明更是以脂质体包裹发酵得到的酵素粉，避免其在空气中酶和抗氧化物失活，延长了产品的存储期限，更有利于产品的运输和使用。
最后，本发明为了进一步增强产品的抗衰老效果，还向其中添加了二裂酵母发酵产物溶胞产物、乳酸菌发酵溶胞产物、乙酰基六肽-8配合本发明制得的植物酵素脂质体，以达到更佳的使用效果。其中，二裂酵母发酵产物溶胞产物和发酵产生的辅酶Q10效果相近，二裂酵母发酵产物溶胞产物促进紫外线损伤细胞的DNA修复，从基因层面延缓细胞的老化衰亡；乳酸菌发酵溶胞产物和发酵产生的酵素酶效果相近，乳酸菌发酵溶胞产物促进表皮角质层的更新速度，一方面促进老化角质脱落，一方面促进角质形成细胞生成速度，使角质层的厚度变厚，质量变好，呈现更年轻的皮肤外观和皮肤更新周期；乙酰基六肽-8和发酵所用的植物中功效性物质效果相近，乙酰基六肽-8则具有类肉毒素的功效，减弱面部肌肉的收缩，缓解产生表情纹和细纹。只需少量的二裂酵母发酵产物溶胞产物、乳酸菌发酵溶胞产物、乙酰基六肽-8添加，便能起到很好的抗衰老效果，还能够促进肌肤对有益成分的吸收。由于二裂酵母发酵产物溶胞产物、乳酸菌发酵溶胞产物、乙酰基六肽-8较为昂贵的价格和生产工序的复杂，因此，本发明制得的植物酵素脂质体能够很好的替代这三种抗衰老物质，起到扩大生产、降低成本的作用。
本发明有益效果：
1.透明质酸、乙醇酸和羟丙基四氢吡喃三醇协同，能够大幅促进皮肤对于透明质酸的吸收能力，修复皮肤受损细胞、淡化皱纹、增加皮肤弹性。
2.以人参、姜黄、雨生红球藻、红景天、燕麦、蓝莓作为发酵的主要原料，采用均质、酶解、发酵三步法提高细胞溶出率，增加了提取物的浓度，缩短了发酵时间。
3.转化人参皂苷鞘氨醇单胞菌和纳豆芽孢杆菌协同发酵，发酵产物能够提高皮肤对营养物质的吸收能力，促进皮肤细胞的代谢和修复，还能抵制环境的破坏和光老化。
4.人参、姜黄、雨生红球藻、红景天、燕麦、蓝莓的溶出物具有极强的保湿、抵制环境伤害和皮肤修复功能，其和透明质酸、乙醇酸、羟丙基四氢吡喃三醇协同，即增强了透明质酸、乙醇酸、羟丙基四氢吡喃三醇修复皮肤细胞、淡化皱纹、增加皮肤弹性的能力，还增加了保湿、促进细胞代谢和抵制环境伤害的功能。最终得到的抗衰老组合物，能够促进衰老细胞代谢、有活力的新细胞的再生，提高肌肤活力，修复肌肤屏障，使得肌肤长效水润、有弹性。
5.本发明更是以脂质体包裹发酵得到的酵素粉，避免其在空气中酶和抗氧化物失活，延长了产品的存储期限，更有利于产品的运输和使用。
具体实施方式
二裂酵母发酵产物溶胞产物，CAS号：96507-89-0，采购自德国CLR公司(Chemisches Laboratorium Dr.Kurt Richter Gmbh)。
乳酸菌发酵溶胞产物，采购自德国CLR公司(Chemisches Laboratorium Dr.KurtRichter Gmbh)。
乙酰基六肽-8，CAS号：616204-22-9，南京莱昂生物科技有限公司。
羟丙基四氢吡喃三醇，货号：202106663213，山东穗华生物科技有限公司。
乙醇酸，货号：gcs001，西安康诺化工有限公司。
透明质酸，货号：0002，武汉普洛夫生物科技有限公司。
聚甘油-2异硬脂酸酯，CAS号：67938-21-8，货号：JXY856，武汉江心宇生物科技有限公司。
鲸蜡硬脂醇乙基己酸酯，型号：yc，湖北远成赛创科技有限公司。
16/18醇，型号：C1618，苏州源泰润化工有限公司。
羟乙基纤维素，货号：HBWS-1339，湖北威德利化学科技有限公司。
人参、姜黄、红景天，采购自亳州市仁和中药材批发商行。
雨生红球藻，Haematococcus pluvialis，货号：BH0615，西安佰斯特生物科技有限公司。
燕麦，货号：03，莒南县厚德食品有限公司。
蓝莓，采购自云南优莓农业科技有限公司。
蛋黄卵磷脂，货号：Y619，武汉远城科技发展有限公司。
胆固醇，货号：S11040，上海源叶生物科技有限公司。
司盘80，货号：S15052，上海源叶生物科技有限公司。
吐温80，货号：S15020，上海源叶生物科技有限公司。
海藻糖，货号：S11052，上海源叶生物科技有限公司。
纤维素酶，酶活性：200000u/g，泰安信得利生物工程有限公司。
半纤维素酶，酶活性：50000u/g，北京夏盛生物科技开发有限公司。
D101大孔吸附树脂，货号：HS91246，上海户实医药科技有限公司。
转化人参皂苷鞘氨醇单胞菌，Sphingomonas ginsenosidimutans，菌株编号：CICC10895，采购自中国工业微生物菌种保藏管理中心。
纳豆芽孢杆菌，Bacillus natto，菌株编号：ACCC 19833，采购自中国农业微生物菌种保藏管理中心。
实施例1
一种抗衰老组合物的制备方法，包括以下步骤：按质量份计，将0.4份二裂酵母发酵产物溶胞产物、0.3份乳酸菌发酵溶胞产物、0.2份乙酰基六肽-8、4份羟丙基四氢吡喃三醇、2份乙醇酸、4份透明质酸、5份1,2-丙二醇、2份甘油、10份植物酵素、5份水混合，并以180r/min转速搅拌15min，得到所述抗衰老组合物。
所述植物酵素的制备方法，包括以下步骤：
(1)按质量份计，将人参8份、姜黄8份、雨生红球藻3份、红景天4份、燕麦9份、蓝莓18份、水50份混合，以4000r/min转速均质15min，得到植物均质液；
(2)按质量份计，向步骤(1)制得的植物均质液中加入0.1份发酵菌、5份蜂蜜混合，以180r/min转速搅拌8min，然后在25℃无菌环境下发酵7天，得到发酵酵素；
(3)用纱布对步骤(2)制备得到的发酵酵素进行一次过滤，纱布孔径200目，得到滤液，接着，采用D101大孔吸附树脂对滤液进行纯化，得到二次滤液；然后对二次滤液进行浓缩得到酵素浓浆；采用巴氏杀菌法将所述酵素浓浆加热至65℃，恒温30min进行杀菌处理，得到酵素浓浆，最后，经冷冻干燥，得到酵素粉。
所述发酵菌由纳豆芽孢杆菌、转化人参皂苷鞘氨醇单胞菌按质量比1：1混合而成。
步骤(3)中所述浓缩的条件为：温度为48℃，真空度为-0.06MPa，浓缩至原体积的1/5。
步骤(3)所述D101大孔吸附树脂(湿态)的质量为滤液质量的3倍，树脂柱径高比为1：6，上样速度为0.5倍柱体积/h；去杂用3倍柱体积水以1.5倍柱体积/h的速度洗；洗脱用4倍柱体积的80wt％乙醇水溶液以1倍柱体积/h的速度进行。
实施例2
一种抗衰老组合物的制备方法，包括以下步骤：按质量份计，将0.4份二裂酵母发酵产物溶胞产物、0.3份乳酸菌发酵溶胞产物、0.2份乙酰基六肽-8、4份羟丙基四氢吡喃三醇、2份乙醇酸、4份透明质酸、5份1,2-丙二醇、2份甘油、10份植物酵素、5份水混合，并以180r/min转速搅拌15min，得到所述抗衰老组合物。
所述植物酵素的制备方法，包括以下步骤：
(1)按质量份计，将人参8份、姜黄8份、雨生红球藻3份、红景天4份、燕麦9份、蓝莓18份、水50份混合，以4000r/min转速均质15min，得到植物均质液；
(2)按质量份计，向步骤(1)制得的植物均质液中加入0.07份酶制剂，在35℃下、以180r/min转速搅拌15min后，静置酶解4h，得到酶解物；
(3)按质量份计，向步骤(2)制得的酶解物中加入0.1份发酵菌、5份蜂蜜，以180r/min转速搅拌8min，然后在25℃无菌环境下发酵7天，得到发酵酵素；
(4)用纱布对步骤(3)制备得到的发酵酵素进行一次过滤，纱布孔径200目，得到滤液，接着，采用D101大孔吸附树脂对滤液进行纯化，得到二次滤液；然后对二次滤液进行浓缩得到酵素浓浆；采用巴氏杀菌法将所述酵素浓浆加热至65℃，恒温30min进行杀菌处理，得到酵素浓浆，最后，经冷冻干燥，得到所述植物酵素。
所述酶制剂由纤维素酶、半纤维素酶按质量比1：2混合而成。
所述发酵菌由纳豆芽孢杆菌、转化人参皂苷鞘氨醇单胞菌按质量比1：1混合而成。
步骤(4)中所述浓缩的条件为：温度为48℃，真空度为-0.06MPa，浓缩至原体积的1/5。
步骤(4)所述D101大孔吸附树脂(湿态)的质量为滤液质量的3倍，树脂柱径高比为1：6，上样速度为0.5倍柱体积/h；去杂用3倍柱体积水以1.5倍柱体积/h的速度洗；洗脱用4倍柱体积的80wt％乙醇水溶液以1倍柱体积/h的速度进行。
实施例3
一种抗衰老组合物的制备方法，包括以下步骤：按质量份计，将0.4份二裂酵母发酵产物溶胞产物、0.3份乳酸菌发酵溶胞产物、0.2份乙酰基六肽-8、4份羟丙基四氢吡喃三醇、2份乙醇酸、4份透明质酸、5份1,2-丙二醇、2份甘油、10份植物酵素脂质体、5份水混合，并以180r/min转速搅拌15min，得到所述抗衰老组合物。
所述植物酵素脂质体的制备方法，包括以下步骤：
(1)按质量份计，将人参8份、姜黄8份、雨生红球藻3份、红景天4份、燕麦9份、蓝莓18份、水50份混合，以4000r/min转速均质15min，得到植物均质液；
(2)按质量份计，向步骤(1)制得的植物均质液中加入0.07份酶制剂，在35℃下、以180r/min转速搅拌15min后，静置酶解4h，得到酶解物；
(3)按质量份计，向步骤(2)制得的酶解物中加入0.1份发酵菌、5份蜂蜜，以180r/min转速搅拌8min，然后在25℃无菌环境下发酵7天，得到发酵酵素；
(4)用纱布对步骤(3)制备得到的发酵酵素进行一次过滤，纱布孔径200目，得到滤液，接着，采用D101大孔吸附树脂对滤液进行纯化，得到二次滤液；然后对二次滤液进行浓缩得到酵素浓浆；采用巴氏杀菌法将所述酵素浓浆加热至65℃，恒温30min进行杀菌处理，得到酵素浓浆，最后，经冷冻干燥，得到酵素粉；
(5)按质量份计，将12份蛋黄卵磷脂、6份胆固醇、4份司盘80加入30份无水乙醇中混合均匀，再通过旋蒸法在30℃下去除无水乙醇，然后加入3份吐温80、3份司盘80、6份酵素粉和20份无水乙醇、40份pH＝7的磷酸缓冲液，最后，超声乳化8min，得到植物酵素脂质体乳液；
(6)按质量份计，向94份物酵素脂质体乳液中加入6份海藻糖，以80r/min转速搅拌15min，然后经冷冻干燥，得到所述植物酵素脂质体。
所述酶制剂由纤维素酶、半纤维素酶按质量比1：2混合而成。
所述发酵菌由纳豆芽孢杆菌、转化人参皂苷鞘氨醇单胞菌按质量比1：1混合而成。
步骤(4)中所述浓缩的条件为：温度为48℃，真空度为-0.06MPa，浓缩至原体积的1/5。
步骤(4)所述D101大孔吸附树脂(湿态)的质量为滤液质量的3倍，树脂柱径高比为1：6，上样速度为0.5倍柱体积/h；去杂用3倍柱体积水以1.5倍柱体积/h的速度洗；洗脱用4倍柱体积的80wt％乙醇水溶液以1倍柱体积/h的速度进行。
步骤(5)所述超声的操作条件：超声功率为150W，频率为30kHz。
实施例4
一种抗衰老组合物的制备方法，包括以下步骤：按质量份计，将0.4份二裂酵母发酵产物溶胞产物、0.3份乳酸菌发酵溶胞产物、0.2份乙酰基六肽-8、4份羟丙基四氢吡喃三醇、2份乙醇酸、4份透明质酸、5份1,2-丙二醇、2份甘油、10份植物酵素脂质体、5份水，并以180r/min转速搅拌15min，得到所述抗衰老组合物。
所述植物酵素脂质体的制备方法，包括以下步骤：
(1)按质量份计，将人参8份、姜黄8份、雨生红球藻3份、红景天4份、燕麦9份、蓝莓18份、水50份混合，以4000r/min转速均质15min，得到植物均质液；
(2)按质量份计，向步骤(1)制得的植物均质液中加入0.07份酶制剂，在35℃下、以180r/min转速搅拌15min后，静置酶解4h，得到酶解物；
(3)按质量份计，向步骤(2)制得的酶解物中加入0.1份发酵菌、5份蜂蜜，以180r/min转速搅拌8min，然后在25℃无菌环境下发酵7天，得到发酵酵素；
(4)用纱布对步骤(3)制备得到的发酵酵素进行一次过滤，纱布孔径200目，得到滤液，接着，采用D101大孔吸附树脂对滤液进行纯化，得到二次滤液；然后对二次滤液进行浓缩得到酵素浓浆；采用巴氏杀菌法将所述酵素浓浆加热至65℃，恒温30min进行杀菌处理，得到酵素浓浆，最后，经冷冻干燥，得到酵素粉；
(5)按质量份计，将12份蛋黄卵磷脂、6份胆固醇、4份司盘80加入30份无水乙醇中混合均匀，再通过旋蒸法在30℃下去除无水乙醇，然后加入3份吐温80、3份司盘80、6份酵素粉和20份无水乙醇、40份pH＝7的磷酸缓冲液，最后，超声乳化8min，得到植物酵素脂质体乳液；
(6)按质量份计，向94份物酵素脂质体乳液中加入6份海藻糖，以80r/min转速搅拌15min，然后经冷冻干燥，得到所述植物酵素脂质体。
所述酶制剂由纤维素酶、半纤维素酶按质量比1：2混合而成。
所述发酵菌为纳豆芽孢杆菌。
步骤(4)中所述浓缩的条件为：温度为48℃，真空度为-0.06MPa，浓缩至原体积的1/5。
步骤(4)所述D101大孔吸附树脂(湿态)的质量为滤液质量的3倍，树脂柱径高比为1：6，上样速度为0.5倍柱体积/h；去杂用3倍柱体积水以1.5倍柱体积/h的速度洗；洗脱用4倍柱体积的80wt％乙醇水溶液以1倍柱体积/h的速度进行。
步骤(5)所述超声的操作条件：超声功率为150W，频率为30kHz。
实施例5
一种抗衰老组合物的制备方法，包括以下步骤：按质量份计，将0.4份二裂酵母发酵产物溶胞产物、0.3份乳酸菌发酵溶胞产物、0.2份乙酰基六肽-8、4份羟丙基四氢吡喃三醇、2份乙醇酸、4份透明质酸、5份1,2-丙二醇、2份甘油、10份植物酵素脂质体、5份水，并以180r/min转速搅拌15min，得到所述抗衰老组合物。
所述植物酵素脂质体的制备方法，包括以下步骤：
(1)按质量份计，将人参8份、姜黄8份、雨生红球藻3份、红景天4份、燕麦9份、蓝莓18份、水50份混合，以4000r/min转速均质15min，得到植物均质液；
(2)按质量份计，向步骤(1)制得的植物均质液中加入0.07份酶制剂，在35℃下、以180r/min转速搅拌15min后，静置酶解4h，得到酶解物；
(3)按质量份计，向步骤(2)制得的酶解物中加入0.1份发酵菌、5份蜂蜜，以180r/min转速搅拌8min，然后在25℃无菌环境下发酵7天，得到发酵酵素；
(4)用纱布对步骤(3)制备得到的发酵酵素进行一次过滤，纱布孔径200目，得到滤液，接着，采用D101大孔吸附树脂对滤液进行纯化，得到二次滤液；然后对二次滤液进行浓缩得到酵素浓浆；采用巴氏杀菌法将所述酵素浓浆加热至65℃，恒温30min进行杀菌处理，得到酵素浓浆，最后，经冷冻干燥，得到酵素粉；
(5)按质量份计，将12份蛋黄卵磷脂、6份胆固醇、4份司盘80加入30份无水乙醇中混合均匀，再通过旋蒸法在30℃下去除无水乙醇，然后加入3份吐温80、3份司盘80、6份酵素粉和20份无水乙醇、40份pH＝7的磷酸缓冲液，最后，超声乳化8min，得到植物酵素脂质体乳液；
(6)按质量份计，向94份物酵素脂质体乳液中加入6份海藻糖，以80r/min转速搅拌15min，然后经冷冻干燥，得到所述植物酵素脂质体。
所述酶制剂由纤维素酶、半纤维素酶按质量比1：2混合而成。
所述发酵菌为转化人参皂苷鞘氨醇单胞菌。
步骤(4)中所述浓缩的条件为：温度为48℃，真空度为-0.06MPa，浓缩至原体积的1/5。
步骤(4)所述D101大孔吸附树脂(湿态)的质量为滤液质量的3倍，树脂柱径高比为1：6，上样速度为0.5倍柱体积/h；去杂用3倍柱体积水以1.5倍柱体积/h的速度洗；洗脱用4倍柱体积的80wt％乙醇水溶液以1倍柱体积/h的速度进行。
步骤(5)所述超声的操作条件：超声功率为150W，频率为30kHz。
对比例
一种抗衰老组合物的制备方法，包括以下步骤：按质量份计，将0.4份二裂酵母发酵产物溶胞产物、0.3份乳酸菌发酵溶胞产物、0.2份乙酰基六肽-8、4份羟丙基四氢吡喃三醇、4份乙醇酸、4份透明质酸、5份1,2-丙二醇、2份甘油、5份水，并以180r/min转速搅拌15min，得到所述抗衰老组合物。
测试例1
抗氧化性能测试
实施例1-5及对比例所制得的抗衰老组合物在常温避光贮存6个月后，测试其DPPH自由基清除率实验。
方法：将3mL浓度为0.0178mmol/L的DPPH-无水甲醇溶液、1mL破乳剂和3mL各个实施例和对比例的抗衰老组合物混合，以180r/min转速搅拌5s，然后以4000r/min转速离心10s，取上清液在517nm波长处测其吸光值，吸光值记为A1，再在37℃下避光以180r/min转速搅拌30min后，以4000r/min转速离心10s，取上清液在517nm波长处测其吸光值，记为A2，空白对照为只加DPPH-无水甲醇溶液，其吸光值记为A3。按下式计算DPPH自由基清除率：
DPPH自由基清除率(％)＝[1-(A1-A2)/A3]×100％，取三次测量的平均值，检测结果如表1所示。
所述破乳剂，型号为PE2040，采购自淮南市科迪化工科技有限公司。
表1：DPPH自由基清除率
DPPH自由基清除率/％
实施例1 45.2
实施例2 51.4
实施例3 96.7
实施例4 88.4
实施例5 87.9
对比例 23.7
由表1可以看出，实施例3经6个月的贮存后，其依然具有极强的DPPH自由基清除率，表明其内的抗氧化物损失最少。而实施例2相较于实施例3，其抗氧化物损失明显增大，这是由于实施例2所制得的酵素粉没有采用脂质体包裹，从而在贮存过程中与氧气反应，导致大量失活。实施例1相较于实施例2，其抗氧化物损进一步增大，这是由于实施例1制备酵素粉的过程中没有先对均质物进行酶解，植物细胞壁极难破坏，部分抗氧化物没有溶出，得到的酵素粉中抗氧化物质比实施例2少。
实施例4和实施例5采用单一的纳豆芽孢杆菌或转化人参皂苷鞘氨醇单胞菌发酵，其DPPH自由基清除率相较于实施例3也略有下降，本发明推测，这是由于实施例5中单独采用转化人参皂苷鞘氨醇单胞菌，虽然其能够产生具有极强抗氧化能力的辅酶Q10，但是，其对于具有抗氧化性的植物细胞溶出物，例如酚、醌等具有降解作用，其量过多，反而会抑制产物中抗氧化性物种的数量。而纳豆芽孢杆菌分解蛋白质产生的大量酵素纳豆激酶、维生素K和氨基酸，有抑制人参皂苷鞘氨醇单胞菌分解酚、醌等物质的能力。
测试例2
人体试用评价
测试用化妆品的制备：按质量份计，将50份实施例1-5和对比例1所制得的抗衰老组合物和4份聚甘油-2异硬脂酸酯、6份鲸蜡硬脂醇乙基己酸酯、2份16/18醇、0.5份羟乙基纤维素、40份水混合，得到测试用化妆品。
受试人员：共120人，每组20人，分别编号1-20，受试人员1天内面部使用2次，每次1mL，均匀涂覆于面部，10min后清水洗净，连续使用3周。
受试者选择：
年龄25至55岁的健康女性；
皮肤光生物类型为II至IV型皮肤；
能很好配合试验者，在研究期间能保持生活的规律性并能避免日光紫外线照射；
颜面部皮肤有细小皱纹、弹性较差和灰暗等问题。
采用Visia皮肤检测仪检测受试者皮肤皱纹和弹性改善效果。实验结果见表2。
表2：皱纹、紧致度改善效果
淡纹/％ 弹性/％
实施例1 56 72
实施例2 59 75
实施例3 69 86
实施例4 66 84
实施例5 67 83
对比例 51 68
由表2可以看出，实施例3制得的抗衰老组合物具有最佳的淡纹和弹性改善效果，这是由于本发明以透明质酸、乙醇酸和羟丙基四氢吡喃三醇协同，能够大幅促进皮肤对于透明质酸的吸收能力，修复皮肤受损细胞、淡化皱纹、增加皮肤弹性。本发明还向其中添加了一种自制植物酵素脂质体，其采用人参、姜黄、雨生红球藻、红景天、燕麦、蓝莓作为发酵的主要原料，采用均质、酶解、发酵三步法提高细胞溶出率，增加了提取物的浓度，缩短了发酵时间。人参、姜黄、雨生红球藻、红景天、燕麦、蓝莓的溶出物具有极强的保湿、抵制环境伤害和皮肤修复功能，其和透明质酸、乙醇酸、羟丙基四氢吡喃三醇协同，即增强了透明质酸、乙醇酸、羟丙基四氢吡喃三醇修复皮肤细胞、淡化皱纹、增加皮肤弹性的能力，还增加了保湿、促进细胞代谢和抵制环境伤害的功能。接着，本发明采用转化人参皂苷鞘氨醇单胞菌和纳豆芽孢杆菌协同发酵，转化人参皂苷鞘氨醇单胞菌能够把人参主皂苷转化为人参稀有皂苷，提升人参皂苷的功效，同时，其还能够产生大量的辅酶Q10，辅酶Q10是一种天然抗氧化剂和细胞代谢激活剂，能保护胶原蛋白、维持皮肤弹性、使皮肤持久保湿，同时抵制环境的破坏和光老化。而纳豆芽孢杆菌通过吞噬植物蛋白来繁殖的时候，产生出的无数酵素纳豆激酶和维生素K，还有大量的氨基酸，有利于皮肤细胞的修复。二者协同，发酵产物能够提高皮肤对营养物质的吸收能力，促进皮肤细胞的代谢和修复，还能抵制环境的破坏和光老化。本发明更是以脂质体包裹发酵得到的酵素粉，避免其在空气中酶和抗氧化物失活，延长了产品的存储期限，更有利于产品的运输和使用。最终得到的抗衰老组合物，能够促进衰老细胞代谢、有活力的新细胞的再生，提高肌肤活力，修复肌肤屏障，使得肌肤长效水润、有弹性。
实施例2所制得的抗衰老组合物，其实际使用效果比实施例3差，这是由于本发明所采用的植物提取物中的抗氧化物主要为花青素、虾青素和辅酶Q10，这三者极易被氧化失活，没有脂质体的保护，其在使用过程中，效用逐渐降低，皮肤抵抗能力下降。而实施例1制备酵素粉的过程中没有先对均质物进行酶解，植物细胞壁极难破坏，部分活性物质没有溶出，使得其抗衰老能力较实施例2下降。实施例4和实施例5抗衰老能力较实施例3下降，是由于只采用了单一的发酵菌，没有发挥其协同作用。

Claims (8)

1.一种抗衰老组合物，其特征在于，包括以下原料：二裂酵母发酵产物溶胞产物、乳酸菌发酵溶胞产物、乙酰基六肽-8、羟丙基四氢吡喃三醇、乙醇酸、透明质酸、1,2-丙二醇、甘油、水；
还包括植物酵素脂质体，所述植物酵素脂质体的制备方法，包括以下步骤：
（1）将人参、姜黄、雨生红球藻、红景天、燕麦、蓝莓、水混合均质，得到均质液；
（2）对均质液进行酶解，采用发酵菌发酵，得到发酵酵素；
（3）过滤发酵酵素，经灭菌、干燥，得到酵素粉；
（4）用脂质体包裹，得到所述植物酵素脂质体；
所述发酵菌为纳豆芽孢杆菌、转化人参皂苷鞘氨醇单胞菌中的一种或两种混合物。
2.如权利要求1所述抗衰老组合物，其特征在于，所述植物酵素脂质体的制备方法，包括以下步骤：
（1）按质量份计，将人参5-10份、姜黄5-10份、雨生红球藻2-5份、红景天3-5份、燕麦5-10份、蓝莓10-20份、水45-70份混合，以3000-6000r/min转速均质10-20min，得到植物均质液；
（2）按质量份计，向步骤（1）制得的植物均质液中加入0.05-0.1份酶制剂，在30-40℃下、以100-200r/min转速搅拌10-20min后，静置酶解3-5h，得到酶解物；
（3）按质量份计，向步骤（2）制得的酶解物中加入0.05-0.15份发酵菌、4-5份蜂蜜，以100-200r/min转速搅拌5-10min，然后在20-30℃无菌环境下发酵7-12天，得到发酵酵素；
（4）用纱布对步骤（3）制备得到的发酵酵素进行一次过滤，纱布孔径150-200目，得到滤液，接着，采用D101大孔吸附树脂对滤液进行纯化，得到二次滤液；然后对二次滤液进行浓缩得到酵素浓浆；采用巴氏杀菌法将所述酵素浓浆加热至62-65℃，恒温25-35min进行杀菌处理，得到酵素浓浆，最后，经冷冻干燥，得到酵素粉；
（5）按质量份计，将10-15份蛋黄卵磷脂、5-7份胆固醇、3-5份司盘80加入25-35份无水乙醇中混合均匀，再通过旋蒸法在25-35℃下去除无水乙醇，然后加入2-4份吐温80、2-4份司盘80、5-7份酵素粉和15-25份无水乙醇、30-50份pH=7的磷酸缓冲液，最后，超声乳化5-10min，得到植物酵素脂质体乳液；
（6）按质量份计，向90-100份物酵素脂质体乳液中加入4-6份海藻糖，以60-100r/min转速搅拌10-20min，然后经冷冻干燥，得到所述植物酵素脂质体。
3.如权利要求2所述抗衰老组合物，其特征在于，所述酶制剂为纤维素酶、半纤维素酶中的一种或两种混合物。
4.如权利要求2所述抗衰老组合物，其特征在于，步骤（4）中所述浓缩条件为：温度为46-50℃，真空度为-0.04-（-0.08）MPa，浓缩至原体积的1/10-1/3。
5.如权利要求2所述抗衰老组合物，其特征在于，步骤（4）中所述D101大孔吸附树脂（湿态）的质量为滤液质量的3-4倍，树脂柱径高比为1：6-7，上样速度为0.5-1倍柱体积/h；去杂用2-4倍柱体积水以1-2倍柱体积/h的速度洗；洗脱用3-5倍柱体积的75-85wt%乙醇水溶液以1-2倍柱体积/h的速度进行。
6.如权利要求2所述抗衰老组合物，其特征在于，步骤（5）中所述超声条件为：功率为150-160W，频率为30-40KHz。
7.如权利要求1-6中任一项所述抗衰老组合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：按质量份计，将0.1-0.5份二裂酵母发酵产物溶胞产物、0.1-0.5份乳酸菌发酵溶胞产物、0.1-0.5份乙酰基六肽-8、1-5份羟丙基四氢吡喃三醇、1-3份乙醇酸、3-5份透明质酸、4-6份1,2-丙二醇、1-3份甘油、8-12份植物酵素脂质体、4-6份水混合，并以100-200r/min转速搅拌10-20min，得到所述抗衰老组合物。
8.权利要求1-6中任一项所述的抗衰老组合物在化妆品中的应用。
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