CN112190529B

CN112190529B - 羊肠衣胶原蛋白粉及其在制备抗衰老护肤品中的应用

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Publication number: CN112190529B
Application number: CN202011115071.8A
Authority: CN
Inventors: 王亚芳
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 2020-10-19
Filing date: 2020-10-19
Publication date: 2022-09-30
Anticipated expiration: 2040-10-19
Also published as: CN112190529A

Abstract

本发明公开了一种羊肠衣胶原蛋白粉的制备方法，本发明还同时公开了利用上述羊肠衣胶原蛋白粉制备而得的抗衰老护肤品，其由以下质量含量的成分组成：羊肠衣胶原蛋白粉10‑30％、天然植物性油脂6‑8％、螯合剂0.1‑0.5％、保湿剂3‑6％、助乳化剂5‑10％、增稠剂0.5‑1％、香气调节剂0‑1％、去离子水，余量。本发明的抗衰老护肤品，不但能修复皮肤损伤，且能发挥抗衰老功效。

Description

羊肠衣胶原蛋白粉及其在制备抗衰老护肤品中的应用

技术领域

本发明属于护肤品技术领域，具体涉及羊肠的小肠固有膜(俗称“羊肠衣”)含有易于人体吸收的胶原蛋白及其在制备抗衰老中的应用。

背景技术

安信证券在相关研报中援引福布斯数据统计显示，抗衰意识持续年轻化，中国20岁到24岁的都市女性中，五分之二(39％)都使用抗衰老产品，尤其是抗皱、祛斑、祛疤痕等产品已成为刚需；90后及95后已经超越80后及85后，成为线上抗衰老第一大消费群体；此外还有数据指出，去年京东618数据显示，全网有25％的抗衰老产品被“00后”消费者买走。

人口基数决定了我国抗衰老市场不会小，这是一个巨大的趋势性的商机。

抗衰老在化妆品研发中属于高精尖技术，在抗衰老功效产品线中，精华与面膜成为消费者最青睐的品类。

环境因素在一定程度上加速了衰老的速度,同时随着经济水平的提高以及人们对美的更高追求，促使了抗衰老化妆品的蓬勃发展。皮肤老化是指皮肤功能衰老性损伤，因此皮肤不能适应内外环境的变化，产生皮肤对机体的防护能力和调节能力等减退，多出现颜色、色泽、形态、质感等外观整体状况的改变。人体的皮肤的老化主要有两个方面对其影响，分别为内源性老化和外源性老化。内源性老化是指随着年龄的不断增加，人体皮肤出现了由于自然老化，多表现为逐渐在皮肤表面出现的细纹、皮肤松弛和变白。外源性老化的最主要原因是人体皮肤受到紫外线长期照射所致的光致老化，老化后的皮肤出现明显皱纹、粗糙、淡黄或灰黄色色素斑块形成的皮肤变色等。因此，从这两方面对皮肤进行保护和修复是抗衰老化妆品的主要内容。在皮肤老化的过程中真皮结构的改变是致使皮肤失去弹性、松弛、产生皱纹的主要原因，在一定程度上可通过使用抗衰老化妆品来刺激肌肤胶原蛋白，弹性蛋白的新生，以实现修复真皮层的功效，达到抗衰老的目的。

发明内容

本发明要解决的问题是提供一种能修复皮肤损伤且能发挥抗衰老功效的抗衰老护肤品。

为了解决上述技术问题，本发明提供一种羊肠衣胶原蛋白粉的制备方法，包括如下步骤：

1)、将羊肠衣经清洗、灭菌(物理灭活)处理，得无菌羊肠衣；

2)、将无菌羊肠衣先在净化室(净化级别10万级别)中于18～25℃、相对湿度50％～55％晾干24±2小时；

3)、将步骤2)所得物粉碎研磨成超微细粉(粒径约为8.4～8.6微米)，得羊肠衣胶原蛋白粉。

上述羊肠衣优选澳洲羊肠衣。

本发明还同时提供了利用上述羊肠衣胶原蛋白粉制备的抗衰老护肤品，由以下质量含量的成分组成：

羊肠衣胶原蛋白粉：10-30％

天然植物性油脂：6-8％

螯合剂：0.1-0.5％

保湿剂：3-6％；

助乳化剂：5-10％

增稠剂：0.5-1％

香气调节剂：0-1％

去离子水：余量。

作为本发明的抗衰老护肤品的改进：

天然植物性油脂由杏仁油和茶籽油组成；所述杏仁油：茶籽油＝1.8～2.2:1的质量比；

螯合剂为EDTA(乙二胺四乙酸)；

保湿剂为燕麦β-葡聚糖；

助乳化剂为Sepigel305；

增稠剂为Carbolpol 940；

香气调节剂为玫瑰精油。

作为本发明的抗衰老护肤品的进一步改进：

羊肠衣胶原蛋白粉(澳洲羊肠衣胶原蛋白粉)20％；

杏仁油4％、茶籽油2％；

螯合剂为0.3％；

保湿剂为5％；

助乳化剂为8％；

增稠剂为0.5％；

香气调节剂为1％。

去离子水：余量。

本发明还同时提供了上述抗衰老护肤品的制备方法，包括如下步骤：

1)、在闭合容器中，将羊肠衣胶原蛋白粉与去离子水混合后于90～100℃熬制1.5～2小时，得羊肠衣胶原蛋白液；

2)、在羊肠衣胶原蛋白液冷却至室温后，加入天然植物性油脂、螯合剂、保湿剂、助乳化剂、增稠剂、香气调节剂进行常规的均匀混合，得抗衰老护肤品。

本发明提供的利用羊肠固有膜(羊肠衣)提取的胶原蛋白富含人体所需的甘氨酸、脯氨酸和羟脯氨酸，对皮肤具有显著的保湿抑菌作用，可修复皮肤损伤，祛除疤痕，减少皱纹和细纹，促进皮肤纹理恢复，从而发挥抗衰老功效。具有纯天然的特性，从羊肠衣提取，无污染，无重金属残留，更安全，同时保持了小分子胶原蛋白肽的生物活性，与人类皮肤胶原蛋白结构相似，能直接被皮肤吸收。对皮肤具有显著的保湿抑菌作用，可修复皮肤损伤，祛除疤痕，减少皱纹和细纹，促进皮肤纹理恢复，从而发挥抗衰老功效的技术优势。

本发明采用的原料取自于澳洲绵羊肠衣，此原料质地洁白、极富柔韧性、易为人体皮肤吸收。

而目前市场上出现的冠以“胶原蛋白”名称的护肤产品多以哺乳动物表皮制作提取的“胶原蛋白”，其蛋白纤维含量少、胶质含量多；本发明使用的是特制的“澳洲羊肠衣胶原蛋白”，其组织结构为小分子多肽，蛋白纤维含量多、胶质含量少，人体吸收效果更佳。

附图说明

下面结合附图对本发明的具体实施方式作进一步详细说明。

图1为胶原蛋白扫描电镜形态观察图；

图2为SDS-PAGE分澳洲羊肠衣胶原蛋白分子量大小图；

图3为澳洲羊肠衣胶原蛋白抑菌作用图；

图3中：1～3均代表20％澳洲羊肠衣胶原蛋白液，Ab代表链霉素；

图4为创伤修复实验检测澳洲羊肠衣胶原蛋白的对伤口修复能力对比图；

图5为H&E组织切片检测澳洲羊肠衣胶原蛋白的对伤口修复能力对比图；

图6为Masson三色染色法检测澳洲羊肠衣胶原蛋白的对伤口修复能力对比图；

图7为抗衰老护肤品的过敏反应测试图；

图8为抗衰老护肤品的感官测试图；

图9抗衰老护肤品的抗衰老效果测试图。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明进行进一步描述，但本发明的保护范围并不仅限于此：

本发明的抗衰老护肤品，除了澳洲羊肠固有膜胶原蛋白粉自行制备而得，其余成分均能通过常规市购形式获得。

实施例1、一种澳洲羊肠衣胶原蛋白粉的制备方法，包括如下步骤：

1)将源自澳洲的羊肠衣清洗干净；

2)将羊肠衣采用物理灭菌消毒处理：

利用氢氧化钠和温度为30℃的纯净水，配制成质量浓度为3％的氢氧化钠溶液作为消毒液；

将步骤1)所得的清洗干净后的澳洲羊肠衣放入上述消毒液中，室温下浸泡灭活6-12小时，再用清水将消毒液彻底清洗干净(即，洗脱液为中性)；

3)、将无菌羊肠衣在净化环境(净化级别10万级别)中于20～22℃、相对湿度50％～55％晾干24小时；

4)、将步骤3)所得物粉碎研磨成超微细粉(粒径约为8.47微米)，得澳洲羊肠衣胶原蛋白粉。

实施例2、抗衰老护肤品，利用实施例1所得的澳洲羊肠衣胶原蛋白粉，由以下质量含量的成分组成：

澳洲羊肠衣胶原蛋白粉20％；

杏仁油4％、茶籽油2％；作为天然植物性油脂；

EDTA(螯合剂)为0.3％；

燕麦β-葡聚糖(保湿剂)为5％；

助乳化剂Sepigel305为8％；

增稠剂Carbolpol 940为0.5％；

玫瑰精油(香气调节剂)为1％；

去离子水：余量(即，去离子水：TO 100％)。

该抗衰老护肤品的制备方法，包括如下步骤：

1)、在闭合容器中，将澳洲羊肠衣胶原蛋白粉与去离子水混合后于90～100℃熬制1.5～2小时，从而使得羊肠衣胶原蛋白粉溶解，得澳洲羊肠衣胶原蛋白液(为20％澳洲羊肠衣胶原蛋白液)；

上述步骤均在化妆品的常规制备环境条件下进行。

实施例3、抗衰老护肤品，将实施例2中的澳洲羊肠衣胶原蛋白粉的含量由20％改成10％，相应调节去离子水的用量；其余等同于实施例2。

该实施例3中，为10％澳洲羊肠衣胶原蛋白液。

实验1、对上述实施例制备所得的澳洲羊肠衣胶原蛋白粉及相应的澳洲羊肠衣胶原蛋白液，进行以下检测：

(一)澳洲羊肠衣胶原蛋白粉的形貌表征

扫描电子显微镜(SEM)：用导电胶将胶原蛋白粉粘贴于载物盘，并对样品表面进行喷雾镀金(Pt)，观察其微观形貌，如图1。微观观察结果显示胶原蛋白粉呈均质，表面光滑，无杂质。

(二)澳洲羊肠衣胶原蛋白分子量大小

胶原蛋白粉样品溶解于乙酸，取10μL加入样品缓冲液，保温1h，SDS-PAGE垂直电泳，考马斯亮蓝R-250染色0.5h，脱色，Marker分析蛋白分子大小；如图2。结果表明澳洲羊肠胶原蛋白分子量大小为2Kda，接近人体皮肤胶原蛋白，易于被皮肤吸收。

(三)澳洲羊肠衣胶原蛋白抑菌活性

以枯草杆菌、大肠杆菌和铜绿假单胞菌为测试菌株，采用纸片扩散法测定20％澳洲羊肠衣胶原蛋白液的抑菌作用。每个受试菌株(1×10⁵～1×10⁶cfu/mL)均在LB培养基上培养。将20％澳洲羊肠衣胶原蛋白液或链霉素(1mg/mL)0.5ml添加到抑菌纸片(直径7mm)上并使其干燥。随后将4张纸片(3份样品和1份链霉素)放置在每个接种LB培养基的表面，在37℃的受控培养箱中培养。24h后，观察抑菌情况。

结果显示从图3中可以较明显地观察到，澳洲羊肠衣胶原蛋白对所有受试微生物均显示出抑菌活性，尤其对大肠杆菌抑菌活性显著。

(四)澳洲羊肠衣胶原蛋白皮肤修复机制研究

创伤模型建立：首先通过对SD大鼠腹腔注射5wt％的水合氯醛生理盐水溶液的方法麻醉大鼠；然后对大鼠背部毛发进行剔除并造成直径为8mm的圆形全皮层创口，从而得到患有皮肤创伤的模型SD大鼠。

创伤修复实验：将上述模型鼠随机分成3组，每组6只；创伤皮肤分别用不同样品进行处理，处理的敷料如下：纱布治疗(对照组)，10％澳洲羊肠衣胶原蛋白液和20％澳洲羊肠衣胶原蛋白液(每天涂抹3次，每次确保能澳洲羊肠衣胶原蛋白液能完全覆盖伤口)。为了评估以上3组样品对SD大鼠的皮肤损伤修复的效率以及修复的过程，利用相机每天对创伤进行照片的采集，并通过测量伤口的面积大小从而计算并绘制出样品处理伤口后的SD大鼠皮肤伤口愈合能力。

结果如图4所述，根据该图4可获得以下总结性结论：成功的建立了大鼠创伤修复模型，修复效果：20％澳洲羊肠衣胶原蛋白液＞(优于)10％澳洲羊肠衣胶原蛋白液＞(优于)对照。

H&E染色：为了能够进一步观察SD大鼠损伤处皮肤的内部细胞组织修复的情况，对创口处进行了切片染色观察。大致操作如下：

(1)取材、固定及包埋：取第4天、第7天的创口新生皮肤组织(5mm×5mm×2mm)并利用福尔马林溶液固定大约40min，利用常规石蜡包埋，并利用切片机制得0.4μm的切片。

(2)脱蜡及水洗：二甲苯脱蜡两次且每次5min后，利用乙醇降梯度(100％、95％、80％和75％)清洗直至蒸馏水清洗两次。

(3)染色：首先利用苏木素染色5min后，水洗并除水；之后利用盐酸乙醇分化30s，温水浸泡5min并除水；最后将切片置于伊红中染色2min。

(4)脱水、透明及封片：利用升梯度浓度乙醇(95％和100％)对切片进行脱水处理，之后利用二甲苯-石碳酸(3:1)和二甲苯透明化切片，最后利用中性树脂封固。

结果如图5所述，根据该图5可获得以下总结性结论：相比对照，羊肠衣胶原蛋白液可对创伤具有修复作用，尤其是20％羊肠衣胶原蛋白液对创伤有很好的修复作用。

Masson三色(MT)染色：为了能够进一步观察SD大鼠损伤皮肤内部胶原蛋白和肌原纤维的富积情况从而分析创伤皮肤修复的完整性，从而对创口新生皮肤组织(第4天、第7天)切片进行MT染色。

结果如图6所述，根据该图6可获得以下总结性结论：相比对照，羊肠衣胶原蛋白液可对创伤具有修复作用，尤其是20％羊肠衣胶原蛋白液对创伤有很好的修复作用。

实验2、对实施例2制备所得的抗衰老护肤品效果评价

①皮肤过敏性试验

选取志愿者5名，将含澳洲羊肠衣胶原蛋白液的抗衰老护肤品均匀涂耳朵后面，观察24h内皮肤反应情况，结果显示无任何过敏反应。其中一名志愿者24小时内的涂抹处皮肤状态如图7所述，显示无任何过敏反应。

②澳洲羊肠衣胶原蛋白液的感官性质测定

含澳洲羊肠衣胶原蛋白液的抗衰老护肤品，其基本的感官性质主要测试样品的铺展性，保湿性，光泽度，细腻性，黏滞感，清爽度等方面。选取手臂干净，皮肤健康，无化妆品过敏反应的志愿者10名，以手臂前臂为实验区，进行实验前需将手臂清洗干净，自然晾干后将抗衰老护肤品涂抹在固定手臂前臂位置(图8)，用量保持基本一致；实验周期为4周，在进行实验时手臂不能涂抹其他的任何化妆品，并将每次的表格收齐，最后统计平均值。化妆品感官评价可参考国际标准《设计感官分析实验室的一般导则》(ISO8589-2007)和国家标准《感官分析-建立感官分析实验室的一般导则》(GB/T 13868-2009)。本次实验采用的是十分制，8～10分表示感觉很好，6～8分表示感觉良好，6分以下表示感觉一般或者不好。

在人体感官评价中，取每次评价的分值最后计算出平均值，含澳洲羊肠衣胶原蛋白液的抗衰老护肤品基本的感官性质评价的结果如表1所示，铺展性，保湿性和清爽度感官性质评分都达到了9.0以上，细腻性达到了8.0以上，光泽度和黏滞感达到了6.0以上，说明含澳洲羊肠衣胶原蛋白液的抗衰老护肤品总体评价很好。

表1、感官性质评价

③抗衰老效果评价

采用对比法对含澳洲羊肠衣胶原蛋白液的抗衰老护肤品的抗衰老效果进行测定，选取女性志愿者15名，平均年龄23～51周岁，每天使用2次，这些志愿者皮肤对化妆品不过敏，在实验期间禁止用其他化妆品。志愿者们每天早8点与晚上9点，将面部皮肤洗净，在室内晾干15min，每次取固定的样品涂抹，再用指腹轻轻的按摩，使样品更好的被皮肤吸收。按规定连续使用含澳洲羊肠衣胶原蛋白液的抗衰老护肤品4周，检测皮肤弹性、纹理、粗糙度以及美白效果。结果显示：抗衰老功效评价过程中，通过对比志愿者面部皮肤皱纹程度的减轻状况和观察皮肤改善状况得出结论，经过连续3个月的使用，可以看出使用澳洲羊肠衣胶原蛋白液的志愿者的皮肤得到明显的改善，皱纹有很大的减轻效果。本次实验采用的是十分制，8～10分表示效果好，6～8分表示效果良好，6分以下表示效果一般或者不好。

表2、使用效果评价

在发明过程中，还进行了如下的比对实验：

对比例1、将实施例2中的“澳洲羊肠衣胶原蛋白粉”改成常规的胶原蛋白，用量保持不变。其余等同于实施例2。

对比例2、将实施例2中的“杏仁油4％+茶籽油2％”改成“杏仁油6％”或者改成“茶籽油6％”，其余等同于实施例2。

将上述对比例按照上述衰老效果评价方法进行检测，皮肤弹性、美白效果均远远不如本发明的实施例2，对比例1的美白效果约为7、皮肤弹性约为7.2；对比例2的皮肤弹性分别约为7.5左右。

最后，还需要注意的是，以上列举的仅是本发明的若干个具体实施例。显然，本发明不限于以上实施例，还可以有许多变形。本领域的普通技术人员能从本发明公开的内容直接导出或联想到的所有变形，均应认为是本发明的保护范围。

Claims

1.抗衰老护肤品，其特征是由以下质量含量的成分组成：

羊肠衣胶原蛋白粉：10-30%

天然植物性油脂：6-8%

螯合剂：0.1-0.5%

保湿剂：3-6%

助乳化剂：5-10%

增稠剂：0.5-1%

香气调节剂：0-1%

去离子水：余量；

天然植物性油脂由杏仁油和茶籽油组成；所述杏仁油：茶籽油=1.8~2.2:1的质量比；

螯合剂为EDTA；

保湿剂为燕麦β-葡聚糖；

助乳化剂为Sepigel305；

增稠剂为Carbolpol 940；

香气调节剂为玫瑰精油。

2.根据权利要求1所述的抗衰老护肤品，其特征是：

羊肠衣胶原蛋白粉20％；

杏仁油4%、茶籽油2%；

螯合剂为0.3％；

保湿剂为5％；

助乳化剂为8％；

增稠剂为0.5％；

香气调节剂为1％；

去离子水：余量。

3.如权利要求1或2所述的抗衰老护肤品的制备方法，其特征是包括如下步骤：

1）、将羊肠衣胶原蛋白粉与去离子水混合后于90~100℃熬制1.5~2小时，得羊肠衣胶原蛋白液；

2）、在羊肠衣胶原蛋白液冷却至室温后，加入天然植物性油脂、螯合剂、保湿剂、助乳化剂、增稠剂、香气调节剂进行常规的均匀混合，得抗衰老护肤品。