CN117919150A - 一种小分子植物水基的制备方法及其应用 - Google Patents

Abstract

本申请涉及一种小分子植物水基的制备方法及其应用，属于植物提取技术领域，本申请提供的小分子植物水基通过用物理方法将新鲜植物汁液分离出来，通过特制的填料作为小分子团簇化的物理反应剂，将普通植物汁液制备成小分子植物水基（半幅宽＜100Hz），制备的小分子植物水基稳定性好，可以保持2年以上的小分子结构特性。本申请提供的小分子植物水基具有渗透、保湿、舒缓、美白效果，应用在化妆品领域，能提升化妆品的产品功效。

Description

一种小分子植物水基的制备方法及其应用

技术领域

本申请属于植物提取技术领域，具体的说，涉及一种小分子植物水基的制备方法及应用。

背景技术

新鲜植物体一般含水率为70％-95％，叶片、花瓣等部位含水量较高。植物水中含有糖类、酚类、皂苷类、维生素类、氨基酸等多种生物活性成分，具有多种保健和美容护肤效果。但是，这一大部分天然的植物水分往往没有得到充分开发和利用。

众所周知，在大多数皮肤护理产品中，水的含量都非常高，能达到80%到95%不等，而爽肤水、面膜等水剂类产品甚至高达95%以上。不少人开始质疑护肤品含大量的水，是否意味着产品大部分有效成分被稀释，进而弱化产品效果。“无水”配方指配方体系中不添加去离子水（纯水），改用微生物发酵滤液、植物提取物等高活性原料替代去离子水。微生物发酵滤液和普通植物提取物存在气味重、颜色深等缺点，很难实现在化妆品中完全替代去离子水。

现有技术中公开号为CN114052152B公开发明了一种植物小分子水的提取方法，通过速冻使植物中的水结晶，再进行微波处理分离植物水分，然后将提取水分后的植物进行酶处理，再将分离出的植物水分和酶处理后植物浆体混合进行超声提取，最后通过纳滤膜过膜物质和超滤膜截留物质，该方法利用微波和超声震荡技术使植物水分小分子化，小分子结构的稳定性有待考究；且制备的植物小分子水本质同样是传统植物提取物，提取步骤更加繁琐。

因此，有必要提供一种以及能作为化妆品配方中的水来使用的小分子植物水基。

发明内容

本申请的目的之一在于提供一种小分子植物水基的制备方法，其在实现小分子植物水基稳定性好，提取步骤简便。

本申请的目的之二在于提供一种小分子植物水基，具有美白、保湿、舒缓和修护功效。

本申请的目的之三在于提供一种化妆品组合物，其包括上述小分子植物水基，具有美白功效。

本申请的目的之三在于小分子植物水基可作为溶剂萃取滇龙胆中微分子滇龙胆细胞液。

为实现上述目的，本申请是通过如下技术方案实现的：

本申请提供了一种小分子植物水基的制备方法，包括以下步骤：

（1）利用植物原料，制备得到汁液；

（2）将步骤（1）中的汁液采用离子交换树脂脱色，收集脱色液；

（3）将步骤（2）中的脱色液置于填充柱中循环，进行小分子团簇化，收集流出液；填充柱中从柱顶往柱底依次为第一层填料、第二层填料和第三层填料，第一层填料为水晶粉、珍珠粉和活性炭的组合物，第二层填料为弱酸性阳离子交换树脂，第三层填料为滇砂陶；

（4）将步骤（3）中的流出液过滤除菌，制备成半幅宽＜100Hz的一种小分子植物水基。

可选的，步骤（3）中水晶粉、珍珠粉、活性炭的质量比依次为（1-3）:（1-2）:（1-10）。

可选的，步骤（3）中填充柱每一层填料用量为植物原料用量的2-5倍；循环条件为：循环压力20-120Pa，循环速度1-5L/h，循环时间24-48h。

可选的，步骤（2）中离子交换树脂为A-30MP、MB-106UP中的一种或两种；离子交换树脂树脂用量为植物原料用量的2-5倍。

可选的，步骤（1）中植物原料含水率为70%以上，选取的植物原料为花、茎或者叶部位。

本申请还提供了一种由上述制备方法制备得到的小分子植物水基。

本申请还提供了小分子植物水基在日化产品中的应用。

本申请还提供了一种化妆品组合物，包括上述制备方法制备得到的小分子植物水基。

可选的，小分子植物水基在化妆品组合物的质量占比为1％-95%。

本申请的有益效果：

1、本申请采用在填充柱中进行小分子团簇化，填充柱从柱顶往柱底分别填充有水晶粉、珍珠粉与活性炭的混合物、弱酸性阳离子交换树脂、滇砂陶，制备得到的小分子植物水基稳定性好，能够保持小分子结构24个月以上；而现有技术中的植物小分子水的稳定性有待考究。

2、现有技术中采用微波和超声震荡技术使植物水分小分子化，本申请采用在填充柱中循环进行小分子团簇化，操作更加简便；并且本申请制备过程没有升温、加热等过程，能够保留植物本身的天然香味和一些热敏性成分，制备过程环保，无溶剂残留风险；

3、本申请制备出的小分子植物水基可作为日化产品配方中的去离子水使用，可制备为乳液，具有美白功效。

附图说明

图1为小分子植物水基制备工艺流程图；

图2为小分子植物水基半幅宽检测图；

图3为放置24个月后的小分子植物水基半幅宽检测图；

图4为普通去离子水半幅宽检测图；

图5为小分子植物水基与普通去离子水渗透效果对比图；

图6为小分子植物水基保湿功效检测—aqp3a基因相对表达量结果图；

图7为小分子植物水基美白功效检测—斑马鱼黑色素对比结果图；

图8为小分子植物水基舒缓功效检测—中性粒细胞数量变化结果图；

图9为小分子植物水基修护功效检测—斑马鱼尾鳍修护结果图；

图10为小分子玫瑰花水制备的乳液美白功效检测—斑马鱼黑色素对比结果图。

具体实施方式

为了使本申请的目的、技术方案和有益效果更加清楚，下面将对本申请的优选实施例进行详细的说明，以方便技术人员理解。

实施例1

一种小分子植物水基的制备方法，包括以下步骤：

（1）以新鲜植物花、茎、叶等含水量率超过70%的部位为植物原料，粉碎榨汁，滤布过滤，3000-4000r/min离心20min分离得到汁液；

（2）将汁液采用A-30MP和MB-106UP离子交换树脂脱色，A-30MP和MB-106UP离子交换树脂比例为3∶2，树脂用量为植物原料用量的3倍（w/w），上样液流速2 mL/min，收集脱色液；

（3）脱色液置于填充柱中循环，进行小分子团簇化，填充柱从柱顶往柱底分别填充有水晶粉、珍珠粉与活性炭的混合物、D113大孔弱酸性阳离子交换树脂、滇砂陶；水晶粉、珍珠粉与活性炭的比例依次为3:2:10；每层填料填充量为新鲜植物用量的3倍（w/w），收集流出液；

（4）脱色液在填充柱里循环24h，循环压力20-120Pa，循环速度2L/h；

（5）将流出液采用0.22μm除菌滤膜正压过滤除菌，过滤压力0.01-0.06MPa，制得小分子植物水基；制得的小分子植物水基颜色为淡黄色，pH值为6.06。

实施例2

一种小分子植物水基的制备方法，包括以下步骤：

（1）以新鲜植物花、茎、叶等含水率超过70%的部位为植物原料，粉碎榨汁，滤布过滤，3000-4000r/min离心20min分离得到汁液；

（2）将汁液采用A-30MP离子交换树脂脱色，树脂用量为植物原料用量的3倍（w/w），上样液流速2 mL/min，收集脱色液；

（3）脱色液置于填充柱中循环，进行小分子团簇化，填充柱从柱顶往柱底分别填充有水晶粉、珍珠粉与活性炭的混合物、D113大孔弱酸性阳离子交换树脂、滇砂陶；水晶粉、珍珠粉与活性炭的比例依次为3:2:10；每层填料填充量为新鲜植物用量的3倍（w/w），收集流出液；

（4）脱色液在填充柱里循环24h，循环压力20-120Pa，循环速度2L/h；

（5）将流出液采用0.22μm除菌滤膜正压过滤除菌，过滤压力0.01-0.06MPa，制得小分子植物水基；制得的小分子植物水基颜色为无色透明，pH值为5.97。

实施例3

一种小分子植物水基的制备方法，包括以下步骤：

（1）以新鲜植物花、茎、叶等含水率超过70%的部位为植物原料，粉碎榨汁，滤布过滤，3000-4000r/min离心20min分离得到汁液；

（2）将汁液采用A-30MP和MB-106UP离子交换树脂脱色，A-30MP和MB-106UP离子交换树脂比例为3∶2，树脂用量为植物原料用量的3倍（w/w），上样液流速2 mL/min，收集脱色液；

（3）脱色液置于填充柱中循环，进行小分子团簇化，填充柱从柱顶往柱底分别填充有水晶粉、珍珠粉与活性炭的混合物、D113大孔弱酸性阳离子交换树脂、滇砂陶；水晶粉、珍珠粉与活性炭的比例依次为1:1:1；每层填料填充量为新鲜植物用量的3倍（w/w），收集流出液；

（4）脱色液在填充柱里循环24h，循环压力20-120Pa，循环速度2L/h；

（5）将流出液采用0.22μm除菌滤膜正压过滤除菌，过滤压力0.01-0.06MPa，制得小分子植物水基；制得的小分子植物水基颜色为淡黄色，pH值为6.14。

实施例4

一种小分子植物水基的制备方法，包括以下步骤：

（1）以新鲜植物花、茎、叶等含水率超过70%的部位为植物原料，粉碎榨汁，滤布过滤，3000-4000r/min离心20min分离得到汁液；

（2）将汁液采用A-30MP和MB-106UP离子交换树脂脱色，A-30MP和MB-106UP离子交换树脂比例为3∶2，树脂用量为植物原料用量的3倍（w/w），上样液流速2 mL/min，收集脱色液；

（3）脱色液置于填充柱中循环，进行小分子团簇化，填充柱从柱顶往柱底分别填充有水晶粉、珍珠粉与活性炭的混合物、D113大孔弱酸性阳离子交换树脂、滇砂陶；水晶粉、珍珠粉与活性炭的比例依次为3:2:10；每层填料填充量为新鲜植物用量的3倍（w/w），收集流出液；

（4）脱色液在填充柱里循环48h，循环压力20-120Pa，循环速度2L/h；

（5）将流出液采用0.22μm除菌滤膜正压过滤除菌，过滤压力0.01-0.06MPa，制得小分子植物水基；制得的小分子植物水基颜色为透明淡黄色，pH值为5.73。

对比例1

对比例1与实施例1相比，区别在于填充柱从柱顶往柱底分别填充有水晶粉、珍珠粉与活性炭的混合物、D113大孔弱酸性阳离子交换树脂；水晶粉、珍珠粉与活性炭的比例依次为3:2:10；其他条件与实施例1中相同。制得的小分子植物水基颜色为无色透明，pH值为6.28。

对比例2

对比例2与实施例1相比，区别在于填充柱从柱顶往柱底分别填充有D113大孔弱酸性阳离子交换树脂、滇砂陶；其他条件与实施例1中相同。制得的小分子植物水基颜色为淡黄色，pH值为5.85。

对比例3

对比例3与实施例1相比，区别在于没有在填充柱中循环；其他条件与实施例1中相同。制得的小分子植物水基颜色为微黄色，pH值为6.25。

实施例5：小分子植物水基的半幅宽测定

具体测试步骤

1、溶液的配置

取等量的实施例1-4和对比例1-3制备所得的小分子植物水基用于核磁半幅宽测定。

2、半幅宽的测定

用核磁共振仪检测其小分子水核磁氧谱半幅宽；放置24个月后再用核磁共振仪检测其小分子水核磁氧谱半幅宽。

3、测定结果

表1不同制备方法得到的小分子植物水基的半幅宽

实施例1制得的小分子植物水基的半幅宽检测图如图2所示，实施例1制得的小分子植物水基在24个月后半幅宽检测图如图3所示，实施例1-4、对比例1-3半幅宽检由表1所示，普通去离子水的半幅宽检测图如图4所示，实施例1-4制备的小分子植物水基半幅宽在70Hz左右，实施例1-4中填充柱的填料均为从柱顶往柱底分别填充有水晶粉、珍珠粉与活性炭的混合物、D113大孔弱酸性阳离子交换树脂、滇砂陶；对比例1-3小分子植物水基半幅宽在95Hz左右，而对比例1采用填充柱从柱顶往柱底分别填充有水晶粉、珍珠粉与活性炭的混合物、D113大孔弱酸性阳离子交换树脂，对比例2采用填充柱从柱顶往柱底分别填充有D113大孔弱酸性阳离子交换树脂、滇砂陶；对比例3没有在填充柱中循环；可见，实施例1-3制备的小分子植物水基24个月后小分子植物水基半幅宽维持在80Hz以下，本申请中实施例1-3制备的小分子植物水基稳定性好。然而，对比例1-3制备的小分子植物水基在24个月后半幅宽在100Hz以上。检测结果说明本申请提供的制备方法制备的一种小分子植物水基稳定性好，能够保持小分子结构至少24个月。

实施例6：小分子植物水基中多糖含量检测

1、仪器及试剂

（1）仪器：紫外分光光度计（上海元析UV-6100S）、超声波清洗器；

（2）试剂：实验室用纯净水、浓硫酸（分析纯）、苯酚（分析纯）、D-无水葡萄糖。

2、溶液的配制

（1）5%苯酚溶液：取重蒸苯酚10g，加水190g，置于棕色试剂瓶，现用现配；

（2）标准品溶液（D-无水葡萄糖溶液）：精密称取D-无水葡萄糖10mg（精确到0.01mg），加纯净水定容至100ml，既得0.1mg/ml D-无水葡萄糖标准溶液。

3、标准曲线制作

分别精密移取D-无水葡萄糖标准溶液0.1ml、0.3ml、0.5ml、0.7ml、0.9ml置于比色管中，补水至1.0ml，然后依次加入1ml 5%苯酚摇匀后匀速加入5.0ml浓硫酸，室温反应20min，在486nm波长测定吸光度，以多糖质量浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制葡萄糖的标准曲线。1ml纯净水代替葡萄溶液作为空白对照。

4、样品多糖含量测定

分别精密移取实施例1、实施例2、实施例3、实施例4、对比例1、对比例2和对比例3中的小分子植物水基样品1ml，加水稀释100倍，得供试品溶液。取供试品溶液1ml，加入1ml5%苯酚，摇匀，匀速加入5.0ml浓硫酸，室温反应20min，在486nm波长测定吸光度。根据标准曲线计算供试品中多糖的质量浓度，根据供试品多糖质量浓度按以下公式计算样品中多糖浓度。

公式：X=C*100*0.9，式中：

C：供试品中多糖浓度，mg/ml；X：样品多糖质量浓度，mg/ml；0.9：葡萄糖对多糖校正系数；100：稀释倍数。

5、检测结果

表2不同制备方法得到的小分子植物水基的多糖含量

多糖含量高会影响日化产品的肤感和配方稳定性，考察结果表明高糖含量的小分子植物水基应用到日化产品中，造成产品粘度下降，颜色改变的情况，通过肤感测试，小分子植物水基多糖含量在1.5-5.5mg/ml范围内肤感最佳。由表2可知，实施例1-4制备的小分子植物水基多糖含量分别为2.64、3.12、3.06、2.91均在1.5-5.5mg/ml范围内，然而，对比例1-3制备的小分子植物水基多糖含量均超过了5.5mg/ml，说明本申请实施例1-4制备的小分子植物水基能够完全替代日化产品中水的使用。

实施例7：小分子植物水基的渗透率检测

1、材料及样品

（1）测试模型与测试体系：本测试选取乳猪皮作为测试模型，选取乳猪皮-Franzcell扩散池体系为测试体系。

（2）试剂：PBS（Gibco）。

（3）仪器：TK-12D透皮吸收扩散仪（上海锴凯）、Franz cell 扩散池（上海锴凯）、KQ3200E型超声波清洗仪（昆山舒美）。

（4）测试分组：

空白组：2%传明酸；

实验组：2%传明酸+1%小分子植物水基（实施例1-4）；

对照组：2%传明酸+1%小分子植物水基（对比例1-3）。

2、透皮吸收测定步骤

（1）向接收室中加入接收液：用移液枪吸取6.0 mL接收液（PBS溶液）注入接收室，并将配套的磁力搅拌子放置于接收室内；

（2）测试模型的组装与固定：将乳猪皮固定于Franz cell扩散池的扩散室和接收室之间，乳猪皮角质层朝向扩散室，真皮层朝向接收室。固定好乳猪皮后，根据取样管的液体高度，在取样管中用移液枪补加1mL接收液（PBS溶液），使乳猪皮真皮层与接收液紧密接触，接收液总体积为7 mL；

（3）将Franz cell扩散池固定于透皮吸收扩散仪中，开启电磁搅拌器以300rpm的速度搅拌，保持（37±1）℃恒温水浴，并确保水浴夹层无气泡；

（4）上样：待扩散仪水浴温度恒定后进行上样处理，按分组用移液枪吸取100μL样品添加至乳猪皮表面并涂抹均匀；

（5）接收池样本采集：于2h分别将空白组和样品组接收室中的液体收集待测传明酸浓度。

3、统计分析

（1）累积渗透量：

Q=Cn×V+∑Ci×V0 （i=1···n-1），式中：

Q：累积渗透量；V：接收室中接收液体积，7mL；V0：每次取样的体积，2mL；Ci：第1次n-1次取样时接收液中药物浓度；Cn：第n个取样点测得的样品浓度。

（2）扩散百分率：

P=Q/P0×100%，式中：

P：扩散百分率；Q：接收室中样品累积渗透量；P0：扩散室中样品的初始上样量。

4、检测结果

表3不同制备方法得到的小分子植物水基的渗透率

图5是小分子植物水基与普通去离子水渗透效果对比图，小分子植物水基的渗透效果好，并且由表3可知，通过渗透率检测，空白组的渗透率仅为2.10%，对比例1-3的渗透率分别为5.35%、4.75%、3.05%，而实施例1-4渗透率均在21%以上，表明本申请制备的小分子植物水基渗透性好，有利于皮肤细胞对植物中营养成分的吸收，说明本申请的小分子植物水基能应用到日化产品中，代替日化产品中的去离子水使用。

实施例8：小分子植物水基保湿功效检测

1、体系及样本量

（1）试验样品：实施例1中的小分子植物水基；

（2）试验体系：黑色素等位基因突变半透明Albino品系斑马鱼；

（3）斑马鱼鱼龄：受精后2天（2 dpf）；

（4）每组实验样本量：30尾（三次生物学重复，N=3）。

2、原理方法

斑马鱼用氯化钠处理，由于渗透压的原因皮肤表面将会失水皱缩。透明质酸（HA）存在于皮肤真皮层，具有保湿功能。水通道蛋白（AQPs）是一种位于细胞膜上的蛋白质，在细胞膜上组成“孔道”，可控制水在细胞的进出。AQP-3，即水通道蛋白3，主要是表皮水通道蛋白，是水和甘油的膜转运蛋白，在正常皮肤的表皮基底层角质形成细胞的质膜中表达，促进水渗透性与角质层水合作用。因此，通过检测aqp3a基因相对表达量可表明样品是否具有保湿功效。

3、实验步骤

（1）随机选取斑马鱼于6孔板中，每孔30尾；

（2）水溶给予样品，同时设置正常对照组和模型对照组，正常对照组为未经氯化钠处理且不加入样品处理组，模型对照组则为使用氯化钠处理至斑马鱼皮肤表面失水皱缩组，每孔容量为3mL，三次生物学重复；

（3）同时水溶给予氯化钠建立斑马鱼皮肤缺水模型；

（4）28℃条件下避光孵育22h；

（5）提取各实验组斑马鱼总RNA，合成cDNA，利用q-PCR检测β-actin和目的基因的基因表达；

（6）用β-actin作为基因表达的内参，计算目的基因的RNA相对表达量。

4、实验结果

小分子植物水基功效实验柱形图，如图6所示，在本实验条件下，小分子植物水基具有保湿功效。

实施例9：小分子植物水基美白功效检测

1、体系及样本量

（1）试验样品：实施例2中的小分子植物水基；

（2）试验体系：野生型AB品系斑马鱼；

（3）斑马鱼鱼龄：受精后6小时（6hpf）；

（4）每组实验样本量：15尾（三次生物学重复，N=3）。

2、原理方法

护肤产品的美白功效最主要的作用通路是通过抑制酪氨酸酶的活性，从而减少黑色素的生成来实现的，斑马鱼皮肤中的黑色素调控机制与人类高度保守，并且黑色素的生成速度快，在显微镜下能被肉眼清晰的观察到，通过图像处理技术可以对护肤产品对黑色素减少的程度进行定量，从而实现美白功效的评价。

3、实验步骤

（1）挑选受精卵-加样标记-孵育-破膜-摆鱼-观察；

（2）体系3mL：使用6hpfAB斑马鱼，3mL标准稀释水，28℃孵育45h，试验周期设置为0-2dpf；

（3）正常对照组：0-2dpf拍照观察头部黑色素生长情况，采用ImageJ软件分析黑色素面积及密度总值；

（4）样品组：添加小分子植物水基，观察小分子植物水基的美白效果及对斑马鱼的影响；

（5）阳性对照组：配制熊果苷溶液3mg/mL，观察其对斑马鱼的影响。

4、实验结果

小分子植物水基功效实验表型图，如图7所示，样品组与正常对照组对比，斑马鱼头部只有少量的黑色素，本实验证实了该小分子植物水基具有美白的作用。

实施例10：小分子植物水基舒缓功效检测

1、体系及样本量

（1）试验样品：实施例3中的小分子植物水基；

（2）试验体系：转基因中性粒细胞绿色荧光斑马鱼（MPX）；

（3）斑马鱼鱼龄：受精后2天（2dpf）；

（4）每组实验样本量：15尾（N=10）。

2、原理方法

十二烷基磺酸钠（SLS）作用于机体后可能引发机体产生刺激反应，刺激物进入斑马鱼体内，诱导炎症反应，中性粒细胞发生免疫应答，向皮肤表皮迁移并聚集。利用转基因中性粒细胞绿色荧光品系斑马鱼（MPX）处理前后皮肤中性粒细胞数量变化来检测样品是否具有舒缓功效。

3、实验步骤

（1）随机选取斑马鱼于6孔板中，每孔15尾。

（2）水溶给予SLS建立斑马鱼皮肤炎症模型。

（3）水溶给予样品，同时设置正常对照组和模型对照组，其中正常对照组为未经SLS炎症诱导且不给予待测样品处理组，模型对照组为使用SLS处理诱导斑马鱼炎症产生组，每孔容量为3 mL。

（4）28℃条件下避光孵育18h。

（5）每个实验组随机选取10尾斑马鱼置于荧光显微镜下拍照，用高级图像处理软件分析并采集数据，分析斑马鱼皮肤中性粒细胞数量（N），根据公式计算样品的舒缓功效，判断其是否具有舒缓功效。

4、实验结果

注：统计学分析P＜0.05，判定为有显著性差异。

小分子植物水基功效实验表型图，如图8所示，观察发现，实施例3制得的小分子植物水基组中的中性粒细胞数量与模型对照组相比，明显减少，揭示了该样品具有舒缓功效。

实施例11：小分子植物水基修护功效检测

1、体系及样本量

（1）试验样品：实施例2中的小分子植物水基；

（2）试验体系：野生型AB品系斑马鱼；

（3）斑马鱼鱼龄：受精后3天（3 dpf）；

（4）每组实验样本量：15尾（N=10）。

2、原理方法

斑马鱼尾鳍再生分为创面愈合、芽基形成、再生结局三个过程，以芽基形成最为核心。鳍再生的细胞有多个来源，包括表皮细胞、纤维母细胞、成骨细胞在内的多种细胞类型均促进尾鳍的再生，且这些细胞具有高度的谱系限制性。斑马鱼尾鳍的再生与人类皮肤、骨骼、血管等修复作用机制相似。斑马鱼尾鳍因结构简单、易于手术操作、术后不影响生存和便于观察等特点，成为研究组织再生过程的重要模型。通过手术刀沿与躯干垂直方向切断尾鳍，以斑马鱼再生的尾鳍面积定量结果来评价样品的修护功效。

3、实验步骤

（1）用手术刀切除斑马鱼的尾鳍建立斑马鱼尾鳍损伤模型；

（2）将模型斑马鱼随机分配至6孔板中，每孔15尾；

（3）水溶给予样品，同时设置正常对照组和模型对照组，正常对照组为未切除尾鳍的斑马鱼组，模型对照组为尾鳍损伤组，每孔容量为3mL；

（4）28℃条件下避光孵育48h；

（5）每个实验组随机选取10尾斑马鱼置于解剖显微镜下拍照，用高级图像处理软件分析并采集数据，分析斑马鱼尾鳍面积（A），根据公式计算样品的修护功效，判断其是否具有修护功效。

4、实验结果

注：统计学分析P＜0.001，判定为有显著性差异。

小分子植物水基功效实验表型图，如图9所示，观察发现，样品植物杂多糖的斑马鱼尾鳍面积与模型对照组相比，明显增加，揭示了该小分子植物水基具有修护功效。

实施例12：将小分子植物水基添制备成乳液

将实施例1中制得的小分子植物水基配置成乳液（配方1），将去离子水配置成乳液（配方2），两个配方制备工艺相同，均为A相在70-80℃加热溶解；B相在70-80℃加热溶解；A相加入B相中保温搅拌；在60℃下加入C相，搅拌均匀即可。

配方1为：

配方2为

对小分子玫瑰花水制备的乳液和去离子水制备的乳液进行美白功效测试：

1、体系及样本量

（1）试验样品：实施例1中的小分子植物水基；

（2）试验体系：野生型AB品系斑马鱼；

（3）斑马鱼鱼龄：受精后6小时（6hpf）；

（4）每组实验样本量：15尾（三次生物学重复，N=3）。

2、原理方法

护肤产品的美白功效最主要的作用通路是通过抑制酪氨酸酶的活性，从而减少黑色素的生成来实现的，斑马鱼皮肤中的黑色素调控机制与人类高度保守，并且黑色素的生成速度快，在显微镜下能被肉眼清晰的观察到，通过图像处理技术可以对护肤产品对黑色素减少的程度进行定量，从而实现美白功效的评价。

3、实验步骤

（1）挑选受精卵-加样标记-孵育-破膜-摆鱼-观察；

（2）体系3mL：使用6hpfAB斑马鱼，3mL标准稀释水，28℃孵育45h，试验周期设置为0-2dpf；

（3）正常对照组：0-2dpf拍照观察头部黑色素生长情况，采用ImageJ软件分析黑色素面积及密度总值；

（4）样品组：采用小分子玫瑰花水制备的乳液，观察小分子玫瑰花水制备的乳液的美白效果及对斑马鱼的影响；

（5）阳性对照组：去离子水制备的乳液，观察其对斑马鱼的影响。

4、实验结果

如图10所示，样品组与正常对照组对比，样品组斑马鱼头部只有少量的黑色素，正常对照组与阳性对照组相比，阳性对照组斑马鱼头部还存在大量的黑色素，本实验证实了小分子玫瑰花水制备的乳液具有美白的作用。

最后说明的是，以上优选实施例仅用于说明本申请的技术方案而非限制，尽管通过上述优选实施例已经对本申请进行了详细的描述，但本领域技术人员应当理解，可以在形式上和细节上对其作出各种各样的改变，而不偏离本申请权利要求书所限定的范围。

Claims (9)

1.一种小分子植物水基的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）利用植物原料，制备得到汁液；

（2）将步骤（1）中的汁液采用离子交换树脂脱色，收集脱色液；

（3）将步骤（2）中的脱色液置于填充柱中循环，进行小分子团簇化，收集流出液；填充柱从柱顶往柱底依次为第一层填料、第二层填料和第三层填料，所述第一层填料为水晶粉、珍珠粉和活性炭的组合物，所述第二层填料为D113大孔弱酸性阳离子交换树脂，所述第三层填料为滇砂陶；

（4）将步骤（3）中的流出液过滤除菌，制备成半幅宽＜100Hz的一种小分子植物水基。

2.根据权利要求1所述一种小分子植物水基的制备方法，其特征在于，步骤（3）中所述水晶粉、所述珍珠粉、所述活性炭的质量比依次为（1-3）:（1-2）:（1-10）。

3.根据权利要求1所述一种小分子植物水基的制备方法，其特征在于，步骤（3）中所述填充柱每一层填料用量为植物原料用量的2-5倍；所述循环条件为：循环压力20-120Pa，循环速度1-5L/h，循环时间24-48h。

4.根据权利要求1所述一种小分子植物水基的制备方法，其特征在于，步骤（2）中所述离子交换树脂为A-30MP、MB-106UP中的一种或两种；所述离子交换树脂树脂用量为植物原料用量的2-5倍。

5.根据权利要求1所述一种小分子植物水基的制备方法，其特征在于，步骤（1）中所述植物原料含水率为70%以上，选取的植物原料为花、茎或者叶部位。

6.一种由权利要求1-5中任一项所述制备方法制备得到的小分子植物水基。

7.一种权利要求6中所述的小分子植物水基在日化产品中的应用。

8.一种化妆品组合物，其特征在于，包括权利要求1-5中任意一项所述制备方法制备得到的小分子植物水基。

9.根据权利要求8所述的化妆品组合物，其特征在于，所述小分子植物水基在所述化妆品组合物的质量占比为1%-95%。