CN110623885A - 一种抗糖基化的祛黄抗衰组合物及其制备方法与应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种抗糖基化的祛黄抗衰的组合物及其制备方法与应用，属于护肤美容技术领域。本发明优选杜仲叶、葛根等草本原料，采用低温萃取工艺最大限度地获取抗糖基化的祛黄抗衰活性成分，并通过后续的发酵技术，让活性分子经生物修饰后变小，能被机体快速吸收，提高生物利用度和药效。本发明组合物从导致皮肤衰老的根源AGEs出发，通过捕获活性羰基化合物来阻断AGEs的形成，可有效提高细胞自身抗氧化活性，清除各种自由基和活性氧，改善皮肤微循环，迅速排出毒素，净化肌肤，由内而外祛黄美白，多效抗衰，以打造新生美肌。本发明采用天然草本成分，不含任何激素，不产生副作用，可以长期使用，可广泛应用于祛黄美白产品或抗衰老产品的面膜液、护肤霜、护肤乳、护肤精华、护肤水及啫喱等多剂型中。

Description

一种抗糖基化的祛黄抗衰组合物及其制备方法与应用
技术领域
本发明属于护肤美容技术领域，具体涉及一种抗糖基化的祛黄抗衰组合物及其制备方法与应用。
背景技术
衰老作为一种复杂的生理机制，目前存在多种学说，遗传学说、损伤学说、自由基学说、免疫学说、交联学说等。从生化分子水平上来说，自由基氧化和非酶糖基化衰老学说占据领导地位。
非酶糖基化(Non-enzymatic glysation，NEG)反应是在还原糖的羰基和蛋白质上的游离氨基进行非酶性缩合反应。产生的糖基化终产物(AGEs)的形成过程是一个不可逆反应，随着年龄的增长，AGEs在体内不断累积，能使相邻的蛋白质、脂类、核酸等物质发生交联，不仅影响这些物质的结构，也可造成其生物学功能的改变。AGEs在糖尿病和衰老进程中扮演重要的角色。
机体衰老的基本特征是组织器官的萎缩与功能衰退等，其实质是构成组织器官的基本成分-细胞与细胞外基质的丢失，皮肤作为机体的一个组织器官也是如此。随着年龄的增长，皮肤会变薄、含水量减少、弹性消退、萎缩、起皱。根据对各年龄组皮肤活检组织的测量，皮肤的厚度每10年约递减6％。
皮肤由表皮和真皮组成，真皮衰老在皮肤衰老过程中起着重要作用。真皮由成纤维细胞及其产生的胶原纤维、弹力纤维及基质组成。胶原是细胞外基质最基本的成分之一，真皮层75％由胶原蛋白组成。胶原蛋白与细胞外液的葡萄糖发生NEG反应形成AGEs，随着年龄的增长而增多。随着AGEs进行性增加，胶原蛋白形成分子间交联，不断降低了结缔组织的通透性，还使养料及废物的扩散性能减弱、组织延展性和硬度增加；降低了胶原的可溶性而难以被胶原酶水解，造成皮肤弹性下降，皱纹产生。由于AGEs生成的不可逆性导致皱纹不断加深并且不易平复。弹性蛋白与细胞外液的葡萄糖发生糖基化反应生成AGEs，导致弹性纤维发生变性交联，弹性消退、皮肤变薄、含水量减少，皮肤进一步萎缩、变皱。
皮肤老化的另一主要特征是皮肤变黄和老年色斑的出现，这一变化主要与老年色素的形成有关。老年色素包括生物体内的AGEs、脂褐素等。脂质过氧化是不饱和脂肪酸与氧自由基反应失去了一个氢原子，形成过氧自由基，过氧自由基经再分解形成各种碳酸二甲酯(DMCs)。来自脂质过氧化反应及NEG反应的DCMs与不同生物分子以交联或聚合的方式生成棕色、具荧光性的物质即AGEs、脂褐素，随着年龄的增长，AGEs、脂褐素会逐渐积累在皮肤细胞及色素细胞上，最终导致皮肤变黄和褐斑的出现。
目前资料显示，有关抑制糖基化反应的方法主要倾向于预防AGEs的形成、减少AGEs对细胞的影响和破坏AGEs的交联三方面。
氨基胍及其类似物、硫醇化合物、自身抗体、替尼西坦等，可通过竞争蛋白质游离氨基或捕捉DMCs等途径来抑制糖基化反应的进行和减少AGEs的产生。目前氨基胍等药物已经用于糖尿病等疾病的临床治疗，而在延缓皮肤衰老的研究与应用却鲜见报道。因此通过抑制糖基化反应来延缓皮肤衰老，将会成为一个重要的研究方向。通过现代生物技术从天然植物中分离提取得到抑制糖基化反应的活性成分，已经成为延缓皮肤衰老方面的一个新的切入点。
发明内容
为了实现上述目的，本发明所采用的技术方案如下：
本发明提供了一种抗糖基化的祛黄抗衰组合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)选取杜仲叶、葛根、茶叶、山竹、松树皮、蓝莓、黑加仑、桑葚、石榴皮和葡萄籽，然后分别对各原料进行拣选及清洗，除去粗梗和泥沙，晾干后，分别将每种原料切碎；
(2)将杜仲叶、山竹、松树皮、石榴皮、葡萄籽分别加入60-90％的乙醇在30～45℃下进行低温萃取三次，过滤，合并滤液，浓缩除去溶剂得到各药材的醇提取物；
(3)将葛根、茶叶、蓝莓、黑加仑、桑葚分别加入去离子水在40～50℃下进行低温萃取三次，过滤，合并滤液，浓缩至合适的比例，分别得到各原料的水提取物；
(4)按配方，称取所需量的醇提取物混合于密闭容器中，加入丁二醇混合溶解完全后，再加入适当比例的水提取物和水，搅拌均匀后，密封；然后放置于阴凉通风处，静置发酵一段时间后，得到发酵混合液；
(5)发酵混合液中加入适当比例的防腐剂抗菌肽，即得到抗糖基化的祛黄抗衰组合物。
本发明提供的一种抗糖基化的祛黄抗衰组合物，其特征在于该组合物由以下重量份数的组分组成：1～10份的杜仲叶醇提取物、1～10份的葛根水提取物、1～5份的抗菌肽、1～10份丁二醇和1～10份去离子水。
本发明还提供了另一种抗糖基化的祛黄抗衰组合物，其特征在于该组合物由以下重量份数的组分组成：1～10份的杜仲叶醇提取物、1～10份的葛根水提取物、1～5份的抗菌肽、1～10份丁二醇和1～10份去离子水和1～10份的茶叶水提取物、1～10份的山竹醇提取物、1～10份的松树皮醇提取物、1～10份的蓝莓水提取物、1～10份的黑加仑水提取物、1～10份的桑葚水提取物、1～10份的石榴皮醇提取物、1～10份的葡萄籽醇提取物中的一种或一种以上的组合物。
所述的抗糖基化的祛黄抗衰组合物在制备祛黄美白产品或抗衰老产品中的应用。
所述的应用，其特征在于，所述的祛黄美白产品或抗衰老产品包括面膜液、护肤霜、护肤乳液、护肤精华、护肤水或护肤啫喱。
本发明提供了两种抗糖基化的祛黄抗衰组合物，具有以下优势：
1、本发明提供的抗糖基化的祛黄抗衰组合物，立足于皮肤衰老的主要机制--非酶糖基化和自由基氧化机制，精选具有抗糖基化、清除自由基、促进皮肤微循环、促进排毒、净化肌肤，祛黄亮肤的功效成分的杜仲叶和葛根，并辅以其他活性成分；协同增效，可从导致皮肤衰老的根源AGEs出发，通过捕获活性羰基化合物来阻断AGEs的形成，并有效提高细胞自身抗氧化活性，清除各种自由基和活性氧，改善皮肤微循环，迅速排出毒素，净化肌肤，由内而外祛黄美白，多效抗衰，以打造新生美肌；
2、本发明的组合物，来源丰富，制作方法简单，适用于规模化的工业生产；
3、本发明提供的组合物，采用低温萃取和发酵工艺，可使原料中的有效成分最大限度得以获取出来，并经后续生物修饰，让活性分子变小，可提高其生物利用度和药效；
4、本发明采用天然草本原料，质量可控，不含任何激素，安全无副作用，可广泛应用于祛黄美白产品和抗衰老产品中。
具体实施方式
实施例1～实施例4 一种抗抗糖基化的祛黄抗衰组合物的制备
表1为实施例1～实施例4的一种抗HPV感染的药物组合物的具体配方。
表1 本发明实施例1～实施例4的4个具体配方
实施例1～实施例4中A1～A4制备方法：
(1))选取高品质的杜仲叶、葛根、茶叶、山竹、松树皮、蓝莓、黑加仑、桑葚、石榴皮和葡萄籽，然后分别对各原料进行拣选及清洗，除去粗梗和泥沙，晾干后，分别将每种原料切碎。
(2)将杜仲叶、山竹、松树皮、石榴皮、葡萄籽分别加入10倍于药材重量的75％的乙醇在30～45℃下进行低温萃取三次，过滤，合并滤液，浓缩除去溶剂至合适体积，得到各药材的醇提取物。
(3)将葛根、茶叶、蓝莓、黑加仑、桑葚分别加入10倍于药材重量的去离子水在40～50℃下进行低温萃取三次，过滤，合并滤液，浓缩至合适的比例，分别得到各原料的水提取物；
(4)按表1中A1～A4中各配方，分别称取所需量的醇提取物混合于密闭容器中，加入丁二醇混合溶解完全后，再加入适当比例的水提取物和水，搅拌均匀后，密封；然后放置于阴凉通风处，静置发酵60天后，得到发酵混合液B1～B4。
(5)发酵混合液中加入适当比例的防腐剂抗菌肽，即得到抗糖基化的祛黄抗衰组合物C1～C4。
实施例5～7 含抗糖基化祛黄抗衰组合物面膜液的制备
面膜液配方：如表2中的D1～D3配方。
表2：祛黄抗衰面膜液配方
制备方法：
(1)按总重量100g分别称取实施例5～实施例7中D1～D3中A相各组分，在75℃下搅拌溶解完全，搅拌保温15-20min；缓慢降温至45℃；
(2)加入C组分，搅拌均匀；
(3)再加入预先混合号的D相中各组分；
(4)然后加入B相调节体系的pH为5.5左右，冷却至37℃后，放料。即获得抗糖基化的祛黄抗衰面膜液D1～D3。
实施例8～实施例10 含抗糖基化的祛黄抗衰组合物的护肤乳的制备
护肤乳配方：如表3中的E1～E3配方。
表3 含抗糖基化的祛黄抗衰组合物的护肤乳的配方
制备方法：
(1)将A相的各组分按比例称取合适的量，混合后，在80-85℃下搅拌溶解，并保温15-20min；
(2)将B相各组分按比例称取合适量，混合后，在90-95℃下搅拌溶解，并保温15-20min；
(3)将A、B相混合，在10000r/min下均质5min，然后在85℃保温搅拌30min，缓慢降温至50℃；
(4)加入C相，搅拌均匀后，再加入预先混合好的D相；
(5)降温至37℃，下料，即获得含抗糖基化祛黄抗衰组合物的护肤乳E1～E3。
实施例11～实施例13 含抗糖基化的祛黄抗衰护肤水F1～F3的制备
护肤水配方：如表4中的F1～F3配方。
表4 含抗糖基化的祛黄抗衰组合物的护肤水的配方
制备方法：
(1)按比例分别称取实施例11～实施例13中F1～F3中A相各组分，在常温下搅拌溶解完全；
(2)加入B相组分，搅拌均匀；
(3)再加入预先混合好的C相中各组分；
(4)然后加入D相调节体系的pH为5.5左右，放料。即获得抗糖基化的祛黄抗衰护肤水F1～F3。
以下通过具体试验例来说明本发明抗糖基化的祛黄抗衰组合物的有益效果。
试验例1 抗糖基化作用
通过利用牛血清蛋白与葡萄糖经由非酶促形成糖基化终产物(AGEs)。
测试样品：实施例1中所获得的抗糖基化的祛黄抗衰组合物C1；空白对照：不含测试样品的试剂空白。
分别取测试样品、牛血清白蛋白水溶液(终浓度为10mg/ml)和葡萄糖水溶液(终浓度为0.2M)加入至含0.02％叠氮化钠50mM磷酸缓冲液中(pH7.4)中，混合均匀后，使体系中测试样品的终浓度分别为0.1％、0.25％、0.5％、1.0％、2.0％和5.0％；同时做不添加测试样品的试剂空白作空白对照，每个样品三个重复。在37℃下放置14d后，取样，使用荧光光度计(激发波长350nm，发射波长450nm)检测形成的AGE的荧光值。
糖基化抑制率(％)＝(1-A350/450nm样品/A350/450nm空白)×100％
抗糖基化的祛黄抗衰组合物C1对AGEs形成的抑制作用结果如表5所示。由结果可知，抗糖基化的去黄抗衰组合物C1可显著抑制AGEs的形成(P＜0.01)，而且与其浓度成依赖关系；当组合物C1的浓度为0.5％以上，对AGEs形成的抑制率已经超过50％，当浓度达到5％时，对AGEs的形成抑制率达到95.28％。
表5 抗糖基化的祛黄抗衰组合物C1对AGEs形成的抑制作用
试验例2 抗氧化、清除自由基作用
此试验例通过评估对超氧阴离子和羟基自由基的清除能力，来评估抗糖基化的祛黄抗衰组合物的抗氧化活性。
测试样品：实施例1中所获得的抗糖基化的祛黄抗衰组合物C1。
测试方法：
(1)超氧阴离子的清楚作用：磷酸缓冲液(pH7.8)中，总体积3ml，内含NBT50μmol/l，核黄素2μmol/l，氰化钠0.2μmol/l，EDTA6.67mmol/l，以及不同浓度的测试样品，同时做试剂空白，充分摇匀后，25±0.5℃水浴，置于20w日光灯下照射12min，于560nm处比色测定，每个样品三重复，计算清除率(％)。超氧阴离子清除率(％)＝(1-A样品/A空白)×100％
(2)羟基自由基的清除作用：在每一测试管中，依次加入20mmol/l EDTA-2Na和12mmol/l FeSO4混合液0.1ml，不同浓度的测试样品0.1ml或去离子水0.ml(空白)以及100mmol/l的H2O20.1ml，再用30mmol/l苯甲酸的磷酸缓冲液(pH7.0)补至4.0ml。混匀，置于37℃水浴保温1h后，用荧光光度计(Ex＝300nm；Em＝408nm)测定其荧光强度，计算清除率(％)，每个样品三重复。羟基自由基的清除率(％)＝(1-A300/408nm样品/A300/408nm空白)×100％
抗糖基化的祛黄抗衰组合物C1对超氧阴离子和羟基自由基的清除作用如表6、表7所示。由此可见，抗糖基化的去黄抗衰组合物C1对超氧阴离子和羟基自由基均具有显著的清除作用，且与浓度成依赖关系。
表6 抗糖基化的祛黄抗衰组合物C1对超氧阴离子的清除作用
表7 抗糖基化的祛黄抗衰组合物C1对羟基自由基的清除作用
以上内容是结合具体的优选实施方式对本发明所作的进一步详细说明，不能认定本发明的具体实施只局限于这些说明。对于本发明所属技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干简单推演或替换，都应当视为属于本发明的保护范围。

Claims (5)

1.一种抗糖基化的祛黄抗衰组合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)选取杜仲叶、葛根、茶叶、山竹、松树皮、蓝莓、黑加仑、桑葚、石榴皮和葡萄籽，然后分别对各原料进行拣选及清洗，除去粗梗和泥沙，晾干后，分别将每种原料切碎；
(2)将杜仲叶、山竹、松树皮、石榴皮、葡萄籽分别加入60-90％的乙醇在30～45℃下进行低温萃取三次，过滤，合并滤液，浓缩除去溶剂得到各药材的醇提取物；
(3)将葛根、茶叶、蓝莓、黑加仑、桑葚分别加入去离子水在40～50℃下进行低温萃取三次，过滤，合并滤液，浓缩至合适的比例，分别得到各原料的水提取物；
(4)按配方，称取所需量的醇提取物混合于密闭容器中，加入丁二醇混合溶解完全后，再加入适当比例的水提取物和去离子水，搅拌均匀后，密封；然后放置于阴凉通风处，静置发酵一段时间后，得到发酵混合液；
(5)发酵混合液中加入适当比例的抗菌肽，即得到抗糖基化的祛黄抗衰组合物。
2.一种抗糖基化的祛黄抗衰组合物，其特征在于该组合物由以下重量份数的组分组成：1～10份的杜仲叶醇提取物、1～10份的葛根水提取物、1～5份的抗菌肽、1～10份丁二醇和1～10份去离子水。
3.一种抗糖基化的祛黄抗衰组合物，其特征在于该组合物由以下重量份数的组分组成：1～10份的杜仲叶醇提取物、1～10份的葛根水提取物、1～5份的抗菌肽、1～10份丁二醇和1～10份去离子水和1～10份的茶叶水提取物、1～10份的山竹醇提取物、1～10份的松树皮醇提取物、1～10份的蓝莓水提取物、1～10份的黑加仑水提取物、1～10份的桑葚水提取物、1～10份的石榴皮醇提取物、1～10份的葡萄籽醇提取物中的一种或一种以上的组合物。
4.根据权利要求2、3任一项所述的抗糖基化的祛黄抗衰组合物在制备祛黄美白产品或抗衰老产品中的应用。
5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述的祛黄美白产品或抗衰老产品包括面膜液、护肤霜、护肤乳液、护肤精华、护肤水或护肤啫喱。
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