CN117919143A - 一种舒缓抗炎组合物、舒敏霜、制备方法及应用 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种舒缓抗炎组合物、舒敏霜、制备方法及应用,涉及敏感肌舒缓抗炎技术领域。该舒缓抗炎组合物包括迷迭香叶提取物、积雪草提取物、光果甘草提取物和苦参根提取物;该舒敏霜包含该舒缓抗炎组合物。该制备方法用于制备舒敏霜。该应用包括该舒缓抗炎组合物在制备洗护产品中的应用、该舒缓抗炎组合物在制备TRPV1抑制剂中的应用、该舒缓抗炎组合物在制备促炎因子IL‑1β抑制剂中的应用以及该舒缓抗炎组合物在制备炎性介质PGE2抑制剂中的应用。本发明提供了天然植物来源的舒缓抗炎组合物,使得所制备的舒敏霜及应用能够解决现有技术中长期采用化学合成物缓解敏感肌对皮肤产生副作用的问题。
Description
技术领域
本发明涉及敏感肌舒缓抗炎技术领域,具体涉及一种舒缓抗炎组合物、舒敏霜、制备方法及应用。
背景技术
在肌肤护理方面,离不开护肤品的使用。然而,因个体差异可能会导致部分消费者出现敏感性问题,如敏感肌。敏感肌特指皮肤在生理或病理条件下发生的一种高反应状态,主要发生于面部,临床表现为受到物理、化学和精神等因素刺激时皮肤易出现灼热、刺痛、瘙痒及紧绷感等主观症状,伴或不伴红斑、鳞屑、毛细血管扩张等客观体征。导致敏感肌发作的有遗传、年龄和激素水平等内在原因,也有过度护肤清洁、季节变化、空气污染加重和使用刺激性药物等外在原因。因此,敏感肌的发生机制可以概括为皮肤屏障损伤、血管反应增高和免疫及炎症反应。
如何有效解决敏感肌的发红、瘙痒、刺痛成为市场热点和痛点。近年来,虽然有部分研究对于切断产生皮肤发红、瘙痒、刺痛的辣椒素通道的信号传递提供了新的思路,但是有效成分大多为化学合成物,如反式-4-叔丁基环己醇,长期使用会对皮肤产生副作用。考虑到纯净美妆概念的兴起,国内消费者也越来越关注原料的“安全、天然、绿色、可持续发展”。天然植物来源的TRVP1(transient receptor potential vanilloid-1)抑制剂也是符合市场趋势和需求的,在敏感肌市场规模将保持较快的增长态势。
综上所述,本发明需要提供一种舒缓抗炎组合物、舒敏霜、制备方法及应用,通过采用天然植物来源的舒缓抗炎组合物,使得所制备的舒敏霜及应用能够解决现有技术中长期采用化学合成物缓解敏感肌对皮肤产生副作用的问题。
发明内容
本发明目的在于提供一种舒缓抗炎组合物、舒敏霜、制备方法及应用,具体技术方案如下:
在第一方面,本发明提供了一种舒缓抗炎组合物,所述舒缓抗炎组合物包括迷迭香叶提取物、积雪草提取物、光果甘草提取物和苦参根提取物。
可选的,所述迷迭香叶提取物、所述积雪草提取物、所述光果甘草提取物和所述苦参根提取物的质量之比为1-20:1-10:1-10:1-5。
本发明选用的迷迭香叶提取物取自迷迭香。迷迭香系唇形科鼠尾草属植物,常绿小灌木,原产欧洲、北非及地中海沿岸,近年来在我国云南、湖南、贵州、福建等省区均有种植。迷迭香是一种多用途的经济作物,从迷迭香叶中可提取多种水溶性迷迭香叶提取物,主要包括迷迭香酸、绿原酸、咖啡酸、阿魏酸、L-抗坏血酸、橙皮苷和异橙皮苷等;迷迭香叶提取物除了具有抗氧化功效外,它还具有抗菌、抗炎和抗真菌功效,对湿疹、痤疮等皮肤病具有强大的镇静作用。
本发明选用的积雪草提取物取自积雪草。积雪草属于伞形科积雪草属植物,产于印度。南朝医药学家陶弘景曾说过:“此草以寒凉得名,其性大寒,故名积雪草”。始载于神农本草经,表明积雪草在我国传统医药领域已经有悠久的历史。积雪草提取物中主要功效成分为积雪草苷,羟基积雪草苷、积雪草酸和羟基积雪草酸,积雪草苷可以促进体内胶原合成和新血管生成、刺激肉芽生长等重要作用,有助于伤口愈合。积雪草提取物具有抗炎、修护、舒缓和去红等护肤效果,其中,去红是通过积雪草提取物调节皮肤毛细血管通透性,改善血管壁功能,增强肌肤微循环。积雪草提取物能减少前炎症介质(IL-1,MMP-1)产生,以此提高肌肤自身屏障的修复能力,防止肌肤免疫功能紊乱导致皮肤产生问题。此外,积雪草提取物还具有不错的抗氧化作用,可抑制自由基活性、淡化黑色素沉着、改善肌肤血液循环、更新肌肤细胞再生,有助于细腻和提亮肌肤。
本发明选用的光果甘草提取物取自光果甘草的茎或根,其活性成分主要为三萜类、黄酮类(如光甘草定)、多糖类(如甘草甜素)、氨基酸、生物碱和有机酸(如甘草酸)等化合物。光果甘草提取物的抗炎机理主要是减少趋化因子和促炎症因子的表达、抑制致炎性因子以及抑制类固醇代谢酶等不同机制协同产生抗炎作用。其中,光甘草定的抗炎活性于1998年首次被证实,光甘草定在浓度为6.25μg/mL时就能够有效抑制由花生四烯酸刺激生成的COX(环氧化酶)的活性,抑制率为31.9%。
本发明选用的苦参根提取物取自苦参的根。苦参,味苦、性寒,具有清热解毒、祛风、杀虫、利尿等功效。药理学研究表明,苦参中含有的生物碱对细菌有抑制作用,例如变形菌、葡萄球菌等具有抑制作用。所以临床上苦参一般用于抗菌消炎。苦参根提取物的活性成分主要为苦参碱;苦参根提取物具有抗菌消炎的效果。
在第二方面,本发明提供了一种舒敏霜,所述舒敏霜包含A相物质、B相物质、C相物质和D相物质;
对所述舒敏霜中的各组分按质量百分数计,所述A相物质包括0.05%-0.1%的EDTA二钠、2%-8%的甘油、1%-8%的甘油聚醚-26、0.02%-0.1%的透明质酸钠、0.5%-1%的丙烯酸羟乙酯/丙烯酰二甲基牛磺酸钠共聚物和44.19%-87.96%的水;所述B相物质包括0.2%-1%的鲸蜡硬脂基葡糖苷、1%-5%的鲸蜡硬脂醇、1%-5%的PEG-20硬脂酸酯、1%-5%的聚二甲基硅氧烷、1%-5%的碳酸二辛酯、1%-5%的氢化聚异丁烯、1%-3%的聚二甲基硅氧烷交联物有机硅弹性体;所述C相物质包括0.2%-1%的丙烯酸钠/丙烯酰二甲基牛磺酸钠共聚物、0.1%-0.5%异十六烷、0.03%-0.05%聚山梨醇酯-80、0.03%-0.05%山梨坦油酸酯;所述D相物质包括0.2%-1%的辛酰羟肟酸、0.2%-1%的1,2-己二醇、0.5%-5%的丙二醇、0.5%-5%的舒缓抗炎组合物和0.01%-0.05%的香精。
在第三方面,本发明提供了一种舒敏霜的制备方法,包括:
步骤S1、将所述A相物质中所需的各组分按所需质量称取后混合,且边加热边搅拌至80-90℃,搅拌速度为300-500转/min,保温10-15分钟备用;将所述B相物质中所需的各组分按所需质量称取后混合,且边加热边搅拌至80-90℃,搅拌速度为300-500转/min,保温10-15分钟备用;
步骤S2、将所述B相物质加入所述A相物质中,在80-90℃条件下,均质5-10分钟,得到预制物,其中,均质速度为3000-3500r/min;将所述预制物保温10-15分钟备用;
步骤S3、对所述预制物降温,并搅拌至40-45℃,依次加入所述C相物质和所述D相物质,搅拌均匀,冷却至室温,得到所述舒敏霜。
在第四方面,本发明提供了一种采用所述舒缓抗炎组合物在制备洗护产品中的应用。
可选的,所述舒缓抗炎组合物在所述洗护产品中的质量占比为0.5%-5%。
可选的,所述洗护产品包括面膜、爽肤水、洁面泡沫、精华露、乳液、膏霜和头皮护理液。
在第五方面,本发明提供了一种采用所述舒缓抗炎组合物在制备TRPV1抑制剂中的应用。
在第六方面,本发明提供了一种采用所述舒缓抗炎组合物在制备促炎因子IL-1β抑制剂中的应用。
在第七方面,本发明提供了一种采用所述的舒缓抗炎组合物在制备炎性介质PGE2抑制剂中的应用。
应用本发明的技术方案,至少具有以下有益效果:
(1)本发明提供的一种舒缓抗炎组合物,将天然植物原料迷迭香叶提取物、积雪草提取物、光果甘草提取物和苦参根提取物组合使用,以“内营外卫、内调外养”的整体性配伍理念,协同抑制TRPV1表达,起到舒缓抗炎功效,能够解决现有技术中长期采用化学合成物缓解敏感肌对皮肤产生副作用的问题。具体的,对内:迷迭香叶提取物主镇痛,光果甘草提取物辅抗炎;迷迭香叶提取物中的酚类物质如迷迭香酸可抑制α-突触核蛋白聚集途径和细胞毒性,占据GABA受体,增强细胞膜离子通透性变化并减少神经系统障碍;光果甘草提取物中甘草甜素、光甘草定等可减少趋化因子和促炎症因子的表达,抑制类固醇代谢酶等,即采用迷迭香叶提取物和光果甘草提取物以不同机制协同产生多维度镇痛抗炎作用。对外:积雪草提取物主修护,苦参根提取物辅抗菌。积雪草提取物能减少前炎症介质(IL-1,MMP-1)产生,以此提高肌肤自身屏障的修复能力。积雪草苷提取物能够促进体内胶原合成和新血管生成、刺激肉芽生长等重要作用,有助于损伤部位愈合。苦参根提取物可防御外部入侵的细菌和真菌等,起到抗菌和抵御作用。
(2)本发明提供了一种舒敏霜能够作为敏感肌护肤品,具有舒缓抗炎的功效,能够减少灼烧感,去红消肿。在所述舒敏霜中使用的舒缓抗炎组合物,几乎无色无味,稳定性强,水溶性好,与其他组分配伍性强。
(3)本发明提供了一种舒敏霜的制备方法,采用步骤S1-S3组合使用能够制备出舒缓抗炎的敏感肌护肤品。具体的,采用步骤S1便于A相、B相分别溶解并混合均匀;采用步骤S2便于A相、B相充分均质;采用步骤S3便于保持活性成分功效。因此,本发明将采用步骤S1-S3组合使用能够制备出舒缓抗炎的敏感肌护肤品。
(4)本发明提供了一种采用所述舒缓抗炎组合物在制备洗护产品中的应用,使得所制备的洗护产品具有舒缓抗炎的功效。
(4)本发明提供了一种采用所述舒缓抗炎组合物在制备TRPV1抑制剂中的应用,使得所制备的TRPV1抑制剂具有抑制TRPV1蛋白表达的效果。
(6)本发明提供了一种采用所述舒缓抗炎组合物在制备促炎因子IL-1β抑制剂中的应用,使得所制备的促炎因子IL-1β抑制剂具有抑制促炎因子IL-1β表达的效果。
(7)本发明提供了一种采用所述的舒缓抗炎组合物在制备炎性介质PGE2抑制剂中的应用,使得所制备的炎性介质PGE2抑制剂具有抑制炎性介质PGE2表达的效果。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例对本发明中的技术方案进行清楚、完整地描述,显然,所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例,而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例,本领域普通技术人员所获得的所有其他实施例,都属于本发明保护的范围。
实施例1:
一种舒缓抗炎组合物,采用迷迭香叶提取物、积雪草提取物、光果甘草提取物和苦参根提取物按质量之比为12:2:2:1混合均匀得到预制组合物,将预制组合物加入到1,3-丙二醇和水中,搅拌均匀,即得到舒缓抗炎组合物;其中,预制组合物、1,3-丙二醇和水的质量比为1:30:19。
所述迷迭香叶提取物的制备方法(为常规制备方法)如下:
首先,将迷迭香叶粉加入挟带剂中混匀,通入二氧化碳依次进行静态萃取和循环萃取后,分离,得到迷迭香萃取液;其次,将迷迭香萃取液过滤、浓缩,得到迷迭香叶提取物。
所述积雪草提取物的制备方法(为常规制备方法)如下:
首先,将积雪草粉末浸泡在体积分数为75%乙醇中,且在50℃下超声提取4次,每次1小时,过滤得到浸膏;其中,积雪草粉末与75%乙醇的体积比为1:5;其次,将浸膏溶解后用等体积石油醚萃取3次,下相水用等体积乙酸乙酯萃取4次,汇集下相水溶液;最后,用活性炭脱色水溶液,制备得到积雪草提取物。
所述光果甘草提取物的制备方法(为常规制备方法)如下:
首先,将光果甘草药材放置于粉碎机中粉碎,且粉碎后过60目筛网;其次,以筛分后的光果甘草为原料,按料液比(m/m)1:10,先用水回流提取后,再用85%(v/v)乙醇回流提取2次,得到提取液,每次1.5h;最后,提取液过滤浓缩干燥得到光果甘草提取物。
所述苦参根提取物的制备方法(为常规制备方法)如下:
首先,将干燥的苦参根粉碎得到苦参根粉;其次,采用筛分目数40目的苦参根粉;最后,将筛分后的苦参根粉和60%乙醇(v/v)按料液比(m/m)1:2混合,回流提取2次。
实施例2:
与实施例1不同的是,采用迷迭香叶提取物、积雪草提取物、光果甘草提取物和苦参根提取物按质量之比为16:3:2:2混合均匀得到预制组合物。
实施例3:
与实施例1不同的是,采用迷迭香叶提取物、积雪草提取物、光果甘草提取物和苦参根提取物按质量之比为18:4:2:1.6混合均匀得到预制组合物。
对比例1:
与实施例1不同的是,迷迭香叶提取物的用量为零。
对比例2:
与实施例1不同的是,积雪草提取物的用量为零。
对比例3:
与实施例1不同的是,光果甘草提取物的用量为零。
对比例4:
与实施例1不同的是,苦参根提取物的用量为零。
本发明在实施例1-3的基础上还做了分别制备舒敏霜的实施例4-6;在对比例1-4的基础上还做了分别制备舒敏霜的对比例5-8。此外,本发明在实施例1的基础上还做了舒缓抗炎组合物零用量的制备舒敏霜的对比例9。对于实施例4-6和对比例5-9的具体制备步骤如下:
步骤S1、将所述A相物质中所需的各组分按所需质量称取后混合,且边加热边搅拌至85℃,搅拌速度为300转/min,保温10分钟备用;将所述B相物质中所需的各组分按所需质量称取后混合,且边加热边搅拌至85℃,搅拌速度为300转/min,保温10分钟备用;
步骤S2、将所述B相物质加入所述A相物质中,在85℃条件下,均质5分钟,得到预制物,其中,均质速度为3000r/min;将所述预制物保温10分钟备用;
步骤S3、对所述预制物降温,并搅拌至45℃,依次加入所述C相物质和所述D相物质,搅拌均匀,冷却至室温,得到所述舒敏霜。
在实施例4-6中的区别之处在于使用了不同用量的舒缓抗炎组合物。在实施例4-6中各组分用量(按质量百分数计)具体如表1所示。
表1在实施例4-6中各组分用量情况
在对比例5-9中的区别之处在于使用了不同用量的舒缓抗炎组合物。在对比例5-9中各组分用量(按质量百分数计)具体如表2所示。
表2在对比例5-9中各组分用量情况
抑制TRPV1蛋白表达的效果实验:
具体的,根据《基于CAP刺激角质形成细胞的辣椒素受体(TRPV1)蛋白含量检测方法》方法,对实施例1-3和对比例1-4所制得的舒缓抗炎组合物各取样0.1%(v/v)(即样品A1-A7)分别进行抑制TRPV1蛋白表达的实验。实验步骤如下:
1)首先,在12孔板中添加0.9mL EpiGrowth培养液;其次,将3D表皮模型转移到12孔板中。
2)在12孔板上标注测试组,即BC组、NC组、PC组和样品组1-7。具体的,
BC组不做任何处理,即仅采用EpiGrowth培养液和3D表皮模型处理的测试组;
NC组为采用EpiGrowth培养液、3D表皮模型和辣椒素CAP处理的测试组;
PC组为采用EpiGrowth培养液、3D表皮模型、辣椒素CAP和反式-4-叔丁基环己醇处理的测试组;另外,在PC组液下添加15.6μg/mL的PC工作液;
样品组1为采用EpiGrowth培养液、3D表皮模型、辣椒素CAP和样品A1(取至实施例1)处理的测试组;
样品组2为采用EpiGrowth培养液、3D表皮模型、辣椒素CAP和样品A2(取至实施例2)处理的测试组;
样品组3为采用EpiGrowth培养液、3D表皮模型、辣椒素CAP和样品A3(取至实施例3)处理的测试组;
样品组4为采用EpiGrowth培养液、3D表皮模型、辣椒素CAP和样品A4(取至对比例1)处理的测试组;
样品组5为采用EpiGrowth培养液、3D表皮模型、辣椒素CAP和样品A5(取至对比例2)处理的测试组;
样品组6为采用EpiGrowth培养液、3D表皮模型、辣椒素CAP和样品A6(取至对比例3)处理的测试组;
样品组7为采用EpiGrowth培养液、3D表皮模型、辣椒素CAP和样品A7(取至对比例4)处理的测试组;
在样品组1-样品组7的表面添加0.1%(v/v)样品工作液,将样品工作液均匀分布于3D表皮模型表面,置于CO2培养箱37℃下,体积分数为5%的CO2条件中孵育24h。
3)孵育结束后,用无菌PBS溶液清洗3D表皮模型表面残留的样品A1-A7,用无菌棉签拭去3D表皮模型内、外残留液体。
4)免疫荧光测试:用4%(v/v)的多聚甲醛进行固定处理,固定30min后,进行辣椒素受体TRPV1的免疫荧光检测,显微镜下拍照观察,采集图片并分析。
5)结果统计分析:应用GraphPad Prism作图,结果表示为Mean±SD;各组间比较采用t-test统计分析,统计分析均为双尾。具体分析结果参见表3所示。
表3TRPV1免疫荧光分析结果汇总表
组别 | 相对IOD/细胞树平均值 | SD | P-value | 抑制率(vsNC) |
BC | 1.00 | 0.15 | / | / |
NC | 3.13 | 0.22 | 0.000## | / |
PC | 2.21 | 0.18 | 0.005** | / |
样品A1(实施例1) | 2.23 | 0.08 | 0.003** | 28.75% |
样品A2(实施例2) | 2.30 | 0.09 | 0.004** | 26.51% |
样品A3(实施例3) | 2.45 | 0.10 | 0.005** | 21.72% |
样品A4(对比例1) | 2.85 | 0.12 | 0.003** | 8.95% |
样品A5(对比例2) | 2.99 | 0.25 | 0.004** | 4.47% |
样品A6(对比例3) | 2.89 | 0.13 | 0.005** | 7.67% |
样品A7(对比例4) | 3.05 | 0.15 | 0.003** | 2.56% |
备注:在表3中P<0.05认为具有显著差异,P<0.01认为具有极显著差异;IOD(积分光密度)的数值反应TRPV1的含量;SD表示IOD的数值的标准差;采用用t-test方法进行统计分析时,与BC组相比,显著性以#表示,P-value<0.05表示为#,P-value<0.01表示为##;与NC组相比,显著性以*表示,P-value<0.05表示为*,P-value<0.01表示为**。
由表3数据知,与BC组相比,NC组的TRPV1蛋白含量显著上升,说明本次测试刺激条件有效。与NC组相比,PC组的TRPV1蛋白含量显著下降,说明本次测试阳性对照有效。与NC组相比,实施例1-3的TRPV1蛋白含量显著下降,抑制率分别为28.75%、26.51%、21.72%。另外,与NC组相比,对比例1-4的TRPV1蛋白含量下降水平减弱,抑制率分别为8.95%、4.47%、7.67%和2.56%。
需要说明的是TRPV1为门控离子通道受体,也称为辣椒素受体,是一种热敏感受体。辣椒素作用3D表皮模型后通过激活TRPV1,进一步导致Ca2+内流,进而诱发神经反应,出现灼烧等感觉。因此,抑制TRPV1蛋白含量可以达到舒缓的功效。
抑制促炎因子IL-1β表达和抑制炎性介质PGE2表达的效果实验:
具体的,根据《基于LPS刺激巨噬细胞的促炎因子(IL-1β)和炎性介质(PGE2)含量检测方法》开展检测,对实施例1-3和对比例1-4所制得的舒缓抗炎组合物各取样1.25%(v/v)(即样品B1-B7,对应的样品组为8-14)分别进行抑制促炎因子IL-1β表达的实验;对实施例1-3和对比例1-4所制得的舒缓抗炎组合物各取样1.25%(v/v)(即样品C1-C7,对应的样品组为15-21)分别进行抑制炎性介质PGE2表达的实验。
抑制促炎因子IL-1β表达的实验步骤如下:
BC组不做任何处理,即仅采用胎牛血清(兰州荣晔)培养液和巨噬细胞模型处理的测试组;
NC组为采用胎牛血清培养液、巨噬细胞模型和脂多糖LPS处理的测试组;
PC组为采用胎牛血清培养液、巨噬细胞模型和脂多糖LPS和地塞米松处理的测试组;地塞米松工作液配制:吸取2μL的10%(v/v)地塞米松母液溶于2mL的KC2500培养液(广东博溪生物)中,配制成0.01%地塞米松;
1)巨噬细胞接种:以2.2×105个/孔的接种密度将巨噬细胞接种到10孔板中,每孔加2mL的胎牛血清培养液,将接种好的巨噬细胞培养板放入培养箱中继续培养24h(体积分数5%CO2、37℃)。
2)吸弃步骤1)孔中的胎牛血清培养液。NC组每孔加入1.8mL的胎牛血清培养液;PC组每孔加入1.8mL的地塞米松工作液;BC组每孔加入1.8mL胎牛血清培养液;样品组(具体为样品组8-14)每孔加入1.8mL含有1.25%(v/v)受试物的胎牛血清培养液;
具体的,样品组8为采用胎牛血清培养液、巨噬细胞模型和、脂多糖LPS和样品B1(取至实施例1)处理的测试组;
样品组9为采用胎牛血清培养液、巨噬细胞模型和、脂多糖LPS和样品B2(取至实施例2)处理的测试组;
样品组10为采用胎牛血清培养液、巨噬细胞模型和、脂多糖LPS和样品B3(取至实施例3)处理的测试组;
样品组11为采用胎牛血清培养液、巨噬细胞模型和、脂多糖LPS和样品B4(取至对比例1)处理的测试组;
样品组12为采用胎牛血清培养液、巨噬细胞模型和、脂多糖LPS和样品B5(取至对比例2)处理的测试组;
样品组13为采用胎牛血清培养液、巨噬细胞模型和、脂多糖LPS和样品B6(取至对比例3)处理的测试组;
样品组14为采用胎牛血清培养液、巨噬细胞模型和、脂多糖LPS和样品B7(取至对比例4)处理的测试组;
3)给药完成后,将10孔板放置于细胞培养箱(体积分数5%CO2、37℃)培养2h。
4)LPS刺激:给药2h后,BC组补加200μL胎牛血清培养液,其余各组每孔加入200μL配制的含LPS的工作液,置于细胞培养箱(体积分数5%CO2、37℃)继续培养22h。
5)IL-1βELISA检测:收集细胞培养上清液,按照IL-1βELISA试剂盒说明书进行IL-1βELISA检测,获得促炎因子IL-1β含量。
抑制炎性介质PGE2表达的实验步骤如下:
BC组不做任何处理,即仅采用胎牛血清(兰州荣晔)培养液和巨噬细胞模型处理的测试组;
NC组为采用胎牛血清培养液、巨噬细胞模型和脂多糖LPS处理的测试组;
PC组为采用胎牛血清培养液、巨噬细胞模型和脂多糖LPS和地塞米松处理的测试组;地塞米松工作液配制:吸取2μL的10%(v/v)地塞米松母液溶于2mL的KC2500培养液(广东博溪生物)中,配制成0.01%地塞米松;
1)巨噬细胞接种:以2.2×105个/孔的接种密度将巨噬细胞接种到10孔板中,每孔加2mL的胎牛血清培养液,将接种好的巨噬细胞培养板放入培养箱中继续培养24h(体积分数5%CO2、37℃)。
2)吸弃步骤1)孔中的胎牛血清培养液。NC组每孔加入1.8mL的胎牛血清培养液;PC组每孔加入1.8mL的地塞米松工作液;BC组每孔加入1.8mL胎牛血清培养液;样品组(具体为样品组15-21)每孔加入1.8mL含有1.25%(v/v)受试物的胎牛血清培养液;
具体的,样品组15为采用胎牛血清培养液、巨噬细胞模型和、脂多糖LPS和样品C1(取至实施例1)处理的测试组;
样品组16为采用胎牛血清培养液、巨噬细胞模型和、脂多糖LPS和样品C2(取至实施例2)处理的测试组;
样品组17为采用胎牛血清培养液、巨噬细胞模型和、脂多糖LPS和样品C3(取至实施例3)处理的测试组;
样品组18为采用胎牛血清培养液、巨噬细胞模型和、脂多糖LPS和样品C4(取至对比例1)处理的测试组;
样品组19为采用胎牛血清培养液、巨噬细胞模型和、脂多糖LPS和样品C5(取至对比例2)处理的测试组;
样品组20为采用胎牛血清培养液、巨噬细胞模型和、脂多糖LPS和样品C6(取至对比例3)处理的测试组;
样品组21为采用胎牛血清培养液、巨噬细胞模型和、脂多糖LPS和样品C7(取至对比例4)处理的测试组;
3)给药完成后,将10孔板放置于细胞培养箱(体积分数5%CO2、37℃)培养2h。
4)LPS刺激:给药2h后,BC组补加200μL胎牛血清培养液,其余各组每孔加入200μL配制的含LPS的工作液,置于细胞培养箱(体积分数5%CO2、37℃)继续培养22h。
5)PGE2 ELISA检测:收集细胞培养上清液,按照PGE2 ELISA试剂盒说明书进行PGE2 ELISA检测,获得炎性介质PGE2含量。
表4促炎因子IL-1β含量结果汇总表
组别 | 平均值(pg/ml) | SD | P-value | 抑制率(vsNC) |
BC | 8.19 | 0.77 | / | / |
NC | 58.88 | 0.74 | 0.000## | / |
PC | 7.53 | 0.41 | 0.000** | / |
样品B1(实施例1) | 11.22 | 0.83 | 0.000** | 80.94% |
样品B2(实施例2) | 12.35 | 0.99 | 0.002** | 79.02% |
样品B3(实施例3) | 13.28 | 0.61 | 0.005** | 77.45% |
样品B4(对比例1) | 14.50 | 0.66 | 0.003** | 75.37% |
样品B5(对比例2) | 18.25 | 0.68 | 0.003** | 69.00% |
样品B6(对比例3) | 16.88 | 0.75 | 0.005** | 71.33% |
样品B7(对比例4) | 15.60 | 0.82 | 0.004** | 75.50% |
在表4中,采用t-test方法进行统计分析时,与BC组相比,显著性以#表示,P-value<0.05表示为#,P-value<0.01表示为##;与NC组相比,显著性以*表示,P-value<0.05表示为*,P-value<0.01表示为**;平均值表示促炎因子IL-1β的平均含量;SD表示促炎因子IL-1β的标准差。
由表4数据知,相比于对比例1-4,本发明采用实施例1-3所制备的舒缓抗炎组合物对促炎因子IL-1β具有较好的抑制效果。
表5炎性介质PGE2含量结果汇总表
组别 | 平均值(pg/ml) | SD | P-value | 抑制率(vsNC) |
BC | 317.40 | 6.34 | / | / |
NC | 28018.40 | 598.79 | 0.000## | / |
PC | 12044.84 | 596.70 | 0.000** | / |
样品C1(实施例1) | 4057.39 | 130.20 | 0.000** | 85.52% |
样品C2(实施例2) | 4678.42 | 230.28 | 0.001** | 83.30% |
样品C3(实施例3) | 5025.35 | 218.75 | 0.003** | 82.06% |
样品C4(对比例1) | 5200.55 | 566.37 | 0.002** | 81.44% |
样品C5(对比例2) | 5134.32 | 580.65 | 0.004** | 81.68% |
样品C6(对比例3) | 5188.60 | 460.89 | 0.005** | 81.48% |
样品C7(对比例4) | 5342.88 | 346.85 | 0.005** | 80.93% |
在表5中,采用t-test方法进行统计分析时,与BC组相比,显著性以#表示,P-value<0.05表示为#,P-value<0.01表示为##;与NC组相比,显著性以*表示,P-value<0.05表示为*,P-value<0.01表示为**;平均值表示促炎因子IL-1β的平均含量;SD表示促炎因子IL-1β的标准差。
由表5数据知,相比于对比例1-4,本发明采用实施例1-3所制备的舒缓抗炎组合物对炎性介质PGE2具有较好的抑制效果。
需要说明的是脂多糖LPS是革兰氏阴性细菌细胞壁外壁的组成成分,是由脂质和多糖构成的物质(糖脂质)。革兰氏阴性细菌的致病机制主要是LPS与Toll样受体结合,激活下游的炎症信号通路NF-κB信号通路,NF-κB是一个核转录因子,激活后进入细胞核内结合到下游靶基因的启动子区,启动基因的转录,其中下游靶基因主要是介导炎症反应的相关细胞因子和酶,大量炎症因子合成后,使得炎症反应级联放大,进一步影响血管反应,诱导皮肤红斑等临床现象。L-1β是由典型的信号通路NF-κB信号通路介导合成的,主要是诱发炎症级联反应。PGE2为前列腺素,是花生四烯酸代谢产物,主要作用是诱发炎症反应,样品作用后PGE2含量减少,可以达到舒缓的功效。
采用实施例4-6和对比例5-9所制得的舒敏霜的临床效果实验:
征集50名女性受试者,测试周期为4周。在舒敏霜产品使用前、使用后第二周以及使用后第四周分别测试。通过测试得到的皮肤经皮失水率、皮肤泛红程度、乳酸刺痛反应程度和辣椒素耐受程度来测试舒缓效果。
1)皮肤经皮失水率测试由Tewameter TM300测得,是反映皮肤水分丢失和屏障功能的重要指标,数值越低则表示皮肤的屏障功能越好。
2)皮肤泛红程度测试用VISIA-CR进行面部图像采集,然后使用Image-Pro-Plus图像分析软件对Standard2光源下的图片进行皮肤a*值分析,该皮肤a*值数值越小,表示皮肤泛红程度越轻。
3)乳酸刺痛反应程度测试,即使用10%(v/v)乳酸溶液浸湿皮肤,对皮肤进行接触性刺激,在5分钟内由受试者评估测试部位瘙痒、刺痛以及灼痛的不适程度,评分值越高,代表不适感越强。该测试以生理盐水为对照。
4)辣椒素耐受程度测试,采用预先在皮肤上臂内侧表面涂抹舒敏霜,30分钟后在相应部位通过5%(v/v)辣椒素溶液贴片(面积:2cm×2cm)刺激皮肤。实验前,将50名志愿者均分2组,志愿者前臂用清水清洗干净,将前臂分成3块区域,区域2预先涂抹舒敏霜,区域1和区域3不做处理。静坐30min,分别在区域1和区域2贴5%辣椒素贴片,区域3作为完全空白对照,不做任何处理。每15min向SDS贴片滴加0.2mL辣椒素溶液。45min后,通过皮肤色度测试仪Mexameter MX18测试皮肤在区域的红斑值E,红斑值E的大小反映皮肤受刺激的程度。
5)实验结果,具体参见表6-表9.
表6皮肤经皮失水率的差异性分析
表7皮肤a*值的差异性分析
表8乳酸刺痛评分的差异性分析
由表6数据知,相比于对比例5-9,本发明采用实施例4-6所制备的舒敏霜具有相对较低的皮肤经皮失水率,表示皮肤的屏障功能越好。
由表7数据知,相比于对比例5-9,本发明采用实施例4-6所制备的舒敏霜具有相对较低的皮肤a*值,表示皮肤泛红程度越轻。
由表8数据知,相比于对比例5-9,本发明采用实施例4-6所制备的舒敏霜具有相对较低的乳酸刺痛评分,代表不适感越低。
在辣椒素耐受程度测试结果中:5%辣椒素刺激后区域1的皮肤不适症状明显,出现一系列如红肿、灼烧感等的不适症状。而预先涂抹含实施例4-6的舒敏霜,再采用5%辣椒素刺激区域2的不适症状不明显,相应的红肿、灼烧感等现象明显减弱,皮肤耐受性明显增强,与完全空白对照的区域3的皮肤相应生理指标接近;综合区域1-3的比较,明显表明由实施例4-6的舒敏霜能够增强皮肤的耐受性。而由对比例5-9所制备的舒敏霜能轻微缓解不适症状,但效果均差于实施例4-6。
以上所述仅为本发明的优选实施例而已,并不用于限制本发明,对于本领域的技术人员来说,本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内,所作的任何修改、等同替换、改进等,均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (10)
1.一种舒缓抗炎组合物,其特征在于,所述舒缓抗炎组合物包括迷迭香叶提取物、积雪草提取物、光果甘草提取物和苦参根提取物。
2.根据权利要求1所述的舒缓抗炎组合物,其特征在于,所述迷迭香叶提取物、所述积雪草提取物、所述光果甘草提取物和所述苦参根提取物的质量之比为1-20:1-10:1-10:1-5。
3.一种舒敏霜,其特征在于,所述舒敏霜包含A相物质、B相物质、C相物质和D相物质;
对所述舒敏霜中的各组分按质量百分数计,所述A相物质包括0.05%-0.1%的EDTA二钠、2%-8%的甘油、1%-8%的甘油聚醚-26、0.02%-0.1%的透明质酸钠、0.5%-1%的丙烯酸羟乙酯/丙烯酰二甲基牛磺酸钠共聚物和44.19%-87.96%的水;所述B相物质包括0.2%-1%的鲸蜡硬脂基葡糖苷、1%-5%的鲸蜡硬脂醇、1%-5%的PEG-20硬脂酸酯、1%-5%的聚二甲基硅氧烷、1%-5%的碳酸二辛酯、1%-5%的氢化聚异丁烯、1%-3%的聚二甲基硅氧烷交联物有机硅弹性体;所述C相物质包括0.2%-1%的丙烯酸钠/丙烯酰二甲基牛磺酸钠共聚物、0.1%-0.5%异十六烷、0.03%-0.05%聚山梨醇酯-80、0.03%-0.05%山梨坦油酸酯;所述D相物质包括0.2%-1%的辛酰羟肟酸、0.2%-1%的1,2-己二醇、0.5%-5%的丙二醇、0.5%-5%的如权利要求1或2所述的舒缓抗炎组合物和0.01%-0.05%的香精。
4.一种如权利要求3所述的舒敏霜的制备方法,其特征在于,包括:
步骤S1、将所述A相物质中所需的各组分按所需质量称取后混合,且边加热边搅拌至80-90℃,搅拌速度为300-500转/min,保温10-15分钟备用;将所述B相物质中所需的各组分按所需质量称取后混合,且边加热边搅拌至80-90℃,搅拌速度为300-500转/min,保温10-15分钟备用;
步骤S2、将所述B相物质加入所述A相物质中,在80-90℃条件下,均质5-10分钟,得到预制物,其中,均质速度为3000-3500r/min;将所述预制物保温10-15分钟备用;
步骤S3、对所述预制物降温,并搅拌至40-45℃,依次加入所述C相物质和所述D相物质,搅拌均匀,冷却至室温,得到所述舒敏霜。
5.一种采用如权利要求1或2所述的舒缓抗炎组合物在制备洗护产品中的应用。
6.根据权利要求5所述的舒缓抗炎组合物在制备洗护产品中的应用,其特征在于,所述舒缓抗炎组合物在所述洗护产品中的质量占比为0.5%-5%。
7.根据权利要求5所述的舒缓抗炎组合物在制备洗护产品中的应用,其特征在于,所述洗护产品包括面膜、爽肤水、洁面泡沫、精华露、乳液、膏霜和头皮护理液。
8.一种采用如权利要求1或2所述的舒缓抗炎组合物在制备TRPV1抑制剂中的应用。
9.一种采用如权利要求1或2所述的舒缓抗炎组合物在制备促炎因子IL-1β抑制剂中的应用。
10.一种采用如权利要求1或2所述的舒缓抗炎组合物在制备炎性介质PGE2抑制剂中的应用。
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