CN117825708A - 一种sFlt-1检测试剂盒 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种sFlt‑1检测试剂盒，包括：磁微粒悬浮液，磁微粒悬浮液包含包被有sFlt‑1抗体的磁微粒、质量分数为0.5%‑5%乙二胺四乙酸二钠；sFlt‑1抗体检测试剂，sFlt‑1抗体检测试剂包含吖啶酯标记的sFlt‑1抗体。本发明解决了现有sFlt‑1检测试剂盒检测结果不准确的技术问题，实现了提高检测结果准确性，且操作简便、反应时间短、检测灵敏度高的技术效果。
Description
技术领域
本发明涉及生物检测技术领域，具体而言，涉及一种sFlt-1检测试剂盒。
背景技术
可溶性 fms 样酪氨酸激酶 1(sFlt-1) 是一种对血管内皮生长因子有高度亲和力的蛋白受体，它在心血管疾病和肿瘤等疾病中发挥着重要的作用。sFlt-1 与其配体血管内皮生长因子 (VEGF) 结合后，可以抑制 VEGF 与 Flt-1 的结合，从而抑制 VEGF的信号通路。此外，sFlt-1 还可以抑制其他信号通路，如细胞周期素 D1 的表达，从而发挥其生物学作用。目前已有研究表明孕中期孕妇血清中sFlt-1水平的检测对先兆子痫的发生有良好的预测价值，且有研究说明子痫前期胎盘形成不良、胎盘低灌注及胎盘缺氧在子痫前期发病中有重要作用，因此sFlt-1的检测在辅助诊断先兆性子痫方面有重要的意义。
存在的问题是：目前常规的sFlt-1检测试剂盒检测容易受到干扰，导致检测结果不准确。
发明内容
本发明解决了现有sFlt-1检测试剂盒检测结果不准确的技术问题，实现了提高检测结果准确性，且操作简便、反应时间短、检测灵敏度高的技术效果。
为解决上述问题，本发明提供一种sFlt-1检测试剂盒，包括：磁微粒悬浮液，磁微粒悬浮液包含包被有sFlt-1抗体的磁微粒、质量分数为0.5%-5%乙二胺四乙酸二钠；sFlt-1抗体检测试剂，sFlt-1抗体检测试剂包含吖啶酯标记的sFlt-1抗体。
与现有技术相比，采用该技术方案所达到的技术效果：本发明利用磁微粒及吖啶酯化学发光免疫分析技术，检测操作简单，分析快，灵敏度更高、线性范围广。通过将sFlt-1抗体包被于磁微粒上，在免疫反应时，磁微粒在反应溶液中分散均匀，大大增加与样本中待测物接触面积，减少反应所需的样本量，同时更快达到反应动态平衡，加快反应速度，节省反应时间。而且磁微粒比表面积较大，能结合更多的蛋白分子，有利于提高检测范围。磁微粒悬浮液中的0.5%-5%乙二胺四乙酸二钠，可消除新旧样本差，能够有效消除试剂盒对新旧样本的检测结果带来的差异，从而增强了试剂盒检测血清中sFlt-1的准确性，且对血清的新鲜程度放低要求，更便于病人预后监督复查。采用吖啶酯标记sFlt-1抗体，吖啶酯与抗体偶联的标记方法简单，重复性较好，便于大规模应用。并且偶联效率高，吖啶酯与sFlt-1抗体结合后，产生具有化学发光活性强，免疫反应特异性高的标记物，因此检测结果的灵敏度和准确性佳。
在本发明的一个实例中，磁微粒为氨基磁珠、羧基磁珠、链霉亲和素磁珠中的任一种。
与现有技术相比，采用该技术方案所达到的技术效果：磁微粒是由高分子单体聚合而成的微球或颗粒，直径多为微米级或毫米级。氨基磁珠上所带有的功能团氨基，或羧基磁珠上所带有的功能团羧基，或链霉亲和素磁珠上所带有的链霉亲和素，均能够与sFlt-1抗体偶联，且偶联稳定，偶联效率高，结合力强。
在本发明的一个实例中，包被有sFlt-1抗体的磁微粒中磁微粒与sFlt-1抗体的摩尔比为1：（5-20）。
与现有技术相比，采用该技术方案所达到的技术效果：磁微粒与sFlt-1抗体在该摩尔比下，偶联的效率高，稳定性佳。
在本发明的一个实例中，吖啶酯标记的sFlt-1抗体中吖啶酯与sFlt-1抗体的摩尔比为1：（5-20）。
与现有技术相比，采用该技术方案所达到的技术效果：吖啶酯与抗体不适当的配比会出现发光信号弱或非特异性结合等情况，导致检测灵敏度低或结果不准确，因此限定了吖啶酯与sFlt-1抗体的摩尔比，在该摩尔比下，发光信号强，检测结果的灵敏度和准确性佳。
在本发明的一个实例中，磁微粒悬浮液包含：第一缓冲液、防腐剂、蛋白类稳定剂、第一表面活性剂、盐类物质、糖类物质。
与现有技术相比，采用该技术方案所达到的技术效果：磁微粒悬浮液中的第一缓冲液能够维持试剂的pH值相对稳定；防腐剂能够防止试剂受到微生物的污染，避免变质；蛋白类稳定剂能够保持抗体分子结构和活性的稳定；第一表面活性剂能够提高待检测物中抗原与抗体的反应速率，进而提高检测速度；盐类物质能够提供离子环境，中和抗原抗体电荷，促进结合；糖类物质能够和蛋白质分子间形成氢键，有利于蛋白质构象稳定性。
在本发明的一个实例中，sFlt-1抗体检测试剂包含：第二缓冲液、防腐剂、蛋白类稳定剂、第二表面活性剂、盐类物质、糖类物质。
与现有技术相比，采用该技术方案所达到的技术效果：sFlt-1抗体检测试剂中的第二缓冲液能够维持试剂的pH值相对稳定，保证吖啶酯的发光信号强度；防腐剂能够防止试剂受到微生物的污染，避免变质；蛋白类稳定剂能够保持抗体分子结构和活性的稳定；第二表面活性剂能够提高待检测物中抗原与抗体的反应速率，进而提高检测速度；盐类物质能够提供离子环境，中和抗原抗体电荷，促进结合；糖类物质能够和蛋白质分子间形成氢键，有利于蛋白质构象稳定性。
在本发明的一个实例中，防腐剂为Proclin300、NaN3、庆大霉素、MIT、IPBC中的至少一种；蛋白类稳定剂为BSA、酪蛋白、鱼皮明胶、猪皮明胶中的至少一种；盐类物质为NaCl、KCl、MgCl2中的至少一种；糖类物质为海藻糖、蔗糖、葡萄糖中的至少一种。
与现有技术相比，采用该技术方案所达到的技术效果：选用以上至少一种防腐剂能够防止试剂受到微生物的污染，避免变质，选用以上至少一种蛋白类稳定剂能够保持抗体分子结构和活性的稳定，选用以上至少一种盐类物质能够提供离子环境，中和抗原抗体电荷，促进结合，选用以上至少一种糖类物质能够和蛋白质分子间形成氢键，有利于蛋白质构象稳定性。
在本发明的一个实例中，第一缓冲液为100mM，pH6.0~8.0的PB缓冲液；第一表面活性剂为Tween20、Tween40、TrotionX-100、Brig35中的至少一种。
与现有技术相比，采用该技术方案所达到的技术效果：100mM，pH6.0~8.0的PB缓冲液，能够让试剂的pH 值相对稳定，提高蛋白质在液体中的稳定性。选用以上至少一种表面活性剂能够提高分散性能，减少蛋白之间相互干扰，提高蛋白稳定性，提高待检测物中抗原与抗体的反应速率，进而提高检测速度。
在本发明的一个实例中，第二缓冲液为100mM，pH6.5~8.0的Tris缓冲液；第二表面活性剂为PEG2000、PEG4000、PEG6000中的至少一种。
与现有技术相比，采用该技术方案所达到的技术效果：不同的缓冲液体系及其浓度和pH对吖啶酯的发光强度有不同程度的影响，选用100mM，pH6.5~8.0的Tris缓冲液，吖啶酯的发光信号强，进而提高检测灵敏性和准确性。选用以上至少一种第二表面活性剂能够提高待检测物中抗原与抗体的反应速率，进而提高检测速度。
附图说明
本发明的上述和/或附加的方面和优点从结合下面附图对实施例的描述中将变得明显和容易理解，其中：
图1为本发明实施例提供的采用对照组的试剂盒和罗氏试剂盒分别检测样本1的检测结果图；
图2为本发明实施例提供的采用实施例的试剂盒和罗氏试剂盒分别检测样本1的检测结果图；
图3为本发明实施例提供的采用对照组的试剂盒和罗氏试剂盒分别检测样本2的检测结果图；
图4为本发明实施例提供的采用实施例的试剂盒和罗氏试剂盒分别检测样本2的检测结果图。
具体实施方式
为使本发明的上述目的、特征和优点能够更为明显易懂，下面对本发明的具体实施例做详细的说明。
本发明提供一种sFlt-1检测试剂盒，包括：磁微粒悬浮液，磁微粒悬浮液包含包被有sFlt-1抗体的磁微粒、质量分数为0.5%-5%乙二胺四乙酸二钠；sFlt-1抗体检测试剂，sFlt-1抗体检测试剂包含吖啶酯标记的sFlt-1抗体。
具体的，本发明利用磁微粒及吖啶酯化学发光免疫分析技术，检测操作简单，分析快，灵敏度更高、线性范围广。通过将sFlt-1抗体包被于磁微粒上，在免疫反应时，磁微粒在反应溶液中分散均匀，大大增加与样本中待测物接触面积，减少反应所需的样本量，同时更快达到反应动态平衡，加快反应速度，节省反应时间。而且磁微粒比表面积较大，能结合更多的蛋白分子，有利于提高检测范围。磁微粒悬浮液中的0.5%-5%乙二胺四乙酸二钠，可消除新旧样本差，能够有效消除试剂盒对新旧样本的检测结果带来的差异，从而增强了试剂盒检测血清中sFlt-1的准确性，且对血清的新鲜程度放低要求，更便于病人预后监督复查。采用吖啶酯标记sFlt-1抗体，吖啶酯与抗体偶联的标记方法简单，重复性较好，便于大规模应用。并且偶联效率高，吖啶酯与sFlt-1抗体结合后，产生具有化学发光活性强，免疫反应特异性高的标记物，因此检测结果的灵敏度和准确性佳。
进一步地，磁微粒为氨基磁珠、羧基磁珠、链霉亲和素磁珠中的任一种。
具体的，磁微粒是由高分子单体聚合而成的微球或颗粒，直径多为微米级或毫米级。氨基磁珠上所带有的功能团氨基，或羧基磁珠上所带有的功能团羧基，或链霉亲和素磁珠上所带有的链霉亲和素，均能够与sFlt-1抗体偶联，偶联稳定，偶联效率高，结合力强。
进一步地，包被有sFlt-1抗体的磁微粒中磁微粒与sFlt-1抗体的摩尔比为1：（5-20）。
具体的，磁微粒与sFlt-1抗体在该摩尔比下，偶联的效率高，稳定性佳。
进一步地，吖啶酯标记的sFlt-1抗体中吖啶酯与sFlt-1抗体的摩尔比为1：（5-15）。
具体的，吖啶酯与抗体不适当的配比会出现发光信号弱或非特异性结合等情况，导致检测灵敏度低或结果不准确，因此限定了吖啶酯与sFlt-1抗体的摩尔比，在该摩尔比下，发光信号强，检测结果的灵敏度和准确性佳。
进一步地，磁微粒悬浮液包含：第一缓冲液、防腐剂、蛋白类稳定剂、第一表面活性剂、盐类物质、糖类物质。
具体的，磁微粒悬浮液中的第一缓冲液能够维持试剂的pH值相对稳定；防腐剂能够防止试剂受到微生物的污染，避免变质；蛋白类稳定剂能够保持抗体分子结构和活性的稳定；第一表面活性剂能够提高待检测物中抗原与抗体的反应速率，进而提高检测速度；盐类物质能够提供离子环境，中和抗原抗体电荷，促进结合；糖类物质能够和蛋白质分子间形成氢键，有利于蛋白质构象稳定性。
进一步地，sFlt-1抗体检测试剂包含：第二缓冲液、防腐剂、蛋白类稳定剂、第二表面活性剂、盐类物质、糖类物质。
具体的，sFlt-1抗体检测试剂中的第二缓冲液能够维持试剂的pH值相对稳定，保证吖啶酯的发光信号强度；防腐剂能够防止试剂受到微生物的污染，避免变质；蛋白类稳定剂能够保持抗体分子结构和活性的稳定；第二表面活性剂能够提高待检测物中抗原与抗体的反应速率，进而提高检测速度；盐类物质能够提供离子环境，中和抗原抗体电荷，促进结合；糖类物质能够和蛋白质分子间形成氢键，有利于蛋白质构象稳定性。
进一步地，防腐剂为Proclin300、NaN3、庆大霉素、MIT、IPBC中的至少一种；蛋白类稳定剂为BSA、酪蛋白、鱼皮明胶、猪皮明胶中的至少一种；盐类物质为NaCl、KCl、MgCl2中的至少一种；糖类物质为海藻糖、蔗糖、葡萄糖中的至少一种。
具体的，选用以上至少一种防腐剂能够防止试剂受到微生物的污染，避免变质，选用以上至少一种蛋白类稳定剂能够保持抗体分子结构和活性的稳定，选用以上至少一种盐类物质能够提供离子环境，中和抗原抗体电荷，促进结合，选用以上至少一种糖类物质能够和蛋白质分子间形成氢键，有利于蛋白质构象稳定性。
进一步地，第一缓冲液为100mM，pH6.0~8.0的PB缓冲液；第一表面活性剂为Tween20、Tween40、TrotionX-100、Brig35中的至少一种。
具体的，100mM，pH6.0~8.0的PB缓冲液，能够让试剂的pH 值相对稳定，提高蛋白质在液体中的稳定性。选用以上至少一种表面活性剂能够提高分散性能，减少蛋白之间相互干扰，提高蛋白稳定性，提高待检测物中抗原与抗体的反应速率，进而提高检测速度。
进一步地，第二缓冲液为100mM，pH6.5~8.0的Tris缓冲液；第二表面活性剂为PEG2000、PEG4000、PEG6000中的至少一种。
具体的，不同的缓冲液体系及其浓度和pH对吖啶酯的发光强度有不同程度的影响，选用100mM，pH6.5~8.0的Tris缓冲液，吖啶酯的发光信号强，进而提高检测灵敏性和准确性。选用以上至少一种第二表面活性剂能够提高待检测物中抗原与抗体的反应速率，进而提高检测速度。
实施例：
本实施例提供一种sFlt-1检测试剂盒，包括：
磁微粒悬浮液，包含：
包被有sFlt-1抗体的羧基磁珠，羧基与sFlt-1抗体的摩尔比为1:5；
100mM PB；
3%BSA；
1%海藻糖；
0.5%Tween20；
2%NaCl；
1%KCl；
3%乙二胺四乙酸二钠；
sFlt-1抗体检测试剂，包含：
吖啶酯标记的sFlt-1抗体，吖啶酯与sFlt-1抗体的摩尔比为1：20；
Tris缓冲液；
5%鱼皮明胶；
1%葡萄糖；
0.5%PEG4000；
2%NaCl；
1%KCl。
对照组：
本对照组提供一种sFlt-1检测试剂盒，包括：
磁微粒悬浮液，包含：
包被有sFlt-1抗体的羧基磁珠，羧基与sFlt-1抗体的摩尔比为1:5；
100mM PB；
3%BSA；
1%海藻糖；
0.5%Tween20；
2%NaCl；
1%KCl；
sFlt-1抗体检测试剂，包含：
吖啶酯标记的sFlt-1抗体，吖啶酯与sFlt-1抗体的摩尔比为1：20；
Tris缓冲液；
5%鱼皮明胶；
1%葡萄糖；
0.5%PEG4000；
2%NaCl；
1%KCl。
实施例与对照组的区别在于，实施例中添加了乙二胺四乙酸二钠，而对照组中未添加。
进一步地，将对照组sFlt-1检测试剂盒、实施例sFlt-1检测试剂盒、罗氏试剂盒分别检测样本1和样本2，样本1和样本2如下所示：
样本1：妊娠24周以上孕妇新鲜血清样本105例；
样本2：将样本1的105例血清样本在-20℃以下冻融三次，获得样本2。
检测结果参见图1至图4，采用对照组sFlt-1检测试剂盒和本发明实施例sFlt-1检测试剂盒分别检测新鲜样本（样本1）和陈旧样本（样本2）发现，添加了乙二胺四乙酸二钠的sFlt-1检测试剂盒检测新鲜样本和陈旧样本差异最小，线性关系良好，并且与罗氏试剂盒临床比对相对一致，因此本发明提供的sFlt-1检测试剂盒在临床应用前景佳。
虽然本发明披露如上，但本发明并非限定于此。任何本领域技术人员，在不脱离本发明的精神和范围内，均可作各种更动与修改，因此本发明的保护范围应当以权利要求所限定的范围为准。
Claims (9)
1.一种sFlt-1检测试剂盒，其特征在于，包括：
磁微粒悬浮液，所述磁微粒悬浮液包含包被有sFlt-1抗体的磁微粒、质量分数为0.5%-5%乙二胺四乙酸二钠；
sFlt-1抗体检测试剂，所述sFlt-1抗体检测试剂包含吖啶酯标记的sFlt-1抗体。
2.根据权利要求1所述的sFlt-1检测试剂盒，其特征在于，所述磁微粒为氨基磁珠、羧基磁珠、链霉亲和素磁珠中的任一种。
3.根据权利要求1所述的sFlt-1检测试剂盒，其特征在于，所述包被有sFlt-1抗体的磁微粒中所述磁微粒与所述sFlt-1抗体的摩尔比为1：（5-20）。
4.根据权利要求1所述的sFlt-1检测试剂盒，其特征在于，所述吖啶酯标记的sFlt-1抗体中所述吖啶酯与所述sFlt-1抗体的摩尔比为1：（5-20）。
5.根据权利要求1所述的sFlt-1检测试剂盒，其特征在于，所述磁微粒悬浮液包含：第一缓冲液、防腐剂、蛋白类稳定剂、第一表面活性剂、盐类物质、糖类物质。
6.根据权利要求1所述的sFlt-1检测试剂盒，其特征在于，所述sFlt-1抗体检测试剂包含：第二缓冲液、防腐剂、蛋白类稳定剂、第二表面活性剂、盐类物质、糖类物质。
7.根据权利要求5或6所述的sFlt-1检测试剂盒，其特征在于，
所述防腐剂为Proclin300、NaN3、庆大霉素、MIT、IPBC中的至少一种；
所述蛋白类稳定剂为BSA、酪蛋白、鱼皮明胶、猪皮明胶中的至少一种；
所述盐类物质为NaCl、KCl、MgCl2中的至少一种；
所述糖类物质为海藻糖、蔗糖、葡萄糖中的至少一种。
8.根据权利要求5所述的sFlt-1检测试剂盒，其特征在于，
所述第一缓冲液为100mM，pH6.0~8.0的PB缓冲液；
所述第一表面活性剂为Tween20、Tween40、TrotionX-100、Brig35中的至少一种。
9.根据权利要求6所述的sFlt-1检测试剂盒，其特征在于，
所述第二缓冲液为100mM，pH6.5~8.0的Tris缓冲液；
所述第二表面活性剂为PEG2000、PEG4000、PEG6000中的至少一种。
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