CN117770446A - 一种运动后促恢复的营养组合物及其制备方法和应用 - Google Patents

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CN117770446A CN202311835917.9A CN202311835917A CN117770446A CN 117770446 A CN117770446 A CN 117770446A CN 202311835917 A CN202311835917 A CN 202311835917A CN 117770446 A CN117770446 A CN 117770446A
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耿华
王贺宇
耿一楠
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Abstract

本发明属于营养保健品技术领域，涉及一种运动后促恢复的营养组合物及其制备方法和应用，运动后促恢复的营养组合物，包括以下质量份的各个原料：人参、骨胶原蛋白肽、牡蛎肽、香蕉冻干粉、黄芪甲苷和蒲公英花。本发明通过人参、骨胶原蛋白肽、牡蛎肽、香蕉冻干粉、黄芪甲苷、蒲公英花形成营养组合物，向人体适当的补充蛋白质和脂肪等营养，有利于身体正常新陈代谢的快速恢复，提升人体抗氧化和免疫力能力。

Description

一种运动后促恢复的营养组合物及其制备方法和应用
技术领域
本发明属于营养保健品技术领域，涉及一种运动后促恢复的营养组合物及其制备方法和应用。
背景技术
运动健身可以促进肌肉的增长和改善肌肉强度，同时增加身体的灵活性和耐力，有益于身体的健康。但是运动也是一个耗能的事情，这是运动刚开始，人体各器官和系统进入工作状态，开始消耗能量和氧气，产生乳酸和二氧化碳等代谢产物；当进入稳定状态后，人体各器官和系统的机能达到最高水平，摄氧量、心率、血压等指标保持相对稳定；然而随着运动时间的延长和强度的增加，人体开始出现疲劳状态，表现为摄氧量下降、心率加快、血压升高、呼吸急促等，还会给机体带来损伤。所以，在运动结束后，人体各器官和系统要恢复到正常状态，就需要补充营养以促进身体机能的恢复，减轻运动损伤。
中国专利文献CN116391870A一种运动后快速补充体能并修复肌肉损伤的食品组合物，其组成及各成分的重量含量分别为：葡萄糖100-200份、果糖50-150份、胶原蛋白肽25-30份、谷氨酰胺17-22份、氯化钠20-25份、柠檬酸钾9-13份、牛磺酸1份、甘氨酸1份、β-丙氨酸0.5份、维C 0.3份、维B1 0.01份。虽然促进运动后体能恢复的食品配方短期服用后就有效果，在每次运动后即刻服用，就能提高运动能力、快速补充体能，但是其主要原理是通过促进肌糖原合成，降低血清中肌酸激酶及乳酸脱氢酶水平，减轻运动损伤，不能很好的调节人体循环动力，导致大运动量后机体恢复至正常新陈代谢需要的时间较长；此外，运动后，机体会出现淋巴细胞浓度下降，免疫球蛋白的功能降低的现象，导致运动后的一天内出现免疫力下降的情形。所以运动后不仅要及时向机体补充营养，还要调节人体循环动力以及免疫力。
发明内容
针对上述运动后要及时向机体补充营养，还要调节人体循环动力以及免疫力的技术问题，本发明提供一种运动后促恢复的营养组合物及其制备方法和应用。
本发明通过人参、骨胶原蛋白肽、牡蛎肽、香蕉冻干粉、黄芪甲苷、蒲公英花形成营养组合物，向人体适当的补充蛋白质和脂肪等营养，有利于身体正常新陈代谢的快速恢复，提升人体抗氧化和免疫力能力。
为了实现上述目的，本发明采用的技术方案是：
一种运动后促恢复的营养组合物，包括以下质量份的各个原料：10～300份人参、20～5000份骨胶原蛋白肽、30～3000份牡蛎肽、100～5000份香蕉冻干粉、7～700份黄芪甲苷和100～10000份蒲公英花。
进一步限定，所述运动后促恢复的营养组合物包括以下质量份的各个原料：60～300份人参、200～4000份骨胶原蛋白肽、120～2700份牡蛎肽、300～3600份香蕉冻干粉、12～560份黄芪甲苷和600～8000份蒲公英花。
进一步限定，所述运动后促恢复的营养组合物包括以下质量份的各个原料：200份人参、2000份骨胶原蛋白肽、2000份牡蛎肽、2000份香蕉冻干粉、200份黄芪甲苷和2000份蒲公英花。
进一步限定，所述黄芪甲苷是从黄芪中提取得到的。
一种运动后促恢复的营养组合物的制备方法，包括以下步骤：
1)按照所述的质量份准备各个原料；
2)将人参经蒸制、烘干、粉碎，得到人参粉；
3)将蒲公英花经过提取、后处理，得到蒲公英提取物；
4)将步骤1)的骨胶原蛋白肽、牡蛎肽、香蕉冻干粉、黄芪甲苷、步骤2)的人参粉以及步骤3)的蒲公英提取物混合均匀，得到混合物；
5)将混合物进行加工，得到营养组合物。
进一步限定，所述步骤2)中，蒲公英花是通过蒸煮法、乙醇回流或渗漉法提取完成的。
进一步限定，所述步骤2)中，后处理是将蒲公英花提取液减压浓缩至相对密度为1.30～1.35稠膏后，再经过真空干燥2h，得到膏状蒲公英提取物；减压浓缩的温度为75～80℃，真空干燥的温度为40℃～65℃。
进一步限定，所述步骤5)中的加工，是向混合物中加入赋形剂；所述营养组合物为片剂、口服液或胶囊剂。
运动后促恢复的营养组合物在制备增强肌肉耐受力药物中的应用。
运动后促恢复的营养组合物在制备增强免疫力和抗氧化药物中的应用。
本发明的有益效果是：
1、本发明通过人参、骨胶原蛋白肽、牡蛎肽、香蕉冻干粉、黄芪甲苷、蒲公英花形成营养组合物，其中人参具有大补元气，复脉固脱，补脾益肺的功效，人参皂苷是人参缓解疲劳的关键有效成分，人参总皂苷可以通过减少运动后小鼠血清中乳酸脱氢酶(LDH)和尿素氮(SUN)的含量、提高机体有氧代谢合成三磷酸腺苷(ATP)的能力、增加肌肉供能，进而达到缓解疲劳的目的；骨胶原蛋白肽可以不被完全消化为氨基酸，而通过细胞旁途径或与跨上皮细胞途径结合的方式直接被人体利用，从而与对应受体结合调节体内的新陈代谢；牡蛎肽含有的氨基酸可以提高肝脏的机能、抑制乳酸的积蓄，帮助加快疲劳的恢复与体力的增进。另外，牡蛎肽中的牛磺酸与肝糖元，不仅可以帮助肉体上疲劳的恢复同时，对精神上疲劳的恢复也是十分有效的；香蕉冻干粉含有丰富的维生素，可以帮助身体吸收其他营养素，增强体质，提高抵抗力，预防疾病。维生素B6可以促进血液循环，预防心血管疾病:维生素C有助于补充维生素C，增强抵抗力；钙可以促进骨骼发育，增强骨骼强度，钾可以维持身体水分平衡，预防体内毒素积累，从而达到增强体质的目的；黄芪甲苷可改善心肺功能，加强心脏收缩力，扩张血管，降低血压，改善皮肤血液循环和营养状况；并能保护肝脏，防止肝糖元减少，对慢性活动性肝炎，有良好作用；蒲公英花含有丰富的微量元素、维生素(如维生素B2)、氨基酸、矿物质和类黄酮物质。类黄酮具有很多生物活性:如杀虫、抑菌或杀菌,扩张血管，利胆或护肝等功效。各个原料进行协同作用，向人体适当的补充蛋白质和脂肪，有助于身体正常新陈代谢的快速恢复，也有助于体内脂肪正常消耗；此外，本发明的营养组合物，能增加人体循环动力，提升免疫力。
2、本发明提供的运动后促恢复的营养组合物，能快速恢复人体新陈代谢，对机体运动后恢复有很好的促进作用，能用于该类型的药物、功能食品中。
3、本发明从黄芪药材中提取黄芪甲苷，优选地，采用超临界二氧化碳流体萃取法，萃取时间短，有助于提升黄芪甲苷活性成分的含量。
具体实施方式
现结合实施例对本发明做详细的说明。
本发明提供一种营养组合物，原料包括人参、骨胶原蛋白肽、牡蛎肽、香蕉冻干粉、黄芪甲苷、蒲公英花。
人参：补气药；人参能抗休克、强心、降血压、抗缺氧和保护心肌、改善血液流变学和抗血栓形成；能兴奋垂体-肾上腺皮质系统、抗应激、提高免疫功能、增强造血功能、调节中枢神经系统兴奋与抑制过程的平衡、促进学习记忆、抗疲劳；能调节胆固醇代谢、降血脂、降血糖；尚有抗炎、抗过敏、抗利尿、抗肿瘤、抗溃疡、抗辐射、保肝、抗氧化等作用。人参活性成分包括人参多肽，人参多糖，人参黄酮，人参挥发油等；这些活性成分够激活脂蛋白脂活酶，清除血液过多的油脂，胆固醇，从而达到降血脂的目的，对抑制脑动脉硬化有一定的作用。能够减少心肌缺血，降低冠脉阻力，对心脏起到保护作用；还具有一定的强身健体功能。
骨胶原蛋白肽：利用酶法将骨胶原蛋白水解成骨胶原多肽，有利于人体消化吸收；骨胶原蛋白是骨中唯一的韧性物质，具有防止骨折的作用，还有补骨筋和修复的效果，有利于再造关节软骨，防止软骨失去弹性；因此，骨胶原蛋白肽具有增强骨密度、增加骨韧性等功效，能够迅速补充人体内所需的蛋白质及氨基酸，保护关节。
牡蛎肽：又称生蚝，是传统滋补品，牡蛎富含高蛋白质和人体所缺的牛磺酸、精氨酸、锌、硒等多种营养成分；据《本草纲目》记载：“生蚝，治虚损，壮阳，解毒，补男女气血，令肌肤细嫩，防衰老。”其主要成分糖原，能缓解疲劳，迅速补充恢复体力，并可以提高机体免疫力。
香蕉冻干粉：香蕉冻干粉是以香蕉为原料，采用冷冻干燥技术加工而成的，既富含碳水化合物和植物性蛋白质，又有非常高的钾、镁元素含量，维生素B族和膳食纤维特别丰富；同时还含有皂甙、植酸、低聚糖等成分。香蕉中的膳食纤维可以为身体提供即时能量，富含的钾元素能帮助降低血压，碳水化合物可以提供人体所需的能量，还具有促进消化，控制血糖、促进心脏健康的作用。
黄芪甲苷：是一种有机物，化学式为C41H68O14，为白色结晶粉末，是从黄芪上提取出来的药物，黄芪甲苷不仅具有黄芪多糖的作用，还有些是黄芪多糖无法比拟的作用，其药效强度是常规黄芪多糖的2倍多，抗病毒作用更是黄芪多糖的30倍。由于含量少，效果好，更是有“超级黄芪多糖”之称。能增强细胞生理代谢作用，促进血液循环，增强动物机体的代谢，起到营养保健作用。研究表明，可以促进双歧杆菌和乳酸菌的生长，具有益生素的作用。加强心脏收缩力，保护心肌，抗心力衰竭。还具有保护肝脏、抗炎、镇痛等作用。对营养物质代谢过程中酶的双向调节效果显著，在一定程度上减轻和消除了热应激对机体生理机能的影响。
蒲公英花：蒲公英花清热解毒、消肿散结、利尿通淋等功效；此外，蒲公英花含有大量蛋白质、脂肪、微量元素、碳水化合物、维生素等成分，含有很多对身体有益的营养成分，具有很高的药用价值。
为了确保上述原料能相互配伍协同作用，本发明一种运动后促恢复的营养组合物，包括以下质量份的各个原料：10～300份人参、20～5000份骨胶原蛋白肽、30～3000份牡蛎肽、100～5000份香蕉冻干粉、7～700份黄芪甲苷和100～10000份蒲公英花。
进一步优选地，一种运动后促恢复的营养组合物包括以下质量份的各个原料：60～300份人参、200～4000份骨胶原蛋白肽、120～2700份牡蛎肽、300～3600份香蕉冻干粉、12～560份黄芪甲苷和600～8000份蒲公英花。
更优选地，运动后促恢复的营养组合物包括以下质量份的各个原料：200份人参、2000份骨胶原蛋白肽、2000份牡蛎肽、2000份香蕉冻干粉、200份黄芪甲苷和2000份蒲公英花。
本发明黄芪甲苷是从黄芪中提取得到的。
黄芪甲苷的提取除醇提、酸提、水提等外，还能采用超临界二氧化碳萃取、微波辅助萃取、超声波辅助提取的方法。
优选地，采用超临界二氧化碳流体萃取法，主要是利用超临界二氧化碳流体作为溶剂进行提取的方法；萃取条件为：温度为45℃～55℃，压力1.2～1.8MPa，流量10L/h～12L/h，萃取时间1h～1.5h。采用超临界二氧化碳流体萃取时间短，有助于提升黄芪甲苷活性成分的含量，较高的活性成分对各个原料之间协同，快速恢复人体新陈代谢，对机体运动后恢复有很好的提升促进作用。
本发明还提供一种运动后促恢复的营养组合物的制备方法，包括以下步骤。
1)按照上述的质量份准备原料；
2)将人参经蒸制、烘干、粉碎，得到人参粉；
3)将蒲公英花经过提取、后处理，得到蒲公英提取物。具体的，蒲公英花是通过蒸煮法、乙醇回流或渗漉法提取完成的。
4)将步骤1)的骨胶原蛋白肽、牡蛎肽、香蕉冻干粉和黄芪甲苷，步骤2)的人参粉，以及步骤3)的蒲公英提取物混合均匀，得到混合物。
5)将混合物进行加工，得到营养组合物。
步骤2)中，蒲公英花是通过蒸煮法、乙醇回流或渗漉法提取完成的。
步骤2)中，后处理是将蒲公英花提取液减压浓缩至相对密度为1.30～1.35稠膏，后，再经过真空干燥2h，得到膏状蒲公英提取物；减压浓缩的温度为75～80℃，真空干燥的温度为40℃～65℃。
步骤5)中的加工，是向混合物中加入赋形剂；营养组合物为片剂、口服液、丸剂或胶囊剂。
可以理解为，片剂指的是将混合物进行压片得到的。口服液，也就是制剂是将混合物溶于水中得到的，丸剂是制成丸状，胶囊剂是将营养组合物包括在囊皮中。
需要说明的是，在混合物加工制成片剂、口服液、丸剂或胶囊剂时，还可以加入赋形剂，例如片剂时加入固体赋形剂，口服液时加入液体赋形剂、丸剂时加入固体赋形剂，胶囊剂时加入对应的囊皮赋形剂。
下面以几组实施例说明本发明提供的运动后促恢复的营养组合物的性能优势。
实施例1
本实施例中，运动后促恢复的营养组合物包括：200份人参、2000份骨胶原蛋白肽、2000份牡蛎肽、2000份香蕉冻干粉、200份黄芪甲苷和2000份蒲公英花。
优选地，黄芪甲苷是从黄芪中提取得到的。具体是将黄芪药材清洗干净、干燥后，粉碎成100目的颗粒；然后采用超临界二氧化碳流体萃取法，萃取条件为：温度为50℃，压力1.6MPa，流量12L/h，萃取时间1h，得到含有黄芪甲苷的提取物。
本实施例中，运动后促恢复的营养组合物的制备方法，包括以下步骤。
1)按照上述的质量份准备原料；
2)将人参经蒸制、烘干、粉碎，得到人参粉。
蒸制过程为加水蒸1小时，干燥温度80℃，粉碎的粒径200目。
3)将蒲公英花经过提取、后处理，得到蒲公英提取物。
蒲公英花是通过70％乙醇回流方法提取完成的。回流时，加8倍量70％乙醇(体积分数)，回流提取2小时；然后分离得到的液体进行浓缩和干燥，浓缩采用减压浓缩，压力为-0.06～0.08MPa，温度为75℃，减压浓缩至相对密度为1.30得到稠膏；在真空度0.1MPa、温度60℃下干燥2h，得到蒲公英提取物。
4)将步骤1)的骨胶原蛋白肽、牡蛎肽、香蕉冻干粉和黄芪甲苷，步骤2)的人参粉，以及步骤3)的蒲公英提取物混合均匀，得到混合物；
5)向混合物进行加工，得到片状的营养组合物。
本实施例中，向混合物中加入蜂蜜，作为润滑剂，增加颗粒的流动性，减少颗粒与冲模之间的摩擦力，以利于将片剂推出模孔；同时加入蜂蜜，口感甜度适中。
实施例2～实施例6
与实施例1不同的是，实施例2～实施例6提供的运动后促恢复的营养组合物中，各个原料的质量份参照表1所列质量份。
表1实施例2～实施例6各个原料的质量份
实施例2 实施例3 实施例4 实施例5 实施例6
人参 20 80 150 210 240
骨胶原蛋白肽 4600 50 200 1200 2600
牡蛎肽 2400 2800 80 600 1200
香蕉冻干粉 2300 3500 4600 200 800
黄芪甲苷 130 260 400 530 10
蒲公英花 2400 4600 6800 8300 9200
同时实施例2～实施例6提供的运动后促恢复的营养组合物的制备方法与实施例1相同，均是得到片状的营养组合物。
本发明提供的营养组合物，按照上述质量份进行配后，各个原料进行协同作用，向人体适当的补充蛋白质和脂肪，能快速恢复人体新陈代谢，对机体运动后恢复有很好的促进作用；此外，本发明的营养组合物，能增加人体循环动力，提升免疫力，具体功效参见下述的试验结果。同时在试验中设计以下对比例与本发明营养组合物的功效进行对比，从而验证本发明营养组合物所要达到的功效及性能优势。
对比例1
与实施例1不同的是，运动后促恢复的营养组合物包括：200份人参、2000份骨胶原蛋白肽、2000份牡蛎肽。
对比例2
与实施例1不同的是，运动后促恢复的营养组合物包括：200份人参、2000份骨胶原蛋白肽、2000份牡蛎肽、2000份香蕉冻干粉。
对比例3
与实施例1不同的是，运动后促恢复的营养组合物包括：200份人参、2000份骨胶原蛋白肽、2000份牡蛎肽、200份黄芪甲苷。
对比例4
与实施例1不同的是，运动后促恢复的营养组合物包括：200份人参、2000份骨胶原蛋白肽、2000份牡蛎肽、2000份蒲公英花。
对比例5
与实施例1不同的是，运动后促恢复的营养组合物包括：200份人参、2000份骨胶原蛋白肽、2000份牡蛎肽、200份黄芪甲苷、2000份蒲公英花。
进一步，通过下列试验对上述提供的营养组合物性能进行验证。
验证1缓解疲劳
采用实施例1制备的运动后促恢复的营养组合物进行缓解体力疲劳测试。
1、材料和方法
1.1样品
片状的营养组合物0.45g/片，每日两次，每次四片，口服。成人体重按60kg计算，折合剂量为0.06g/kg·BW；用2％淀粉糊作溶剂配制样品。
1.2实验动物
由西安交通大学医学院实验动物中心(质量合格证号：61001700000686、61001700000701生产许可证号：SCXK(陕)2012-003)提供雄性昆明种小鼠120只，体重18-22g，SPF级。分别用于负重游泳、血清尿素氮测定试验、肝糖原和血乳酸测定试验。动物饲料、垫料均由西安交通大学医学院实验动物中心提供。试验动物房为屏障系统，使用许可证号为SYXK(陕)2012-006，温度20-25℃，相对湿度45％-65％。
1.3剂量设计及配制
将营养组合物设计为1.8g/kg·BW、1.2g/kg·BW、0.6g/kg·BW三个剂量组，其剂量分别相当于人体推荐用量的30倍、20倍、10倍，另设一个阴性对照组(2％淀粉糊)。
样品配制：准确称取受试样品1.8g、1.2g、0.6g分别加2％淀粉糊至20mL混合均匀备用。
1.4试验方法
选姿势正确雄性小鼠10只，共分四个试验组，每试验组用40只小鼠并随机分为3小组，各试验组均设三个剂量组和一个阴性对照组，每组10只小鼠。试验一组为负重游泳试验，试验二组为血清尿素氮测定试验，试验三组为肝糖原测定试验。按上述剂量每天经口给予受试样品一次，阴性对照组给予等容量2％淀粉糊，连续30天。然后分别进行各项指标的测定，方法如下：
1.4.1负重游泳试验
末次给予受试样品后30min，置于游泳箱中游泳，水深35cm，水温25℃，鼠尾根部负荷5％体重的铅皮。记录各组小鼠自游泳开始至死亡的时间，作为小鼠负重游泳时间，各剂量组结果与阴性对照组比较进行方差分析。死亡判断标准为：小鼠沉至游泳箱底并停止张口呼吸。若剂量组游泳时间明显长于阴性对照组游泳时间，且差异有显著性(P<0.05)，可判定该受试样品有延长小鼠负重游泳时间的作用。
1.4.2血清尿素氮测定
末次给予受试样品后30min，在温度为30℃的水中不负重游泳90min，休息60min后拔眼球采血0.5mL，分离血清后用全自动生化分析仪进行血清尿素氮测定，各剂量组结果与阴性对照组比较进行方差分析。若剂量组血清尿素含量明显低于阴性对照组，且差异有显著性(P<0.05)，可判定该受试样品有减少疲劳小鼠尿素产生的作用。
1.4.3肝糖原测定
末次给予受试样品后30min处死动物，解剖取出肝脏，按试剂盒要求进行肝糖原测定，各剂量组结果与阴性对照组比较进行方差分析。肝糖原测定采用南京建成赛浩科技有限公司生产的试剂盒进行测定。若剂量组肝糖原含量明显高于阴性对照组，可判定该受试样品有促进小鼠肝糖原储备的作用。表明该试样能够通过增强肝糖原的储备量，以保持运动时所需的血样水平，为机体提供较多能量，缓解疲劳。
2、结果
2.1小鼠负重游泳试验
由表2可见，各剂量组小鼠平均游泳时间较阴性对照组游泳时间均延长，且高剂量组与阴性对照组比较，差异有显著性(P<0.01)。结果表明该样品有延长小鼠负重游泳时间的作用。
表2小鼠负重游泳试验结果
组别(g/kg·BW) 动物数(只) 游泳时间(min) P值
1.8 10 42.80±10.26 0.002**
1.2 10 29.30±11.11 0.754
0.6 10 32.40±9.34 0.321
阴性对照组 10 25.60±9.81
2.2小鼠血清尿素氮测定
由表3可见，高、中剂量组小鼠血清尿素氮含量与阴性对照组比较，差异均有显著性(P<0.01)。结果表明该受试样品对疲劳小鼠尿素的产生有明显作用。
表3小鼠血清尿素氮含量的影响
组别(g/kg·BW) 动物数(只) 尿素氮(mmol/L) P值
1.8 10 11.07±1.97 0.000**
1.2 10 11.62±1.71 0.004**
0.6 10 12.99±0.83 0.347
阴性对照组 10 13.97±1.28
注：与阴性对照组比较，**表示P<0.01。
2.3小鼠肝糖原测定
由表4可见，各剂量组肝糖原含量明显高于阴性对照组，结果表明，该受试样品对促进小鼠肝糖原储备无明显作用。
表4小鼠肝糖原含量的影响
组别(g/kg·BW) 动物数(只) 肝糖原(mg/100g肝)
1.8 10 1971.97±323.76
1.2 10 1888.36±378.61
0.6 10 1846.55±386.12
阴性对照组 10 1843.02±307.63
从上述结果可以看出：高剂量组可明显延长小鼠负重游泳时间，与阴性对照组比较,差异有显著性(P<0.01)；高、中剂量组小鼠血清尿素氮含量与阴性对照组比较，差异均有显著性(P<0.01)；各剂量组能提高小鼠肝糖原的储备量。因此，实施例1得到的营养组合物具有缓解体力疲劳功能。
3、对于实施例2～实施例6以及对比例1～对比例4提供的营养组合物，采用高剂量分别按照上述方法进行小鼠模型试验，分别测定小鼠负重游泳时间、小鼠血清尿素氮含量、小鼠肝糖原的储备量，测定结果参见表5。
表5各实施例与对比例试验结果对比
从表5的结果说明，本发明提供的营养组合物均有利于延长小鼠运动时间，提高机体运动耐力；可以明显抑制乳酸的生成或加速乳酸的分解，从而起到增强肌肉耐受力，缓解疲劳，促进运动后恢复的作用。
验证2抗氧化性
1 材料和方法
1.1 样品
实施例1的质量份所制备的片状营养组合物和安慰剂分别记为1号和2号，人口服每日2次，每次4片，0.45g/片。
1.2受试者选择
1.2.1纳入标准
选年龄18-65岁，身体健康状况良好，无明显脑、心、肝、肺、肾、血液疾患无长期服药史，志愿受试保证配合的人群。
1.2.2受试者排除标准
1.2.2.1妊娠或哺乳期妇女，对保健食品过敏者。
1.2.2.2合并有心、肝、肾和造血系统等严重疾病患者。
1.2.2.3短期内服用与受试功能有关的物品，影响到对结果的判断者。
1.2.2.4不符合纳入标准，未按规定食用受试样品，无法判定功效或资料不全影响功效或安全性判断者。
1.3实验设计与分组
对受试者按MDA、SOD、GSH-Px水平随机分为试食组和对照组，尽可能考虑影响结果的主要因素如年龄、性别、生活饮食习惯等，进行均衡性检验，以保证组间的可比性。按双盲法进行试食试验。
1.4试验方法
采用自身和组间两种对照设计。将符合纳入标准并保证配合试验的自愿受试者按照1.3随机分为试食组和对照组。试验组按推荐服用方法、服用量每日服用受试产品，对照组服用安慰剂，连续180天。试验期间对照组和试食组原生活、饮食不变
2观察指标
各项指标在试验开始及结束时各检测1次。
2.1安全性指标
2.1.1一般状况
试验前详细询问受试者健康状况，了解受试者的精神、睡眠、饮食、大小便等情况，并测定体重、血压、心率等。对所有受试者进行常规体格检查及必要的实验室检查。
2.1.2血、尿、便常规检查
2.1.3肝、肾功能检查
2.1.4胸透、心电图、腹部B超检查。
2.1.5不良反应观察
2.2功效指标
2.2.1过氧化脂质含量
观察试验前后MDA的变化及MDA下降百分率
MDA下降率＝((试验前MDA-试验后MDA)/试验前MDA)×100％
2.2.2超氧化物歧化酶
观察试验前后SOD的变化及SOD的升高百分率。
SOD升高率＝((试验后SOD-试验前SOD)/试验前SOD)×100％
2.2.3谷胱甘脑过氧化物酶
观察试验前后GSH-Px的变化及GSH-Px的升高百分率。
GSH-Px升高率＝((试验后GSH-Px-试验前GSH-Px)/试验前GSH-Px)×100％
3、结果
双盲法观察结束揭晓，服食2号者为实施例1制备的营养组合物，服食1号者为安慰剂。
3.1一般情况
初始试验人群试食组53例，对照组53例，试食前后，受试者精神、睡眠、饮食、大小便状况未见异常。对照组:男/女为20/33，年龄为55.72±6.99岁；试食组男/女为19/34，年龄为56.30±6.88岁。
3.2安全性观察
3.2.1体重、血压、心率、尿常规、大便常规、血常规及生化检测见表6和表7。
表6试食前后体重、血压、心率、血常规、尿常规、大便常规变化情况
表7试食前后生化指标变化情况
从表6和表7可知，食用受试物180天后，试食组和对照组体重、血压、心率均未见明显异常改变，血常规、尿常规、大便常规及生化指标均在正常范围内，表明本实施例的营养组合物对机体健康无明显损害。
3.2.2心电图、腹部B超、胸透检查，均未见明显异常
3.2.3试食期间未见与样品相关的不良反应。
3.3功效观察
试食试验前后血清MDA、SOD、GSH-Px水平变化情况见表8和表9。
表8试食前后血清MDA、SOD、GSH-Px水平比较
注：*与试食前比较P<0.05，#与对照组比较P<0.05
表9试食前后血清MDA、SOD、GSH-Px变化率
组别 对照组 试食组
MDA降低率 0.68 2.89
SOD升高率 0.16 10.29
GSH-Px升高率 0.31 11.47
参见表8和表9，试验前，对照组和试食组血清MDA、SOD水平比较，P值均大于0.05，提示两组之间具有可比性。试验后试食组血清SOD及GSH-PX活与对照组试食后及自身试验前比较，均有提升，且差异均有显著性。试食后试食组MDA与对照组及自身试验前比较，MDA值下下降，但是下降幅度不大，差异性不显著。试食组血清SOD较试验前升高10.29％，血清MDA较试验前降低2.89％，血清GSH-Px活力较试验前升高11.47％。
3.4脱失率
经过180天试验后，对照组有3例受试者因间断服用受试品无法判断效果被筛除；试食组有3例受试者因间断服用受试品无法判断效果被筛除。最后有效试验人群对照组50例，试食组50例。见表10。
表10试验脱失率
组别 对照组 试食组
试食前 53 53
脱失数 3 3
脱失率 5.66％ 5.66％
从上述结果可知，受试者服用受试物180天后，结果表明：试食后试食组血清SOD、GSH-Px活力分别较试验前提高10.29％和11.47％，血清MDA较试验前降低2.89％，其中SOD活力和血清GSH-Px活力与对照组试食后及自身试验前比较，差异均有显著性。试食前后体重、血压、心率均未见明显异常改变，血常规、尿常规、大便常规、生化检测、心电图、B超、胸透等安全性指标均在正常范围内。试食期间未见与样品相关的不良反应。可见，本实施例提供的营养组合物具有抗氧化功能。
验证3免疫力
1、材料和方法
1.1受试样品
片状的营养组合物0.45g/片，每日两次，每次四片，口服。成人体重按60kg计算，折合剂量为0.06g/kg·BW。
1.2试验动物
由西安交通大学医学院实验动物中心提供，SPF级昆明种雄性小白鼠120只体18-22克，动物质量合格证号61001700001376，动物生产许可证号：SCXK(陕)2012-003，用于第一组ConA诱导的小鼠淋细胞转化试验、NK细胞活性测定，第二组小鼠迟发型变态反应(DTH)测定、淋巴器官/体重比值测定及第三组抗体生成细胞检测、血清溶血素测定。由北京维通利华实验动物技术有限公司提供，SPF级昆明种雄性小白鼠80只，体重18-22克动物质量合格证号为11400700170935，动物生产许可证号：SCXK(京)2012-0001用于第四组小鼠碳廓清试验及第五组小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞试验。饲料、垫料均由西安交通大学医学院实验动物中心提供。
1.3动物室环境
实验动物房为屏障系统使用许可证号为SYXK(陕)2012-006温度20-25℃，相对湿度45％-65％。
1.4剂量设计、受试样品配制
剂量设计：将200只雄性小鼠设定为五大组(分五项试验)，每大组40只小鼠并随机分为4小组，每小组10只小鼠。剂量设计：按人体推荐量的30倍、20倍、10倍的剂量设计，即1.8g/kg.BW、1.2g/kg.Bw、0.6g/kg.Bw三个剂量组，另设阴性对照组(蒸馏水)。
受试样品配制：分别取相应质量的样品加蒸水至20mL，充分混备用。灌胃量按20mL/kg·BW，连续灌胃30天。
1.5试验方法
各组小鼠按剂量设计每天灌胃受试样品一次，灌胃容量均为20mL/kg·BW，阴性对照组给与等容量蒸馏水，连续灌胃30天后分别对动物进行各项免疫指标测定，试验方法如下：
1.5.1ConA 诱导的小鼠脾淋巴细胞转化试验(MTT法)
无菌操作摘取脾脏，置于盛有适量无菌Hanks液平中，轻轻将脾磨碎，制成细胞悬液经200目筛网过滤，用Hanks液清洗2次，每次离10min(1000r/min)。然后将细胞悬浮于1mL的完全培养液中，用台酚兰染色计数活细胞数(应在95％以上)，用RPMI1640培养液调整细胞浓度为3×106个/mL。将每一份脾细胞悬液分两孔加入24孔培养板中，每孔1mL孔加75μLConA液(相当于7.5μg/mL)，另一孔作为对照，置5％CO2孵箱中37℃培养72h。培养结束前4h，每孔轻轻吸去上清液0.7mL，加入0.7mL不含小牛血清的RPMI640培养液，同时加入MTT(5mg/mL)50μL/孔，继续培养4h。培养结束后，每孔加入1mL酸性异醇吹打混匀，使紫色结晶完全溶解，用紫外分光光度计以570nm波长测定光密度值。结果如表11所示。
表11对细胞免疫功能的影响
注：与阴性对照组比较，P>0.05。
由表11可见，本发明提供的营养组合物，各剂量组ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞增殖能力均高于与阴性对照组，但是与阴性对照组比较，差异均无显著性。
1.5.2血清溶血素的测定
给受试样品第26天每鼠腹腔注射2％SRBC 0.2mL/只，于免疫后第四天摘眼球采血，分离血清。用生理盐水将血清倍比稀释，将不同稀释度的血清分别置于微量血凝板内，每孔100L。再加入100μL、0.5％(v/v)的SRBC悬液，混合装入湿润的平盘内加盖，于37℃温箱孵育3h进行血清溶血素测定。统计血球凝集度，计算相应抗体积数，各剂量组结果与阴性对照组比较进行方差分析，结果如表12所示。
表12对小鼠溶血素水平的影响
组别 剂量 动物数 血清溶血素(抗体积数) P值
高剂量 1.8 10 197.0±11.4* 0.011
中剂量 1.2 10 193.6±16.2 0.045
低剂量 0.6 10 188.5±12.9 0.259
阴性对照组 10 179.0±11.1
注：与阴性对照组比较，*表示P<0.05。
由表12可见，本发明提供的营养组合物，营养组合物高、中剂量组能增强其血清溶血素水平，与阴性对照组比较，差异均有显著性。
1.5.3小鼠碳廓清试验
各组小鼠尾静脉注射印度墨汁(用生理水4.0倍稀释)10mL/kg·BW。每鼠在注射墨汁后2min和10min分别通过眼内眦静脉丛各取血20μL，并迅速加入到0.1％碳酸钠溶液2mL中并摇匀。以碳酸钠溶液作空白对照，用紫外可见分光光度计600nm波长处测光密度值(OD)。将小鼠处死后取肝脏和脾脏，用滤纸吸干脏器表面血污，分别称重。按公式计算吞噬指数(a)，各剂量组结果与阴性对照组比较进行方差分析。结果如表13所示。
表13对小鼠碳廓清功能的影响
组别 剂量 动物数 吞噬指数a P值
高剂量 1.8 10 6.59±0.99* 0.001
中剂量 1.2 10 6.18±0.87 0.025
低剂量 0.6 10 5.81±0.85 0.194
阴性对照组 10 5.12±0.72
注：与阴性对照组比较，*表示P<0.05。
由表13可见，本发明提供的营养组合物，高、中剂量组均能提高小鼠碳廓清吞噬指数，与阴性对照组比较，差异均有显著性(P<0.05)。
1.5.4小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞试验
采用半体内法。各组小鼠均腹腔注射20％(v/v)鸡红细胞悬液1L/只，间隔30分钟颈椎脱臼处死小鼠，经腹腔注入生理盐水2mL/只。转动鼠板min后吸出腹腔洗液1mL平均分滴于2片载玻片上，放入垫有湿纱布的搪瓷盒内，37℃温育30min。孵毕，再用生理盐水漂洗、晾干，以1：1的丙酮甲醇溶液固定，4％(v/v)Giemsa-磷酸缓冲液染色，再用蒸馏水漂洗晾干。显微镜油镜下观察100个巨噬细胞，计数吞噬鸡红细胞的巨噬细胞数和巨噬细胞吞噬的鸡红细胞总数及其被消化的程度，按下式计算吞噬百分率和吞噬指数，各剂量组结果与阴性对照组比较进行方差分析，结果如表14所示。
吞噬百分率(％)＝(吞噬鸡红细胞的巨噬细胞数/计数的巨噬细胞数)×100
吞噬指数(％)＝(被吞噬的鸡红细胞总数/计数的巨噬细胞数)×100
表14各剂量组小鼠巨噬细胞吞噬鸡红细胞指数
注：与阴性对照组比较，P>0.05。
由表14可见，本发明提供的营养组合物，中剂量和高剂量组能提升小鼠的吞噬指数；各剂量组均能提升小鼠的吞噬百分率，但是与阴性对照组比较，差异不是很显著。
1.5.5NK细胞活性测定
方法：乳酸脱氢酶(LDH)测定法
靶细胞的传代(YAC-1细胞)：试验前24h将靶细胞进行传代培养。用前以Hanks液洗3次，用RPMI640完全培养液调整细胞浓度为4×105个/mL。
脾细胞悬液的制备(效应细胞)：无菌取脾，置于盛有适量无菌Hanks液的小平皿中，用镊子轻轻将脾磨碎，制成单细胞悬液。经200目筛网过滤，用Hanks液洗2次，每次离心10min(1000r/min)。弃上清将细胞浆弹起，加入0.5mL灭菌水20秒，裂解红细胞后再加入0.5mL2倍Hanks液及8mLHanks液，1000r/min，10min离心，用1mL含10％小牛血清的RPM640完全培养液重悬，用1％冰醋酸稀释后计数(活细胞数应在95％以上)，用台酚兰染色计数活细胞数(应在95％以上)，最后用RPML1640完全培养液调整细胞浓度为2×107个/mL。
NK细胞活性检测：取靶细胞和效应细胞各100μL(效靶比50：1)，加入U型96孔培养板中；靶细胞自然释放孔加靶细胞和培养液各100μL，靶细胞最大释放孔加靶细胞和1％NP40各100uL；上述各项均设三个平行孔，于5％CO2培养箱中37℃培养4h，然后将96孔培养板以1500r/min离心5min，每孔吸取上清100μL置平底96孔培养板中，同时加入LDH基质液100μL，根据室温不同反应8min，每孔加入1mol/L的HCL30μL，在酶标仪490nm处测定光密度值(OD)按下式计算NK细胞活性，求出NK细胞活性转换值，各剂量组结果与阴性对照组比较进行方差分析，结果如表15所示。
NK细胞活性(％)＝(反应孔OD-自然释放孔OD)×100/(最大释放孔OD-自然释放孔OD)。
表15对小鼠NK细胞活性的影响
组别 剂量 动物数 NK细胞活性值 P值
高剂量 1.8 10 32.07±4.22 0.939
中剂量 1.2 10 30.06±3.60 0.891
低剂量 0.6 10 29.44±4.94 0.677
阴性对照组 10 31.17±4.20
由表15可见，本发明提供的营养组合物，各受试样品组的NK细胞活性显著高于阴性对照组的NK细胞活性，但是各剂量组的NK细胞活性值与阴性对照组比较，差异性不是很显著性。即可判定该项试验结果阳性。
综合上述试验结论，依据《保健食品检验与评价术规》(2003中“增强力能评价方法)，可以判定本发明提供的营养组合物具有增强免疫力功能。
从上述验证结果可以看出，本发明提供的营养组合物能向人体提供所需碳水化合物，补充能量；能适当的补充蛋白质和脂肪，既有助于维持身体新陈代谢，也有助于体内脂肪正常消耗；此外，还能增加人体循环动力，有助于恢复正常的新陈代谢；而且本发明提供的营养组合物还具有抗氧化和提升免疫力的作用，能很好的促进运动后人体的恢复。

Claims (10)

1.一种运动后促恢复的营养组合物，其特征在于，所述运动后促恢复的营养组合物包括以下质量份的各个原料：10～300份人参、20～5000份骨胶原蛋白肽、30～3000份牡蛎肽、100～5000份香蕉冻干粉、7～700份黄芪甲苷和100～10000份蒲公英花。
2.根据权利要求1所述的运动后促恢复的营养组合物，其特征在于，所述运动后促恢复的营养组合物包括以下质量份的各个原料：60～300份人参、200～4000份骨胶原蛋白肽、120～2700份牡蛎肽、300～3600份香蕉冻干粉、12～560份黄芪甲苷和600～8000份蒲公英花。
3.根据权利要求2所述的运动后促恢复的营养组合物，其特征在于，所述运动后促恢复的营养组合物包括以下质量份的各个原料：200份人参、2000份骨胶原蛋白肽、2000份牡蛎肽、2000份香蕉冻干粉、200份黄芪甲苷和2000份蒲公英花。
4.根据权利要求3所述的运动后促恢复的营养组合物，其特征在于，所述黄芪甲苷是从黄芪中提取得到的。
5.一种如权利要求4所述的运动后促恢复的营养组合物的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤：
1)按照所述的质量份准备各个原料；
2)将人参经蒸制、烘干、粉碎，得到人参粉；
3)将蒲公英花经过提取、后处理，得到蒲公英提取物；
4)将步骤1)的骨胶原蛋白肽、牡蛎肽、香蕉冻干粉、黄芪甲苷、步骤2)的人参粉以及步骤3)的蒲公英提取物混合均匀，得到混合物；
5)将混合物进行加工，得到营养组合物。
6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述步骤2)中，蒲公英花是通过蒸煮法、乙醇回流或渗漉法提取完成的。
7.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述步骤2)中，后处理是将蒲公英花提取液减压浓缩至相对密度为1.30～1.35稠膏后，再经过真空干燥2h，得到膏状蒲公英提取物；减压浓缩的温度为75～80℃，真空干燥的温度为40℃～65℃。
8.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述步骤5)中的加工，是向混合物中加入赋形剂；所述营养组合物为片剂、口服液或胶囊剂。
9.如权利要求1所述的运动后促恢复的营养组合物在制备增强肌肉耐受力药物中的应用。
10.如权利要求1所述的运动后促恢复的营养组合物在制备增强免疫力和抗氧化药物中的应用。
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