CN117740962A - 一种基于lc-ms/ms技术分析检测荧光增白剂的方法及应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种基于LC‑MS/MS技术分析检测荧光增白剂的方法，该制备方法通过计算出已知量的25种荧光增白剂标准样品对应系数f，采用将荧光增白剂标准样品的系数f代入计算，以获得待检测样品中荧光增白剂的浓度Cr，具体计算式如下为：Ar/As＝f×Cr/Cs，通过分析和计算出待测样品的分子型提取物和离子型提取物峰面积值Ar与待检测样品中荧光增白剂的浓度Cr，与已知量的25种荧光增白剂峰面积Ai比对，可定性和定量分析待测样品中荧光增白剂的含量。本发明还提供该方法在日化、纺织、造纸领域中的应用。该方法具有检测类别全面、适用范围广的特点，还能够同时分析检测离子型与分子型荧光增白剂，可进行分子型、离子型共25种荧光增白剂的定性定量。
Description
技术领域
本发明涉及化学检测技术领域，尤其涉及一种基于LC-MS/MS技术分析检测荧光增白剂的方法及应用。
背景技术
荧光增白剂是染料工业中增加彩色物体鲜艳度、炫彩度的化合物，广泛运用于纺织品、造纸、日用化妆品等多个领域，年总产量达15万吨以上。值得关注的是，荧光增白剂在使用过程中容易释放到环境中，由于其化学稳定性而不易被生物降解，可在环境中持续存在，引发一系列环境健康问题。同时荧光增白剂具有多种毒性，在使用添加荧光增白剂的日用品过程中人体上会有少量残留，可能对人体造成伤害。
目前，荧光增白剂测定方法主要为荧光分光光度法、高效液相色谱法等。这些方法定量不精准，也不能全面测定出荧光增白剂具体类别。LC-MS/MS即液相色谱与串联质谱联用，是一种结合了液相色谱(LC)的物理分离能力和质谱(MS)的质谱分析能力的分析化学技术。与LC-MS相比，LC-MS/MS结合两个质谱仪的分析能力，一级质谱MS1用于分析过滤前体离子，二级质谱MS2用于分析前体离子碎裂后产生的碎片离子，提高检测的灵敏度，且利用碎片离子的图谱可以获得更多关于分析物的结构信息。基于此，本发明提供一种基于LC-MS/MS技术分析检测荧光增白剂的方法及应用。
发明内容
为了克服现有技术的不足和缺点，本发明的首要目的是提供一种基于LC-MS/MS技术分析检测荧光增白剂的方法，该方法一方面能同时分析检测分子型与离子型荧光增白剂，另一方面，该方法具有检测类别全面、适用范围广的特点，可覆盖分子型、离子型25种荧光增白剂的定性定量。
为了实现本发明的目的，本发明通过以下技术手段实现解决上述技术问题：
一种基于LC-MS/MS技术分析检测荧光增白剂的方法，包括以下步骤：
(1)将待测样品充分粉碎，混匀，在低温下保存，备用；
(2)将待检测样品分离成分子型提取物和离子型提取物分别放至棕色容量瓶中；
(3)分别称取已知量的25种荧光增白剂标准样品放至棕色容量瓶中，将每种荧光增白剂制成1mg/mL的混合标准溶液，按逐级稀释的方法配制成标准系列溶液，往标准系列溶液加入等质量的内标物BTH-d4和NSC 5067，采用LC-MS/MS仪器进行检测，检测出荧光增白剂峰面积Ai和内标物峰面积As，以Ai/As为纵坐标，标准化合物浓度Ci与内标物浓度Cs比为横坐标，进行一次线性拟合，绘制出标准曲线，具体计算公式为：Ai/As＝f×Ci/Cs，进而分别计算出25种荧光增白剂标准样品对应的系数f；
(4)采用LC-MS/MS仪器进行检测，检测出分子型FB(荧光增白剂)和离子型FB(荧光增白剂)峰面积值Ar与样品中所加的内标物浓度Cs及内标峰面积值As，将荧光增白剂标准样品的系数f代入计算，以获得待检测样品中荧光增白剂的浓度Cr，具体计算式为：Ar/As＝f×Cr/Cs；
(5)根据分析和计算出的分子型FB和离子型FB峰面积值Ar与待检测样品中荧光增白剂的浓度Cr，通过与已知量的25种荧光增白剂峰面积Ai比对，可定量分析待测样品中荧光增白剂。
本发明的基于LC-MS/MS技术分析检测荧光增白剂的方法涵盖13种分子型荧光增白剂，12种离子型荧光增白剂，可同时测定不同种类的荧光增白剂，涵盖范围广，且针对分子型、离子型荧光增白剂精准提取，有助于快捷高效分析。
优选地，所述分子型FB的制备方法具体包括以下步骤：
将待测样品研磨过筛处理，称取一定量的样品到离心管内，并加入内标物BTH-d4和内标物NSC 5067，离心管中平衡，使用体积比为3:7的二氯甲烷/乙腈(DCM/ACN)溶剂三次萃取并将所得上清液合并，浓缩至干，再使用1mL体积比为3:7的DCM/ACN溶剂进行复溶，合并的上清液标记为提取物I；
提取物I通过复合色谱柱从下到上填充质量分数为5％水灭活的弗罗里硅土2g和质量分数为5％水灭活的碱性氧化铝2g进行净化，该复合色谱柱在净化之前，先用10mL体积比为3:7的DCM/ACN溶剂净化去除填料中的杂质，上样提取物I后，再用15mL体积比为3:7的DCM/ACN溶剂洗脱色谱柱，用玻璃管接收上样及洗脱液，将洗脱液氮吹浓缩并近干，定容至500μL，通过0.22μm滤膜过滤后进行LC-MS/MS分析。
优选地，所述待测样品、内标物BTH-d4和内标物NSC 5067的质量比为50mg:10ng:10ng。
优选地，所述DCM/ACN溶剂三次萃取的具体步骤为：往离心管中加入体积比为3:7的DCM和ACN溶剂，涡旋并超声处理，离心，取上清液。
优选地，所述涡旋时间为15min，超声处理时间为20min，离心转速为3800r/min，离心时间为6min。
优选地，所述浓缩至干的步骤在氮气流下进行。
优选地，所述离子型FB的制备方法具体包括以下步骤：
将待测样品研磨过筛处理，称取一定量的样品到离心管内，并加入内标物BTH-d4和内标物NSC 5067，离心管中平衡，使用体积比为3:7的DCM/ACN溶剂三次萃取并将所得上清液合并，浓缩至干，再使用3mL体积比3:2的ACN/H2O溶剂进行复溶，合并的上清液标记为提取物II；
提取物II在氮气流下直接浓缩至1mL上清液，浓缩好的上清液使用60mg OasisHLB 3cc固相萃取小柱通过SPE装置净化；固相萃取小柱先依次加入3mL甲醇、3mL水活化，将浓缩好的上清液上样，然后用2mL质量分数为5％甲醇水淋洗，待固相萃取小柱抽干后，用10mL体积分数为5％氨甲醇洗脱，收集洗脱液；将洗脱液浓缩并近干，然后用0.5mL体积为3:2的ACN/H2O复溶，通过0.22μm滤膜过滤后进行LC-MS/MS分析。
优选地，所述浓缩至干的步骤在氮气流下进行。
本发明的另一目的是提供上述基于LC-MS/MS技术分析检测荧光增白剂的方法在日化、纺织、造纸领域中的应用。
与现有技术相比，本发明的有益效果在于：
1、本发明的基于LC-MS/MS技术分析检测荧光增白剂的方法涵盖13种分子型荧光增白剂，12种离子型荧光增白剂，可同时测定不同种类的荧光增白剂，涵盖范围广，且针对分子型、离子型荧光增白剂精准提取，有助于快捷高效分析。
2、本发明使用的高效液相色谱法具有定量精确度高、分离效果理想、检测灵敏度高、分析速度快、检出限低等优点，通过高效液相色谱法与质谱联用，具有检测类别全面、适用范围广的特点。
附图说明
图1为本发明检测已知13种分子型荧光增白剂总离子流图；
图2为本发明实施例1的广东污水处理厂Ⅰ活性污泥中分子型荧光增白剂的总离子流图；
图3为本发明实施例1的广东污水处理厂Ⅱ活性污泥中分子型荧光增白剂的总离子流图；
图4为本发明检测已知12种离子型荧光增白剂总离子流图；
图5为本发明实施例1的广东污水处理厂Ⅰ活性污泥中离子型荧光增白剂的总离子流图；
图6为本发明实施例1的广东污水处理厂Ⅱ活性污泥中离子型荧光增白剂的总离子流图；
图7为本发明实施例2的北京污水处理厂Ⅰ活性污泥中分子型荧光增白剂的总离子流图；
图8为本发明实施例2的北京污水处理厂Ⅱ活性污泥中分子型荧光增白剂的总离子流图；
图9为本发明实施例2的北京污水处理厂Ⅰ活性污泥中离子型荧光增白剂的总离子流图；
图10为本发明实施例2的北京污水处理厂Ⅱ活性污泥中离子型荧光增白剂的总离子流图。
具体实施方式
为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合本发明附图说明和实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
下述实施例中所用的试验材料和试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径获得。
实施例中未注明具体技术或条件者。均可以按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。
本发明通过如下方式得到荧光增白剂标准样品的系数f：
分别称取已知量的25种荧光增白剂标准样品放至棕色容量瓶中，分子型荧光增白剂以乙腈定容，离子型荧光增白剂以乙腈水定容，将每种荧光增白剂制成1mg/mL的混合标准溶液，按逐级稀释的方法配制成标准系列溶液(其中，分子型荧光增白剂配制5、10、25、50、100ng/mL标准系列溶液，离子型荧光增白剂配制100、200、250、500、1000ng/mL标准系列溶液)，往标准系列溶液加入等质量的内标物BTH-d4和NSC 5067，采用LC-MS/MS仪器进行检测，检测出荧光增白剂峰面积Ai和内标物峰面积As，以Ai/As为纵坐标，标准化合物浓度Ci与内标物浓度Cs比为横坐标，进行一次线性拟合，绘制出标准曲线，具体计算公式如下所示：
Ai/As＝f×Ci/Cs，分别计算出25种荧光增白剂标准样品对应的系数f。
图1为检测已知13种分子型荧光增白剂总离子流图，13种分子型荧光增白剂总离子流图，其中，1-AT、2-SWN、3-ER-Ⅰ、4-ER-Ⅱ、5-ER-Ⅲ、6-PF、7-EBF、8-OB-1、9-KCB、10-FP、11-KSN、12-OB-2、13-OB。
图4为检测已知12种离子型荧光增白剂总离子流图，12种离子型荧光增白剂总离子流图，其中，14-FWA264、15-MST(FWA353)、16-SPP(FWA357)、17-BBU(FWA220)、18-FWA210、19-FWA28、20-BA、21-VBL、22-CBS(FWA351)、23-BBF(FWA134)、24-CXT、25-5bm。
实施例1
一种基于LC-MS/MS技术分析检测荧光增白剂的方法，本方法适用于日化、纺织、造纸领域，本实施例所分析的待测样品来自于广东典型污水处理厂Ⅰ、Ⅱ活性污泥，该方法包括如下步骤：
S1、取待测样品充分粉碎，混匀，在低温下保存，备用；
S2、样品的前处理：
分子型化合物的提取：将采集的广东污水处理厂Ⅰ活性污泥样品和广东污水处理厂Ⅱ活性污泥样品分别存放于-18℃的冰箱中保存，并分别称量50mg研磨过筛处理过的样品，装入10mL离心管中；然后分别加入BTH-d4和NSC 5067(各10ng)；平衡12h后，每个样品加入3mL DCM:ACN(v/v＝3/7)溶剂，通过涡旋15min和超声处理20min提取，然后以3800r/min的转速离心6min，后将上清液转至另一个玻璃管中，将上清液继续萃取提取，该萃取提取过程重复3次；将3次萃取提取的上清液合并，然后在温和的氮气流下浓缩至干，加1mL DCM:ACN(v/v＝3/7)复溶，合并的上清液标记为提取物I。
提取物I是包含全部的分子型FBs，不包括离子型FB，提取物I通过复合色谱柱从下到上填充质量分数为5％水灭活的弗罗里硅土2g和质量分数为5％水灭活的碱性氧化铝2g进行净化，该复合色谱柱在净化之前，先用10mL体积比为3:7的DCM/ACN溶剂净化去除填料中的杂质，上样提取物I后，再用15mL体积比为3:7的DCM/ACN溶剂洗脱色谱柱，用玻璃管接收上样及洗脱液，将洗脱液氮吹浓缩并近干，定容至500μL，通过0.22μm滤膜过滤后后进行LC-MS/MS分析。
离子型化合物的提取：将采集的广东污水处理厂Ⅰ活性污泥样品和广东污水处理厂Ⅱ活性污泥样品分别存放于-18℃的冰箱中保存，并分别称量50mg研磨过筛处理过的样品，装入10mL离心管中；然后分别加入BTH-d4和NSC 5067(各10ng)；平衡0.5h后，每个样品加入3mL DCM:ACN(v/v＝3/7)溶剂，通过涡旋15min和超声处理20min提取，然后以3800r/min的转速离心6min，后将上清液转至另一个玻璃管中，将上清液继续萃取提取，该萃取提取过程重复3次，将3次萃取提取的上清液合并，浓缩至干，再使用3mL体积比3:2的ACN/H2O溶剂进行复溶，合并的上清液标记为提取物II；
提取物II含有全部离子型FBs，提取物II在温和氮气流下直接浓缩至1mL，浓缩好的上清液使用Oasis HLB 3cc(60mg)固相萃取小柱通过SPE装置净化，固相萃取小柱先依次加入3mL甲醇、3mL水活化，将浓缩好的上清液上样，然后用2mL质量分数为5％甲醇水淋洗，待固相萃取小柱抽干后，用10mL体积分数为5％氨甲醇洗脱，收集洗脱液；将洗脱液浓缩并近干，然后用0.5mL体积为3:2的ACN/H2O复溶，通过0.22μm滤膜过滤后进行LC-MS/MS分析。
S3、LC-MS/MS检测：ExionLC AC超快液相色谱与Triple Quad 5500质谱仪(ABSciex，Framingham，MA)对25种FBs进行目标筛选和定量分析。质谱仪配备了电喷雾电离(ESI)探针，该探针在非离子FB的ESI正离子(+)离子模式和离子FB的负(-)离子模式下运行。本发明使用的高效液相色谱法具有定量精确度高、分离效果理想、检测灵敏度高、分析速度快、检出限低等优点，通过高效液相色谱法与质谱联用，分析荧光增白剂的种类更全面、高效、快速、高灵敏。
分子型FB：使用XBridge BEH C18色谱柱(2.1mm×100mm，2.5μm)，进样量设为5μL，流速设为0.3mL/min。流动相由含有0.1％甲酸的水溶液(A相)和乙腈(B相)组成，梯度洗脱程序如下：0-1min，10％B；8-15min，90％B；16-20min，10％ B。采用多反应检测技术(MRM)模式；气帘气：35psi；离子喷雾电压：5500V；离子源温度：550℃；辅助加热气：45psi；喷雾气：45psi。检测分析得最终结果，图2为广东污水处理厂Ⅰ活性污泥中分子型荧光增白剂的总离子流图，图3为广东污水处理厂Ⅱ活性污泥中分子型荧光增白剂的总离子流图。
离子型FB：使用ACQUITY UPLC BEH C18色谱柱(2.1mm×100mm，1.7μm)，进样量设为5μL，流速设为0.25mL/min。流动相由含有0.02％氨水的5mM乙酸氨溶液(A相)和乙腈(B相)组成，梯度洗脱程序如下：0-1min，10％B；1-2min，85％B；2-6min，65％B；6-10min，10％B。采用多离子检测(MRM)模式；气帘气：35psi；离子喷雾电压：-4500V；离子源温度：450℃；辅助加热气：45psi；喷雾气：45psi。检测分析得最终结果，图5为广东污水处理厂Ⅰ活性污泥中离子型荧光增白剂的总离子流图；图6为广东污水处理厂Ⅱ活性污泥中离子型荧光增白剂的总离子流图。
将LC-MS/MS检测所获得的分子型提取物和离子型提取物峰面积值Ar与样品中所加的内标物浓度Cs及内标峰面积值As，将荧光增白剂标准样品的系数f代入计算，以获得待检测样品中荧光增白剂的浓度Cr，具体计算式为：Ar/As＝f×Cr/Cs，根据分析和计算出的分子型提取物和离子型提取物峰面积值Ar与待检测样品中荧光增白剂的浓度Cr，测定结果如表1所示。通过与已知量的25种荧光增白剂峰面积Ai比对，可定性和定量分析待测样品中荧光增白剂。
表1为广东污水处理厂Ⅰ、Ⅱ检测测定值如下(单位为ng/g)
| ng/g | 标准曲线 | DF | 污水处理厂Ⅰ | 污水处理厂Ⅱ |
| OB | y＝3105x | 100％ | 17.7 | 23.6 |
| KCB | y＝719x | 100％ | 9.41 | 9.88 |
| SWN | y＝1646x | 100％ | 41.3 | 2.52 |
| PF | y＝1692x | 100％ | 9.12 | 5.62 |
| FP | y＝121x | 100％ | 53.8 | 776 |
| ERI/II/III | y＝86x | 100％ | 17.7 | 18.1 |
| OB-1 | y＝1004x | 100％ | 50.8 | 55.7 |
| AT | y＝388x | 94％ | 0.12 | 0.36 |
| KSN | y＝203x | 100％ | 6.3 | 5.72 |
| OB-2 | y＝0.702x | 100％ | 47.6 | 87.3 |
| EBF | y＝1316x | 52％ | 0.21 | 0.21 |
| SPP | y＝2.1x | 100％ | 59601 | 4245 |
| FB 5bm | y＝0.0217x | 100％ | 10377 | 12906 |
| FB 264 | y＝0.244x | 100％ | 779 | 244 |
| BBF | y＝1.01x | 100％ | 13.8 | 26.4 |
| MST | y＝0.296x | 100％ | 2176 | 499 |
| FB 210 | y＝1.375x | 100％ | 589 | 62.9 |
| BBU | y＝2.034x | 100％ | 1532 | 114 |
| FB 28/BA | y＝6.71x | 100％ | 773 | 1054 |
| VBL | y＝11.38x | 100％ | 1598 | 5233 |
| CXT | y＝14.57x | 100％ | 7974 | 12988 |
| CBS | y＝25.301x | 100％ | 2298 | 4603 |
本发明的基于LC-MS/MS技术分析检测荧光增白剂的方法涵盖13种分子型荧光增白剂，12种离子型荧光增白剂，可同时测定不同种类的荧光增白剂，涵盖范围广，且针对分子型、离子型荧光增白剂精准提取，有助于快捷高效分析。
实施例2
一种基于LC-MS/MS技术分析检测荧光增白剂的方法，本方法适用于日化、纺织、造纸领域，本实施例所分析的待测样品来自于典型北京污水处理厂Ⅰ、Ⅱ活性污泥，该方法包括如下步骤：
S1、取待测样品充分粉碎，混匀，在低温下保存，备用；
S2、样品的前处理：
分子型化合物的提取：将采集的北京污水处理厂Ⅰ活性污泥样品和北京污水处理厂Ⅱ活性污泥样品分别存放于-18℃的冰箱中保存，并分别称量约50mg研磨过筛处理过的样品，装入10mL离心管中；然后分别加入BTH-d4和NSC 5067(各10ng)；平衡12h后，每个样品加入4mL DCM:ACN(v/v＝3/7)溶剂，通过涡旋15min和超声处理20min提取，然后以3800r/min的转速离心6min，后将上清液转至另一个玻璃管中，将上清液继续萃取提取，该萃取提取过程重复3次；将3次萃取提取的上清液合并，然后在温和的氮气流下浓缩至干，加1mLDCM:ACN(v/v＝3/7)复溶(标记为提取物I)。
提取物I是包含全部的分子型FBs，不包括离子型FB，提取物I通过复合色谱柱从下到上填充2g质量分数为5％水灭活的弗罗里硅土和2g质量分数为5％水灭活的碱性氧化铝净化(复合色谱柱首先用10mL DCM:ACN(v/v＝3/7)比例溶剂净化去除填料中的杂质，上样提取物I后，用15mL DCM:ACN(v/v＝3/7)洗脱色谱柱，用玻璃管接收上样及洗脱液)，洗脱液氮吹浓缩并近干，定容至500μL，0.22μm滤膜过滤后进行LC-MS/MS分析。
离子型化合物的提取：将经过DCM:ACN(v/v＝3/7)提取三次后的样品，用4mL混合的ACN/H2O(v/v＝3/2)萃取相同的样品。合并的上清液(提取物II)含有全部离子型FBs。萃取液II在温和氮气流下直接浓缩至1mL，浓缩好的上清液使用Oasis HLB 3cc(60mg)固相萃取小柱通过SPE装置净化。小柱先依次加入3mL甲醇，3mL水活化，将浓缩物上样，然后用2mL5％甲醇水淋洗，待小柱抽干后，用10mL 5％氨甲醇(v/v)洗脱，收集洗脱液。将洗脱液浓缩并近干，然后用0.5mL ACN/H2O(v/v＝3/2)复溶。通过0.22μm滤膜过滤后进行LC-MS/MS分析。
S2、LC-MS/MS检测：ExionLC AC超快液相色谱与Triple Quad 5500质谱仪(ABSciex,Framingham，MA)对25种FBs进行目标筛选和定量分析。质谱仪配备了电喷雾电离(ESI)探针，该探针在非离子FB的ESI正离子(+)离子模式和离子FB的负(-)离子模式下运行。
分子型FB：使用XBridge BEH C18色谱柱(2.1mm×100mm，2.5μm)，进样量设为5μL，流速设为0.3mL/min。流动相由含有0.1％甲酸的水溶液(A相)和乙腈(B相)组成，梯度洗脱程序如下：0-1min，10％B；8-15min，90％B；16-20min，10％B。采用多反应检测技术(MRM)模式；气帘气：35psi；离子喷雾电压：5500V；离子源温度：550℃；辅助加热气：45psi；喷雾气：45psi。检测分析得最终结果，图7为北京污水处理厂Ⅰ活性污泥中分子型荧光增白剂的总离子流图；图8为北京污水处理厂Ⅱ活性污泥中分子型荧光增白剂的总离子流图。
离子型FB：使用ACQUITY UPLC BEH C18色谱柱(2.1mm×100mm，1.7μm)，进样量设为5μL，流速设为0.25mL/min。流动相由含有0.02％氨水的5mM乙酸氨溶液(A相)和乙腈(B相)组成，梯度洗脱程序如下：0-1min，10％B；1-2min，85％B；2-6min，65％B；6-10min，10％B。采用多离子检测(MRM)模式；气帘气：35psi；离子喷雾电压：-4500V；离子源温度：450℃；辅助加热气：45psi；喷雾气：45psi。检测分析得最终结果，图9为北京污水处理厂Ⅰ活性污泥中离子型荧光增白剂的总离子流图；图10为北京污水处理厂Ⅱ活性污泥中离子型荧光增白剂的总离子流图。
将LC-MS/MS检测所获得的分子型提取物和离子型提取物峰面积值Ar与样品中所加的内标物浓度Cs及内标峰面积值As，将荧光增白剂标准样品的系数f代入计算，以获得待检测样品中荧光增白剂的浓度Cr，具体计算式为：Ar/As＝f×Cr/Cs，根据分析和计算出的分子型提取物和离子型提取物峰面积值Ar与待检测样品中荧光增白剂的浓度Cr，测定结果如表2所示。通过与已知量的25种荧光增白剂峰面积Ai比对，可定性和定量分析待测样品中荧光增白剂。
表2为北京污水处理厂Ⅰ、Ⅱ检测测定值如下(单位为ng/g)
以上实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换,并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的精神和范围。
Claims (9)
1.一种基于LC-MS/MS技术分析检测荧光增白剂的方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)将待测样品充分粉碎，混匀，在低温下保存，备用；
(2)将待检测样品分离成分子型提取物和离子型提取物分别放至棕色容量瓶中；
(3)分别称取已知量的25种荧光增白剂标准样品放至棕色容量瓶中，将每种荧光增白剂制成1mg/mL的混合标准溶液，按逐级稀释的方法配制成标准系列溶液，往标准系列溶液加入等质量的内标物BTH-d4和NSC 5067，采用LC-MS/MS仪器进行检测，检测出荧光增白剂峰面积Ai和内标物峰面积As，以Ai/As为纵坐标，标准化合物浓度Ci与内标物浓度Cs比为横坐标，进行一次线性拟合，绘制出标准曲线，具体计算公式为：Ai/As＝f×Ci/Cs，进而分别计算出25种荧光增白剂标准样品对应的系数f；
(4)采用LC-MS/MS仪器进行检测，检测出分子型提取物和离子型提取物峰面积值Ar与样品中所加的内标物浓度Cs及内标峰面积值As，将荧光增白剂标准样品的系数f代入计算，以获得待检测样品中荧光增白剂的浓度Cr，具体计算式为：Ar/As＝f×Cr/Cs；
(5)根据分析和计算出的分子型提取物和离子型提取物峰面积值Ar与待检测样品中荧光增白剂的浓度Cr，通过与已知量的25种荧光增白剂峰面积Ai比对，可定量分析待测样品中荧光增白剂。
2.根据权利要求书1所述的基于LC-MS/MS技术分析检测荧光增白剂的方法，其特征在于，所述分子型提取物的制备方法具体包括以下步骤：
将待测样品研磨过筛处理，称取一定量的样品到离心管内，并加入内标物BTH-d4和内标物NSC 5067，离心管中平衡，使用体积比为3:7的二氯甲烷/乙腈溶剂三次萃取并将所得上清液合并，浓缩至干，再使用1mL体积比为3:7的二氯甲烷/乙腈溶剂进行复溶，合并的上清液标记为提取物I；
提取物I通过复合色谱柱从下到上填充质量分数为5％水灭活的弗罗里硅土2g和质量分数为5％水灭活的碱性氧化铝2g进行净化，该复合色谱柱在净化之前，先用10mL体积比为3:7的二氯甲烷/乙腈溶剂净化去除填料中的杂质，上样提取物I后，再用15mL体积比为3:7的二氯甲烷/乙腈溶剂洗脱色谱柱，用玻璃管接收上样及洗脱液，将洗脱液氮吹浓缩并近干，定容至500μL，通过0.22μm滤膜过滤后进行LC-MS/MS分析。
3.根据权利要求书2所述的基于LC-MS/MS技术分析检测荧光增白剂的方法，其特征在于：所述待测样品、内标物BTH-d4和内标物NSC 5067的质量比为50mg:10ng:10ng。
4.根据权利要求书2所述的基于LC-MS/MS技术分析检测荧光增白剂的方法，其特征在于，所述二氯甲烷/乙腈溶剂三次萃取的具体步骤为：往离心管中加入体积比为3:7的二氯甲烷和乙腈溶剂，涡旋并超声处理，离心，取上清液。
5.根据权利要求书4所述的基于LC-MS/MS技术分析检测荧光增白剂的方法，其特征在于，所述涡旋时间为15min，超声处理时间为20min，离心转速为3800r/min，离心时间为6min。
6.根据权利要求书2所述的基于LC-MS/MS技术分析检测荧光增白剂的方法，其特征在于：所述浓缩至干的步骤在氮气流下进行。
7.根据权利要求书1所述的基于LC-MS/MS技术分析检测荧光增白剂的方法，其特征在于：所述离子型提取物的制备方法具体包括以下步骤：
将待测样品研磨过筛处理，称取一定量的样品到离心管内，并加入内标物BTH-d4和内标物NSC 5067，离心管中平衡，使用体积比为3:7的二氯甲烷/乙腈溶剂三次萃取并将所得上清液合并，浓缩至干，再使用3mL体积比3:2的乙腈/水溶剂进行复溶，合并的上清液标记为提取物II；
提取物II在氮气流下直接浓缩至1mL上清液，浓缩好的上清液使用60mg Oasis HLB3cc固相萃取小柱通过SPE装置净化；固相萃取小柱先依次加入3mL甲醇、3mL水活化，将浓缩好的上清液上样，然后用2mL质量分数为5％甲醇水淋洗，待固相萃取小柱抽干后，用10mL体积分数为5％氨甲醇洗脱，收集洗脱液；将洗脱液浓缩并近干，然后用0.5mL体积为3:2的乙腈/水复溶，通过0.22μm滤膜过滤后进行LC-MS/MS分析。
8.根据权利要求书7所述的基于LC-MS/MS技术分析检测荧光增白剂的方法，其特征在于：所述浓缩至干的步骤在氮气流下进行。
9.根据权利要求1至8任一项所述的基于LC-MS/MS技术分析检测荧光增白剂的方法在日化、纺织、造纸领域中的应用。
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