CN1176576A

CN1176576A - 类黄酮醛类作为农药的用途

Info

Publication number: CN1176576A
Application number: CN95197715A
Authority: CN
Inventors: R·W·爱默生; 小·B·G·克兰德尔
Original assignee: Proguard Inc
Current assignee: Proguard Inc
Priority date: 1994-12-30
Filing date: 1995-12-29
Publication date: 1998-03-18
Also published as: CA2208755A1; NZ300850A; BR9510178A; JPH10511955A; WO1996020596A1; AU699074B2; AU4611196A; US6251951B1; MX9704962A; PL321178A1; EP0800343A1

Abstract

提供了以天然类黄酮醛类为基础的方法和组合物,包括肉桂醛,α－己基肉桂醛,和松柏醛,发现了其作为农药的用途。该组合物在对所处理的宿主植物无植物毒性的浓度下有效抗病原性真菌,蜘蛛纲和昆虫。可以处理各种植物部分的侵染,包括对叶、种子、籽苗、果实、花和根的侵害。敏感的生物体包括锈菌,白粉菌,葡萄孢,葡萄瘤蚜,蓟马,苹果蠹虫,线虫和叶蝉。

Description

类黄酮醛类作为农药的用途

引言

技术领域

本发明涉及经营养传递而对植物病原的生物控制。本发明以使用肉桂醛和松柏醛来控制真菌和寄生性昆虫的生长，包括定居在植物各部分和组织表面上的吸树汁昆虫，作为例子。

背景

植物各部分的表面如根和叶的表面定居着各种生物体，其中很多生物体依赖宿主植物作为营养来源。定居的生物体包括病原性真菌和吸树汁昆虫；两组生物体均能给宿主植物带来严重损伤，包括阻碍宿主植物的发育生长，和降低植物生产力，以及杀死宿主植物。

对于植物的病原性真菌是多种多样的，它们存在于真菌的大多数族内。有一些，如锈菌，夏孢锈菌目，白粉菌和霜霉，白粉菌和霜霉(Erysiphacea和Peronosporacea)，是专性寄生物。一般一种特殊的锈菌或霉与制造加工该病原体所需营养的特定宿主植物相关。作为一个例子，由短尖多胞锈菌(Phragmidrium mucronatrum)引起的锈病是一种重要的与玫瑰相关的真菌病害；其在玫瑰叶背面产生亮橙色的色点，且在梢顶产生浅黄色斑点。由蔷薇单丝壳菌(Sphaerotheca pannosa)(Wallr.ex.Fr.)Lev var.rosae Woronichine引起的白粉病也与玫瑰相关，并可能是温室，花园和野生玫瑰等分布最广最为严重的病害。

侵害植物的病原性昆虫包括那些与细菌共生的昆虫物种，如蚜虫，叶蝉，和白蝇；宿主寄生虫在没有共生生物情况下不能生存。例如蚜虫(homoptera)在称为血腔内菌胞的细胞中拥有Buchnera属共生细菌。该细菌直接从其母体蚜虫遗传给其后代，并且不会自然产生无共生的蚜虫。该细菌提供宿主昆虫胚胎发育所需的脂类，但该脂类在这些昆虫侵害的植物韧皮部分树汁中不存在或以低浓度存在。

植物病原体包括葡萄瘤蚜虫属(Daktulosphaira vitifoliae)，一种类蚜虫昆虫，和线虫。葡萄瘤蚜虫属是美国Rocky山脉东部本生的，其生活在已演变为限制昆虫进食的天然野生种葡萄上。用来生产葡萄的欧洲葡萄(Vitis vinifera)在西亚已种植发展，但其对葡萄瘤蚜虫属没有抵抗性。茎和鳞茎线虫(Ditylenchus dipsaci)在所有加利弗尼亚主要农业区均有记录。如此广泛的分布可能反映其在如大蒜鳞茎之被侵害的植物材料上的散布。无论这样被侵害的植物在何处生长，线虫都可能会被引入。Ditylenchus dipsaci被发现寄生于宽范围养植和野生植物上。线虫在被侵染的组织中产生虫瘿。除线虫虫瘿本身对植物引起的侵扰外，某些寄生真菌对受侵植物的伤害也增加，这些真菌易附于衰弱的根组织和虫瘿的肥大、未分化细胞上。而且有些真菌，例如腐霉属(Pythium)，镰孢霉菌(Fusarium)，和丝核菌属(Rhizoctonia)在虫瘿中生长繁殖要比在根的其它区快得多，因此引起根组织提早毁坏。

多种农药组合物被用来控制植物病原体。例如，当环境条件适于发生病害时，对锈病和白粉病两者进行6-7天程的保护性杀真菌喷雾是控制的典型方法。两种常用的系统杀真菌剂是苯菌灵和嗪氨灵。但是控制白粉病的杀真菌剂的费用高：在剪下的玫瑰作物中，加州处理的费用一年有几百万美元。

较早的杀真菌剂包括无机化合物，如铜和硫的化合物，以及有机保护物如福美双，captam，代森锰和chlorotholonilo。这些化合物只在植物表面作用，并且为了防止侵染，必须在真菌病原出现之时或之前存在。这些较早的杀真菌剂是多点抑制剂；即它们影响许多真菌的代谢活性。较新的杀真菌剂趋向于是高度有效的有机体系，如苯并咪唑，甾醇生物合成抑制剂，N-甲酰苯胺，和苯酰胺，它们在植物内部和表面都有良好的作用。与较早的表面保护剂相反，该体系的杀真菌剂一般以低得多的剂量起作用，而且能治愈已发生的真菌感染，这是病害防治中的一个关键因素。该体系的杀真菌剂通常在真菌的单一靶位点作用，干扰产生生长，生存和真菌生物体的传染所需要的所有新的细胞物质所必需的特定代谢过程。这些制剂一般只在抗真菌病原体方面是有效的。

现在使用方法中控制某些地上害虫(例如蜘蛛蚲，蚜虫，银箔白蝇，叶蝉)的化学物质包括那些结合两种来自不同化学类别的杀虫剂，例如结合一种合成的带有机磷或有机氯杀虫剂的拟除虫菊酯。土壤熏蒸剂已经成为一种防治土壤害虫(线虫，葡萄瘤蚜虫)的普遍的方法。使用某些高效型杀昆虫剂和熏蒸剂已由于取消了产品的公共协调机构注册，或拒绝再注册而在最近几年明显减少了。

农药的广泛的使用已导致抗性病原体的发展及进化，以及提高了人们对环境和健康的关注。成效高度显著的生态环境活动者团体和公共调节机构已经造成越来越少的农药登记，并且随之而来的是减少的相关的研究和发展。因此，人们对具有较低的动物和环境毒性，且在控制病原真菌和昆虫的使用浓度下不具有明显的生理毒性的“生物合理”杀真菌剂感兴趣，将其鉴别和/或发展。相关文献

使用含有肉桂醛且需要一种抗氧化剂的组合物而保护作物不受有害昆虫，微生物和病原性微生物的侵害的方法在美国专利No.4978686中公开。通过使用含肉桂醛的含水的组合物而保护作用抗病原性微生物和有害害虫在法国专利申请2529755中公开。美国专利2465854中公开了含有肉桂醛衍生物的杀昆虫组合物。在种植香菇的基质中使用肉桂醛控制轮枝孢属(Verticillium)公开于美国专利No.5149715。

Reweri等说明了用磷酸盐诱发对黄瓜白菌病的系统抗性。Biol.Agric，and Hort.(1993)9：305-315。Horst和Kawamato在《植物病害》(Plant Disease)，1992年3月，p.247中公开了碳酸氢钠和油对控制玫瑰白粉病和黑点病的作用。碳酸氢钠和溶剂精炼的轻石蜡油已被用来控制黑点病和白粉病。Ziv等，Hort.Science(1993)28：124-126。

Elad等在Phytoparasitica(1989)，17：279-288中公开了膜生成聚合物对黄瓜白粉病的作用。Hagiladi和Ziv在J.Environ.Hortic.(1986)，4：69-71中公开了使用抗蒸腾剂控制田间白粉病。Macro等人在Phytoparasitica(1994)22：19-29中公开了用涂上聚合物的抗蒸腾剂控制玫瑰白粉病。Paulus和Nelson在Calif.Agric.1988，42：15中公开了使用氟硅唑(flusilarzol)，腈菌唑，氯苯嘧啶醇(fenarimol)，pentonazote和烯唑醇控制玫瑰白粉病和锈病。

美国专利No.4402950公开了通过使用由芳香植物经蒸汽应用而获得的萜烯而使活体人或动物生物体内的病毒去活。引用的萜烯是：黑胡椒油，肉桂粉油，小豆蔻油，乙酸沉香酯，肉桂醛，黄樟油精，香芹酮，和顺式/反式柠檬醛。美国专利No.4477361描述了包含抗微生物表面活性剂的肉桂化合物，其使实体变成被冲洗的表面。

涉及单独或与其它试剂结合的各种皂草苷的抗微生物性质的参考文献包括下面文献：JP 2157205，DE 3724595，JP 61065802，JP61007290。已建议将抑制转基因植物中CAD活性作为减少植物内木质素合成的一个方法，从而提高素材作物的消化性(WO 93/05159)。

发明概述

本发明提供一种通过营养传递控制植物，种子，籽苗和基本上不带植物病原体的植物上的病原性生物体的方法。该方法包括用足以控制目标病原性生物体生长的量的抗病原体试剂接触有病害植物或易受病原体侵害的植物的一部分或几部分或组织这一步骤。该生长调节产物具有下面(1)中给出的结构式：其中R代表-CH₂OH或-CHO，n是0至3的整数；每个R₁独立地代表OH或含有1至10个碳原子及0至5个杂原子的有机取代基，其中所述化合物中所有R₁取代基中的碳和杂原子总数不超过15；且R₄代表氢原子或1至10个碳原子的有机基团。这些化合物包括天然化合物，如肉桂醛。α取代的醛如α-己基肉桂醛(HCA)也是令人感兴趣的。该方法发现了防治观赏和农作物病原体生物的应用。具体实施方案的说明

提供了基本上不带病原生物体如真菌和吸树汁昆虫的种子，籽苗和植物部分，如果实，以及用类黄酮醛对植物上的病原体侵害进行生物控制的方法。“生物控制”是指藉直接的抗病原活性和/或诱导的宿主植物对病原体侵害的抗性来控制植物病原。定居在植物部分如叶，根，或花，或组织如木质部或韧皮部的表面的真菌和/或昆虫与一种天然产物接触。“寄生”指一种微生物或昆虫与一种植物的部分或组织相关联，病原体从该植物部分或组织摄取营养，一般是基本养分如氨基酸，特别是蛋氨酸。“天然产物”指对于一种生物体是独特的、或者对于少数密切相关的生物体是共同的一种天然来源的有机化合物，并且包括真菌的第二代谢物和植物产生的化学物质。天然产物可以从天然来源中分离，可以全部或部分合成，或者用重组技术生产。

本发明方法是通过对植物宿主或对病原生长或将要生长的底物施以有效抑制病原量的本发明化合物而实行的。施加到植物本身或施加到其根隙的抗病原剂的量将取决于受侵害程度并在某种程度上取决于制剂和使用的特定的化合物，因此必须经实验确定才能取得最好的结果。“抗病原剂”是指有效控制病原体生长，且能涉及杀死病原体和/或减缓或停止其繁殖的农药，即制剂。病原体包括对它们所寄生的植物具有不利影响的昆虫，真菌和其它微生物。

本发明组合物和方法与现有组合物和方法相比有几点优点。尽管已经报导类黄酮醛，肉桂醛具有抗真菌性能，但原先并没有用于植物作为无抗氧化剂存在时的水性乳剂或水溶液。作为一个例子，美国专利申请No.4978686公开了抗氧化剂对于用来施用给作物的含肉桂醛的组合物来说是必需的。抗氧化剂是昂贵的，因此本发明制剂显示出明显的成本利益。另外，单一使用肉桂醛足以长期保护植物宿主免受病原生物体，包括锈菌和白粉菌，的侵害，并且在比现有报道的浓度更低的浓度下有效。

本发明制剂对已知对常规处理方法有抗性的害虫(包括如蓟马科食植物害虫和甜瓜蚜虫)也有效。因此使用的醛的浓度减小且所需施用的次数减少，从而使制剂的毒性也降低了。本发明制剂也有效控制真菌和昆虫两者，从而排除了施用多种试剂的需要。在特殊情况下，如昆虫伤害植物部分或组织并发生第二种真菌病害时，本发明的该方面特别有利。与未处理的植物相比，长期控制病原生物体会使植物更健康并提高宿主植物的产率。更低浓度和单一剂量的抗病原试剂不仅降低对植物或作物的损害的可能性，也降低了对施农药的工人，或对摄食被处理过的植物的组织或部分的动物，鱼或鸟的副作用的可能性。另一个优点是芳香醛特别具有实际的器官感觉的和嗅觉性质，在某些情况下可以提高处理过产物的味觉和/或嗅觉性质。HCA的气味被描述为有某些草质特征的花或象茉莉一样的气味(技术数据页)。

一些发现在本发明中有用的芳香族和脂肪族醛类如α-己基肉桂醛，苯甲醛，乙醛，肉桂醛，胡椒醛，和香草醛一般被认为是安全(GRAS)合成香料(21 CFR 172.515)。HCA在五十年代前就已公用，并且现在广泛用于消费品(肥皂，清洁剂，雪花膏，洗液，香水)(香料原料的有关专题著作，Food Cosmet.Toxicol.12：增刊，915，1974)。1965年HCA被FEMA(香料提取物制造商协会，香料成份使用标准调查，No.2569，Fd.Technol.，Champaign，19：(第2部分)155，1965)授予GRAS(一般认为是安全的)权，并且美国FDA允许其用于食品(21 CFR 121.1164)。欧洲理事会(1970)(欧洲理事会，天然和人工香料物质，社会和公共健康领域部分协议，斯特拉斯堡，表A(1)，第1系列，no.129，p.55，1970)。在可允许的、1ppm水平的人工香料物质名单中包括HCA。这些化合物的许多种已被报道具有抗肉毒梭状芽孢杆菌(C.botulinum)孢子产生的抑制活性，参见Bowles和Miller，G.Food Protection(1993)56：788-794。这些化合物的通式见上文的(1)。

可用作乳化剂如Tweens(多乙氧基醚)的表面活性剂也已经用作食品添加剂，象皂草苷(也已有GRAS权)一样。另外，制剂残留量可以控制。这一点在与有益昆虫相关的整体害虫控制计划需要短期残留时有很大益处。另外，本发明制剂有效抗那些对其它试剂有抗性的害虫。再次进入温室的时间也不是问题。一般情况下该制剂快速使目标生物体致死；当与无再进入时间联系起来时，这一点是特别有价值的特点，(例如，剪花总量没有损失)。

本发明制剂和方法的另一个优点在于治理不仅仅提供长期持续的抗害虫的保护作用，而且在距施用本发明制剂点较远的植物上的位点也是有效的。例如，对叶施用本发明化合物，在较远和达不到的植物区位如根和分生组织处对定居的病原体也是有效的。之所以发生远效果是因为类黄酮醛在植物维管系统中运送，其使化合物在活植物内长距离运送，和/或因为本发明制剂的施用诱导系统获得抗性(SAR)。SAR发生于有受侵染响应、特别是由引起坏死的病原体侵染的植物内，其提供对相同或甚至不相关的病原体的相继侵害的增强的抗性。SAR提供贯穿植物(系统的)抗广谱范围不相关病原体的长期(几星期或几个月)的保护作用。植物细胞中抵御响应的例子包括诱发的植物细胞结构成份的合成，如角质和木栓质，胼胝质，木质素，化学抵御化合物如H₂O₂，和抗细菌或抗真菌化合物，如单宁和植物抗毒素。

优选的结构在下面结构式(2)中给出：其中R₁代表-CHO，R₂代表-OH或有1至10个碳原子的有机取代基，且R₃代表甲氧基或有1至10个碳原子的有机取代基，和R₄代表氢原子或有1至10个碳原子的有机取代基。特别令人感兴趣的是类黄酮醛类，特别是芳香族醛类。用在本发明中的芳香醛的例子是肉桂醛(下面(3)式)：

和松柏醛(下面式(4))：

令人感兴趣的其它化合物包括式(1)化合物的类似物，如在α位被烷基如己基或支链烷基如戊基取代的化合物。一般情况下α位的基团是C-5至C-10。这样的化合物包括α-己基肉桂醛和α-戊基肉桂醛。α-己基肉桂醛(HCA)的化学结构见(5)(下)。HCA的化学文摘社(CAS)的名称是2-(苯基亚甲基)辛醛，化学文摘登记号是[101-86-0]。该化合物的化学名称也叫2-己基-3-苯基-2-丙烯醛。化合物分子式是C₁₅H₂₀O，分子量是216.3。HCA是低至中度挥发性化合物，25℃时的蒸汽压是70×10^-5mmHg。其母体化合物，肉桂醛，具有大约40倍高的蒸汽压(2970×10^-5mmHg，25℃)。为了比较的目的，昆虫相斥的N，N-二乙基-m-甲苯胺具有稍高的蒸汽压(167×10^-5mmHg，25℃)(Reifenrath，W.G.(1995)Volatile Substances.Cosmetics and Toiletries，110：85-93)。

本发明芳香族和脂肪族醛可通过各种本领域技术人员公知的合成方法来制备。例如，参见J.March，ed.，附录B，有机化学进展：反应，机理，和结构，第二版(Appendix B，Advanced Organic Chemistry：Reactions，Mechanisms，and Seructure，2nd Ed.，)，McGraw-Hill，New York，1977。肉桂醛可以通过例如氧化肉桂醇(Traynelis等，J.Am.Chem.Soc.(1964)86：298)或通过苯乙烯与甲酰甲苯胺的缩合(英国专利504125)而合成制备。本发明醛类也可以从天然来源中分离得到。例如，肉桂醛可以从木腐真菌密绒韧革菌(Stereumsubpileatum)中分离到。参见Birkinshaw等，Biochem.J.(1957)66：188。

HCA可以按照例如USPN 5055621的说明来合成。在实验室规模上，HCA可以通过苯甲醛与辛醛在氮气保护下反应而合成(醛醇缩合)(私人信息，Eric Walborsky，Firmenich Chemical ManufacturingCenter，Port Newark，New Jersey)。反应在装有甲醇，309ppm二苯胺，氢氧化钾和苯甲醛的搅拌瓶中进行。缓慢加入辛醛后用乙酸将反应混合物调至pH7.5-9.5。蒸发掉甲醇后，用水洗涤反应混合物，有机相转移到蒸馏装置中。其中大约20-24％作为苯甲醛和“轻成分”被除掉了，剩下的馏出液包括α-己基肉桂醛“主馏分”。将“主馏分”再分馏，其中物质的1-5％(重量)在“轻”级分中去除，根据的是气味评估。终产物是浅黄色油状物，其20℃时的比重是0.955-0.965，20℃时的折光指数为1.548-1.562，一大气压下的沸点为305℃，熔点是26℃。

也可以从Firmenich获得HCA；他们的产物主要由(E)-顺式异构体(最多93.8％)和(Z)-反式异构体(最多6％)组成。少量成分是辛醛自身醛醇缩合产物(1-1.5％)(个人信息，June Burkhardt，Firmenich，Plainsboro，New Jersey)。加入起抗氧化剂(技术数据页，己基肉桂醛907600，Revision 853，Firmenich Inc.，Plainsboro，New Jersey)作用的0.04％ 2，6-二叔丁基-对甲苯酚(丁基化的羟基甲苯或BHT)，来稳定商售产物。据报道HCA天然存在于稻中，可从稻中分离(Givaudan-Roure Index，Givaudan-Roure Corporafion，Clifton，New Jersey，1994，p.89)。

本发明醛化合物可以单独使用或者结合其它活性或非活性物质使用。在某些情况下，通过向制剂中加入一种或几种其它成分，即除式(1)化合物外的一种化合物，可提高该制剂的效力。优选附加的成分减小特定制剂的植物毒性，同时提高该制剂的抗病原效果。具体优选的是一种“协同剂”，其是一种由于其存在而增强比添加量更多的所期效果的成分。可以变化一种或几种其它制剂成分的浓度，同时保持或提高该制剂所期的植物毒性和抗病原性效果。特别令人感兴趣的是向一种制剂中加入几种成分，使减小给定制剂中一种或几种其它成分的浓度，同时基本上保持该制剂的效力。这样一种成分与该制剂的其它组分的结合可以在混合和/或施用的任何合适的阶段在一步或几步中进行。

特别令人感兴趣的是向制剂中加入助剂。“助剂”指向制剂中加入的有助于主要成分操作的物质。在施用农用化学物质时喷雾助剂担当此作用。有效喷雾助剂可以配制成含有一种或几种表面活性剂，溶剂或助溶剂。含有表面活性剂，水和油成分的体系有许多形成有序相的其它可能性，表面活性剂可以使其自身聚集成各种形状以产生微胞，第一有序相是一种可能性。表面活性剂也可以在互相贯穿的油和水相之间的界面聚集，产生微滴乳状液。例如，该制剂可以通过加入的乳化剂如吐温80而变得持久。其它可以使用的洗涤剂包括阴离子洗涤剂，如美国专利申请No.4978686公开的那些洗涤剂。一般情况下，用于本发明制剂的洗涤剂和其它试剂不有损于类黄酮醛类的农药性质，而且还提高了该制剂的实质性质(参见，例如，美国专利U.S.-4477361)，而且可以改善该杀虫性能。

一种用于农药的优选表面活性剂是皂草苷，其从任何一种各种来源获得。皂草苷可以用作助剂和表面活性剂，用来减小所用类芳族醛的植物毒性和/或提高其效力。皂草苷是一类由皂草配基部分和糖基构成的化合物。皂草配基可以是一甾类化合物或一三萜烯，糖基部分可以是葡萄糖，半乳糖，戊糖，或甲基戊糖。参见S.Budavari.ed.，The MerckIndex，11版，Merck & Co.，Inc.，Rahway，N.J.，1990，p.1328。用于本发明的皂草苷可以用本领域已知的方法，从多种来源包括已知可产生皂草苷的各种植物，范围从丝兰，龙舌兰，皂树属(quillaja)，烟草，甘草，大豆，人参和芦笋到芦荟，从各植物部分包括果实，叶，种子和/或根中制备和/或提取。用于本发明的皂草苷优选在使用浓度对人和高级动物无毒性的。更优选用于本发明的皂草苷是无毒性食品级的，其来源是丝兰植物。更为优选的是来自Yucca schidigera或Y.valida和其等价物的皂草苷。考虑到植物毒性控制以及毒性安全性，优选的皂草苷来自丝兰属，并且优选不结合包括那些来自芦笋的胆甾醇的皂草苷。皂草苷一般由冷压萃取方法制得，并且用HPLC分析所得萃取液的皂草苷浓度。也可以使用丝兰纤维；其一般经日晒，研磨并筛选大小。

已知多种结构相关的皂草苷，变化最多的结构特征是糖基化形式。皂草苷也可以包含另外的修饰形式，如连接甾族化合物的拔葜苷，且皂草苷结构可以通过任何本领域已知的酶学，化学和/或机械方法来修饰。参见Nobel，Park S.，Agaves，Oxford Univ.Press，New York，1994，pp.42-44。因此，生产具有所期抗病原性和/或植物毒性效果的制剂的这些化合物的衍生物被认为是本发明的等价物。一种给定的皂草苷可以根据其结构而具有特殊的杀虫性能并为本发明所使用。皂草苷的有效量一般是0.01至3％范围，且最优选大约0.25％v/v10°白利糖度的皂草苷萃取水溶液。

本发明制剂可任选地包含有附加成分，如多元酸盐如碳酸氢钠，硫酸钠，磷酸钠或磷酸氢钠的含水制剂，来提高该制剂的杀真菌性能。所得乳化液被稀释至合适浓度备用。

其它化合物可以单独或结合该组合物使用，例如H₂O₂，其已知在碱性环境中杀死特定的真菌如黄色曲霉(A.flavus)。也可以包含一种抗冻成分如甘油，丙二醇，乙二醇和/或异丙醇，和一种胶或类胶物质如黄原胶，金合欢胶，明胶，羟丙基甲基纤维素及类似物，如在美国专利No.5290557中公开的那些。另外，对于收获前使用，可以使用诱发植物对各种真菌的非系统性或系统性抗性的化合物来控制某些真菌在田间条件下的定居和/或生长。

包含式(1)，(2)，(3)，(4)和/或(5)化合物的组合物的最有效制剂可以使用如实施例中所描述的那些方案和本领域技术人员公知的其它方法来确定。使用任一种式(1)化合物以及该制剂的其它成分如吐温80和/或碳酸氢钠，来评估每一制剂对具体害虫和/或植物宿主的作用，和适于减小毒性同时保持或提高该制剂抗病原体的效果的特定应用的结合物和每一组分的有效量。各组分有效量可以通过系统地改变试验制剂中的该组分的量、用试验制剂处理感兴趣的植物、并监测与未处理对照植物相比较的害虫侵害的程度来确定。被试验组分的有效量可以定义为控制病原体在植物宿主上生长、因而减小植物病害程度的量。对于每一特定应用，可以计算平均病害抗性(MPDC)。MPDC由下面的计算式确定：

MPDC = \frac{(MDIC - MDIT) \times 100}{MDIC}

MDIC＝未处理对照物病害发生的平均百分数

MDIT＝处理植物病害发生平均百分数一般情况下，对于有效病原体控制，病害控制平均百分数(MPDC)大于60％，优选至少约70％。

也需要评估制剂的植物毒性，因此在宿主品种活植物上至少进行一次制剂毒性评估是重要的。可以随毒性严重程度增加的顺序来评定植物毒性：0-植物没有任何症状；1-胚轴非常轻微地变为褐色(没有其它症状)；2-植物有些萎蔫，低部的叶子近于死亡，维管系统有些变为褐色；3-整个植物萎蔫，叶子死亡，胚轴有外部和内部症状；4-茎坏死，植物死亡。优选使用的制剂具有2或更小、更优选1或更小的植物毒性评定值。作为一个例子，评估了肉桂醛对白粉菌在0.1ppm至25,000ppm范围时的效果。平均病害控制可以通过使用较高剂量的肉桂醛、和/或加入式(1)的其它化合物、或者通过加入清洁剂等而增加制剂的实体，而提高。

试验组分的生长调节有效量可以确定为或者通过杀死害虫、或者通过防止其再生而减小害虫定居宿主植物的程度的量。一种或几种式(1)，(2)，(3)，(4)，或(5)化合物的生长调节有效量一般是大约0.01g/l至25g/l，更优选大约1g/l至20g/l，最优选大约5g/l至10g/l。在一优选实施方案中，本发明制剂在包含吐温80或皂草苷为乳化剂并任选地含有碳酸氢钠的配方中含有生长调节有效量的α-己基肉桂醛，肉桂醛和/或松柏醛。优选的制剂是含有α-己基肉桂醛，肉桂醛和/或松柏醛(0.5％至10％重量)、且可以含有质子惰性酸的盐(8％至12％重量)和配平的水的乳状液。优选有6-12％质子惰性酸的制剂。一般情况下，制剂中醛的总量是5％或更少。用于防治白粉病、锈病和孢子、以及蚜虫的优选制剂是含有肉桂醛和/或松柏醛(0.001％至10％重量)、多元酸的盐(4％至12％重量)、乳化剂(1％至4％重量)和配平的水的乳状液。本发明制剂不使用除特定醛例如松柏醛所固有的抗氧化剂性能之外的抗氧化剂时是有效的。

该制剂的稳定性可以用各种方法评估，包括将感兴趣的制剂在升高的温度下暴露一段时间的加速试验。制剂样品在规定的间隔时间取出，并用本领域技术人员已知的方法进行化学分析，以测定分解的速度和性质。例如，HCA可以通过气液色谱(GLC)，使用30米非极性聚二甲基硅氧烷毛细柱(例如，HP-1，Hewlett-Packard，或SPB-1，Supelco)和火焰离子化检测器来分析。使用氦气为载气(8ml/min)，柱温度大约240℃，(E)-顺式异构体(主要成分)保留时间是大约6.0分钟，(Z)-反式异构体(小成分)的保留时间是大约6.3分钟。

为了该制剂将要用来制备种植易受特殊病原体感染的宿主植物的土壤或其它生长基质，或施用到一种已受侵害的生长基质、或应用到收获的材料，本发明制剂可以直接加至根围、底物或已收获的材料，或者将制剂结合于固体载体或包裹在缓释材料中。在使用固体载体的情况下，应避免使用能导致活性醛氧化的物质。输送系统的例子包括淀粉-右旋糖，等等。输送系统的例子参见，Yuan等，Fundamental and AppliedToxicology(1993)20：83-87。也参见Kawada等(1994)10：385-389。

除上述式(1)，(2)，(3)，(4)和(5)的具体化合物及可任选的皂草苷外，由对衍生物的生物系统作用而产生上文鉴定的结构的化合物的任何化合物的衍生物被认为是本发明化合物的等价物。因此，将母体化合物施加到植物部分或组织或已收获的材料等于本发明的实施。母体化合物生物转化成类黄酮醛类描述于例如，美国专利U.S.5149715中，这里引入作为参考。也参见Casey和Dobb Enzyme Microb.Techol.(1992)14：739-747。母体化合物的例子包括有关已得到的和/或对植物病原体有系统抗性的途径中的那些化合物，如氨基酸解氨醚途径中的那些化合物，且包括苯丙氨酸(产生肉桂酸)。其它感兴趣的母体化合物包括那些产生木质素和香豆素的生物途径中的化合物，例如酪氨酸以产生p-香豆酸。因此，产生具有所期抗病原性和减小毒性作用的结构的这些化合物的母体或衍生物被认为是本发明等同物。

本发明方法通过向目标病原生物体引入足够量的抗病原试剂，以阻碍目标病原生物体的生长和/或生存而实现的。将含有抗病原试剂的制剂在收获前或收获后引入到植物组织或部分。施用方法包括喷施，洒施，浸渍，注射等等。活性成分以乳油，溶液，悬液，粉末等形式存在。例如，制剂以湿或干剂形式喷施到受植物病原体侵害的或易受植物病原体侵害的植物的叶的表面和/或背面，或其它植物组织或部分，使用湿剂时，优选喷施到流溢程度。可在受侵害之前或之后，优选在受侵害之前对植物喷施。但为了减小对宿主植物的伤害，在可能的情况下，优选处理长成植物，因为嫩绿叶对植物毒性要敏感得多。在收获前，在抗病原性制剂中或作为分体式制剂，可任选使用一种植物生长调节剂，如皂草苷。或者，该制剂可以干态或湿态施用，或者作为灌溉计划的一部分，或者作为分开式施用，施用到根围，在那里，其可以接触根和定居在根部的相关的病原微生物。在某些情况下，发现随时间而释放的制剂特别适用于对根围或对收获后材料施用。

对目标生物体引入制剂活性成分的方法可以直接被害虫生物从被处理植物表面消化，或者在目标害虫生物定居的提供营养的宿主等部位表面由害虫生物进食消化，所述宿主或者含有或者在其表面具有抗病原试剂。在提供营养的宿主植物表面存在抗病原试剂可使抗病原试剂与植物部分直接接触，或者努力从宿主植物发展成诱发出系统抗性作为前次用该抗病原试剂处理植物的第二效果的结果，或者作为宿主植物遗传性修饰的结果。

根据目标生物，要使用的醛可以做成微胶囊或与固体载体偶联，可任选地通过一连接剂如自多糖酶衍生的结合区，其中固体载体是一种多糖如纤维素，特别是微晶纤维素。纤维素结合区的制备在美国专利No.5340731；5202247和5166317中有所描述。也可使用来自支架蛋白的结合区。参见Shoseyen等(PCT申请PCT/0594/04132)。这些醛化合物可以用本领域技术人员公知的方法偶联到有或没有可裂解键的结合区或其它固体载体上。活性成份的固体或微胶囊形式特别适用于防治土壤生病原体的侵害。用分析化学技术来测定并优化活性成分自固体或微胶囊形式释放的速度。为了定性目的，可用气相色谱技术来测定释放出的醛的量。例如，制成胶囊(制成丸剂)的产物的样品与选择的土壤类型混合并在不同时间期间取样来测定释放。也可以分析从制剂中释放出的挥发性气体。用GC方法，用本领域技术人员已知的方法也可以评价叶和引管灌溉施用本发明制剂随时间的活性和稳定性。也可以制备该制剂的甲醇或醇提取物以用于HPLC分析。

本发明制剂中的一种或几种组分可以通过调节编码一种或几种酶的一种或几种基因的表达，或改变控制所感兴趣化合物在植物，植物部分，植物细胞，特定植物组织的水平和/或与植物生长特定阶段相关联的酶途径或簇，而在所感兴趣的植物体内产生。所述酶可以是生物合成途径或降解途径，调节分别是向上的或向下的，分别改变内源植物基因或外源提供给植物的转基因的表达。土著植物基因是宿主植物基因组天然的基因。内源植物基因是存在于所感兴趣植物宿主野生型基因组中的基因。它可以是土著基因，或者是作为植物侵害结果而存在的基因(例如，一种病毒基因)，或者是自然插入到植物基因组中的基因。宿主植物也可以通过重组方法或通过使传统植物育种方法来改变，以引入一种或几种对宿主植物来说是外源的、编码酶的基因，该酶控制所感兴趣化合物水平并处于所述化合物是一种或几种式(1)，(2)，(3)，(4)或(5)化合物合成途径中。调节基因表达，是要在转录，翻译和/或翻译后水平上控制所感兴趣的基因产物的产生。所感兴趣化合物的水平通过调节编码一种或几种合成所感兴趣化合物所需要的酶的一种或几种内源基因或转基因的表达而控制。

调节植物基因表达的方法是本领域已知的。生长条件的改变或对植物外部施用化合物能影向基因表达。例如，本发明制剂可用来通过调节内源基因表达而诱导系统植物抗性。在分子水平上，基因表达基本上取决于转录，翻译和调控结构基因编码区表达的终止控制区。通过利用调控这些控制区的植物信号或通过控制区的直接重组操作，可以调节例如编码控制肉桂醛水平所需的酶的基因的表达。在转基因对植物宿主是外源的情况下，转基因包括被选择和设计来实现所期基因表达的水平和时间的控制区。合适的是，该控制区对于所感兴趣的基因是同源(天然)或非同源(非天然)的。“同源”是指来自于或基本上类似于通常与所感兴趣基因相关的控制区相同的控制区。“非同源”指从不同核苷酸源或序列产生的控制区，或实质上不同于一般与所感兴趣基因相关的控制区的控制区。例如，如果与控制区相比，酶编码序列在来源中是非同源的，为使基因在所感兴趣的植物细胞中表达，规定在这些植物细胞中提供转录和翻译起始调节区或启动子功能可操作地连接到该编码序列上。植物细胞中转录和翻译起始信号功能包括那些来自与植物宿主或其它植物品种土著关系或内源的基因的功能，并在植物宿主中直接组成或选择性表达，并且包括来自感染植物的病毒如CaMV的序列。

特别令人感兴趣的是选择性调控在植物，植物部分，植物细胞，特定植物组织中的结构基因表达的和/或与植物生长特定阶段有关基因控制区。优选的是那些本领域已知的控制区，特别是能用来调节编码控制式(1)，(2)，(3)，(4)，(5)和/或皂草苷成分在植物，植物部分，植物细胞，或特定植物组织中的水平所需的酶的基因的表达的和/或与植物生长特定阶段相关转录控制区或启动子。例如，为果实中不同表达模式而提供的启动子描述于USPN 4943674和USPN 5175095；为种子中不同表达模式而提供的启动子描述于USPN 5315001；而对于快速生长的组织和幼芽参见USPN 5177011。

在植物宿主中产生本发明制剂所需组分的优选方法是通过重组DNA方法，特别是通过用本领域已知的重组技术构建转基因植物而改变至少一种所感兴趣的式(1)，(2)，(3)，(4)，(5)和/或皂草苷化合物在所感兴趣植物组织中的水平。该方法涉及用在植物细胞中起作用的表达弹夹转化所感兴趣的植物细胞，包括作为5′至3′方向转录中的操纵连接成分，转录和翻译起始调节区，在可读框中使5′与一DNA序列连接，该DNA序列编码一种或几种能调节令人感兴趣的化合物的产生和/或产生令人感兴趣的化合物所需要的酶，和翻译及转录终止区。产生令人感兴趣的化合物所需的酶的表达提供该化合物产量的提高，这是由于参与化合物的生物合成的酶的浓度改变所致。特别令人感兴趣的是选择性控制皂草苷，肉桂醛和/或松柏醛在植物组织如叶，根，果实和种子中的产生。

对于在令人感兴趣的组织中的肉桂醛生物合成，用一种表达弹夹转化植物细胞，所述表达弹夹包含有合成肉桂醛所需要的并能增加肉桂醛在所感兴趣的组织中的量的一种或几种酶的结构基因的编码DNA。类似地，对于令人感兴趣的组织中皂草苷生物合成的选择性控制，用一种表达弹夹转化植物细胞，所述表达弹夹包含有合成皂草苷所需要的并能增加这些化合物在所感兴趣的组织中的量的一种或几种酶的结构基因的编码DNA。特别令人感兴趣的是编码一种或几种酶的这些基因，所述酶能从一般在植物细胞中发现的基质中代谢所感兴趣的皂草苷，肉桂醛和/或松柏醛化合物生物合成所需要的母体化合物。更特别令人感兴趣的是至少一种式(1)，(2)，(3)，(4)，(5)和皂草苷化合物的转基因表达。

制备表达令人感兴趣基因的DNA构建，其提供表达弹夹进入植物宿主基因组的整合。整合可以用本领域已知的转化体系如土壤杆菌(Agrobacterium)，电穿孔或高速微粒介导的转化作用来完成。根据应用，皂草苷或一种令人感兴趣的其它化合物可以在所感兴趣的组织和/或特殊细胞器中被很好地表达。组织特异性通过使用具有所需表达分布的转录调控区而实现。该酶至特殊细胞器的转运通过使用合适的转运肽而实现。DNA构建的组织和细胞器特异性表达的方法已公开且是本领域已知的。

为了证明所感兴趣的基因的调控和表达，有多种技术来测定存在于植物细胞中的所期DNA序列是否整合到了基因组中，和是否是正在被转录。可以使用如Northern印迹技术来检测编码所需酶的信使RNA。通过测试酶活性或对蛋白产物的免疫测定可进一步检测表达。最优选的是用本领域已知的方法测定植物宿主中存在的令人感兴趣的化合物的水平。例如，一种所期望的表型是根据所感兴趣的基因表达和/或存在于植物宿主中皂草苷的水平而测定的与对照植物相比的所感兴趣植物组织中增加的皂草苷和/或类黄酮醛含量。

为了向目标生物体引入一种或几种本发明化合物，表达编码控制令人感兴趣化合物的水平所需要的酶的基因的植物宿主使目标生物体暴露于至少一种抗病原制剂组分。在另一实施方案中，令人感兴趣的基因的选择性表达诱导了对病原体侵害或定居的系统植物宿主抗性。至少一种抗病原制剂的组分可被植物宿主表达，而且可任选地，抗病原制剂的其它组分外部对植物宿主施用，从而当直接或间接引入到目标生物体时，这种结合得到所期望的抗病原效果。除抗植物病原的自身保护外，具有提高的聚集类黄酮醛如肉桂醛，α-己基肉桂醛和松柏醛能力的转基因植物可以用作类黄酮醛类的来源，用于提取以及接下来用作化学农药。

类黄酮醛类的积累可以通过向下调控编码酶的特定植物基因的表达而实现，所述酶或者引起所期醛类的进一步代谢，或者使代谢中间产物从所期醛类转换。例如在肉桂醛的情况下，其包括向下调控肉桂酸4-羟基酶(CA4H)和肉桂醇脱氢酶(CAD)的表达。CA4H一般从肉桂醛转换一些肉桂酸以产生p-香豆酸，其自身是一种代谢中间产物。只减小CA4H活性一般不足以引起肉桂醛的累积，因为CAD能很快将肉桂醛转换为肉桂醇，其然后结合到木质素中或累积为糖苷。同时减小CA4H和CAD两者的活性会造成肉桂酸至肉桂醛代谢转变的增加，并降低肉桂醛类转换成肉桂醇的作用。一些肉桂醛变成掺入木质素中，但肉桂醛(游离的或者是糖苷形式)还是积累至正常水平之上，特别是在当肉桂酸的生物合成增加的时候。这发生在当苯丙氨酸解氨酶(PAL；一般苯丙类似物(phenylpropanoid)代谢中第一和速率限制步骤，Hahlbrock和Scheel，(1989)Annu.Rev.Plant Physiol.Plant Mol.Biol.40：347-369)活性水平高的时候，这是一种在植物体内自然发生的对宽广范围刺激有响应的情况，刺激包括受真菌病原体侵害和与受伤和昆虫取食有关的机械损伤。

一些植物CA4H和CAD基因已经被克隆出，且它们的序列可从基因库中获得。部分包括在不同植物品种之间保守的核苷酸序列的这些基因的部分可直接用于植物表达载体(反义和有义方向)中，以抑制相应的内源基因的表达(例如，Pear等，(1993)，Antisense Res.andDevelop.3：181-190，Napoli等(1990)，The Plant Cell 2：279-289。也可参见USPN 5107065)。更优选的是，这些保守的基因序列被用来从要被修饰的植物品种的cDNA库中分离CA4H和CADcDNA克隆。所得到的cDNA克隆或其部分随后被引入植物表达载体中(反义或有义)，并被用来转化所感兴趣的植物。优选本发明DNA构建包括与内源CA4H或CAD基因同源的至少50个碱基的序列。

重组DNA分子通过将一载体操作连接于一有用的DNA片段以形成被用于植物转化的质粒而产生。能指导RNA自一种基因被克隆部分表达的载体在本文中称作“表达载体”。这样的表达载体包含表达控制元件，包括启动子。在高级植物中用于基因表达的典型载体是本领域公知的，且包括Roger等在Methods in Enzymology(1987)153：253-277中描述的自根癌土壤杆菌(Agrobacterium tumefaciens)的Ti质粒衍生的载体。一种被用来提供引入基因的强组成型表达的共同启动子是花椰菜嵌合体病毒(CaMV)35S启动子(得自Pharmacia，Piscataway，NJ)。可使用组成型启动子(如CaMV 35S)或可诱导或发展性调控启动子(如来自PAL基因或内源CA4H或CAD基因的启动子)。使用组成型启动子是要影响植物全部部分中的功能，而使用可诱导或发展性调控的启动子具有实质上只在所期组织中并在其所需要的条件下产生反义或有义RNA的优点。优选使用发展性调控的启动子，因为已知苯丙类似物(phenylpropanoid)生物合成的下游调控能对包含异源PAL基因的转基因植物的生长产生所不期望的副作用(Elkind等(1990)，Proc.Nat.Acad Sci 87：9057-9061)。

对于宽范围植物品种的常规转化有一些不同的转化方法。一种将DNA传递给双子叶植物特别有效的方法包括使用土壤杆菌。在该方法中，令人感兴趣的基因插入到T-DNA区的边缘之间，所述T-DNA区已被剪切成带选择性标记基因的小的重组质粒(选择性标记基因例如编码新霉素磷酸转移酶II或phosphinothricin乙酰转移酶)。然后该重组质粒通过转化或三亲代交配而引入到土壤杆菌宿主中。然后携有令人感兴趣基因的土壤杆菌菌株用来通过使细菌与合适的植物组织(例如叶盘)共同培养而转化植物组织。在组织培养物中用合适的选择试剂选择转化的细胞后，使植物再生(参见Horsch等，(1985)Science 227：1229-1231)。其它已经用于植物细胞转化的方法，特别是对于更难处理的作物植物，包括biolistics和电穿孔(关于详细步骤，参见Sanford等，(1993)Methods in Enzymology 217：483-509；和Potter(1993)Methods in Enzymology 217：461-478)。

一旦产生出转基因植物，要使用常规的对于CA4H和CAD的酶分析来测定不同转化物中实现的抑制酶活性的水平。可能只有产生的一小部分转化物会具有足够低的残余酶活性，引起类黄酮醛类的累积而对植物的生长不产生某些不期望的副作用。因为这一原因，优选的产生所期望的CA4H和CAD两者被抑制的转化物的方法是将两基因分别引入不同的转化物中，然后通过标准的有性交配而将它们结合。这使得可在同时评估较大数目结合物的基因抑制水平。

在转基因植物中大量产生类黄酮醛的另一选择是使用使微生物宿主具有合成特定类黄酮醛和/或皂草苷能力的植物基因。得到的微生物可以用来在发酵系统中产生类黄酮醛或者作为类黄酮醛在活的或不是活的微生物制剂中的天然运送系统。酵母，尤其是啤酒糖酵母(Saccharomycescerevisiae)是为此目的的优选的微生物，因为它们已经被改变成高水平表达PAL(Faulkener等，(1994)Gene 143：13020)，并且一种植物肉桂酸4-羟基酶已被证明在酵母中起作用(Urban等，(1994)Eur.J.Biochem.222：843-850。

PAL的表达引出自苯丙氨酸产生肉桂酸的能力。需要两步额外的步骤来从苯丙氨酸产生肉桂醛。在植物中，这些步骤由酶肉桂酸：CoA连接酶(CL)和肉桂酰CoA还原酶(CCoAR)所催化，但因为4-香豆酸CoA连接酶(4CL)也能用肉桂酸作为基质(Knobloch，和Hahlbrock(1977)Arch.Biochem.Biophys.184：237-248)，因此4CL能代替CL使用。多于20个的克隆的PAL基因和多于6个的4CL基因已被充分详细地描述过(GenBank)，以有利于在本发明实际中使用它们。CCoAR的基因通过应用标准基因克隆技术用探针序列分离cDNA克隆而获得，所述探针序列衍生于纯化蛋白的N-末端氨基酸序列，或肽片段。CCoAR已经从大豆培养物中(wengenmayer等(1976)，欧洲生物化学杂志(Eur.J.Biochem.，65：529-536；Luderitz和Grisebach(1981)，欧洲生物化学杂志，119：115-124)，从云杉形成层汁(Luderitz和Grisebach，上文)，从白杨木质部(Sami等(1984)，欧洲生物化学杂志，139：259-265)，和从Eucalyptus gunnii分化着的木质部(Goffner等(1994)，植物生理学(Plant Physiol.)106：625-632)中纯化并部分表征出来。优选的纯化方法是Goffner等(上文)的方法，因为其在SDS-聚丙烯酰胺凝胶上产生用于蛋白质序列测定的单一的蛋白质泳带。为了表达α-己基肉桂醛，催化α-己基加成到肉桂醛的酶的编码基因也被插入到微生物宿主或植物中。该基因例如可以从稻植物中克隆。

克隆的基因被引入到标准的表达载体中，并用来藉标准转化技术如电穿孔来转化微生物宿主，优选转化酵母(Becker和Guarante(1991)，酶学方法(Methods in Enzymol.194：182-187)。用标准酶分析来证明已处理基因的功能表达，用对于类黄酮醛的分析挑选有最大产量的菌株。因为类黄酮醛有抗微生物性质，因此优选使用只是在生长周期后期或响应一种化学引诱物时引起插入基因的表达载体。也优选使经基因工程处理过的微生物宿主在固定的全细胞反应器中生长(例如Evans等(1987)，生物技术和生物工程(Biotechnology andBioengineering)30：1067-1072)来防止醛在培养物中积累。

本发明制剂和方法对于处理病原生物体定居的植物是有用的。这些植物包括开花植物，草，包括观赏用草皮草，苇草，蔬菜，谷类植物和水果，包括番茄，马铃薯，洋蓟，草莓，玉米，谷子，洋葱，黄瓜，莴苣，烟草和柑橘属，如橙子，柠檬，莱姆和葡萄柚，以及胡椒和葡萄，和水果树，如桃，苹果和樱桃，装饰性植物，如玫瑰和树，特别是针叶树。也包括为鱼，鸟和动物包括人直接或间接取食的作物。“直接或间接”是指可以被例如人类(直接消费)消化的作物，或者由非人类动物或鸟类消化的作物，接着被人类消化(间接消费)。要用于消费的作物包括烟草，鱼类，动物和鸟类饲料，要加工成酒精或食品的作物如玉米糖浆和类似物质。

目标病原生物体包括定居在植物或植物部分，特别是植物部分的表面的真菌。施用本发明制剂的最佳时间和方法由被真菌定居的植物的特定部分以及发生或可能发生特定侵害的植物生长周期中的时间来确定。例如，为处理定居在宿主植物叶子上的白粉菌，锈菌和其它病原体，用本发明制剂对宿主植物喷施至流溢。使用的式(1)化合物的量将部分取决于目标病原体和宿主植物而不同，并可以通过评估目标生物体对该制剂的敏感性以及该制剂对宿主植物的植物毒性作用而凭经验确定。可以在受侵害之前或之后，优选在受侵害之前对植物喷施，但在可行的情况下，为了减小对宿主植物的伤害，优选处理长成植物，因为嫩的绿叶对植物毒性更敏感。或者，可以使用转基因作物，其以足以抑制病原体生长和/或杀死病原体的量表达一种或几种该制剂组分。优选这些组分在病原体定居的组织中例如叶中表达。

特别令人感兴趣的是处理由目标微生物真菌白粉病科(Erysiphaceae)引起的白粉病侵害的植物，例如，下面的菌种在指出的植物中引起白粉病：二孢白粉菌(Erysiphe cichoracearum：秋海棠，菊花，大波斯菊，葫芦，大利花，亚麻，莴苣和百日草；禾白粉菌(E.graminis)：谷类植物和草类；蓼白粉菌(E.polgoni)：豆类，大豆，苜蓿和其它豆科植物，甜菜，包心菜和其它十字花科植物，黄瓜和甜瓜，飞燕草和八仙花；Microsphaera alni：蓝莓，梓树，榆树，紫丁香，橡树，山杜鹃花，和甜豌豆；Phyllactinia sp.：梓树，榆树，枫树和橡树；苹果白粉病柄球菌(Podosphaera leucotricha)：苹果，梨和榅桲；P.oxyacanthae：杏树，樱桃树，桃树和梅树；Spaelrotheca macularis：草莓；S.mors-uvae：醋栗和红醋栗；S.pannosa：桃树和玫瑰；以及葡萄白粉病钩丝壳霉：葡萄，马栗树和欧椴。

还有特别令人感兴趣的是处理由担子菌纲(Basidiomycetes)特别是夏孢锈菌目(Uredinales)引起的锈病侵害的植物。有大约4000种锈菌真菌菌种。最重要的锈菌真菌和受影响的植物包括：柄锈菌属(Puccinia)：引起多种宿主如小麦和所有其它小谷类的锈病(禾柄锈菌(P.graminis))；黄色或条状锈病：小麦，大麦，和裸麦(条形柄锈菌(P.striiformis))；叶或棕色锈病：小麦和裸麦(隐匿柄锈菌(P.recondita)；大麦的叶或棕色矮小锈病(P.hordei，大麦柄锈菌)；燕麦的冠状锈病(P.coronata，禾冠柄锈菌)；玉米锈病(P.sorghi，高粱柄锈菌)；南方或热带玉米锈病(P.polysora，多堆柄锈菌)；蜀黍锈病(P.purpurea，紫色柄锈菌)；和甘蔗锈病(P.sacchari，和P.kuehnii，屈恩氏柄锈菌)。

柄锈菌属也引起田野作物如棉花(P.stakmanii)，蔬菜如芦笋(P.asparagi，天门冬柄锈菌)，和花卉如菊花(P.chrysanthemi，菊柄锈菌)，蜀葵(P.malvacearum)，和金鱼藻(P.antirrhini)的严重锈病。胶锈菌属(Gymnosporangium)引起重要的西洋杉-苹果锈病(G.juniperi-virginianae)和山楂-西洋杉锈病(G.globosum)。Hemileia引起荒废咖啡叶锈病(H.vastatrix)。多胞锈菌属(Phragmidium)引起玫瑰锈病和木莓黄锈病。

其它引起锈病但能用本发明制剂处理的真菌菌种包括单胞锈菌属：豆科植物(豆，蚕豆，豌豆)(几种单胞锈菌种)和石竹属植物(U.caryophyllinus)；柱锈菌属(Cronartium)：松树，橡树和其它宿主严重的锈病，如白松水泡锈病(C.ribicola)；松树和橡树的钫锤形锈病(C.quercuumf.sp.fusiforme)；东部瘿或松树-橡树锈病(C.quercuumf.sp.virginianae)；香松树蕨类植物水疱锈病(C.comptoniae)；Comandra松树锈病(C.comandrae)；和南方玉米锈病(C.strobilinum)。其它的包括栅锈菌属(Melampsora)，其引起亚麻的锈病(M.lini，亚麻栅锈菌)；鞘孢锈菌属(Coleosporium)，其引起松针水疱锈病(C.asterinum)；裸双胞锈菌属(Gymnoconia)，其引起黑莓和覆盆子的桔锈病；层锈菌(Phakopsora)，其引起潜在性大灾害的大豆锈病(P.pahyrhizi)；和疣双胞锈菌属(Tranzschelia)，其引起桃树锈病。

本发明制剂和方法也用来预防和处理定居在植物其它部分，如根和果实的生物体的侵害。对于侵袭植物根的真菌，如镰孢属(Fusariumsp.)，曲霉属(Aspergillus)，和Verticulum(包括V.alboatrium和V.dahlise)，优选通过叶施用本发明制剂来处理侵害，通过改变位置或通过诱发系统获得性抗性(SAR)而使活性成分达到根。为治疗果实侵害，如黑斑病，在果实长成期间或之后，优选直接向生长着的果实施用本发明制剂。其它目标真菌生物包括发光杆菌属(Phragmidium)；玫瑰双壳(Diplocaopan rosae)；Sphaerotheca tannosa；Oibiapsissicula；Phytophoya taraesitica；柄锈菌属(Puccinia spp.)；链格孢属(Alternaria sp.)；susaiun spp；灰色葡萄孢(Botrytis cinerea)；Sclerotinia Homoeocarca；荷兰榆树病(Ceratocystis ulmi)和橡树萎蔫病(C. fagacearum)。还包括兰-绿藻(Cyanobacteria)。

本发明制剂也用来杀灭昆虫，特别是直翅目(Orthoptera)昆虫；缨翅目(Thysanoptera)包括蓟马科；同翅类(Homoptera)包括蚜虫，叶蝉，白蝇，粉状小虫，蝉和毛虫。本发明的理论是可用本发明制剂处理的昆虫是那些内脏中聚藏共生细菌的昆虫。因此，除上面所列昆虫外，聚藏共生物质的昆虫也可用本发明制剂控制。其它目标生物体包括蛛形纲昆虫，特别是蜘蛛(节肢动物门)。其它的昆虫目标包括鞘翅目昆虫(Coleoptera)，如玉米根蠕虫和棉桃象鼻虫；和鳞翅目(Lepodoptera)，包括苹果蠹蛾。

特别令人感兴趣的是处理葡萄瘤蚜侵袭。根部葡萄瘤蚜(Daktulosphaira vitifoliae Fitch)是破坏葡萄的昆虫。植物损伤不只是因为葡萄瘤蚜取食，而大部分是因为第二真菌，即杀虫剂没有控制住的生物的侵袭。一般情况下在和宿主植物根一样深，即可能是8英尺或更深的深度发现葡萄瘤蚜。因此为了防治葡萄的葡萄瘤蚜侵袭，应将本发明制剂直接送至植物的根部，如将液体或固体制剂注入根周围的土壤中。或者，可以对植物的叶或其它可能部位施用本发明制剂，并通过植物维管系统或通过SAR的诱导而转移至根区。对防治白粉病和锈病的情况下，转基因植物可用于防治葡萄瘤蚜；表达式(1)组分的优选组织是根。

式(1)化合物可以用来处理不同生长阶段的葡萄瘤蚜。这些化合物可配制或分别对葡萄瘤蚜生长目标特定阶段如卵，若虫和成虫期施用。特定制剂和处理方案的效力可以用各种方法，如在田野和/或实验室条件下处理后测定葡萄瘤蚜死亡率，葡萄瘤蚜进食，和/或不再受侵的取食点，或者通过改善受侵葡萄藤的生长状况来评估。另外，一种特定制剂和处理方案的效力可以通过用本领域已知方法分析代谢，易位和/或对制剂处理的反应中葡萄藤的生理状况来评估。除一般测试的处理的剂量，制剂和时间选择性外，也考虑其它因素，以确定葡萄瘤蚜物候学，植物物候学，植物健康，接枝和栽培品种(接穗和根状茎两者)的存在所涉及的情况。

本发明方法和制剂也用于防治草皮被侵袭。一些非传染性病害的生物制剂因竞争而损害草皮。藻类常常通过占据草皮由于传染性病害而变稀疏后留下的空地并迅速生长而损害草皮。兰-绿草藻(Ajanobacteria物种)在过湿土壤表面上长成为黑色浮垢。这些藻减少了空气和土壤间气体的交换，也可能在植物中引起缺绿病。黑层是主要与高尔夫场铺置的草坪相关的一种物质状况。特别指出的是高砂质含量的草皮。另外，草皮真菌病害可以用本发明制剂防治。核盘菌属(Sclerotinia)元点病，腐霉属(Pythium)枯萎病和丝核菌属(Rhizoctonia)枯萎病是多种草皮用草种尤其是苇草的破坏性病害。本发明制剂处理草皮的效力可通过改变制剂的组成，施用方法，施用容积和/或施用比例来测定。评估可以在田野和/或实验室条件下进行，要考虑给定的环境条件如湿度，温度，光的强弱，光量和光密度，土壤类型和肥力，含水量，排水等等。制剂持久性和活性效果也可以通过与日常的草叶的刈除和去除比较向顶的易位和持久性而确定。本发明制剂可以以不同的施用比例和浓度，及施用方法施用，以达到所期望的病害控制程度和植物毒素水平。对于本发明应用优选式(2)和(5)的组合物，更优选式(3)，(4)和(5)。

特别令人感兴趣的是本发明制剂控制核盘菌属元点病(dollarspot)(Sclerotinia homeocarpa)的应用。核盘菌元点病是发生于全世界大部分草皮品种的分布广泛，持久和损耗性的病害。对元点病有利的环境条件包括长期高湿度和过剩的水分。这些环境条件再加上低氮肥力增加了元点病发生的可能性。密集稠密生长习性的细叶草特别易受侵害，使元点病成为严重损害经营的高尔夫场绿地的主要威胁。特别令人感兴趣的还有本发明制剂控制由腐霉属种引起的病害的应用。由腐霉属种引起的病害经常被认为是腐霉属枯萎病，油点病，斑点枯萎病，冠枯病和根枯病。腐霉属也引起籽苗病害。所有草皮草易受腐霉属侵袭，包括爬行苇草，高尔夫场绿地最普遍的草，生长在美国南方的新型苇草。腐霉属抗性生物型一般对传统杀真菌剂的应用没有反应。本发明制剂一般在促进腐霉属的种生长的条件第一次出现之前或出现之时以叶喷施而施用。当天气热且潮湿，而夜间仍热的时候，这对于腐霉属枯萎病特别有效。

本发明方法和组合物另一优选的应用是控制丝核菌属枯萎病，一般认为是棕斑病。丝菌属枯萎病当周围环境适合其生长时其是一种特别快的毁坏性病害。因此，要使用的本发明制剂一般应该在热湿气候，高氮肥力比例，密集叶生长和/或常浇水的时候施用。控制草皮的丝菌属枯萎病是困难的，传统的杀真菌剂常常对该病害不起作用。用本发明制剂控制St.Augusting草丝菌属枯萎病也是令人感兴趣的。

特别令人感兴趣的是为昆虫目标的oranamental花和其它植物的蓟马，白粉菌，黑斑病，葡萄孢和瓜蚜侵袭的防治和预防。本发明制剂对预防或处理玫瑰，圣诞树(例如松树)，和果树和果实的侵害特别有用。例如，本发明制剂对于处理桃树不受星尺蛾侵害，处理苹果树不受苹果蠹蛾侵害，处理葡萄不受卷叶虫，葡萄瘤蚜，叶蝉，葡萄孢，蓟马和白粉菌的侵害。优选的制剂来自芳香族类黄酮醛式(2)和(5)，优选式(3)，(4)和(5)。

一个例子是处理棉花瓜蚜侵袭。最重要的物种是棉蚜或瓜蚜(Aphisgossypii Glover，棉蚜，瓜蚜)。几乎在棉花一长出叶时，小的软体的白绿色植物小虫即飞向它们并开始繁殖。因此本发明制剂应该在其生长早期对棉花施用。优选叶喷施，因为蚜虫在地上部分取食。处理的最重要的时间是正好在冷湿季节之前和/或在冷湿季节期间，当蚜虫多至足以阻碍植物生长和损坏植物。

本发明也用来防治和预防晚疫病。晚疫病影响番茄，马铃薯，茄子和其它薯类植物，并由蚜虫类侵害而产生。本发明制剂优选在温和温度多雨期，一般当发病由于孢子驻留在植物表面而开始的时候对植物施用。损伤是由象鼻虫成虫和它们的幼虫或蛴螬引起的。成虫咀嚼进棉蕾和圆荚而戳破它们。本发明制剂应该特别地直接地施加到植物的这一部分。

处理制剂也用来控制开花植物的传花粉时间。例如，为防止或推迟传花粉，以足够的量施加本发明制剂来防蜜蜂和其它传粉昆虫。通过判断制剂的残留量，人们可以控制抑制传花粉时间的长短。另一方面，对于交叉传粉需要施肥的植物，如果传粉昆虫被本发明制剂抵制或杀死，则应该避免在此期间施用本发明制剂。特别是胡蜂科的种，包括群居峰，胡巢蜂(paper-nest wasps)，大胡蜂和胡蜂传粉对本发明制剂敏感。

用本发明化合物处理革翅目(欧洲蠼螋(Forticula aureculatia欧洲球螋))也是令人感兴趣的。蠼螋有极宽的食谱，以多种不同类型植物材料为食，包括花，蔬菜和果实，无论收获前和收获后。因此，本发明制剂例如通过对蠼螋侵袭了的正在生长的植物和/或已收获的植物部分叶喷施而施用。

特别令人感兴趣的是用本发明制剂收获后处理剪下的花以控制那些在花瓶溶液中发现的微生物的生长。本发明也能增长剪下的花的寿命，这部分是由于对茎在水中生长时对花瓶溶液微生物如细菌和真菌的控制。处理剪下的花可以用各种适于特定目的的方法，如将剪下的茎浸入本发明制剂后再取出，和/或向花瓶溶液中加入该制剂，或将整个剪下的花在该制剂中浸一浸。在一优选实施方案中，收获后控制是针对于葡萄孢开花期枯萎病(由剪下的花上的灰色葡萄孢Pers：Fr引起)。葡萄孢开花期枯萎病是温室生长的玫瑰和很多其它剪下的花植物以及葡萄藤上分布广泛且毁坏性病害。用试验化合物收获后处理可以用来减少由灰色葡萄孢引起的灰色霉菌，延迟由灰色葡萄孢，根霉(Rhizopus)和扩展青霉(Penicillium expansum)引起的花的腐烂(或果实如木莓，草莓，苹果，梨的腐烂)。优选式(2)和(5)化合物。更优选的是含有皂草苷和/或吐温80的制剂中包括肉桂醛和/或α-己基肉桂醛的制剂。该制剂延长或保持剪下的花的寿期的效力可通过监视花叶，茎的枯萎，再水合作用，细菌生长和茎污染，和微生物及生理性孢塞的收获后控制而评估。

本发明化合物可以在苹果蠹蛾(Cydia pomonella)进入果实前用来处理其三个生长阶段，成虫，卵和新生幼虫。对于这项应用，必须研究这些生长阶段的敏感性曲线，以优化施用本发明制剂的时间性。通过试验卵，新生幼虫和成虫对该制剂的敏感性，刚施药时以及最初施药后保留的残余毒性来进行。

本发明类黄酮醛组合物也被用来控制San José介壳虫，其是一种形状奇特且不动的昆虫。象粉蚧一样，介壳虫比动物更接近类似于病害微生物。有两类介壳虫：意为以花园植物为食的软蚧(Coccidea)和优选果园植物的盾蚧(Diaspididae)。介壳虫总科中的一些介壳虫自身接触很多不同植物的叶，果实和茎皮。因此，本发明制剂优选施与敏感植物的叶，果实和茎皮。

本发明方法和组合物也用于控制与蚜虫，木虱，和葡萄瘤蚜类似的粉蚧。粉蚧从植物中吸取汁并传播病害，它们分泌的蜜汁招来干扰光合作用的黑色真菌的生长。叶施药被用来控制黑色真菌的生长，所用的量应足以在植物中诱导SAR，以在昆虫取食的植物的远距离区控制吸汁昆虫的生长。

除处理宿主植物外，也可用本发明制剂处理种子。种子可用粉末制剂在其上涂粉(参见美国专利No.4978686，是制剂能被吸附的无机材料的例子)或在植物基质如蛭石中混合。种子也可自转基因作物获得，其中式(1)组分已在种子中表达，最好优先在种子中表达。无菌条件下自处理过的种子生长出的籽苗对真菌和昆虫无感应性。另外也可以用本发明制剂处理籽苗。在一些情况下必须调整处理用制剂以减小与处理相关的任何植物毒性，因为弱小幼芽更可能显现出植物毒性症状。

提供下面的实施例是为了详细说明而不是限制本发明。

实施例原料和方法

从以下来源获得下面给出的实施例中使用的化学物质：肉桂醛，Spectrum化学公司，N.J.，松柏醛，APIN化学公司，U.K.；吐温80和碳酸氢钠，Spectrum化学公司，Gardena，C.A.；α-己基肉桂醛，Firmenich，Plainsboro，新泽西；皂草苷，Danco有限公司，Fresno，C.A.。

实施例1玫瑰栽培植物上白粉菌的处理

A.盆栽玫瑰.对8株玫瑰栽培植物进行试验来研究肉桂醛/NaHCO₃制剂对锈菌和孢子的作用。所用的栽培植物包括未命名的Moss(Moss)，Galica，Rosette Delize(Hybrid Fea)，Rosa RugosaRubra(Rugosa)，Abel Morrison(Hybrid多年生植物)，JohnLaing，Betty Prior，和Rose de Roi。选择五种(5)盆栽栽培植物(Moss，Galica，Hybrid Tea，Rugosa，和Hybrid多年生植物)，并根据Paulus和Nelson(上文)设计白粉菌，锈菌和孢子的发病等级，(只对Moss，Gali Ca和对照植物评估孢子)。Moss和Galica栽培物是0-5等级中的5(其中0＝没有白粉菌，锈菌/孢子病害，1＝1～25，2＝26～50，3＝51～75，4＝76～90，和5＝＞90％每丛中的叶受损伤)。Hybrid Tea和Hybrid常年生植物等级为3，而Rugosa等级为1。Moss和Galica也受锈菌侵害至相当于等级3。

每株栽培的植物接受了大约100ml(肉桂醛制剂)的叶喷施，所述制剂中含有5g肉桂醛，80g NaHCO₃，10g吐温80，加水至1000g。另外，从第一次用肉桂醛/NaHCO₃处理那天起每周一次对每株盆栽植物施加250ml 0.01％(v/v)10°白利糖度皂草苷水溶液，该皂草苷是从丝兰植物中提取的。对照植物没有接受处理。至最后每周一次田间观测，一次性处理8周后与未处理对照物相比根除了白粉菌，锈菌和孢子，其中对照植物分别保持5，3和4级的白粉菌，锈菌和孢子的发病等级。而且，该项处理显示出诱发了系统抗性。没有观测到植物毒性。

B.田间生长的玫瑰

对田间生长的剪花玫瑰设计另一实验来评估同一时期(季节)和环境条件下肉桂醛/NaHCO₃控制白粉菌的效力。白粉菌和锈菌接种物在该试验田中有很多，不需另外的接种物来提供病害压力。在该项研究中使用了栽培植物John Laing，Betty Prior，和Rose de Roi。从一列16株中挑选8株John Laing植物用于处理。该列中从第一株植物开始处理每一株其它植物。从6株植物中挑选的3株Betty Prior植物被同样处理，和从4株中挑选的2株Rose de Roi植物一样。对每一组栽培植物施用一次制剂的叶喷施处理(大约100ml)，所述制剂中含有肉桂醛(5g)，吐温80(10g)，NaHCO₃(80g)和加至1000g的水。植物间距平均0.86m。发病等级与用来评估盆栽植物白粉菌的相同。对照物是未处理植物。没有风，且喷施要准确以保证对照植物不受喷施转移的影响。John Laing栽培物是嫩的生长了45天的植物，白粉菌等级为5。Betty Prior栽培物是较大植物(≥240天)，事先用Eagle喷施(120天以前)，白粉菌等级为3，Rose de Roi是生长了240天植物，白粉菌等级为2，锈菌等级为2，根据上文给出的相同的等级标度。通过与未处理对照组比较，发现在处理后每一株植物上产生的白粉菌和锈菌损害的数值，来测定诱导的系统抗性，对各种植物进行每周一次的观察。在每株植物最后一次田间观测时确定该处理方法对生长速度的作用。

除了未处理的对照物和三株再次感染等级为3的栽培物Betty Prior外，在为期五周的试验的最后，所有植物都没有了白粉菌。没有发现植物毒性。所有植物都有超过未处理对照物的新的生长。

对每一组植物计算病害控制平均百分率。对于白粉病有如下结果：John Laing，98.3％；Betty Prior，64.3％；Rose de Roi，100％。所有三种玫瑰平均抗白粉病率为90.7％。只对Rose de Roi评价了锈病，抑制率为85.0％。温室和田间条件下，对白粉病提供≥70％MPDC有效的杀真菌剂，而对于锈病是≥65％。

用含肉桂醛和碳酸氢钠的乳液对盆栽或田间生长的玫瑰喷施至流溢，并伴随喷施以皂草苷，保持多至56天没有白粉菌和锈菌，而只用水喷施的植物都不是这种情况。处理过的植物也没有了蚜虫。据报道，用Rubigon喷施，诱发了对玫瑰白粉病的抗性，平均大约20天。用肉桂醛和松柏醛的水溶液或含有碳酸氢钠和肉桂醛和/或松柏醛的乳液喷洒玫瑰获得大约70％平均病害控制测定值。在平行实验中，Benomyl给出大约80％平均病害控制率。

实施例2用松柏醛处理玫瑰上的真菌和昆虫

使用了专用的实验玫瑰花园中6株受感染的玫瑰。用两种松柏醛制剂中的一种处理4株Mrs.John Laing(杂交常年生)和2株Marchioneseof Londonderry(杂交常年生)。低剂量处理(T1)是含有松柏醛(5g)，吐温80(10g)，NaHCO₃(80g)和905g H₂O，共1000g产品的制剂。高剂量处理(T2)的是含100g松柏醛，20g吐温80，120gNaHCO₃和760g水，共1000g产品的松柏醛制剂。参见表1。

用Paulus和Nelson(上文)的等级体系将首先2株Mrs.John Laing植物(P1和P2)设计为白粉菌病害等级为3，且锈病等级为3。Mrs.JohnLaing植物3和4(P3和P4)被设计为白粉病和锈病病害等级分别为4和5，P3和P4也感染了蚜虫，每株植物有＞35个昆虫。根据Paulus和Nelson(上文)的等级体系，两株Marchionese of Londonderry(P5和P6)白粉病和锈病等级为5。

两种处理制剂用于该试验。每株植物(P1至P6)接受了≈100ml下面表1所列制剂的喷施处理。对照植物只喷洒水。以这里所说明的病害控制平均百分率(MPDC)来计算处理前到处理后等级的变化。

表1
表1		植物处理/剂量指定
处理/剂量T1-低T2-高	植物P1，P4，P6P2，P3，P5	植物处理/剂量指定

如下面表2所示，两种制剂均降低了受感染程度。和只喷洒水的植物相比，处理后降低了最小一个估价等级的值。

表2植物处理/剂量
表2植物处理/剂量								害虫	低(T1)			高(T2)
P1	P4	P6		P2	P3	P5			低(T1)			高(T2)
P1	P4	P6		P2	P3	P5	白粉菌前(等级) 后变化		321	312	413		523	514	514
锈菌前(等级) 后变化	321	312	431		523	514	白粉菌前(等级) 后变化	514	321	312	413		523	514	514
锈菌前(等级) 后变化	321	312	431		523	514	蚜虫(#) 前启变化	514	---	350≥35	---		---	≥35-≥35	---

P3和P4植株上消灭了蚜虫，表明该制剂有杀昆虫性能。松柏醛和肉桂醛一样，具有抗微生物性能，并且可以消灭存在于宿主昆虫上的共生细菌，没有这些细菌，昆虫不能成活。

实施例3处理玫瑰白粉病

对已知易感白粉病的田间生长玫瑰评估用肉桂醛制剂，松柏醛制剂，和结合使用的肉桂醛和松柏醛制剂进行的三种处理实验。这些植物受各种以前的杀真菌剂处理的阻碍，且对这些植物是随机性的。两个物种被用于下面描述的三项实验中的每一项。在实验1中，使用了Reichsprasident von Hindenburg(Bourbon)和Oskar Cordel(杂交常年生)；在实验2中，使用了Rosa Gallica Officinalis(Apothecary玫瑰)和Deuil de Paul Fontaine(Hybrid Moss)。在实验3中，使用了Comte de Chambord(Portland)和Madame Pierre Oger(Boarbon)。实验1评价单独使用肉桂醛和结合吐温80和/或NaHCO₃组分的效果，实验2评估单独使用松柏醛和结合吐温80和/或NaHCO₃的效果，实验3评估了肉桂醛和松柏醛与吐温80和/或NaHCO₃结合的效果。在实验1中试验了9次处理，实验2中6次，实验3中6次。参见表3的处理方案；制剂1用于这些实验。

每株植物接受了一次100ml叶喷施，接着用Paulus/Nelson等级规格(上文)评估白粉病。只是在处理前和处理后4天用该等级规格对植物评估。以这些实验为基础，病害控制平均百分率数据表明所有三种混合制剂(即G，M，和Q)提供了超过70％病害控制率(表4)。处理Q(CNMA和COFA两者)明显比所有其它处理，包括苯菌灵(benomyl)要好。而且，肉桂醛，松柏醛，吐温80和NaHCO₃用于食品工业，可能对消费者或任何以该方法喷施的食品作物或园艺操作者没有毒性危险。类似地，因为这些化学物质没有留下毒性残留物，因此没有机会对广泛的环境有任何破坏作用。而且其应用可能与当今生物控制方法相容合。

表3

处理方案

组号	处理	组分	处理组分的量¹
			处理组分的量¹		制剂1	制剂2
			1	A	制剂1	制剂2	肉桂醛(CNMA)	5g	20g
1	B	吐温80(T80)	1	A	10g	20g	肉桂醛(CNMA)	5g	20g
1	B	吐温80(T80)	1	C	10g	20g	NaHCO₃	80g	60g
1	D	CNMA+T80	1	C	5g，10g	20，60g	NaHCO₃	80g	60g
1	D	CNMA+T80	1	E	5g，10g	20，60g	CNMA+NaHCO₂	5g，80g	20g，60g
1	F	NaHCO₃+T80	1	E	80g，10g	60g，20g	CNMA+NaHCO₂	5g，80g	20g，60g
1	F	NaHCO₃+T80	1	G	80g，10g	60g，20g	制剂1(CNMA)	A＝5，B＝10g，C=80g	A＝20，B＝20，C＝60g
1，2，3	H	+对照²	1	G	按制造商说明	R，S，T²	制剂1(CNMA)	A＝5，B＝10g，C=80g	A＝20，B＝20，C＝60g
1，2，3	H	+对照²	1，2，3	I	按制造商说明	R，S，T²	-对照	H₂O	H₂O
2	J	松柏醛(COFA)	1，2，3	I	5g	20g	-对照	H₂O	H₂O
2	J	松柏醛(COFA)	2	K	5g	20g	COFA+T80	5g，10g	20g，20g
2	L	COFA+NaHCO₃	2	K	5g，80g	20g，60g	COFA+T80	5g，10g	20g，20g
2	L	COFA+NaHCO₃	2	M	5g，80g	20g，60g	制剂2(COFA)	J＝5g，B＝10g，C＝80g	J＝20g，B＝20g，C＝60g
3	N	CNMA+COFA	2	M	2.5g，2.5g	10g，10g	制剂2(COFA)	J＝5g，B＝10g，C＝80g	J＝20g，B＝20g，C＝60g
3	N	CNMA+COFA	3	O	2.5g，2.5g	10g，10g	CNMA+COFA+T80	2.5g，2.5g，10g	10g，10g，10g
3	P	CNMA+COFA+NaHCO₃	3	O	2.5g，2.5g，80g	10g，10g，10g	CNMA+COFA+T80	2.5g，2.5g，10g	10g，10g，10g
3	P	CNMA+COFA+NaHCO₃	3	Q	2.5g，2.5g，80g	10g，10g，10g	制剂3(CNMA+COFA)	A＝2.5g，J＝2.5gB＝10g，C＝80g	A＝10g，J＝10g，B＝20g，C＝60g

¹加水至1000g²R＝苯菌灵S＝麻拉松T＝Lilly Miller SSKB

表4

肉桂醛和松柏醛制剂对玫瑰白粉菌的作用

醛

肉桂醛松柏醛肉桂醛(2.5g)+添加剂没有 (5g) (5g) 松柏醛(2.5g)

病害控制平均百分数None 0％ 50％ 56％ 69％T80(10g) 0％ 44％ 44％ 69％NaHCO₃ 44％ 56％ 44％ 88％T80+NaHCO₃19％ 94％ 81％ 100％苯菌灵 79％ NT NT NT

实施例4

单独使用肉桂醛和/或松柏醛和/或与吐温80

和/或NaHCO₃一起处理葡萄瘤蚜取食位置试验

生理过程阻碍导致的死亡率由成虫和蛹死亡率实验以及由卵孵化实验来测定。孵化后，新生昆虫必取得一确定的合适的进食点。如果昆虫的生命周期要持续的话，该所做的事情一定要成功。研究表明大约80％的葡萄瘤蚜死亡发生在此项事情期间。低剂量浓度制剂可以通过阻碍昆虫“寻找和确定取食点”行为而保护葡萄的根。用以下方案评价所有三个类型的作用。成虫和蛹死亡率实验

使大约24只葡萄瘤蚜的卵在标准的切除的葡根上生长至30天。在30天左右，一些昆虫长成蛹而另一些长成若虫。在该过程中移去新生卵。昆虫侵染的根浸入试验制剂中6秒钟，然后放置于空气中风干。5天后以其生长，产卵或脚部活动来确定成活昆虫百分率。如果一只昆虫放弃了其取食点，则认为它已死亡。在最初的试验中，评估了有各种添加剂在水中20000ppm肉桂醛(即2％肉桂醛)的剂量。没有任何添加剂的肉桂醛产生83.3％的死亡率。添加1％吐温80，得到91.7％死亡率。向2％肉桂醛溶液中加入6％NaHCO₃，得到91.7％死亡率。向2％肉桂醛溶液中加入1％吐温80和6％NaHCO₃，得到100％死亡率。没有添加剂的水不产生死亡率，而250ppm水中的马拉松正控制溶液给出100％死亡率。卵孵化实验

60只混合龄群的葡萄瘤蚜卵置于50×9mm密封的塑料陪替氏培养皿中的滤纸(Whatman#1，5.5cm，圆形)上，用100μl溶液处理。选定浓度的400μl试验制剂加到滤纸皿中，并将培养皿用陪替氏培养皿盖盖上，并置于塑料容器箱内。6小时后，将该箱置于24℃黑暗中的保护室中。10只卵一组。一周后，测量孵化百分率。在最初的实验中，用一组卵在每一剂量评估6％NaHCO₃，和2％吐温80中自0.1至25000ppm肉桂醛剂量。实验重复三次。7天后评价该制剂的效果，并以壳内死亡(DIS)的蛹数或未完全孵化(IH)的卵(即完全死亡)来记分。根据概率分析来测定LD50和LD90。使用5000ppm肉桂醛，所有的蛹死在壳中。使用100ppm，88％死于壳中及还有12％未完全孵化。使用10ppm，壳中没有死亡，但100％的卵没有完全孵化。向100ppm的制剂中加入0.86ml 10°白利糖度皂草苷的水溶液将死在壳中的蛹数增加至93％。相同剂量范围的松柏醛(6％NaHCO₃，2％吐温80)有较小效力。但在5000ppm浓度下，仍有10％的蛹死于壳中，在1000ppm下，12％死于壳中且85％未完全孵化。所有只用水处理的葡萄瘤蚜的卵孵化了。用Carbofuran(10ppm)或马拉松(250ppm)处理的100％葡萄瘤蚜死于壳中。

在实验室生物分析中用6％NaHCO₃，2％吐温-80中的肉桂醛(CNMA)制剂处理葡萄瘤蚜卵。死亡率以不能完成初次破碎卵壳来表示。第7天的EC₅₀是115ppm CNMA。7天后根深部处理蛹和成虫的LC₅₀在3000ppm和10000ppm之间。葡萄瘤蚜严重侵袭的一年龄温室Vitisvinifera栽培物Merlot葡萄的叶使用相同制剂用CNMA处理喷施至流溢。两周后，所有处理过的葡萄的根没有了昆虫，而用水处理的对照物仍有昆虫。参见表5。CNMA或其它处理后1，2和5周从植物体上取根样品置于陪替氏皿生物分析中并用未处理过的葡萄瘤蚜卵感染。这些卵在来自水处理过的对照植物的根上产生新葡萄瘤蚜群，而在来自CNMA处理过的植物的根上没有这种情况。该结果表明该项处理的长期效力。用CNMA处理或对照物喷施在Davis，CA田间植物生长地块中生长的一年龄Merlot葡萄(表6)和2年龄Chardonnay植物(表7)。两周后，10000ppm处理与对照葡萄上昆虫群相比减少95％虫群；1000ppm处理产生92％减少(表8)。这些结果表明，根部的葡萄瘤蚜也被施与叶的该制剂所控制。

如实验数据所示，CNMA可能是对葡萄瘤蚜有直接的毒性，和/或CNMA和/或其代谢产物可能引发植物生理中荷尔蒙或蜡质-愈合变化，该变化不利于葡萄瘤蚜生存。

实施例5

葡萄藤叶的化学物质处理控制根部葡萄瘤蚜

方案

根部葡萄瘤蚜(Daktulosphaira Vitifoliae Fitch)是有论证的世界范围内破坏性最强的葡萄害虫。在该试验中，试验了用1％吐温80配制的肉桂醛控制葡萄瘤蚜的能力。在温室和花盆的研究中，基础制剂用各种浓度技术纯的碳酸氢钠添增。田间处理用加有1％吐温80的1％肉桂醛，或只用1％吐温80。也对类似物和其它物质进行了试验，包括肉桂醇，肉桂酸甲酯，α-己基肉桂醛，苯丙氨酸中4-乙酰氨基苯酚(98％，Aldrich Chemical Co.，Inc.Milwaukee，WI)。

表5

温室Merlot植物，1年龄，被生物型(biotype)A侵染日期和 10K 3K 2.5K 1K 0.3K 水 200ppm 空白剪下的活性1 CNMA CNMA CNMA CNMA CNMA 马拉松制剂0天， 9 9处理7天 0(3) 0(3) 0.7(3) 3.3(3)评估排放 3剪下植物14天 0(3) 0(3) 0(3) 0(3) 3.0(3) 3评估处理后 0(3) 0(3) 0(3) 0.7(3) 4.0(3)5周排放 9 9 9 9处理后 4.0(3) 4.0(3) 4.0(3) 4.0(3)1天处理后 0.3(3) 4.0(3) 2.3(3) 0(3)2天处理后 0.3(3) 3.3(3) 0(2) 1.7(3)7天¹用6％NaHCO₃，和2％吐温中各浓度CNMA处理至流溢。0-4病害等级(植株数)。

表6

Merlot植物，1年龄，被生物型A侵染

植物数日期及活性 20K 10K 10K涂施 1K 水空白制剂处理 2 4 2 3 3 2(5∶30p.m.)处理后7天 1 2^* 1 1 1 1处理后1 4天 1 2 1 2 2 1^*一种10K植物和空白制剂用木质物盖在盒内。

表7

田间地块实验Chardonnay，2年龄，被生物型A侵染

植物数日期和活性 10K CNMA 1K CNMA 水空白制剂0天处理 2植物 2植物 2植物 2植物

(地块5) (地块2) (地块1) (地块6)7天评估 1植物 1植物 1植物 1植物14天评估 1植物 1植物 1植物 1植物

表8

植物根中的葡萄瘤蚜群两周结果 Merlot Chardonnay

(2次处理)20K 16 (98.7％控制)10K 96，52，33 (94.9％控制) 1021K 133，72，95 (91.5％控制) 637水 1143，1138 1048FB 1279 2521

如前所述(DeBenedictis和Granett(1992)在切除的V.Vinifera栽培物Cabernet Sauvignon根片上保留有实验用群体生物型A和B葡萄瘤蚜。来自该群体的卵用于侵染温室和田间田块植物的毒性研究，并评估化学处理植物的宿主适应性。类似于Granett和Timper(1987)描述的实验进行实验生物分析。各种龄段的卵置于用足够溶液弄湿的Whatman#1滤纸上，在卵侧一半的地方形成弯液面。带有卵的滤纸片置于2℃下密封的塑料陪替氏皿中，至其生长7天，然后计数孵育的个数。如果蛹自己完全从卵壳中出来，则认为孵育成功了。即使它们部分从卵壳中暴露出来，昆虫也被认为是未孵化的。

对于蛹和成虫试验，将卵置于切除的根片上，根片类似于用于培植目的的那些，将卵和根片密封在陪替氏皿中，并在24℃保持18-25天使昆虫孵育，开发取食点并成长。大约在此时，大约一半群体处成虫期。试验前，测定每一根片上的群体以及每一昆虫的生长阶段。取出卵。然后将这些根片浸入试验溶液5秒钟，并在装回陪替氏皿之前空气风干，密闭，并放回24℃的保温箱中。5天后测定死亡率。如果昆虫变黑或脱水，如果从处理前记录起其没有再生长，且没有产卵或产极少新卵，则认为昆虫死亡。

对于温室植物，使用了来自Davis的加里弗尼亚大学FoundationPlant Material Service的一年龄盆栽V.Vinifera栽培merlot植物。这些植物栽于10cm直径的小盆中，并在处理前5周用葡萄瘤蚜侵染。在喷施时，将植物小盆置于塑料袋中使从叶喷施中流下的化学物质不滴入土壤中。用普通的1升容积塑料喷洒瓶进行喷施至流溢。使植物在室外空气风干后再放回温室。一段时间后，从盆混合物中分离出根，并估计总的葡萄瘤蚜口数。

切碎来自处理后5周的植物的根，将大约3mm直径4cm长的6段根段清除侵染，用于生物分析。为了进行该项生物分析，用20只卵接种根段，维持植物根，同时维持了寄生群体。25天后，计数各年龄组中个体数目。

种植箱是木质的，上表面积1.5m×1m，高1.5m。箱中装入粘土-肥土土壤，在1995年早春种植4株一年龄Merlot植物。1995年5月通过将大约150只卵放入土壤表面下邻近根的地方而用生物型A葡萄瘤蚜侵袭植物。每周用薄雾滋润植物。在1995年7月和8月不同时间用普通1升容量塑料喷雾瓶进行处理，喷施至流溢。处理后一周或两周，从土壤中取出植物根系，估计总的葡萄瘤蚜口数。1.用CNMA对卵进行试验；将卵置于CNMA湿润的滤纸上处理24小时，卵保持在24℃。

CNMA浓度(ppm)	大约的死亡百分率处理后天数
	大约的死亡百分率处理后天数					1	2	3	4	5
	100	8	0	0	6	1	2	3	4	5	25
180	100	8	0	0	6	100	0	0	47	72	25
180	320	100	37	28	85	100	0	0	47	72	100

2.用卵进行的类似试验；将卵置于CNMA湿润的滤纸上处理24小时化合物大约的卵孵化LD50肉桂醛 320ppm肉桂醇＞320，＜560ppm肉桂酸甲酯＞320，＜560ppmα-己基肉桂醛在560ppm没有孵化失败；快的

蛹死亡率，在100ppm有100％4-乙酰氨基苯酚在560ppm没有死亡3.蛹/成虫试验

水对照试验发现平均减少2％葡萄瘤蚜，表明空白制剂，吐温80在一定程度上对蛹和成虫葡萄瘤蚜有毒性。

用肉桂醛处理的蛹和成虫死亡率a.温室Merlot植物，1年龄，实验1，叶处理(n＝3)

周	0ppm	300ppm	1000ppm	3000ppm	10,000ppm
周	0ppm	300ppm	1000ppm	3000ppm	10,000ppm	1	3.3	0.7	0	0	0
2	3.0	0	0	0	0	1	3.3	0.7	0	0	0
2	3.0	0	0	0	0	5	4.0	0.7	0	0	0

b.用处理后5周时取出的根进行再接种试验(第25天生物分析)，每一剂量6段根上葡萄瘤蚜总数。

处理	卵	1st龄	2nd龄	3rd龄	4th龄	成虫
处理	卵	1st龄	2nd龄	3rd龄	4th龄	成虫	水	52	7	7	7	13	16
300ppm	16	0	6	5	0	4	水	52	7	7	7	13	16
300ppm	16	0	6	5	0	4	1000ppm	2	0	1	4	2	1
3000	0	0	2	1	1	0	1000ppm	2	0	1	4	2	1
3000	0	0	2	1	1	0	10,000ppm	0	0	2	0	0	0

c.温室Merlot植物，1年龄，实验2，叶处理(n)

处理后天数	水	空白制剂	2500ppm CNMA	200ppm马拉松
处理后天数	水	空白制剂	2500ppm CNMA	200ppm马拉松	1	4.0(3)	4(3)	4(3)	4(3)
2	4.0(3)	0(3)	0.3(3)	2.3(3)	1	4.0(3)	4(3)	4(3)	4(3)
2	4.0(3)	0(3)	0.3(3)	2.3(3)	7	3.3(3)	1.7(3)	0.3(3)	0(2)

d.盆栽植物，一年龄Merlot植物，对叶CNMA处理至流溢。去除不好的不连续的根的植物

实验1 实验2平均值±95％CI (n) 平均值±95％CI (n)
实验1 实验2平均值±95％CI (n) 平均值±95％CI (n)	对照 1187±91(3) 767±135 (6)1000ppm 100±31 (3) 58±17 (5)10,000ppm 60±37 (3) 43±56 (2)

讨论

A.直接毒性

这些结果证明当表面施用时CNMA对葡萄瘤蚜卵，蛹和成虫有直接毒性。对进食阶段的毒性水平要比对卵阶段的毒性低得多。当卵龄小或接受孵化时，卵更敏感。这些毒性区别可能反映吸收特征，解毒酶，或活性点在这些阶段的差别。

B.系统活性

当在温室或田间处理整个植物的叶时，活性在两周内转位到根。可见到未被侵食的位点，而且切除的根在处理后至少5周仍保持对葡萄瘤蚜再侵袭的抗性，这表明类黄酮醛和/或代谢物易位到根，在根部其直接引起葡萄瘤蚜死亡或空出进食点，或者类黄酮醛诱导植物改变其根的化学成分，使根不能被葡萄瘤蚜取食所接受。任一机理都是控制葡萄瘤蚜和其它害虫的令人兴奋的新的进展。常规系统杀昆虫剂一般是在植物中向上游动而不是向下游动；因此向下游动对杀昆虫证据是重要的补充。如果类黄酮醛是诱导宿主植物抗性的刺激物，则其增加了一条处理植物害虫的新途径。

实施例6处理蚜虫和白蝇的方案

如下测定肉桂醛和/或松柏醛抗黑豆蚜虫，棉叶螨(Tetranychusurticae)，和银叶白蝇(silverleaf white fly)，Bemisia argentifolii的活性：1.蚜虫

a.陪替氏皿生物分析

用溶解于水的特定制剂(例如10-25,000ppm)处理陪替氏皿(60mm)，使空气风干。在每个皿中放入20只成虫蚜虫(Tetranychusurtcae)(重复10次)。与处理过的皿接触3小时后，与只用稀释剂处理的陪替氏皿中蚜虫的死亡率相比较。使用马拉松(250ppm)为正对照物。

对在2％吐温80和6％NaHCO₃中指定浓度的肉桂醛进行了试验。在2500ppm浓度或高于此浓度下，100％的蚜虫被杀死。在100ppm和10ppm时，发现50％和25％的死亡率。而用2％吐温80和6％NaHCO₃(不加入醛)发现25％的死亡率，用马拉松(250ppm)能杀死100％的蚜虫。

b.植物的叶生物分析

植物在温室中在7.5mm陶土小盆中生长。使用白蝇对棉花植物试验，使用蚜虫对甜菜试验。当植物生长至3叶期时，用60只特定的节肢动物侵染(重复6次)。让昆虫定居并进食。用含有100至2000pm或0.1至2g/l浓度试验制剂的制剂对植物喷施至流溢(大约5ml)。用高的塑料箱将植物罩住(箱的规格是5mm高×10mm直径)。三天后测定用试验制剂喷洒的植物上的昆虫死亡率，并与只用水喷洒的植物上昆虫死亡率相比较。2.银叶白蝇

a.陪替氏皿生物测定

用溶解于水的试验制剂(例如10-25000ppm)处理陪替氏皿(60mm)，并使空气风干。每个皿中放入20只成虫银叶白蝇，(重复10次)。三小时后测定接触过理过皿的昆虫死亡率，并与只用稀释剂处理的陪替氏皿中银叶白蝇的死亡率比较。使用250ppm马拉松作为正对照物。

对2％吐温80和6％NaHCO₃中指定浓度的肉桂醛进行试验。在2500ppm或高于这一浓度时，100％银叶白蝇被杀死。在100ppm和10ppm，分别发现50％和25％的死亡率。用浓度为2％的吐温80和6％NaHCO₃(不加醛)发现25％的死亡率，用马拉松(250ppm)杀死了100％的银叶白蝇。参见表9。

表9

肉桂醛和松柏醛制剂对银叶白蝇死亡率(百分率)的影响

醛

肉桂醛松柏醛肉桂醛(10g)+添加剂无 (20g) (20g) 松柏醛(10g)

死亡百分率无 0 68.6 NT NTT80(10g) 14.5 72.1 NT NTNaHCO₃ 22.9 87.3 NT NTT80+NaHCO₃ 25.0 100 NT NT皂草苷(1％10brix) NT NT NT NT皂草苷+T80 NT NT NT NT皂草苷+NaHCO₃ NT NT NT NT马拉松(250ppm) 100 NT NT NTH₂O(负对照) 26.9 NT NT NT

实施例7

对线虫侵害的处理

有多种线虫侵害植物组织，包括茎和鳞茎线虫(Ditylenchusdipsaci)和根结线虫(Meloidogyne spp)。用含有肉桂醛的各种制剂处理茎线虫(Ditylenchus disaci)如下进行试验。1.茎线虫

从大蒜鳞茎中提取茎线虫，将组织切碎，放入底部有筛网的烧杯中，将该底部有筛网的烧杯置于一盛水的烧杯中。线虫从宿主组织中迁移出并通过筛网沉降在底部烧杯中。将上清水去除，保留在烧杯中的线虫转移到表玻璃上并用于下面的处理方法中。清洁的塑料盒分成20mm×20mm×20mm顶端开口的小盒。室温下(19℃)向每一小盒中吸量半毫升自来水。用粘在解剖针上的睫毛操作每只动物，向每个小盒中放入10只线虫。然后向每一小盒中加入半毫升一种试验溶液。向对照小盒中加入水。用双眼显微镜观察，监测盒中线虫的存活。加入该溶液后1，5，10，20，30和60分钟记录存活的动物数目。如果线虫个体不动或对操作无反应，则认为该线虫已死亡。该试验重复三次。2.根线虫

a.陪替氏皿分析

在一双盲研究中，对本发明醛化合物浓度进行抗根结线虫，Meloidogyne javanica活性的试验。使线虫直接接触化学物质并以24小时为间隔，目测和测试来评估死亡率。用溶液培养来产生Meloidogynejavanica。收集线虫并在24小时内使用。

大约0.07ml水中100只线虫被吸量管移至一syracuse皿(Fisher)中，并立即向每一皿中吸取1ml试验制剂。然后将皿置于塑料袋中保持湿润，防止蒸发。对于每一溶液试验制剂使用4个syracuse皿。七天内每24小时检查一次溶液，并根据线虫的形态完整性及触摸来评价首先碰到的10只线虫是活是死。能动的线虫以成活计数。

肉桂醛在赋形剂(2％吐温80，6％NaHCO₃)中的浓度是100ppm或更大时，在24小时时100％线虫死亡。在10ppm，0％，15％，17.5％，22.5％，27.5％，52.5％和52.5％浓度时，线虫分别在24，48，72，96，108，132和156小时时死亡。肉桂醛在赋形剂中的浓度为1ppm和0.1ppm时对死亡率无影响。用肉桂醛在赋形剂中的最低浓度0.1ppm来试验，加入1∶60稀释度10白利糖度浓度的Yucca Shidigera皂草苷在第24小时产生100％死亡率。但是单独使用皂草苷有相同的效果。EtOH(95％)在24小时时杀死所有线虫。发现赋形剂对死亡的最小的作用是：2.5％时是72小时，5％时是108小时。

b.植物叶生物分析

对本发明制剂测试减少由根结，树皮，残根，和卷轴损伤线虫对葡萄藤侵袭的能力。用2％吐温80中1000ppm或3000ppm肉桂醛，商售抗线虫剂Namacar，或空白制剂处理葡萄园中的葡萄藤(Harmony根茎)。在处理时及在处理后30和60天测定线虫侵袭程度。结果见表10。

表10

肉桂醛对葡萄藤线虫侵袭的作用

每250cc土壤中的线虫数¹ 每克根上的线虫²

根结线虫树皮线虫残根根结卷轴损伤处理处理后天数处理后天数处理后天数处理后天数处理后天数

0 30 60 0 30 60 0 30 60 0 30 60 0 30 60未处理 2110.8 1360 276.8 117.5 151.5 179.6 39.8 10.8 44.5 393.2 130.8 25 0 0.02 01000ppm 498.8 872 204.5 47.2 171.2 1168 13.8 45 36.2 310.3 55.2 11.8 2.9 2.7 0肉桂醛^*3000 379.8 700 269.8 540.2 322.8 1127 0.8 8.8 43.5 24.4 125.6 1.0 0.56肉桂醛^*Nemacur 1008 568.8 139.8 181.5 3 17.8 36.5 72.4 36 0.4 0.08空白制剂 332.5 935 58.2 19 7.2 17.2 36.5 93.2 22.8 1.1^*在2％吐温中¹用筛-糖离心提取线虫。²洗净的根用雾气滋润5天以提取幼虫。

实施例8处理草莓红心(Phytophthora Fragariae，草莓疫霉)

草莓红心病是由真菌真菌疫霉Hickman引起的，其借助受侵害残留物上长期生长的卵孢子侵袭的受侵植物材料或土壤而传播。如下对含有肉桂醛和/或松柏醛的各种制剂进行试验。用草莓疫霉侵染的浸软的草莓根与受侵害的堆肥充分混合，使之分解4至6星期以产生用于处理的完全腐烂的接种物。将其分成1kg一堆，并与1500ml不同浓度的试验制剂混合。处理10分钟后，此堆肥在25mm筛上在流水式自来水下中洗至少5分钟，以去除试验试剂所有残存物。然后将堆肥装入9cm直径塑料小盆中，每盆栽种4株草莓植物。每次处理使用5个小盆。植物在控制环境条件的房中，于15℃和18小时日长下生长；堆肥保持潮湿以有利侵染。将小盆放于格子内以防止处理过程中有交叉感染。

9周后，将草莓植根洗净堆肥并将根纵向切开，检查侵染现象，观察红色中柱，和腐烂的或变为棕色的根。显微镜检查根碎片存在草莓疫霉卵孢子证明所有的侵染物。

实施例9

肉桂醛的稳定性测定有或没有抗氧化剂的存在下肉桂醛随时间的稳定性的方法

向有和没有加入维生素E的(1％CNMA浓度的生育酚)含有2％吐温80和6％碳酸氢钠的制剂中加入2％重量的肉桂醛。该溶液在50℃放置两周。在这两周期间以有规间隔用HPLC/UV分析该溶液的肉桂醛浓度并记录(即用高效液相色谱紫外检测)。

实施例10树脂蛀孔病

树脂蛀孔病是由真菌Fusarium subglutinans f.sp.pini引起的，其特征是受侵染的树木的芽，枝，暴露的根和树干表面有树脂状流出物。在1986年在加里弗尼亚第一次发现以来，树脂蛀孔病的宿主和地理范围大大增加。最近已经在墨西哥和日本发现了该病原体。

用不同浓度的肉桂醛和制剂进行了双盲生物分析。生物分析以抑制Fusarium subglutinans f.sp.pini的扩散性生长为基础。向200ml(已熔解的2％马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)中用吸量管加入8ml制剂(浓度未知)，将此混合物散布于5个塑料陪替氏皿(25ml皿)中。对四个皿中的每一个在其中央用从fusarium subglutinans f.sp.pini生长的PDA培养基中移取的琼脂栓(分离物SL-1，UCB)接种，而第五个皿未被接种，作为对照物。对于每一种肉桂醛制剂重复这些步骤。作为正对照物，初加有5ppm苯菌灵的四个PDA皿如所述被接种；负对照物是用F.subglutinans接种的四个未补加的PDA皿。所有已接种的和未接种的皿在18℃孵育5天，然后测定菌落直径。

表11给出该生物分析的菌落直径粗略平均值，表12比较有和没有皂草苷(0.86ml Yucca schidegira提取物，10°白利糖度)的各种浓度的CNMA对菌落直径的影响。

表11Fusarium subglutinans f.sp.pini的扩散性生长

(平均数据)^*

处理菌落直径(cm)PDA(未修正的) 4.03810ppm CNMA 4.363100ppm CNMA 4.238100ppm CNMA+皂草苷 4.300戊二醛2％ 3.6635,000ppm CNMA+皂草苷 2.91310ppm CNMA+皂草苷 3.600H2O 3.7382,500ppm CNMA 3.5132,500ppm CNMA+皂草苷 3.600皂草苷 4.1385,000 CNMA 2.908空白制剂 4.38012,500 CNMA+皂草苷 0.00025,000 CNMA 0.0005ppm苯菌灵(正对照物) 0.00012,500ppm CNMA 0.00025,000 CNMA+皂草苷 0.000

表12F.subglutinans f.sp.pini的扩散性生长

处理

PGXL

PGXL CNMA+皂草苷(.86ml)ppm 菌落直径(cm) 菌落直径(cm)10 4.36 3.60100 4.24 4.302,500 3.51 3.605,000 2.91 2.9112,500 0 025,000 0 0对照物菌落直径(cm)2％戊二醛 3.66H₂O 3.745ppm苯菌灵 0PDA(未修正的) 4.04

实施例11用肉桂醛和用吐温80和/或NaHCO₃处理玉米根蠕虫植物叶生物分析

植物在陶土7.5mm小盆中在温室中生长。用玉米植物进行玉米根蠕虫试验。当植物长至3叶期时，用60只特定的节肢动物侵袭(重复6次)。使玉米根蠕虫定居并取食。用含有100至2000ppm，或0.1至2g/l浓度的试验制剂的制剂对植物喷洒至流溢(大约5ml)，将植物用塑料罩披盖以防止制剂接触土壤。用试验制剂喷洒植物后第3，5和7天，测定蠕虫死亡率，并与只用水和/或空白制剂喷洒的植物上蠕虫的死亡率相比较。

实施例12用肉桂醛和用吐温80和/或NaHCO₃处理俄罗斯小麦蚜虫植物叶生物分析

植物在陶土7.5mm小盆中在温室中生长。用小麦植物(Kansas品种)对俄罗斯小麦蚜虫进行试验。当植物长至3叶期时，用60只特定节肢动物侵染(重复6次)。使昆虫定居并取食。用含有100至10000ppm，或0.1至10g/l浓度试验制剂的制剂对植物喷洒至流溢(大约5ml)。植物披盖上塑料罩以防止制剂接触土壤。在用试验化合物喷洒植物后第36小时，5天，和第7天，测定昆虫的死亡率，并与只用水和/或空白制剂喷洒的植物上昆虫的死亡率相比较。

实施例13用肉桂醛和用吐温80和/或NaHCO₃处理缨翅目

植物在陶土7.5mm小盆中在温室中生长。用各种品种的玫瑰植物对蚜虫进行试验。当植物长至3叶期时，用60只特定节肢动物侵染(重复6次)。使昆虫定居并取食。用含有100至10000ppm，或0.1至10g/l浓度试验制剂的制剂对植物喷洒至流溢(大约5m1)。将植物披盖上塑料罩以防止制剂接触土壤。用试验制剂对植物喷施后36小时，5天和7天时测定昆虫死亡率，并与只用水和/或空白制剂喷洒的植物上的昆虫死亡率相比较。

实施例14对草皮藻类侵害的处理

草皮藻类侵害最常严重地发生于经营草皮(例如高尔夫场)。使控制藻类侵害很困难。应用一小块受害草皮进行试验藻类侵害控制的实验。用5种试验制剂和一种空白制剂处理受害草皮，重复5次。在第2，第3和第5周评价处理效果。

实施例15用肉桂醛处理瓜蚜植物叶生物分析

如下进行对瓜蚜(Aphis gossypii Glover)的处理。使用菊花(C.morifolum)进行瓜蚜植物叶生物分析。植物在装有栽培土壤的7.5mm小盆中在温室中生长。使开花植物遭受虫害，并对每株植物事先计量群体大小，并计算每片叶的平均蚜虫蛹数。用含有1000ppm，3000ppm和10000ppm浓度肉桂醛的水溶液制剂对植物喷洒至流溢(大约5ml)，负对照物只含有水。 36小时后测定施用了试验制剂的叶上的昆虫数，并与只喷洒了负对照物的叶上的昆虫数相比较。与预先记数的平均大约60只昆虫相比，对于每一种肉桂醛浓度，测定的每叶平均蚜蛹少于10只。参见表13。

实施例16处理晚疫病(Phytophthora infectans)

晚疫病(Late Blight)影响蕃茄，马铃薯，茄子，和其它薯类植物：当真菌孢子在温和温度期间落在湿的植物表面上时，开始发生晚疫病。用马铃薯籽苗在温室中进行试验控制phytophthora infestans的实验。用病原体分离物在温室中对植物喷洒接种。在接种前或接种后处理植物，在第2和第3周评估处理效果。

表13

用肉桂醛处理瓜蚜制剂

每叶蚜蛹平均数CNMA(ppm)1,000 6±33,000 4±310,000 1±1对照H₂O 33±11预先计数 60^*CNMA＝H₂O中的肉桂醛(ppm)

实施例17

处理胡蜂科昆虫

为测定该制剂的接触活性，直接对试验昆虫喷施该制剂。移取处理昆虫并放于末处理陪替氏皿或管瓶中。试验了5种制剂和一种空白制剂，对于每种制剂和昆虫重复5次。在24和48小时记数死亡昆虫数。

实施例18

处理Dermoptera-欧洲蠼螋(Fofticula aureculatia)

为了测定该制剂的接触活性，直接对试验蠼螋喷施本制剂。移取处理过的昆虫并放入未处理的陪替氏皿或管瓶中。试验使用了5种制剂和一种空白制剂，和一种负对照物(水)，对于每种制剂重复5次。在24和48小时记数死亡蠼螋数。

实施例19肉桂醛和α-己基肉桂醛的残留活性

两种不同实验表明肉桂醛(CNMA)和α-己基肉桂醛(AHCNMA)有残留活性。在第一种实验中，将2ml两种浓度的CNMA(0.3和1％)喷洒在滤纸上(Whatman)。作为负对照，也将2ml水喷洒在滤纸上。24小时后，将2ml水喷洒在处理和对照滤纸上，然后干燥30分钟。大约引入了30只蓟马昆虫(Frankliniella occidentalis，苜蓿蓟马。1小时后观察F.occidentalis数。对于每次处理计算平均死亡率。

72小时后，翻动处理滤纸，只对负对照滤纸和用1％CNMA处理过的滤纸喷洒2ml水，并使干燥30分钟。向两个处理过的滤纸引入大约30只蓟马，并观察1小时后死亡的F.cocidentalis数，并对每次处理计算平均死亡率。用α-己基肉桂醛进行类似分析。与未再水化的滤纸相比，随时间的进行，再水化滤纸的平均死亡率较高。这些实验证明再水化作用在接触蓟马的处理过的滤纸的持续致死作用中起作用。连续暴露试验

为了进一步测定CNMA和AHCNMA的残留活性，使昆虫宿居在两片有代表性的表面。用玻璃代表无孔表面，用滤纸代表有孔表面。向滤纸皿(9cm)直径的底部加入2ml每种活性成分五种不同浓度的制剂。作为对照，在试验前使沉积物干燥24小时。在实验第7，14，28和56天间隔时，用2ml水将一套皿和滤纸再水化，而平行的一套未被水化。然后使昆虫持续地限制在沉积物处，并有序地记录由沉积物杀死的昆虫数。如果沉积物在48小时间没有杀死昆虫，这些处理就不用再进行研究了。

实施例20

苜蓿蓟马

评估了CNMA制剂抗苜蓿蓟马，Frankliniella occidentalis的剂量-致死率关系。三种不同剂量水平的CNMA制剂与只用水处理的情况相比较。用含有小型玫瑰叶的500ml通风的纸板内实验区进行试验。F.occidentalis种群居留在菊花上，小型玫瑰是用于研究的蓟马的来源(U.C.Davis，Deportment of Entomogy)。用实验室喷雾塔喷施三种活性成分剂量(0.1，0.3和1.0％)，校正到田间喷雾相当于每英亩用所需剂量的113L。重复4次(每次处理有4种观察值)，并比较各剂量。对于每次试验，处理纸片受到处理并保持在室温下。观察每次处理F.occidentalis随时间的平均死亡率，并计算平均死亡率。表14给出了平均死亡率处理数据。

实施例21处理长角叶甲(Diabrotica Longicornis/D.virgifaris)

这些玉米根蠕虫是北美玉米最具破坏性的昆虫害虫。在处理前用玉米根蠕虫侵袭来自Hebraska大学的栽于10cm直径小盆中的温室玉米植物。在喷洒药物时，将植物小盆置于塑料袋中，从而使从叶喷洒流下来的化学物质不浸入土壤中。用普通一升容积喷雾瓶喷洒至流溢。使植物在室外空气风干后再返回温室。此后以周为时间间隔，从盆混合物中分离出根，并估计全部根蠕虫口数。

表14肉桂醛(CNMA)浓度对蓟马随时间的影响¹时间² 平均蓟马死亡率A³ B C D1615 0.79 0.26 0.13 01645 0.82 0.28 0.17 01715 0.78 0.28 0.17 01845 0.84 0.37 0.19 02215 0.84 0.40 0.25 01/向小容器中加入Whatmans纸加玫瑰叶。

每次处理用2ml。在加入活蓟马前等5分钟。2/记录给样品时间。3/A＝1.0％CNMAB＝0.3％CNMAC＝0.1％CNMAD＝对照物(只有水)

实施例22控制棉铃象甲(Anthonomus grandis Boheman)

为了测定本制剂的接触活性，直接对棉铃象甲喷施本制剂。移取处理过的昆虫并置于无菌的未处理的陪替氏皿或管瓶中。在试验处理中使用5种制剂和一种空白制剂。每种制剂重复5次试验。在24和48小时时计数死亡棉铃象甲数。

实施例23

收获后处理剪下的花1.处理剪下的花，使其在花瓶中的寿命延长

使用有表面活性剂的肉桂醛和α-己基肉桂醛的四种制剂的两种浓度评估延长收获后剪下的花在花瓶中的寿命的效力。对剪下的玫瑰试验对细菌和生物孢塞的收获后控制。将50枝刚剪摘的花分成处理和对照组(负对照和正对照)。负对照物是平行试验使用的去离子水，正对照物是Oasis^TM花保鲜剂。将各个处理过的或未处理的花置于有无菌瓶衬的Platex240ml小瓶中。在三周内对花的质量评级：茎直度，茎强度，花大小，瓶中寿命，成熟均匀性。所有级别都是产业可接受标准。2.对剪下的花收获后控制灰色葡萄孢(Botrytis cinerea)

由Botrytis cinerea Pers：Fr.引起的葡萄孢花期枯萎病是对于温室生长的玫瑰以及很多其它供剪花用植物和葡萄的一种分布广泛且具破坏力的病害。将玫瑰花(Rosa Hybrid L.)浸入处理溶液2-3秒，然后轻轻抖动去除多余的溶液并使风干。然后用分生孢子悬浮液(B.cinerea)用chromist喷雾装置(Gelman Science，Ann Arbor，MI)对花喷雾至流溢。未接种的花用去离子水喷洒，监测自然感染。接种后，将玫瑰置于2℃的潮湿的贮存室中。接种后贮存7天后从室中取出玫瑰，并以每株花产生的损伤数来确定病害发生的数量。

接着，在模拟消费者的环境下，在21℃，每天用冷-白荧光灯(PAR＝32μ E.M-2.S-1)照射12小时，进行10天对玫瑰的评估(花瓶期寿命评估)。每天记录鲜重和目测观察。在10天期间如果B.Cinerea浸化了整个容器，使其破坏了茎，或者引起花瓣脱落，则放弃该玫瑰。

实施例24控制苹果蠹蛾，Cydia pomonella：不同苹果蠹蛾生长期对类黄酮醛的灵敏性

三种生长期的苹果蠹蛾在田间大致通过接触或表面处理用杀昆虫剂处理：进入果实前的成虫，卵和新生幼虫。为优化田间施用的时间，研究出这些生长期的灵敏性曲线。

A.卵的灵敏性

1.残留毒性：

在Potter喷雾塔中用不同浓度类黄酮醛制剂处理条状粘附性塑料片(5×10cm)。残留物干燥后使处理过的塑料长片暴露于盒中的10-15对蠹蛾，使其产卵。24至48小时后，取出带卵的长片，保持25℃和60-70％相对湿度，在卵已在未处理的对照物中孵化以后评估卵的死亡率。该试验也可以用天然底物进行，以测定果实(苹果)或叶上的毒性。

2.表面毒性：

在Potter喷雾塔中用不同浓度的类黄酮醛制剂处理塑料长片或果实(苹果)上的卵。如上评估卵的死亡率。用幼卵(白色阶段)和接近孵化的卵(黑头阶段)进行试验。

B.新生幼虫的灵敏性

使用Riedl等((1986)Agric.Ecosyst.Enuiron.16：189-202)描述的幼虫实验。在Potter喷雾塔中用不同浓度的类黄酮醛制剂处理苹果。小明胶盒用蜂蜡固定在处理过的果实表面。然后将一个新生幼虫放到一个明胶小盒中。载有关入盒中的幼虫的苹果在25℃和60-70％相对湿度下保存。7天后，取出小盒，评估幼虫死亡率和对果实的伤害(进入，刺进)。

用塑料陪替氏皿分析也能试验对新生幼虫的接触活性。小陪替氏皿的内表面在喷雾塔中被处理。在各种生长期间将幼虫暴露给残留物，然后转移到未处理的人工喂食的小杯中。10天后测定死亡率。

C.对成虫的毒性和亚致死作用

在喷雾塔中用不同浓度的醛处理CO2麻醉的成虫。将处理过的雌雄对蛾放在小产卵盒中。比较处理过的和未处理的成虫产生的卵的生长。另外，每24小时观察处理过的和未处理的成虫死亡率，直到所有蛾死亡。

实施例25

控制San Jose Scale

为了测定类黄酮醛制剂的接触活性，直接对试验介壳虫喷施制剂。移取处理过的昆虫放入无菌的未处理过的陪替氏皿或管瓶中。在试验处理中使用五种制剂浓度和一种空白制剂，每个试验重复5次。在24和48小时计数死亡昆虫数。

实施例26

控制粉蚧

为了测定类黄酮醛制剂的接触活性，直接对粉蚧喷施本制剂。移取处理过的昆虫放入无菌的未处理过的陪替氏皿或管形瓶中。在试验处理中使用五种制剂浓度和一种空白制剂，以于每种制剂重复五次试验。在24和48小时计数死亡昆虫数。

实施例27含肉桂醛和皂草苷制剂的植物毒性和生物测定

A.植物毒性试验

对三种温室植物进行植物毒性试验，以测定用皂草苷作为表面活性助剂代替多乙氧基醚(例如吐温)与CNMA的互容性。下面总结了测定结果：

1.Mini玫瑰(Sunburst)

用三种处理应用的每一种处理四株盆栽的minirose植物(Sunburst)：0.5％CNMA加0.05％皂草苷，0.25％CNMA加0.025％皂草苷和只有水的对照物。在实验室中用喷雾塔对植物喷洒，所有植物喷洒至流溢。喷洒后，对植物观察五天。

2.菊花

用0.5％CNMA加0.05％皂草苷，0.25％CNMA加0.025％皂草苷，或只用水对照物处理三株盆栽菊花的每一株。如上所述对植物喷洒。五天观察期后，在叶或花瓣上没有发现植物毒性，证明这些比例对于应用来说是安全的。

3.一品红

用0.5％CNMA加0.05％皂草苷，0.25％CNMA加0.025％皂草苷，或只用水对照物处理两株盆栽一品红的每一株。五天观察期后，高施用比例(0.5％CNMA，0.05％皂草苷)新长的叶上观察到植物毒性。较低比例(0.25％CNMA，0.025％皂草苷)新长的叶上没有观察到症状，表明较低比例对于应用是安全的。

B.害虫生物测定

1.棉红蜘蛛

将被大约相等数目的棉红蜘蛛侵染的玫瑰叶置于底部放有Whatman纸的陪替氏皿中来测定棉红蜘蛛。对于三种处理的每一种，对于有棉红蜘蛛的四个陪替氏皿，对叶的两面喷施本制剂：0.5％CNMA加0.05％皂草苷，0.25％CNMA加0.025％皂草苷，和只有水的对照物。使处理过的棉红蜘蛛放置24小时，然后数一数成活棉红蜘蛛数并记录。结果如下：对照陪替氏皿(只用水)，53.25±15.57(平均值±SE)；0.25％CNMA，6.75±1.18；0.5％CNMA，0.75±0.48。这些结果表明CNMA加皂草苷对于直接喷施应用具有高的抗棉红蜘蛛效力。

2.苜蓿蓟马

将被大约相等数目蓟马侵染的玫瑰叶置于底部放有Whatman纸的陪替氏皿中来测定蓟马。对于三种处理的每一种，对有蓟马的四个陪替氏皿，对叶的两面喷施：0.5％CNMA加0.05％皂草苷，0.25％CNMA加0.025％皂草苷和只有水的对照物。使处理过的蓟马放置6小时，然后数一数死亡的蓟马数并记录。结果如下：对照陪替氏皿(只用水)，1.4％±0.85％(平均值±SE)；0.25％CNMA，53.2％±11.8；和0.5％CNMA，87.2％±2.79。这些结果表明，CNMA加皂草苷对于直接喷施应用有高度抗蓟马效力。

3.瓜蚜

使用整株的未开化的盆栽菊花植物测定瓜蚜。每种处理方案处理了两株植物，取两片叶作样品，一片叶来自植物顶部，一片叶来自植物底部，来测定活的和死的瓜蚜数。使用的三种处理方案是：1.0％CNMA加0.5％皂草苷，0.5％CNMA加0.25％皂草苷，和只有0.5％皂草苷。对整株植物喷药使叶的正面和底面部接受了药剂。结果以蚜虫死亡比例表示。结果如下：对照植物(只用0.5％皂草苷)，14.8％±4.5；0.5％CNMA 48.3±16.1；1.0％CNMA 72.0％±11.2。这些结果表明CNMA在直接施用情况下能高度杀死蚜虫。

实施例28控制草皮核盘菌属元点病材料和方法

在Texas Agricultural Experiment Station-Dallas，Texas的苗圃草地上测定病害严重度数据。苇草草地由沙/泥土混合物(90∶10)组成。草地保持在0.4cm刈整高度，中等肥力和日照射量。在田间接种前大约2星期通过使S.homoecarpa在高压灭菌的黑麦种上的强毒分离物生长而制备种菌(SH-03)。在一随机区组设计中选择地块，重复三次，大小为2.5×18ft(45ft²)。以大约20/ft²的密度手工播种感染的黑麦种子。以一周为时间间隔田间施用肉桂醛制剂A，B，和C，共施用4周(表15)。但是因为草皮植物毒性反应，将制剂D只施用1次。在田间接种感染黑麦种子之前施用制剂A，B，C和D。使用CO₂压力喷雾器(30psi)，喷施体积为7加仑/1000ft²。接种后对实验地块全面浇水，不要刈草，使真菌定居。每一实验的接种区盖以塑料薄膜以保持高湿度以利于加快病害的发展。接种后两天通过目测真菌菌丝体自感染的黑麦种上的生长而评价病害(0-4最大值)。每周也记录一次所有田间地块表现的目测病害等级，从最初施药3周半开始，持续到最后施药后第4天。记录地块中自然病害发生的等级(0＝植物毒性；4＝没有病害)，也记录任何制剂的使用引起的植物毒性；0＝植物毒性，1＝严重病害，2＝中等病害，3＝轻微病害，4＝无病害。将数据用SASANOVA程序进行ANOVA分析，以评价处理方法的统计含义(1)。当测定到不同结果时，用Duncan多范围比较试验(p＞.05)得处理的平均值。

表15

制剂Turf Key

CNMA¹ T80²A 1.0 0.2B 0.5 0.1C 0.1 0.1D 2.0 0.3¹CNMA＝肉桂醛(％)。²T80＝吐温80(％)。结论

使用两种不同方法评估处理地块元点病的抑制情况。评估方法包括1)自然病害突发方法，和2)田间接种方法。田间接种技术被认为是病害压力的严重形式。进行田间接种至大约病害的自然状况，考虑到自然病害突发感染的自然接种输入。

使用田间接种法评估杀真菌剂Daconil 2787。使用该方法每日接种，连续10天，施用杀真菌剂后检测8天杀真菌剂。该项实验测定气候条件和培植条件如肥力水平，草地剪切情况，包括剪刈高度和频度等怎样快或慢地对杀真菌喷雾方案施以“非”的影响。

对于两种评价方法，与未处理的对照面积相比较，观察到用所有试验制剂(A，B，C和D)的病害控制。对元点病自然突发的控制

在用于评估自然病害抑制的试验地块中观察所有试验制剂对元点病病害的控制。实验评估期始终在未处理对照地块发现严重病害压力。用肉桂醛制剂D处理给出最初的植物毒性反应，这由应用处理48小时内出现的整个叶片轻微变黄的症状所证实。在评估的每一日期，试验制剂肉桂醛制剂A，B，C和D对病害的控制要比未处理的对照地块要好。对人工接种后发生的元点病的控制

观察所有用于评估人工接种试验地块的试验肉桂醛制剂对元点病的控制(参见表16)。实验始终，未处理的接种的对照地块给出严重病害等级，接种后48小时自接种点的平均菌丝体生长为2.0cm直径或更大。肉桂醛制剂D证明了元点病的控制，但其应用是不持续的以避免对实验苇草草地的任何永久性植物毒性损伤。出人意料的是11月8日后评估的结果受天气变冷的影响。32次每周平均病害等级处理的统计释析表明试验制剂A，B和C比未处理对照物优越，且在不冷气候日期极少发生害病。制剂A，B和C处理在所有四个观察日所有统计结果相同。

上述结果表明，试验制剂A，B和C在田间地块接种条件下，在存在自然病害突发的地方，对抗元点病叶枯萎有效。对于控制元点病自然入侵的另外的观察也证明所有四种试验制剂A，B，C和D控制病害。这些结果出人意料地给出肉桂醛制剂控制元点病病害的水平和持久性。

表16

对于“Penncross”苇草草地上核盘菌元点病的

制剂草皮施药时间间隔和病害控制测定

制剂^a，e7gal/1000ft²	施药间隔^b(天数)	病害等级(0-4max)^c，d第1周第2周第3周第4周
制剂^a，e7gal/1000ft²	施药间隔^b(天数)	病害等级(0-4max)^c，d第1周第2周第3周第4周				ABCD未处理检查	一周一周一周1X	1.9bcd1.0d2.0bc----3.0a	2.1cde2.3e2.5cde2.7cd3.5a	1.3bc1.4ab1.4ab----1.4ab	3.0ab3.0ab3.3a----3.5a

a/使用手动喷杆，用CO₂压力喷雾器30psi，每周一次进行喷药。b/所有施药都是每周一次，只有制剂D除外，其由于草皮植物毒性而只施药一次。c/以直观的等级将病害观测分为等级0-4；0＝无病害，1＝真菌开始生长，2＝真菌生长0.5cm，3＝真菌生长出1cm，4＝真菌生长出＞1cm。d/后面接有相同字母的每一栏内的平均值不是明显不同的(p＞0.05；Duncans New Multiple Range Test)。e/对于制剂情况参见表15

实施例29

地草皮腐霉属枯萎病的控制

用环境舱研究测定病害严重度数据，从位于Texas AgriculturalExperiment Station-Dallas，Texas的苇草草地取一块草皮(7cm直径)进行研究。该苇草草地由沙/泥土(90∶10)组成，并保持在0.4cm剪刈高度，中度肥力和日照射，在随机地块设计中选定地块，重复三次，大小为2.5×13ft(32.5ft²)。用田间地块(7cm直径)对环境舱接种前4天施用肉桂醛制剂A，B，C和D(表15)和正对照物Aleiette^TM(4oz)。用CO₂加压的喷雾器(30psi)施加制剂，以根据厂商说明的比例以7加仑/1000ft²的体积施药。

菌种P#24在无菌水琼脂上生长3天用于环境舱的研究。环境舱研究使用3次用在水琼脂上生长的病原体P#24接种的苇草块。每一苇草块用含病原体的1cm水琼脂孢塞在其中央接种。在病害测定之前苇草块放入光照入的环境舱中，在28℃保持4天。对草块每日浇水保证最佳病害压力所需的高湿度环境。4天后对环境舱研究进行病害测定，通过菌丝体扩散(cm，直径)来确定病害传播。

使用SAS ANOVA程序将数据进行ANOVA分析，以评估处理方法的统计结果。如果检测到明显不同，则用Duncan多范围比较试验(p＞0.05)来释析处理平均值。每一种肉桂醛制剂A，B，C和D在环境舱中都控制了腐霉属枯萎病(表17)。相反，未处理的接种的对照物在实验始终都有严重病害等级，接种后48小时自接种点的平均菌丝体生长出5.0cm或更大(表17)。一次施用肉桂醛制剂D呈现出对处理过的苇草的植物毒性，有叶子变黄的症状且阻碍生长，因此只施用一次制剂D。

上述结果表明肉桂醛制剂A，B和C在处理后有效4周。这些结果出人意料地给出了病害控制的水平和持久性，特别是与在四星期研究期间每周喷施标准杀真菌剂Aliette和oz的情况相比较的时候。

表17

对于“Penncross”苇草草地上环境舱接种的

腐霉枯萎病的制剂草皮施药时间间隔和病害控制测定

制剂^a，c7gal/1000ft²	施药间隔^b(天数)	病害扩散(cm)^c，d第1周第2周第3周第4周
制剂^a，c7gal/1000ft²	施药间隔^b(天数)	病害扩散(cm)^c，d第1周第2周第3周第4周				ABCDAliette 4.0oz未处理检查	一周一周一周1X	3.8bc4.5bc4.0bc----4.0bc5.9a	4.3cdef5.0abc3.8f5.5a4.2def4.9abcd	4.7bc5.0bc4.0c----4.8bc6.5ab	4.6abc4.6abc3.6bcde----4.8abc6.1a

a/使用手动喷杆，用CO₂加压的喷雾器(30psi)进行喷药。b/所有应用都是每周喷药一次，只有ProGuard D除外，其因为有草皮植物毒性反应而只喷一次。c/以直观的0-4等级将在以cm记的方圆7cm直径大小的草皮块中测得的病害观察分为等绿；0＝无病害，1＝真菌开始生长，2＝真菌生长0.5cm，3＝真菌长出1cm，4＝真菌长出＞1cm。d/后面接有相同字母的每一栏内的平均值不是明显不同(p＞0.05)；Duncans New Multiple Range Test)。e/制剂组成参见表15。

实施例30

对草皮丝核菌枯萎病的控制

在Texas Agricultural Experiment Station-Dallas，Texas的苗圃草地上测定病害严重性数据。苇草草地由砂/泥土混合物(90∶10)组成。草地保持在0.4cm剪刈高度，中等肥力和日照量。在田间接种前大约5天使茄属丝核菌(Rhizoctonia solani)在高压灭菌的黑麦种上的强毒分离物生长而制备菌种(R#31)。在一随机区组设计中选择地块，重复三次，大小为2.5×18ft(45ft²)。以大约20粒/ft²的密度手工播种感染的黑麦种。开始田间施周每种杀真菌剂并持续3周。根据厂商说明确定Daconil 6.0oz正对照物的喷施间隔。肉桂醛A，B，C和D制剂(参见表15)是每周施用一次(只有D是共施用一次)，而Daconil6.0oz是每14天施用一次。所有制剂是在田间接种感染黑麦种之前4天施用。用CO2加压的喷雾器(30psi)对实验区全面浇水，不要刈草，使真菌定居。每一实验的接种区盖以塑料薄膜以保证高湿度以利于加快病害发展。

接种后两天，通过目测真菌菌丝体自感染的黑麦种上生长而进行病害测定(0-4最大值)；0＝无病害，1＝菌丝体开始生长，2＝0.5cm生长，3＝1cm生长，4＝＞1cm的生长。用SAS ANOVA程度使数据进行ANOVA分析以评价处理方法的统计结果。如果检测到不同，则用Duncan多范围比较试验(p＞0.05)释析处理平均值。

观察用所有试验肉桂醛制剂在用于病害抑制评估的接种试验小区中对丝核菌枯萎病的控制(参见表18)。未处理的接种的对照物在实验始终都显现严重的病害等级。接种后48小时自接种点生长出的平均菌丝体大小为2.8cm直径或更大。一次施用制剂D后观察到植物毒性，因此其施药是不连续的。

上面的结果证明制剂B和C无植物毒性，并且在接种田间试验中，其有与Daconil 6oz可比的控制苇草丝核菌枯萎病的活性。这些结果出人意料地给出观察到的制剂B和C控制病害的水平和持久性，其至少与Danonil 6.0oz相当。

表18

对于“Penncross”苇草丝核菌枯萎病的

制剂草皮施药间隔和病害控制测定

制剂^a，e7gal/1000ft²	施药间隔^b(天数)	病害等级(0-4max)^c，d第1周第2周第3周第4周
制剂^a，e7gal/1000ft²	施药间隔^b(天数)	病害等级(0-4max)^c，d第1周第2周第3周第4周				Daconil 6ozABCD未接种检查	14天V7天7天7天7天^*	1.3bcd1.2bcde1.5bcde1.5bcde2.8a	1.8bcd2.9abc2.5def2.6def3.0abc3.1a	1.9gh2.8a1.8bc2.0bc2.2b3.0a	2.0bc2.4ab2.1bc2.5ab2.4ab3.0a

a/用手动喷杆用CO₂加压的喷雾器(30psi)进行喷药。b/以7天间隔在第7天施药，共施药4次。以14天间隔在第14天施药，共施药2次。^*指处理对草皮有植物毒性，只施药一次。c/以直观的0-4等级将病害测定分为等级；0＝无病害，1＝真菌开始生长，2＝真菌长出0.5cm，3＝真菌长出1cm，4＝真菌长出＞1cm。d/后面接有相同字母的每一栏中的平均值不是明显不同的(p＞0.05；Duncans New Multiple Range Test)。e/每制剂组成参见表15。

实施例31在转基因植物中大量生产类黄酮醛

从产生肉桂醛的植物组织中制备20μg聚腺苷酸化RNA，并合成出cDNA。其中一部分克隆到λ-ZAP II载体(这是一种可商购的克隆载体)中，用寡核苷酸探针筛选至少500000个重组体，所用探针从由基因库中的克隆的CA4H和CAD的保守序列设计，或者从来自想要的宿主植物的纯化的蛋白质的肽序列设计。选择强杂交克隆，并用来再筛选cDNA库。对所得克隆进行序列测定，以使在有义或反义方面向植物表达弹夹引入适合的基因序列。根据已公开的方法，通过直接转化将反义和有义构建引入到根癌土壤杆菌LBA 4404中。用已经完整建立起的公开的方法(Horsch等(1985)，科学，227：1229-1231转化烟草(N.tabacum变种Samsun)叶片。包含CA4H或CAD构建的植物用PCR或杂交鉴定，并挑选出来用作进一步分析。

来自转化的各未转化的对照植物的植物材料被用来用已经完整建立起的公开的方法测定CA4H和CAD酶活性。CA4H或CAD的活性已减小到少于对照植物活性的20％的植物被挑选出来用于进一步分析。挑选的具有低CA4H活性的植物与具有低CAD活性的植物杂交，且用PCR选择遗传两个基因构建的子代。用标准的公开的方法对有抑制的CA4H和抑制的CAD活性的植物进行类黄酮产生的分析。

实施例32

在微生物体系中产生类黄酮醛

用从六周龄烟草茎中提取的RNA产生cDNA库。制备20μg聚腺苷酸化RNA并合成出cDNA。其中一部分亚克隆到λ-ZAPII载体(一种可商购克隆载体)中。用寡核苷酸探针筛选至少500000个重组体，所用探针由用Goffner等，植物生理(1994)106：625中的方法从六周龄烟草茎组织中纯化出的CCoAr蛋白的肽序列设计。挑选强杂交克隆，并用来再次筛选cDNA库。对所得克隆序列测定，使能鉴别全长cDNA插入物并将合适的CCoAR基因序列引入到酵母表达载体pMTL 8110中(Faulkner等，(1994)，基因，143：13-20)。类似地将类酵母红冬孢(Rhodosporidium toruloides苯丙氨酸解氨酶的编码序列(PAL；基因库位置RHDPAL)和欧芹4-香豆酯：CoAl连接酶的编码序列(4CL；基因库位置PC 4CL 1AA)引入到相同的酵母表达载体中。用PAL，4CL和CCoAR构建，用已建立的公开的方法通过电穿孔转化啤酒糖酵母(Saccharomyces cerevisiae)菌株(Becker和Guarente，酶学方法(Methods in Enzymology)194：182-187，1991；Simon，(1993)，酶学方法217：478-483)。在没有亮氨酸的少量培养基上选择转化产物。用PCR鉴定携有所有三种基因构建的转化产物菌株，并挑选出来用作进一步分析。

用转化的和未转化的对照菌株的提取物，用已完整建立的公开的分析方法，测定PAL，4CL和CCoAR酶活性。选择那些PAL，4CL和CCoAR活性明显大于在对照菌株中检测到的背景活性的菌株进行进一步的分析。用标准的公开的方法对选择的菌株分析类黄酮醛的产生。选择那些产生明显量的肉桂醛的菌株作为优化的发酵条件。

实施例33构建产生HCA的酵母菌株

如下构建含有肉桂醛(CNMA)生物合成所必需的酶的酵母菌株，如啤酒糖酵母。首先按照Faulkener等(1994)基因143：13020的说明将菌株经基因工程处理为高水平表达PAL。植物肉桂酸4-羟基酶基因也被操作连接到合适的调控信号上，并插入到菌株中(参见Urban等，(1994)，欧洲生物化学杂志(Eur.J.Biochem.222：843-850)。通过应用标准基因克隆技术获得肉桂醛CoA还原酶(CCoAR)来分离用作探针(从已经由几种植物源中纯化和部分表征的纯化的蛋白质部分氨基酸序列衍生的核苷酸序列)的cDNA克隆。该CCoAR基因也连接到在酵母中可操作的调控信号上，并插入到酵母菌株中。

然后如下克隆催化CNMA至HCA转化的酶的编码基因。在酵母表达载体中用从稻植物得到的mRNA构建cDNA库。然后将该cDNA库转化到事先已构建的酵母菌株中，并用存在于表达载体上的选择标记选择转化产物。

为了鉴定那些产生HCA的酵母菌株，将转化物转移到含有酵母生长培养琼脂的微量滴定孔中。然后将微量滴定平板放在含有蚤的舱中，蚤对HCA敏感而对CNMA不敏感。将来自与含未处理对照酵母菌株的孔相比有统计学上明显更多死亡蚤数目的孔中的酵母菌株稀释，并再放入微量滴定板上，此值重复筛选过程，得到自单一转化酵母细胞衍生的菌落。

对具有提高的蚤死亡率的单一细胞衍生的菌落，通过气液层析(GLC)，使用一个30米非极性聚二甲基硅氧烷毛细柱(例如HP-1，Hewlett-Packard，或SPB-1，Sapelco)和火焰电离检测器，分析HCA的产生。使用氦气作为载体气体(8ml/分钟)，柱温大约240℃，(E)-顺式异构体(主成分)保留时间大约为6.0分钟，(Z)-反式异构体(小成分)保留时间大约为6.3分钟。

从产生HCA的菌落分离表达载体DNA，并对插入物测序，得到核苷酸序列，并推导出催化CNMA转化为HCA的酶的氨基酸序列。

实施例34构建产生HCA的转基因植物

通过转座子突变从稻植物克隆催化肉桂醛(CNMA)转化为α-己基肉桂醛(HCA)的酶的编码基因。用克隆载体转化稻原生质体，该克隆载体含有插入到潮霉素B磷酸转移酶(hyg B)基因中从而破坏hyg B基因编码序列的玉米AC转座子因子(参见，例如，Izawa等，(1991)Mol.Gen.Genet.227：391-396；Murai等，(1991)，核酸研究(Nucl.Acids.Res.19：617-622)。转化的原生质体置于含有足够量的潮霉素B以防止非潮霉素抗性原生质体再生的生长培养基琼脂板上。其中AC转座子因子已从hyg B基因跳跃到稻基因组中的原生质体对潮霉素B有抗性，因此再生生成胼胝体组织。植物从潮霉素抗性胼胝体组织再生(参见Izawa等，上文)。

如前面实施例说明的对再生的稻植物分析存在或不存在CNMA和HCA。产生CNMA但不产生HCA的植物可能带有插入到HCA生物合成基因中的AC转座子。从CNMA⁺/HCA^-突变体分离基因组DNA并与标记的转座子DNA杂交。与转座子DNA探针杂交的片段亚克隆到合适的克隆载体用于制图和序列分析。该HCA生物合成基因鉴定为因插入已知序列的AC转座子而被破坏的开放读框。该基因的一个片段被用来探测分离相应的cDNA的cDNA库。

HCA生物合成酶的cDNA被插入到表达载体中，与强表达的启动子操作连接，该启动子在植物中起作用，该植物希望对害虫有抗性。该表达载体用本领域技术人员已知的转化方法被插入到所述植物中。按照上文实施例33的说明对转基因植物分析HCA的产生和/或排斥力或抗害虫的除害虫活性。

这些实施例证明本发明类黄酮醛制剂和方法对于处理和/或防止植物被多种害虫生物侵袭是有用的。例如，这些实验证明，这些制剂能有效处理玫瑰白粉病，锈病，和蚜虫侵害，有效处理葡萄的葡萄瘤蚜侵害(该制剂在葡萄瘤蚜的卵、蛹和成虫生长期有效)。这些制剂也显示出抗害虫的有效性，如棉红蜘蛛，蚜虫，白蝇，线虫，和蓟马。该制剂也对抗真菌病原体有效，如Fusarium subglutinans，灰色葡萄孢，对草皮病原体有效，如核盘菌元点病，丝核菌枯萎病，腐霉菌枯萎病。

本说明书中提到的所有出版物和专利申请表明与本发明有关的本领域技术人员的水平。尽管每一出版物或专利申请具体地个别地指明作为参考，所有出版物和专利申请在这里同样引入作为参考。

已经完整地描述了本发明，对于本领域技术人员来说显然可以在不超出后面的权利要求书的精神或范围的情况下作出很多变化和改变。

权利要求书

按照条约第19条的修改

1.一种控制病原生物体在植物上生长的方法，其中对植物表面提供有效病原生物体生长控制量的至少一种根据下面结构式的化合物

其是R₁代表-CHO，R₂代表H，-OH或含1-10个碳原子的有机取代基，R₃代表H，-O-CH₃或含1-10个碳原子的有机取代基，和R₄代表H或含1-10个碳原子的有机取代基，其中所述量对所述植物无植物毒性，并且其中除式(2)化合物外没有其它的抗氧化剂。

2.权利要求1的方法，其中所述植物与含有0.01-50g/L一种或几种权利要求1的化合物的水制剂相接触。

3.权利要求1或2的方法，其中R₁代表-CHO，R₂代表-OH或含1-10个碳原子的有机取代基，R₃代表O-CH₃或含1-10个碳原子的有机取代基，和R₄代表H或含1-10个碳原子的有机取代基。

4.权利要求1或2的方法，其中R₁代表-CHO，R₂和R₃代表H，和R₄代表-(CH₂)₅-CH₃。

5.根据前面的权利要求的任一方法，其中植物物种是玫瑰，葡萄，苹果，桃，草皮，松树或棉花物种。

6.权利要求1-5的任一方法，其中病原生物体包括至少一种真菌，细菌，线虫，藻，昆虫和蜘蛛纲动物。

7.权利要求5和6的方法，其中病原生物体是引起白粉病，锈病，葡萄孢，pitch canker，核盘菌元点病，腐霉菌枯萎病，和丝核菌枯萎病的真菌。

8.权利要求1-6的任一方法，其中病原生物体是至少一种蚜虫，叶蝉，卷叶虫，茎和鳞茎线虫，葡萄瘤蚜，兰-绿草藻，苹果蠹蛾和蓟马。

9.权利要求1-3，和5-8的任一方法，其中至少一种化合物是肉桂醛或松柏醛。

10.一种用于前述权利要求的任一方法中的含水组合物，含有0.0150g/L一种或几种下式化合物：其中R₁代表-CHO，R₂代表H，-OH或含1-10个碳原子的有机取代基，R₃代表H，-O-CH₃或含1-10个碳原子的有机取代基，R₄代表氢或含1-10个碳原子的有机取代基，所述组合物除该结构化合物外不含其它抗氧化剂。

11.权利要求10的组合物，其中R₁代表-CHO，R₂和R₃代表H，R₄代表-(CH₂)₅-CH₃。

12.权利要求10的组合物，其中R₁代表-CHO，R₂代表-OH或含1-10个碳原子的有机取代基，R₃代表-O-CH₃或含1-10个碳原子的有机取代基，R₄代表-H或含1-10个碳原子的有机取代基。

13.权利要求10的组合物，其中至少一种化合物是肉桂醛或松柏醛。

14.权利要求10-13的任一组合物控制病原生物体在植物上生长的用途。

15.一种诱发植物对病原生物体抗性的方法，其中所述植物与一定量的至少一种下式化合物接触：其中R₁代表-CHO，R₂代表H，-OH或含1-10个碳原子的有机取代基，R₃代表H，-O-CH₃或含1-10个碳原子的有机取代基，R₄代表H或含1-10个碳原子的有机取代基，其中所述量足以诱发对所述病原生物体的系统抗性。

16.一种用于权利要求15的方法中的组合物，包括含有至少一种下式化合物的含水制剂：

其中R₁代表-CHO，R₂代表H，-OH或含1-10个碳原子的有机取代基，R₃代表H，-O-CH₃或含有1-10个碳原子的有机取代基，R₄代表H或含1-10个碳原子的有机取代基，其中该化合物的含量是诱发所述系统抗性的有效量，而且所述制剂除该式化合物外没有其它抗氧化剂。

17.权利要求10-13或16的组合物在诱发植物抗病原生物体系统抗性中的用途。

18.一种含有病原体生长调节量的一种或几种下式化合物的组合物：

其中R₁代表-CHO，R₂代表H，-OH或含有1-10个碳原子的有机取代基，R₃代表H，-O-CH₃或含1-10个碳原子的有机取代基，R₄代表H或含1-10个碳原子的有机取代基，该组合物含有农业可容性载体，所述组合物提供大约70％或更高的抗至少一种定居在一种或几种植物表面上的病原生物体的平均病害抗性。

19.权利要求18的组合物，其中所述农业可容性载体是一种含水乳液。

20.权利要求19的组合物，其中所述乳液是用足够量的一种表面活性剂来生成所述乳液而制备的。

21.权利要求20的组合物，其中所述表面活性剂是皂草苷。

22.权利要求10-13，16或18的组合物提供大约70％或更高抗至少一种定居在一种或几种植物表面上的病原生物体的平均病害抗性的用途。

23.用权利要求1-9的任一方法获得的基本上无真菌的种子和植物。

24.通过使所述种子和植物与权利要求18的组合物接触而得到的基本上没有真菌的种子和植物。

25.一种筛选植物病原体对于下式真菌生长调节自然产物的敏感性的方法：

其中R₁代表-CHO，R₂代表H，-OH，或含1-10碳原子的有机取代基，R₃代表H，-O-CH₃或含1-10个碳原子的有机取代基，R₄代表H或含1-10个碳原子的有机取代基，所述方法包括：

使所述植物病原体与真菌生长调节自然产物接触；并测定所述天然产物作为真菌病原体的效力。

Claims

1.一种控制病原生物体在植物上生长的方法，其中对植物表面提供病原生物体生长控制有效量的至少一种根据下面结构式的化合物

其是R₁代表-CHO，R₂代表H，-OH或含1-10个碳原子的有机取代基，R₃代表H，-O-CH₃或含1-10个碳原子的有机取代基，其中所述量对所述植物无植物毒性，并且其中除式(I)化合物外没有其它的抗氧化剂。

10.一种用于前述权利要求的任一方法中的含水组合物，含有0.01-50g/L一种或几种下式化合物：

其中R₁代表-CHO，R₂代表H，-OH或含1-10个碳原子的有机取代基，R₃代表H，-O-CH₃或含1-10个碳原子的有机取代基，R₄代表氢或含1-10个碳原子的有机取代基，所述组合物除该结构化合物外不含其它抗氧化剂。

12.权利要求10的组合物，其中R₁代表-CHO，R₂代表-OH或含1-10个碳原子的有机取代基， R₃代表-O-CH₃或含1-10个碳原子的有机取代基，R₄代表-H或含1-10个碳原子的有机取代基。

21.权利要求20的组合物，其中所述表面活性剂是皂草苷。