CN107406836A - 核酸构造、含有核酸构造的植物以及将核酸构造用于提高植物抗病虫害和改良植物单萜特性的用途 - Google Patents

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Abstract

本发明公开一种核酸构造，用以编码香叶醇合成酶(GS)、香叶醇还原酶(GR)、香叶醇脱氢酶(GD)及/或柠檬醛还原酶(CR)。以及本发明公开一种含有所述核酸构造的植物。

Description

核酸构造、含有核酸构造的植物以及将核酸构造用于提高植 物抗病虫害和改良植物单萜特性的用途
技术领域及背景技术
本发明在其一些实施例中是有关于一种核酸结构，特别是有关于一种含有所述核酸构造用于提高植物抗病虫害和改良植物单萜特性的植物及其用途。
桉树种是商业上用于工业目的的重要的木本植物，例如生产精油、木浆、木屑、木炭和生质燃料。病虫害例如瘿蜂瘿姬小蜂、红树胶木瓜木虱、赤桉木虱及桉突眼蝽，已被鉴定并对澳大利亚、非洲、南美和北美、中国、印度和地中海等自然种群以及栽培的桉树构成威胁。例如，赤桉木虱侵染的症状包括叶片损失和芽的干燥，而严重的侵染可能导致树木完全落叶和死亡。控制桉树害虫感染的努力包括分离天然抗性植物和尝试天敌；然而，这些努力有限或没有成功。
单萜是植物挥发性化合物，它们是植物精油的主要成分。许多单萜有助于植物的芳香形态，有些则用作天然香料来向食品和化妆品添加风味和香味。单萜在花授粉和对生物或非生物胁迫的反应中也扮演重要的生态和生理作用[Gutenshon等人，植物学报(2013)75：351-363；杨等人，代谢工程(2011)13：414-425]。已知单萜在植物中作为天然杀虫剂，并被有效地用于控制收获前和采收后的植物性害虫，以及用于叮咬苍蝇和家庭及花园害虫的驱虫剂[Regnault-Roger等人，昆虫学年鉴，(2012)57：405-24]。
然而使单萜生产的生物合成途径的架构对于所有植物物种而言无处不在，但单萜的组成物在物种甚至品种之间经常有显着差异，因此导致挥发性化合物的多样性以及草药和水果中的香气和风味。
这种多样性似乎主要源自生物合成途径中关键酶的具体组成和表现、单萜合成酶和其他下游修饰酶。所有的萜类化合物是来自通用的多个五碳结构单元异戊烯焦磷酸(IPP)及其异构体的二甲基烯丙基焦磷酸(或二甲基烯丙基二磷酸酯，DMAPP)。
香叶基焦磷酸(又名香叶基二磷酸，GPP)，为大多数单萜的前驱物，通过GPP合成酶(GPPS)在质体中以DMAPP和IPP合成[Ohara等人，植物生物技术期刊，(2010)8：28-37]。
在过去的几年中，来自不同物种的大量单萜合成酶基因已被表征，其中许多被用于植物的代谢工程。通过相应的萜类合成酶基因的异源表达，各种植物已经实现了目标单萜的生产和增加释放，例如西红柿果实中的香叶醇[Davidovich-Rikanati等人，2007]；阿拉伯芥中的沉香醇[Aharoni等人，植物细胞(2003)15：2866-2884]；在烟草中的b-蒎烯和g-萜品烯[Lucker等人，植物生理，(2004)134：510-519]；；和薄荷中的柠檬烯[Diemer等人，植物生理学与生物化学(2001)39：603–614。]。
香叶醇合成酶(GS)、香叶醇还原酶(GR)、香叶醇脱氢酶(GD)导致在大多数桉树物种中以最小或不可检测的量发现单萜的生产。GS将GPP转化为香叶醇，GR将香叶醇转化为香茅醇，GD将香叶醇转化为香叶醛，以及香茅醇转化为香茅醛(图1)。
香叶醇、香叶醛、橙花醛、香茅醇和香茅醛已被发现赋予不同作物对病虫害抗性[参考例如Chen and Viljoen，南非植物学杂志，(2010)76：643-651]。然而，通过在玉米中异源表达GS来增加香叶醇和香叶醛的含量对真菌抗性没有影响[杨等人，代谢工程，(2011)13：414-425]。虽然在大多数桉树种中不存在，但是香茅醛是柠檬尤加利中的主要精油(约70％)，具有与桉树属的显着不同的一单萜特性。已被证明，柠檬尤加利(Corymbiacitriodora)对某些害虫具有抗性，如瘿蜂(Leptocybe invasa)、赤桉木虱(Glycaspisbrimblecombei)以及象鼻虫(Gonipterus scutellatus)[参考例如Batish等人，Z自然研究期刊、(2006)61(7-8)：465-71和Thu等人，亚洲科学期刊，35(2009)：113-117]。
其他相关技术
美国专利号US8124375；
美国专利号US6515202；
美国专利号US7985567；
美国专利号US8329438；
美国专利号US6291745；
国际专利申请公开号WO2000036081A2；
Iijima等人[生物化学与生物物理档案，(2006)448:141–149]；
Stott等人[生物化学学报，(1993)268(9):6097-6106]；
Yuan等人[生物勘探期刊，(2011)1:108–111]；以及
Lange and Ahkami等人[植物生物技术期刊，(2013)11:169–196]。
发明内容
根据本发明一些实施例的一目的，本发明提供一种基因改造的木本植物，包含：一异源核酸序列，用以编码选自于由下述所组成的群组中的至少一种多肽：香叶醇合成酶(GS)、香叶醇还原酶(GR)、香叶醇脱氢酶(GD)以及柠檬醛还原酶(CR)。
根据本发明一些实施例的一目的，本发明提供一种核酸构造，包含：一核酸序列，用以编码选自于由下述所组成的群组中的至少一种多肽：香叶醇合成酶(GS)、香叶醇还原酶(GR)、香叶醇脱氢酶(GD)以及柠檬醛还原酶(CR)；以及至少一顺式作用调节组件，用于引导所述核酸序列的表现。
根据本发明一些实施例的一目的，本发明提供一种核酸构造系统，包含：至少两核酸构造，用以表现至少两种多肽，其中所述至少两种多肽选自于由下述所组成的群组中：香叶醇合成酶(GS)、香叶醇还原酶(GR)、香叶醇脱氢酶(GD)以及柠檬醛还原酶(CR)。
根据本发明一些实施例的一目的，本发明提供一种核酸构造，包含：一核酸序列，用以编码香叶醇脱氢酶(GD)；以及一顺式作用调节组件用于，引导所述核酸序列在一植物细胞中的表现。
根据本发明一些实施例的一目的，本发明提供一种核酸构造，包含：一核酸序列，用以编码柠檬醛还原酶(CR)；以及一顺式作用调节组件，用于引导所述核酸序列在一植物细胞中的表现；其中所述核酸序列更包含一叶绿体前导肽。
根据本发明一些实施例的一目的，本发明提供一种核酸构造，包含：一核酸序列，用以编码香叶醇还原酶(GR)；以及一顺式作用调节组件用于引导所述核酸序列在一植物细胞中的表现；其中所述核酸序列不具有过氧化物酶体羧基端三氨基酸信号(SRL)，并且具有一叶绿体前导肽。
根据本发明一些实施例的一目的，本发明提供一种分离的细胞，包含：如本发明的一些实施例所述的核酸构造。
根据本发明一些实施例的一目的，本发明提供一种分离的植物细胞，包含：如本发明的一些实施例所述的核酸构造。
根据本发明一些实施例的一目的，本发明提供一种基因改造的木本植物，包含：如本发明的一些实施例所述的核酸构造。
根据本发明一些实施例的一目的，本发明提供一种杀虫剂组合物，包含：如本发明的一些实施例所述的核酸构造或核酸构造系统作为一活性成分；以及一农业上可接受的载体或稀释剂。
根据本发明一些实施例的一目的，本发明提供一种用于增强一木本植物对病虫害感染的抗性的方法，所述方法包含：在所述木本植物中表现选自于由下述所组成的群组中的至少一种重组多肽：香叶醇合成酶(GS)、香叶醇还原酶(GR)、香叶醇脱氢酶(GD)以及柠檬醛还原酶(CR)，从而提高所述木本植物对病虫害感染的抗性。
根据本发明一些实施例的一目的，本发明提供一种用于增加一木本植物中的香叶醇、香叶酸、香精、香茅醇、香茅醛和柠檬油中的至少一种的含量的方法，所述方法包含：在所述木本植物中表现选自于由下述所组成的群组中的至少一种重组多肽：香叶醇合成酶(GS)、香叶醇还原酶(GR)、香叶醇脱氢酶(GD)以及柠檬醛还原酶(CR)，从而增加木本植物中的香叶醇、香叶醛、橙花醛、香茅醇、香茅醛和柠檬醛中的至少一种的含量。
根据本发明一些实施例的一目的，本发明提供一种生产油的方法，所述方法包含：提供如本发明的一些实施例所述的基因改造的木本植物；以及从所述木本植物萃取油，从而产生所述油。
根据本发明一些实施例，所述方法更包含：在所述萃取后从所述油中纯化一单萜成分。
根据本发明一些实施例的一目的，本发明提供一种油，通过如本发明的一些实施例所述的方法被生产。
根据本发明一些实施例的一目的，本发明提供一种桉树油，与一非基因改造的桉树的一桉树油相比，包含一增加含量的至少一种单萜，所述单萜选自于由下述所组成的群组：香叶醇、香叶醛、橙花醛、香茅醇、香茅醛和柠檬醛。
根据本发明一些实施例，与一非基因改造的桉树的一桉树油相比，包含一降低含量的至少一种单萜，所述单萜不选自于由下述所组成的群组：香叶醇、香叶醛、橙花醛、香茅醇、香茅醛和柠檬醛。
根据本发明一些实施例的一目的，本发明提供一种用于产生选自于由香叶醇、香叶醛、橙花醛、香茅醇、香茅醛和柠檬醛所组成的群组中的至少一种单萜的方法，所述方法包含：提供如本发明的一些实施例所述的基因改造的木本植物；以及从所述木本植物中萃取所述单萜，从而产生选自于由下述所组成的群组的至少一种单萜：香叶醇、香叶醛、橙花醛、香茅醇、香茅醛和柠檬醛。
根据本发明一些实施例，所述顺式作用调节组件包括一启动子序列。
根据本发明一些实施例，所述启动子序列为一组成型启动子。
根据本发明一些实施例，所述组成型启动子选自于由下述所组成的群组：花椰菜花叶病毒(CaMV)35S启动子、玄参花叶病毒亚基因组转录(sgFiMV)启动子以及草莓镶脉病毒(SVBV)启动子。
根据本发明一些实施例，如本发明的一些实施例所述的基因改造的木本植物对病虫害具有抗性。
根据本发明一些实施例，所述单萜成分包含香叶醇、香叶醛、橙花醛、香茅醇、香茅醛和柠檬醛的至少一种。
根据本发明一些实施例，所述至少一种单萜包含香叶醇合成酶(GS)。
根据本发明一些实施例，所述至少一种单萜包含至少两种多肽。
根据本发明一些实施例，所述至少两种多肽包含香叶醇合成酶(GS)及香叶醇还原酶(GR)。
根据本发明一些实施例，所述至少两种多肽包含香叶醇合成酶(GS)及柠檬醛还原酶(CR)。
根据本发明一些实施例，述至少两种多肽包含香叶醇合成酶(GS)及香叶醇脱氢酶(GD)。
根据本发明一些实施例，所述至少两种多肽包含香叶醇合成酶(GS)、香叶醇还原酶(GR)及香叶醇脱氢酶(GD)。
根据本发明一些实施例，所述至少两种多肽包含香叶醇合成酶(GS)、香叶醇脱氢酶(GD)及柠檬醛还原酶(CR)。
根据本发明一些实施例，所述至少两种多肽包含香叶醇合成酶(GS)、香叶醇还原酶(GR)、香叶醇脱氢酶(GD)及柠檬醛还原酶(CR)。
根据本发明一些实施例，所述多肽更包含一叶绿体前导肽。
根据本发明一些实施例，所述植物为一木本植物。
根据本发明一些实施例，所述木本植物为桉树或白杨树。
根据本发明一些实施例，所述病虫害选自于由下述所组成的群组：赤桉木虱、桉突眼蝽、桉树枝瘿釉小蜂以及桉树釉小蜂。
根据本发明一些实施例，所述香叶醇合成酶(GS)的核酸序列包含SEQ ID NO：36至46。
根据本发明一些实施例，所述香叶醇还原酶(GR)的核酸序列包含SEQ ID NO：47至57、82、84、86、88或90。
根据本发明一些实施例，所述香叶醇脱氢酶(GD)的核酸序列包含SEQ ID NO：58至63。
根据本发明一些实施例，所述柠檬醛还原酶(CR)的核酸序列包含SEQ ID NO：80。
根据本发明一些实施例，所述香叶醇合成酶(GS)的氨基酸序列包含SEQ ID NO：1至12。
根据本发明一些实施例，所述香叶醇还原酶(GR)的氨基酸序列包含SEQ ID NO：13至29、81、83、85、87或89。
根据本发明一些实施例，所述香叶醇脱氢酶(GD)的氨基酸序列包含SEQ ID NO：30至35。
根据本发明一些实施例，所述柠檬醛还原酶(CR)的氨基酸序列包含SEQ ID NO：79。
除非另有定义，本文使用的所有技术及/或科学术语具有与本发明所属领域的普通技术人员通常理解的相同的含义。尽管类似于或等同于本文所描述的方法和材料可以用于实施或试验本发明的实施例、以下所描述的例示性的方法及/或材料。在发生冲突的情况下，专利说明书(包括定义)将受到限制。此外，材料、方法和实施例仅是说明性的，并非用以限制本发明。
附图说明
这里仅通过例示的方式参照附图来描述本发明的一些实施例。现在具体参考附图，应该强调的是，所示的细节是作为例示并且为了说明性地讨论本发明实施例的目的。在这方面，使用附图进行的描述对于本领域技术人员来说是显而易见的，可以得知如何实施本发明的实施例。
附图如下：
图1是根据本发明的一些实施例的一单萜改造途径的示意图，其示出了多个化合物和各自的酶(标记为灰色)。
图2是一示意图，示出自由选择实验用于测试香叶醇和香茅醛对在桉树抗性上对桉树釉小蜂感染的影响。每个笼子包含四个桉树树苗，每个树苗有10个盘连接到其分支，所述分支以香叶醇、香茅醇、桉树油对照组或矿物油对照组的其中一个进行处理。下一步，桉树釉小蜂被释放在笼子的中间。
图3是在自由选择实验设置下，在香叶醇、香茅醇、矿物油对照组或桉树油对照组存在下，用桉树釉小蜂感染桉树中每片叶子数目的长条图。多个长条根据每片叶子的虫瘿数量进行编码。*通过邓尼特测试确定，相比于矿物油对照组和桉树油对照组，p<0.05。
图4是根据本发明的一些实施例的表现构造的实例的示意图，其被转殖入垂尾桉(E.urophylla)与细叶桉(E.Tereticornis)的杂交植物中。
图5是一长条图，显示与野生型(WT)植物相比，具有构造C的垂尾桉(E.urophylla)与细叶桉(E.Tereticornis)的杂交植物的转殖(编码香叶醇合成酶(GS)、香叶醇还原酶(GR)、香叶醇脱氢酶(GD)、项目POC-1-9A)，造成一修饰后的单萜特性。显示了从野生型(WT)植物和基因改造植物的叶片提取的桉树油、α-蒎烯香叶醇，香叶醛(α柠檬醛)和橙花醛(β柠檬醛)的浓度。
图6是一长条图，显示表达香叶醇合成酶(GS)的桉树中的单萜特性(例如香叶醇合成酶(GS)转殖株系)。三个转殖项目(以A、B和C标记)通过GC-MS分析测试单萜特性。结果是三株植物(n＝3)的平均(长条表示SE)。
图7是一长条图，显示香叶醇合成酶(GS)的实时聚合酶链锁反应分析，以及香叶醇合成酶(GS)植物和野生型植物中的内源性单萜表现。与看家基因TEF相比，基因表现显示出一相对表现，在每个项目中，呈现三株植物的平均值(n＝3)。
图8是通过烯酸还原酶对具有活化的吸电子基团(EWG)的活性烯的不对称生物还原的示意图。吸电子基团(EWG)属于酮、醛、羧酸或酸酐、内酯、酰亚胺或硝基。
具体实施方式
本发明在其一些实施例中是有关于一种核酸结构及植物，包括它们及其用途用于提高植物抗病虫害和改良植物单萜特性的植物。
在详细说明本发明的至少一个实施例之前，应当理解的是本发明在其应用中不一定受到以下描述中的阐述或由实施例举例说明的细节的限制。本发明能够以其他实施例或以各种方式实施或执行。
桉树是商业上用于工业目的的重要的木本植物，例如生产精油、木浆、木屑、木炭和生质燃料。然而，病虫害侵袭是广泛的，对全球自然的和栽培种群的桉树构成真正的威胁。控制病虫害感染的努力包括分离天然抗性植物和尝试使用天敌。然而，这些努力效果有限或没有成功。
单萜-植物挥发性化合物是植物精油的主要成分，有助于植物的芳香性，并在花授粉和对生物或非生物胁迫的应对中发挥主要的生态和生理作用。也已知有几种单萜作为植物中的天然杀虫剂，并已被用作防虫剂例如蚊虫叮咬和为家庭和花园害虫驱虫剂。
在单萜的生物合成途径中的酶的组成和表现导致不同物种之间的单萜特性不同。因此，例如，在大多数桉树种中，发现单萜类化合物如香叶醇、香叶醛、橙花醛、香茅醇及/或香茅醛存在最小或检测不到的的含量。
在将本发明减少到可以实践的同时，本发明人试图重新建构桉树中的单萜合成途径，其有效地抗病虫害并导致油类组合物具有前所未有的性质。
因此，本发明人成功地异源表达了在桉树中的香叶醇合成酶(GS)、香叶醇合成酶(GS)加上香叶醇还原酶(GR)、香叶醇合成酶(GS)加上香叶醇还原酶(GR)加上香叶醇脱氢酶(GD)、香叶醇合成酶(GS)加上香叶醇脱氢酶(GD)以及香叶醇合成酶(GS)加上香叶醇脱氢酶(GD)再加上柠檬醛还原酶(CR)，并设法改变植物单萜特性，导致如上所述的在大多数桉树种中发现量少或不可检测并增强植物病害虫抗性的单萜的产生。
如下文和以下的实施例部分所示，本发明人已经表明用香叶醇或香茅醛处理显着增加了在自由选择实验设置中，桉树幼苗对桉树釉小蜂感染的抗性(实验例1，图2-图3)。接下来，多种酶例如香叶醇合成酶(GS)、香叶醇合成酶(GS)加上香叶醇还原酶(GR)、香叶醇合成酶(GS)加上香叶醇还原酶(GR)加上香叶醇脱氢酶(GD)、香叶醇合成酶(GS)加上香叶醇脱氢酶(GD)以及香叶醇合成酶(GS)加上香叶醇脱氢酶(GD)再加上柠檬醛还原酶(CR)的表现被复制到植物表达载体中并转殖入垂尾桉(E.urophylla)与细叶桉(E.Tereticornis)的杂交植物中(实验例2A-2C，图4)。香叶醇还原酶(GR)分别从单细胞生物体(例如酿酒酵母)和多细胞生物体(例如来自橡胶树、西红柿、阿拉伯芥、野蔷薇和桉树的植物)分别获得，如实施例2A和2B所示。此外，为了能够在细胞叶绿体中表现酶，从多肽的氨基酸序列中，例如香叶醇还原酶(GR)，去除了过氧化物酶体羧基端三氨基酸信号(SRL)，并加入了一叶绿体前导肽(如叶绿体CTP2，如SEQ ID NO：91所示)(实验例2B)。
基因改造植物表现出改良的单萜特性，具有提升的单萜含量，例如香叶醇、香叶醛和橙花醛(实验例3，图5)。再者，香叶醇合成酶(GS)在桉树中的表现被举例说明(实验例4，图7)，并导致香叶醇、顺式柠檬醛和反式柠檬醛单萜的显着生产(实验例4，图6)。此外，所述基因改造植物对于赤桉木虱、桉突眼蝽、桉树枝瘿釉小蜂以及桉树釉小蜂的感染更具有抗性(实验例5-7)。
因此，本发明教示香叶醇合成酶(GS)、香叶醇还原酶(GR)、香叶醇脱氢酶(GD、柠檬醛还原酶(CR)及其组合的异源表现可以被用于赋予病害虫抗性。这样的改造植物可以用于例如在木材工业中，树木的害虫侵害，诸如桉树，导致严重的年度损失，以及在依赖广泛植物栽培的其它工业中。或者或另外，香叶醇合成酶(GS)、香叶醇还原酶(GR)、香叶醇脱氢酶(GD、柠檬醛还原酶(CR)及其组合的异源表现可用于改变植物单萜特性，从而产生富含例如香叶醇、香叶醛、橙花醛、香茅醇及/或香茅醛。这样的油类可以用作例如驱虫剂，以及用于向食品和化妆品添加风味和香料的香味来源。
如本文所用术语"单萜"是指具有非线性支链的十碳架构的化合物。单萜化合物具有以头对尾方式连接的两个异戊二烯单元。术语"单萜"还指的是单萜衍生物和类似物，也被称为“单萜类化合物”。因此，单萜衍生物/类似物包括但不限于醇、酮、醛、醚、酸、不含氧官能基的烃。通常，单萜是挥发性化合物，它们可以通过与较大部分(例如糖残基)缀合来进一步修饰，如此通常使其不具挥发性。
单萜的非限制性实施例包括香叶醇、橙花醇、橙花醛、香叶醛、柠檬醛、香茅醇、香茅醛、柠檬烯，蒎烯、萜品烯、薄荷烷、香芹醇、芳樟醇、S-芳樟醇、黄樟油、肉桂酸、欧芹脑、百里酚、香芹酮、樟脑及其衍生物。关于单萜的结构和合成信息，参见科克-奥瑟化学技术百科全书，Mark等人，22：709-762 3d Ed(1983)，其教示整体通过引用并入本文。
如本文所用术语"香叶醇"也称为柠檬醇、乙醇香叶草酯、反式香叶醇，E-香叶醇，是指具有下列化学式的单萜：C10H18O，CAS编号：106-24-1，IUPAC命名：(反式)-3,7-二甲基-2,6-辛二烯-1-醇。
如本文所用术语"香叶醛"是指柠檬醛的E异构体，也称为柠檬醛A。
如本文所用术语"橙花醛"是指柠檬醛的Z异构体，也称为柠檬醛B。
如本文所用术语"柠檬醛"是指具有下列化学式的单萜：C10H16O，CAS编号：5392-40-5，IUPAC命名：3,7-二甲基-2,6-辛二烯醛。根据一实施例，柠檬醛是α柠檬醛(也称为香叶醛)或β柠檬醛(也称为橙花醛)。
如本文所用术语"香茅醇"是指具有下列化学式的单萜：C10H20O，CAS编号：106-22-9，IUPAC命名：3,7-二甲基辛-6-烯-1-醇。
如本文所用术语"香茅醛"也称为香芧油、3,7-二甲基-6-辛烯醛、6-辛烯醛、3,7-二甲基-2,3-二氢柠檬醛和香茅子，是指具有下列化学式的单萜：C10H18O，CAS编号：106-23-0，IUPAC命名：3,7-二甲基辛-6-烯-1-醛。
在单萜的生物合成途径中的酶的组成和表现导致不同物种之间的单萜特性不同。
因此，根据本发明的一目的，提供了可用于转殖入细胞的核酸构造，例如植物细胞，例如木本植物。
根据一实施例，核酸构造包含编码选自于由下述所组成的群组中的至少一种多肽的核酸序列：香叶醇合成酶(GS)、香叶醇还原酶(GR)、香叶醇脱氢酶(GD)以及柠檬醛还原酶(CR)；以及一顺式作用调节组件，用于引导所述核酸序列在例如多个植物细胞中的表现。
根据一具体实施例，所述核酸构造包含用以编码香叶醇脱氢酶(GD)；以及一顺式作用调节组件，用于引导所述核酸序列在例如一植物细胞中的表现。
根据一具体实施例，所述核酸构造包含一核酸序列，用以编码柠檬醛还原酶(CR)；以及一顺式作用调节组件，用于引导所述核酸序列在一植物细胞中的表现。根据一具体实施例，所述核酸序列更包含一叶绿体前导肽。
根据一具体实施例，所述核酸构造包含一核酸序列，用以编码香叶醇还原酶(GR)；以及一顺式作用调节组件用于引导所述核酸序列在一植物细胞中的表现，其中所述核酸序列不具有过氧化物酶体羧基端三氨基酸信号(SRL)。根据一具体实施例，所述核酸序列更包含一叶绿体前导肽。
根据一具体实施例，编码所述酶的核酸序列来自植物界。因此，编码香叶醇合成酶(GS)、香叶醇还原酶(GR)、香叶醇脱氢酶(GD)及/或柠檬醛还原酶(CR)的核酸序列可以衍生自植物。
根据一具体实施例，所述核酸构造包含一核酸序列，用以编码香叶醇还原酶(GR)；以及一顺式作用调节组件用于引导所述核酸序列在一植物细胞中的表现，其中编码所述酶的核酸序列来自植物界且所述核酸序列不具有过氧化物酶体羧基端三氨基酸信号(SRL)。根据一具体实施例，所述核酸序列更包含一叶绿体前导肽。
根据另一实施例，所述核酸构造包含一核酸序列，用以编码选自于由下述所组成的群组中的至少两种多肽：香叶醇合成酶(GS)、香叶醇还原酶(GR)、香叶醇脱氢酶(GD)以及柠檬醛还原酶(CR)；以及至少一顺式作用调节组件，用于引导所述核酸序列在例如一植物细胞中的表现。
根据另一实施例，所述核酸构造包含一核酸序列，用以编码香叶醇合成酶(GS)、香叶醇还原酶(GR)以及香叶醇脱氢酶(GD)；以及至少一顺式作用调节组件，用于引导所述核酸序列的表现。
根据另一实施例，所述核酸构造包含一核酸序列，用以编码香叶醇合成酶(GS)、香叶醇还原酶(GR)、香叶醇脱氢酶(GD)以及柠檬醛还原酶(CR)；以及至少一顺式作用调节组件，用于引导所述核酸序列的表现。
根据一具体实施例，所述核酸构造包含一核酸序列，用以编码香叶醇合成酶(GS)加上香叶醇还原酶(GR)；以及至少一顺式作用调节组件，用于引导所述核酸序列的表现。
根据一具体实施例，所述核酸构造包含一核酸序列，用以编码香叶醇脱氢酶(GD)加上香叶醇还原酶(GR)；以及至少一顺式作用调节组件，用于引导所述核酸序列的表现。
根据一具体实施例，所述核酸构造包含一核酸序列，用以编码香叶醇合成酶(GS)加上香叶醇脱氢酶(GD)；以及至少一顺式作用调节组件，用于引导所述核酸序列的表现。
根据一具体实施例，所述核酸构造包含一核酸序列，用以编码香叶醇合成酶(GS)加上柠檬醛还原酶(CR)；以及至少一顺式作用调节组件，用于引导所述核酸序列的表现。
根据一具体实施例，所述核酸构造包含一核酸序列，用以编码香叶醇还原酶(GR)加上柠檬醛还原酶(CR)；以及至少一顺式作用调节组件，用于引导所述核酸序列的表现。
根据一具体实施例，所述核酸构造包含一核酸序列，用以编码香叶醇脱氢酶(GD)加上柠檬醛还原酶(CR)；以及至少一顺式作用调节组件，用于引导所述核酸序列的表现。
根据一具体实施例，所述核酸构造包含一核酸序列，用以编码香叶醇合成酶(GS)加上香叶醇还原酶(GR)再加上香叶醇脱氢酶(GD)；以及至少一顺式作用调节组件，用于引导所述核酸序列的表现，例如在一植物细胞中。
根据一具体实施例，所述核酸构造包含一核酸序列，用以编码香叶醇合成酶(GS)加上香叶醇还原酶(GR)再加上柠檬醛还原酶(CR)；以及至少一顺式作用调节组件，用于引导所述核酸序列的表现，例如在一植物细胞中。
根据一具体实施例，所述核酸构造包含一核酸序列，用以编码香叶醇合成酶(GS)加上香叶醇脱氢酶(GD)再加上柠檬醛还原酶(CR)；以及至少一顺式作用调节组件，用于引导所述核酸序列的表现，例如在一植物细胞中。
根据一具体实施例，所述核酸构造包含一核酸序列，用以编码香叶醇还原酶(GR)加上香叶醇脱氢酶(GD)再加上柠檬醛还原酶(CR)；以及至少一顺式作用调节组件，用于引导所述核酸序列的表现，例如在一植物细胞中。
根据一具体实施例，所述核酸构造包含一核酸序列，用以编码香叶醇合成酶(GS)加上香叶醇还原酶(GR)加上香叶醇脱氢酶(GD)再加上柠檬醛还原酶(CR)；以及至少一顺式作用调节组件，用于引导所述核酸序列的表现，例如在一植物细胞中。
根据本发明的另一目的，本发明提供一种核酸构造系统，包含：至少两核酸构造，用以表现至少两种多肽，其中所述至少两种多肽选自于由下述所组成的群组中：香叶醇合成酶(GS)、香叶醇还原酶(GR)、香叶醇脱氢酶(GD)以及柠檬醛还原酶(CR)；以及至少一顺式作用调节组件，用于引导所述核酸序列的表现，例如在一植物细胞中。
根据一具体实施例，所述核酸构造系统包含：至少两核酸构造，用以表现香叶醇合成酶(GS)与香叶醇还原酶(GR)，各个香叶醇合成酶(GS)与香叶醇还原酶(GR)可操作地连接于一顺式作用调节组件，用于引导至少两种多肽在多个植物细胞中的表现。
根据一具体实施例，所述核酸构造系统包含：至少两核酸构造，用以表现香叶醇合成酶(GS)与香叶醇脱氢酶(GD)，各个香叶醇合成酶(GS)与香叶醇脱氢酶(GD)可操作地连接于一顺式作用调节组件，用于引导至少两种多肽在多个植物细胞中的表现。
根据一具体实施例，所述核酸构造系统包含：至少两核酸构造，用以表现香叶醇还原酶(GR)与香叶醇脱氢酶(GD)，各个香叶醇还原酶(GR)与香叶醇脱氢酶(GD)可操作地连接于一顺式作用调节组件，用于引导至少两种多肽在多个植物细胞中的表现。
根据一具体实施例，所述核酸构造系统包含：至少两核酸构造，用以表现香叶醇合成酶(GS)与柠檬醛还原酶(CR)，各个香叶醇合成酶(GS)与柠檬醛还原酶(CR)可操作地连接于一顺式作用调节组件，用于引导至少两种多肽在多个植物细胞中的表现。
根据一具体实施例，所述核酸构造系统包含：至少两核酸构造，用以表现香叶醇还原酶(GR)与柠檬醛还原酶(CR)，各个香叶醇还原酶(GR)与柠檬醛还原酶(CR)可操作地连接于一顺式作用调节组件，用于引导至少两种多肽在多个植物细胞中的表现。
根据一具体实施例，所述核酸构造系统包含：至少两核酸构造，用以表现香叶醇脱氢酶(GD)与柠檬醛还原酶(CR)，各个香叶醇脱氢酶(GD)与柠檬醛还原酶(CR)可操作地连接于一顺式作用调节组件，用于引导至少两种多肽在多个植物细胞中的表现。
根据一具体实施例，所述核酸构造系统包含：至少两(例如三)核酸构造，用以表现香叶醇合成酶(GS)、香叶醇还原酶(GR)及/或香叶醇脱氢酶(GD)，各个香叶醇合成酶(GS)、香叶醇还原酶(GR)及香叶醇脱氢酶(GD)可操作地连接于一顺式作用调节组件，用于引导至少两种多肽在多个植物细胞中的表现。
根据一具体实施例，所述核酸构造系统包含：至少两(例如三)核酸构造，用以表现香叶醇合成酶(GS)、香叶醇还原酶(GR)及/或柠檬醛还原酶(CR)，各个香叶醇合成酶(GS)、香叶醇还原酶(GR)及柠檬醛还原酶(CR)可操作地连接于一顺式作用调节组件，用于引导至少两种多肽在多个植物细胞中的表现。
根据一具体实施例，所述核酸构造系统包含：至少两(例如三)核酸构造，用以表现香叶醇合成酶(GS)、香叶醇脱氢酶(GD)及/或柠檬醛还原酶(CR)，各个香叶醇合成酶(GS)、香叶醇脱氢酶(GD)及柠檬醛还原酶(CR)可操作地连接于一顺式作用调节组件，用于引导至少两种多肽在多个植物细胞中的表现。
根据一具体实施例，所述核酸构造系统包含：至少两(例如三)核酸构造，用以表现香叶醇还原酶(GR)、香叶醇脱氢酶(GD)及/或柠檬醛还原酶(CR)，各个香叶醇还原酶(GR)、香叶醇脱氢酶(GD)及柠檬醛还原酶(CR)可操作地连接于一顺式作用调节组件，用于引导至少两种多肽在多个植物细胞中的表现。
根据一具体实施例，所述核酸构造系统包含：至少两(例如三、四)核酸构造，用以表现香叶醇合成酶(GS)、香叶醇还原酶(GR)、香叶醇脱氢酶(GD)及/或柠檬醛还原酶(CR)，各个香叶醇合成酶(GS)、香叶醇还原酶(GR)、香叶醇脱氢酶(GD)及柠檬醛还原酶(CR)可操作地连接于一顺式作用调节组件，用于引导至少两种多肽在多个植物细胞中的表现。
如上所述，本发明人已经表明，本文描述的包含编码所述酶的核酸序列的构造可以催化特异性单萜的产生，甚至在所述合成途径看似被抑制或不存在的植物中。
如本文所用术语"香叶醇合成酶(GS)"，EC编号为E.C.3.1.7.11，也称为二氢二苯基甘油二磷酸酶、香叶基焦磷酸焦磷酸酶、GES及CtGES，是指功能性香叶醇合成酶及其多个部分，其催化香叶醇由二烷基二氢呋喃(GDP)产生。根据多个具体实施例，香叶醇合成酶(GS)是NCBI登录号AAR11765(SEQ ID NO：1)和NCBI gi|75224312(SEQ ID NO：2)和gi|75251480(SEQ ID NO：3)中提供的罗勒(罗勒)香叶醇合成酶(GS)。根据多个具体实施例，香叶醇合成酶(GS)是NCBI gi|406780549(SEQ ID NO：4)、gi|406780547(SEQ ID NO：5)和gi|385211784(SEQ ID NO：6)中提供的油橄榄香叶醇合成酶(GS)。根据多个具体实施例，香叶醇合成酶(GS)是NCBI gi|301131134(SEQ ID NO：7)中提供的甜舌草香叶醇合成酶(GS)。根据其他多个具体实施例，香叶醇合成酶(GS)是NCBI gi|380513810(SEQ ID NO：8)中提供的长春花香叶醇合成酶(GS)。根据其它多个具体实施例，香叶醇合成酶(GS)是NCBI gi|618884964(SEQ ID NO：9)中提供的胡黄连香叶醇合成酶(GS)。根据其它多个具体实施例，香叶醇合成酶(GS)是NCBI gi|569344778(SEQ ID NO：10)中提供的缬草香叶醇合成酶(GS)。根据其它多个具体实施例，香叶醇合成酶(GS)是NCBI gi|313755452(SEQ ID NO：11)和gi|526118024(SEQ ID NO：12)中提供的葡萄子香叶醇合成酶(GS)。
如本文所用术语"香叶醇还原酶(GR)"，EC编号为E.C.3.1.7.11，也称为老黄酶2、OYE2、NADPH脱氢酶、烯酮还原酶2和ERED 2，是指能够从香叶醇催化生产香茅醇的功能性香叶醇还原酶(GR)及其部分。根据多个具体实施例，香叶醇还原酶(GR)是例如NCBI登录号Q03558(SEQ ID NO：13)和NCBI gi|6321973(SEQ ID NO：14)、gi|151944124(SEQ ID NO：15)，gi|45270462(SEQ ID NO：16)、gi|323308791(SEQ ID NO：17)、gi|584370807(SEQ IDNO：18)、gi|349578731(SEQ ID NO：19)、gi|584476449(SEQ ID NO：20)和gi|347803140(SEQ ID NO：21)中提供的酿酒酵母香叶醇还原酶(GR)。根据多个具体实施例，香叶醇还原酶(GR)是例如NCBI gi|347803126(SEQ ID NO:22)提供的清酒假丝酵母香叶醇还原酶(GR)。根据其它多个具体实施例，香叶醇还原酶(GR)是例如NCBI gi|347803128(SEQ IDNO：23)提供的少孢酵母香叶醇还原酶(GR)。根据其它多个具体实施例，香叶醇还原酶(GR)是例如NCBI gi|347803138(SEQ ID NO:24)提供的闹莫氏卡氏德巴利酵母香叶醇还原酶(GR)。根据其它多个具体实施例，香叶醇还原酶(GR)是例如NCBI gi|347803134(SEQ IDNO:25)提供的哈萨克斯坦斯坦巴氏酵母香叶醇还原酶(GR)。根据其它多个具体实施例，香叶醇还原酶(GR)是例如NCBI gi|347803132(SEQ ID NO:26)提供的Kazachstaniasolicola香叶醇还原酶(GR)。根据其它多个具体实施例，香叶醇还原酶(GR)是例如NCBI gi|347803136(SEQ ID NO:27)提供的Nakaseomyces bacillisporus香叶醇还原酶(GR)。根据其它多个具体实施例，香叶醇还原酶(GR)是例如NCBI gi|365760283(SEQ ID NO:28)提供的酿酒酵母和Saccharomyces kudriavzevii型酿酒酵母杂交的香叶醇还原酶(GR)。根据其它多个具体实施例，香叶醇还原酶(GR)是例如NCBI gi|401841420(SEQ ID NO:29)提供的kudriavzevii酵母香叶醇还原酶(GR)。根据其它多个具体实施例，香叶醇还原酶(GR)是如提供于UniProt Q4ZJ73(SEQ ID NO：81)，来自巴西三叶草(橡胶树)的12-氧代植物二烯酸还原酶。根据其它多个具体实施例，香叶醇还原酶(GR)是来自阿拉伯芥，如提供于UniProtQ9FUP0(SEQ ID NO：83)。根据其它多个具体实施例，香叶醇还原酶(GR)来自Soliumlycopersicum(西红柿)，如提供于UniProt Q9FEW9(SEQ ID NO：85)。根据其它多个具体实施例，香叶醇还原酶(GR)来自桉树，如提供于UniProt A0A059CML0(SEQ ID NO：87)。根据其它多个具体实施例，香叶醇还原酶(GR)来自野蔷薇，如提供于Transcriptom(doi：10.3389/fpls.2015.00249)(SEQ ID NO：89)。
如本文所用术语"香叶醇脱氢酶(GD)"，EC编号为EC No.1.1.1.183，也称为香茅醇脱氢酶、橙花醇脱氢酶和GEDH1，是指功能性香叶醇脱氢酶(GD)及其部分，其能够从香叶醇催化生成香叶醛以及从香茅醇催化生成香茅醛。根据多个具体实施例，香叶醇脱氢酶(GD)是如NCBI登录号Q2KNL6(SEQ ID NO：30)和NCBI gi|122200955(SEQ ID NO：31)和gi|389889215(SEQ ID NO：32)中提供的罗勒香叶醇脱氢酶(GD)。根据多个具体实施例，香叶醇脱氢酶(GD)是例如NCBI gi|427776200(SEQ ID NO：33)中提供的紫苏GS。根据其它多个具体实施例，香叶醇脱氢酶(GD)是如NCBI gi|427776198(SEQ ID NO：34)中提供的紫苏柠檬GS。根据其它多个具体实施例，香叶醇脱氢酶(GD)是例如NCBI gi|427776196(SEQ ID NO：35)中提供的紫苏子香叶醇脱氢酶(GD)。
如本文所用术语"柠檬醛还原酶(CR)"，也称为推定的氧化还原酶或烯酸还原酶，是指能够从柠檬醛催化产生香茅醛的功能性柠檬醛还原酶(CR)及其部分。根据多个具体实施例，柠檬醛还原酶(CR)来自如Q5FTL6(SEQ ID NO：79)中提供的氧化还原酶。
根据一具体实施例，香叶醇合成酶(GS)核酸序列包含选自SEQ ID NO：36-46的一核酸序列，或一核酸序列为至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％相同或同源于SEQ ID NO：36-46，并催化由香叶基二磷酸(GDP)产生香叶醇(也称为一功能性同源物)。
根据一具体实施例，香叶醇合成酶(GS)氨基酸序列包含选自SEQ ID NO：1-12的一氨基酸序列，或一氨基酸序列为至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％相同或同源于SEQ ID NO：1-12，并催化由二酰甘油二苯醚(GDP)产生香叶醇。
根据多个具体实施例，香叶醇还原酶(GR)核酸序列包含选自SEQ ID NO：47-57,82,84,86,88和90的一核酸序列，或者一核酸序列为至少60％、至少70％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％相同或同源于SEQ ID NO：47-57,82,84,86,88或90，并由香叶醇催化来生产香茅醇(也称为一功能性同源物)。
根据多个具体实施例，香叶醇还原酶(GR)氨基酸序列包含选自SEQ ID NO：13-29,81,83,85,87和89的一氨基酸序列，或一氨基酸序列为至少60％、至少70％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％相同或同源于SEQ ID NO：13-29,81,83,85,87或89，并由香叶醇催化来生产香茅醇。
根据多个具体实施例，香叶醇脱氢酶(GD)核酸序列包含一核酸序列选自于SEQ IDNO：58-63，或一核酸序列为至少60％、至少70％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％相同或同源于SEQ ID NO：58-63，并由香叶醇催化来生产香叶醛以及由香茅醇催化来生产香茅醛(也称为一功能性同源物)。
根据多个具体实施例，香叶醇脱氢酶(GD)氨基酸序列包含一氨基酸序列选自于SEQ ID NO：30-35，或一氨基酸序列为至少60％、至少70％、至少80％、至少85％、至少90％，至少95％，至少98％，至少99％或100％相同或同源于SEQ ID NO：30-35，并由香叶醇催化来生产香叶醛以及由香茅醇催化来生产香茅醛。
根据多个具体实施例，柠檬醛还原酶(CR)核酸序列包含如SEQ ID NO：80所示的一核酸序列，或一核酸序列为至少60％、至少70％、至少80％，至少85％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％相同或同源于SEQ ID NO：80，并从柠檬醛催化产生香茅醛(也称为一功能性同源物)。
根据多个具体实施例，柠檬醛还原酶(CR)氨基酸序列包含包含如SEQ ID NO：79所示的一氨基酸序列，或一氨基酸序列为至少60％、至少70％、至少80％，至少85％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％相同或同源于SEQ ID NO：80，并从柠檬醛催化产生香茅醛。
可以使用任何蛋白质或核酸序列比对算法(例如Blast、ClustalW和MUSCLE)来确定序列同一性或同源性，例如使用预设参数。
如本文所用术语"多肽"和"蛋白质"可互换使用。
如本文所用术语"至少一种多肽"指一种、两种、三种或全部四种多肽，例如香叶醇合成酶(GS)、香叶醇还原酶(GR)、香叶醇脱氢酶(GD)、柠檬醛还原酶(CR)、香叶醇合成酶(GS)加香叶醇还原酶(GR)、香叶醇合成酶(GS)加香叶醇脱氢酶(GD)、香叶醇合成酶(GS)加柠檬醛还原酶(CR)、香叶醇还原酶(GR)加香叶醇脱氢酶(GD)、香叶醇还原酶(GR)加柠檬醛还原酶(CR)、香叶醇脱氢酶(GD)加柠檬醛还原酶(CR)、香叶醇合成酶(GS)加香叶醇还原酶(GR)加香叶醇脱氢酶(GD)、香叶醇合成酶(GS)加香叶醇还原酶(GR)加柠檬醛还原酶(CR)、香叶醇合成酶(GS)加香叶醇脱氢酶(GD)加柠檬醛还原酶(CR)、香叶醇还原酶(GR)加香叶醇脱氢酶(GD)加柠檬醛还原酶(CR)或香叶醇合成酶(GS)加香叶醇还原酶(GR)加香叶醇脱氢酶(GD)加柠檬醛还原酶(CR)。
根据一具体实施例，所述至少一种多肽包括香叶醇合成酶(GS)。
根据一具体实施例，所述至少一种多肽包括香叶醇还原酶(GR)。
根据一具体实施例，所述至少一种多肽包括香叶醇脱氢酶(GD)。
根据一具体实施例，所述至少一种多肽包括柠檬醛还原酶(CR)。
根据另外具体实施例，所述至少一种多肽包含至少两种多肽。
如本文所用术语"至少两种多肽"指两种、三种或全部四种多肽，例如香叶醇合成酶(GS)加香叶醇还原酶(GR)、香叶醇合成酶(GS)加香叶醇脱氢酶(GD)、香叶醇合成酶(GS)加柠檬醛还原酶(CR)、香叶醇还原酶(GR)加香叶醇脱氢酶(GD)、香叶醇还原酶(GR)加柠檬醛还原酶(CR)、香叶醇脱氢酶(GD)加柠檬醛还原酶(CR)、香叶醇合成酶(GS)加香叶醇还原酶(GR)加香叶醇脱氢酶(GD)、香叶醇合成酶(GS)加香叶醇还原酶(GR)加柠檬醛还原酶(CR)、香叶醇合成酶(GS)加香叶醇脱氢酶(GD)加柠檬醛还原酶(CR)、香叶醇还原酶(GR)加香叶醇脱氢酶(GD)加柠檬醛还原酶(CR)或香叶醇合成酶(GS)加香叶醇还原酶(GR)加香叶醇脱氢酶(GD)加柠檬醛还原酶(CR)。
根据一具体实施例，所述至少两种多肽包括香叶醇合成酶(GS)及香叶醇还原酶(GR)。
根据一具体实施例，所述至少两种多肽包括香叶醇合成酶(GS)及香叶醇脱氢酶(GD)。
根据一具体实施例，所述至少两种多肽包括香叶醇合成酶(GS)及柠檬醛还原酶(CR)。
根据一具体实施例，所述至少两种多肽包括香叶醇还原酶(GR)及香叶醇脱氢酶(GD)。
根据一具体实施例，所述至少两种多肽包括香叶醇还原酶(GR)及柠檬醛还原酶(CR)。
根据一具体实施例，所述至少两种多肽包括香叶醇脱氢酶(GD)及柠檬醛还原酶(CR)。
根据另外具体实施例，所述至少两种多肽包括三种多肽。例如香叶醇合成酶(GS)、香叶醇还原酶(GR)及香叶醇脱氢酶(GD)。
根据另外具体实施例，所述至少两种多肽包括三种多肽。例如香叶醇合成酶(GS)、香叶醇还原酶(GR)及柠檬醛还原酶(CR)。根据另外具体实施例，所述至少两种多肽包括三种多肽。例如香叶醇合成酶(GS)、香叶醇脱氢酶(GD)及柠檬醛还原酶(CR)。
根据另外具体实施例，所述至少两种多肽包括三种多肽。例如香叶醇还原酶(GR)、香叶醇脱氢酶(GD)及柠檬醛还原酶(CR)。
根据另外具体实施例，所述至少两种多肽包括四种多肽。例如香叶醇合成酶(GS)、香叶醇还原酶(GR)、香叶醇脱氢酶(GD)及柠檬醛还原酶(CR)。
如本文所用术语"多核苷酸"与"核酸序列"可互换使用，指一单链或双链核酸序列以一RNA序列、一互补多核苷酸序列(cDNA)、一基因组多核苷酸序列及/或复合多核苷酸序列的形式分离和提供(例如，上述的组合)。
如本文所用术语"互补多核苷酸序列"是指由使用逆转录酶或任何其它RNA依赖性DNA聚合酶的信使RNA的逆转录产生的序列。随后可以使用DNA依赖性DNA聚合酶在体内或体外扩增这样的序列。
如本文所用术语"基因组多核苷酸序列"是指从染色体衍生(分离)的序列，因此它代表染色体的连续部分。
如本文所用术语"复合多核苷酸序列"是指至少部分互补且至少部分基因组的一序列。一复合序列可以包括编码本发明多肽所需的一些外显子序列，以及插入其间的一些内含子序列。内含子序列可以是任何来源，包括其他基因，通常将包括保留剪接信号序列。这样的内含子序列可以进一步包括多个顺式作用表现调节组件，如下文进一步详述。
本发明一些实施例的多肽的核酸序列可以针对植物表现进行优化。这种序列修饰的实例包括但不限于一改变的G/C含量以更接近于通常在感兴趣植物物种中发现的G/C含量，以及非典型地去除植物物种中多个密码子，通常称为密码子优化。
如本文所用术语"密码子优化"是指选择合适的DNA核苷酸用于使用于一结构基因或其片段内而接近目标植物内使用的密码子。因此，一优化的基因或核酸序列是指天然或天然存在一基因的核苷酸序列已被修饰以便利用植物中统计学上优选的或统计学上有利的密码子。核苷酸序列通常在DNA标准上进行检测，并使用任何合适的方法优化确定用于在植物物种中表现进行的编码区。例如如Sardana等人所述。(1996，植物细胞报导15：677-681)。在这种方法中，密码子使用的标准偏差，即密码子使用偏差的度量，可以通过首先找到天然基因相对于高度表现的植物基因的每个密码子的使用的平方比例偏差来计算，随后是平均偏差的计算。使用的公式是：1SDCU＝n＝1N[(Xn-Yn)/Yn]2/N，其中Xn是指高度表现的植物基因中密码子n的使用频率；其中Yn是指感兴趣的基因中密码子n的使用频率；N是指感兴趣的基因中的密码子的总数。一密码子使用表由Murray等人以数据汇编了来自双子叶植物的高度表现基因(1989，核酸研究，17：477-498)。
一种优化所述核酸序列的方法以对应特定植物细胞类型的优选密码子是基于直接使用，而不进行任何额外的统计计算的密码子优化表，例如在密码子使用中在线提供的密码子优化表数据库，通过日本的国家农业科学研究所(National Institute ofAgrobiological Sciences)的DNA库(www.kazusa.或jp/codon/)。密码子使用数据库包含许多不同物种的密码子使用表，每个密码子使用表已根据Genbank中存在的数据进行统计确定。
通过使用上述表来确定特定物种(例如桉树)中每个氨基酸最优选或最有利的密码子，一编码有感兴趣的一蛋白质的天然核苷酸序列可以针对所述特定植物物种进行密码子优化。这是通过将具有相对应密码子的特定物种基因组中可能具有低统计学发生率的密码替换为统计学上更有利的氨基酸来实现的。
然而，可以选择一个或多个较不利的密码子来删除现有的限制性位点，以在潜在有用的交会处创造新的限制性位点(5'和3'端添加信号肽或终止盒，内部位点可用于将片段切割并剪接在一起以产生一正确的全长序列)添加信号肽或终止盒，可能用于切割的内部位点剪接片段一起产生正确的全长序列)，或消除可能负面影响mRNA稳定性或表现的核苷酸序列。
天然存在的编码核苷酸序列可能已经存在，在任何修饰之前，包含对应于特定植物物种中统计学上有利密码子的许多密码子。因此，天然核苷酸序列的密码子优化可以包括确定天然核苷酸序列内的哪些密码子在特定植物方面不是统计学上有利的，并且根据特定植物的密码子使用表来修饰这些密码子以产生密码子优化的衍生物。修饰的核苷酸序列可以完全或部分地优化用于植物密码子使用，只要由修饰的核苷酸序列编码的蛋白质的产生水平高于由相应天然存在或天然基因编码的蛋白质的水平即可。通过改变密码子使用来构造合成基因描述于例如PCT专利申请号93/07278中。
因此，本发明的实施例包括上文所述的核酸序列、其片段、与其可杂交的序列、与其同源的序列、与其直系同源的序列、编码具有不同密码子使用的相似多肽的序列、以突变例如天然存在或人为诱导的一个或多个核苷酸的缺失、插入或取代为特征改变的序列，无论是随机还是以有目标的方式。
可以使用本领域技术人员熟知的重组DNA技术构建可用于本发明方法的建构体。可以将基因构建体插入到可以商业购买到的载体中，适于转殖入例如植物，及适合在转殖细胞中表现感兴趣的基因。遗传构建体可以是表现载体，其中如所述的，异源核酸序列可操作地连接到顺式作用调节组件允许在细胞中表达，例如在植物细胞中。
如本文所用术语"顺式作用调节组件"是指多核苷酸序列，优选为一启动子，其结合一反式作用调节子并调节位于其下游的编码序列的转录。
根据多个具体实施例，所述顺式作用调节组件包含一启动子序列。
如本文所用术语"可操作地连接"是指顺式调节组件(例如启动子)的一功能定位，以便允许调节所选择的核酸序列的表现。例如，启动子序列可以在转录和转译方向上位于所选择的核酸序列的上游。
根据一实施例，本发明的核酸构造中的启动子是用于引导异源核酸分子在植物细胞内的表达的植物启动子。
如本文所用术语"植物启动子"是指一启动子序列，包括添加到其中或包含其中任何另外的调节组件，至少能够在植物细胞、组织或器官，优选在木本植物细胞、组织或器官中诱导、授予、激活或增强表现。这样的启动子可以衍生自植物、细菌、病毒、真菌或动物来源。这样的启动子可以是组成型的，即能够引导多个植物组织中的基因高度表现；组织特异性，即能够引导特定植物组织或组织中的基因表现；可诱导的，即能够在刺激下引导基因表现；或嵌合的，即由至少两种不同启动子的部分形成。
根据多个具体实施例，所述启动子是一组成型启动子。
组成型植物启动子的实例包括但不限于：CaMV35S及CaMV19S启动子、玄参花叶病毒亚基因组转录(sgFiMV)启动子、草莓镶脉病毒(SVBV)启动子、FMV34S启动子、甘蔗杆菌病毒启动子、CsVMV启动子、阿拉伯芥ACT2/ACT8肌动蛋白启动子、阿拉伯芥泛素UBQ1启动子、大麦叶硫素BTH6启动子和水稻肌动蛋白启动子。
根据一具体实施例，所述组成型启动子选自于由下述所组成的群组：花椰菜花叶病毒(CaMV)35S启动子、玄参花叶病毒亚基因组转录(sgFiMV)启动子以及草莓镶脉病毒(SVBV)启动子。
根据多个具体实施例，所述启动子是组织特异性激活子。组织特异性启动子的非限制性实例包括下列描述Yamamoto等人，(1997)植物期刊，12(2)：255-265；Kawamata等人，(1997)植物细胞生理学，38(7)：792-803；Hansen等人，(1997)，基因期刊，254(3)：337-343；Russell等人，(1997)基因转殖研究。6(2)：157-168；Rinehart等人，(1996)植物生理学。112(3)：1331-1341；Van Camp等人，(1996)植物生理。112(2)：525-535；Canevascini等人，(1996)植物生理。112(2)：513-524；Yamamoto等人，(1994)植物细胞生理学。35(5)：773-778；Lam，(1994)细胞差异研究结论，20：181-196；Orozco等人，(1993)植物生物学。23(6)：1129-1138；松冈等人，(1993)美国国家科学院，90(20)：9586-9590；和Guevara-Garcia等人，(1993)植物期刊，4(3)：495-505。
可用于本发明的一些实施例的其它例示性启动子示于表I、II和III中。
表I
用于实施本发明的一些实施例的例示性组成型启动子
表II
用于实施本发明的一些实施例的例示性种子优选启动子
表III
用于实施本发明的例示性花特异性启动子
根据其它具体实施例，所述启动子是化学调节的启动子。根据所述目的，启动子可以是化学诱导基因表现的化学诱导型启动子，其中化学抑制基因表现的应用是化学抑制性启动子。化学诱导型启动子是本领域已知的，并且包括但不限于玉米In2-2启动子，其被苯磺酰胺除草安全剂活化、玉米GST启动子，其由用作芽前除草剂的疏水性亲电子化合物活化，以及由水杨酸活化的烟草PR-1a启动子。其他化学调节的启动子包括类固醇反应性启动子和四环素诱导型和四环素抑制性启动子(参见例如Schena等人，(1991)美国国家科学院院刊，88：10421-10425和Gatz等人，(1991)，分子基因期刊，227：229-237)。
根据其它具体实施例，所述启动子是害虫诱导型启动子。这些启动子在感染病菌如细菌、真菌、病毒、线虫和昆虫后，引导植物中的基因表现。这些启动子包括来自发病相关蛋白(PR蛋白)的启动子，其在病原体感染后诱导，例如PR蛋白、SAR蛋白、β-1,3-葡聚醣酶，几丁质酶等。参见例如Redolfi等人，(1983)植物病理学，89：245-254；Uknes等人，(1992)植物细胞，4：645-656；和Van Loon(1985)植物生理学病毒学杂志。4：111-116。
本发明的一些实施例的核酸构造(本文中也称为“表现载体”、“表现构造”或“载体”)包括附加的序列使得所述载体适合于在原核生物、真核生物或优选两者(例如穿梭载体)中复制和整合。此外，一般的载体还可以含有一个或多个附加的调节组件，例如转录和转译起始序列、转录和翻译终止子、用于增强转录的一5'端前导序列及/或一3'端非转译区(例如包含多聚腺苷酸化信号的序列)，和编码传输的核酸序列或信号肽(例如，叶绿体转运或信号肽)。本发明的一些实施例的表现载体还可以包括工程改造以表现多肽的稳定性、生产、纯化、量产或毒性的多个序列。
根据多个具体实施例，本发明的核酸构造可以包含转译增强子，例如ω-转译增强子。多个增强子组件可以从连锁的同源或异源启动子刺激高达1,000倍的转录。当被放置在转录起始位点的下游或上游时，多个增强子是有活性的。衍生自病毒的许多增强子组件具有广泛的宿主范围，并且在各种组织中是有活性的。增强子的非限制性实例包括烟草花叶病毒(TMV)的RNA的5'端-非转译区(5'-UTR)，称为ω-序列、烟草蚀刻病毒转译增强子和SV40早期基因增强子。适用于本发明的一些实施例的其它增强子/启动子组合包括衍生自多瘤病毒、人或鼠巨细胞病毒(CMV)的衍生物，长期复制来自各种反转录病毒如鼠白血病病毒、鼠或肉瘤病毒和HIV。参见增强子和真核表现，冷泉港出版社，冷泉港，N.Y.1983，其以引用方式并入本文。
基因终止序列，其位于待转录的多核苷酸3'端，可以与来自基因启动子序列相同的基因，或可以来自不同的基因。本领域已知的许多基因终止序列可用于本发明，例如但不限于胭脂碱合酶(NOS)终止子(SEQ ID NO：64)、CaMV终止子(SEQ ID NO：65)、氨基酸合成酶(AGS)终止子(SEQ ID NO：66)和八聚蛋白合酶(OCS)终止子(SEQ ID NO：67)。
在合成单萜的天然组织中，香叶醇合成酶(GS)、香叶醇还原酶(GR)和香叶醇脱氢酶(GD)通过质体前导肽导向质体。然后将多个目标序列切割以释放质体中的成熟酶。因此，为了操作关于单萜生产的代谢途径，香叶醇合成酶(GS)、香叶醇还原酶(GR)和香叶醇脱氢酶(GD)(或其中部分)导向质体可能是有帮助的。这种导向可以通过使用天然蛋白质序列中包含的天然导向序列，或通过加入或交换异源亚细胞导向信号(前导序列)来实现。或者，用于本发明方法的酶可以通过删除质体导向信号来引导细胞质。核苷酸序列的剔除，交换和添加的方法是本领域公知的，并且可以容易地用于操作如本文所述的编码目的靶标信号的核苷酸区段。
因此，本发明的核酸构造还可以包含编码前导肽的附加的核酸序列，其允许将与其融合的多肽传输到植物内、细胞壁或分泌到细胞外基质中的亚细胞器，如质体，或如质叶、叶绿体和色原体。
如本文所用术语"前导肽"是指与一多肽的氨基末端连接的一肽，并将编码的多肽导入细胞的亚细胞器(例如质体、例如叶绿体)。这样的转输肽是本领域已知的(参见例如Clark等人(1989)生物化学期刊，264：17544-17550和Della-Cioppa等人(1987)植物生理，84：965-968)。
根据多个具体实施例，所述多肽还包含一叶绿体前导肽。
叶绿体前导序列是本领域已知的，包括但不限于阿拉伯芥核酮糖二磷酸羧化酶小链的靶向序列、核酮糖-1,5-二磷酸羧化酶(加氧酶)的小次单元、5-烯醇丙酮酸莽草酸-3-磷酸合成酶(EPSPS)、色氨酸合成酶、质体蓝素、绒毛膜合成酶和捕光叶绿素a/b结合蛋白(LHBP)。
根据多个具体实施例，叶绿体前导肽是阿拉伯芥核酮糖二磷酸羧化酶小链(SEQID NO：68)。
根据多个具体实施例，叶绿体前导肽是阿拉伯芥叶绿体CTP2序列(SEQ ID NO：91)。
根据多个具体实施例，将叶绿体前导肽置于多肽序列的N端。
根据多个具体实施例，从多肽的氨基酸序列中，例如香叶醇还原酶(GR)，去除了过氧化物酶体羧基端三氨基酸信号(SRL)，从而能够在叶绿体中表现多肽。
供检测转化的细胞并确保细胞中载体维持的多个选择性标记基因也可以包括在表现载体中。优选的选择性标记包括赋予对一种或多种药物抗性的标记，例如氨芐青霉素、氯霉素、红霉素、卡那霉素(新霉素)、潮霉素和四环素(Davies等(1978)，微生物研究期刊，32：469)。这种标记的一个非限制性实例是其表现对卡那霉素或潮霉素具有抗性的NPTII基因，其通常在中等浓度对植物细胞具有毒性(罗杰斯等人，魏斯巴赫A和魏斯巴赫H，植物分子生物学方法，学术出版社：圣地亚哥，CA，1988)。选择性标记还可以允许细胞在基本培养基上生长，或在有毒代谢物存在下生长，并且可以包括生物合成基因，例如那些生物合成途径中的组氨酸、色氨酸和白氨酸。
可替代的或附加的，转型细胞中所需构造的存在可以通过本领域熟知的其它技术测定，例如定序、PCR、南方墨点法和西方墨点法。
本发明的教示进一步包括：多核苷酸是一核酸构造系统的一部分，其中如上所述，香叶醇合成酶(GS)、香叶醇还原酶(GR)、香叶醇脱氢酶(GD)及/或柠檬醛还原酶(CR)多肽由多个构造表现。
根据一个实施例，多核苷酸可以以任何顺序置于核酸构造或核酸构造系统中。
可以使用各种构造的构成来表达来自单个核酸构造的几个基因。例如，本发明的一些实施例的核酸构造可以包括至少两个启动子序列，每个用于分别表现一特定多肽。这些至少两个相同或不同的启动子可以是在一种或多种细胞类型中产生作用的组成型、组织特异性或可调节(例如诱导型)启动子。这些构造的非限制性实例描述于以下多个实施例的实施例2A中，其中香叶醇合成酶(GS)被复制到CaMV 35S启动子的下游(SEQ ID NO：69)；将香叶醇还原酶(GR)被复制到sgFiMV启动子下游(SEQ ID NO：70)；香叶醇脱氢酶(GD)被复制到SVBV启动子的下游(SEQ ID NO：71)，柠檬醛还原酶(CR)被复制到上游至NPTII匣，下游至NPTII匣，上游至GS匣或下游至GS匣。
或者，可以将这些基因从核酸构造的单个启动子序列共转录为多顺反子信息。为了使来自单一多顺反子信息的所有基因共同转译，可以通过包括一内部核醣体进入位点(IRES)序列的接头序列转录融合不同的多核苷酸片段，其能够使IRES序列下游的多核苷酸片段转译。在这种情况下，包含两个或三个基因编码序列的转录的多顺反子RNA分子将从多顺反子RNA分子的5'末端和内部IRES序列转译，从而产生不同的多肽。
根据具体实施例，所述构造如下面部分实施例的实施例2A所述。
本发明某些实施例的核酸序列和构造可以通过本领域中的各种已知方法中的任一种引入细胞中。这样的方法在以下文献中被描述：Sambrook等人，[分子复制：A实验室手册，冷泉港实验室，纽约，(1989,1992)]；Ausubel等人，[当前分子生物学方法，John Wiley和Sons，Baltimore，Maryland(1989)]；Chang等人，[体细胞基因治疗，CRC Press，AnnArbor，MI(1995)]；Vega等人，[基因靶向，CRC Press，Ann Arbor MI(1995)]；Vectors，[分子复制载体及其用途，Butterworths，Boston MA(1988)]和Gi lboa等人，[生物技术4(6)：504-512(1986)]；以及包括例如稳定或瞬时转染、脂质转染、电穿孔和以重组病毒载体感染。
植物细胞可以与本发明的一些实施例的核酸构造稳定或瞬时转型。转型过程导致异源核酸序列的表现，例如将受体细胞改变为转型的、遗传修饰的或基因改造的细胞。在稳定转型中，将本发明的一些实施例的核酸分子整合到植物基因组中，因此它代表稳定和遗传的性状。在瞬时转型中，核酸分子由转型的细胞表现，但不与基因组整合，因此代表瞬时性状。
将外来基因引入单子叶植物和双子叶植物中有多种方法(Potrykus，植物生理学期刊、植物分子生理学。(1991)42：205-225；Shimamoto等人，自然期刊，(1989)338：274-276)。
将外源DNA稳定整合到植物基因组DNA中的主要方法包括两个主要方法：
(i)农杆菌引导的基因转移：Klee等人，(1987)，植物生理学刊38：467-486；Kleeand Rogers，细胞培养和植物体细胞遗传学，Vol。6，植物核基因的分子生物学；Schell，J.，and Vasil，L.K.，学术出版社，San Diego，Calif，(1989)p.2-25；Gatenby，植物生物技术；Kung，S。和Arntzen，C.J，巴特沃斯出版社；Boston，质量刊，(1989)p.93-112；美国专利号5,635,055；5,824,877；5,591,616；5,981,840和6,384,301。
(ii)直接摄取DNA：Paszkowski等人，细胞和体细胞遗传学植物，Vol。6，植物核基因的分子生物学；Schell，J.，and Vasil，L.K.，学术出版社，San Diego，Calif。(1989)p.52-68；包括将DNA直接摄入原生质体的方法，Toriyama，K等人，(1988)生物技术：1072-1074；植物细胞短暂电击引起的DNA摄取；Zhang等人，植物细胞研究，(1988)7：379-384；Fromm等人，自然期刊，(1986)319：791-793；通过粒子轰击将DNA注入植物细胞或组织中，Klein等人，生物技术，(1988)6：559-563；McCabe等人，生物技术，(1988)6：923-926；Sanford，植物生理，(1990)79：206-209；Gordon-Kamm等人，植物细胞，2：603-618,1990；Fromm等人，生物技术，8：833-839,1990；WO 93/07278；和Koziel等人，生物技术11：194-200,1993；美国专利号5,015,580、5,550,318、5,538,880、6,160,208、6,399,861、6,403,865、4,945,050、5,036,006及5,100,792；通过聚乙二醇(PEG)或电穿孔介导的摄取(参见例如美国专利号5,384,253、EP 0292435、EP 0392225和WO 93/07278)；通过使用微量移液器系统：Neuhaus等人，应用遗传学理论，Genet，(1987)75：30-36；Neuhaus和Spangenberg，植物生理，(1990)79：213-217；玻璃纤维或碳化硅晶须转型细胞培养物，胚胎或愈伤组织，美国专利号5,464,765，或通过DNA与发芽花粉的直接孵育，DeWet等人，胚珠组织的实验操作；Chapman，G.P。和Mantell，S.H。和Daniels，W.Longman，London，(1985)p.197-209；Ohta，美国国家科学院刊USA(1986)83：715-719。
农杆菌系统包括使用含有整合入植物基因组DNA的定义的DNA片段的质粒载体。植物组织的接种方法根据植物种类和农杆菌递送系统而变化。广泛使用的方法是可以用任何组织外植体进行叶圆片方法，其为启动整个植物分化提供了良好的来源。Horsch等人，植物分子生物学手册A5，学术出版社，Dordrecht(1988)p.1-9。补充方法使用农杆菌递送系统与真空渗透组合。农杆菌系统在产生基因改造双子叶植物中尤其可行。
许多载体可用于使用根癌土壤杆菌进行转型。这些载体通常携带至少一个T-DNA边界序列并且包括多个载体，例如pCIB10、pBI121和pBIN19(Bevan，核酸研究，11：369,1984)。二元载体pCIB10包含编码卡那霉素抗性的基因，用于在植物中选择和T-DNA右侧和左侧的边界序列，并且包含来自宽宿主范围质粒pRK252的序列，使其能够在大肠杆菌和农杆菌中复制(Rothstein等人，基因，53：153-161,1987)。通过重组农杆菌转型目标植物物种通常涉及将土壤杆菌与来自植物的外植体共培养，并依照本领域公知的方案。转型的组织在具有存在于二元质粒T-DNA边界之间的抗生素或除草剂抗性标记的选择性培养基上再生。
有直接将DNA转移到植物细胞中的各种方法。在电穿孔中，原生质体短暂暴露于强电场。在显微注射中，使用非常小的微量移液管将DNA机械注射到细胞中。在微粒轰击中，DNA被吸附在诸如硫酸镁晶体或钨颗粒的微粒子上，微粒物理加速进入细胞或植物组织。
在稳定转型后将植物繁殖。植物繁殖的最常见方法是种子。然而，通过种子繁殖的再生具有由于杂合性而导致的作物缺乏一致性的缺陷，因为根据由门德尔规则所支配的遗传变异，种子由植物产生。基本上，每个种子在遗传上是不同的，每个种子都会随着自己的特征而增长。因此，优选转型植物进行生产，使得再生植物具有相同的基因改造母本植物的性状和特征。因此，优选通过微繁殖再生转型的植物，其提供转型植物的快速、一致的繁殖。
微繁殖是从已选择的母本植物或品种中切除的单片组织生长成新一代植物的过程。所述方法允许具有表达融合蛋白的优选组织的植物大量繁殖。生产的新一代植物与原始植物具有遗传相同性，具有全部特征。
微繁殖允许在短时间内批量生产优质植物材料，并提供所选栽培品种在保持原始改造基因或转殖植物特征的快速繁殖。复制植物的优点是植物繁殖的速度和植物的质量和均匀性。
微繁殖是一个多阶段的过程，需要改变培养基或阶段之间的生长条件。因此，微繁殖过程涉及四个基本阶段：第一阶段，初始组织培养；第二阶段，组织培养繁殖；第三阶段，分化和植株形成；第四阶段，温室栽培和硬化。在第一阶段，初始组织培养，组织培养被建立和被认证为无污染。在第二阶段期间，将初始组织相互培养，直到产生足够数量的组织样本以满足生产目标。在第三阶段期间，将在第二阶段生长的组织样品分成并生长成单独的小植株。在第四阶段，将转型的小植物转移到温室以进行硬化，其中植物对光的耐受性逐渐增加，使得其可以在自然环境中生长。
虽然目前优选稳定转化，但是本发明的一些实施例也设想了叶片细胞、分生细胞或整株植物的瞬时转化。
瞬时转化可以通过上述任何直接DNA转移方法或通过使用修饰的植物病毒的病毒感染来实现。
已被证明可用于植物宿主转化的病毒包括CaMV、TMV和BV。使用植物病毒转化植物描述于美国专利4,855,237(BGV)、EP-A 67,553(TMV)、日本公开申请号63-14693(TMV)、EPA194,809(BV)、EPA 278,667(BV)，和Gluzman，Y等人，分子生物学通讯：病毒载体，冷泉港实验室，New York，pp.172-189(1988)。在WO 87/06261中描述了用于在许多宿主(包括植物)中表达外源DNA的假病毒颗粒。
在植物中引入和表现非病毒外源核酸序列的植物RNA病毒的构造，通过上述参考文献以及Dawson，W.O等人，病毒学，(1989)172：285-292；Takamatsu等人，胚胎期刊，(1987)6：307-311；French等人，科学期刊，(1986)231：1294-1297；和Takamatsu等人，FEBSLetters(1990)269：73-76。
当病毒是DNA病毒时，可以对病毒本身进行适当的修改。或者，可以首先将病毒复制到细菌质粒中以便于用外来DNA构建所需的病毒载体。然后可以从质粒中切除病毒。如果病毒是DNA病毒，则细菌复制起点可以附着于病毒DNA，然后由细菌复制。
所述DNA的转录和转译将产生外壳蛋白，其将包裹病毒DNA。如果病毒是RNA病毒，则通常将病毒作为cDNA复制并插入质粒。然后将质粒用于制备所有构造。然后通过转录质粒的病毒序列和病毒基因的转译以产生包裹病毒RNA的外壳蛋白来产生RNA病毒。
用于在植物中引入和表现非病毒外源核酸序列(例如包括那些在本发明的一些实施例的构造)的植物RNA病毒的构造通过上述参考文献以及美国专利号5,316,931得到证实。
在一个实施例中，提供了植物病毒核酸，其中天然外壳蛋白编码序列已经从病毒核酸、非天然植物病毒外壳蛋白编码序列和非天然启动子中剔除，优选地是亚基因组启动子，已经插入能够在植物宿主中表达的非天然外壳蛋白的编码序列，重组植物病毒核酸的外壳以及通过重组植物病毒核酸确保宿主的全身感染。或者，可以通过将非天然核酸序列插入其中而使外壳蛋白基因失去活性，从而产生蛋白质。重组植物病毒核酸可以含有一种或多种另外的非天然亚基因组启动子。每个非天然亚基因组启动子能够在植物宿主中转录或表现相邻基因或核酸序列，并且不能与天然亚基因组启动子相互重组。如果包括多于一个核酸序列，则非天然(外源)核酸序列可以插入到天然植物病毒亚基因组启动子或天然的非天然植物病毒亚基因组启动子附近。非天然核酸序列在亚基因组启动子的控制下在宿主植物中转录或表现以产生所需的产物。
在第二个实施例中，除了将天然外壳蛋白编码序列置于非天然外壳蛋白亚基因组启动子之外，而不是非天然外壳蛋白编码序列之外，其余与第一个实施例相同，提供重组植物病毒核酸。
在第三个实施例中，提供一重组植物病毒核酸，其中天然外壳蛋白基因与其亚基因组启动子相邻，并且一个或多个非天然亚基因组启动子已插入到所述病毒核酸中。
插入的非天然亚基因组启动子能够在植物宿主中转录或表现相邻基因，并且不能彼此重组和与天然亚基因组启动子重组。非天然核酸序列可以插入在非天然亚基因组植物病毒启动子附近，使得序列在宿主植物中在亚基因组启动子的控制下转录或表现以产生所需产物。
在第四实施例中，除了将天然外壳蛋白编码序列替换为非天然外壳蛋白编码序列之外，按照第三实施例提供重组植物病毒核酸。
病毒载体被由重组植物病毒核酸编码的外壳蛋白包裹以产生重组植物病毒。重组植物病毒核酸或重组植物病毒用于感染适当的宿主植物。重组植物病毒核酸能够在宿主中复制，在宿主中全身扩散，并在宿主中转录或表现外源基因(分离的核酸)以产生所需的蛋白质。
除了上述之外，本发明的一些实施例的核酸分子也可以引入质体，例如叶绿体基因组从而使叶绿体表现。转化质体的示例性方法描述于：Svab等人，国家科。科学院。科学。美国90：913-917,1993；Svab等人，美国国家科学院刊：87：8526-8530,1990；McBride等人，美国国家科学院刊：91：7301-7305,1994；Day等人，植物生物技术，J.9：540-553，2011。
将外源核酸序列引入叶绿体基因组的技术是已知的。所述技术涉及以下步骤。首先，化学处理植物细胞，以将每个细胞的叶绿体数量减少到约1个。然后，通过颗粒轰击将外源核酸引入细胞中，目的是将至少一种外源核酸分子引入叶绿体中。选择外源核酸，使得其可通过同源重组将其整合入叶绿体的基因组，其容易受到叶绿体固有的酶的影响。为此，外源核酸除了感兴趣的基因之外还包括衍生自叶绿体基因组的至少一个核酸的延伸。此外，外源核酸包括选择性标记，其通过顺序选择方法来进行，以确定在这种选择之后叶绿体基因组的全部或基本上全部的复制体将包括外源核酸。关于所述技术的进一步细节见于美国专利号4,945,050和5,693,507，其通过引用并入本文。因此，多肽可以通过叶绿体的蛋白质表现系统产生并且整合到叶绿体的内膜中。
根据具体实施例，在转殖后，根据异源多肽的表现水平选择植物或植物细胞，因此有用于确定转殖的植物细胞，转基因植物和组织特异性的表现状态。
根据替代或附加的实施例，在转殖后，根据单萜特性选择植物或植物细胞。评估单萜含量的方法是本领域众所周知的，包括气相色谱(GC)、耦合到质谱仪(GC-MS)的气相色谱、离子迁移谱仪(IMS)、高场离子迁移谱仪不对称波形(FAIMS，高场非对称波形离子迁移光谱法)电化学传感器、电化学传感器数组和比色传感器。
单萜是挥发性化合物，其已知具有特定的气味，例如香叶醇和香茅醇具有玫瑰状香味，香叶醛、橙花醛和香茅醛具有强烈的柠檬气味。因此，根据另一个具体实施例，在转殖后，根据植物的气味，使用本领域已知的方法来选择植物，例如采用一组人鼻或人造鼻和电子鼻作为传感器。
如本文所用术语"异源多肽"或"重组多肽"是指由重组DNA技术产生的多肽，即由通过编码所述多肽的外源核酸构造改造的细胞产生的多肽。重组多肽对于细胞是外源性的，或源自不是从其在细胞基因组中的天然位置和表达水平的核酸序列的同源多肽。
因此，无论引入方法如何，本发明提供了分离的细胞(例如植物细胞、例如木本植物细胞)，其包含编码任何上述酶的异源核酸序列，例如香叶醇还原酶(GR)、香叶醇合成酶(GS)、香叶醇脱氢酶(GD)、柠檬醛还原酶(CR)、香叶醇合成酶(GS)加香叶醇还原酶(GR)、香叶醇还原酶(GR)加香叶醇脱氢酶(GD)、香叶醇合成酶(GS)加香叶醇还原酶(GR)、香叶醇合成酶(GS)加香叶醇脱氢酶(GD)、香叶醇合成酶(GS)加柠檬醛还原酶(CR)、香叶醇还原酶(GR)加柠檬醛还原酶(CR)、香叶醇脱氢酶(GD)加柠檬醛还原酶(CR)、香叶醇合成酶(GS)加香叶醇还原酶(GR)加香叶醇脱氢酶(GD)、香叶醇合成酶(GS)加香叶醇还原酶(GR)加柠檬醛还原酶(CR)、香叶醇合成酶(GS)加香叶醇脱氢酶(GD)加柠檬醛还原酶(CR)、香叶醇还原酶(GR)加香叶醇脱氢酶(GD)加柠檬醛还原酶(CR)、或香叶醇合成酶(GS)加香叶醇还原酶(GR)加香叶醇脱氢酶(GD)加柠檬醛还原酶(CR)。这些异源序列可以由任何上述核酸构造编码。
如本文所用术语"分离"是指至少部分地与天然环境例如整个植物分离。
细胞可以是原核的或真核的，例如细菌、昆虫、真菌、植物或动物细胞。根据一具体实施例，细胞是植物细胞。
因此，根据本发明的一目的，提供了一种基因改造植物，例如木本植物或植物细胞，其包含任何上述异源表达的酶。
如本文所用术语"基因改造"是指包括异源即外源核酸序列的一细胞(例如植物细胞，例如木本植物细胞)。所述细胞可以是基因改造或非基因改造细胞(即，其中细胞不包含外源调节组件，例如病毒组分)。
根据一具体实施例，本发明提供了一种木本植物或植物细胞，包含编码选自以下的至少一种多肽的异源核酸序列：香叶醇合成酶(GS)、香叶醇还原酶(GR)、香叶醇脱氢酶(GD)以及柠檬醛还原酶(CR)。
如本文所用术语"植物"包括植物、嫁接植物、植物和植物部分的母代和后代，包括种子、芽、茎、根(包括块茎)、砧木、接穗和植物细胞、组织和器官。植物可以是任何形式，包括悬浮培养物、胚胎、分生组织、愈伤组织、叶、配子体、孢子体、花粉和小孢子。在本发明的方法中特别有用的植物包括属于超家族绿色植物亚界的所有植物，特别是单子叶植物和双子叶植物，包括谷物料或饲料豆类、观赏植物、食用作物、树，或选自以下的灌木：包括相思树、枫属树木、猕猴桃属、蔷薇属、天竺葵、合欢属、三色桫椤，须芒草属、花生属、槟榔属、阿斯特瑞雅樨、黄芪、白桦、白桦属、芸苔属、木榄、非洲杉、紫铆树花、卡塔尔巴豆、朱缨花属、山茶、美人蕉、辣椒属、决明属，、毛竹、木瓜属、肉桂、咖啡、可乐豆木、小冠花、栒子酸橙木、山楂属、黄瓜属、柏木属、银荆桫椤、榅、柳杉、香茅属、银荆、榲桲、货币黄檀、大叶骨碎补、小槐花属、蚌壳蕨属、拢双黄茅、油麻藤属、扁豆属、矛豆属、金字塔稗草、拉菲草属、穇子、叶画眉草属、刺桐属、桉树属、希氏假乌木属、荞麦属、南美稳、草莓属、土黄耆属、藤露兜属、天竺葵、银杏、爪哇大豆属、毒鼠豆属、巴西海岛棉、银桦属、鞘籽古夷苏木、岩黄芪属、臭椿、黄茅、大麦草、红苞茅、圣约翰草、连翅、靛蓝莲、鸢尾属、鹿蹄柳、萩属、莴苣属、细叶番婆树、银合欢、百脉根、莲花属、硬皮豆属、苹果属、木薯、生苜蓿、水杉、野豌豆、烟草属、红豆草属、料豆属、稻属、盾柱木、狼尾草属、鳄梨、矮牵牛属、菜豆属、凤尾鱼属、禾本科、石楠属、云杉、松属、豌豆、桃柘罗汉松、木槿属、金叶木、白杨苷属、牧豆树、花旗松、翼荚木、西洋梨、栎属、石斑木、棕榈、纳塔尔盐肤木、欧洲醋栗、醋栗、刺槐、罗莎属、悬钩子属、柳树属、红裂草、金松属、加州红木、红豆杉、高粱、菠菜属、鼠尾粟属、葫芦属、矮柱花草、葫芦茶属、落羽杉、美达三叶草、三叶草、小麦属、异叶铁杉、越橘属、蚕豆属、越橘属、酿酒葡萄、黄芪、马蹄莲、玉米、苋菜、朝鲜蓟、芦笋、西兰花、布鲁塞尔芽菜、卷心菜、油菜、胡萝卜、花椰菜、芹菜、桂皮、亚麻、羽衣甘蓝、扁豆、油菜、秋葵、洋葱、马铃薯、米、大豆、稻草、甜菜、甘蔗、向日葵、西红柿、南瓜茶、树木。或者，藻类和其他非绿色植物亚界植物可用于本发明的一些实施例的方法。
根据具体实施例，所述植物是木本植物。
如本文所用术语"植物"是指一棵树，即具有细长的硬木质茎的多年生植物。木本植物包括被子植物和裸子植物和杂交种。本植物的非限制性实例包括桉树、杨树、松树、冷杉、云杉、阿拉伯树、糖香树、灰分树、桦树、橡木、柚木、红木、甘蔗和蒙特里树，坚果树，例如核桃和杏仁，和果树例如苹果、李子、柑橘和杏。
根据具体实施例，木本植物是桉树或杨树。
桉树种的非限制性实例包括但不限于：白桉、桉树、二叶桉、Eucalyptusbndgesiana、美叶桉、赤桉、柠檬尤加利树、糖桉树、聚果桉、大叶桉、山桉、彩虹桉树、香油桉、红桉、Eucalyptus dunnu、红花桉、蓝胶尤加利、赤桉、肥皂桉树、Eucalyptus hemyi、柠檬桉、毛皮桉、红粗皮桉、斑皮桉、红柳桉树、美佳桉、蜜味桉、Eucalyptus nicholu、白珠桉、诺伐桉、斜叶桉、钝叶桉、硬柄桉、雪桉、多苞叶尤加利、杏仁桉、Eucalyptus resimfera、大叶桉、野桉、Eucalyptus sahgna、铁木桉、卵形按、细叶桉、毛叶桉、Eucalyptus urmgera、尾叶桉、多枝桉树、绿桉、鞣桉、尤曼桉及其杂交种。
根据一具体的实施例，所述桉树不是柠檬桉。
杨树(也称为山杨、白杨和棉白杨)的非限制性实例包括：山杨、响叶杨、银白杨、银灰杨、阿尔卑斯杨、卵叶山杨、胡杨、天女杨、颤杨、美洲黑杨、胡杨、黑杨、伦巴孛杨、珍珠杨、卡罗莱纳白杨、罗布斯白杨、马里兰杨、胡杨、窄叶杨、欧洲大叶杨、胡杨、青杨、胡杨、朝鲜杨、胡藓杨、小叶杨、木樨胡杨、四川胡杨、毛果杨、胡杨、大青杨、滇杨、太子胡杨、大叶杨、椅杨、胡杨、胡杨、月青杨、墨西哥杨及其杂交种。
根据一具体实施例，细胞或植物中内源性的香叶醇合成酶(GS)、香叶醇还原酶(GR)、香叶醇脱氢酶(GD)及/或柠檬醛还原酶(CR)并未表现到可供检测的含量(例如通过RT-PCR)。
如本文所用术语"内源性"是指自然基因在其自然位置的表现以及在一细胞的基因组中的表现含量。
当理解，当提到经基因改造的植物或植物细胞时，本发明人还指从其产生的后代。
可以通过使用核酸或蛋白质探针(例如抗体)验证外源mRNA及/或多肽的存在来选择从育种或转化植物产生的后代。或者，本发明多肽的表现可以通过感染基因修饰植物和野生型(即相同类型的非基因改造植物)来测量增强的对害虫的抗性并通过进一步比较植物中的疾病来验证，将在以下详细描述。
然后可以将基因改造植物细胞在合适的培养基中培养以再生整株植物，可使用本领域熟知的技术。然后可以将这些植物生长，并用相同的转殖菌株或不同菌株进行授粉，得到具有所需表型特征的杂交体。可以培养两代或更多代，以确保受试者表型特征被稳定地保持和遗传，然后取得种子以确保所期望的表型或其他性质已经实现。
根据具体实施例，基因改造植物的发育和生长不受影响。评估植物的发育和生长可以通过确定例如果实成熟、器官生长、细胞分裂、细胞成长、衰老、发芽、呼吸、光合作用、蒸腾作用、开花、授粉和受精。
因此，用本文所述的核酸构造或构造系统为用于转殖单一植物(无论是否为基因改造植物)。
然而，如本发明所述，涉及多种基因改造的表现，基因改造植物或植物细胞可通过杂交各自表达个体基因改造(或更多)的植物被产生，以获得包含多个基因改造的杂交产物。
被修饰以表达多于一种基因改造的植物可能是交叉表达基因改造的第一基因改造植物(a)，与第二基因改造植物表现基因改造(b)以及选择表现基因改造的植物后代(a+b)的结果。因此，根据具体实施例，基因改造(a)包含香叶醇合成酶(GS)，基因改造(b)包含香叶醇还原酶(GR)、香叶醇脱氢酶(GD)、柠檬醛还原酶(CR)、香叶醇还原酶(GR)加香叶醇脱氢酶(GD)、香叶醇还原酶(GR)加柠檬醛还原酶(CR)或香叶醇脱氢酶(GD)加柠檬醛还原酶(CR)。根据其它具体实施例，基因改造(a)包含香叶醇还原酶(GR)，基因改造(b)包含香叶醇脱氢酶(GD)、香叶醇合成酶(GS)、柠檬醛还原酶(CR)、香叶醇合成酶(GS)加香叶醇脱氢酶(GD)、香叶醇脱氢酶(GD)加柠檬醛还原酶(CR)或香叶醇合成酶(GS)加柠檬醛还原酶(CR)。根据其它具体实施例，基因改造(a)包含香叶醇脱氢酶(GD)，基因改造(b)包含香叶醇合成酶(GS)、香叶醇还原酶(GR)、柠檬醛还原酶(CR)、香叶醇合成酶(GS)加香叶醇还原酶(GR)、香叶醇合成酶(GS)加柠檬醛还原酶(CR)或香叶醇还原酶(GR)加柠檬醛还原酶(CR)。根据其它具体实施例，基因改造(a)包含柠檬醛还原酶(CR)，基因改造(b)包含香叶醇合成酶(GS)、香叶醇还原酶(GR)、香叶醇脱氢酶(GD)、香叶醇合成酶(GS)加香叶醇还原酶(GR)、香叶醇合成酶(GS)加香叶醇脱氢酶(GD)或香叶醇还原酶(GR)加香叶醇脱氢酶(GD)。
因此，根据具体实施例，表达基因改造(例如香叶醇合成酶(GS)加香叶醇还原酶(GR)、香叶醇合成酶(GS)加香叶醇脱氢酶(GD)、香叶醇合成酶(GS)加柠檬醛还原酶(CR)、香叶醇还原酶(GR)加香叶醇脱氢酶(GD)、香叶醇还原酶(GR)加柠檬醛还原酶(CR)、香叶醇合成酶(GS)加香叶醇还原酶(GR)加香叶醇脱氢酶(GD)、香叶醇合成酶(GS)加香叶醇还原酶(GR)加柠檬醛还原酶(CR)、香叶醇合成酶(GS)加香叶醇脱氢酶(GD)加柠檬醛还原酶(CR)、香叶醇还原酶(GR)加香叶醇脱氢酶(GD)加柠檬醛还原酶(CR)、香叶醇合成酶(GS)加香叶醇还原酶(GR)加香叶醇脱氢酶(GD)加加柠檬醛还原酶(CR))受交叉和选择的技术的影响。
交叉繁殖可以通过本领域已知的用于育种植物的任何方式来实现，例如上述第一和第二植物的异花授粉以及来自表达第一和第二酶的后代的植物的选择。本文使用的植物育种方法是本领域技术人员公知的。关于植物育种技术的讨论，参见Poehlman(1987)，育种田间作物，AVI出版公司，Westport Conn。在这种方法中有用的许多作物植物通过利用植物授粉方法的技术繁殖。
如所提到的，本发明人已经表示，香叶醇合成酶(GS)、香叶醇还原酶(GR)、香叶醇脱氢酶(GD)及/或柠檬醛还原酶(CR)的异源表达改变了植物单萜特性，导致生成单萜，例如香叶醇、香叶醛、橙花醛、香茅醇和香茅醛，其大多数桉树种类中所发现的数量是微量或不可检测的。
因此，根据本发明的一目的，提供了一种增强木本植物的香叶醇、香叶醛、橙花醛、香茅醇和香茅醛油中的至少一种的方法，所述方法包括在木本植物中表达至少一种重组多肽，选自由香叶醇合成酶(GS)、香叶醇还原酶(GR)、香叶醇脱氢酶(GD)及/或柠檬醛还原酶(CR)所组成的群组，从而增强木本植物香叶醇、香叶醛、橙花醛、香茅醇和香茅醛油中的至少一种。
还要指出的是，本发明人已经发现，在桉树中香叶醇合成酶(GS)、香叶醇还原酶(GR)、香叶醇脱氢酶(GD)及/或柠檬醛还原酶(CR)的异源表达增强了植物的病虫害抗性。不受理论的拘束，据认为，香叶醇、香叶醛、橙花醛、和香茅醇已知具有杀虫和驱虫性质，单萜特性的变化是增强害虫抗性的原因。
因此，根据具体实施例，本文公开的经基因改造的木本植物具有抗虫害感染的能力。
根据本发明的另一目的，提供了一种增强木本植物对病虫害感染的抗性的方法，所述方法包括在所述木本植物中表现选自于由下述所组成的群组中的至少一种重组多肽：香叶醇合成酶(GS)、香叶醇还原酶(GR)、香叶醇脱氢酶(GD)以及柠檬醛还原酶(CR)，从而提高所述木本植物对病虫害感染的抗性。
根据一具体实施例，所述方法还包括在已知有病虫害危害的区域中种植所述植物。
如本文所用术语"病虫害"是指一种通过定植、破坏、攻击或感染植物而对植物产生负面影响的生物体。因此，害虫可能影响植物的生长、发育、繁殖、收获或产量。这包括传播疾病及/或损害宿主及/或竞争宿主营养物质的生物体。植物害虫包括但不限于真菌、细菌、昆虫和线虫。根据具体实施例，害虫是昆虫。
害虫的非限制性实例包括：圆头螟如长角蛀虫、木虱如红树胶木犀草(Glycaspisbrimblecombei)、蓝色甜糖木虱、斑点香脂木瓜木虱、柠檬胶木脂肉桂脂、乌龟甲虫、鼻甲虫、叶甲虫、蜂蜜真菌、桉树榈蝽科害虫、无柄瘿蜂(Cynipidae)，例如桉树枝瘿釉小蜂、桉树釉小蜂、雪地球菌，食叶毛虫如杂食性尺蠖橙卷叶蛾、琉璃叶蝉和和粉虱如巨粉虱。其他非限制性实例的害虫包括蚜虫如柳黑毛蚜属、Cloudywinged cottonwood、及多态毛蚜属，盾蚧例如牡蛎壳盾蚧和圣何塞盾蚧，毛毛虫，透翅蛾蛀如美国大黄蜂和西杨透翅蛾，蛀虫如桦木螟和杨树螟，食树叶的毛虫如美国白蛾、卷蛾、红疣天社蛾、毛虫、飞蛾毛虫、刺榆毛虫、帐篷毛虫、卷叶蛾和西部虎凤蝶，叶矿虫如波普勒盾蚧，瘿螨和水疱螨如卡顿伍德瘿螨，蚜虫如白杨叶蚜，琉璃叶蝉，叶甲虫和跳蚤甲虫，粉介壳虫，杨树和柳螟，圆头蛀虫，叶蜂，软蚧如黑皮蚧棕色软鳞蚧、棉花枫蚧和褐盔蜡蚧，瓢虫如布法罗树虱，和真正的虫类，如网蝽和牧草盲蝽虫类。
如本文所用术语"昆虫"是指在任何发育阶段的昆虫，包括昆虫幼虫和成虫。昆虫的非限制性实例包括选自鞘翅目、双翅目、膜翅目、鳞翅目、食毛目、同翅目、半翅目、直翅目、缨翅目、革翅目、等翅目、虱目、蚤目、毛翅目等，特别是半翅目的昆虫。
根据具体实施例，所述病虫害选自于由下述所组成的群组：赤桉木虱、桉突眼蝽、桉树枝瘿釉小蜂以及桉树釉小蜂。
红色树胶木瓜木虱、赤桉木虱是刺吸式口器害虫(半翅目：木虱)，通常感染桉树。雌性赤桉木虱生命周期间生产45至700个卵。赤桉木虱的卵在10到20天内孵化，新生的幼虫用他们的探针(口器)刺穿桉树组织，摄食木质部和韧皮部。由于幼虫从叶子上植入植物糖，所以分泌出蜜汁，并在其周围建立一个蜡状保护罩(“lerp”，昆虫分泌出来的一种蜜)。在发育过程中，叶子呈白色和圆锥形，并且在成虫阶段才能收容昆虫。成虫长约1/8英寸，纤细，浅绿色至褐色，有橘黄色斑点。成虫出现在树叶上，不生活在树皮下。赤桉木虱感染的症状包括叶片掉落和芽的干燥。严重的感染可能导致树木完全脱落和死亡。
桉突眼蝽，(以下简称“Tp”或“绿色盾蝽”)是刺吸式口器害虫(半翅目：榈蝽科)，通常感染桉树。成年绿色盾蝽的特征在于强烈压缩的腹侧和细长的身体，长2-3.5毫米，头部宽，花梗眼和细长明显的下颌，在外缘呈弯曲和宽阔。身体是浅棕色并具有较暗的区域。蛋是黑色，椭圆形，具有塑形绒毛膜和圆盖，平均长0.5毫米，宽0.2毫米。爬虫和年轻的幼虫基本上是橙色的，在胸部和第一节腹部有黑斑。绿色盾蝽侵染的症状包括叶片银化，从褪绿到金色，重度侵染会导致叶子变红/褐色和脱叶现象。严重的感染可能导致树木死亡。
桉树枝瘿釉小蜂(Li)是一种小黄蜂，颜色为褐色，具有轻微的特殊蓝色至绿色金属光泽，通常感染桉树。平均雌性的长度为1.2毫米。幼虫是微小的，白色的和没有腿的。成年雌性蜂将卵放在叶脉中、叶柄和幼树茎上，以及新生幼苗和生长中的幼苗，导致凸块形虫瘿的形成。在黄蜂出现之前已经鉴定出五个阶段的发育：1)产卵后一至两周，软蛋白组织出现在卵插入点，并且虫瘿开始在植物组织内发育；2)发育典型的凸起形状，直到虫瘿达到最大尺寸；3)虫瘿表面上的绿色退色，变成粉红色的光泽；4)虫瘿失去光泽并发生颜色变化至浅红或深红色；5)可见到黄蜂的出现孔。桉树枝瘿釉小蜂感染的症状包括树叶落叶过早、发育迟缓、倒下和死亡。
桉树釉小蜂(Om)是一种微小的黑色昆虫，其幼虫通常发育在在桉叶上形成的隆起的虫瘿内。桉树釉小蜂感染的症状包括略微凸起的肿胀，直径约1毫米，位于叶片两侧，虫瘿大小和形状均匀，中空，每个包含一个微小的白色蛴螬。桉树釉小蜂不影响树的长期健康或活力，但会影响其外观。
如本文所用术语"病虫害抗性"是指在与宿主相关联的有害生物生命周期的任何步骤对害虫的多样性及/或毒性的抵抗，包括但不限于定殖、繁殖、产卵、虫瘿形成、摄食、生长和死亡。病虫害抗性是相对的，并且是基于已知具有抗性或敏感性的对照生物体(例如植物)的比较。
如本文所用术语"抗病虫害"以及"增强抗性"是指与合适的对照组相比，基因改造植物对病虫害的抗性增加至少5％，例如在相同条件下生长的相同发育阶段的同一物种的未基因改造植物。根据具体实施例，增加至少为10％、30％、40％或甚至更高，例如50％、60％、70％、80％、90％或大于100％。增强的病虫害抗性可以以宿主中减少的症状、植物表面上的有害害虫数量减少、植物上的虫卵或卵簇数量减少及/或幼虫的生长推迟或改变的生长发育的形式表现出来。
根据具体实施例，未基因改造的细胞或植物不表现达有效杀虫含量的香叶醇合成酶(GS)、香叶醇还原酶(GR)、香叶醇脱氢酶(GD)及/或柠檬醛还原酶(CR)。
根据其它具体实施例，未基因改造的细胞或植物不包含有效杀虫含量的香叶醇、香叶醛、香茅醇及/或香茅醛。
用于测试病虫害抗性的测定法是本领域熟知的并在下文中提及。
通常，为了评估病虫害抗性，感兴趣的感染害虫所感染的植物被保持在足以维持植物健康的条件下。例如，给植物提供足量的水并保持足够的温度、照明和湿度条件以适当地生长，发育及/或维护植物。
任何以下(或其他)方法可用于评估病虫害抗性：自由选择实验和非选择实验。
在自由选择实验中，将测试的植物物种(即野生型和基因改造植物)一起暴露于害虫，因此害虫可以在植物物种之间进行选择。
在非选择实验中，每个测试植物物种分别在相同条件下接种有害生物。
通常，病虫害抗性的评估是在具有害虫的保护笼中进行，将接种植物置于保护笼内同时防止外来害虫进入保护笼。
病虫害抗性测试可以在整个植物上或在单个叶子上进行(参见例如亚利桑那大学昆虫科学中心教育外联中心insected.arizona.edu/gg/resource/clip.html)。例示性实验设置在下面的部分实施例的实施例5-7中描述。
接种后，通常通过每天评估每个植物上的活的害虫数量，通常评估几个星期(例如1,2,3或4个月)的症状。不在植物上的有害生物数量、死亡害虫数量、变形、功能失调或非生殖有害生物的数量、虫卵和卵簇数量、幼虫数、蜡状保护罩的数量、虫瘿数量、虫瘿大小、虫瘿中重要幼虫的数量、落叶数量、变色叶片数量、枯枝数和死亡植物的数量。
根据一些实施例，提供了一种提高一嫁接木本植物的病虫害抗性的方法，所述方法包括提供一幼枝，其不具有本发明基因改造所表现的多个多肽(例如香叶醇合成酶(GS)、香叶醇还原酶(GR)、香叶醇脱氢酶(GD)及/或柠檬醛还原酶(CR))，和一植物的根茎其以基因改造表现香叶醇合成酶(GS)、香叶醇还原酶(GR)、香叶醇脱氢酶(GD)及/或柠檬醛还原酶(CR)的至少一种(以非生物胁迫反应的方式)，从而提高嫁接木本植物的病虫害抗性。在一些实施例中，植物的幼枝是非基因改造的。几个实施例有关于一种表现出改善的病虫害抗性的一嫁接木本植物，其包含以非基因改造表现本发明多肽(例如香叶醇合成酶(GS)、香叶醇还原酶(GR)、香叶醇脱氢酶(GD)及/或柠檬醛还原酶(CR))的一幼枝，以及一植物的根茎其以基因改造表现香叶醇合成酶(GS)、香叶醇还原酶(GR)、香叶醇脱氢酶(GD)及/或柠檬醛还原酶(CR)的至少一种。根据一些实施例，所述植物的根茎在一压力反应的方式下以基因改造表现香叶醇合成酶(GS)、香叶醇还原酶(GR)、香叶醇脱氢酶(GD)及/或柠檬醛还原酶(CR)的至少一种。
根据本发明的另一目的，提供一种杀虫剂组合物，其包含作为活性成分的本发明的核酸构造或核酸系统，和农业上可接受的载体或稀释剂。
如本文所用术语"农业上可接受的载体"是指载体或稀释剂，其不会对植物造成显着的刺激，并且不会消除所施用化合物的生物活性和性质。在这个术语中包括通常用于制剂技术的表面活性剂或其它促进应用的佐剂
合适的载体和佐剂可以是固体或液体，并且是制剂技术中通常使用的物质，例如天然或再生矿物质、溶剂、分散剂、润湿剂、增粘剂、增稠剂、粘合剂、防冻剂、防腐剂或肥料。这种载体通常用于本领域已知的制剂技术和制剂技术中。
组合物可以是任何所需制剂的形式，例如用于天然或合成材料的溶液、乳液、喷雾、悬浮液、粉末、泡沫、油分散体、糊剂、颗粒、胶囊或其它细碎或粗分散的材料或浸渍剂。
与组合物的性质一样，根据预期的目标和普遍的情况选择施用方法，例如喷雾、雾化、喷粉、撒播、涂覆或浇注。
组合物可以单独使用或与其他农药一起使用[例如吡虫啉和DIPEL(苏云金芽孢杆菌生物农药)]。
根据上述教示产生的基因改造植物的特征在于一经修饰的油组合物。根据具体实施例，基因改造植物表现出提升的单萜含量，例如香叶醇、香叶醛、橙花醛、香茅醇及/或香茅醛，同时降低了其它单萜的相对含量。
根据本发明的一目的，提供了一种生产油的方法，所述方法包括提供本发明的基因改造木本植物；并从木本植物中提取油，从而生产油。
根据另一目的，提供了根据所述方法生产的油。
根据本发明的另一目的，提供了一种桉树油，与一非基因改造的桉树的一桉树油相比，包含一增加含量的至少一种单萜，所述单萜选自于由下述所组成的群组：香叶醇、香叶醛、橙花醛、香茅醇和香茅醛。
根据多个具体实施例，所述桉树油与一非基因改造的桉树的一桉树油相比，包含一降低含量的至少一种单萜，所述单萜不选自于由下述所组成的群组：香叶醇、香叶醛、橙花醛、香茅醇和香茅醛。
如本文所用术语"油"是指一精油，含有从植物提取的单萜的浓缩疏水性液体。如本文所用术语“油”包括其衍生物，包括外消旋混合物、对映异构体、非对映异构体、水合物、盐、溶剂混合物、代谢物、类似物和同系物。油的组合物、产品及植物种类的油包含单萜，详细描述于科克-奥瑟化学技术百科全书，第4版；S.Price，芳香疗法手册-从植物到瓶子了解精油，(HarperCollins出版社，1993；J.Rose，芳香疗法图书，应用及吸入剂(北大西洋图书，1992)；以及默克索引，第13版，其各自通过引用并入本文。
根据具体实施例，所述油是桉树油。
如本文所用术语"桉树油"是指来自桉树的精油。
精油通常在植物内的特殊分泌腺体或细胞中发现，可以从例如叶、花、根、芽、枝条、根茎、心材、树皮、树脂、种子和水果中发现。参阅Price，芳香疗法手册-从植物到瓶子了解精油，(HarperColl ins出版社，1993，其全部公开内容通过引用并入本文)
根据多个具体实施例，从所述油中进一步纯化一单萜成分。
根据多个具体实施例，所述油的至少20％、至少30％、至少40％、至少50、至少60、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％或至少99％为单萜。
所述单萜成分可以含有单一萜烯或单萜的混合物。
根据多个具体实施例，所述单萜成分包含香叶醇、香叶醛、橙花醛、香茅醇和香茅醛中的至少一种。
如本文所用术语"香叶醇、香叶醛、橙花醛、香茅醇和香茅醛中的至少一种"是指一、二、三、四或五种单萜，例如香叶醇；香叶醛；橙花醛；香茅醇；香茅醛；香叶醇加香叶醛；香叶醇加橙花醛；香叶醇加香茅醇；香叶醇加香茅醛；香叶醛加橙花醛；香叶醛加香茅醇；香叶醛加香茅醛；橙花醛加香茅醇；橙花醛加香茅醛；香茅醇加香茅醛；香叶醇加香叶醛加橙花醛；香叶醇加香叶醛加香茅醇；香叶醇加香叶醛加香茅醛；香叶醇加橙花醛加香茅醇；香叶醇加橙花醛加香茅醛；香叶醇加香茅醇加香茅醛；香叶醛加橙花醛加香茅醇；香叶醛加橙花醛加香茅醛；香叶醛加香茅醇加香茅醛；橙花醛加香茅醇加香茅醛；香叶醇加香叶醛加橙花醛加香茅醇；香叶醇加香叶醛加橙花醛加香茅醛；香叶醛加橙花醛加香茅醇加香茅醛；或香叶醇加香叶醛加香茅醇加香茅醛；香叶醇加橙花醛加香茅醇加香茅醛；或香叶醇加香叶醛加橙花醛加香茅醇加香茅醛。
根据多个具体实施例，一具体单萜包含至少5％、至少10％、至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％或是说100％的所述单萜成分。
从油中纯化一单萜成分的方法是本领域已知的，并且包括例如气相色谱(GS)、GS-质谱仪(GC-MS)、重复蒸馏或其它方法，例如美国专利号8507734,5094720和7727401。
根据多个具体实施例，至少70％、至少80％、至少90％、至少95％或至少99％的纯化成分是单萜。
由于单萜是挥发性化合物，单萜成分可以通过本领域已知的方法直接从植物中收集，例如Yang等人，代谢工程13(2011)414-425；Ohara等人，植物生物技术杂志，(2010)8，pp。28-37；Aharoni等人，植物细胞，(2003)15：2866-2884；Lucker等人，植物生理学，(2004)134：510-519；Diemer等人，植物生理学生物化学，(2001)39：603-614；和Gutensohn等人；植物学报(2013)75，351-363。
因此，根据本发明的另一目的，提供了一种生产香叶醇、香叶醛、橙花醛、香茅醇和香茅醛中的至少一种的单萜的方法，所述方法包括提供本发明的基因改造木本植物，从所述木本植物中萃取所述单萜，从而产生选自于由下述所组成的群组的至少一种单萜：香叶醇、香叶醛、橙花醛、香茅醇、和香茅醛。
还考虑了本发明的一些实施例的植物(例如木本植物)的加工产品，包括但不限于装饰品、木材或木柴、木炭、丸、纸浆、纸、锯木厂、家具、建筑材料、染料、覆盖物、肥料、以及用于蜂蜜的花蜜和油为驱虫剂、驱蚊剂、农药、燃料、食品、饲料、饮料、糖果、牙膏、化妆品、香水、肥皂、洗涤剂、防腐剂、药用和药物工业。
如本文所用术语"约"是指10％。
如本文所用术语“包括(comprises)”、“包括(comprising)”、“包括(includes)”、“包含(including)”、“具有(having)”及其词形变化是指“包括但不限于”。
如本文所用术语“由......组成(essentially consisting of)”是指“包括但不限于”。
如本文所用术语“基本上由......组成(essentially consisting of)”是指组合物、方法或结构可包括额外的成分、步骤及/或部件，但只有当额外的成分、步骤及/或部件实质上不改变所要求保护的组合物、方法或结构的基本特征及新特征。
本文所使用的单数型式“一”、“一个”及“至少一”包括复数引用，除非上下文另有明确规定。例如，术语“一化合物”或“至少一种化合物”可以包括多个化合物，包括其混合物。
在整个本申请中，本发明的各种实施例可以以一个范围的型式存在。应当理解，以一范围型式的描述仅仅是因为方便及简洁，不应理解为对本发明范围的硬性限制。因此，应当认为所述的范围描述已经具体公开所有可能的子范围以及该范围内的单一数值。例如，应当认为从1到6的范围描述已经具体公开子范围，例如从1到3，从1到4，从1到5，从2到4，从2到6，从3到6等，以及所数范围内的单一数字，例如1、2、3、4、5及6，此不管范围为何皆适用。
每当在本文中指出数值范围，是指包括所指范围内的任何引用的数字(分数或整数)。术语，第一指示数字及第二指示数字"之间的范围”及第一指示数字"到”第二指示数字"的范围"在本文中可互换，并指包括第一及第二指示数字，及其间的所有分数及整数。
如本文所用的术语「方法(method)」指的是用于完成一特定任务的方式(manner)，手段(means)，技术(technique)和程序(procedures)，包括但不限于，那些方式，手段，技术和程序，其是已知的，或是从已知的方式，手段，技术或程序很容易地被化学，药理，生物，生化及医学领域从业者所开发。
当提及特定的序列表时，这样的参考数据应被理解为也包括基本上对应于其互补序列的序列，包括由于例如测序错误、复制错误或导致碱基置换的其他改变而导致的次要序列变异、碱基缺失或碱基添加，条件是这些变异的频率在50个核苷酸中少于1个，或者100个核苷酸中少于1个，或者200个核苷酸中少于1个，或者500个核苷酸中少于1个，小于1个1000个核苷酸中少于1个，或者5,000个核苷酸中少于1个，或者10,000个核苷酸中少于1个。
应该理解的是，本发明中的特定特征，为清楚起见，在分开的实施例的内文中描述，也可以在单一实施例的组合中提供。相反地，本发明中，为简洁起见，在单一实施例的内文中所描述的各种特征，也可以分开地、或者以任何合适的子组合、或者在适用于本发明的任何其他描述的实施例中提供。在各种实施例的内文中所描述的特定特征，并不被认为是那些实施方案的必要特征，除非该实施例没有那些组件就不产生作用。
作为上文描述的各种实施例和本发明的目的和在以下部分的权利要求将从下列实验例中得到实验支持。
实验例
现在参考以下实验例，其与上述描述一起以非限制性方式说明本发明的一些实施例。
通常，本文使用的命名法和本发明中使用的实验室程序包括分子、生化、微生物和重组DNA技术。这些技术在文献中有详细解释。参见例如“分子复制：实验室手册”，Sambrook等人，(1989)；“当前分子生物学方法”，卷I-III奥苏贝尔R.M.编辑，(1994)；Ausubel等人，“分子生物学实验方法”，John Wiley和Sons，马里兰州巴尔的摩(1989)；派尔巴尔，“分子复制实用指南”，John Wiley和Sons，纽约(1988年)；。Watson等，“重组DNA”，科学美国书籍，纽约；Birren等人，“基因组分析：实验室手册丛书”，卷1-4，冷泉港实验室出版社，纽约(1998年)；所阐述方法于美国专利号4,666,828；4,683,202；4,801,531；5,192,659以及5,272,057；“细胞生物学：实验室手册”，卷I-III Cellis，J.E编辑。(1994)；“动物细胞的培养-基本技术手册”，Freshney.WILEY-利斯，N.Y。(1994)，第三版；“当今免疫学”卷I-III ColiganJ.E.编(1994)；Stites等人(编)，“基础和临床免疫学”(第8版)，Appleton&&Lange,Norwalk，CT(1994)；Mishell和Shiigi(编)“在细胞免疫学所选方法”，W.H.Freeman公司，纽约(1980年)。可用的免疫测定在专利和科学文献中广泛描述，参见例如美国专利号3,791,932；3,839,153；3,850,752；3,850,578；3,853,987；3,867,517；3,879,262；3,901,654；3,935,074；3,984,533；3,996,345；4,034,074；4,098,876；4,879,219；5,011,771及5,281,521；“寡核苷酸合成”Gait.M.J编辑，(1984)；“核酸杂交”Hames，BD，和Higgins SJ，编着(1985)；“转录和转译”Hames，BD，和Higgins SJ，编(1984)；“动物细胞培养”Freshney，(1986年)；“固定化细胞和酶”IRL出版社，(1986)；“分子复制实用指南”派尔巴尔，B.，(1984)和“酶学方法”卷1-317，学术出版社；“PCR方案：指南方法和应用”，科学出版社，圣地亚哥，加利福尼亚州(1990年)；马沙克等人，“蛋白质纯化和鉴定策略-实验室课程手册”冷泉港实验室出版社(1996年)。所有参考数据都通过引用并入，如同在此完全阐述。本文中提供了其他一般参考数据。认为其中的程序在本领域中是众所周知的，并且为了读者的便利而提供。其中包含的所有内容通过引用并入本文。
实验例1
香叶醇和香茅醛增加赤桉对桉树釉小蜂的抗性
材料和方法
准备多个单萜圆盘-100微升的香叶醇、香茅醛、桉叶油素(也称为1,8-桉叶油醇，1,8-环氧对对薄荷烷)的纯单萜的多个溶液或矿物油(Sigma-Aldrich Cat。Nos。G9698,27470，C80601或M5904)，分别与5毫升凡士林混合。然后使用刮刀将混合溶液涂布在直径为20mm的滤纸盘(Whatman 3毫米纤维素色谱纸，Sigma-Aldrich Cat.No.Z742422)上。
自由选择实验-所述自由选择实验，多个虫瘿可以自由选择感染哪个植物，在一个给定的网笼里。用桉树釉小蜂在80厘米×100厘米×150厘米的三个网笼于温室(28±2℃)中进行，如Bleeker等人[植物生理学(2009)151(2)：925-935]所述。具有以下修改。四株赤桉3个月大的幼苗随机放置在每个网笼中，10个具有香叶醇、香茅醛、桉叶油素(1,8-桉叶素，用作对照组)或矿物油(作为对照组)的圆盘通过金属线连接到每棵幼苗的树枝上(每个树苗10个分支)(见图2)。所以每个树苗都有10个圆盘并附有多个处理方法的一种。接下来，五百只桉树釉小蜂的雌性成年蜂被释放在每个网笼的中间。一周后，从幼苗的树枝上去除圆盘，将幼苗从网笼中取出，然后将桉树幼苗转移到无虫网笼，一个四面为50目防虫网的户外周边。植物在接种后保存在净室中6周。在六周结束时，通过计数处理的幼苗上发育的虫瘿数来评估感染程度。
结果
为了测试香叶醇和香茅醛对赤桉的病虫害抗性的影响，将幼苗用滤纸以香叶醇、香茅醛、矿物油对照组或桉叶油素对照组(大多数桉树种中丰富的一单萜油)处理，并在自由选择实验设置中受到桉树釉小蜂感染。从下面的表1和图3可以看出，与用矿物油处理相比，用桉叶油素的处理对桉树釉小蜂产卵没有负面影响，甚至导致被感染的叶子数量略有增加。与此形成鲜明对比的是，与矿物油对照组和桉叶油素对照组相比，用香叶醇或香茅醛处理导致桉树釉小蜂的产卵显着降低，受感染的叶片数与每叶片被感染的虫瘿数目两者都减少。
总而言之，用香叶醇或香茅醛处理显着增加了赤桉对桉树釉小蜂感染的抗性。
表1：自由选择实验的结果
实验例2A
以香叶醇合成酶(GS)、香叶醇还原酶(GR)、香叶醇脱氢酶(GD)及/或柠檬醛还原酶(CR)复制并转殖桉属植物
材料和方法
复制-香叶醇合成酶(GS)从罗勒(SEQ ID NO：36)，香叶醇还原酶(GR)从酿酒酵母(SEQ ID NO：47)，香叶醇脱氢酶(GD)从罗勒(SEQ ID NO：58)的编码序列和表现盒合成并克隆到pBI121在T-DNA的右边界和左边界之间的二元载体中(GenBank：AF485783.1)。每种酶的编码序列根据桉树密码子的使用进行了优化。每个二元载体含有NPTII选择基因(SEQ IDNO：72)。将柠檬醛还原酶(CR)，即来自氧化葡糖杆菌细菌的碱基还原酶GTE1(WP_011252080)(SEQ ID NO：79)编码序列克隆到NPTII盒中。
合成了5种不同的构造(图4)：构造A为香叶醇合成酶(GS)表现；构造B为香叶醇合成酶(GS)和香叶醇还原酶(GR)表现；构造C为香叶醇合成酶(GS)和香叶醇还原酶(GR)和香叶醇脱氢酶(GD)表现以及构造D为香叶醇合成酶(GS)和香叶醇脱氢酶(GD)表现以及构造D为香叶醇合成酶(GS)和香叶醇脱氢酶(GD)和柠檬醛还原酶(CR)表现。
在所有构造中，香叶醇合成酶(GS)被克隆到花椰菜花叶病毒(CaMV)35S启动子(SEQ ID NO：69)和Omega 5'-UTR的下游。
在构造A中，将香叶醇合成酶(GS)克隆至胭脂碱合酶(NOS)基因终止子(SEQ IDNO：64)的上游，并且在构造B、C和D中，将香叶醇合成酶(GS)克隆至氨基酸合成酶基因终止子(AGS)的上游(SEQ ID NO：66)。
在构造B和C中，香叶醇还原酶(GR)被克隆到玄参花叶病毒亚基因组转录(sgFiMV)启动子(SEQ ID NO：70)和Omega 5'UTR的下游。
在构造B中，将香叶醇还原酶(GR)克隆到NOS终止子(SEQ ID NO：64)的上游，并在上游的构造C中克隆到八碱基合成酶基因终止子(OCS)(SEQ ID NO：67)。
在构造C和D中，将香叶醇脱氢酶(GD)克隆到草莓静脉条带病毒(SVBV)启动子(SEQID NO：71)和烟草蚀刻病毒5'-UTR的下游，NOS终止子(SEQ ID NO：64)的上游。
在构造E中，将柠檬醛还原酶，如来自氧化葡糖杆菌(WP_011252080)(SEQ ID NO：79)的编码序列的烯酸还原酶GTE1克隆在NPTII盒的上游，在NPTII盒下游，在GS盒的上游和GS盒的下游。
转化与选择-农杆菌EAH105用构造A、B、C、D或E进行电转化，在卡那霉素平板(100微克/毫升)上选择48小时，并用于垂尾桉(E.urophylla)与细叶桉(E.Tereticornis)的杂交植物的转殖。使用基本上如Prakash等，植物-生物体外细胞开发，45：429-434,2009中所述的方案进行转化。简言之，垂尾桉(E.urophylla)与细叶桉(E.Tereticornis)杂交的芽在由3％(w/v)蔗糖和0.8％(w/v)琼脂组成的Murashige和Skoog(MS)基础盐培养基上体外繁殖。通过标准方案在选择板中使用卡那霉素在整个单一芽中进行基因改造植物选择。垂尾桉(E.urophylla)与细叶桉(E.Tereticornis)杂交的野生型(WT)或用空pBI121载体转化的垂尾桉(E.urophylla)与细叶桉(E.Tereticornis)杂交型作为对照组，然后通过PCR分析植物叶片，以确认基因组中存在T-DNA，并通过RT-PCR使用特异性引子SEQ ID NO：73-74,75-76和77-78分别检测香叶醇合成酶(GS)、香叶醇还原酶(GR)、香叶醇脱氢酶(GD)及/或柠檬醛还原酶(CR)转录物。阳性植物后来扎根并通过标准方案繁殖。从每个构造中选出5个不同的转化事件进行进一步分析。
实验例2B
以从植物来源的香叶醇还原酶(GR)复制并转殖桉属植物
材料和方法
复制-香叶醇还原酶(GR)是从植物取得的。具体来说，来自橡胶树(巴西橡胶树)(SEQ ID NO:82)、来自阿拉伯芥(SEQ ID NO：84)、来自西红柿(西红柿)(SEQ ID NO：86)、来自巨桉(SEQ ID NO：88)、或来自野蔷薇(SEQ ID NO：90)的12-氧代植物二烯酸还原酶编码序列和表现盒合成并克隆到T-DNA的右边界和左边界之间的pBI121二元载体(GenBank：AF485783.1)中。
过氧化物酶体羧基端三氨基酸信号(SRL)被从每个编码序列中剔除。向蛋白质序列的N-端添加叶绿体转运肽(SEQ ID NO：91)。
此外，香叶醇合成酶(GS)从罗勒(SEQ ID NO：36)以及香叶醇脱氢酶(GD)从罗勒(SEQ ID NO：58)的编码序列和表现盒合成并克隆到pBI121在T-DNA的右边界和左边界之间的二元载体中(GenBank：AF485783.1)，如上面实验例2A中详细描述的。将柠檬醛还原酶(CR)，即来自氧化葡糖杆菌的碱基还原酶GTE1(WP_011252080)(SEQ ID NO：79)编码序列克隆到NPTII盒中，如上面实验例2A中详细描述的。每种酶的编码序列根据桉树密码子的使用进行了优化。每个二元载体含有NPTII选择基因(SEQ ID NO：72)。
如上述实验例2A和图4中详细描述的，合成了五种不同的构造。
转化与选择-农杆菌EAH105用构造A、B、C、D或E进行电转化，如上面实验例2A中详细描述的。
结果
使用源自植物来源的香叶醇还原酶(GR)酶测试将香叶醇转化为香茅醇。不同的还原酶被测试。首先使用源自橡胶树(巴西橡胶树)的12-氧代植物二烯酸还原酶(SEQ ID NO：81)(SEQ ID NO：81)，在这之前已经显示在体外将香叶醇转化为香茅醛[Yuan TT等人，天然产物和生物勘探，(2011)1(3)：108-111]。另外，测试了来自其他植物来源的12-氧代植物二烯酸还原酶的同源物(SEQ ID NO：83,85,87和89)。为了在叶绿体中引导还原酶的表现，向蛋白质的N-端添加叶绿体转运肽(SEQ ID NO：91)，过氧化物酶体羧基端三氨基酸信号(SRL)被剔除。源自植物来源的香叶醇还原酶(GR)(例如橡胶树香叶醇还原酶(GR))在桉树植物中表现并分析单萜特性。
值得注意的是，DNA序列被优化为桉树密码子使用，如密码子使用数据库-www.kazusa.或.jp/codon/.。桉树密码子的使用也是通过从完整的桉树转录组文库计数每个密码子的速率来产生的。本发明人还利用具有反向转译特征的计算器软件来获得优化的DNA。
实验例2C
柠檬醛还原酶在桉树的表现
材料和方法
复制-香叶醇还原酶(GR)及香叶醇脱氢酶(GD)从植物或单细胞生物体获得，并如上详细实验例2A和2B所述进行复制。
此外，香叶醇合成酶(GS)及香叶醇脱氢酶(GD)如上实验例2A所详细描述的进行复制。将柠檬醛还原酶(CR)，即来自氧化葡糖杆菌的碱基还原酶GTE1(WP_011252080)(SEQ IDNO：79)的编码序列克隆到NPTII盒中，如上面实验例2A中详细描述的。每种酶的编码序列根据桉树密码子的使用进行了优化。每个二元载体含有NPTII选择基因(SEQ ID NO：72)。
如上述实验例2A和图4中详细描述的，合成了五种不同的构造。
转化与选择-农杆菌EAH105用构造A、B、C、D或E进行电转化，如上面实验例2A中详细描述的。
结果
文献教导，柠檬醛还原酶可将柠檬醛基质在体外转化为香茅醛。本发明人提出，如图8所示，还原酶可能能够通过减少C＝C双键使成为C-C(--OH)＝O，将体内香叶醇转化为香茅醇以及将柠檬醛转化为香茅醛。使用来自氧化葡糖杆菌的碱基还原酶GTE1(WP_011252080)(SEQ ID NO：79)通过柠檬醛还原酶将柠檬醛转化为香茅醛的方法被测试，先前已经显示在体外将柠檬醛转化为香茅醛[Yin B.等人，分子生物技术，(2008)38(3)：241-245]。了引导还原酶在叶绿体中的表达，向蛋白质的N末端添加叶绿体转运肽(SEQ ID NO：91)。葡萄糖氧化杆菌细菌的GTE1与GS组成型表达，并分析单萜谱。为了引导还原酶在叶绿体中的表现，向蛋白质的N端添加叶绿体转运肽(SEQ ID NO：91)。葡萄糖氧化杆菌的GTE1与GS组成表现，并分析单萜特性。
值得注意的是，DNA序列被优化为桉树密码子使用，如密码子使用数据库-www.kazusa.或.jp/codon/.。桉树密码子的使用也是通过从完整的桉树转录组文库计数每个密码子的速率来产生的。本发明人还利用具有反向转译特征的计算器软件来获得优化的DNA。
实验例3
香叶醇合成酶(GS)、香叶醇还原酶(GR)及/或香叶醇脱氢酶(GD)的异源表现修饰桉树的单萜特性
材料和方法
油的萃取-从2个月龄的野生型(WT)和基因改造植物获得精油。具体地说，将新鲜叶子称重，将0.2克-0.4克置于玻璃小瓶中并保持在-20℃。为了计算含水量，称重来自每个植物的另外的一叶子，在60℃下脱水48小时并再次称重。用二氯甲烷进行单萜萃取，然后超声处理。作为内部标准，将联苯加入所有样品中。
气相色谱-质谱(GC-MS)分析-使用含有使用Supelco蜡柱(60m×0.25mm id，膜厚0.25μm)的火焰离子化检测器的Shimadzu GC-14B气相色谱仪进行GC分析，根据以下程序：70℃4分钟，以4℃/分钟升温至220℃5分钟；承载气体为氮气。通过基于计算器的峰面积归一化计算确定不同成分的相对量，无任何校正因子。将获得的峰与从GC-MS获得的数据进行比较。
使用装有熔融石英(BP 21)毛细管柱(30m×0.25mm i.d.，膜厚度0.25μm)的QMass 910 Perkin-Elmer质谱仪进行MS分析。分析条件如下：注射器和检测器温度分别为230℃和250℃；烘箱温度编程以5℃/分钟从40℃(等温7分钟)至190℃(等温20分钟)；承载气体为氦气。化合物鉴定基于使用库搜索系统HP-5872(Hewlett-Packard)的质谱的计算器来配对[Batish等人，2006]。
桉树油的化学组成通过GC-MS和装有二乙二醇(AB-Innowax 7031428，日本)的60m×0.25mm×0.25mWCOT柱的火焰离子化检测(FID)检测器测定。载气为155kPa柱压，流速为3毫升/分钟。注射器和检测器温度保持在260℃。将样品(0.2毫升)以80:1的分流比注入柱中。在60-260℃的线性温度程序下以3℃/分钟实现成分分离，然后在260℃保持10分钟，总运行时间为40分钟。使用面积归一化方法计算百分比组成，假设检测器的响应相等。通过将峰面积计算与用标准完成的标准曲线进行比较来进行定量(香叶醇、香茅醛、桉叶油素或柠檬醛Sigma-Aldrich，目录号分别为：G9698,27470，C80601，C83007)。然后在装有相同色谱柱的同样的Shimadzu仪器上分析样品并按照与上述相同的温度程序。使用的MS参数为：电离电压(EI)70eV，峰宽2s，质量范围40-850m/z和检测器电压1.5伏特。使用国家标准与技术研究所(NIST12或NIST62)和Wiley 229质谱图谱库(Kumar等，2012)从其质谱数据中分析了物质特性。
结果
为了测试香叶醇合成酶(GS)、香叶醇还原酶(GR)及/或香叶醇脱氢酶(GD)的异源表现在桉树的单萜特性的效果，从野生型(WT)基因改造植物的转录构造A，B，C或D提取的精油通过气相色谱-质谱(GC-MS)分析。
从图5可以看出，从垂尾桉(E.urophylla)与细叶桉(E.Tereticornis)杂交的野生型(WT)植物的叶片所提取的精油含有丰富的桉叶油素和α-蒎烯，而香叶醇、香叶醛(α柠檬醛)和橙花醛(β柠檬醛)含量不高。可区别的，用构造C转殖的基因改造植物(编码香叶醇合成酶(GS)、香叶醇还原酶(GR)和香叶醇脱氢酶(GD)，项目POC-1-9A)具有不同的芳香成分，与野生型(WT)相比，具有较强的柠檬气味，由一组实验室人员通过气味和个人印象所指出。事实上，从基因改造植物的叶子所提取的精油(项目POC-1-9A)含有较高含量的香叶醇、香叶醛和橙花醛(分别为1.27、0.56和0.34毫克/总净重)，以及降低含量的桉叶油素和α-蒎烯。有趣的是，从野生型(WT)和基因改造植物的叶片中所提取的精油不含香茅醛痕迹。
与野生型(WT)相比，表现香叶醇合成酶(GS)(构造A)的植物含有较高浓度的香叶醇。与野生型(WT)相比，表现香叶醇合成酶(GS)和香叶醇还原酶(GR)(构造B)的植物含有较高的香叶醇和香茅醇浓度。表达香叶醇合成酶(GS)和香叶醇脱氢酶(GD)(构造D)的植物含有较高的香叶醇和柠檬醛浓度。
实验例4
香叶醇合成酶(GS)的异源表现增强单萜在桉属植物的表现
材料和方法
复制-
从罗勒(SEQ ID NO：36)取得的香叶醇合成酶(GS)编码序列及合成盒进行合成和复制，如上文实验例2A所述。
转化与选择-如上述实验例2A所述进行。
油的萃取-如上述实验例3所述进行。
气相色谱-质谱(GC-MS)分析-GC分析上述实验例3所述进行。
具体来说，将生成的三植株中的每一植株的叶片组织用于GC-MS分析。通过MS进行萜烯鉴定，并使用FID反应进行定量分析，与通过已知浓度的标准产生的标准曲线相比。联苯作为内部标准。野生型非基因改造桉树作为对照组。
实时聚合酶链锁反应(qPCR)
RNA的提取油植物/真菌总RNA纯化试剂盒(NorgenBiotek Cat#25800)进行，如制造流程中所述。测试每一行的一个植物。使用高容量cDNA逆转录试剂盒(AppliedBiosystems)提取cDNA。用双蒸馏水(1:1)稀释cDNA，每次反应使用2微升。每个样品与香叶醇合成酶(GS)基因(在上文实验例2中提供)的多个引子反应。对于每个样品，进行了3次技术上重复。将测试基因的基因表现与看家基因TEF(延伸因子)的表达程度进行比较，以降低技术错误的影响，并将其表示为2-ΔCT(ΔCT＝CT(参考基因)-CT(目标基因))。
结果
分析表现香叶醇合成酶(GS)的桉树，分析单萜特性(通过GC-MS)和基因表达程度(通过qPCR)。测试三个基因改造的项目(A、B和C)。
如图6所示，香叶醇、顺式柠檬醛和反式柠檬醛单萜在所有香叶醇合成酶(GS)基因改造株中被生产，而不是在野生型(WT)中。而在桉树(α-蒎烯，柠檬烯和桉叶油素)中天然产生的单萜的浓度则是野生型(WT)高于基因改造植物。
实时PCR结果指出香叶醇合成酶(GS)基因在所有项目中表现(图7)。在所有测试项目中检测到香叶醇合成酶(GS)表现，并且比内源性随机单萜合成酶高约10倍(图7)。
总之，香叶醇合成酶(GS)在桉树中的有效表现导致了香叶醇、顺式柠檬醛和反式柠檬醛单萜的显着生产。
实验例5
香叶醇合成酶(GS)、香叶醇还原酶(GR)、香叶醇脱氢酶(GD)及/或柠檬醛还原酶(CR)的异源表现保护桉属植物免于赤桉木虱感染
材料和方法
全植株分析-三个月龄的野生型(WT)，空载体对照(对照组)及五个独立转化项目的基因转殖垂尾桉(E.urophylla)与细叶桉(E.Tereticornis)的杂交植株，各株生长在温室中，每天24℃，40-60％相对湿度(RH)和16小时光照。每个植株保持在一单独的防虫网箱中，并且每个植株接种有在培养物中预养的50只成虫及/或幼虫。在接种赤桉木虱后，每天记录以下参数维持40天：
1.每个植株的活虫数量；
2.不在植株上的活虫数；
3.死虫数量
4.变形、功能失调或非生殖有害生物的数量；
5.产卵数量；
6.幼虫孵出数量；
7.蜡状保护罩数量；
8.落叶数量；
9.枯死枝数量；
10.死亡植株数量。
单一叶片测定-三个月龄的野生型(WT)、对照组及基因转殖垂尾桉(E.urophylla)与细叶桉(E.Tereticornis)杂交的每一植株中五个植株的每一个在24℃，40-60％RH和16小时光照的温室中生长。每个植株包含在一个单独的防虫网箱中，每个植株的5个叶子覆盖着夹式防虫网箱，由由亚利桑那大学昆虫科学中心描述的：Education Outreachinsected.arizona.edu/gg/resource/clip.html.。十只成虫放置于每个叶子的夹子内，夹子可以夹在叶子喂食昆虫，而不会扰乱昆虫或植物。这些笼子提供了一种简单的方式来隔离一个或多个吸吮害虫或其他小昆虫进行调查和观察。
在接种赤桉木虱后，每天记录以下参数维持40天：
1.死亡率((昆虫总数-活昆虫)/昆虫总数)×100；
2.变色叶片的程度、数量和百分比；
3.虫卵或卵簇数量。
结果
为了评估香叶醇合成酶(GS)、香叶醇还原酶(GR)、香叶醇脱氢酶(GD)及/或柠檬醛还原酶(CR)的异源表现的能力以保护桉属植物抵抗来自赤桉木虱的感染，野生型(WT)及基因转殖垂尾桉(E.urophylla)与细叶桉(E.Tereticornis)杂交的表现构造A、B、C、D或E的植物共同与幼虫及/或赤桉木虱成虫生长在温室中的防虫网箱中。防虫网箱保护接种物，同时防止外来害虫进入网箱中。在接种赤桉木虱后，对蜡状保护罩的评估包括在叶片的上表面或下表面上出现，其与植物竞争光合作用产物和植物合成糖。进一步检查植物以确定在包括叶、生殖器官、分枝和茎在内的植物组织上的虫卵或卵簇数量。抗性植物的主要目标是可以减少症状，减少植物表面上的有害生物数量，减少植物上的虫卵或卵簇数量及/或推迟或改变幼虫的生长发育。在一些情况下，抗性植物可能简单地导致接触的害虫变得无法行动或无法繁殖而不会引起害虫死亡。
与对照组相比，转录所述构造的基因改造植物表现出较少的症状，较少的赤桉木虱活体标本，较少的虫卵和较少的卵簇，及/或较少新孵出的幼虫。此外，基因改造植物植株对于与赤桉木虱感染的对照组和野生型(WT)植物相比，更能抵抗赤桉木虱感染，其显示较少的植物生长抑制、较少的落叶和其他组织损伤，例如蜡状保护罩。
实验例6
香叶醇合成酶(GS)、香叶醇还原酶(GR)、香叶醇脱氢酶(GD)及/或柠檬醛还原酶(CR)的异源表现保护桉属植物免于桉突眼蝽感染
材料和方法
如上文实验例5所述。在桉突眼蝽接种后，每天记录以下参数40天：
1.每个植株的活虫数量；
2.不在植株上的活虫数；
3.死虫数量
4.变形、功能失调或非生殖有害生物的数量；
5.产卵数量；
6.幼虫孵出数量；
7.落叶数量；
8.叶片变色数量；
9.每片感染的叶片其褪色斑块数；
10.枯死枝数量；
11.死亡植株数量。
单一叶片测定-如上文实验例5所述。在桉突眼蝽接种后，每天记录以下参数40天：
1.死亡率((昆虫总数-活昆虫)/昆虫总数)×100；
2.变色叶片的程度、数量和百分比；
3.虫卵或卵簇数量。
结果
为了评估香叶醇合成酶(GS)、香叶醇还原酶(GR)、香叶醇脱氢酶(GD)及/或柠檬醛还原酶(CR)的异源表现的能力以保护桉属植物抵抗来自桉突眼蝽(Tp或绿色盾蝽)的感染，野生型(WT)及基因转殖垂尾桉(E.urophylla)与细叶桉(E.Tereticornis)杂交的表现构造A、B、C、D或E的植物共同与幼虫及/或绿色盾蝽成虫生长在温室中的防虫网箱中。防虫网箱保护接种物，同时防止外来害虫进入网箱中。在接种绿色盾蝽后，评估叶片外观的损伤。叶片损伤可以看作是青叶状的斑点或在叶子上下表面的区域。这些青叶状地区的形成为绿色盾蝽吮吸动作的直接及/或间接结果。进一步检查植株以确定在植物组织(包括叶片、生殖器官、分枝和茎)上的绿色盾蝽虫卵和卵簇数以及在植物上或其附近发现的死亡或功能失调的绿色盾蝽标本的数量。抗性植物的主要目标可以是减少症状、减少植物表面上的有害生物数量、减少植物上的虫卵或卵簇数量及/或推迟或改变幼虫的生长发育。在一些情况下，抗性植物可能简单地导致接触的害虫变得无法行动或无法繁殖而不会引起害虫死亡。
实验例7
香叶醇合成酶(GS)、香叶醇还原酶(GR)、香叶醇脱氢酶(GD)及/或柠檬醛还原酶(CR)的异源表现保护桉属植物免于桉树枝瘿釉小蜂以及桉树釉小蜂感染
材料和方法
非选择性生物测定-野生型(WT)，空载体对照(对照组)及五个独立转化项目的基因转殖垂尾桉(E.urophylla)与细叶桉(E.Tereticornis)的杂交植株，各株生长在温室中，每天24℃，40-60％相对湿度(RH)和16小时光照。将20只成年的小蜂放置于一叶片网箱内，其由具有一网状盖的猎鹰50毫升管制成。每个叶片网箱使用一夹具连接到基因转殖桉树或野生型(WT)桉树的一叶片上。三个叶片网箱连接到每个植株。接种后6天或所有成虫死亡后取出叶片网箱。在接种后1、2、3和4个月记录虫瘿数量、虫瘿尺寸、每10个虫瘿生成幼虫数以及新生长成虫(由出口孔)。
结果
为了评估香叶醇合成酶(GS)、香叶醇还原酶(GR)、香叶醇脱氢酶(GD)及/或柠檬醛还原酶(CR)的异源表现的能力以保护桉属植物抵抗来自桉树枝瘿釉小蜂或桉树釉小蜂的感染，野生型(WT)及基因转殖垂尾桉(E.urophylla)与细叶桉(E.Tereticornis)杂交的表现构造A、B、C、D或E的植物共同与幼虫及/或瘿蜂成虫生长在温室中的防虫网箱中。防虫网箱保护接种物，同时防止外来害虫进入网箱中。在接种瘿蜂后，评估虫瘿出现在叶脉和叶片中的情况。植物被检查以确定虫瘿数量，虫瘿尺寸(最大长度)、虫瘿生成幼虫数以及新生长的成熟瘿蜂的数量。
与对照组相比，转录有所述构造的基因改造植物表现出较少的较小体积的虫瘿。此外，在基因改造植物植株中，检测到多个较小体积的虫瘿较少或无法孵化为幼虫，与对照相比，较少或不会出现成熟瘿蜂。因此，基因改造植物植株对桉树枝瘿釉小蜂以及桉树釉小蜂感染都更具抗性，相较于对照组及野生型(WT)，后两者皆被完全发育的虫瘿感染。
虽然本发明结合其具体实施例而被描述，显而易见的是，许多替代、修改及变化对于那些本领域的技术人员将是显而易见的。因此，其意在包括落入所附权利要求书的范围内的所有替代、修改及变化。
在本说明书中提及的所有出版物、专利及专利申请以其整体在此通过引用并入本说明书中。其程度如同各单独的出版物、专利或专利申请被具体及单独地指明而通过引用并入本文中。此外，所引用的或指出的任何参考文献不应被解释为承认这些参考文献可作为本发明的现有技术。本申请中标题部分在本文中用于使本说明书容易理解，而不应被解释为必要的限制。
相关技术
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<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 567
<212> PRT
<213> Ocimum basilicum
<400> 1
Met Ser Cys Ala Arg Ile Thr Val Thr Leu Pro Tyr Arg Ser Ala Lys
1 5 10 15
Thr Ser Ile Gln Arg Gly Ile Thr His Tyr Pro Ala Leu Ile Arg Pro
20 25 30
Arg Phe Ser Ala Cys Thr Pro Leu Ala Ser Ala Met Pro Leu Ser Ser
35 40 45
Thr Pro Leu Ile Asn Gly Asp Asn Ser Gln Arg Lys Asn Thr Arg Gln
50 55 60
His Met Glu Glu Ser Ser Ser Lys Arg Arg Glu Tyr Leu Leu Glu Glu
65 70 75 80
Thr Thr Arg Lys Leu Gln Arg Asn Asp Thr Glu Ser Val Glu Lys Leu
85 90 95
Lys Leu Ile Asp Asn Ile Gln Gln Leu Gly Ile Gly Tyr Tyr Phe Glu
100 105 110
Asp Ala Ile Asn Ala Val Leu Arg Ser Pro Phe Ser Thr Gly Glu Glu
115 120 125
Asp Leu Phe Thr Ala Ala Leu Arg Phe Arg Leu Leu Arg His Asn Gly
130 135 140
Ile Glu Ile Ser Pro Glu Ile Phe Leu Lys Phe Lys Asp Glu Arg Gly
145 150 155 160
Lys Phe Asp Glu Ser Asp Thr Leu Gly Leu Leu Ser Leu Tyr Glu Ala
165 170 175
Ser Asn Leu Gly Val Ala Gly Glu Glu Ile Leu Glu Glu Ala Met Glu
180 185 190
Phe Ala Glu Ala Arg Leu Arg Arg Ser Leu Ser Glu Pro Ala Ala Pro
195 200 205
Leu His Gly Glu Val Ala Gln Ala Leu Asp Val Pro Arg His Leu Arg
210 215 220
Met Ala Arg Leu Glu Ala Arg Arg Phe Ile Glu Gln Tyr Gly Lys Gln
225 230 235 240
Ser Asp His Asp Gly Asp Leu Leu Glu Leu Ala Ile Leu Asp Tyr Asn
245 250 255
Gln Val Gln Ala Gln His Gln Ser Glu Leu Thr Glu Ile Ile Arg Trp
260 265 270
Trp Lys Glu Leu Gly Leu Val Asp Lys Leu Ser Phe Gly Arg Asp Arg
275 280 285
Pro Leu Glu Cys Phe Leu Trp Thr Val Gly Leu Leu Pro Glu Pro Lys
290 295 300
Tyr Ser Ser Val Arg Ile Glu Leu Ala Lys Ala Ile Ser Ile Leu Leu
305 310 315 320
Val Ile Asp Asp Ile Phe Asp Thr Tyr Gly Glu Met Asp Asp Leu Ile
325 330 335
Leu Phe Thr Asp Ala Ile Arg Arg Trp Asp Leu Glu Ala Met Glu Gly
340 345 350
Leu Pro Glu Tyr Met Lys Ile Cys Tyr Met Ala Leu Tyr Asn Thr Thr
355 360 365
Asn Glu Val Cys Tyr Lys Val Leu Arg Asp Thr Gly Arg Ile Val Leu
370 375 380
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Glu Ala Lys Trp Phe Asn Gly Gly Ser Ala Pro Lys Leu Glu Glu Tyr
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Ile Glu Asn Gly Val Ser Thr Ala Gly Ala Tyr Met Ala Phe Ala His
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Ile Phe Phe Leu Ile Gly Glu Gly Val Thr His Gln Asn Ser Gln Leu
435 440 445
Phe Thr Gln Lys Pro Tyr Pro Lys Val Phe Ser Ala Ala Gly Arg Ile
450 455 460
Leu Arg Leu Trp Asp Asp Leu Gly Thr Ala Lys Glu Glu Gln Glu Arg
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Gly Asp Leu Ala Ser Cys Val Gln Leu Phe Met Lys Glu Lys Ser Leu
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Thr Glu Glu Glu Ala Arg Ser Arg Ile Leu Glu Glu Ile Lys Gly Leu
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Ser Ile Ile Lys Val Ala Leu Asn Met Ala Arg Ala Ser Gln Val Val
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<213> Ocimum basilicum
<400> 2
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Leu His Gly Glu Val Ala Gln Ala Leu Asp Val Pro Arg His Leu Arg
210 215 220
Met Ala Arg Leu Glu Ala Arg Arg Phe Ile Glu Gln Tyr Gly Lys Gln
225 230 235 240
Ser Asp His Asp Gly Asp Leu Leu Glu Leu Ala Ile Leu Asp Tyr Asn
245 250 255
Gln Val Gln Ala Gln His Gln Ser Glu Leu Thr Glu Ile Ile Arg Trp
260 265 270
Trp Lys Glu Leu Gly Leu Val Asp Lys Leu Ser Phe Gly Arg Asp Arg
275 280 285
Pro Leu Glu Cys Phe Leu Trp Thr Val Gly Leu Leu Pro Glu Pro Lys
290 295 300
Tyr Ser Ser Val Arg Ile Glu Leu Ala Lys Ala Ile Ser Ile Leu Leu
305 310 315 320
Val Ile Asp Asp Ile Phe Asp Thr Tyr Gly Glu Met Asp Asp Leu Ile
325 330 335
Leu Phe Thr Asp Ala Ile Arg Arg Trp Asp Leu Glu Ala Met Glu Gly
340 345 350
Leu Pro Glu Tyr Met Lys Ile Cys Tyr Met Ala Leu Tyr Asn Thr Thr
355 360 365
Asn Glu Val Cys Tyr Lys Val Leu Arg Asp Thr Gly Arg Ile Val Leu
370 375 380
Leu Asn Leu Lys Ser Thr Trp Ile Asp Met Ile Glu Gly Phe Met Glu
385 390 395 400
Glu Ala Lys Trp Phe Asn Gly Gly Ser Ala Pro Lys Leu Glu Glu Tyr
405 410 415
Ile Glu Asn Gly Val Ser Thr Ala Gly Ala Tyr Met Ala Phe Ala His
420 425 430
Ile Phe Phe Leu Ile Gly Glu Gly Val Thr His Gln Asn Ser Gln Leu
435 440 445
Phe Thr Gln Lys Pro Tyr Pro Lys Val Phe Ser Ala Ala Gly Arg Ile
450 455 460
Leu Arg Leu Trp Asp Asp Leu Gly Thr Ala Lys Glu Glu Gln Glu Arg
465 470 475 480
Gly Asp Leu Ala Ser Cys Val Gln Leu Phe Met Lys Glu Lys Ser Leu
485 490 495
Thr Glu Glu Glu Ala Arg Ser Arg Ile Leu Glu Glu Ile Lys Gly Leu
500 505 510
Trp Arg Asp Leu Asn Gly Glu Leu Val Tyr Asn Lys Asn Leu Pro Leu
515 520 525
Ser Ile Ile Lys Val Ala Leu Asn Met Ala Arg Ala Ser Gln Val Val
530 535 540
Tyr Lys His Asp Gln Asp Thr Tyr Phe Ser Ser Val Asp Asn Tyr Val
545 550 555 560
Asp Ala Leu Phe Phe Thr Gln
565
<210> 3
<211> 574
<212> PRT
<213> Ocimum basilicum
<400> 3
Met Ser Cys Ala Arg Ile Thr Val Thr Leu Pro Tyr Arg Ser Ala Lys
1 5 10 15
Thr Ser Ile Gln Arg Gly Ile Thr His Cys Pro Ala Leu Leu Arg Pro
20 25 30
Arg Phe Ser Ala Cys Thr Pro Leu Ala Ser Ala Val Pro Leu Ser Ser
35 40 45
Thr Pro Leu Ile Asn Gly Asp Asn Ser Pro Leu Lys Asn Thr His Gln
50 55 60
His Val Glu Glu Arg Ser Ser Lys Arg Arg Glu Tyr Leu Leu Glu Glu
65 70 75 80
Thr Ala Arg Lys Leu Gln Arg Asn Asp Thr Glu Ser Val Glu Lys Leu
85 90 95
Lys Leu Ile Asp Asn Ile Gln Arg Leu Gly Ile Gly Tyr Tyr Phe Glu
100 105 110
Asp Ala Ile Asp Ala Val Leu Arg Ser Pro Phe Ser Ala Glu Glu Glu
115 120 125
Glu Asp Leu Phe Thr Ala Ala Leu Arg Phe Arg Leu Leu Arg His Asn
130 135 140
Gly Ile Gln Val Thr Pro Glu Ile Phe Leu Lys Phe Lys Asp Glu Arg
145 150 155 160
Gly Glu Phe Asp Glu Ser Asp Thr Leu Gly Leu Leu Ser Leu Tyr Glu
165 170 175
Ala Ser Asn Leu Gly Val Thr Gly Glu Glu Ile Leu Glu Glu Ala Met
180 185 190
Glu Phe Ala Glu Pro Arg Leu Arg Arg Ser Leu Ser Glu Leu Ala Ala
195 200 205
Pro Leu Arg Ser Glu Val Ala Gln Ala Leu Asp Val Pro Arg His Leu
210 215 220
Arg Met Ala Arg Leu Glu Ala Arg Arg Phe Ile Glu Gln Tyr Gly Lys
225 230 235 240
Gln Ser Asp His Asp Gly Asp Leu Leu Glu Leu Ala Ile Leu Asp Tyr
245 250 255
Asn Gln Val Gln Ala Gln His Gln Ser Glu Leu Thr Glu Ile Thr Arg
260 265 270
Trp Trp Lys Gln Leu Gly Leu Val Glu Lys Leu Gly Phe Gly Arg Asp
275 280 285
Arg Ala Leu Glu Cys Phe Met Trp Thr Met Gly Ile Leu Pro His Pro
290 295 300
Lys Tyr Ser Ser Ser Arg Ile Glu Ser Ala Lys Ala Ala Ala Leu Leu
305 310 315 320
Tyr Val Ile Asp Asp Ile Phe Asp Thr Tyr Gly Lys Met Asp Glu Leu
325 330 335
Ile Leu Phe Thr Asp Ala Ile Arg Arg Trp Asp Leu Glu Ala Met Glu
340 345 350
Gly Leu Pro Glu Tyr Met Lys Ile Cys Tyr Met Ala Leu Tyr Asn Thr
355 360 365
Thr Asn Glu Ile Cys Tyr Arg Val Leu Lys Asp Thr Gly Arg Ile Ala
370 375 380
Leu Pro Tyr Leu Lys Ser Val Trp Ile Glu Thr Ile Glu Ala Tyr Met
385 390 395 400
Val Glu Val Lys Trp Phe Ser Gly Gly Ser Ala Pro Lys Leu Glu Glu
405 410 415
Tyr Ile Glu Asn Gly Ala Ser Thr Val Gly Ala Tyr Met Val Leu Val
420 425 430
His Leu Phe Phe Leu Ile Gly Glu Gly Leu Thr His Gln Asn Val Leu
435 440 445
Phe Phe Lys Gln Lys Pro Tyr His Lys Pro Phe Ser Ala Ala Gly Arg
450 455 460
Ile Phe Arg Leu Trp Asp Asp Leu Gly Thr Ser Gln Glu Glu Glu Glu
465 470 475 480
Arg Gly Asp Met Ala Ser Ser Ile Arg Leu Phe Met Lys Glu Tyr Lys
485 490 495
Leu Ser Thr Val Glu Glu Ala Arg Ser Cys Val Leu Glu Glu Ile Ser
500 505 510
Arg Leu Trp Lys Asp Leu Asn Glu Gly Leu Ile Ser Ile Lys Asp Ala
515 520 525
Leu Pro Leu Thr Ile Val Lys Val Ala Leu Asn Ile Ala Arg Thr Ser
530 535 540
Gln Val Val Tyr Lys His Glu Gln His Thr Tyr Met Leu Ser Val Asp
545 550 555 560
Asn Tyr Val Glu Ala Leu Phe Phe Thr Pro Leu Leu Ser Ser
565 570
<210> 4
<211> 363
<212> PRT
<213> Olea europaea
<220>
<221> PEPTIDE
<222> (1)..(363)
<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸
<220>
<221> UNSURE
<222> (15)..(15)
<223> The 'Xaa' at location 15 stands for Gln, Arg, Pro, or Leu.
<400> 4
Asp Val Phe Leu Lys Phe Met Glu Lys Asn Met Lys Phe Lys Xaa His
1 5 10 15
Leu Ala Gln Asp Thr Ile Gly Leu Leu Ser Leu Tyr Glu Ala Ser Ser
20 25 30
Met Gly Ala Asn Gly Glu Glu Ile Leu Ser Glu Ala Lys Glu Phe Thr
35 40 45
Glu Ile His Leu Arg Gln Ser Met Pro Arg Leu Val Pro Gln Leu Arg
50 55 60
Arg Gln Val Ser Ser Ala Leu Glu Leu Pro Arg His Leu Arg Met Ala
65 70 75 80
Arg Leu Glu Ala Arg Arg Tyr Ile Glu Glu Tyr Gly Asn Glu Ser Asp
85 90 95
His Asp Pro Ala Val Leu Glu Leu Ala Arg Leu Asp Tyr Asn Lys Val
100 105 110
Gln Leu Gln His Gln Met Glu Leu Ala Glu Ile Thr Arg Trp Trp Lys
115 120 125
Gln Leu Gly Leu Val Glu Lys Leu Ser Phe Ala Arg Asp Arg Pro Leu
130 135 140
Glu Cys Phe Leu Trp Thr Val Gly Leu Leu Pro Glu Pro Lys Tyr Ser
145 150 155 160
Ser Cys Arg Ile Glu Leu Ala Lys Thr Ile Ala Ile Leu Leu Val Ile
165 170 175
Asp Asp Ile Phe Asp Thr Tyr Gly Lys Met Glu Glu Leu Val Leu Phe
180 185 190
Thr Glu Ala Ile Gln Arg Trp Asp Leu Asp Glu Leu Glu Thr Leu Pro
195 200 205
Pro Tyr Met Arg Ile Cys Tyr Met Ala Leu Tyr Asn Thr Thr Asn Glu
210 215 220
Ile Cys Tyr Lys Ile Leu Lys Glu Tyr Gly Phe Cys Val Leu Pro Tyr
225 230 235 240
Leu Lys Ser Thr Trp Ile Asp Met Ile Glu Gly Phe Met Val Glu Ala
245 250 255
Asn Trp Phe Asn Gly Gly His Gly Pro Asn Leu Glu Glu Tyr Ile Glu
260 265 270
Asn Gly Val Ser Thr Ala Gly Ala Tyr Met Ala Leu Val His Leu Phe
275 280 285
Phe Leu Ile Gly Glu Gly Val Thr Asn Glu Asn Ile Ala Lys Leu Leu
290 295 300
Arg Lys Pro Tyr Pro Lys Leu Phe Ser Ala Ala Gly Arg Ile Leu Arg
305 310 315 320
Leu Trp Asp Asp Leu Gly Thr Ala Lys Glu Glu Glu Glu Arg Gly Asp
325 330 335
Leu Ala Ser Cys Met Gln Ile Leu Met Arg Glu Lys Asn Ile Asp Cys
340 345 350
Glu Asn Glu Gly Arg Asn Tyr Ile Leu Lys Ala
355 360
<210> 5
<211> 363
<212> PRT
<213> Olea europaea
<220>
<221> PEPTIDE
<222> (1)..(25)
<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸
<220>
<221> PEPTIDE
<222> (1)..(50)
<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸
<220>
<221> PEPTIDE
<222> (1)..(58)
<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸
<220>
<221> PEPTIDE
<222> (1)..(60)
<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸
<220>
<221> UNSURE
<222> (25)..(25)
<223> The 'Xaa' at location 25 stands for Gln, Arg, Pro, or Leu.
<220>
<221> UNSURE
<222> (50)..(50)
<223> The 'Xaa' at location 50 stands for Gln, Arg, Pro, or Leu.
<220>
<221> UNSURE
<222> (58)..(58)
<223> The 'Xaa' at location 58 stands for Gln, Arg, Pro, or Leu.
<220>
<221> UNSURE
<222> (60)..(60)
<223> The 'Xaa' at location 60 stands for Gln, Arg, Pro, or Leu.
<400> 5
Asp Val Phe Leu Lys Phe Met Glu Lys Asn Met Lys Phe Lys Glu His
1 5 10 15
Leu Ala Gln Asp Thr Ile Gly Leu Xaa Ser Leu Tyr Glu Ala Ser Ser
20 25 30
Met Gly Ala Asn Gly Glu Glu Ile Leu Ser Glu Ala Lys Glu Phe Thr
35 40 45
Glu Xaa His Leu Arg Gln Ser Met Pro Xaa Leu Xaa Pro Gln Leu Arg
50 55 60
Arg Gln Val Ser Ser Ala Leu Glu Leu Pro Arg His Leu Arg Met Ala
65 70 75 80
Arg Leu Glu Ala Arg Arg Tyr Ile Glu Glu Tyr Gly Asn Glu Ser Asp
85 90 95
His Asp Pro Ala Val Leu Glu Leu Ala Arg Leu Asp Tyr Asn Lys Val
100 105 110
Gln Leu Gln His Gln Met Glu Leu Ala Glu Ile Thr Arg Trp Trp Lys
115 120 125
Gln Leu Gly Leu Val Glu Lys Leu Ser Phe Ala Arg Asp Arg Pro Leu
130 135 140
Glu Cys Phe Leu Trp Thr Val Gly Leu Leu Pro Glu Pro Lys Tyr Ser
145 150 155 160
Ser Cys Arg Ile Glu Leu Ala Lys Thr Ile Ala Ile Leu Leu Val Ile
165 170 175
Asp Asp Ile Phe Asp Thr Tyr Gly Lys Met Glu Glu Leu Val Leu Phe
180 185 190
Thr Glu Ala Ile Gln Arg Trp Asp Leu Asp Glu Leu Glu Thr Leu Pro
195 200 205
Pro Tyr Met Arg Ile Cys Tyr Met Ala Leu Tyr Asn Thr Thr Asn Glu
210 215 220
Ile Cys Tyr Lys Ile Leu Lys Glu Tyr Gly Phe Cys Val Leu Pro Tyr
225 230 235 240
Leu Lys Ser Thr Trp Ile Asp Met Ile Glu Gly Phe Met Val Glu Ala
245 250 255
Asn Trp Phe Asn Gly Gly His Gly Pro Asn Leu Glu Glu Tyr Ile Glu
260 265 270
Asn Gly Val Ser Thr Ala Gly Ala Tyr Met Ala Leu Val His Leu Phe
275 280 285
Phe Leu Ile Gly Glu Gly Val Thr Asn Glu Asn Ile Ala Lys Leu Leu
290 295 300
Arg Lys Pro Tyr Pro Lys Leu Phe Ser Ala Ala Gly Arg Ile Leu Arg
305 310 315 320
Leu Trp Asp Asp Leu Gly Thr Ala Lys Glu Glu Glu Glu Arg Gly Asp
325 330 335
Leu Ala Ser Cys Met Gln Ile Leu Met Arg Glu Lys Asn Ile Asp Cys
340 345 350
Glu Asn Glu Gly Arg Asn Tyr Ile Leu Lys Ala
355 360
<210> 6
<211> 583
<212> PRT
<213> Olea europaea
<400> 6
Met Asp Cys Thr Met Thr Ser Ile Ser Leu Phe Ser Gln Ser Ser Asn
1 5 10 15
Gly Ile Ser Gly Thr Ala Arg Ser Pro Phe Gln Trp Pro Ile Asn His
20 25 30
Arg Phe Ser Ser Gly Gln Arg Asp Phe Ile Cys Lys Ser Leu Pro Val
35 40 45
Ser Ser Pro Ser Ala Thr Pro Leu Ile Pro Ala Glu Asn Gly Ala Met
50 55 60
Tyr Asn Tyr Ile Arg Gln Pro Val Ile Val Thr Pro Glu Val Asp Asp
65 70 75 80
Gly Thr Lys His Ser Glu Leu Val Glu Arg Thr Arg Arg Glu Leu Gln
85 90 95
Arg Ser Thr Lys Pro Val Glu Thr Leu Lys Leu Ile Asp Asn Leu Gln
100 105 110
Arg Leu Gly Ile Ala Tyr Tyr Phe Glu Asp Asp Ile Asn Ala Ile Leu
115 120 125
Asp Gln Phe Ser Asp Gly Leu Pro Asp Glu Asp Leu Phe Thr Thr Ala
130 135 140
Leu Cys Phe Arg Leu Leu Arg Asp Gln Arg Leu Gln Thr Gly Ser Asp
145 150 155 160
Val Phe Leu Lys Phe Met Glu Lys Asn Met Lys Phe Lys Glu His Leu
165 170 175
Ala Gln Asp Thr Ile Gly Leu Val Ser Leu Tyr Glu Ala Ser Ser Met
180 185 190
Gly Ala Asn Gly Glu Glu Ile Leu Ser Glu Ala Lys Glu Phe Thr Glu
195 200 205
Met His Leu Arg Gln Ser Met Pro Gln Leu Ala Pro Gln Leu Arg Arg
210 215 220
Gln Val Ser Ser Ala Leu Glu Leu Pro Arg His Leu Arg Met Ala Arg
225 230 235 240
Leu Glu Ala Arg Arg Tyr Ile Glu Glu Tyr Gly Asn Glu Ser Asp His
245 250 255
Asp Pro Ala Leu Leu Glu Leu Ala Arg Leu Asp Tyr Asn Lys Val Gln
260 265 270
Leu Gln His Gln Met Glu Leu Ala Glu Ile Thr Arg Trp Trp Lys Gln
275 280 285
Leu Gly Leu Val Glu Lys Leu Ser Phe Ala Arg Asp Arg Pro Leu Glu
290 295 300
Cys Phe Leu Trp Thr Val Gly Leu Leu Pro Glu Pro Lys Tyr Ser Ser
305 310 315 320
Cys Arg Ile Glu Leu Ala Lys Thr Ile Ala Ile Leu Leu Val Ile Asp
325 330 335
Asp Ile Phe Asp Thr Tyr Gly Lys Met Glu Glu Leu Val Leu Phe Thr
340 345 350
Glu Ala Ile Gln Arg Trp Asp Leu Asp Glu Leu Glu Thr Leu Pro Pro
355 360 365
Tyr Met Arg Ile Cys Tyr Met Ala Leu Tyr Asn Thr Thr Asn Glu Ile
370 375 380
Cys Tyr Lys Ile Leu Lys Glu Tyr Gly Phe Cys Val Leu Pro Tyr Leu
385 390 395 400
Lys Ser Thr Trp Ile Asp Met Ile Glu Gly Phe Met Val Glu Ala Asn
405 410 415
Trp Phe Asn Gly Gly His Gly Pro Asn Leu Glu Glu Tyr Ile Glu Asn
420 425 430
Gly Val Ser Thr Ala Gly Ala Tyr Met Ala Leu Val His Leu Phe Phe
435 440 445
Leu Ile Gly Glu Gly Val Thr Asn Glu Asn Ile Ala Lys Leu Leu Arg
450 455 460
Lys Pro Tyr Pro Lys Leu Phe Ser Ala Ala Gly Arg Ile Leu Arg Leu
465 470 475 480
Trp Asp Asp Leu Gly Thr Ala Lys Glu Glu Glu Glu Arg Gly Asp Leu
485 490 495
Ala Ser Cys Met Gln Ile Leu Met Arg Glu Lys Asn Ile Asp Cys Glu
500 505 510
Asn Glu Gly Arg Asn Tyr Ile Leu Lys Ala Ile Asn Gly Leu Trp Lys
515 520 525
Asp Leu Asn Asp Glu Leu Ile Ser Pro Asn Ala Met Pro Leu Ala Ile
530 535 540
Thr Lys Val Ala Leu Asn Met Ala Arg Ala Phe Glu Val Val Tyr Lys
545 550 555 560
His Glu Glu Asp Ser Tyr Phe Ser Ser Val Asp Asn Tyr Val Gln Ala
565 570 575
Leu Phe Phe Thr Pro Ile Asn
580
<210> 7
<211> 584
<212> PRT
<213> Phyla dulcis
<400> 7
Met Ala Ser Ala Arg Ser Thr Ile Ser Leu Ser Ser Gln Ser Ser His
1 5 10 15
His Gly Phe Ser Lys Asn Ser Phe Pro Trp Gln Leu Arg His Ser Arg
20 25 30
Phe Val Met Gly Ser Arg Ala Arg Thr Cys Ala Cys Met Ser Ser Ser
35 40 45
Val Ser Leu Pro Thr Ala Thr Thr Ser Ser Ser Val Ile Thr Gly Asn
50 55 60
Asp Ala Leu Leu Lys Tyr Ile Arg Gln Pro Met Val Ile Pro Leu Lys
65 70 75 80
Glu Lys Glu Gly Thr Lys Arg Arg Glu Tyr Leu Leu Glu Lys Thr Ala
85 90 95
Arg Glu Leu Gln Gly Thr Thr Glu Ala Ala Glu Lys Leu Lys Phe Ile
100 105 110
Asp Thr Ile Gln Arg Leu Gly Ile Ser Cys Tyr Phe Glu Asp Glu Ile
115 120 125
Asn Gly Ile Leu Gln Ala Glu Leu Ser Asp Thr Asp Gln Leu Glu Asp
130 135 140
Gly Leu Phe Thr Thr Ala Leu Arg Phe Arg Leu Leu Arg His Tyr Gly
145 150 155 160
Tyr Gln Ile Ala Pro Asp Val Phe Leu Lys Phe Thr Asp Gln Asn Gly
165 170 175
Lys Phe Lys Glu Ser Leu Ala Asp Asp Thr Gln Gly Leu Val Ser Leu
180 185 190
Tyr Glu Ala Ser Tyr Met Gly Ala Asn Gly Glu Asn Ile Leu Glu Glu
195 200 205
Ala Met Lys Phe Thr Lys Thr His Leu Gln Gly Arg Gln His Ala Met
210 215 220
Arg Glu Val Ala Glu Ala Leu Glu Leu Pro Arg His Leu Arg Met Ala
225 230 235 240
Arg Leu Glu Ala Arg Arg Tyr Ile Glu Gln Tyr Gly Thr Met Ile Gly
245 250 255
His Asp Lys Asp Leu Leu Glu Leu Val Ile Leu Asp Tyr Asn Asn Val
260 265 270
Gln Ala Gln His Gln Ala Glu Leu Ala Glu Ile Ala Arg Trp Trp Lys
275 280 285
Glu Leu Gly Leu Val Asp Lys Leu Thr Phe Ala Arg Asp Arg Pro Leu
290 295 300
Glu Cys Phe Leu Trp Thr Val Gly Leu Leu Pro Glu Pro Lys Tyr Ser
305 310 315 320
Ala Cys Arg Ile Glu Leu Ala Lys Thr Ile Ala Ile Leu Leu Val Ile
325 330 335
Asp Asp Ile Phe Asp Thr Tyr Gly Lys Met Glu Glu Leu Ala Leu Phe
340 345 350
Thr Glu Ala Ile Arg Arg Trp Asp Leu Glu Ala Met Glu Thr Leu Pro
355 360 365
Glu Tyr Met Lys Ile Cys Tyr Met Ala Leu Tyr Asn Thr Thr Asn Glu
370 375 380
Ile Cys Tyr Lys Val Leu Lys Lys Asn Gly Trp Ser Val Leu Pro Tyr
385 390 395 400
Leu Arg Tyr Thr Trp Met Asp Met Ile Glu Gly Phe Met Val Glu Ala
405 410 415
Lys Trp Phe Asn Gly Gly Ser Ala Pro Asn Leu Glu Glu Tyr Ile Glu
420 425 430
Asn Gly Val Ser Thr Ala Gly Ala Tyr Met Ala Leu Val His Leu Phe
435 440 445
Phe Leu Ile Gly Glu Gly Val Ser Ala Gln Asn Ala Gln Ile Leu Leu
450 455 460
Lys Lys Pro Tyr Pro Lys Leu Phe Ser Ala Ala Gly Arg Ile Leu Arg
465 470 475 480
Leu Trp Asp Asp Leu Gly Thr Ala Lys Glu Glu Glu Gly Arg Gly Asp
485 490 495
Leu Ala Ser Ser Ile Arg Leu Phe Met Lys Glu Lys Asn Leu Thr Thr
500 505 510
Glu Glu Glu Gly Arg Asn Gly Ile Gln Glu Glu Ile Tyr Ser Leu Trp
515 520 525
Lys Asp Leu Asn Gly Glu Leu Ile Ser Lys Gly Arg Met Pro Leu Ala
530 535 540
Ile Ile Lys Val Ala Leu Asn Met Ala Arg Ala Ser Gln Val Val Tyr
545 550 555 560
Lys His Asp Glu Asp Ser Tyr Phe Ser Cys Val Asp Asn Tyr Val Glu
565 570 575
Ala Leu Phe Phe Thr Pro Leu Leu
580
<210> 8
<211> 589
<212> PRT
<213> Catharanthus roseus
<400> 8
Met Ala Ala Thr Ile Ser Asn Leu Ser Phe Leu Ala Lys Ser Arg Ala
1 5 10 15
Leu Ser Arg Pro Ser Ser Ser Ser Leu Ser Trp Leu Glu Arg Pro Lys
20 25 30
Thr Ser Ser Thr Ile Cys Met Ser Met Pro Ser Ser Ser Ser Ser Ser
35 40 45
Ser Ser Ser Ser Met Ser Leu Pro Leu Ala Thr Pro Leu Ile Lys Asp
50 55 60
Asn Glu Ser Leu Ile Lys Phe Leu Arg Gln Pro Leu Val Leu Pro His
65 70 75 80
Glu Val Asp Asp Ser Thr Lys Arg Arg Glu Leu Leu Glu Arg Thr Arg
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Lys Glu Leu Glu Leu Asn Ala Glu Lys Pro Leu Glu Ala Leu Lys Met
100 105 110
Ile Asp Ile Ile Gln Arg Leu Gly Leu Ser Tyr His Phe Glu Asp Asp
115 120 125
Ile Asn Ser Ile Leu Thr Gly Phe Ser Asn Ile Ser Ser Gln Thr His
130 135 140
Glu Asp Leu Leu Thr Ala Ser Leu Cys Phe Arg Leu Leu Arg His Asn
145 150 155 160
Gly His Lys Ile Asn Pro Asp Ile Phe Gln Lys Phe Met Asp Asn Asn
165 170 175
Gly Lys Phe Lys Asp Ser Leu Lys Asp Asp Thr Leu Gly Met Leu Ser
180 185 190
Leu Tyr Glu Ala Ser Tyr Leu Gly Ala Asn Gly Glu Glu Ile Leu Met
195 200 205
Glu Ala Gln Glu Phe Thr Lys Thr His Leu Lys Asn Ser Leu Pro Ala
210 215 220
Met Ala Pro Ser Leu Ser Lys Lys Val Ser Gln Ala Leu Glu Gln Pro
225 230 235 240
Arg His Arg Arg Met Leu Arg Leu Glu Ala Arg Arg Phe Ile Glu Glu
245 250 255
Tyr Gly Ala Glu Asn Asp His Asn Pro Asp Leu Leu Glu Leu Ala Lys
260 265 270
Leu Asp Tyr Asn Lys Val Gln Ser Leu His Gln Met Glu Leu Ser Glu
275 280 285
Ile Thr Arg Trp Trp Lys Gln Leu Gly Leu Val Asp Lys Leu Thr Phe
290 295 300
Ala Arg Asp Arg Pro Leu Glu Cys Phe Leu Trp Thr Val Gly Leu Leu
305 310 315 320
Pro Glu Pro Lys Tyr Ser Gly Cys Arg Ile Glu Leu Ala Lys Thr Ile
325 330 335
Ala Ile Leu Leu Val Ile Asp Asp Ile Phe Asp Thr His Gly Thr Leu
340 345 350
Asp Glu Leu Leu Leu Phe Thr Asn Ala Ile Lys Arg Trp Asp Leu Glu
355 360 365
Ala Met Glu Asp Leu Pro Glu Tyr Met Arg Ile Cys Tyr Met Ala Leu
370 375 380
Tyr Asn Thr Thr Asn Glu Ile Cys Tyr Lys Val Leu Lys Glu Asn Gly
385 390 395 400
Trp Ser Val Leu Pro Tyr Leu Lys Ala Thr Trp Ile Asp Met Ile Glu
405 410 415
Gly Phe Met Val Glu Ala Glu Trp Phe Asn Ser Asp Tyr Val Pro Asn
420 425 430
Met Glu Glu Tyr Val Glu Asn Gly Val Arg Thr Ala Gly Ser Tyr Met
435 440 445
Ala Leu Val His Leu Phe Phe Leu Ile Gly Gln Gly Val Thr Glu Asp
450 455 460
Asn Val Lys Leu Leu Ile Lys Pro Tyr Pro Lys Leu Phe Ser Ser Ser
465 470 475 480
Gly Arg Ile Leu Arg Leu Trp Asp Asp Leu Gly Thr Ala Lys Glu Glu
485 490 495
Gln Glu Arg Gly Asp Leu Ala Ser Ser Ile Gln Leu Phe Met Arg Glu
500 505 510
Lys Glu Ile Lys Ser Glu Glu Glu Gly Arg Lys Gly Ile Leu Glu Ile
515 520 525
Ile Glu Asn Leu Trp Lys Glu Leu Asn Gly Glu Leu Val Tyr Arg Glu
530 535 540
Glu Met Pro Leu Ala Ile Ile Lys Thr Ala Phe Asn Met Ala Arg Ala
545 550 555 560
Ser Gln Val Val Tyr Gln His Glu Glu Asp Thr Tyr Phe Ser Ser Val
565 570 575
Asp Asn Tyr Val Lys Ala Leu Phe Phe Thr Pro Cys Phe
580 585
<210> 9
<211> 586
<212> PRT
<213> Picrorhiza kurrooa
<400> 9
Met Gly Cys Ile Arg Ser Thr Thr His Thr Ser Thr Asn Tyr Gly Ile
1 5 10 15
Asn Ser Arg Leu Gly Leu Ser Phe Pro Val Pro Ile Ile Tyr Arg Pro
20 25 30
Ala Gly Ala Ser Arg Asn Ile Ser Ile Tyr Met Ser Ser Ser Ala Ala
35 40 45
Pro Asn Val Thr Gln Val Val Val Gly Ala Asn Asp Ala Leu Leu Gln
50 55 60
Tyr Thr His Gln Pro Met Leu Ile Pro Ser Glu Val Asp Ala Asp Thr
65 70 75 80
Glu Arg Arg Asp Tyr Leu Leu Glu Lys Ala Arg Gln Glu Leu Ser Arg
85 90 95
Thr Thr Lys Pro Thr Asp Lys Leu Lys Leu Ile Asp Met Ile Gln Arg
100 105 110
Leu Gly Ile Gly Phe Tyr Leu Glu Asp Asp Ile Asn Ala Ile Leu Arg
115 120 125
Thr Gln Phe Ser Val Asn Val Ile Asp Glu Glu Asp Leu Ser Ala Thr
130 135 140
Gly Leu Arg Phe Arg Met Leu Arg Gln Asn Ser Phe Pro Ile Ser Ser
145 150 155 160
Asp Ile Phe Lys Arg Phe Gln Asp Gln Asn Glu Lys Phe Asp Glu Thr
165 170 175
Leu Thr Asn Asp Thr Leu Gly Val Ile Glu Leu Val Arg Ser Ile Ile
180 185 190
His Gly Glu Pro Lys Gly Glu Glu Ile Leu Glu Glu Ala Met Glu Phe
195 200 205
Ser Lys Thr Arg Leu Lys Arg Ser Leu Ser Ser Leu Pro Ala Gln Ile
210 215 220
Lys Ala Asp Val Gly Gln Ala Leu Glu Leu Pro Thr His Leu Arg Met
225 230 235 240
Ala Arg Leu Glu Ala Arg Arg Phe Ile Glu Gln Tyr Ala Thr Gln Ser
245 250 255
Asp His Asn Pro Ile Leu Leu Glu Leu Ala Thr Leu Asp Tyr Asn His
260 265 270
Val Gln Ser Gln His Gln Met Glu Leu Val Glu Ile Thr Arg Trp Trp
275 280 285
Lys Gln Leu Gly Leu Val Asp Gln Leu Ser Phe Ala Arg Asp Arg Pro
290 295 300
Leu Glu Cys Phe Leu Trp Thr Val Gly Leu Leu Pro Glu Pro Lys Tyr
305 310 315 320
Ser Ser Cys Arg Ile Glu Leu Ala Lys Thr Ile Ala Val Leu Leu Val
325 330 335
Ile Asp Asp Ile Phe Asp Thr Tyr Gly Lys Met Asp Asp Leu Ile Leu
340 345 350
Phe Thr Asp Ala Ile Gln Arg Trp Asp Leu Gly Ala Met Glu Ser Leu
355 360 365
Pro Glu Tyr Met Lys Ile Cys Tyr Met Ala Leu Tyr Asn Leu Thr Asn
370 375 380
Glu Ile Cys Tyr Lys Val Leu Lys Glu Asn Gly Trp Thr Val Leu Pro
385 390 395 400
Tyr Leu Lys Ser Ser Trp Ile Asp Met Ile Glu Gly Phe Met Val Glu
405 410 415
Ala Lys Trp Phe Asn Gly Gly Cys Ala Pro Asn Leu Glu Glu Tyr Val
420 425 430
Glu Asn Gly Val Ser Thr Ala Gly Ser Tyr Met Ala Leu Val His Leu
435 440 445
Phe Phe Leu Ile Gly Glu Gly Val Thr Glu Gln Asn Ala Gln Leu Leu
450 455 460
Met Lys Lys Pro Tyr Pro Lys Ala Phe Ser Ser Ala Gly Arg Ile Leu
465 470 475 480
Arg Leu Trp Asp Asp Leu Gly Thr Ala Lys Glu Glu Gln Glu Arg Gly
485 490 495
Asp Leu Ala Ser Ser Ile Asn Leu Phe Met Lys Glu Arg Asn Leu Ala
500 505 510
Thr Glu Glu Glu Gly Arg Glu Cys Ile Leu Glu Asp Ile Tyr Gly Tyr
515 520 525
Trp Lys Asp Leu Asn Gly Glu Leu Val Ser Gln Lys Glu Met Pro Leu
530 535 540
Ala Ile Ile Lys Val Ala Leu Asn Met Ala Arg Ala Ser Gln Val Val
545 550 555 560
Tyr Lys His Glu Glu Asp Ser Tyr Phe Ser Asn Val Asp Asn Tyr Val
565 570 575
Gln Ala Leu Leu Phe Thr Pro Leu Ile Ile
580 585
<210> 10
<211> 594
<212> PRT
<213> Valeriana officinalis
<220>
<221> PEPTIDE
<222> (1)..(228)
<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸
<220>
<221> UNSURE
<222> (228)..(228)
<223> The 'Xaa' at location 228 stands for Gln, Arg, Pro, or Leu.
<400> 10
Met Ile Thr Ser Ser Ser Ser Val Arg Ser Leu Cys Cys Pro Lys Thr
1 5 10 15
Ser Ile Ile Ser Gly Lys Leu Leu Pro Ser Leu Leu Leu Thr Asn Val
20 25 30
Ile Asn Val Ser Asn Gly Thr Ser Ser Arg Ala Cys Val Ser Met Ser
35 40 45
Ser Leu Pro Val Ser Lys Ser Thr Ala Ser Ser Ile Ala Ala Pro Leu
50 55 60
Val Arg Asp Asn Gly Ser Ala Leu Asn Phe Phe Pro Gln Ala Pro Gln
65 70 75 80
Val Glu Ile Asp Glu Ser Ser Arg Ile Met Glu Leu Val Glu Ala Thr
85 90 95
Arg Arg Thr Leu Arg Asn Glu Ser Ser Asp Ser Thr Glu Lys Met Arg
100 105 110
Leu Ile Asp Ser Leu Gln Arg Leu Gly Leu Asn His His Phe Glu Gln
115 120 125
Asp Ile Lys Glu Met Leu Gln Asp Phe Ala Asn Glu His Lys Asn Thr
130 135 140
Asn Gln Asp Leu Phe Thr Thr Ser Leu Arg Phe Arg Leu Leu Arg His
145 150 155 160
Asn Gly Phe Asn Val Thr Pro Asp Val Phe Asn Lys Phe Thr Glu Glu
165 170 175
Asn Gly Lys Phe Lys Glu Ser Leu Gly Glu Asp Thr Ile Gly Ile Leu
180 185 190
Ser Leu Tyr Glu Ala Ser Tyr Leu Gly Gly Lys Gly Glu Glu Ile Leu
195 200 205
Ser Glu Ala Met Lys Phe Ser Glu Ser Lys Leu Arg Glu Ser Ser Gly
210 215 220
His Val Ala Xaa His Ile Arg Arg Gln Ile Phe Gln Ser Leu Glu Leu
225 230 235 240
Pro Arg His Leu Arg Met Ala Arg Leu Glu Ser Arg Arg Tyr Ile Glu
245 250 255
Glu Asp Tyr Ser Asn Glu Ile Gly Ala Asp Ser Ser Leu Leu Glu Leu
260 265 270
Ala Lys Leu Asp Phe Asn Ser Val Gln Ala Leu His Gln Met Glu Leu
275 280 285
Thr Glu Ile Ser Arg Trp Trp Lys Gln Leu Gly Leu Ser Asp Lys Leu
290 295 300
Pro Phe Ala Arg Asp Arg Pro Leu Glu Cys Phe Leu Trp Thr Val Gly
305 310 315 320
Leu Leu Pro Glu Pro Lys Tyr Ser Gly Cys Arg Ile Glu Leu Ala Lys
325 330 335
Thr Ile Ala Val Leu Leu Val Ile Asp Asp Ile Phe Asp Thr Tyr Gly
340 345 350
Ser Tyr Asp Gln Leu Ile Leu Phe Thr Asn Ala Ile Arg Arg Trp Asp
355 360 365
Leu Asp Ala Met Asp Glu Leu Pro Glu Tyr Met Lys Ile Cys Tyr Met
370 375 380
Ala Leu Tyr Asn Thr Thr Asn Glu Ile Cys Tyr Lys Val Leu Lys Glu
385 390 395 400
Asn Gly Trp Ser Val Leu Pro Tyr Leu Glu Arg Thr Trp Ile Asp Met
405 410 415
Val Glu Gly Phe Met Leu Glu Ala Lys Trp Leu Asn Ser Gly Glu Gln
420 425 430
Pro Asn Leu Glu Ala Tyr Ile Glu Asn Gly Val Thr Thr Ala Gly Ser
435 440 445
Tyr Met Ala Leu Val His Leu Phe Phe Leu Ile Gly Asp Gly Val Asn
450 455 460
Asp Glu Asn Val Lys Leu Leu Leu Asp Pro Tyr Pro Lys Leu Phe Ser
465 470 475 480
Ser Ala Gly Arg Ile Leu Arg Leu Trp Asp Asp Leu Gly Thr Ala Lys
485 490 495
Glu Glu Gln Glu Arg Gly Asp Val Ser Ser Ser Ile Gln Leu Tyr Met
500 505 510
Lys Glu Lys Asn Val Arg Ser Glu Ser Glu Gly Arg Glu Gly Ile Val
515 520 525
Glu Ile Ile Tyr Asn Leu Trp Lys Asp Met Asn Gly Glu Leu Ile Gly
530 535 540
Ser Asn Ala Leu Pro Gln Ala Ile Ile Glu Thr Ser Phe Asn Met Ala
545 550 555 560
Arg Thr Ser Gln Val Val Tyr Gln His Glu Asp Asp Thr Tyr Phe Ser
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Ser Val Asp Asn Tyr Val Gln Ser Leu Phe Phe Thr Pro Val Ser Val
580 585 590
Ser Val
<210> 11
<211> 591
<212> PRT
<213> Vitis vinifera
<400> 11
Met Ser Arg Phe Val Thr Met Pro Ser His Val Leu Pro Ser Ser Phe
1 5 10 15
Val Ala Pro Ser Leu Gln Val Ser Ser Ser Pro Cys Ser Trp Arg Thr
20 25 30
Arg Pro Ser Pro Cys Thr Ser Cys His Leu Ser Pro Ser Ser Ser Ser
35 40 45
Lys Pro Leu Leu Gly Ser His Asp Tyr Ser Leu Leu Lys Ser Leu Thr
50 55 60
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65 70 75 80
Met Lys Glu Val Lys Glu Arg Thr Trp Glu Ala Phe Tyr Arg Ala Trp
85 90 95
Asp Ser Arg Ala Ala Met Glu Met Val Asp Thr Val Glu Arg Leu Gly
100 105 110
Leu Ser Tyr His Phe Glu Asp Glu Ile Asn Ala Leu Leu Gln Arg Phe
115 120 125
Cys Asp Trp Asn Ala Ser Glu Asp Leu Phe Thr Thr Ala Leu Arg Phe
130 135 140
Arg Leu Leu Arg Gln Asn Gly Phe Pro Thr His Ser Asp Val Phe Gly
145 150 155 160
Lys Phe Met Asp Lys Asn Gly Lys Phe Lys Glu Ser Leu Thr Glu Asp
165 170 175
Ile Trp Gly Met Leu Ser Leu His Glu Ala Ser His Leu Gly Ala Lys
180 185 190
Asn Glu Glu Val Leu Ala Glu Ala Lys Glu Phe Thr Arg Ile His Leu
195 200 205
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210 215 220
Arg Ala Leu Glu Leu Pro Arg His Leu Arg Met Val Arg Leu Glu Ala
225 230 235 240
Arg Asn Tyr Ile Gly Glu Tyr Ser Arg Glu Ser Asn Pro Asn Leu Ala
245 250 255
Phe Leu Glu Leu Ala Lys Leu Asp Phe Asp Met Val Gln Ser Leu His
260 265 270
Gln Lys Glu Leu Ala Glu Ile Val Arg Trp Trp Lys Gln Leu Gly Leu
275 280 285
Val Asp Lys Leu Asp Phe Ala Arg Asp Arg Pro Met Glu Cys Phe Leu
290 295 300
Trp Thr Val Gly Ile Phe Pro Asp Pro Arg His Ser Ser Cys Arg Ile
305 310 315 320
Glu Leu Thr Lys Ala Ile Ala Ile Leu Leu Val Ile Asp Asp Ile Tyr
325 330 335
Asp Ser Tyr Gly Ser Leu Asp Glu Leu Ala Leu Phe Thr Asp Ala Val
340 345 350
Lys Arg Trp Asp Leu Gly Ala Met Asp Gln Leu Pro Glu Tyr Met Lys
355 360 365
Ile Cys Tyr Met Ala Leu Tyr Asn Thr Thr Asn Asp Ile Ala Tyr Arg
370 375 380
Ile Leu Lys Glu His Gly Trp Ser Val Ile Glu Asp Leu Lys Arg Thr
385 390 395 400
Trp Met Asp Ile Phe Gly Ala Phe Leu Ala Glu Ala Tyr Cys Phe Lys
405 410 415
Gly Gly His Val Pro Ser Leu Glu Glu Tyr Leu Thr Asn Ala Val Thr
420 425 430
Thr Gly Gly Thr Tyr Met Ala Leu Val His Ala Phe Phe Leu Met Gly
435 440 445
Gln Gly Val Thr Arg Glu Asn Met Ala Met Leu Lys Pro Tyr Pro Asn
450 455 460
Ile Phe Ser Cys Ser Gly Lys Ile Leu Arg Leu Trp Asp Asp Leu Gly
465 470 475 480
Thr Ala Arg Glu Glu Gln Glu Arg Gly Asp Asn Ala Ser Ser Ile Glu
485 490 495
Cys Tyr Lys Arg Glu Arg Glu Met Asp Thr Val Leu Glu Asp Glu Ala
500 505 510
Cys Arg Lys His Ile Arg Gln Met Ile Gln Ser Leu Trp Val Glu Leu
515 520 525
Asn Gly Glu Leu Val Ala Ser Ser Ala Leu Pro Leu Ser Ile Ile Lys
530 535 540
Ala Ala Phe Asn Leu Ser Arg Thr Ala Gln Val Ile Tyr Gln His Gly
545 550 555 560
Asp Asp Asn Lys Thr Ser Ser Val Glu Asp His Val Gln Ala Leu Leu
565 570 575
Phe Arg Pro Val Ser Ser Asn Gly His Ala Gln Ile Thr Met His
580 585 590
<210> 12
<211> 595
<212> PRT
<213> Vitis vinifera
<400> 12
Met Ala Phe Asn Met Ser Arg Phe Val Thr Met Pro Ser His Val Leu
1 5 10 15
Pro Ser Ser Phe Val Ala Pro Ser Leu Gln Val Ser Ser Ser Pro Cys
20 25 30
Ser Trp Arg Thr Arg Pro Ser Pro Cys Thr Ser Cys His Leu Ser Pro
35 40 45
Ser Ser Ser Ser Lys Pro Leu Leu Gly Ser His Asp Tyr Ser Leu Leu
50 55 60
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65 70 75 80
Ser Thr Arg Arg Met Lys Glu Val Lys Glu Arg Thr Trp Glu Ala Phe
85 90 95
Tyr Arg Ala Trp Asp Ser Arg Ala Ala Met Glu Met Val Asp Thr Val
100 105 110
Glu Arg Leu Gly Leu Ser Tyr His Phe Glu Asp Glu Ile Asn Ala Leu
115 120 125
Leu Gln Arg Phe Cys Asp Trp Asn Ala Ser Glu Asp Leu Phe Thr Thr
130 135 140
Ala Leu Arg Phe Arg Leu Leu Arg Gln Asn Gly Phe Pro Thr His Ser
145 150 155 160
Asp Val Phe Gly Lys Phe Met Asp Lys Asn Gly Lys Phe Lys Glu Ser
165 170 175
Leu Thr Glu Asp Ile Arg Gly Met Leu Ser Leu His Glu Ala Ser His
180 185 190
Leu Gly Ala Lys Asn Glu Glu Val Leu Ala Glu Ala Lys Glu Phe Thr
195 200 205
Arg Ile His Leu Ile Gln Ser Met Pro His Met Glu Pro His Phe Ser
210 215 220
Ser His Val Gly Arg Ala Leu Glu Leu Pro Arg His Leu Arg Met Val
225 230 235 240
Arg Leu Glu Ala Arg Asn Tyr Ile Gly Glu Tyr Ser Arg Glu Ser Asn
245 250 255
Pro Asn Leu Ala Phe Leu Glu Leu Ala Lys Leu Asp Phe Asp Met Val
260 265 270
Gln Ser Leu His Gln Lys Glu Leu Ala Glu Ile Leu Arg Trp Trp Lys
275 280 285
Gln Leu Gly Leu Val Asp Lys Leu Asp Phe Ala Arg Asp Arg Pro Met
290 295 300
Glu Cys Phe Leu Trp Thr Val Gly Ile Phe Pro Asp Pro Arg His Ser
305 310 315 320
Ser Cys Arg Ile Glu Leu Thr Lys Ala Ile Ala Ile Leu Leu Val Ile
325 330 335
Asp Asp Ile Tyr Asp Ser Tyr Gly Ser Leu Asp Glu Leu Ala Leu Phe
340 345 350
Thr Asp Ala Val Lys Arg Trp Asp Leu Gly Ala Met Asp Gln Leu Pro
355 360 365
Glu Tyr Met Lys Ile Cys Tyr Met Ala Leu Tyr Asn Thr Thr Asn Asp
370 375 380
Ile Ala Tyr Arg Ile Leu Lys Glu His Gly Trp Ser Val Ile Glu His
385 390 395 400
Leu Lys Arg Thr Trp Met Asp Ile Phe Gly Ala Phe Leu Ala Glu Ala
405 410 415
Tyr Cys Phe Lys Gly Gly His Val Pro Ser Leu Glu Glu Tyr Leu Thr
420 425 430
Asn Ala Val Thr Thr Gly Gly Thr Tyr Met Ala Leu Val His Ala Phe
435 440 445
Phe Leu Met Gly Gln Gly Val Thr Arg Glu Asn Met Ala Met Leu Lys
450 455 460
Pro Tyr Pro Asn Ile Phe Ser Cys Ser Gly Lys Ile Leu Arg Leu Trp
465 470 475 480
Asp Asp Leu Gly Thr Ala Arg Glu Glu Gln Glu Arg Gly Asp Asn Ala
485 490 495
Ser Ser Ile Glu Cys Tyr Lys Arg Glu Arg Glu Met Asp Thr Val Leu
500 505 510
Glu Asp Glu Ala Cys Arg Lys His Ile Arg Gln Met Ile Gln Ser Leu
515 520 525
Trp Val Glu Leu Asn Gly Glu Leu Val Ala Ser Ser Ala Leu Pro Leu
530 535 540
Ser Ile Ile Lys Ala Ala Phe Asn Leu Ser Arg Thr Ala Gln Val Ile
545 550 555 560
Tyr Gln His Gly Asp Asp Asn Lys Thr Ser Ser Val Glu Asp His Val
565 570 575
Gln Ala Leu Leu Phe Arg Pro Val Ser Ser Asn Gly His Ala Gln Ile
580 585 590
Thr Met His
595
<210> 13
<211> 400
<212> PRT
<213> Saccharomyces cerevisiae
<400> 13
Met Pro Phe Val Lys Asp Phe Lys Pro Gln Ala Leu Gly Asp Thr Asn
1 5 10 15
Leu Phe Lys Pro Ile Lys Ile Gly Asn Asn Glu Leu Leu His Arg Ala
20 25 30
Val Ile Pro Pro Leu Thr Arg Met Arg Ala Gln His Pro Gly Asn Ile
35 40 45
Pro Asn Arg Asp Trp Ala Val Glu Tyr Tyr Ala Gln Arg Ala Gln Arg
50 55 60
Pro Gly Thr Leu Ile Ile Thr Glu Gly Thr Phe Pro Ser Pro Gln Ser
65 70 75 80
Gly Gly Tyr Asp Asn Ala Pro Gly Ile Trp Ser Glu Glu Gln Ile Lys
85 90 95
Glu Trp Thr Lys Ile Phe Lys Ala Ile His Glu Asn Lys Ser Phe Ala
100 105 110
Trp Val Gln Leu Trp Val Leu Gly Trp Ala Ala Phe Pro Asp Thr Leu
115 120 125
Ala Arg Asp Gly Leu Arg Tyr Asp Ser Ala Ser Asp Asn Val Tyr Met
130 135 140
Asn Ala Glu Gln Glu Glu Lys Ala Lys Lys Ala Asn Asn Pro Gln His
145 150 155 160
Ser Ile Thr Lys Asp Glu Ile Lys Gln Tyr Val Lys Glu Tyr Val Gln
165 170 175
Ala Ala Lys Asn Ser Ile Ala Ala Gly Ala Asp Gly Val Glu Ile His
180 185 190
Ser Ala Asn Gly Tyr Leu Leu Asn Gln Phe Leu Asp Pro His Ser Asn
195 200 205
Asn Arg Thr Asp Glu Tyr Gly Gly Ser Ile Glu Asn Arg Ala Arg Phe
210 215 220
Thr Leu Glu Val Val Asp Ala Val Val Asp Ala Ile Gly Pro Glu Lys
225 230 235 240
Val Gly Leu Arg Leu Ser Pro Tyr Gly Val Phe Asn Ser Met Ser Gly
245 250 255
Gly Ala Glu Thr Gly Ile Val Ala Gln Tyr Ala Tyr Val Leu Gly Glu
260 265 270
Leu Glu Arg Arg Ala Lys Ala Gly Lys Arg Leu Ala Phe Val His Leu
275 280 285
Val Glu Pro Arg Val Thr Asn Pro Phe Leu Thr Glu Gly Glu Gly Glu
290 295 300
Tyr Asn Gly Gly Ser Asn Lys Phe Ala Tyr Ser Ile Trp Lys Gly Pro
305 310 315 320
Ile Ile Arg Ala Gly Asn Phe Ala Leu His Pro Glu Val Val Arg Glu
325 330 335
Glu Val Lys Asp Pro Arg Thr Leu Ile Gly Tyr Gly Arg Phe Phe Ile
340 345 350
Ser Asn Pro Asp Leu Val Asp Arg Leu Glu Lys Gly Leu Pro Leu Asn
355 360 365
Lys Tyr Asp Arg Asp Thr Phe Tyr Lys Met Ser Ala Glu Gly Tyr Ile
370 375 380
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385 390 395 400
<210> 14
<211> 400
<212> PRT
<213> Saccharomyces cerevisiae
<400> 14
Met Pro Phe Val Lys Asp Phe Lys Pro Gln Ala Leu Gly Asp Thr Asn
1 5 10 15
Leu Phe Lys Pro Ile Lys Ile Gly Asn Asn Glu Leu Leu His Arg Ala
20 25 30
Val Ile Pro Pro Leu Thr Arg Met Arg Ala Gln His Pro Gly Asn Ile
35 40 45
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50 55 60
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65 70 75 80
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Glu Trp Thr Lys Ile Phe Lys Ala Ile His Glu Asn Lys Ser Phe Ala
100 105 110
Trp Val Gln Leu Trp Val Leu Gly Trp Ala Ala Phe Pro Asp Thr Leu
115 120 125
Ala Arg Asp Gly Leu Arg Tyr Asp Ser Ala Ser Asp Asn Val Tyr Met
130 135 140
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Ala Ala Lys Asn Ser Ile Ala Ala Gly Ala Asp Gly Val Glu Ile His
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195 200 205
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210 215 220
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225 230 235 240
Val Gly Leu Arg Leu Ser Pro Tyr Gly Val Phe Asn Ser Met Ser Gly
245 250 255
Gly Ala Glu Thr Gly Ile Val Ala Gln Tyr Ala Tyr Val Leu Gly Glu
260 265 270
Leu Glu Arg Arg Ala Lys Ala Gly Lys Arg Leu Ala Phe Val His Leu
275 280 285
Val Glu Pro Arg Val Thr Asn Pro Phe Leu Thr Glu Gly Glu Gly Glu
290 295 300
Tyr Asn Gly Gly Ser Asn Lys Phe Ala Tyr Ser Ile Trp Lys Gly Pro
305 310 315 320
Ile Ile Arg Ala Gly Asn Phe Ala Leu His Pro Glu Val Val Arg Glu
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Glu Val Lys Asp Pro Arg Thr Leu Ile Gly Tyr Gly Arg Phe Phe Ile
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355 360 365
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370 375 380
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<211> 400
<212> PRT
<213> Saccharomyces cerevisiae
<400> 15
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1 5 10 15
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Val Ile Pro Pro Leu Thr Arg Met Arg Ala Gln His Pro Gly Asn Ile
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100 105 110
Trp Val Gln Leu Trp Val Leu Gly Trp Ala Ala Phe Pro Asp Thr Leu
115 120 125
Ala Arg Asp Gly Leu Arg Tyr Asp Ser Ala Ser Asp Asn Val Tyr Met
130 135 140
Asn Ala Glu Gln Glu Glu Lys Ala Lys Lys Ala Asn Asn Pro Gln His
145 150 155 160
Ser Ile Thr Lys Asp Glu Ile Lys Gln Tyr Val Lys Glu Tyr Val Gln
165 170 175
Ala Ala Lys Asn Ser Ile Ala Ala Gly Ala Asp Gly Val Glu Ile His
180 185 190
Ser Ala Asn Gly Tyr Leu Leu Asn Gln Phe Leu Asp Pro His Ser Asn
195 200 205
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210 215 220
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225 230 235 240
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245 250 255
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260 265 270
Leu Glu Arg Arg Ala Lys Ala Gly Lys Arg Leu Ala Phe Val His Leu
275 280 285
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290 295 300
Tyr Asn Gly Gly Ser Asn Glu Phe Ala Tyr Ser Ile Trp Lys Gly Pro
305 310 315 320
Ile Ile Arg Ala Gly Asn Phe Ala Leu His Pro Glu Val Val Arg Glu
325 330 335
Glu Val Lys Asp Pro Arg Thr Leu Ile Gly Tyr Gly Arg Phe Phe Ile
340 345 350
Ser Asn Pro Asp Leu Val Asp Arg Leu Glu Lys Gly Leu Pro Leu Asn
355 360 365
Lys Tyr Asp Arg Asp Thr Phe Tyr Lys Met Ser Ala Glu Gly Tyr Ile
370 375 380
Asp Tyr Pro Thr Tyr Glu Glu Ala Leu Lys Leu Gly Trp Asp Lys Asn
385 390 395 400
<210> 16
<211> 400
<212> PRT
<213> Saccharomyces cerevisiae
<400> 16
Met Pro Phe Val Lys Asp Phe Lys Pro Gln Ala Leu Gly Asp Thr Asn
1 5 10 15
Leu Phe Lys Pro Ile Lys Ile Gly Asn Asn Glu Leu Leu His Arg Ala
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50 55 60
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65 70 75 80
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85 90 95
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100 105 110
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115 120 125
Ala Arg Asp Gly Leu Arg Tyr Asp Ser Ala Ser Asp Asn Val Tyr Met
130 135 140
Asn Ala Glu Gln Glu Glu Lys Ala Lys Lys Ala Asn Asn Pro Gln His
145 150 155 160
Ser Ile Thr Lys Asp Glu Ile Lys Gln Tyr Val Lys Glu Tyr Val Gln
165 170 175
Ala Ala Lys Asn Ser Ile Ala Ala Gly Ala Asp Gly Val Glu Ile His
180 185 190
Ser Ala Asn Gly Tyr Leu Leu Asn Gln Phe Leu Asp Pro His Ser Asn
195 200 205
Asn Arg Thr Asp Glu Tyr Gly Gly Ser Ile Glu Asn Arg Ala Arg Phe
210 215 220
Thr Leu Glu Val Val Asp Ala Val Val Asp Ala Ile Gly Pro Glu Lys
225 230 235 240
Val Gly Leu Arg Leu Ser Pro Tyr Gly Val Phe Asn Ser Met Ser Gly
245 250 255
Gly Ala Glu Thr Gly Ile Val Ala Gln Tyr Ala Tyr Val Leu Gly Glu
260 265 270
Leu Glu Arg Arg Ala Lys Ala Gly Lys Arg Leu Ala Phe Val His Leu
275 280 285
Val Glu Pro Arg Val Thr Asn Pro Phe Leu Thr Glu Gly Glu Gly Glu
290 295 300
Tyr Asn Gly Gly Ser Asn Lys Phe Ala Tyr Ser Ile Trp Lys Gly Pro
305 310 315 320
Ile Ile Arg Ala Gly Asn Phe Ala Leu His Pro Glu Val Val Arg Glu
325 330 335
Glu Val Lys Asp Pro Arg Thr Leu Ile Gly Tyr Gly Arg Phe Phe Ile
340 345 350
Ser Asn Pro Asp Leu Val Asp Arg Leu Glu Lys Gly Leu Pro Leu Asn
355 360 365
Lys Tyr Asp Arg Asp Thr Phe Tyr Lys Met Ser Ala Glu Gly Tyr Ile
370 375 380
Asp Tyr Pro Thr Tyr Glu Glu Ala Leu Lys Leu Gly Trp Asp Lys Asn
385 390 395 400
<210> 17
<211> 400
<212> PRT
<213> Saccharomyces cerevisiae
<400> 17
Met Pro Phe Val Lys Asp Phe Lys Pro Gln Ala Leu Gly Asp Thr Asn
1 5 10 15
Leu Phe Lys Pro Ile Lys Ile Gly Asn Asn Glu Leu Leu His Arg Ala
20 25 30
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Gly Gly Tyr Asp Asn Ala Pro Gly Ile Trp Ser Glu Glu Gln Ile Lys
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Glu Trp Thr Lys Ile Phe Lys Ala Ile His Glu Lys Lys Ser Phe Ala
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Trp Val Gln Leu Trp Val Leu Gly Trp Ala Ala Phe Pro Asp Thr Leu
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Ala Arg Asp Gly Leu Arg Tyr Asp Ser Ala Ser Asp Asn Val Tyr Met
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Asn Ala Glu Gln Glu Glu Lys Ala Lys Lys Ala Asn Asn Pro Gln His
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340 345 350
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<211> 400
<212> PRT
<213> Saccharomyces cerevisiae
<400> 18
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20 25 30
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245 250 255
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275 280 285
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290 295 300
Tyr Asn Gly Gly Ser Asn Glu Phe Ala Tyr Ser Ile Trp Lys Gly Pro
305 310 315 320
Ile Ile Arg Ala Gly Asn Phe Ala Leu His Pro Glu Val Val Arg Glu
325 330 335
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<211> 400
<212> PRT
<213> Saccharomyces cerevisiae
<400> 19
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<212> PRT
<213> Saccharomyces cerevisiae
<400> 20
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<212> PRT
<213> Saccharomyces cerevisiae
<400> 21
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<212> PRT
<213> Candida sake
<400> 22
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<211> 400
<212> PRT
<213> Kazachstania exigua
<400> 23
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210 215 220
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Leu Glu Arg Arg Ala Lys Ala Gly Lys Arg Leu Ala Phe Val His Leu
275 280 285
Val Glu Pro Arg Val Thr Asn Pro Phe Leu Thr Glu Gly Glu Gly Glu
290 295 300
Tyr Asn Gly Gly Ser Asn Glu Phe Ala Tyr Ser Ile Trp Lys Gly Pro
305 310 315 320
Ile Ile Arg Ala Gly Asn Phe Ala Leu His Pro Glu Val Val Arg Glu
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Asp Tyr Pro Thr Tyr Glu Glu Ala Leu Lys Leu Gly Trp Asp Lys His
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<210> 24
<211> 400
<212> PRT
<213> Naumovozyma castellii
<400> 24
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1 5 10 15
Leu Phe Lys Pro Thr Lys Ile Gly Asn Asn Glu Leu Leu His Arg Ala
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Trp Val Gln Leu Trp Val Leu Gly Trp Ala Ala Phe Pro Asp Thr Leu
115 120 125
Ala Arg Asp Gly Leu Arg Tyr Asp Ser Ala Ser Asp Asn Val Tyr Met
130 135 140
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145 150 155 160
Ser Ile Thr Lys Asp Glu Ile Lys Gln Tyr Val Lys Glu Tyr Val Gln
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Ala Ala Lys Asn Ser Ile Ala Ala Gly Ala Asp Gly Val Glu Ile His
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Ser Ala Asn Gly Tyr Leu Leu Asn Gln Phe Leu Asp Pro His Ser Asn
195 200 205
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Val Gly Leu Arg Leu Ser Pro Tyr Gly Val Phe Asn Ser Met Ser Gly
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Gly Ala Glu Thr Gly Ile Val Ala Gln Tyr Ala Tyr Val Leu Gly Glu
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370 375 380
Asp Tyr Pro Thr Tyr Glu Glu Ala Leu Lys Leu Gly Trp Asp Lys Gln
385 390 395 400
<210> 25
<211> 400
<212> PRT
<213> Kazachstania spencerorum
<400> 25
Met Ser Phe Val Lys Asp Phe Lys Pro Gln Ala Leu Gly Asp Thr Asn
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Leu Phe Lys Pro Ile Lys Ile Gly Asn Asn Glu Leu Leu His Arg Ala
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85 90 95
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100 105 110
Trp Val Gln Leu Trp Val Leu Gly Trp Ala Ala Phe Pro Asp Thr Phe
115 120 125
Ala Arg Asp Gly Leu Arg Tyr Asp Ser Ala Ser Asp Asn Val Tyr Met
130 135 140
Asn Ala Glu Gln Glu Glu Lys Ala Lys Lys Ala Asn Asn Pro Gln His
145 150 155 160
Ser Ile Thr Lys Asp Glu Ile Lys Gln Tyr Ala Lys Glu Tyr Val Gln
165 170 175
Ala Ala Lys Asn Ser Ile Ala Ala Gly Ala Asp Gly Val Glu Ile His
180 185 190
Ser Ala Asn Gly Tyr Leu Leu Asn Gln Phe Leu Asp Pro His Ser Asn
195 200 205
Asn Arg Thr Asp Glu Tyr Gly Gly Ser Ile Glu Asn Arg Ala Arg Phe
210 215 220
Thr Leu Glu Val Val Asp Ala Val Val Asp Ala Ile Gly Pro Glu Lys
225 230 235 240
Val Gly Leu Arg Leu Ser Pro Tyr Gly Val Phe Asn Ser Met Ser Gly
245 250 255
Gly Ala Glu Thr Gly Ile Val Ala Gln Tyr Ala Tyr Val Leu Gly Glu
260 265 270
Leu Glu Arg Arg Ala Lys Ala Gly Lys Arg Leu Ala Phe Val His Leu
275 280 285
Val Glu Pro Arg Val Thr Asn Pro Phe Leu Thr Glu Gly Glu Gly Glu
290 295 300
Tyr Asn Gly Gly Ser Asn Glu Phe Ala Tyr Ser Ile Trp Lys Gly Pro
305 310 315 320
Ile Ile Arg Ala Gly Asn Phe Ala Leu His Pro Glu Val Val Arg Glu
325 330 335
Glu Val Lys Asp Pro Arg Thr Leu Ile Gly Tyr Gly Arg Phe Phe Ile
340 345 350
Ser Asn Pro Asp Leu Val Asp Arg Leu Glu Lys Gly Leu Pro Leu Asn
355 360 365
Lys Tyr Asp Arg Asp Thr Phe Tyr Lys Met Ser Ala Glu Gly Tyr Ile
370 375 380
Asp Tyr Pro Thr Tyr Glu Glu Ala Leu Lys Leu Gly Trp Asp Lys Gln
385 390 395 400
<210> 26
<211> 400
<212> PRT
<213> Kazachstania solicola
<400> 26
Met Ser Phe Val Lys Asp Phe Lys Pro Gln Ala Leu Gly Asp Thr Asn
1 5 10 15
Leu Phe Lys Pro Ile Lys Ile Gly Asn Asn Glu Leu Leu His Arg Ala
20 25 30
Val Ile Pro Pro Leu Thr Arg Met Arg Ala Gln His Pro Gly Asn Ile
35 40 45
Pro Asn Arg Asp Trp Ala Val Glu Tyr Tyr Ala Gln Arg Ala Gln Arg
50 55 60
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65 70 75 80
Gly Gly Tyr Asp Asn Ala Pro Gly Ile Trp Ser Glu Glu Gln Ile Lys
85 90 95
Glu Trp Thr Lys Ile Phe Lys Ala Ile His Glu Lys Lys Ser Phe Ala
100 105 110
Trp Ile Gln Leu Trp Val Leu Gly Trp Ala Ala Phe Pro Asp Thr Phe
115 120 125
Ala Arg Asp Gly Leu Arg Tyr Asp Ser Ala Ser Asp Asn Val Tyr Met
130 135 140
Asn Ala Glu Gln Glu Glu Lys Ala Lys Lys Ala Asn Asn Pro Gln His
145 150 155 160
Ser Ile Thr Lys Asp Glu Ile Lys Gln Tyr Val Lys Glu Tyr Val Gln
165 170 175
Ala Ala Lys Asn Ser Ile Ala Ala Gly Ala Asp Gly Val Glu Ile His
180 185 190
Ser Ala Asn Gly Tyr Leu Leu Asn Gln Phe Leu Asp Pro His Ser Asn
195 200 205
Asn Gly Thr Asp Glu Tyr Gly Gly Ser Ile Glu Asn Arg Ala Arg Phe
210 215 220
Thr Leu Glu Val Val Asp Ala Val Val Asp Ala Ile Gly Pro Glu Lys
225 230 235 240
Val Gly Leu Arg Leu Ser Pro Tyr Gly Val Phe Asn Ser Met Ser Gly
245 250 255
Gly Ala Glu Thr Gly Ile Val Ala Gln Tyr Ala Tyr Val Leu Gly Glu
260 265 270
Leu Glu Arg Arg Ala Lys Ala Gly Lys Arg Leu Ala Phe Val His Leu
275 280 285
Val Glu Pro Arg Val Thr Asn Pro Phe Leu Thr Glu Gly Glu Gly Glu
290 295 300
Tyr Asn Gly Gly Ser Asn Glu Phe Ala Tyr Ser Ile Trp Lys Gly Pro
305 310 315 320
Ile Ile Arg Ala Gly Asn Phe Ala Leu His Pro Glu Val Val Arg Glu
325 330 335
Glu Val Lys Asp Pro Arg Thr Leu Ile Gly Tyr Gly Arg Phe Phe Ile
340 345 350
Ser Asn Pro Asp Leu Val Asp Arg Leu Glu Lys Gly Leu Pro Leu Asn
355 360 365
Lys Tyr Asp Arg Asp Thr Phe Tyr Lys Met Ser Ala Glu Gly Tyr Ile
370 375 380
Asp Tyr Pro Thr Tyr Glu Glu Ala Leu Lys Leu Gly Trp Asp Lys Gln
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<210> 27
<211> 400
<212> PRT
<213> Nakaseomyces bacillisporus
<400> 27
Met Ser Phe Val Lys Asp Phe Lys Pro Gln Ala Leu Gly Asp Thr Asn
1 5 10 15
Leu Phe Lys Pro Ile Lys Ile Gly Asn Asn Glu Leu Leu His Arg Ala
20 25 30
Val Ile Pro Pro Leu Thr Arg Met Arg Ala Gln His Pro Gly Asn Ile
35 40 45
Pro Asn Arg Asp Trp Ala Val Glu Tyr Tyr Ala Gln Arg Ala Gln Arg
50 55 60
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65 70 75 80
Gly Gly Tyr Asp Asn Ala Pro Gly Ile Trp Ser Glu Glu Gln Ile Lys
85 90 95
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100 105 110
Trp Val Gln Leu Trp Val Leu Gly Trp Ala Ala Phe Pro Asp Thr Phe
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Ala Arg Asp Gly Leu Arg Tyr Asp Ser Ala Ser Asp Asn Val Tyr Met
130 135 140
Asn Ala Glu Gln Glu Glu Lys Ala Lys Lys Ala Asn Asn Pro Gln His
145 150 155 160
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165 170 175
Ala Ala Lys Asn Ser Ile Ala Ala Gly Ala Asp Gly Val Glu Ile His
180 185 190
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195 200 205
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210 215 220
Thr Leu Glu Val Val Asp Ala Val Val Gly Ala Ile Gly Pro Glu Lys
225 230 235 240
Val Gly Leu Arg Leu Ser Pro Tyr Gly Val Phe Asn Ser Met Ser Gly
245 250 255
Gly Ala Glu Thr Gly Ile Val Ala Gln Tyr Ala Tyr Val Leu Gly Glu
260 265 270
Leu Glu Arg Arg Ala Lys Val Gly Lys Arg Leu Ala Phe Val His Leu
275 280 285
Val Glu Pro Arg Val Thr Asn Pro Phe Leu Thr Glu Gly Glu Gly Glu
290 295 300
Tyr Asn Gly Gly Ser Asn Glu Phe Ala Tyr Ser Ile Trp Lys Gly Pro
305 310 315 320
Ile Ile Arg Ala Gly Asn Phe Ala Leu His Pro Glu Val Val Arg Glu
325 330 335
Glu Val Lys Asp Pro Arg Thr Leu Ile Gly Tyr Gly Arg Phe Phe Ile
340 345 350
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355 360 365
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370 375 380
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<212> PRT
<213> Saccharomyces cerevisiae x Saccharomyces kudriavzevii VIN7
<400> 28
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1 5 10 15
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20 25 30
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50 55 60
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65 70 75 80
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85 90 95
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100 105 110
Trp Val Gln Leu Trp Val Leu Gly Trp Ala Ala Phe Pro Asp Thr Leu
115 120 125
Ala Arg Asp Gly Leu Arg Tyr Asp Ser Ala Ser Asp Asn Val Tyr Met
130 135 140
Asn Ala Glu Gln Glu Glu Lys Ala Lys Lys Ala Asn Asn Pro Gln His
145 150 155 160
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165 170 175
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180 185 190
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195 200 205
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210 215 220
Thr Leu Glu Val Val Asp Ala Ile Val Glu Ala Ile Gly Gln Glu Lys
225 230 235 240
Val Gly Leu Arg Leu Ser Pro Tyr Gly Val Phe Asn Ser Met Ser Gly
245 250 255
Gly Ala Glu Thr Gly Ile Val Ala Gln Tyr Ala Tyr Val Leu Gly Glu
260 265 270
Leu Glu Arg Arg Ala Asn Ala Gly Lys Arg Leu Ala Phe Val His Leu
275 280 285
Val Glu Pro Arg Val Thr Asn Pro Phe Leu Ala Glu Gly Glu Gly Ala
290 295 300
Tyr Asp Gly Gly Ser Asn Gln Phe Val Tyr Ser Ile Trp Lys Gly Ala
305 310 315 320
Ile Ile Arg Ala Gly Asn Tyr Ala Leu His Pro Glu Val Val Arg Glu
325 330 335
Glu Val Lys Asp Pro Arg Thr Leu Ile Gly Tyr Gly Arg Phe Phe Ile
340 345 350
Ser Asn Pro Asp Leu Val Asp Arg Leu Glu Lys Gly Leu Pro Leu Asn
355 360 365
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370 375 380
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<211> 400
<212> PRT
<213> Saccharomyces kudriavzevii IFO 1802
<400> 29
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1 5 10 15
Leu Phe Lys Pro Ile Lys Ile Gly Asn Asn Glu Leu Leu His Arg Ala
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Val Ile Pro Pro Leu Thr Arg Met Arg Ala Gln His Pro Gly Asn Val
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Pro Asn Lys Asp Trp Ala Val Glu Tyr Tyr Thr Gln Arg Ala Gln Arg
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65 70 75 80
Gly Gly Tyr Asp Asn Ala Pro Gly Ile Trp Ser Glu Glu Gln Met Lys
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Glu Trp Thr Lys Ile Phe Lys Ala Ile His Glu Lys Lys Ser Phe Ala
100 105 110
Trp Val Gln Leu Trp Val Leu Gly Trp Ala Ala Phe Pro Asp Thr Leu
115 120 125
Ala Arg Asp Gly Leu Arg Tyr Asp Ser Ala Ser Asp Asn Val Tyr Met
130 135 140
Ser Ala Glu Gln Glu Glu Lys Ala Lys Lys Ala Asn Asn Pro Gln His
145 150 155 160
Ser Leu Thr Lys Asp Glu Ile Lys Gln Tyr Ile Lys Glu Tyr Val Gln
165 170 175
Ala Ala Lys Asn Ser Ile Ala Ala Gly Ala Asp Gly Val Glu Ile His
180 185 190
Ser Ala Asn Gly Tyr Leu Leu Asn Gln Phe Leu Asp Pro His Ser Asn
195 200 205
Asn Arg Thr Asp Glu Tyr Gly Gly Ser Ile Glu Asn Arg Ala Arg Phe
210 215 220
Thr Leu Glu Val Val Asp Ala Ile Val Glu Ala Ile Gly Gln Glu Lys
225 230 235 240
Val Gly Leu Arg Leu Ser Pro Tyr Gly Val Phe Asn Ser Met Ser Gly
245 250 255
Gly Ala Glu Thr Gly Ile Val Ala Gln Tyr Ala Tyr Val Leu Gly Glu
260 265 270
Leu Glu Arg Arg Ala Asn Ala Gly Lys Arg Leu Ala Phe Val His Leu
275 280 285
Val Glu Pro Arg Val Thr Asn Pro Phe Leu Ala Glu Gly Glu Gly Ala
290 295 300
Tyr Asp Gly Gly Ser Asn Gln Phe Val Tyr Ser Ile Trp Lys Gly Ala
305 310 315 320
Ile Ile Arg Ala Gly Asn Tyr Ala Leu His Pro Glu Val Val Arg Glu
325 330 335
Glu Val Lys Asp Pro Arg Thr Leu Ile Gly Tyr Gly Arg Phe Phe Ile
340 345 350
Ser Asn Pro Asp Leu Val Asp Arg Leu Glu Lys Gly Leu Pro Leu Asn
355 360 365
Lys Tyr Asp Arg Thr Thr Phe Tyr Ser Met Ser Ala Lys Gly Tyr Ile
370 375 380
Asp Tyr Pro Thr Tyr Glu Glu Ala Leu Lys Leu Gly Trp Asp Lys Asn
385 390 395 400
<210> 30
<211> 360
<212> PRT
<213> Ocimum basilicum
<400> 30
Met Ala Lys Ser Pro Glu Thr Glu His Pro Val Lys Ala Leu Gly Trp
1 5 10 15
Ala Ala Thr Asp Asn Ser Gly Thr Phe Ser Pro Phe Asn Phe Ser Arg
20 25 30
Arg Ala Thr Gly Glu Arg Asp Val Gln Phe Arg Val Leu Tyr Cys Gly
35 40 45
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50 55 60
His Tyr Pro Ile Val Pro Gly His Glu Ile Val Gly Ile Val Thr Glu
65 70 75 80
Val Gly Ser Lys Val Glu Lys Val Lys Ile Gly Asp Lys Val Gly Val
85 90 95
Gly Val Leu Val Gly Ser Cys Arg Gln Cys Asp Gln Cys Ser Asn Asp
100 105 110
Leu Glu Asn Tyr Cys Tyr Lys Gln Ile Leu Thr Tyr Gly Ala Pro Tyr
115 120 125
Leu Asp Gly Thr Ile Ala Arg Gly Gly Tyr Ser Asp Ile Met Val Ala
130 135 140
Asp Glu His Phe Ile Ile Arg Trp Pro Glu Asn Phe Pro Leu Asp Ala
145 150 155 160
Gly Ala Pro Leu Leu Cys Ala Gly Ile Thr Thr Tyr Ser Pro Leu Lys
165 170 175
Tyr Phe Gly Leu Asp Lys Pro Gly Leu Arg Val Gly Val Asn Gly Leu
180 185 190
Gly Gly Leu Gly His Val Ala Val Lys Phe Ala Lys Ala Phe Gly Thr
195 200 205
Lys Val Thr Val Ile Ser Thr Ser Leu Ser Lys Lys Glu Glu Ala Met
210 215 220
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225 230 235 240
Met Gln Ala Ala Val Gly Thr Leu Asp Gly Ile Ile Asp Thr Val Ser
245 250 255
Ala Pro His Pro Ile Val Pro Leu Leu Ser Leu Leu Lys Pro His Gly
260 265 270
Lys Leu Ile Val Val Gly Leu Pro Asp Lys Pro Leu Gln Leu Pro Val
275 280 285
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290 295 300
Gly Leu Lys Glu Thr Gln Glu Met Ile Asp Phe Ala Ala Lys Asn Asn
305 310 315 320
Ile Val Ala Asp Val Glu Val Ile Pro Ile Asp Tyr Ile Asn Thr Ala
325 330 335
Met Asp Arg Leu Leu Lys Ser Asp Val Lys Tyr Arg Phe Val Ile Asp
340 345 350
Val Glu Lys Ser Leu Lys Pro Gln
355 360
<210> 31
<211> 360
<212> PRT
<213> Ocimum basilicum
<400> 31
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20 25 30
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35 40 45
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50 55 60
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65 70 75 80
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Gly Val Leu Val Gly Ser Cys Arg Gln Cys Asp Gln Cys Ser Asn Asp
100 105 110
Leu Glu Asn Tyr Cys Tyr Lys Gln Ile Leu Thr Tyr Gly Ala Pro Tyr
115 120 125
Leu Asp Gly Thr Ile Ala Arg Gly Gly Tyr Ser Asp Ile Met Val Ala
130 135 140
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145 150 155 160
Gly Ala Pro Leu Leu Cys Ala Gly Ile Thr Thr Tyr Ser Pro Leu Lys
165 170 175
Tyr Phe Gly Leu Asp Lys Pro Gly Leu Arg Val Gly Val Asn Gly Leu
180 185 190
Gly Gly Leu Gly His Val Ala Val Lys Phe Ala Lys Ala Phe Gly Thr
195 200 205
Lys Val Thr Val Ile Ser Thr Ser Leu Ser Lys Lys Glu Glu Ala Met
210 215 220
Gln His Leu Gly Val Asp Glu Phe Val Val Ser Thr Asp Pro Gln Gln
225 230 235 240
Met Gln Ala Ala Val Gly Thr Leu Asp Gly Ile Ile Asp Thr Val Ser
245 250 255
Ala Pro His Pro Ile Val Pro Leu Leu Ser Leu Leu Lys Pro His Gly
260 265 270
Lys Leu Ile Val Val Gly Leu Pro Asp Lys Pro Leu Gln Leu Pro Val
275 280 285
Phe Pro Leu Ile Gln Gly Arg Arg Thr Ile Ala Gly Ser Gly Ile Gly
290 295 300
Gly Leu Lys Glu Thr Gln Glu Met Ile Asp Phe Ala Ala Lys Asn Asn
305 310 315 320
Ile Val Ala Asp Val Glu Val Ile Pro Ile Asp Tyr Ile Asn Thr Ala
325 330 335
Met Asp Arg Leu Leu Lys Ser Asp Val Lys Tyr Arg Phe Val Ile Asp
340 345 350
Val Glu Lys Ser Leu Lys Pro Gln
355 360
<210> 32
<211> 354
<212> PRT
<213> Ocimum americanum
<400> 32
Met Ala Lys Ser Pro Glu Thr Glu His Pro Val Lys Ala Leu Gly Trp
1 5 10 15
Ala Ala Thr Asp Asn Ser Gly Thr Phe Ser Pro Phe Asn Phe Ser Arg
20 25 30
Arg Ala Thr Gly Glu Arg Asp Val Gln Phe Arg Val Leu Tyr Cys Gly
35 40 45
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50 55 60
Leu Tyr Pro Ile Val Pro Gly His Glu Ile Val Gly Ile Val Thr Glu
65 70 75 80
Val Gly Ser Lys Val Glu Lys Val Lys Val Gly Asp Lys Val Gly Val
85 90 95
Gly Val Leu Val Gly Ser Cys Arg Gln Cys Asp Gln Cys Ser Asn Asp
100 105 110
Leu Glu Asn Tyr Cys Tyr Lys Gln Ile Leu Thr Tyr Gly Ala Pro Tyr
115 120 125
Leu Asp Gly Thr Ile Thr Arg Gly Gly Tyr Ser Asp Thr Asp Glu His
130 135 140
Phe Ile Ile Arg Trp Pro Glu Asn Phe Pro Leu Asp Ala Gly Ala Pro
145 150 155 160
Leu Leu Cys Ala Gly Ile Thr Thr Tyr Ser Pro Leu Lys Tyr Phe Gly
165 170 175
Leu Asp Lys Pro Gly Leu Arg Val Gly Val Asn Gly Leu Gly Gly Leu
180 185 190
Gly His Val Ala Val Lys Phe Ala Lys Ala Phe Gly Thr Lys Val Thr
195 200 205
Val Ile Ser Thr Ser Leu Ala Lys Lys Glu Glu Ala Ile Gln His Leu
210 215 220
Gly Val Asp Glu Phe Val Val Ser Thr Asp Pro Gln Gln Met Gln Ala
225 230 235 240
Ala Val Gly Thr Leu Asp Gly Ile Ile Asp Thr Val Ser Ala Pro His
245 250 255
Pro Val Val Pro Leu Leu Ser Leu Leu Lys Pro His Gly Lys Leu Ile
260 265 270
Val Val Gly Leu Pro Asp Lys Pro Leu Gln Leu Pro Ala Phe Pro Leu
275 280 285
Ile Gln Gly Arg Lys Thr Val Ala Gly Ser Gly Ile Gly Gly Leu Lys
290 295 300
Glu Thr Gln Glu Met Ile Asp Phe Ala Ala Lys Asn Asn Ile Val Ala
305 310 315 320
Asp Val Glu Val Ile Pro Ile Asp Tyr Ile Asn Thr Ala Met Asp Arg
325 330 335
Leu Asp Val Lys Tyr Arg Phe Val Ile Asp Val Glu Lys Ser Leu Lys
340 345 350
Pro Gln
<210> 33
<211> 360
<212> PRT
<213> Perilla setoyensis
<400> 33
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50 55 60
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Gly Val Ile Val Gly Ser Cys Arg Gln Cys Asp Gln Cys Ser Asn Asp
100 105 110
Leu Glu Asn Tyr Cys Ser Lys Gln Ile Leu Thr Tyr Gly Ala Pro Tyr
115 120 125
Ile Asp Gly Thr Ile Thr Arg Gly Gly Tyr Ser Asn Ile Met Val Ala
130 135 140
Asp Glu His Phe Ile Ile Arg Trp Pro Glu Asn Leu Pro Leu Asp Ala
145 150 155 160
Gly Ala Pro Leu Leu Cys Ala Gly Ile Thr Thr Tyr Ser Pro Leu Arg
165 170 175
Tyr Tyr Gly Leu Asp Lys Pro Gly Leu Ser Val Gly Val Asn Gly Leu
180 185 190
Gly Gly Leu Gly His Val Ala Val Lys Phe Ala Lys Ala Phe Gly Thr
195 200 205
Lys Val Thr Val Ile Ser Thr Ser Leu Gly Lys Lys Lys Glu Ala Ile
210 215 220
Glu His Leu Gly Val Asp Glu Phe Leu Val Ser Ser Asp Pro Gln Gln
225 230 235 240
Met Gln Ala Ala Val Gly Thr Leu Asp Gly Ile Ile Asp Thr Val Ser
245 250 255
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260 265 270
Lys Leu Ile Val Val Gly Ala Pro Gln Lys Pro Leu Gln Leu His Ala
275 280 285
Phe Ser Leu Ile Gln Gly Arg Lys Thr Val Ala Gly Ser Gly Ile Gly
290 295 300
Gly Met Lys Glu Thr Gln Glu Met Ile Asp Phe Ala Ala Lys Lys Asn
305 310 315 320
Ile Ile Pro Asp Val Glu Val Ile Pro Ile Asp Tyr Ile Asn Thr Ala
325 330 335
Met Asp Arg Leu Leu Lys Ser Asp Val Lys Tyr Arg Phe Val Ile Asp
340 345 350
Val Asn Lys Ser Phe Asn Ala His
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<211> 360
<212> PRT
<213> Perilla setoyensis
<400> 34
Met Ala Lys Thr Pro Glu Thr Glu His Pro Val Lys Ala Phe Gly Trp
1 5 10 15
Ala Ala Arg Asp Asn Ser Gly Thr Leu Ser Pro Phe Asn Phe Ser Arg
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130 135 140
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Gly Ala Pro Leu Leu Cys Ala Gly Ile Thr Thr Tyr Ser Pro Leu Arg
165 170 175
Tyr Tyr Gly Leu Asp Lys Pro Gly Leu Ser Val Gly Val Asn Gly Leu
180 185 190
Gly Gly Leu Gly His Val Ala Val Lys Phe Ala Lys Ala Phe Gly Thr
195 200 205
Lys Val Thr Val Ile Ser Thr Ser Leu Gly Lys Lys Lys Glu Ala Ile
210 215 220
Glu His Leu Gly Val Asp Glu Phe Leu Val Ser Ser Asp Pro Gln Gln
225 230 235 240
Met Gln Ala Ala Val Gly Thr Leu Asp Gly Ile Ile Asp Thr Val Ser
245 250 255
Ala Glu His Pro Leu Val Pro Leu Met Ser Leu Leu Lys Pro His Gly
260 265 270
Lys Leu Ile Val Val Gly Ala Pro Glu Lys Pro Leu Gln Leu His Ala
275 280 285
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Gly Met Lys Glu Thr Gln Glu Met Ile Asp Phe Ala Ala Lys Lys Asn
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325 330 335
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340 345 350
Val Asn Lys Ser Phe Asn Ala His
355 360
<210> 35
<211> 360
<212> PRT
<213> Perilla setoyensis
<400> 35
Met Ala Lys Thr Pro Glu Thr Glu His Pro Val Lys Ala Phe Gly Trp
1 5 10 15
Ala Ala Arg Asp Asn Ser Gly Thr Leu Ser Pro Phe Asn Phe Ser Arg
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Arg Asp Thr Gly Glu Arg Asp Val Gln Phe Lys Val Leu Tyr Cys Gly
35 40 45
Val Cys His Ser Asp Leu His Met Val Lys Asn Glu Arg Gly Val Thr
50 55 60
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65 70 75 80
Val Gly Ser Lys Val Glu Lys Val Lys Ala Gly Asp Lys Val Gly Val
85 90 95
Gly Val Ile Val Gly Ser Cys Arg Gln Cys Asp Gln Cys Ser Asn Asp
100 105 110
Leu Glu Asn Tyr Cys Ser Lys Gln Ile Leu Thr Tyr Gly Ala Pro Tyr
115 120 125
Ile Asp Gly Thr Ile Thr Arg Gly Gly Tyr Ser Asn Ile Met Val Ala
130 135 140
Asp Glu His Phe Ile Ile Arg Trp Pro Glu Asn Leu Pro Leu Asp Ala
145 150 155 160
Gly Ala Pro Leu Leu Cys Ala Gly Ile Thr Thr Tyr Ser Pro Leu Arg
165 170 175
Tyr Tyr Gly Leu Asp Lys Pro Gly Leu Ser Val Gly Val Asn Gly Leu
180 185 190
Gly Gly Leu Gly His Val Ala Val Lys Phe Ala Lys Ala Phe Gly Thr
195 200 205
Lys Val Thr Val Ile Ser Thr Ser Leu Gly Lys Lys Lys Glu Ala Ile
210 215 220
Glu His Leu Gly Val Asp Glu Phe Leu Val Ser Ser Asp Pro Gln Gln
225 230 235 240
Met Gln Ala Ala Val Gly Thr Leu Asp Gly Ile Ile Asp Thr Val Ser
245 250 255
Ala Glu His Pro Leu Val Pro Leu Met Ser Leu Leu Lys Pro His Gly
260 265 270
Lys Leu Ile Val Val Gly Ala Pro Glu Lys Pro Leu Gln Leu His Ala
275 280 285
Phe Ser Leu Ile Gln Gly Arg Lys Thr Val Ala Gly Ser Ala Ile Gly
290 295 300
Gly Met Lys Glu Thr Gln Glu Met Ile Asp Phe Ala Ala Lys Lys Asn
305 310 315 320
Ile Ile Pro Asp Val Glu Val Ile Pro Ile Asp Tyr Ile Asn Thr Ala
325 330 335
Met Asp Arg Leu Leu Lys Ser Asp Val Lys Tyr Arg Phe Val Ile Asp
340 345 350
Val Asn Lys Ser Phe Asn Ala His
355 360
<210> 36
<211> 1704
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<221> gene
<222> (1)..(1704)
<223> 单链DNA寡核苷酸
<400> 36
atgagctgcg ctcgaattac cgttaccttg ccttatcgta gcgcaaagac ctctatccaa 60
cgtggcataa ctcattatcc tgctttgatt cgtcctagat tcagtgcctg cacacctctc 120
gcctcagcta tgcctttgtc atctacacct ctgattaatg gtgataactc acagcgcaag 180
aataccagac agcatatgga ggaaagttca agtaagagac gcgaatacct cttggaagag 240
acaactagaa aactgcaacg caacgataca gaatccgtgg aaaagctcaa attgatcgac 300
aatattcagc agctcggtat cggctactat ttcgaggatg caatcaacgc tgtgcttcga 360
agcccatttt ctaccggaga ggaagacttg ttcactgcag ctttgcgatt ccgtttgctg 420
cgtcacaatg gaattgaaat tagcccagag atcttcctga agttcaaaga cgagagggga 480
aaattcgacg aatctgatac acttggtttg ctgagtctct acgaggcttc aaacctcgga 540
gtcgcaggag aggaaatcct cgaagaggct atggagttcg cagaagctag acttcgaaga 600
tctctgagcg agcctgccgc acctctccat ggagaagtgg cacaagcact ggatgttcct 660
agacacctta gaatggctcg attggaagca aggcgattca tagagcagta tgggaaacaa 720
agcgatcatg acggagattt gcttgagctg gctatccttg attataatca ggtccaagcc 780
cagcaccaga gcgagttgac agagattatt cgttggtgga aggagcttgg actcgtggac 840
aaattgtctt tcgggcgaga tcgacccctt gagtgctttc tctggacagt cggactgctt 900
ccagagccaa aatactcttc agttaggatc gaattggcca aggcaattag tattctgctg 960
gtcatagacg acatctttga tacttacggt gaaatggatg atctgattct ctttactgac 1020
gctattcgaa gatgggacct tgaagcaatg gagggactcc ctgagtatat gaagatatgt 1080
tatatggctc tctacaatac tacaaacgaa gtttgctaca aagtcttgcg tgacacaggc 1140
aggatagtcc ttctgaatct taagtccacc tggattgata tgatagaagg cttcatggaa 1200
gaggccaaat ggtttaatgg tggctccgcc ccaaagttgg aggagtatat tgagaacgga 1260
gtttccaccg ccggggccta catggccttt gctcatattt tctttctcat tggcgaggga 1320
gtgacccacc agaatagcca actctttact caaaagccct atcccaaagt gttctctgca 1380
gctggacgta ttcttcgact ttgggatgat ctgggcactg ccaaagagga acaagagaga 1440
ggggatcttg caagctgcgt ccaactgttt atgaaagaga agtctctgac agaagaagaa 1500
gccaggagca gaatcctgga agaaatcaaa gggctttggc gagatttgaa tggagagctg 1560
gtctacaaca aaaacctgcc tctctccata atcaaggtcg cattgaacat ggctcgcgct 1620
agtcaagttg tctataagca cgatcaagac acctactttt catctgtcga taattatgtg 1680
gacgctcttt tctttaccca gtaa 1704
<210> 37
<211> 1704
<212> DNA
<213> Ocimum basilicum
<400> 37
atgtcttgtg cacggatcac cgtaacattg ccgtatcgct ccgcaaaaac atcaattcaa 60
cggggaatta cgcattaccc cgcccttata cgcccacgct tctctgcttg cacgcctttg 120
gcatcggcga tgcctctaag ttcaactcct ctcatcaacg gggataactc tcagcgtaaa 180
aacacacgtc aacacatgga ggagagcagc agcaagagga gagaatatct gctggaggaa 240
acgacgcgaa aactgcagag aaacgacacc gaatcggtgg agaaactcaa gcttatcgac 300
aacatccaac agttgggaat cggctactat tttgaggacg ccatcaacgc cgtactccgc 360
tcgcctttct ccaccggaga agaagacctc ttcaccgctg ctctgcgctt ccgcttgctc 420
cgccacaacg gcatcgaaat cagccctgaa atattcctaa aattcaagga cgagagggga 480
aaattcgacg aatcggacac gctagggtta ctgagcttgt acgaagcgtc aaatttgggg 540
gttgcaggag aagaaatatt ggaggaggct atggagtttg cggaggctcg cctgagacgg 600
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gtgatcgatg atattttcga tacctatgga gagatggatg acctcatcct cttcaccgat 1020
gcaattcgaa gatgggatct tgaagcaatg gaggggctcc ctgagtacat gaaaatatgc 1080
tacatggcgt tgtacaatac caccaatgaa gtatgctaca aagtgctcag ggatactgga 1140
cggattgtcc tccttaacct caaatctacg tggatagaca tgattgaagg tttcatggag 1200
gaagcaaaat ggttcaatgg tggaagtgca ccaaaattgg aagagtatat agagaatgga 1260
gtgtccacgg caggagcata catggctttt gcacacatct tctttctcat aggagaaggt 1320
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tctcaagttg tgtacaagca cgatcaagac acttattttt caagcgtaga caattatgtg 1680
gatgccctct tcttcactca ataa 1704
<210> 38
<211> 1725
<212> DNA
<213> Ocimum basilicum
<400> 38
atgtcttgtg cacggatcac cgtaacattg ccgtatcgct ccgcaaaaac atcaattcaa 60
cggggaatta cgcattgccc cgcccttctc cgcccacgct tctctgcttg cacacctttg 120
gcatccgcag tgcctctaag ttcaactcct ctcatcaacg gggataactc tccgcttaaa 180
aacacacatc aacacgtgga ggagaggagc agcaagagga gagaatatct gctggaggaa 240
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ctacctcacc ctaaatactc ttcttctaga atagaatcag ccaaggcagc tgctcttctg 960
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aattacgtgg aagccctctt cttcactcct cttctttctt cttag 1725
<210> 39
<211> 1093
<212> DNA
<213> Olea europaea
<400> 39
ctgatgtctt tcttaaattc atggaaaaga acatgaaatt caaggawcat ttggctcaag 60
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ttgctaaatt gttgagaaaa ccatatccka aactcttttc cgcwgcyggg agaattcttc 960
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gcatgcagat attaatgaga gagaaraaca tagattgtga aaacgaaggc agaaattata 1080
ttctgaaagc tat 1093
<210> 40
<211> 1752
<212> DNA
<213> Olea europaea
<400> 40
atggactgta caatgacgag tatttccttg ttttcacagt catctaatgg tatttcagga 60
actgcaagaa gtccatttca atggccgata aatcatcgat tttcgtcggg tcaacgtgat 120
ttcatttgca agtcgttgcc cgtgtcgtcg cctagtgcaa cgccattgat ccctgctgaa 180
aatggtgcta tgtataatta tatacgtcaa cctgtgatag ttactcctga agttgacgac 240
ggcacgaagc acagcgaatt ggtcgaaaga actcgacgag aactgcaaag aagtacaaaa 300
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caacttcgtc gacaagttag ttctgcctta gagctcccga ggcacctcag gatggctcgg 720
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ttggaactgg caagattaga ttataacaaa gtccagttac agcaccaaat ggaattggct 840
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acatatggca aaatggagga acttgttctt ttcactgaag caattcaaag atgggatctt 1080
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accaatgaaa tctgctacaa aatcctcaag gagtatggat tttgcgtcct tccctacctt 1200
aaatccacgt ggatagatat gattgagggg tttatggtag aggcaaattg gttcaacggt 1260
ggacatggac caaatttgga ggaatatata gaaaatggtg tttcaacagc aggagcatat 1320
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tgggatgatc taggaactgc caaggaggag gaagaacgag gcgatcttgc atcgtgcatg 1500
cagatattaa tgagagagaa gaacatagat tgtgaaaacg aaggcagaaa ttatattctg 1560
aaagctataa acggcctatg gaaagatctg aacgatgaac tgatttcacc aaatgcaatg 1620
ccattagcca ttaccaaagt tgcattaaac atggctagag cttttgaagt tgtttacaag 1680
catgaagagg actcctactt ttccagcgtc gataattatg tacaggcttt gtttttcact 1740
cccattaatt ga 1752
<210> 41
<211> 1755
<212> DNA
<213> Phyla dulcis
<400> 41
atggcgagtg caagaagcac catatctttg tcctcacagt catctcatca tgggttctcc 60
aaaaactcat ttccatggca actgaggcat tcccgctttg ttatgggttc tcgagcacgt 120
acctgcgcat gcatgtcatc atcagtatca ctgcctactg caacgacgtc gtcctcagtc 180
attacaggca acgatgccct cctcaaatac atacgtcagc ctatggtaat tcctttgaaa 240
gaaaaggagg gcacgaagag acgagaatat ctgctggaga aaactgcaag ggaactgcag 300
ggaactacgg aggcagcgga gaaactgaaa ttcattgata caatccaacg gctgggaatc 360
tcttgctatt tcgaggatga aatcaacggc atactgcagg cggagttatc cgatactgac 420
cagcttgagg acggcctctt cacaacggct ctacgcttcc gtttgctccg tcactacggc 480
taccaaatcg ctcccgacgt cttcctaaaa ttcacggacc aaaatggaaa attcaaagaa 540
tccttagcgg atgacacaca aggattagtc agcttatacg aagcatcata tatgggagca 600
aacggagaaa acatattaga agaagctatg aaattcacca aaactcatct ccaaggaaga 660
caacatgcga tgagagaagt ggctgaagcc ttggagcttc cgaggcatct gagaatggcc 720
aggttagaag caagaagata catcgaacaa tatggtacaa tgattggaca tgataaagac 780
ctcttggagc tagtaatatt ggactataac aatgtccagg ctcagcacca agcggaactc 840
gccgaaattg ccagatggtg gaaggagctt ggtctagttg acaagttaac tttcgcgcga 900
gatagaccat tggagtgctt tttgtggact gtcggtcttc tacctgaacc caaatactct 960
gcttgccgaa tcgagctcgc aaaaacaata gccattctat tggtaatcga tgatatcttc 1020
gatacctatg ggaaaatgga agaactcgct cttttcacgg aggcaattag aagatgggat 1080
cttgaagcta tggaaaccct tcccgagtac atgaaaatat gctatatggc attgtacaat 1140
accaccaacg agatatgcta caaagtcctc aagaaaaatg gatggagtgt tctcccatac 1200
ctaagatata cgtggatgga catgatagaa ggttttatgg tggaggcaaa gtggttcaat 1260
ggtggaagtg ctccaaactt ggaagagtac atagagaatg gagtctcaac ggctggggca 1320
tacatggctt tggtgcatct cttctttcta attggggaag gtgtcagtgc gcaaaatgcc 1380
caaatattac tgaagaaacc ctatcctaag ctcttctcgg ctgccggtcg aattcttcgc 1440
ctttgggatg atcttggaac ggctaaggag gaggaaggaa gaggtgatct tgcatcgagc 1500
atacgtttat tcatgaaaga aaagaaccta acaacggaag aggaagggag aaatggtata 1560
caggaggaga tatatagctt atggaaagac ctaaacggag agctcatttc taaaggtagg 1620
atgccattgg ccatcatcaa agtggcactt aacatggcta gagcttctca agtggtgtac 1680
aagcatgacg aggactctta tttttcatgt gtagacaatt atgtggaggc cctgttcttc 1740
actcctctcc tttga 1755
<210> 42
<211> 1770
<212> DNA
<213> Catharanthus roseus
<400> 42
atggcagcca caattagtaa cctttctttc ttagcaaaat ctagggcact ttcaaggcct 60
tcttcttctt cactttcatg gctagaaagg cctaaaactt catcgactat ttgcatgtct 120
atgccatcat cttcatcatc atcatcatct tcatccatgt ctctgccttt ggcaactcca 180
ttgatcaaag acaatgaatc tctcatcaag ttcttgcgcc aacccctggt gcttcctcat 240
gaggttgatg acagcacaaa aaggagggaa ttgttggaaa gaacaagaaa agaactagaa 300
ttaaatgcag aaaaaccatt ggaggccttg aagatgatag atataattca aagattggga 360
ttatcatatc attttgaaga tgatattaat tcaattctca caggattttc aaatattagc 420
agccaaactc atgaagatct cctcactgct tcactttgtt ttcgattgct tcgacacaat 480
gggcataaga tcaatcctga tatattccaa aaattcatgg acaacaatgg aaagtttaaa 540
gattcattaa aggatgacac attaggcatg ttaagcttat atgaagcttc atatttggga 600
gccaatggag aagaaatatt gatggaagcc caagaattca ccaaaactca cctgaaaaac 660
tcattgccag ccatggcacc atctctttct aagaaggttt ctcaagcttt agagcaacca 720
agacatagaa gaatgttgag gttagaagct agaagattta ttgaagaata tggtgctgaa 780
aatgaccata atccagacct tcttgagctt gcaaaattgg attataacaa agtccaatct 840
ctacaccaaa tggaattgtc tgagataaca aggtggtgga aacaattagg gcttgtggat 900
aaactcacct ttgctcgaga tcgacccctt gaatgctttc tttggacagt gggattatta 960
ccagagccta agtattcagg ttgcagaatt gagcttgcaa aaaccatagc cattttgctt 1020
gtcattgatg atatctttga tactcatggt accctagatg agcttcttct attcactaat 1080
gccattaaaa gatgggatct tgaggccatg gaagatttac cagaatatat gagaatttgt 1140
tacatggcat tgtacaatac tactaatgaa atttgctata aagttcttaa ggaaaatggt 1200
tggagtgttc ttccttacct aaaggcaacg tggattgata tgattgaagg attcatggtt 1260
gaagcagaat ggttcaattc tgattatgta ccaaacatgg aagaatatgt agaaaatgga 1320
gttagaacag caggatcata tatggcctta gtccatttgt tctttctaat agggcaaggt 1380
gtcactgaag ataatgtgaa attactgatt aaaccctatc caaagctctt ttcctcctca 1440
ggaagaatcc ttcgcctttg ggatgatttg ggaactgcaa aggaggaaca agaaagagga 1500
gacttggcat caagcataca attgtttatg agagagaaag agataaaatc agaagaagaa 1560
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gtttatagag aagaaatgcc tcttgcaata atcaagacag cattcaacat ggcaagagct 1680
tcccaagttg tgtatcaaca tgaagaagac acctattttt caagtgtaga taattatgta 1740
aaagctttgt tttttacacc ttgtttttaa 1770
<210> 43
<211> 1761
<212> DNA
<213> Picrorhiza kurrooa
<400> 43
atgggttgta ttaggagcac cacacacact tcaactaatt acgggattaa ttcaagactc 60
ggtttatctt tcccggtccc cattatatat cgccccgccg gggcaagccg taatatctcc 120
atttacatgt cttcatccgc ggcgcctaac gttacacagg tggttgtcgg agctaacgac 180
gccctactcc aatacacaca tcaaccaatg ttgataccgt cagaagtaga tgcagacacc 240
gagaggaggg attatttgtt ggaaaaagct cgacaagaac tgagccgaac aacaaaacca 300
acggataagc ttaaactgat tgacatgatc caacgacttg gaattgggtt ttatttagaa 360
gacgatatca acgctatact aaggactcaa ttctccgtta atgtgataga tgaagaagac 420
ctttccgcca ccggattacg ctttcgtatg ctccgtcaaa atagcttccc aatctcttcc 480
gatattttca agagattcca ggatcaaaat gaaaaattcg atgaaacttt aaccaacgac 540
acgttggggg ttattgagct tgtacgaagc atcatacatg gggagccaaa gggcgaagag 600
atattggagg aagccatgga atttagcaag actcgcctca agaggtccct ttccagtctc 660
ccggcgcaaa tcaaagccga cgtgggtcaa gccttggagc ttccaacaca cttgaggatg 720
gccagattag aagctagacg attcatcgaa caatacgcta cgcaaagtga tcacaatcct 780
atccttttag aactagcaac actggactac aaccatgttc agtctcaaca ccaaatggag 840
ctggttgaaa tcactaggtg gtggaaacag ttgggtctag ttgaccaatt gagttttgct 900
cgggatagac ctttggaatg ctttttgtgg accgttgggc ttcttccaga gcccaagtac 960
tctagttgtc gcatcgaact cgcaaaaaca atcgccgttt tattggtaat cgatgatatt 1020
tttgacacat atggcaaaat ggatgatctt atcctcttca ctgatgcaat ccaaagatgg 1080
gatctcggag caatggaaag ccttccggaa tacatgaaaa tatgttatat ggcattgtac 1140
aacttaacca acgagatatg ttacaaagtt ctcaaagaga atggatggac tgtcctgccc 1200
tacttaaaat cgtcgtggat agatatgatt gaaggcttta tggtggaggc gaagtggttt 1260
aacgggggat gtgcaccaaa tttggaagag tacgtagaga atggagtttc aactgccggg 1320
tcgtacatgg cattggtgca tttgttcttt ttaatagggg aaggtgttac tgaacaaaat 1380
gcccaactct taatgaagaa accttatcct aaggcctttt cttccgccgg aagaattctt 1440
cgcctttggg atgatcttgg aaccgccaag gaagaacaag aacgaggtga tctagcgtcg 1500
agcataaact tattcatgaa agagagaaat cttgcaacag aagaggaagg tagagaatgc 1560
atattggaag atatatatgg atattggaaa gatcttaatg gagagctagt ttctcagaag 1620
gagatgccat tagccatcat caaagtggca ctgaacatgg caagggcttc ccaagtagtg 1680
tacaagcatg aagaagattc ttatttttcc aatgtagaca attatgtaca agcgctttta 1740
tttactcctc ttattatttg a 1761
<210> 44
<211> 1785
<212> DNA
<213> Valeriana officinalis
<400> 44
atgataactt catcgtcgtc cgttcgatct ttatgctgtc cgaaaaccag tatcatttca 60
ggcaaacttc ttccttcatt gctcctcact aacgtaataa atgtcagtaa tggtacgagt 120
agtcgcgctt gcgtttccat gtcgtcttta ccggtttcca agtccactgc ctcctccatt 180
gcagctccgt tggtccggga caacggctcc gcccttaact tttttcctca agctccacag 240
gttgaaatag atgaaagcag tagaataatg gagttggtag aagccactag aagaacactc 300
agaaacgaat cttctgattc tacggagaag atgaggttga tcgactccct tcaacgcctg 360
ggattgaacc accatttcga acaagacata aaggagatgc tacaagattt cgcaaatgag 420
cacaagaata caaaccaaga tctctttact acttcactac gttttcgatt gctaagacat 480
aatggcttta atgtcacgcc tgatgtattc aataaattca cggaggaaaa tggcaagttt 540
aaggaatcat taggcgagga cacaattggg attttaagtt tgtatgaagc gtcgtattta 600
gggggaaagg gggaagaaat attatcggag gcaatgaaat ttagcgaatc taaattaaga 660
gaatcttctg gacacgtggc acstcatatt cgtcgacaga ttttccagtc gttggagctt 720
ccgaggcatt tgagaatggc taggttagaa tcccgaagat acatcgaaga agattacagc 780
aatgaaattg gggctgattc ttccttgctt gaattagcaa aactcgattt caattcagta 840
caagcacttc accaaatgga attaaccgaa atttctaggt ggtggaaaca attgggtttg 900
tctgataagc taccatttgc acgcgatcga ccgttggaat gcttcttgtg gaccgtcgga 960
ttacttcctg aaccaaaata ttctggttgt aggattgagt tggccaaaac cattgccgtt 1020
ttgctcgtta ttgatgacat attcgacact tatggctcgt atgatcaact tattctcttc 1080
acaaacgcaa tcagaagatg ggatctagat gcaatggatg aacttcccga gtacatgaaa 1140
atatgctaca tggcattgta caacacgact aacgaaatat gttacaaagt acttaaagaa 1200
aacggatgga gtgttcttcc ttacctcgaa cgaacgtgga tagacatggt tgaaggattc 1260
atgctagaag ccaagtggtt aaacagcggc gaacaaccga atttggaagc atacatagaa 1320
aacggcgtta ccacagccgg ctcttacatg gctttagtac acttgttttt cctcatagga 1380
gacggcgtta acgatgagaa cgtgaaatta ctattagacc cttaccctaa actgttctca 1440
tcggctgggc gcattcttcg actgtgggac gatttgggta ctgctaagga ggaacaagag 1500
agaggggatg tatcttcaag catacaattg tacatgaagg agaagaatgt gagatcagag 1560
agtgaaggaa gggagggaat agtagagata atatacaact tgtggaaaga catgaatgga 1620
gaattgattg gttcaaacgc attgccgcaa gcaatcatag agacctcatt caacatggca 1680
agaacatcac aagttgtgta tcaacacgaa gatgatactt atttctctag tgtcgataac 1740
tatgtacaat ctctcttctt cactcctgtt tctgtttctg tttaa 1785
<210> 45
<211> 1778
<212> DNA
<213> Vitis vinifera
<400> 45
atgagcaggt tcgttaccat gccttcacat gtgctgccat cttcctttgt cgctccttca 60
cttcaagtct catcgtctcc ttgttcatgg cggacgcgcc cctccccttg caccagctgc 120
catttatcgc catcatcatc gtcaaagcca ctgcttggaa gccatgatta ttctttgctc 180
aagtccttaa ctctatctcc acatgcggtg aattctgaag ctgatagcag caccagaagg 240
atgaaagaag tgaaggaaag aacctgggag gcattctata gagcttggga ttcaagggct 300
gctatggaga tggtagacac agttgagagg ctaggtctat cataccattt tgaagacgag 360
ataaatgcac tattgcaaag gttctgcgac tggaatgcca gtgaagatct cttcaccact 420
gcccttcgtt tccggttgct tcgccaaaat ggattcccaa ctcattctga tgtttttggc 480
aagttcatgg ataagaatgg aaaattcaag gaaagcttga ctgaagacat atggggtatg 540
ctgagtttac atgaggcatc tcacttgggg gccaaaaatg aagaagtatt agcagaagcc 600
aaggagttca caaggattca cctcatacag tctatgccgc acatggaacc ccattttagc 660
agccatgtcg gccgggcact cgagcttccc aggcacttga ggatggtgag gttggaggct 720
agaaactata taggcgaata tagcagggaa agcaacccga acttagcttt tctagagcta 780
gcaaaattgg atttcgacat ggttcaatca ctgcaccaga aagagttggc tgagatagta 840
aggtggtgga aacagttggg tcttgttgat aagcttgatt ttgctcgaga ccggccgatg 900
gagtgcttct tatggacagt ggggatattt ccagatccca ggcattcaag ctgccgcatc 960
gaattaacca aggccattgc tatcttacta gttattgatg atatttacga ctcttatgga 1020
tctttggacg agcttgctct cttcactgat gcagtaaaaa gatgggatct tggtgcaatg 1080
gatcagctcc ctgagtacat gaagatatgt tacatggcat tgtacaacac tactaatgac 1140
attgcataca ggatcttgaa ggagcatgga tggagcgtca tagaagacct aaaacgaacg 1200
tggatggaca tctttggagc tttcctagct gaagcctatt gtttcaaagg tggccacgta 1260
ccctcactag aagagtatct aactaatgca gttaccactg gaggcacata catggccttg 1320
gtgcatgctt tttttcttat ggggcaaggt gttactaggg aaaatatggc catgttgaag 1380
ccctatccca acatcttctc ctgctcaggg aaaattcttc ggctttggga tgacttggga 1440
actgcaagag aggagcaaga gagaggagat aacgcgtcga gtatagaatg ctacaagcga 1500
gagcgagaga tggatactgt gttggaagat gaagcctgca ggaaacacat aaggcagatg 1560
atccagagct tgtgggtaga gctcaatggg gagctggttg cttcgtctgc attgcctctt 1620
tcaatcatca aagctgcctt taacctctca agaactgcac aagtcattta ccagcatgga 1680
gatgataaca agacttctag tgttgaagat catgtacaag cattgctctt taggcctgtt 1740
tcctctaatg ggcatgctca aattaccatg cattagat 1778
<210> 46
<211> 1788
<212> DNA
<213> Vitis vinifera
<400> 46
atggctttca atatgagcag gttcgttacc atgccttcac atgtgctgcc atcttccttt 60
gtcgctcctt cacttcaagt ctcatcgtct ccttgttcat ggcggacgcg cccctcccct 120
tgcaccagct gccatttatc gccatcatca tcgtcaaagc cactgcttgg aagccatgat 180
tattctttgc tcaagtcctt aactctatct ccacatgcgg tgaattctga agctgatagc 240
agcaccagaa ggatgaaaga agtgaaggaa agaacctggg aggcattcta tagagcttgg 300
gattcaaggg ctgctatgga gatggtagac acagttgaga ggctaggtct atcataccat 360
tttgaagacg agataaatgc actattgcaa aggttctgcg actggaatgc cagtgaagat 420
ctcttcacca ctgcccttcg tttccggttg cttcgccaaa atggattccc aactcattct 480
gatgtttttg gcaagttcat ggataagaat ggaaaattca aggaaagctt gactgaagac 540
atacggggta tgctgagttt acatgaggca tctcacttgg gggccaaaaa tgaagaagta 600
ttagcagaag ccaaggagtt cacaaggatt cacctcatac agtctatgcc gcacatggaa 660
ccccatttta gcagccatgt cggccgggca ctcgagcttc ccaggcactt gaggatggtg 720
aggttggagg ctagaaacta tataggcgaa tatagcaggg aaagcaaccc gaacttagct 780
tttctagagc tagcaaaatt ggatttcgac atggttcaat cactgcacca gaaagagttg 840
gctgagatat taaggtggtg gaaacagttg ggtcttgttg ataagcttga ttttgctcga 900
gaccggccga tggagtgctt cttatggaca gtggggatat ttccagatcc cagacattca 960
agctgccgca tcgaattaac caaggccatt gctatcttac tagttattga tgatatttac 1020
gactcttatg gatctttgga cgagcttgct ctcttcactg atgcagtaaa aagatgggat 1080
cttggtgcaa tggatcagct ccctgagtac atgaagatat gttacatggc attgtacaac 1140
actactaatg acattgcata caggatcttg aaggagcatg gatggagcgt catagaacac 1200
ctaaaacgaa cgtggatgga catctttgga gctttcctag ctgaagccta ttgtttcaaa 1260
ggtggccacg taccctcact agaagagtat ctaactaatg cagttaccac tggaggcaca 1320
tacatggcct tggtgcatgc tttttttctt atggggcaag gtgttactag ggaaaatatg 1380
gccatgttga agccctatcc caacatcttc tcctgctcag ggaaaattct tcggctttgg 1440
gatgacttgg gaactgcaag agaggagcaa gagagaggag ataacgcgtc gagtatagaa 1500
tgctacaagc gagagcgaga gatggatact gtgttggaag atgaagcctg caggaaacac 1560
ataaggcaga tgatccagag cttgtgggta gagctcaatg gggagctggt tgcttcgtct 1620
gcattgcctc tttcaatcat caaagctgcc tttaacctct caagaactgc acaagtcatt 1680
taccagcatg gagatgataa caagacttct agtgttgaag atcatgtaca agcattgctc 1740
tttaggcctg tttcctctaa tgggcatgct caaattacca tgcattag 1788
<210> 47
<211> 1377
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<221> gene
<222> (1)..(1377)
<223> 单链DNA寡核苷酸
<400> 47
atggcaagct ctatgctttc ctccgctgcc gttgtcacca gtccagctca ggctactatg 60
gttgcccctt tcactggtct caaatcctct gcctcttttc ccgtcacacg taaggccaat 120
aacgatatca cttctatcac ctctaacggt ggccgagttt cttgcatgaa agtgtggcct 180
tttgtcaaag actttaaacc ccaagctctt ggcgatacta accttttcaa gcccattaag 240
attggaaaca atgagttgct tcacagggct gttatccctc ctcttactag aatgagagca 300
caacacccag gaaacattcc taatcgcgat tgggccgttg aatactacgc tcaacgagca 360
cagaggccag gcactttgat cattactgag ggaacttttc cttcaccaca atctggcgga 420
tatgacaatg caccaggaat ctggagcgag gaacagatta aggagtggac caagatcttc 480
aaggctattc atgagaataa gtcatttgca tgggttcagc tctgggttct cgggtgggca 540
gcatttcctg acaccttggc tagggacggg ttgaggtacg attccgctag tgataacgtg 600
tacatgaatg ctgagcagga ggagaaagca aaaaaggcta acaatcccca gcattccatc 660
accaaggatg agattaagca atacgtcaag gaatatgtgc aagctgccaa aaactcaata 720
gccgccgggg cagacggtgt tgagattcat tccgctaatg gctacttgct taaccagttt 780
cttgatcctc actcaaacaa ccgcacagac gaatatgggg gatctataga gaatagagca 840
cgtttcacct tggaagtcgt tgacgccgtt gttgacgcta ttggtccaga gaaagtgggt 900
ctgcgactgt caccatatgg agttttcaat tcaatgagcg gtggagccga aaccggcata 960
gtcgctcagt acgcatatgt gttgggagaa ttggaaagga gagcaaaagc tggtaaacgt 1020
ctggcctttg ttcaccttgt ggagccacgt gtgacaaatc ctttcctgac tgaaggagaa 1080
ggcgaatata acggcggatc taacaagttc gcttactcca tctggaaagg accaatcatt 1140
agggccggaa acttcgccct tcatccagag gtcgttagag aagaggtgaa agatccaagg 1200
acactcattg gttatggccg ctttttcatc tcaaatccag atctcgttga tagattggag 1260
aaggggttgc ccttgaacaa gtatgatagg gacactttct ataagatgtc cgctgagggt 1320
tacattgatt accccactta tgaagaggct ttgaagctcg gatgggataa gaactaa 1377
<210> 48
<211> 1767
<212> DNA
<213> Saccharomyces cerevisiae
<400> 48
tcgaggtaac ctgccttgtt cctcctggtg actttctaaa atataaaagg aaaagcatat 60
ctctagtttc gagttttttc ttcatacttt atttccttat gttaaacggt ccagatatag 120
aataaatcat catattaagc taaatataga cgataatata gtatcgataa tgccatttgt 180
taaggacttt aagccacaag ctttgggtga caccaactta ttcaaaccaa tcaaaattgg 240
taacaatgaa cttctacacc gtgctgtcat tcctccattg actagaatga gagcccaaca 300
tccaggtaat attccaaaca gagactgggc cgttgaatac tacgctcaac gtgctcaaag 360
accaggaacc ttgattatca ctgaaggtac ctttccctct ccacaatctg ggggttacga 420
caatgctcca ggtatctggt ccgaagaaca aattaaagaa tggaccaaga ttttcaaggc 480
tattcatgag aataaatcgt tcgcatgggt ccaattatgg gttctaggtt gggctgcttt 540
cccagacacc cttgctaggg atggtttgcg ttacgactcc gcttctgaca acgtgtatat 600
gaatgcagaa caagaagaaa aggctaagaa ggctaacaac ccacaacaca gtataacaaa 660
ggatgaaatt aagcaatacg tcaaagaata cgtccaagct gccaaaaact ccattgctgc 720
tggtgccgat ggtgttgaaa tccacagcgc taacggttac ttgttgaacc agttcttgga 780
cccacactcc aataacagaa ccgatgagta tggtggatcc atcgaaaaca gagcccgttt 840
caccttggaa gtggttgatg cagttgtcga tgctattggc cctgaaaaag tcggtttgag 900
attgtctcca tatggtgtct tcaacagtat gtctggtggt gctgaaaccg gtattgttgc 960
tcaatatgct tatgtcttag gtgaactaga aagaagagct aaagctggca agcgtttggc 1020
tttcgtccat ctagttgaac ctcgtgtcac caacccattt ttaactgaag gtgaaggtga 1080
atacaatgga ggtagcaaca aatttgctta ttctatctgg aagggcccaa ttattagagc 1140
tggtaacttt gctctgcacc cagaagttgt cagagaagag gtgaaggatc ctagaacatt 1200
gatcggttac ggtagatttt ttatctctaa tccagatttg gttgatcgtt tggaaaaagg 1260
gttaccatta aacaaatatg acagagacac tttctacaaa atgtcagctg agggatacat 1320
tgactaccct acgtacgaag aagctctaaa actcggttgg gacaaaaatt aatagtgtta 1380
accgtacttt gtagcaccat ttctttttct tctaatttat ataattaatg aatatatata 1440
tttgggataa atagccttta tgaaatatta cagacttttt gcttgggcag caacagattt 1500
atatctttgt ggaaaggagt aaactgggct ttcactttag atcattattc acataaactt 1560
cttttagaat atgtttgaat gtaaatccac aaaatggaat cggtcattct acatcatgaa 1620
tattaattta ccttctttcc ttttatatgc tgtcattcat catcctatta cattatcaat 1680
cgttgcattt cagcttccat taatttcgac gactgtgtcc caatcctatg tcatcttctt 1740
acaccgcgtg taataatata gtagtaa 1767
<210> 49
<211> 1203
<212> DNA
<213> Saccharomyces cerevisiae
<400> 49
atgccatttg ttaaggactt taagccacaa gctttgggtg acaccaactt attcaaacca 60
atcaaaattg gtaacaatga acttctacac cgtgctgtca ttcctccatt gactagaatg 120
agagcccaac atccaggtaa tattccaaac agagactggg ccgttgaata ctacgctcaa 180
cgtgctcaaa gaccaggaac cttgattatc actgaaggta cctttccctc tccacaatct 240
gggggttacg acaatgctcc aggtatctgg tccgaagaac aaattaaaga atggaccaag 300
attttcaagg ctattcatga gaataaatcg ttcgcatggg tccaattatg ggttctaggt 360
tgggctgctt tcccagacac ccttgctagg gatggtttgc gttacgactc cgcttctgac 420
aacgtgtata tgaatgcaga acaagaagaa aaggctaaga aggctaacaa cccacaacac 480
agtataacaa aggatgaaat taagcaatac gtcaaagaat acgtccaagc tgccaaaaac 540
tccattgctg ctggtgccga tggtgttgaa atccacagcg ctaacggtta cttgttgaac 600
cagttcttgg acccacactc caataacaga accgatgagt atggtggatc catcgaaaac 660
agagcccgtt tcaccttgga agtggttgat gcagttgtcg atgctattgg ccctgaaaaa 720
gtcggtttga gattgtctcc atatggtgtc ttcaacagta tgtctggtgg tgctgaaacc 780
ggtattgttg ctcaatatgc ttatgtctta ggtgaactag aaagaagagc taaagctggc 840
aagcgtttgg ctttcgtcca tctagttgaa cctcgtgtca ccaacccatt tttaactgaa 900
ggtgaaggtg aatacaatgg aggtagcaac aaatttgctt attctatctg gaagggccca 960
attattagag ctggtaactt tgctctgcac ccagaagttg tcagagaaga ggtgaaggat 1020
cctagaacat tgatcggtta cggtagattt tttatctcta atccagattt ggttgatcgt 1080
ttggaaaaag ggttaccatt aaacaaatat gacagagaca ctttctacaa aatgtcagct 1140
gagggataca ttgactaccc tacgtacgaa gaagctctaa aactcggttg ggacaaaaat 1200
taa 1203
<210> 50
<211> 1203
<212> DNA
<213> Saccharomyces cerevisiae
<400> 50
atgccatttg ttaaggactt taagccacaa gctttgggtg acaccaactt attcaaacca 60
atcaaaattg gtaacaatga acttctacac cgtgctgtca ttcctccatt gactagaatg 120
agagcccaac atccaggtaa tattccaaac agagactggg ccgttgaata ctacgctcaa 180
cgtgctcaaa gaccaggaac cttgattatc actgaaggta cctttccctc tccacaatct 240
gggggttacg acaatgctcc aggtatccgg tccgaagaac aaattaaaga atggaccaag 300
attttcaagg ctattcatga gaataaatcg ttcgcatggg tccaattatg ggttctaggt 360
tgggctgctt tcccagacac ccttgctagg gatggtttgc gttacgactc cgcttctgac 420
aacgtgtata tgaatgcaga acaagaagaa aaggctaaga aggctaacaa cccacaacac 480
agtataacaa aggatgaaat taagcaatac gtcaaagaat acgtccaagc tgccaaaaac 540
tccattgctg ctggtgccga tggtgttgaa atccacagcg ctaacggtta cttgttgaac 600
cagttcttgg acccacactc caataacaga accgatgagt atggtggatc catcgaaaac 660
agagcccgtt tcaccttgga agtggttgat gcagttgtcg atgctattgg ccctgaaaaa 720
gtcggtttga gattgtctcc atatggtgtc ttcaacagta tgtctggtgg tgctgaaacc 780
ggtattgttg ctcaatatgc ttatgtctta ggtgaactag aaagaagagc taaagctggc 840
aagcgtttgg ctttcgtcca tctagttgaa cctcgtgtca ccaacccatt tttaactgaa 900
ggtgaaggtg aatacaatgg aggtagcaac aaatttgctt attctatctg gaagggccca 960
attattagag ctggtaactt tgctctgcac ccagaagttg tcagagaaga ggtgaaggat 1020
cctagaacat tgatcggtta cggtagattt tttatctcta atccagattt ggttgatcgt 1080
ttggaaaaag ggttaccatt aaacaaatat gacagagaca ctttctacaa aatgtcagct 1140
gagggataca ttgactaccc tacgtacgaa gaagctctaa aactcggttg ggacaaaaat 1200
taa 1203
<210> 51
<211> 1203
<212> DNA
<213> Saccharomyces cerevisiae
<400> 51
atgtcatttg taaaggattt caagccacaa gctttgggtg acaccaactt attcaaacca 60
atcaaaattg gtaacaatga acttctacac cgtgctgtca ttcctccatt gactagaatg 120
agagcccaac atccaggtaa tattccaaac agagactggg ccgttgaata ctacgctcaa 180
cgtgctcaaa gaccaggaac cttgattatc actgaaggta cctttccctc tccacaatct 240
gggggttacg acaatgctcc aggtatctgg tccgaagaac aaattaaaga atggaccaag 300
attttcaagg ctattcatga gaagaaatcg ttcgcatggg tccaattatg ggttctaggt 360
tgggctgctt tcccagacac ccttgctagg gatggtttgc gttacgactc cgcttctgac 420
aacgtgtata tgaatgcaga acaagaagaa aaggctaaga aggctaacaa cccacaacac 480
agtataacaa aggatgaaat taagcaatac gtcaaagaat acgtccaagc tgccaaaaac 540
tccattgctg ctggtgccga tggtgttgaa atccacagcg ctaacggtta cttgttgaac 600
cagttcttgg acccacactc caataacaga accgatgagt atggtggatc catcgaaaac 660
agagcccgtt tcaccttgga agtggttgat gcagttgtcg atgctattgg ccctgaaaaa 720
gtcggtttga gattgtctcc atatggtgtc ttcaacagta tgtctggtgg tgctgaaacc 780
ggtattgttg ctcaatatgc ttatgtctta ggtgaactag aaagaagagc taaagctggc 840
aagcgtttgg ctttcgtcca tctagttgaa cctcgtgtca ccaacccatt tttaactgaa 900
ggtgaaggtg aatacaatgg aggtagcaac gaatttgctt attctatctg gaagggccca 960
attattagag ctggtaactt tgctctgcac ccagaagttg tcagagaaga ggtgaaggat 1020
cctagaacat tgatcggtta cggtagattt tttatctcta atccagattt ggttgatcgt 1080
ttggaaaaag ggttaccatt aaacaaatat gacagagaca ctttctacaa aatgtcagct 1140
gagggataca ttgactaccc tacgtacgaa gaagctctaa aactcggctg ggacaagcat 1200
taa 1203
<210> 52
<211> 1203
<212> DNA
<213> Candida sake
<400> 52
atgtcatttg ttaaggattt caagccacaa gctttgggtg acaccaactt attcaaacca 60
atcaaaattg gtaacaatga acttctacac cgtgctgtca ttcctccatt gactagaatg 120
agagcccaac atccaggtaa tattccaaac agagactggg ccgttgaata ctacgctcaa 180
cgtgctcaaa gaccaggaac cttgattatc actgaaggta cctttccctc tccacaatct 240
gggggttacg acaatgctcc aggtatctgg tccgaagaac aaattaaaga atggaccaag 300
attttcaagg ctattcatga gaataaatcg ttcgcatggg tccaattatg ggttctaggt 360
tgggctgctt tcccagacac ccttgctagg gatggtttgc gttacgactc cgcttctgac 420
aacgtgtata tgaatgcaga acaagaagaa aaggctaaga aggctaacaa cccacaacac 480
agtataacaa aggatgaaat taagcaatac gtcaaagaat acgtccaagc tgccaaaaac 540
tccattgctg ctggtgccga tggtgttgaa atccacagcg ctaacggtta cttgttgaac 600
cagttcttgg acccacactc caataacaga accgatgagt atggtggatc catcgaaaac 660
agagcccgtt tcaccttgga agtggttgat gcagttgtcg atgctattgg ccctgaaaaa 720
gtcggtttga gattgtctcc atatggtgtc ttcaacagta tgtctggtgg tgctgaaacc 780
ggtattgttg ctcaatatgc ttatgtctta ggtgaactag aaagaagagc taaagctggc 840
aagcgtttgg ctttcgtcca tctagttgaa cctcgtgtca ccaacccatt tttaactgaa 900
ggtgaaggtg aatacaatgg aggtagcaac aaatttgctt attctatctg gaagggccca 960
attattagag ctggtaactt tgctctgcac ccagaagttg tcagagaaga ggtgaaggat 1020
cctagaacat tgatcggtta cggtagattt tttatctcta atccagattt ggttgatcgt 1080
ttggaaaaag ggttaccatt aaacaaatat gacagagaca ctttctacaa aatgtcagct 1140
gagggataca ttgactaccc tacgtacgaa gaagctctaa aactcggctg ggacaagaag 1200
taa 1203
<210> 53
<211> 1203
<212> DNA
<213> Kazachstania exigua
<400> 53
atgccatttg tcaaggattt taagccacaa gctttgggtg acaccaactt attcaaacca 60
atcaaaattg gtaacaatga acttctacac cgtgctgtca ttcctccatt gactagaatg 120
agagcccaac atccaggtaa tattccaaac agagactggg ccgttgaata ctacgctcaa 180
cgtgctcaaa gaccaggaac cttgattatc actgaaggta cctttccctc tccacaatct 240
gggggttacg acaatgctcc aggtatctgg tccgaagaac aaattaaaga atggaccaag 300
attttcaagg ctattcatga gaagaaatcg ttcgcatggg tccaattatg ggttctaggt 360
tgggctgctt tcccagacac ccttgctagg gatggtttgc gttacgactc cgcttctgac 420
aacgtgtata tgaatgcaga acaagaagaa aaggctaaga aggctaacaa cccacaacac 480
agtataacaa aggatgaaat taagcaatac gtcaaagaat acgtccaagc tgccaaaaac 540
tccattgctg ctggtgccga tggtgttgaa atccacagcg ctaacggtta cttgttgaac 600
cagttcttgg acccacactc caataacaga accgatgagt atggtggatc catcgaaaac 660
agagcccgtt tcaccttaga agtggttgat gcagttgtcg atgctattgg ccctgaaaaa 720
gtcggtttga gattgtctcc atatggtgtc ttcaacagta tgtctggtgg tgctgaaacc 780
ggtattgttg cccaatatgc ttatgtctta ggtgaactag aaagaagagc taaagctggc 840
aagcgtttgg ctttcgtcca tctagttgaa cctcgtgtca ccaacccatt tttaactgaa 900
ggtgaaggtg aatacaatgg aggtagcaac gaatttgctt attctatctg gaagggccca 960
attattagag ctggtaactt tgctctgcac ccagaagttg tcagagaaga ggtgaaggat 1020
cctagaacat tgatcggtta cggtagattt tttatctcta atccagattt ggttgatcgt 1080
ttggaaaaag ggttaccatt aaacaaatat gacagagaca ctttctacaa aatgtcagct 1140
gagggataca ttgactaccc tacgtacgaa gaagctctaa aactcggctg ggacaagcat 1200
taa 1203
<210> 54
<211> 1203
<212> DNA
<213> Naumovozyma castellii
<400> 54
atgtcatttg taaaagattt taagccacaa gctttgggtg acaccaactt attcaaacca 60
accaaaattg gtaacaatga acttctacac cgtgctgtca ttcctccatt gactagaatg 120
agagcccaac atccaggtaa tattccaaac agagactggg ccgttgaata ctacgctcaa 180
cgtgctcaaa gaccaggaac cttgattatc actgaaggta cctttccctc tccacaatct 240
gggggttacg acaatgctcc aggtatctgg tccgaagaac aaattaaaga atggaccaag 300
attttcaagg ctattcatga gaataaatcg ttcgcatggg tccaattatg ggttctaggt 360
tgggctgctt tcccagacac ccttgctagg gatggtttgc gttacgactc cgcttctgac 420
aacgtgtata tgaatgcaga acaagaagaa aaggctaaga aggctaacaa cccacaacac 480
agtataacaa aggatgaaat taagcaatac gtcaaagaat acgtccaagc tgccaaaaac 540
tccattgctg ctggtgccga tggtgttgaa atccacagcg ctaacggtta cttgttgaac 600
cagttcttgg acccacactc caataacaga accgatgagt atggtggatc catcgaaaac 660
agagcccgtt tcaccttgga agtggttgat gcagttgtcg atgctattgg ccctgaaaaa 720
gtcggtttga gattgtctcc atatggtgtc ttcaacagta tgtctggtgg tgctgaaacc 780
ggtattgttg ctcaatatgc ttatgtctta ggtgaactag aaagaagagc taaagctggc 840
aagcgtttgg ctttcgtcca tctagttgaa cctcgtgtca ccaacccatt tttaactgaa 900
ggtgaaggtg aatacaatgg aggtagcaac aaatttgctt attctatctg gaagggccca 960
attattaggg ctggtaactt tgctctgcac ccagaagttg tcagagaaga ggtgaaggat 1020
cctagaacat tgatcggtta cggtagattt tttatctcta atccagattt ggttgatcgt 1080
ttggaaaaag ggttaccatt aaacaaatat gacagagaca ctttctacaa aatgtcagct 1140
gagggataca ttgactaccc tacgtacgaa gaagctctaa aactcggctg ggacaaacag 1200
taa 1203
<210> 55
<211> 1203
<212> DNA
<213> Kazachstania spencerorum
<400> 55
atgtcatttg taaaggactt taagccacaa gctttgggtg acaccaactt attcaaacca 60
atcaaaattg gtaacaatga acttctacac cgtgctgtca ttcctccatt gactagaatg 120
agagcccaac atccaggtaa tattccaaac agagactggg ccgttgaata ctacgctcaa 180
cgtgctcaaa gaccaggaac cttgattatc actgaaggta cctttccctc tccacaatct 240
gggggttacg acaatgctcc aggtatctgg tccgaagaac aaattaaaga atggaccaag 300
attttcaagg ctattcatga gaagaaatcg ttcgcatggg tccaattatg ggttctaggt 360
tgggctgctt tcccagacac ctttgctagg gatggtttgc gttacgactc cgcttctgac 420
aacgtgtata tgaatgcaga acaagaagaa aaggctaaga aggctaacaa cccacaacac 480
agtataacaa aggatgaaat taagcaatac gctaaagaat acgtccaagc tgccaaaaac 540
tccattgctg ctggtgccga tggtgttgaa atccacagcg ctaacggtta cttgttgaac 600
cagttcttgg acccacactc caataacaga accgatgagt atggtggatc catcgaaaac 660
agagcccgtt tcaccttaga agtggttgat gcagttgtcg atgctattgg ccctgaaaaa 720
gtcggtttga gattgtctcc atatggtgtc ttcaacagta tgtctggtgg tgctgaaacc 780
ggtattgttg ctcaatatgc ttatgtctta ggtgaactag aaagaagagc taaagctggc 840
aagcgtttgg ctttcgtcca tctagttgaa cctcgtgtta ccaacccatt tttaactgaa 900
ggtgaaggtg aatacaatgg aggtagcaac gaatttgctt attctatctg gaagggccca 960
attattagag ctggtaactt tgctctgcac ccagaagttg tcagagaaga ggtgaaggat 1020
cctagaacat tgatcggtta cggtagattt tttatctcta atccagattt ggttgatcgt 1080
ttggaaaaag ggttaccatt aaacaaatat gacagagaca ctttctacaa aatgtcagct 1140
gagggataca ttgactaccc tacgtacgaa gaagctctaa aactcggttg ggacaaacag 1200
taa 1203
<210> 56
<211> 1203
<212> DNA
<213> Kazachstania spencerorum
<400> 56
atgtcatttg ttaaagattt caagccacaa gctttgggtg acaccaactt attcaaacca 60
atcaaaattg gtaacaatga acttctacac cgtgctgtca ttcctccatt gactagaatg 120
agagcccaac atccaggtaa tattccaaac agagactggg ccgttgaata ctacgctcaa 180
cgtgctcaaa gaccaggaac cttgattatc actgaaggta cctttccctc tccacaatct 240
gggggttacg acaatgctcc aggtatctgg tccgaagaac aaattaaaga atggaccaag 300
attttcaagg ctattcatga gaagaaatcg ttcgcatgga tccaattatg ggttctaggt 360
tgggctgctt tcccagacac ctttgctagg gatggtttgc gttacgactc cgcttctgac 420
aacgtgtata tgaatgcaga acaagaagaa aaggctaaga aggctaacaa cccacaacac 480
agtataacaa aggatgaaat taagcaatac gtcaaagaat acgtccaagc tgccaaaaac 540
tccattgctg ctggtgccga tggtgttgaa atccacagcg ctaacggtta cttgttgaac 600
cagttcttgg acccacactc caataacgga accgatgagt atggtggatc catcgaaaac 660
agagcccgtt tcaccttaga agtggttgat gcagttgtcg atgctattgg ccctgaaaaa 720
gtcggtttga gattgtctcc atatggtgtc ttcaacagta tgtctggtgg tgctgaaacc 780
ggtattgttg ctcaatatgc ttatgtctta ggtgaactag aaagaagagc taaagctggc 840
aagcgtttgg ctttcgtcca tctagttgaa cctcgtgtca ccaacccatt tttaactgaa 900
ggtgaaggtg aatacaatgg aggtagcaac gaatttgctt attctatctg gaagggccca 960
attattagag ctggtaactt tgctctgcac ccagaagttg tcagagaaga ggtgaaggat 1020
cctagaacat tgatcggtta cggtagattt tttatctcta atccagattt ggttgatcgt 1080
ttggaaaaag ggttaccatt aaacaaatat gacagagaca ctttctacaa aatgtcagct 1140
gagggataca ttgactaccc tacgtacgaa gaagctctaa aactcggttg ggacaagcag 1200
taa 1203
<210> 57
<211> 1203
<212> DNA
<213> Nakaseomyces bacillisporus
<400> 57
atgtcatttg ttaaggattt taagccacaa gctttgggtg acaccaactt attcaaacca 60
atcaaaattg gtaacaatga acttctacac cgtgctgtca ttcctccatt gactagaatg 120
agagcccaac atccaggtaa tattccaaac agagactggg ccgttgaata ctacgctcaa 180
cgtgctcaaa gaccaggaac cttgattatc actgaaggta cctttccctc tccacaatct 240
gggggttacg acaatgctcc aggtatctgg tccgaagaac aaattaaaga atggaccaag 300
attttcaagg ctattcatga gaagaaatcg ttcgcatggg tccaattatg ggttctaggt 360
tgggctgctt tcccagacac ctttgctagg gatggtttgc gttacgactc cgcttctgac 420
aacgtgtata tgaatgcaga acaagaagaa aaggctaaga aggctaacaa cccacaacac 480
agtataacaa aggatgaaat taagcaatac gtcaaagaat acgtccaagc cgccaaaaac 540
tccattgctg ctggtgccga tggtgttgaa atccacagcg ctaacggtta cttgttgaac 600
cagttcttgg acccacactc caataacaga accgatgagt atggtggatc catcgaaaac 660
agagcccgtt tcaccttaga agtggttgat gcagttgtcg gtgctattgg ccctgaaaaa 720
gtcggtttga gattgtctcc atatggtgtc ttcaacagta tgtctggtgg tgctgaaacc 780
ggtattgttg ctcaatatgc ttatgtctta ggtgaactag aaagaagagc taaagttggc 840
aagcgtttag ctttcgtcca tctagttgaa cctcgtgtca ccaacccatt tttaactgaa 900
ggtgaaggtg aatacaatgg aggtagcaac gaatttgctt attctatctg gaagggccca 960
attattagag ctggtaactt tgctctgcac ccagaagttg tcagagaaga ggtgaaggat 1020
cctagaacat tgatcggtta cggtagattt tttatctcta atccagattt ggttgatcgt 1080
ttggaaaaag ggttaccatt aaacaaatat gacagagaca ctttctacaa aatgtcagct 1140
gagggataca ttgactaccc tacgtacgaa gaagctctaa aactcggttg ggacaagcag 1200
taa 1203
<210> 58
<211> 1083
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<221> gene
<222> (1)..(1083)
<223> 单链DNA寡核苷酸
<400> 58
atggctaagt ctccagaaac cgagcatcct gttaaagcct tgggatgggc tgccactgat 60
aattccggaa cttttagtcc ctttaacttc tcaagaagag ccaccggaga gagggatgtt 120
caatttagag ttctttactg cggagtgtgt cattcagatc ttcacatggt taagaacgaa 180
tggggtgtca cacattatcc catagttcct gggcacgaaa tcgttggaat tgtgaccgaa 240
gtgggtagta aagtggagaa ggttaagatc ggagataagg ttggtgtggg cgttctcgtg 300
ggatcatgtc gccagtgtga tcaatgtagt aacgacttgg agaattactg ttacaagcag 360
attctcacat atggcgctcc atatctggac gggacaatag ctagaggagg ctattctgat 420
attatggtcg cagatgagca cttcataatt aggtggcctg aaaacttccc acttgatgca 480
ggcgctccac ttctctgtgc aggcattaca acttattctc cattgaaata cttcggtttg 540
gacaagcctg ggcttcgcgt tggcgttaac ggactcgggg gtctcggaca cgttgctgtg 600
aagtttgcta aggcattcgg aacaaaagtc actgtgatct caactagcct gagcaagaaa 660
gaagaggcta tgcagcatct tggagtcgat gaatttgtgg tcagtactga tccccaacaa 720
atgcaagccg cagtggggac tcttgacgga atcatagata ccgtgtccgc acctcatcct 780
atagtgcctc tgctttccct tttgaagcca catggtaagc tcatagttgt ggggcttcca 840
gataagccct tgcaacttcc tgtgtttcct ctcatccagg ggagaagaac aattgccggt 900
agcgggatag gtggactcaa ggaaacacaa gaaatgatag acttcgcagc caagaacaat 960
atcgttgccg acgtcgaagt gatcccaatt gattatatta acacagctat ggatcgcctt 1020
ctgaaaagcg acgttaagta ccgctttgtg atcgatgttg agaagagttt gaaaccccag 1080
taa 1083
<210> 59
<211> 1083
<212> DNA
<213> Ocimum basilicum
<400> 59
atggcgaaat caccagaaac agagcaccca gtgaaggcct tgggatgggc agccacagac 60
aattctggga ccttttctcc cttcaacttc tctaggaggg ccaccggcga gcgtgacgtg 120
cagttcaggg tattgtattg tggcgtttgt cattcagatc tccacatggt caagaatgag 180
tggggcgtta ctcactatcc cattgttcct gggcatgaaa tagtgggtat tgtgactgag 240
gtgggcagca aggtggagaa ggtgaagatc ggagacaaag ttggtgtagg ggtgttggtg 300
ggatcatgcc ggcagtgtga tcagtgcagc aatgatcttg aaaactactg ctacaagcaa 360
atcctgacct acggtgcccc ttacctcgat ggaaccattg ctcgcggagg ctactctgat 420
atcatggtgg cagacgagca tttcatcatc cgctggcctg aaaacttccc cctcgacgct 480
ggagcccctc tcctctgtgc tggtatcact acttacagtc ctctcaagta ttttggactg 540
gacaagcctg gactcagggt gggcgtcaac ggccttggtg gcctgggtca tgtagctgtc 600
aaatttgcta aagctttcgg gactaaggtg actgtcatca gcacatctct ttccaagaag 660
gaggaagcta tgcaacatct tggcgtggac gagtttgtag tcagcaccga tccacagcag 720
atgcaggctg cagtaggcac actagatggt atcattgaca cggtctctgc acctcatccc 780
attgttccgt tgctgagctt gctgaagcca cacgggaagc ttatcgtggt tggccttccc 840
gataagcccc tgcagcttcc ggttttcccc ttgattcaag gtaggaggac tatagccggg 900
agtggcatcg gcgggcttaa ggagacgcag gagatgatcg atttcgcggc caagaacaac 960
atagtagcgg acgtggaggt gatccccatc gactatataa acacagcaat ggatcggctt 1020
ctcaaatctg atgtcaagta ccgtttcgtc atcgatgttg aaaaatcctt gaaacctcag 1080
tga 1083
<210> 60
<211> 1646
<212> DNA
<213> Ocimum americanum
<400> 60
acaattccgg gaccttttct ccattcaagt tttctaggag gtacggaaat caaaatatta 60
ttgtgtgtgt gtgtgtgcgc gcgagagaga gattaattct tgtttgatgg tggatgtgta 120
ccggacgcgg gcatggcgaa atcaccagaa acagagcacc cagtgaaggc cttgggatgg 180
gcagccacag acaattctgg gaccttttct cccttcaact tctctaggag ggctaccggt 240
gagcgtgatg tgcagttcag ggtactgtat tgtggcgttt gtcattcaga tctgcacatg 300
gtcaagaatg agtggggggt tactctctat cccattgttc cagggtacgt accactcttt 360
catctcactt ttttgttatg tgcttgcctg tatgacttcc tttttaggca ttatactagt 420
aatcatagaa ttcaacaata tatcaatttt tttatttggt ctgatggctt caacttttca 480
ttgtaaaatt taatattgtt tctcctagct tcacctccgg atgaatttga gttttagggg 540
aagctttatc atctagaaaa atattgagct tagaaaatga aaggatgaag caaaatgcag 600
tgttattggt ggtgcttata ctagtttgtt gcgcagacat gaaattgtgg gtattgtgac 660
tgaggtgggc agcaaggtgg aaaaggtaaa agtcggagac aaagttggtg ttggagtgtt 720
ggtgggatca tgccggcagt gtgatcagtg cagcaatgat cttgaaaact actgctacaa 780
gcaaatactc acctacggcg ccccttacct tgatggaacc attactcgcg gaggctactc 840
cgatacagac gagcatttca tcatccgttg gcctgaaaac ttccccctcg acgctggagc 900
ccctctcctc tgtgctggta tcacaactta cagtccactc aagtattttg gactcgacaa 960
gcctggacta agggtgggtg tgaacggcct tggtgggctc ggtcatgtag ctgtcaaatt 1020
cgctaaggct ttcgggacta aggtcactgt catcagcaca tctcttgcca agaaggagga 1080
agctatacag catcttggtg tggacgagtt tgtagtcagc accgatccac agcagatgca 1140
ggtacactga caccactctc ttctccccac tttccctaaa ttcttcatct tcaatattaa 1200
tcttttgtgt gttggtttgg taggctgcag taggcacact agatggcatc attgacacgg 1260
tctctgcacc gcatcccgtt gttccgttgc tgagcttgct gaagccacac gggaagctta 1320
tcgtggtcgg ccttccagat aagcccctgc agcttcctgc tttccccttg attcaaggtt 1380
tgagttttca ttacattctt atttatctgt tatgtcttgt tgaaagttgg ttatatatgt 1440
ttgaggaaac aggtaggaag actgtggcgg ggagtggcat tggagggctt aaggagacgc 1500
aagagatgat tgatttcgcg gccaagaaca acatagtagc ggacgtggag gtcatcccca 1560
tcgactatat aaacacagca atggatcggc ttgatgtcaa gtaccgtttc gtcatcgatg 1620
ttgaaaaatc cttgaaacct cagtga 1646
<210> 61
<211> 1083
<212> DNA
<213> Perilla setoyensis
<400> 61
atggcgaaaa ccccagaaac agagcaccca cttaaggcct ttggttgggc tgccagagac 60
aattctggga ccttatctcc attcaatttt tctaggaggg ataccggtga gcgtgatgtg 120
cagttcaagg tgttgtactg tggcgtttgt cattcagatc tgcacatggt caagaatgag 180
tggggcgtaa ctcactaccc ggttgttccc gggcatgaga ttgtgggggt tgtgacagag 240
gtgggcagca aggtcgaaaa ggtgaaggcc ggggacaaag ttggtgtggg agtcatagtt 300
ggatcatgtc gccagtgtga tcagtgttcc aacgatcttg aaaactactg ctcgaagcaa 360
atacttacct acggtgcccc ttacattgat ggcaccatta ctcgtggagg ttactctaac 420
atcatggtgg cagacgagca tttcattatc cgttggcctg aaaacctgcc tctcgatgct 480
ggagctcctc tcctctgtgc tggcatcaca acttacagtc cattgaggta ctatggactc 540
gacaagcctg gactaagtgt tggtgtgaac ggccttggtg ggctgggtca tgtagccgtg 600
aaatttgcca aagcttttgg gactaaggtg actgttatca gcacatctct tggcaagaag 660
aaggaagcta ttgaacatct tggtgtggat gagtttttgg tcagtagtga cccgcagcag 720
atgcaggctg cagtaggcac actagatggc atcattgaca cagtctccgc agagcatcct 780
cttgcgccgt tgatgagctt gttgaagcct catgggaagc ttatcgtggt tggagctcca 840
caaaagcccc tgcagcttca tgcttttagc ctgatccaag gtaggaagac agtagcgggg 900
agtgggattg gagggatgaa ggagacgcaa gagatgattg atttcgcggc aaagaagaac 960
atcataccgg atgtggaggt catcccaata gactacataa acacagcaat ggatcgcctt 1020
ctcaaatctg atgtcaagta caggttcgtc attgatgtta acaaatcttt caatgctcac 1080
taa 1083
<210> 62
<211> 1083
<212> DNA
<213> Perilla citriodora
<400> 62
atggcgaaaa ccccagaaac agagcaccca gttaaggcct ttggttgggc tgccagagac 60
aattctggga ccttatctcc attcaatttt tctaggaggg ataccggtga gcgtgatgtg 120
cagttcaagg tgttgtactg tggcgtttgt cattcaggtc tgcacatggt caagaatgag 180
tggggcgtaa ctcactaccc ggttgttccc ggacatgaga ttgtgggggt tgtgacagag 240
gtgggcagca aggtcgaaaa ggtgaaggct ggggacaaag ttggtgtggg agtcatagtt 300
ggatcatgtc gccagtgtga tcagtgttcc aatgatcttg aaaactactg ctcgaagcaa 360
atacttacct acggtgcccc ttacattgat ggcaccatta ctcgcggagg ttactctaac 420
atcatggtgg cagacgagca tttcattatc cgttggcctg aaaacctgcc tctcgatgct 480
ggagctcctc tcctctgtgc tggcatcaca acttacagtc cattgaggta ctatggactc 540
gacaagcctg gactaagtgt tggtgtgaac ggccttggtg ggctgggtca tgtagccgtg 600
aaatttgcca aagcttttgg gactaaggtg actgttatca gcacatctct tggcaagaag 660
aaggaagcta ttgaacatct tggtgtggat gagtttttgg tcagtagtga cccacagcag 720
atgcaggctg cagtaggcac actagatggt atcattgaca cagtctcagc agagcatccc 780
cttgtgccgt tgatgagctt gttgaagcct catgggaagc ttatcgtggt tggagctcca 840
gaaaagcccc tgcagcttca tgcttttagc ctgatccaag gtaggaagac agtagcgggg 900
agtgcgattg gagggatgaa ggagacgcaa gagatgattg atttcgcggc aaagaagaac 960
atcataccgg atgtggaggt catcccaata gattacataa acacagcaat ggatcgcctt 1020
ctcaaatctg atgtcaagta caggttcgtc attgatgtta acaaatcttt caatgctcac 1080
taa 1083
<210> 63
<211> 1083
<212> DNA
<213> Perilla frutescens
<400> 63
atggcgaaaa ccccagaaac agagcaccca gttaaggcct ttggttgggc tgccagagac 60
aattctggga ccttatctcc attcaatttt tctaggaggg ataccggtga gcgtgatgtg 120
cagttcaagg tgttgtactg tggcgtttgt cattcagatc tgcacatggt caagaatgag 180
cggggcgtaa ctcactaccc ggttgttccc ggacatgaga ttgtgggggt tgtgacagag 240
gtgggcagca aggtcgaaaa ggtgaaggct ggggacaaag ttggtgtggg agtcatagtt 300
ggatcatgtc gccagtgtga tcagtgttcc aatgatcttg aaaactactg ctcgaagcaa 360
atacttacct acggtgcccc ttacattgat ggcaccatta ctcgcggagg ttactctaac 420
atcatggtgg cagacgagca tttcattatc cgttggcctg aaaacctgcc tctcgatgct 480
ggagctcctc tcctctgtgc tggcatcaca acttacagtc cattgaggta ctatggactc 540
gacaagcctg gactaagtgt tggtgtgaac ggccttggtg ggctgggtca tgtagccgtg 600
aaatttgcca aagcttttgg gactaaggtg actgttatca gcacatctct tggcaagaag 660
aaggaagcta ttgaacatct tggtgtggat gagtttttgg tcagtagtga cccacagcag 720
atgcaggctg cagtaggcac actagatggt atcattgaca cagtctcagc agagcatccc 780
cttgtgccgt tgatgagctt gttgaagcct catgggaagc ttatcgtggt tggagctcca 840
gaaaagcccc tgcagcttca tgcttttagc ctgatccaag gtaggaagac agtagcgggg 900
agtgcgattg gagggatgaa ggagacgcaa gagatgattg atttcgcggc aaagaagaac 960
atcataccgg atgtggaggt catcccaata gattacataa acacagcaat ggatcgcctt 1020
ctcaaatctg atgtcaagta caggttcgtc attgatgtta acaaatcttt caatgctcac 1080
taa 1083
<210> 64
<211> 253
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<221> gene
<222> (1)..(253)
<223> 编码胭脂碱合成酶（NOS）终止子的DNA序列
<400> 64
gatcgttcaa acatttggca ataaagtttc ttaagattga atcctgttgc cggtcttgcg 60
atgattatca tataatttct gttgaattac gttaagcatg taataattaa catgtaatgc 120
atgacgttat ttatgagatg ggtttttatg attagagtcc cgcaattata catttaatac 180
gcgatagaaa acaaaatata gcgcgcaaac taggataaat tatcgcgcgc ggtgtcatct 240
atgttactag atc 253
<210> 65
<211> 401
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<221> gene
<222> (1)..(401)
<223> 编码CaMV终止子的DNA序列
<400> 65
gaaatcacca gtctctctct acaaatctat ctctctctat tttctccata ataatgtgtg 60
agtagttccc agataaggga attagggttc ttatagggtt tcgctcacgt gttgagcata 120
taagaaaccc ttagtatgta tttgtatttg taaaatactt ctatcaataa aatttctaat 180
tcctaaaacc aaaatccagt actaaaatcc agatcaccta aagtccctat agatctttgt 240
cgtgaatata aaccagacat gagacgacta aacctggagc ccagacgccg ttcgaagcta 300
gaagtaccgc ttaggcagga ggccgttagg gaaaagatgc taaggcaggg ttggttacgt 360
tgactccccc gtaggtttgg tttaaatatg ataaagtgga c 401
<210> 66
<211> 270
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<221> gene
<222> (1)..(270)
<223> 编码农杆碱合成酶（AGS）终止子的DNA序列
<400> 66
tgcatttgat tagtgaaaat taattttcag tgcagtattt tctattcgat ctttatgtaa 60
tccgtttcaa tgaataaatt taaatccgat gattagctgt tgtttatatt aattcgtatt 120
tcatccatat ttttattaga atcttgagat gttaaaaaat ttcagtcaaa atttaaacat 180
gaaactttat tcaatatttc tgtatcgcac aatgcaaatc tatgtgagat tacaagatac 240
cgacactgtt atttaacata acatagacat 270
<210> 67
<211> 401
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<221> gene
<222> (1)..(401)
<223> 编码章鱼碱合成酶（OCS）终止子的DNA序列
<400> 67
aatcaaatct tccagctgct ttaatgagat atgcgagacg cctatgatcg catgatattt 60
gctttcaatt ctgttgtgca cgttgtaaaa aacctgagca tgtgtagctc agatccttac 120
cgccggtttc ggttcattct aatgaatata tcacccgtta ctatcgtatt tttatgaata 180
atattctccg ttcaatttac tgattgtacc ctactactta tatgtacaat attaaaatga 240
aaacaatata ttgtgctgaa taggtttata gcgacatcta tgatagagcg ccacaataac 300
aaacaattgc gttttattat tacaaatcca attttaaaaa aagcggcaga accggtcaaa 360
cctaaaagac tgattacata aatcttattc aaatttcaaa a 401
<210> 68
<211> 60
<212> PRT
<213> Artificial sequence
<220>
<221> PEPTIDE
<222> (1)..(60)
<223> 氨基酸序列编码叶绿体信号肽的阿拉伯芥核酮糖二磷酸羧化酶小链
<400> 68
Met Ala Ser Ser Met Leu Ser Ser Ala Ala Val Val Thr Ser Pro Ala
1 5 10 15
Gln Ala Thr Met Val Ala Pro Phe Thr Gly Leu Lys Ser Ser Ala Ser
20 25 30
Phe Pro Val Thr Arg Lys Ala Asn Asn Asp Ile Thr Ser Ile Thr Ser
35 40 45
Asn Gly Gly Arg Val Ser Cys Met Lys Val Trp Pro
50 55 60
<210> 69
<211> 426
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<221> gene
<222> (1)..(426)
<223> 编码35S启动子的DNA序列
<400> 69
caacatggtg gagcacgaca ctctcgtcta ctccaagaat atcaaagata cagtctcaga 60
agaccaaagg gctattgaga cttttcaaca aagggtaata tcgggaaacc tcctcggatt 120
ccattgccca gctatctgtc acttcatcaa aaggacagta gaaaaggaag gtggcaccta 180
caaatgccat cattgcgata aaggaaaggc tatcgttcaa gatgcctctg ccgacagtgg 240
tcccaaagat ggacccccac ccacgaggag catcgtggaa aaagaagacg ttccaaccac 300
gtcttcaaag caagtggatt gatgtgatat ctccactgac gtaagggatg acgcacaatc 360
ccactatcct tcgcaagacc cttcctctat ataaggaagt tcatttcatt tggagaggac 420
acgctg 426
<210> 70
<211> 301
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<221> gene
<222> (1)..(301)
<223> 编码sgFiMV启动子的DNA序列
<400> 70
tttacagtaa gaactgataa caaaaatttt acttatttcc ttagaattaa tcttaaaggt 60
gatagtaaac aaggacgatt agtccgttgg caaaattggt tcagcaagta tcaatttgat 120
gtcgaacatc ttgaaggtgt aaaaaacgtt ttagcagatt gcctcacgag agattttaat 180
gcttaaaaac gtaagcgctg acgtatgatt tcaaaaaacg cagctataaa agaagccctc 240
cagcttcaaa gttttcatca acacaaattc taaaaacaaa attttttaga gagggggagt 300
g 301
<210> 71
<211> 372
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<221> gene
<222> (1)..(372)
<223> 编码SVBV启动子的DNA序列
<400> 71
gaagcccgct ttacaagtgg ccagctagct atcactgaaa agacagcaag acaatggtgt 60
ctcgatgcac cagaaccaca tctttgcagc agatgtgaag cagccagagt ggtccacaag 120
acgcactcag aaaaggcatc ttctaccgac acagaaaaag acaaccacag ctcatcatcc 180
aacatgtaga ctgtcgttat gcgtcggctg aagataagac tgaccccagg ccagcactaa 240
agaagaaata atgcaagtgg tcctagctcc actttagctt taataattat gtttcattat 300
tattctctgc ttttgctctc tatataaaga gcttgtattt tcatttgaag gcagaggcga 360
acacacacac ag 372
<210> 72
<211> 795
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<221> gene
<222> (1)..(795)
<223> 编码NptII选择基因的DNA序列
<400> 72
atgattgaac aagatggatt gcacgcaggt tctccggccg cttgggtgga gaggctattc 60
ggctatgact gggcacaaca gacaatcggc tgctctgatg ccgccgtgtt ccggctgtca 120
gcgcaggggc gcccggttct ttttgtcaag accgacctgt ccggtgccct gaatgaactg 180
caggacgagg cagcgcggct atcgtggctg gccacgacgg gcgttccttg cgcagctgtg 240
ctcgacgttg tcactgaagc gggaagggac tggctgctat tgggcgaagt gccggggcag 300
gatctcctgt catctcacct tgctcctgcc gagaaagtat ccatcatggc tgatgcaatg 360
cggcggctgc atacgcttga tccggctacc tgcccattcg accaccaagc gaaacatcgc 420
atcgagcgag cacgtactcg gatggaagcc ggtcttgtcg atcaggatga tctggacgaa 480
gagcatcagg ggctcgcgcc agccgaactg ttcgccaggc tcaaggcgcg catgcccgac 540
ggcgatgatc tcgtcgtgac ccatggcgat gcctgcttgc cgaatatcat ggtggaaaat 600
ggccgctttt ctggattcat cgactgtggc cggctgggtg tggcggaccg ctatcaggac 660
atagcgttgg ctacccgtga tattgctgaa gagcttggcg gcgaatgggc tgaccgcttc 720
ctcgtgcttt acggtatcgc cgctcccgat tcgcagcgca tcgccttcta tcgccttctt 780
gacgagttct tctga 795
<210> 73
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<221> gene
<222> (1)..(21)
<223> 单链DNA寡核苷酸
<400> 73
tggcacaagc actggatgtt c 21
<210> 74
<211> 24
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<221> gene
<222> (1)..(24)
<223> 单链DNA寡核苷酸
<400> 74
aatctctgtc aactcgctct ggtg 24
<210> 75
<211> 22
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<221> gene
<222> (1)..(22)
<223> 单链DNA寡核苷酸
<400> 75
gcaaaaaagg ctaacaatcc cc 22
<210> 76
<211> 23
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<221> gene
<222> (1)..(23)
<223> 单链DNA寡核苷酸
<400> 76
gaatgaatct caacaccgtc tgc 23
<210> 77
<211> 24
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<221> gene
<222> (1)..(24)
<223> 单链DNA寡核苷酸
<400> 77
ataaggttgg tgtgggcgtt ctcg 24
<210> 78
<211> 23
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<221> gene
<222> (1)..(23)
<223> 单链DNA寡核苷酸
<400> 78
catcaagtgg gaagttttca ggc 23
<210> 79
<211> 361
<212> PRT
<213> Gluconobacter oxydans
<400> 79
Met Pro Thr Leu Phe Asp Pro Ile Asp Phe Gly Pro Ile His Ala Lys
1 5 10 15
Asn Arg Ile Val Met Ser Pro Leu Thr Arg Gly Arg Ala Asp Lys Glu
20 25 30
Ala Val Pro Thr Pro Ile Met Ala Glu Tyr Tyr Ala Gln Arg Ala Ser
35 40 45
Ala Gly Leu Ile Ile Thr Glu Ala Thr Gly Ile Ser Arg Glu Gly Leu
50 55 60
Gly Trp Pro Phe Ala Pro Gly Ile Trp Ser Asp Ala Gln Val Glu Ala
65 70 75 80
Trp Lys Pro Ile Val Ala Gly Val His Ala Lys Gly Gly Lys Ile Val
85 90 95
Cys Gln Leu Trp His Met Gly Arg Met Val His Ser Ser Val Thr Gly
100 105 110
Thr Gln Pro Val Ser Ser Ser Ala Thr Thr Ala Pro Gly Glu Val His
115 120 125
Thr Tyr Glu Gly Lys Lys Pro Phe Glu Gln Ala Arg Ala Ile Asp Ala
130 135 140
Ala Asp Ile Ser Arg Ile Leu Asn Asp Tyr Glu Asn Ala Ala Arg Asn
145 150 155 160
Ala Ile Arg Ala Gly Phe Asp Gly Val Gln Ile His Ala Ala Asn Gly
165 170 175
Tyr Leu Ile Asp Glu Phe Leu Arg Asn Gly Thr Asn His Arg Thr Asp
180 185 190
Glu Tyr Gly Gly Val Pro Glu Asn Arg Ile Arg Phe Leu Lys Glu Val
195 200 205
Thr Glu Arg Val Ile Ala Ala Ile Gly Ala Asp Arg Thr Gly Val Arg
210 215 220
Leu Ser Pro Asn Gly Asp Thr Gln Gly Cys Ile Asp Ser Ala Pro Glu
225 230 235 240
Thr Val Phe Val Pro Ala Ala Lys Leu Leu Gln Asp Leu Gly Val Ala
245 250 255
Trp Leu Glu Leu Arg Glu Pro Gly Pro Asn Gly Thr Phe Gly Lys Thr
260 265 270
Asp Gln Pro Lys Leu Ser Pro Gln Ile Arg Lys Val Phe Leu Arg Pro
275 280 285
Leu Val Leu Asn Gln Asp Tyr Thr Phe Glu Ala Ala Gln Thr Ala Leu
290 295 300
Ala Glu Gly Lys Ala Asp Ala Ile Ala Phe Gly Arg Lys Phe Ile Ser
305 310 315 320
Asn Pro Asp Leu Pro Glu Arg Phe Ala Arg Gly Ile Ala Leu Gln Pro
325 330 335
Asp Asp Met Lys Thr Trp Tyr Ser Gln Gly Pro Glu Gly Tyr Thr Asp
340 345 350
Tyr Pro Ser Ala Thr Ser Gly Pro Asn
355 360
<210> 80
<211> 1082
<212> DNA
<213> Gluconobacter oxydans
<400> 80
atgcctaccc tctttgaccc tatcgatttt gggcccatcc acgccaagaa taggatagtg 60
atgagccctc tcaccagagg gagggccgat aaggaggccg tgcctacccc tatcatggcc 120
gaatactacg cccaaagggc cagcgccggt ctcatcatca ctgaagccac tgggatcagc 180
agggagggtc tcgggtggcc ttttgcccct gggatctgga gcgacgctca ggttgaggcc 240
tggaagccca tcgtggccgg tgtgcacgcc aagggtggga agatcgtgtg ccaactctgg 300
cacatgggga ggatggtgca cagcagcgtt actgggactc aacctgtttc ttctagcgcc 360
accactgccc ctggggaggt gcacacttat gaggggaaga agcctttcga gcaggccagg 420
gccatagacg ccgccgatat cagcagaatc ctcaatgact acgagaacgc cgccaggaat 480
gccatcaggg ccgggttcga tggggttcag atccacgccg ccaatgggta cctcatcgat 540
gagttcctca ggaatggtac taaccacagg accgacgagt acgggggtgt tcctgagaac 600
aggatcaggt tcctcaagga ggttaccgag agggtgatcg ccgctatagg tgccgatagg 660
actggtgtga ggcttagccc taatggtgac acccaagggt gcatcgacag cgcccctgag 720
actgtgttcg ttcctgccgc caagctcctt caagatctcg gggtggcctg gctcgagctt 780
agggagcctg ggcctaacgg gacctttggg aagactgatc agcctaagct cagccctcaa 840
atcaggaagg tgttcctcag gcctctcgtg ctcaatcagg actacacttt cgaggccgcc 900
caaactgccc ttgctgaggg gaaggccgat gccatcgcct ttgggaggaa gttcatcagc 960
aaccctgatc tccccgagag gtttgccagg gggatcgccc tccaacccga cgacatgaaa 1020
acctggtaca gccaagggcc tgaggggtac accgattacc cttctgccac tagcgggcct 1080
aa 1082
<210> 81
<211> 399
<212> PRT
<213> Hevea brasiliensis
<400> 81
Met Ala Glu Thr Gly Thr Glu Gly Thr Gly Ile Thr Thr Leu Phe Ser
1 5 10 15
Pro Tyr Lys Met Gly Lys Phe Ser Leu Ser His Arg Val Val Leu Ala
20 25 30
Pro Met Thr Arg Cys Arg Ala Leu Asn Gly Ile Pro Asn Ala Ala Leu
35 40 45
Val Asp Tyr Tyr Thr Gln Arg Ser Thr Pro Gly Gly Phe Leu Ile Thr
50 55 60
Glu Gly Thr Leu Val Ser Pro Thr Ala Pro Gly Phe Pro His Val Pro
65 70 75 80
Gly Ile Tyr Thr Glu Glu Gln Ala Glu Ala Trp Lys Arg Val Val Asp
85 90 95
Ala Val His Ala Lys Gly Ser Ile Ile Phe Cys Gln Leu Trp His Val
100 105 110
Gly Arg Ala Ser His Gln Val Tyr Gln Pro Asn Gly Ala Ala Pro Ile
115 120 125
Ser Ser Thr Gly Lys Ala Ile Ser Asn Arg Trp Arg Ile Leu Met Pro
130 135 140
Asp Gly Ser Tyr Gly Lys Tyr Pro Thr Pro Arg Pro Leu Glu Thr Pro
145 150 155 160
Glu Ile Leu Glu Val Val Lys Asn Tyr Arg Gln Ser Ala Leu Asn Ala
165 170 175
Ile Arg Ala Gly Phe Asp Gly Ile Glu Val His Gly Ala His Gly Tyr
180 185 190
Leu Ile Asp Gln Phe Leu Lys Asp Gly Ile Asn Asp Arg Thr Asp Glu
195 200 205
Tyr Gly Gly Ser Ile Asn Asn Arg Cys Arg Phe Leu Met Gln Val Ile
210 215 220
Gln Ala Val Val Ala Ala Ile Gly Ala Asp Arg Val Gly Phe Arg Met
225 230 235 240
Ser Pro Ala Ile Asp His Leu Asp Ala Ile Asp Ser Asp Pro Leu Asn
245 250 255
Leu Gly Leu Ala Val Ile Glu Arg Leu Asn Lys Leu Gln Leu Asn Leu
260 265 270
Gly Ser Lys Leu Thr Tyr Leu His Val Thr Gln Pro Arg Tyr Thr Ala
275 280 285
Tyr Gly Gln Thr Glu Ser Gly Arg His Gly Thr Glu Glu Glu Glu Ala
290 295 300
Arg Leu Met Arg Thr Trp Arg Arg Ala Tyr Lys Gly Thr Phe Ile Cys
305 310 315 320
Ser Gly Gly Phe Thr Arg Glu Leu Gly Met Glu Ala Ile Ala Gln Asp
325 330 335
Asp Ala Asp Leu Val Ser Tyr Gly Arg Leu Phe Ile Ser Asn Pro Asp
340 345 350
Leu Val Leu Arg Phe Lys Leu Asn Ala Pro Leu Asn Lys Tyr Val Arg
355 360 365
Lys Thr Phe Tyr Thr Gln Asp Pro Val Val Gly Tyr Thr Asp Tyr Pro
370 375 380
Phe Phe Arg Lys Val Asp Gly Ser Gln Glu Pro Arg Ser Arg Leu
385 390 395
<210> 82
<211> 1191
<212> DNA
<213> Hevea brasiliensis
<400> 82
atggctgaga ccggtactga agggactggg ataaccactc tcttctctcc ttacaagatg 60
gggaagttta gccttagcca tagggtggtg ctcgccccca tgaccaggtg cagggccctt 120
aatgggatac ccaatgccgc cctcgtggac tactacaccc agaggagcac tcctgggggg 180
ttcctcatca ctgaggggac tcttgtgagc cccaccgctc ctggtttccc tcacgtgccc 240
ggtatataca ccgaggaaca ggccgaagcc tggaagagag tggttgatgc cgtgcacgcc 300
aaggggagca tcatcttttg ccagctttgg cacgtgggga gggccagcca ccaagtttac 360
caacctaatg gggccgcccc tatcagctct accgggaagg ctatcagcaa caggtggcgt 420
attttaatgc ccgacgggag ctacgggaag taccctaccc ctaggcctct cgagaccccc 480
gagatcctcg aggtggtgaa gaactacagg caaagcgccc tcaatgccat aagagccggg 540
tttgatggga tagaggtgca tggggctcac ggttatctca tcgatcagtt tctcaaggac 600
gggatcaacg acaggactga cgaatacggg gggagcatca acaataggtg caggtttctc 660
atgcaagtta tacaagccgt ggttgccgct atcggggctg atagggtggg ttttaggatg 720
agccctgcta tcgaccacct tgatgccatc gacagcgacc ctcttaatct cgggcttgcc 780
gtgatcgaga gactcaataa gctccagctc aacctcggga gcaaactcac ctacctccac 840
gtgacccagc ctaggtacac tgcctacggg cagaccgagt ctgggagaca cgggactgag 900
gaggaggagg ccaggcttat gaggacctgg aggagggcct acaagggtac ctttatctgt 960
agcggggggt ttaccaggga attagggatg gaggccatcg cccaagacga tgccgacctc 1020
gtgagctacg ggaggctctt tatcagcaac cctgaccttg tgctcaggtt caagctcaac 1080
gcccccctca ataagtacgt gaggaagact ttctacactc aggaccctgt ggtggggtac 1140
accgactacc ccttctttag gaaggtggac gggagccaag agcctaggtg a 1191
<210> 83
<211> 391
<212> PRT
<213> Arabidopsis thaliana
<400> 83
Met Thr Ala Ala Gln Gly Asn Ser Asn Glu Thr Leu Phe Ser Ser Tyr
1 5 10 15
Lys Met Gly Arg Phe Asp Leu Ser His Arg Val Val Leu Ala Pro Met
20 25 30
Thr Arg Cys Arg Ala Leu Asn Gly Val Pro Asn Ala Ala Leu Ala Glu
35 40 45
Tyr Tyr Ala Gln Arg Thr Thr Pro Gly Gly Phe Leu Ile Ser Glu Gly
50 55 60
Thr Met Val Ser Pro Gly Ser Ala Gly Phe Pro His Val Pro Gly Ile
65 70 75 80
Tyr Ser Asp Glu Gln Val Glu Ala Trp Lys Gln Val Val Glu Ala Val
85 90 95
His Ala Lys Gly Gly Phe Ile Phe Cys Gln Leu Trp His Val Gly Arg
100 105 110
Ala Ser His Ala Val Tyr Gln Pro Asn Gly Gly Ser Pro Ile Ser Ser
115 120 125
Thr Asn Lys Pro Ile Ser Glu Asn Arg Trp Arg Val Leu Leu Pro Asp
130 135 140
Gly Ser His Val Lys Tyr Pro Lys Pro Arg Ala Leu Glu Ala Ser Glu
145 150 155 160
Ile Pro Arg Val Val Glu Asp Tyr Cys Leu Ser Ala Leu Asn Ala Ile
165 170 175
Arg Ala Gly Phe Asp Gly Ile Glu Ile His Gly Ala His Gly Tyr Leu
180 185 190
Ile Asp Gln Phe Leu Lys Asp Gly Ile Asn Asp Arg Thr Asp Gln Tyr
195 200 205
Gly Gly Ser Ile Ala Asn Arg Cys Arg Phe Leu Lys Gln Val Val Glu
210 215 220
Gly Val Val Ser Ala Ile Gly Ala Ser Lys Val Gly Val Arg Val Ser
225 230 235 240
Pro Ala Ile Asp His Leu Asp Ala Thr Asp Ser Asp Pro Leu Ser Leu
245 250 255
Gly Leu Ala Val Val Gly Met Leu Asn Lys Leu Gln Gly Val Asn Gly
260 265 270
Ser Lys Leu Ala Tyr Leu His Val Thr Gln Pro Arg Tyr His Ala Tyr
275 280 285
Gly Gln Thr Glu Ser Gly Arg Gln Gly Ser Asp Glu Glu Glu Ala Lys
290 295 300
Leu Met Lys Ser Leu Arg Met Ala Tyr Asn Gly Thr Phe Met Ser Ser
305 310 315 320
Gly Gly Phe Asn Lys Glu Leu Gly Met Gln Ala Val Gln Gln Gly Asp
325 330 335
Ala Asp Leu Val Ser Tyr Gly Arg Leu Phe Ile Ala Asn Pro Asp Leu
340 345 350
Val Ser Arg Phe Lys Ile Asp Gly Glu Leu Asn Lys Tyr Asn Arg Lys
355 360 365
Thr Phe Tyr Thr Gln Asp Pro Val Val Gly Tyr Thr Asp Tyr Pro Phe
370 375 380
Leu Ala Pro Phe Ser Arg Leu
385 390
<210> 84
<211> 1167
<212> DNA
<213> Arabidopsis thaliana
<400> 84
atgaccgccg cccaggggaa cagcaacgag accctcttca gcagctacaa gatggggagg 60
ttcgacctta gccatagagt ggtgctcgcc cccatgacca gatgtagagc cctcaatggg 120
gtgcctaatg ccgccctcgc cgagtactac gctcagagga ctactcctgg tgggttcctt 180
ataagcgagg ggactatggt gagccctggg agcgccgggt ttcctcacgt gcctggtatc 240
tactctgacg agcaggtgga agcctggaag caggtggtgg aggccgtgca cgccaagggg 300
gggtttatat tttgccaact ttggcacgtg gggagagcct ctcacgccgt gtaccaacct 360
aacgggggta gccctatcag cagcaccaat aagcctataa gcgagaatag gtggagggtg 420
ctcctccctg acgggagcca cgtgaaatac cctaagccta gggcccttga ggccagcgag 480
atccctaggg tggtggagga ttactgcctt agcgctctca acgccataag ggccggtttt 540
gacggtatcg agatccacgg tgcccatggg tacctcatcg accagttcct caaggacggt 600
atcaatgaca ggactgacca gtacgggggg agcatagcca acaggtgtag gttcctcaaa 660
caagtggtgg aaggggtggt ttctgccatc ggtgccagca aggttggggt gagggttagc 720
cctgccatcg accaccttga tgccaccgac tctgaccctc tcagccttgg gctcgccgtg 780
gtggggatgc tcaacaaatt acagggggtg aacgggagca agctcgccta cctccacgtg 840
acccaaccta ggtaccacgc ctacgggcaa actgaatctg ggagacaagg gagcgacgag 900
gaggaggcta agctcatgaa gagcctcagg atggcctaca acgggacctt catgagcagc 960
ggtgggttca acaaggaatt agggatgcaa gctgtgcaac aaggtgatgc cgatctcgtg 1020
agctacggga ggctcttcat agccaatcct gacctcgtga gcaggttcaa gatcgacggg 1080
gaattaaaca agtacaatag gaagactttc tatactcaag accctgtggt ggggtacact 1140
gactacccct ttcttgcccc tttctga 1167
<210> 85
<211> 396
<212> PRT
<213> Solanum lycopersicum
<400> 85
Met Ala Ser Ser Ala Gln Asp Gly Asn Asn Pro Leu Phe Ser Pro Tyr
1 5 10 15
Lys Met Gly Lys Phe Asn Leu Ser His Arg Val Val Leu Ala Pro Met
20 25 30
Thr Arg Cys Arg Ala Leu Asn Asn Ile Pro Gln Ala Ala Leu Gly Glu
35 40 45
Tyr Tyr Glu Gln Arg Ala Thr Ala Gly Gly Phe Leu Ile Thr Glu Gly
50 55 60
Thr Met Ile Ser Pro Thr Ser Ala Gly Phe Pro His Val Pro Gly Ile
65 70 75 80
Phe Thr Lys Glu Gln Val Arg Glu Trp Lys Lys Ile Val Asp Val Val
85 90 95
His Ala Lys Gly Ala Val Ile Phe Cys Gln Leu Trp His Val Gly Arg
100 105 110
Ala Ser His Glu Val Tyr Gln Pro Ala Gly Ala Ala Pro Ile Ser Ser
115 120 125
Thr Glu Lys Pro Ile Ser Asn Arg Trp Arg Ile Leu Met Pro Asp Gly
130 135 140
Thr His Gly Ile Tyr Pro Lys Pro Arg Ala Ile Gly Thr Tyr Glu Ile
145 150 155 160
Ser Gln Val Val Glu Asp Tyr Arg Arg Ser Ala Leu Asn Ala Ile Glu
165 170 175
Ala Gly Phe Asp Gly Ile Glu Ile His Gly Ala His Gly Tyr Leu Ile
180 185 190
Asp Gln Phe Leu Lys Asp Gly Ile Asn Asp Arg Thr Asp Glu Tyr Gly
195 200 205
Gly Ser Leu Ala Asn Arg Cys Lys Phe Ile Thr Gln Val Val Gln Ala
210 215 220
Val Val Ser Ala Ile Gly Ala Asp Arg Val Gly Val Arg Val Ser Pro
225 230 235 240
Ala Ile Asp His Leu Asp Ala Met Asp Ser Asn Pro Leu Ser Leu Gly
245 250 255
Leu Ala Val Val Glu Arg Leu Asn Lys Ile Gln Leu His Ser Gly Ser
260 265 270
Lys Leu Ala Tyr Leu His Val Thr Gln Pro Arg Tyr Val Ala Tyr Gly
275 280 285
Gln Thr Glu Ala Gly Arg Leu Gly Ser Glu Glu Glu Glu Ala Arg Leu
290 295 300
Met Arg Thr Leu Arg Asn Ala Tyr Gln Gly Thr Phe Ile Cys Ser Gly
305 310 315 320
Gly Tyr Thr Arg Glu Leu Gly Ile Glu Ala Val Ala Gln Gly Asp Ala
325 330 335
Asp Leu Val Ser Tyr Gly Arg Leu Phe Ile Ser Asn Pro Asp Leu Val
340 345 350
Met Arg Ile Lys Leu Asn Ala Pro Leu Asn Lys Tyr Asn Arg Lys Thr
355 360 365
Phe Tyr Thr Gln Asp Pro Val Val Gly Tyr Thr Asp Tyr Pro Phe Leu
370 375 380
Gln Gly Asn Gly Ser Asn Gly Pro Leu Ser Arg Leu
385 390 395
<210> 86
<211> 1182
<212> DNA
<213> Solanum lycopersicum
<400> 86
atggccagca gcgcccaaga tgggaacaat cctctcttca gcccctacaa gatggggaag 60
ttcaatctct ctcacagggt ggtgctcgcc cctatgacta ggtgcagggc cctcaataac 120
atacctcagg ctgccctcgg tgagtactac gagcaaaggg ccactgccgg tgggttcctc 180
atcaccgagg ggactatgat ctctcctacc agcgccgggt tccctcatgt gcccggtatc 240
ttcactaaag aacaagtgag agagtggaag aagatagtgg acgtggtgca cgccaagggg 300
gctgtgatct tttgccaact ttggcacgtt gggagggctt ctcacgaggt gtatcaacct 360
gccggggccg ctcccatctc ttctactgag aagcccatca gcaacaggtg gagaatcctc 420
atgcctgacg gtactcacgg tatataccct aagcctaggg ccatcgggac ttatgagatc 480
agccaggtgg tggaggatta caggaggtct gccctcaacg ctatcgaggc cggttttgat 540
gggatcgaga tccacggggc ccacgggtac ctcatcgacc aattccttaa ggacgggatc 600
aatgatagga ctgatgagta cgggggtagc ctcgccaata ggtgcaagtt tatcacccag 660
gtggtgcaag ccgtggtgag cgccataggg gccgacagag tgggggtgag ggtgagccct 720
gccatcgatc atcttgacgc catggatagc aatcccctct ctctcgggct cgccgtggtg 780
gagaggctca acaagatcca gctccacagc gggagcaagc tcgcctacct tcatgtgact 840
cagcctaggt acgtggccta cggtcagacc gaggctggga gactcgggag cgaggaggaa 900
gaggccaggc tcatgaggac tcttaggaat gcctaccaag ggactttcat ctgcagcggg 960
gggtacacta gggaattagg gatcgaggct gttgcccaag gggatgccga cctcgtgagc 1020
tacgggaggc tcttcatcag caaccccgat ctcgtgatga ggatcaagct caacgctcct 1080
ctcaataagt acaacagaaa gaccttctac acccaagacc ctgtggttgg gtacactgat 1140
taccccttcc tccaggggaa tgggagcaat ggtcctcttt ga 1182
<210> 87
<211> 389
<212> PRT
<213> Eucalyptus grandis
<400> 87
Met Ala Asp Ser Asp Leu Phe Thr Pro Tyr Lys Met Ser Lys Phe Asp
1 5 10 15
Leu Ser His Arg Val Val Leu Ala Pro Met Thr Arg Cys Arg Ala Leu
20 25 30
Gly Gly Ile Pro Arg Pro Ala Met Ala Glu Tyr Tyr Ala Gln Arg Ser
35 40 45
Thr Pro Gly Gly Phe Leu Ile Ser Glu Gly Thr Met Ile Ser Asp Thr
50 55 60
Ala Ala Gly Phe Pro His Val Pro Gly Ile Tyr Asn Glu Glu Gln Val
65 70 75 80
Arg Ala Trp Lys Lys Val Val Asp Ser Val His Ala Lys Gly Ser Val
85 90 95
Ile Phe Cys Gln Leu Trp His Val Gly Arg Ala Ser His Gln Val Tyr
100 105 110
Gln Pro Gly Gly Ala Ala Pro Leu Ser Ser Thr Asp Lys Pro Ile Ser
115 120 125
Gln Arg Trp Arg Ile Leu Met Pro Asp Gly Ser His Ala Ile Tyr Pro
130 135 140
Lys Pro Arg Ala Leu Asn His Ser Asp Ile Gln Asp Met Val Glu His
145 150 155 160
Tyr Arg Gln Ala Ala Ile Asn Ala Ile Arg Ala Gly Phe Asp Gly Ile
165 170 175
Glu Ile His Gly Ala His Gly Tyr Leu Ile Asp Gln Phe Leu Lys Asp
180 185 190
Gly Ile Asn Asp Arg Thr Asp Glu Tyr Gly Gly Ser Ile Glu Asn Arg
195 200 205
Cys Arg Phe Ile Met Gln Val Val Lys Ala Val Ala Met Ala Ile Arg
210 215 220
Pro Asp Arg Val Gly Val Arg Met Ser Pro Ala Ile Asp His Leu Asp
225 230 235 240
Ala Met Asp Ser Asp Pro Pro Lys Leu Gly Leu Ala Val Ile Glu Arg
245 250 255
Leu Asn Lys Leu Gln Leu Glu Leu Gly Ser Arg Leu Ala Tyr Leu His
260 265 270
Val Thr Gln Pro Arg Tyr Val Ala Tyr Gly Gln Thr Glu Ser Gly Arg
275 280 285
Leu Gly Ser Glu Glu Glu Glu Ala Gln Leu Met Arg Thr Trp Arg Arg
290 295 300
Ala Tyr Gln Gly Thr Phe Ile Cys Ser Gly Gly Phe Thr Arg Glu Leu
305 310 315 320
Gly Met Lys Ala Ile Ala Asp Gly Asp Ala Asp Leu Val Ser Tyr Gly
325 330 335
Arg Leu Phe Ile Ala Asn Pro Asp Leu Val Leu Arg Phe Gln Ile Asn
340 345 350
Ala Pro Leu Asn Lys Tyr Val Arg Lys Thr Phe Tyr Thr Gln Asp Pro
355 360 365
Val Val Gly Tyr Thr Asp Tyr Pro Phe Leu Asp Ser Arg Lys Gln Lys
370 375 380
Leu Ser Ser Arg Leu
385
<210> 88
<211> 1161
<212> DNA
<213> Eucalyptus grandis
<400> 88
atggccgata gcgacctctt tactccttac aagatgtcta agtttgacct cagccacagg 60
gttgtgctcg cccctatgac taggtgcagg gctctcggtg gtatccctag gcccgctatg 120
gccgaatact acgctcagag aagcacccct ggggggttcc ttatctctga ggggaccatg 180
atcagcgata ctgctgccgg gttccctcac gtgcctggga tctataacga ggagcaagtg 240
agggcctgga agaaggtggt ggattctgtg catgccaagg ggagcgtgat cttttgccaa 300
ctctggcacg tggggagggc ctctcaccaa gtttaccaac ctgggggggc tgcccccctc 360
agctctactg acaagcctat cagccagagg tggcgtattt taatgcccga cgggtctcac 420
gccatctacc ccaagcctag ggccctcaac cacagcgaca tccaggacat ggtggagcac 480
tacaggcagg ccgccatcaa tgccatcaga gccggttttg acggtatcga gatccatggg 540
gcccacgggt acctcatcga ccaattcctc aaggacggga tcaacgatag aaccgatgag 600
tacggggggt ctatagagaa caggtgcagg tttatcatgc aggtggtgaa ggccgtggct 660
atggctataa ggcctgacag ggtgggggtg agaatgagcc ctgccatcga tcacctcgac 720
gccatggata gcgatcctcc taagctcggg ctcgccgtga tcgagaggct caataagctc 780
cagcttgaat tagggtctag gcttgcctac ctccatgtga cccaacctag gtacgttgcc 840
tacgggcaaa ctgaatctgg tagactcggg agcgaggagg aggaagccca actcatgagg 900
acctggagga gggcctacca ggggaccttt atctgcagcg ggggtttcac tagggaactc 960
ggtatgaaag ctatcgccga tggggatgct gaccttgtga gctacgggag gctcttcata 1020
gctaatcctg acctcgtgct caggtttcag atcaatgccc ccctcaataa gtacgtgagg 1080
aagaccttct acacccaaga tcctgtggtg gggtatactg actacccttt cctcgacagc 1140
agaaagcaaa aactcagctg a 1161
<210> 89
<211> 393
<212> PRT
<213> Rosa multiflora
<400> 89
Met Ala Asp Ser Ser Val Thr Leu Phe Ser Pro Ile Lys Met Ala Lys
1 5 10 15
Phe Asn Leu Ser His Arg Val Val Leu Ala Pro Met Thr Arg Cys Arg
20 25 30
Ala Leu Asn Gly Val Pro Asn Pro Ala Leu Ala Glu Tyr Tyr Ser Gln
35 40 45
Arg Ser Thr Pro Gly Gly Phe Leu Ile Ser Glu Gly Thr Leu Val Ser
50 55 60
Asp Thr Ala Ala Gly Phe Pro His Val Pro Gly Ile Phe Ser Asp Glu
65 70 75 80
Gln Val Glu Ala Trp Lys Lys Val Val Asp Ala Val His Ala Lys Gly
85 90 95
Ala Ile Ile Phe Cys Gln Leu Trp His Val Gly Arg Ala Ser His Gly
100 105 110
Val Tyr Gln Pro Gly Gly Gly Ser Pro Ile Ser Ser Thr Asn Asn Pro
115 120 125
Ile Ser Lys Arg Trp Lys Ile Leu Leu Pro Asp Gly Ser His Gly Thr
130 135 140
Tyr Pro Gln Pro Gln Arg Leu Glu Ile His Glu Ile Pro His Ile Val
145 150 155 160
Glu Gln Tyr Arg Arg Ala Ala Val Asn Ala Ile Arg Ala Gly Phe Asp
165 170 175
Gly Ile Glu Ile His Gly Ala His Gly Tyr Leu Ile Asp Gln Phe Leu
180 185 190
Lys Asp Gly Ile Asn Asp Arg Thr Asp Glu Tyr Gly Gly Ser Leu Ala
195 200 205
Asn Arg Cys Lys Phe Leu Ile Glu Ile Val Gln Ala Val Val Glu Ala
210 215 220
Ile Gly Ala Asp Arg Val Gly Val Arg Val Ser Pro Ala Ile Asp His
225 230 235 240
Leu Asp Ala Met Asp Ser Asp Pro Val Ser Leu Gly Phe Ala Val Ile
245 250 255
Glu Arg Leu Asn Lys Leu Gln Gln Asn Ile Gly Ser Lys Leu Thr Tyr
260 265 270
Leu His Val Thr Gln Pro Arg Tyr Ala Ala Tyr Gly Gln Ala Glu Ser
275 280 285
Gly Lys His Gly Ser Asp Gln Asp Glu Ala Glu Phe Met Arg Thr Leu
290 295 300
Arg Lys Ala Tyr Gln Gly Thr Phe Met Ala Ser Gly Gly Phe Thr Arg
305 310 315 320
Glu Leu Gly Met Glu Ala Val Ala Ser Gly Asp Ala Asp Leu Val Ser
325 330 335
Tyr Gly Arg Tyr Phe Ile Ser Asn Pro Asp Leu Val Leu Arg Phe Lys
340 345 350
Leu Asn Ala Pro Leu Thr Lys Tyr Val Arg Lys Thr Phe Tyr Thr Gln
355 360 365
Asp Pro Val Val Gly Tyr Thr Asp Tyr Pro Phe Leu Asn Asn Thr Ser
370 375 380
Ile Lys Glu Gln Ala Val Ser Arg Leu
385 390
<210> 90
<211> 1173
<212> DNA
<213> Rosa multiflora
<400> 90
atggctgaca gcagcgtgac tctcttcagc cccatcaaga tggccaagtt caacctcagc 60
cacagagttg tgctcgcccc tatgactagg tgcagggctc tcaatggggt gcctaacccc 120
gctctcgccg agtactactc tcagaggagc actcctgggg ggttcctcat aagcgagggg 180
acccttgtga gcgatactgc cgctgggttt cctcacgtgc ctgggatctt tagcgatgaa 240
caagtggagg cctggaagaa ggtggttgat gccgtgcacg ccaagggtgc catcatcttc 300
tgccaactct ggcatgtggg gagggctagc catggggtgt accaacctgg gggggggagc 360
cctatcagca gcactaacaa tcccatcagc aagaggtgga agatcctcct tcctgacggg 420
agccatggga cttaccccca gcctcaaagg ctcgaaatcc acgagatacc ccacatcgtg 480
gagcaataca gaagggccgc tgtgaatgcc ataagggccg ggtttgatgg gatcgagatc 540
catggtgccc atgggtacct catcgaccaa tttctcaagg acgggatcaa tgacaggacc 600
gacgagtacg gggggtctct cgccaacagg tgcaagttcc tcatcgagat cgtgcaagcc 660
gtggtggagg ccataggtgc cgatagggtt ggggtgaggg tgagccctgc catcgaccac 720
ctcgacgcca tggatagcga ccccgttagc ctcgggttcg ccgttatcga gaggctcaat 780
aagctccaac aaaatatagg gagcaagctc acctaccttc acgtgactca gcctaggtac 840
gccgcctacg ggcaagctga gagcggtaaa cacgggtctg accaagatga agccgagttc 900
atgaggaccc tcaggaaggc ttatcaaggg accttcatgg cctctggggg gtttactagg 960
gagcttggta tggaagctgt ggctagcggg gacgccgacc ttgtgagcta cgggagatac 1020
tttatatcta accctgacct tgtgctcagg ttcaagctca acgcccctct cactaagtac 1080
gtgaggaaga ccttctacac ccaagaccct gtggtggggt acaccgatta cccttttctc 1140
aacaatacta gcataaagga gcaagccgtg tga 1173
<210> 91
<211> 76
<212> PRT
<213> Arabidopsis Chloroplast
<400> 91
Met Ala Gln Val Ser Arg Ile Cys Asn Gly Val Gln Asn Pro Ser Leu
1 5 10 15
Ile Ser Asn Leu Ser Lys Ser Ser Gln Arg Lys Ser Pro Leu Ser Val
20 25 30
Ser Leu Lys Thr Gln Gln His Pro Arg Ala Tyr Pro Ile Ser Ser Ser
35 40 45
Trp Gly Leu Lys Lys Ser Gly Met Thr Leu Ile Gly Ser Glu Leu Arg
50 55 60
Pro Leu Lys Val Met Ser Ser Val Ser Thr Ala Cys
65 70 75

Claims (43)

1.一种基因改造的木本植物，其特征在于，包含：
一异源核酸序列，用以编码选自于由下述所组成的群组中的至少一种多肽：香叶醇合成酶(GS)、香叶醇还原酶(GR)、香叶醇脱氢酶(GD)以及柠檬醛还原酶(CR)。
2.一种核酸构造，其特征在于，包含：
一核酸序列，用以编码选自于由下述所组成的群组中的至少一种多肽：香叶醇合成酶(GS)、香叶醇还原酶(GR)、香叶醇脱氢酶(GD)以及柠檬醛还原酶(CR)；以及
至少一顺式作用调节组件，用于引导所述核酸序列的表现。
3.一种核酸构造系统，其特征在于，包含：
至少两核酸构造，用以表现至少两种多肽，其中所述至少两种多肽选自于由下述所组成的群组中：香叶醇合成酶(GS)、香叶醇还原酶(GR)、香叶醇脱氢酶(GD)以及柠檬醛还原酶(CR)。
4.一种核酸构造，其特征在于，包含：
一核酸序列，用以编码香叶醇脱氢酶(GD)；以及
一顺式作用调节组件，用于引导所述核酸序列在一植物细胞中的表现。
5.一种核酸构造，其特征在于，包含：
一核酸序列，用以编码柠檬醛还原酶(CR)；以及
一顺式作用调节组件，用于引导所述核酸序列在一植物细胞中的表现；
其中所述核酸序列更包含一叶绿体前导肽。
6.一种核酸构造，其特征在于，包含：
一核酸序列，用以编码香叶醇还原酶(GR)；以及
一顺式作用调节组件用于引导所述核酸序列在一植物细胞中的表现；
其中所述核酸序列不具有过氧化物酶体羧基端三氨基酸信号(SRL)，并且具有一叶绿体前导肽。
7.如权利要求2至6任一项所述的核酸构造，其特征在于：所述顺式作用调节组件包括一启动子序列。
8.如权利要求7所述的核酸构造，其特征在于：所述启动子序列为一组成型启动子。
9.如权利要求8所述的核酸构造，其特征在于：所述组成型启动子选自于由下述所组成的群组：花椰菜花叶病毒(CaMV)35S启动子、玄参花叶病毒亚基因组转录(sgFiMV)启动子以及草莓镶脉病毒(SVBV)启动子。
10.一种分离的细胞，其特征在于，包含：如权利要求2至3任一项所述的核酸构造。
11.一种分离的植物细胞，其特征在于，包含：如权利要求2至9任一项所述的核酸构造。
12.一种基因改造的木本植物，其特征在于，包含：如权利要求2至9任一项所述的核酸构造。
13.如权利要求1至12任一项所述的基因改造的木本植物，其特征在于：对病虫害具有抗性。
14.一种杀虫剂组合物，其特征在于，包含：
如权利要求2至9任一项所述的核酸构造或核酸构造系统作为一活性成分；以及
一农业上可接受的载体或稀释剂。
15.一种用于增强一木本植物对病虫害感染的抗性的方法，其特征在于：所述方法包含：
在所述木本植物中表现选自于由下述所组成的群组中的至少一种重组多肽：香叶醇合成酶(GS)、香叶醇还原酶(GR)、香叶醇脱氢酶(GD)以及柠檬醛还原酶(CR)，从而提高所述木本植物对病虫害感染的抗性。
16.一种用于增加一木本植物中的香叶醇、香叶酸、香精、香茅醇、香茅醛和柠檬油中的至少一种的含量的方法，其特征在于，所述方法包含：
在所述木本植物中表现选自于由下述所组成的群组中的至少一种重组多肽：香叶醇合成酶(GS)、香叶醇还原酶(GR)、香叶醇脱氢酶(GD)以及柠檬醛还原酶(CR)，从而增加木本植物中的香叶醇、香叶醛、橙花醛、香茅醇、香茅醛和柠檬醛中的至少一种的含量。
17.一种生产油的方法，其特征在于，所述方法包含：
提供如权利要求1至12任一项所述的基因改造的木本植物；以及
从所述木本植物萃取油，从而产生所述油。
18.如权利要求17所述的方法，其特征在于：更包含：在所述萃取后从所述油中纯化一单萜成分。
19.如权利要求18所述的方法，其特征在于：所述单萜成分包含香叶醇、香叶醛、橙花醛、香茅醇、香茅醛和柠檬醛的至少一种。
20.一种油，其特征在于，通过如权利要求17所述的方法被生产。
21.一种桉树油，其特征在于，与一非基因改造的桉树的一桉树油相比，包含一增加含量的至少一种单萜，所述单萜选自于由下述所组成的群组：香叶醇、香叶醛、橙花醛、香茅醇、香茅醛和柠檬醛。
22.如权利要求21所述的桉树油，其特征在于：与一非基因改造的桉树的一桉树油相比，包含一降低含量的至少一种单萜，所述单萜不选自于由下述所组成的群组：香叶醇、香叶醛、橙花醛、香茅醇、香茅醛和柠檬醛。
23.一种用于产生选自于由香叶醇、香叶醛、橙花醛、香茅醇、香茅醛和柠檬醛所组成的群组中的至少一种单萜的方法，其特征在于，所述方法包含：
提供如权利要求1至12任一项所述的基因改造的木本植物；以及
从所述木本植物中萃取所述单萜，从而产生选自于由下述所组成的群组的至少一种单萜：香叶醇、香叶醛、橙花醛、香茅醇、香茅醛和柠檬醛。
24.如权利要求1至13任一项所述的基因改造的木本植物或如权利要求15至20及23任一项所述的方法，其特征在于：所述至少一种单萜包含香叶醇合成酶(GS)。
25.如权利要求1至13任一项所述的基因改造的木本植物或如权利要求15至20及23任一项所述的方法，其特征在于：所述至少一种单萜包含至少两种多肽。
26.如权利要求2、3及7至9任一项所述的核酸构造、如权利要求10至11任一项所述的分离的细胞、如权利要求12至13任一项所述的基因改造的木本植物、如权利要求14所述的组合物、如权利要求17至20任一项所述的方法或如权利要求25所述的基因改造的木本植物及所述的方法，其特征在于：所述至少两种多肽包含香叶醇合成酶(GS)及香叶醇还原酶(GR)。
27.如权利要求2、3及7至9任一项所述的核酸构造、如权利要求10至11任一项所述的分离的细胞、如权利要求12至13任一项所述的基因改造的木本植物、如权利要求14所述的组合物、如权利要求17至20任一项所述的方法或如权利要求25所述的基因改造的木本植物及所述的方法，其特征在于：所述至少两种多肽包含香叶醇合成酶(GS)及柠檬醛还原酶(CR)。
28.如权利要求2、3及7至9任一项所述的核酸构造、如权利要求10至11任一项所述的分离的细胞、如权利要求12至13任一项所述的基因改造的木本植物、如权利要求14所述的组合物、如权利要求17至20任一项所述的方法或如权利要求25所述的基因改造的木本植物及所述的方法，其特征在于：所述至少两种多肽包含香叶醇合成酶(GS)及香叶醇脱氢酶(GD)。
29.如权利要求2、3及7至9任一项所述的核酸构造、如权利要求10至11任一项所述的分离的细胞、如权利要求12至13任一项所述的基因改造的木本植物、如权利要求14所述的组合物、如权利要求17至20任一项所述的方法或如权利要求25所述的基因改造的木本植物及所述的方法，其特征在于：所述至少两种多肽包含香叶醇合成酶(GS)、香叶醇还原酶(GR)及香叶醇脱氢酶(GD)。
30.如权利要求2、3及7至9任一项所述的核酸构造、如权利要求10至11任一项所述的分离的细胞、如权利要求12至13任一项所述的基因改造的木本植物、如权利要求14所述的组合物、如权利要求17至20任一项所述的方法或如权利要求25所述的基因改造的木本植物及所述的方法，其特征在于：所述至少两种多肽包含香叶醇合成酶(GS)、香叶醇脱氢酶(GD)及柠檬醛还原酶(CR)。
31.如权利要求2、3及7至9任一项所述的核酸构造、如权利要求10至11任一项所述的分离的细胞、如权利要求12至13任一项所述的基因改造的木本植物、如权利要求14所述的组合物、如权利要求17至20任一项所述的方法或如权利要求25所述的基因改造的木本植物及所述的方法，其特征在于：所述至少两种多肽包含香叶醇合成酶(GS)、香叶醇还原酶(GR)、香叶醇脱氢酶(GD)及柠檬醛还原酶(CR)。
32.如权利要求1至4、7至20及23至29任一项所述的核酸构造、所述的分离的细胞、所述的基因改造的细胞、所述的组合物或所述的方法，其特征在于：所述多肽更包含一叶绿体前导肽。
33.如权利要求4所述的构造或如权利要求10所述的分离的细胞，其特征在于：所述植物为一木本植物。
34.如权利要求1、12及13任一项所述的基因改造的木本植物、如权利要求15至20及权利要求23任一项所述的方法或如权利要求33所述的构造及所述的分离的细胞，其特征在于：所述木本植物为桉树或白杨树。
35.如权利要求13所述的基因改造的植物或如权利要求15所述的方法，所述病虫害选自于由下述所组成的群组：赤桉木虱、桉突眼蝽、桉树枝瘿釉小蜂以及桉树釉小蜂。
36.如权利要求1至3、7至20及23至35任一项所述的基因改造的木本植物、所述的核酸构造、所述的分离的细胞、所述的组合物或所述的方法，其特征在于：所述香叶醇合成酶(GS)的核酸序列包含SEQ ID NO：36至46。
37.如权利要求1至3、7至20、23、25至26及29至35任一项所述的基因改造的木本植物、所述的核酸构造、所述的分离的细胞、所述的组合物或所述的方法，其特征在于：所述香叶醇还原酶(GR)的核酸序列包含SEQ ID NO：47至57、82、84、86、88或90。
38.如权利要求1至20、23、25及28至35任一项所述的基因改造的木本植物、所述的核酸构造、所述的分离的细胞、所述的组合物或所述的方法，其特征在于：所述香叶醇脱氢酶(GD)的核酸序列包含SEQ ID NO：58至63。
39.如权利要求1至3、7至20及23至35任一项所述的基因改造的木本植物、所述的核酸构造、所述的分离的细胞、所述的组合物或所述的方法，其特征在于：所述柠檬醛还原酶(CR)的核酸序列包含SEQ ID NO：80。
40.如权利要求1至3、7至20及23至35任一项所述的基因改造的木本植物、所述的核酸构造、所述的分离的细胞、所述的组合物或所述的方法，其特征在于：所述香叶醇合成酶(GS)的氨基酸序列包含SEQ ID NO：1至12。
41.如权利要求1至3、7至20、23、25至26及29至35任一项所述的基因改造的木本植物、所述的核酸构造、所述的分离的细胞、所述的组合物或所述的方法，其特征在于：所述香叶醇还原酶(GR)的氨基酸序列包含SEQ ID NO：13至29、81、83、85、87或89。
42.如权利要求1至20、23、25及28至35任一项所述的基因改造的木本植物、所述的核酸构造、所述的分离的细胞、所述的组合物或所述的方法，其特征在于：所述香叶醇脱氢酶(GD)的氨基酸序列包含SEQ ID NO：30至35。
43.如权利要求1至20、23、25及28至35任一项所述的基因改造的木本植物、所述的核酸构造、所述的分离的细胞、所述的组合物或所述的方法，其特征在于：所述柠檬醛还原酶(CR)的氨基酸序列包含SEQ ID NO：79。
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