CN117647607B - 一种同时测定5-(2-氟苯基)-1h-吡咯-3-甲醛中有关物质的hplc检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种同时测定5‑(2‑氟苯基)‑1H‑吡咯‑3‑甲醛中有关物质的HPLC检测方法，操作简便，专属性、线性、精密度均良好，且溶液稳定、灵敏度高、方法耐用性好，可用于富马酸伏诺拉生起始物料5‑(2‑氟苯基)‑1H‑吡咯‑3‑甲醛的质量控制，满足现有需要。
Description
技术领域
本发明属于药物分析技术领域，具体涉及一种同时测定5-(2-氟苯基)-1H-吡咯-3-甲醛中有关物质的HPLC检测方法。
背景技术
富马酸伏诺拉生，是一种钾离子竞争性酸阻滞剂（P-CAB），适用于胃溃疡、十二指肠溃疡、反流性食道炎，可预防服用低剂量阿司匹林期间胃溃疡或十二指肠溃疡的复发以及预防服用非甾体类抗炎药期间胃溃疡或十二指肠溃疡的复发。可辅助胃溃疡、十二指肠溃疡、胃粘膜相关淋巴组织（MALT）淋巴癌、原发免疫性血小板减少症、早期胃癌内窥镜切除术后、幽门螺杆菌感染性胃炎等疾病根除幽门螺旋杆菌。
富马酸伏诺拉生，CAS号：881681-01-2，化学名为1-[5-(2-氟苯基)-1-(吡啶-3-磺酰基)-1H-吡咯-3-基]-N-甲基甲胺单富马酸盐，结构式如下：
富马酸伏诺拉生
富马酸伏诺拉生起始物料5-(2-氟苯基)-1H-吡咯-3-甲醛（以下可称为化合物（Ⅳ）），CAS号：881674-56-2，是合成富马酸伏诺拉生的重要起始物料，结构式如下：
化合物（IV）
依据5-(2-氟苯基)-1H-吡咯-3-甲醛的化学结构及制备工艺，其可能存在多种杂质，其中，2个氟位置异构体及脱氟杂质，在合成工艺过程中均会直接参与反应，产生富马酸伏诺拉生对应的氟位置异构体及脱氟杂质。由于其结构与伏诺拉生相似，性质相近，故在合成工艺过程中很难去除，从而可能影响终产品富马酸伏诺拉生的质量。因此，建立一种稳定有效的测定5-(2-氟苯基)-1H-吡咯-3-甲醛异构体及其他杂质的HPLC检测方法，完善对该起始物料的质量控制，是非常必要的。目前尚未检索到5-(2-氟苯基)-1H-吡咯-3-甲醛有关杂质的检测方法。
发明内容
本发明解决了现有技术中存在的难题，提供了一种同时测定富马酸伏诺拉生起始物料5-(2-氟苯基)-1H-吡咯-3-甲醛中有关物质的HPLC检测方法，操作简便，专属性、线性、精密度均良好，且溶液稳定、灵敏度高、方法耐用性好，可用于富马酸伏诺拉生起始物料5-(2-氟苯基)-1H-吡咯-3-甲醛的质量控制，满足现有需要。
本发明提供了一种同时测定5-(2-氟苯基)-1H-吡咯-3-甲醛中有关物质的HPLC检测方法，包括以下步骤：分别取分离度溶液、供试品溶液进样，按高效液相色谱条件进行检测，记录色谱图；
所述色谱条件为：色谱柱：五氟苯基键合硅胶为填充剂的色谱柱；流动相A为缓冲溶液，流动相B为有机溶剂；按下表进行梯度洗脱：
；
进一步的，梯度洗脱条件为：
；
更优选的，梯度洗脱条件为：
。
其中，所述有关物质包括异构体1、脱氟杂质，其结构如下所示：
；
所述有关物质还可进一步包括异构体2、脱氟杂质、杂质1、杂质2，其结构如下所示：
。
所述色谱条件还包括：
检测器：紫外检测器；
流速：1.0ml/min；
柱温：20~30℃，优选25℃；
检测波长：242nm或270nm；
进样量：20μl；
运行时间：55分钟。
所述的色谱柱优选Welch Ultimate PFP，4.6mm×250mm，5μm。
所述的流动相A，缓冲溶液为磷酸二氢钾溶液、磷酸二氢钠溶液、磷酸氢二钾溶液、磷酸氢二钠溶液、甲酸铵溶液、醋酸铵溶液或磷酸溶液，其中，所述磷酸二氢钾溶液用酸性试剂调节pH值至2.5～3.5，优选3.0，其浓度为10~50 mmol/L，优选10 mmol/L，所述酸性试剂为选自冰醋酸、磷酸、甲酸中的一种或多种，优选磷酸；所述磷酸溶液浓度为0.1%~0.3%（ml/ml），优选0.1%（ml/ml）。
所述的流动相B，有机溶剂选自乙腈或甲醇-乙腈混合溶液，优选甲醇-乙腈混合溶液，其比例为1：1~6，优选1：1。
所述分离度溶液通过以下过程配制：取脱氟杂质对照品、异构体1对照品、异构体2对照品、杂质1对照品、杂质2对照品各适量，加溶剂使溶解并稀释，摇匀，作为各杂质贮备液。称取化合物（Ⅳ）适量，加溶剂使溶解，再加各杂质贮备液适量，用溶剂稀释摇匀即得。
所述供试品溶液通过以下过程配制：取化合物（Ⅳ）适量，加溶剂溶解并稀释摇匀即得。
其中所述溶剂为流动相A：流动相B=60~70∶30~40。
本发明进一步提供了一种同时测定5-(2-氟苯基)-1H-吡咯-3-甲醛中有关物质的HPLC检测方法，包括以下步骤：分别取分离度溶液、供试品溶液进样，按高效液相色谱条件进行检测，记录色谱图；
所述色谱条件为：色谱柱：Welch Ultimate PFP，4.6mm×250mm，5μm；流动相A为磷酸二氢钾溶液或磷酸溶液；流动相B为乙腈或甲醇-乙腈混合溶液；按下表进行梯度洗脱：
；
进一步的，梯度洗脱条件为：
。
其中，所述有关物质包括异构体1、脱氟杂质，其结构如下所示：
；
所述有关物质还可进一步包括异构体2、脱氟杂质、杂质1、杂质2，其结构如下所示：
。
所述色谱条件还包括：
检测器：紫外检测器；
流速：1.0ml/min；
柱温：25℃；
检测波长：242nm或270nm；
进样量：20μl；
运行时间：55分钟。
所述的色谱柱优选Welch Ultimate PFP，4.6mm×250mm，5μm。
所述的流动相A中，所述磷酸二氢钾溶液用磷酸调节pH值至3.0，其浓度为10mmol/L；所述磷酸溶液浓度为0.1%（ml/ml）。
所述的流动相B为甲醇-乙腈混合溶液，其比例为1∶1~6，优选1：1。
所述分离度溶液通过以下过程配制：取脱氟杂质对照品、异构体1对照品、异构体2对照品、杂质1对照品、杂质2对照品各约2mg，置10ml量瓶中，加乙腈和溶剂适量使溶解，用溶剂稀释至刻度，摇匀，作为各杂质贮备液。称取化合物（Ⅳ）约2mg，置10ml量瓶中，加溶剂适量使溶解，再加各杂质贮备液0.1ml，用溶剂稀释至刻度，摇匀，即得。
所述供试品溶液通过以下过程配制：取5-(2-氟苯基)-1H-吡咯-3-甲醛（化合物（Ⅳ））约5mg，置25ml量瓶中，加溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。
其中所述溶剂为流动相A：流动相B=60~70∶30~40。
本发明进一步提供了同时测定5-(2-氟苯基)-1H-吡咯-3-甲醛中有关物质的HPLC检测方法在富马酸伏诺拉生质量控制中的用途。
本发明的有益技术效果为：
（1）本发明提出一种5-(2-氟苯基)-1H-吡咯-3-甲醛中的有关物质分析方法，采用高效液相色谱法，可实现5-(2-氟苯基)-1H-吡咯-3-甲醛与其氟位置异构体及脱氟杂质的有效分离，同时可实现对其他杂质的控制。
（2）本发明操作简便，专属性、线性、精密度均良好，且溶液稳定、灵敏度高、方法耐用性好，可用于富马酸伏诺拉生起始物料5-(2-氟苯基)-1H-吡咯-3-甲醛的质量控制。
附图说明
图1为实施例1中条件①的混合溶液色谱图。
图2为实施例1中条件②的混合溶液色谱图。
图3为实施例1中条件③的分离度溶液色谱图。
图4为实施例2中的系统适用性溶液色谱图。
图5为实施例2中的异构体2定位溶液色谱图。
图6为实施例3中化合物（Ⅳ）线性图。
图7为实施例4中定量限图谱。
图8为实施例4中定量限图谱。
图9为实施例4中检测限图谱。
图10为实施例4中检测限图谱。
图11为实施例5中精密度试验重叠图。
图12为实施例6中供试品溶液稳定性试验重叠图。
图13为实施例7中不同色谱柱供试品溶液图谱。
图14为实施例7中不同柱温供试品溶液图谱。
图15为实施例7中不同运行梯度供试品溶液图谱。
具体实施方式
下面详细描述本发明的具体实施例，需要说明的是下面描述的实施例是示例性的，仅用于解释本发明，而不能理解为对本发明的限制。
仪器及色谱条件：
仪器：高效液相色谱仪；
检测器：紫外检测器；
色谱柱：五氟苯基键合硅胶为填充剂的色谱柱，Welch Ultimate PFP，4.6mm×250mm，5μm；
流速：1.0ml/min；
进样体积：20μl；
运行时间：55分钟。
溶液配制：
供试品溶液的配制：取5-(2-氟苯基)-1H-吡咯-3-甲醛（化合物（Ⅳ））约5mg，置25ml量瓶中，加溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。
实施例1 色谱条件选择
在上述仪器及色谱条件的基础上，继续筛选最适用的色谱条件。
①流动相：流动相 A：10mmol/L磷酸二氢钾溶液（用磷酸调节pH值至3.0）；流动相B：乙腈；按下表进行梯度洗脱：
；
溶剂：流动相A-流动相B（70∶30）；
柱温：30℃；
检测波长为242nm。
混合溶液配制：取脱氟杂质对照品与异构体1对照品各约5mg，置25ml量瓶中，加溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀，作为各杂质贮备液。称取化合物（Ⅳ）约5mg，置25ml量瓶中，加溶剂适量使溶解，再加各杂质贮备液0.25ml，用溶剂稀释至刻度，摇匀，即得。
精密量取混合溶液10µl，注入液相色谱仪，记录色谱图。
结果：化合物（Ⅳ）峰保留时间为13.379分钟，异构体1峰保留时间为14.063分钟，两峰之间的分离度为1.72，分离良好，见图1。为改善化合物（Ⅳ）峰与异构体1峰的分离情况，进一步调整色谱条件。
②流动相A为10mmol/L磷酸二氢钾溶液（用磷酸调节pH值至3.0），流动相B为甲醇-乙腈（1︰6）；按下表进行梯度洗脱：
。
其余条件均同①。
精密量取混合溶液10µl，注入液相色谱仪，记录色谱图。
结果：化合物（Ⅳ）峰保留时间为15.842分钟，异构体1峰保留时间为16.908分钟，两峰之间的分离度为2.32，分离良好，见图2。为简化流动相A配制操作，将流动相A更改为0.1%（ml/ml）磷酸溶液，为改善化合物（Ⅳ）峰与异构体1峰的分离情况，进一步调整色谱条件。
③流动相A为0.1%（ml/ml）磷酸溶液，流动相B为甲醇-乙腈（1︰1），按下表进行梯度洗脱；化合物（Ⅳ）及其杂质在270m均有较大吸收，将检测波长改为270nm；溶剂调整为流动相A-流动相B（60∶40），柱温为25℃，其余条件均同②。
。
分离度溶液配制：取脱氟杂质对照品、异构体1对照品、异构体2对照品、杂质1对照品、杂质2对照品各约2mg，置10ml量瓶中，加乙腈和溶剂适量使溶解，用溶剂稀释至刻度，摇匀，作为各杂质贮备液。称取化合物（Ⅳ）约2mg，置10ml量瓶中，加溶剂适量使溶解，再加各杂质贮备液0.1ml，用溶剂稀释至刻度，摇匀，即得。
精密量取分离度溶液20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。
结果：主峰保留时间为15.589min，与相邻最近杂质（异构体1）峰间的分离度为2.61，其他各杂质峰之间分离度均大于2.0，分离良好，各杂质峰峰形良好，见图3。
实施例2 系统适用性试验
系统适用性溶液：取脱氟杂质对照品与异构体1对照品各约2mg，置同一100ml量瓶中，加乙腈5ml使溶解，用溶剂稀释至刻度，摇匀，作为杂质贮备液；取化合物（Ⅳ）约2mg，置10ml量瓶中，加溶剂适量使溶解，再加杂质贮备液1ml，用溶剂稀释至刻度，摇匀。
定位溶液：取异构体2对照品约10mg，置25ml量瓶中，加溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀；量取0.5ml，置100ml量瓶中，用溶剂稀释至刻度，摇匀；量取1ml，置10ml量瓶中，用溶剂稀释至刻度，摇匀。
精密量取系统适用性溶液和定位溶液各20μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。结果：分离度溶液中脱氟杂质、化合物（Ⅳ）、异构体1依次出峰，化合物（Ⅳ）峰与异构体1峰之间的分离度为2.77，大于1.5，符合规定。具体结果见表1、图4、图5。
表1 系统适用性试验试验结果
实施例3 线性试验
线性溶液的配制：称取化合物（Ⅳ）约12mg，置50ml量瓶中，加溶剂使溶解并稀释至刻度，作为线性溶液5。称取化合物（Ⅳ）约10mg，置50ml量瓶中，加溶剂使溶解并稀释至刻度，作为线性贮备液；分别精密量取线性贮备液1ml和5ml，置不同的10ml量瓶中，用溶剂稀释至刻度，摇匀，分别作为线性溶液3和线性溶液4；精密量取线性溶液3 1ml，置10ml量瓶中，用溶剂稀释至刻度，摇匀，作为线性溶液2；精密量取线性溶液2 1ml，置10ml量瓶中，用溶剂稀释至刻度，摇匀，作为线性溶液1。
定量限溶液的配制：量取线性贮备液30μl，置100ml量瓶中，用溶剂稀释至刻度，摇匀，即得。
精密量取线性溶液及定量限溶液各20μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。以峰面积对浓度作曲线，用最小二乘法计算回归方程及相关系数。结果如表2及图6所示，结合定量限试验结果，化合物（Ⅳ）在浓度为0.063～246.802μg/ml的范围内线性良好。
表2 化合物（Ⅳ）有关物质检查线性试验结果
实施例4 定量限、检测限试验
脱氟杂质贮备液的配制：取脱氟杂质对照品约4mg，置10ml量瓶中，加溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。
异构体1贮备液、异构体2贮备液和杂质2贮备液的配制：取异构体1对照品、异构体2对照品和杂质2对照品各约10mg，置25ml量瓶中，加乙腈和溶剂适量使溶解，用溶剂稀释至刻度，摇匀，即得。
定量限溶液①的配制：精密量取脱氟杂质贮备液、异构体1贮备液、异构体2贮备液和杂质2贮备液各0.5ml，置同一100ml量瓶中，用溶剂稀释至刻度，摇匀，即得。
杂质1贮备液的配制：取杂质1对照品约2mg，精密称定，置10ml量瓶中，加溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。
化合物（Ⅳ）贮备液的配制：取化合物（Ⅳ）约25mg，置25ml量瓶中，加溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀；精密量取0.5ml，置50ml量瓶中，用溶剂稀释至刻度，摇匀，即得。
定量限溶液②的配制：精密量取化合物（Ⅳ）贮备液0.5ml，杂质1贮备液0.025ml，置同一100ml量瓶中，用溶剂稀释至刻度，摇匀，即得。
检测限溶液①的配制：精密量取定量限溶液①3ml，置10ml量瓶中，用溶剂稀释至刻度，摇匀，即得。
检测限溶液②的配制：精密量取定量限溶液②3ml，置10ml量瓶中，用溶剂稀释至刻度，摇匀，即得。
分别精密量取定量限溶液和检测限溶液各20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，至测得的主峰响应值不低于噪音信号的10倍高和3倍高，即为各化合物的定量限和检测限。结果见表3、表4、图7～图10。
表3 化合物（Ⅳ）有关物质检查定量限结果表
表4 化合物（Ⅳ）有关物质检查检测限结果表
实施例5 精密度试验
平行配制6份供试品溶液，作为供试品溶液1~6。
分别精密量取各供试品溶液20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。结果如表5、图11所示，精密度试验结果良好。
表5 化合物（Ⅳ）有关物质检查精密度试验结果
实施例6 溶液稳定性试验
取供试品溶液，于室温自然光下放置，分别于0、2、4、6、8、24小时，精密量取20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，与0小时比较，分别计算并分析脱氟杂质、其他最大单个杂质及总杂质检出量的变化率。结果表明：供试品溶液在24小时内稳定性良好。结果如表6，图12所示。
表6 化合物（Ⅳ）有关物质检查供试品溶液稳定性试验结果
实施例7 耐用性试验
取供试品溶液在既定色谱条件基础上，按表7分别采用两根同型号不同编号的色谱柱、不同柱温、不同流动相比例来测定化合物（Ⅳ）的有关物质，比较测定结果。结果见表8及图13~15所示，采用两根同型号不同编号的色谱柱，柱温在20～30℃范围内，梯度在梯度Ⅰ～梯度Ⅲ范围内，供试品溶液色谱图中，化合物（Ⅳ）峰与相邻杂质峰之间的分离度均不小于1.5；按峰面积归一化法分别计算脱氟杂质、其他最大单个杂质和总杂质检出量，测定结果基本一致，方法的耐用性良好。
表7 化合物（Ⅳ）有关物质检查HPLC方法的耐用性
梯度表Ⅰ
梯度表Ⅱ
梯度表Ⅲ
表8 化合物（Ⅳ）有关物质检查耐用性试验结果（供试品溶液）
注：*为同一张色谱图。
Claims (4)
1.一种同时测定5-(2-氟苯基)-1H-吡咯-3-甲醛中有关物质的HPLC检测方法，其特征在于，包括以下步骤：分别取分离度溶液、供试品溶液进样，按高效液相色谱条件进行检测，记录色谱图；所述色谱条件为：色谱柱：五氟苯基键合硅胶为填充剂的色谱柱；流动相A为缓冲溶液，流动相B为有机溶剂；按下表进行梯度洗脱：
其中，所述有关物质包括异构体1、脱氟杂质，其结构如下所示：
所述有关物质还包括异构体2、杂质1、杂质2，其结构如下所示：
所述流动相A为磷酸二氢钾溶液或磷酸溶液，所述磷酸二氢钾溶液用酸性试剂调节pH值至2.8～3.2，其浓度为10～50mmol/L；所述磷酸溶液浓度为0.1％(ml/ml)，所述流动相B为甲醇-乙腈混合溶液，其中，甲醇：乙腈＝1:1～6。
2.根据权利要求1所述的同时测定5-(2-氟苯基)-1H-吡咯-3-甲醛中有关物质的HPLC检测方法，其特征在于，所述色谱条件还包括：
检测器：紫外检测器；
流速：1.0ml/min；
柱温：20～30℃；
检测波长：270nm；
进样量：20μl；
运行时间：55分钟。
3.根据权利要求1所述的同时测定5-(2-氟苯基)-1H-吡咯-3-甲醛中有关物质的HPLC检测方法，其特征在于，所述梯度洗脱条件为：
。
4.根据权利要求1所述的同时测定5-(2-氟苯基)-1H-吡咯-3-甲醛中有关物质的HPLC检测方法在富马酸伏诺拉生质量控制中的用途。
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Citations (4)
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|---|---|---|---|---|
| CN113984928A (zh) * | 2021-10-25 | 2022-01-28 | 南京锐志生物医药有限公司 | 一种2-苯甲酰基吡咯有关物质的高效液相色谱分析方法 |
| WO2022151841A1 (zh) * | 2021-01-15 | 2022-07-21 | 浙江海正药业股份有限公司 | 法维拉韦中有关物质的测定方法 |
| CN116953129A (zh) * | 2023-09-21 | 2023-10-27 | 山东齐都药业有限公司 | 高效液相色谱法同时测定富马酸伏诺拉生中十二种杂质的方法 |
| CN117030876A (zh) * | 2023-07-19 | 2023-11-10 | 山东新华制药股份有限公司 | 富马酸伏诺拉生起始物料的有关物质的检测方法 |
Family Cites Families (1)
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2022151841A1 (zh) * | 2021-01-15 | 2022-07-21 | 浙江海正药业股份有限公司 | 法维拉韦中有关物质的测定方法 |
| CN113984928A (zh) * | 2021-10-25 | 2022-01-28 | 南京锐志生物医药有限公司 | 一种2-苯甲酰基吡咯有关物质的高效液相色谱分析方法 |
| CN117030876A (zh) * | 2023-07-19 | 2023-11-10 | 山东新华制药股份有限公司 | 富马酸伏诺拉生起始物料的有关物质的检测方法 |
| CN116953129A (zh) * | 2023-09-21 | 2023-10-27 | 山东齐都药业有限公司 | 高效液相色谱法同时测定富马酸伏诺拉生中十二种杂质的方法 |
Non-Patent Citations (1)
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| HPLC法测定5-(2-氟苯基)-1H-吡咯-3-甲醛有关物质;蒙发明 等;化工中间体;20150315;第11卷(第3期);第41-42页 * |
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