CN117625405A

CN117625405A - 一种出芽短梗霉及其发酵产物和应用

Info

Publication number: CN117625405A
Application number: CN202311618115.2A
Authority: CN
Inventors: 沈真; 吴慧君; 张丽华; 朱龙
Original assignee: Osmun Biological Co ltd
Current assignee: Osmun Biological Co ltd
Priority date: 2023-11-29
Filing date: 2023-11-29
Publication date: 2024-03-01

Abstract

本发明公开了一种出芽短梗霉及其发酵产物和应用，涉及微生物领域。本发明提供了一种新的南极来源的出芽短梗霉OSM‑NJ02‑Gly‑3‑01，其发酵产生的多糖分子量比普通菌株发酵产生的多糖分子量更大，且分布更窄，其发酵产物具有较好的抗紫外线活性，能提高胶原蛋白的生成，促进皮肤基底层和角质层的修护，抑制炎症因子的活性。且该出芽短梗霉可以通过与珍珠共发酵，进一步提高发酵产物的功效，为增强皮肤屏障功能，抗衰老和晒后修复提供了新的途径。

Description

一种出芽短梗霉及其发酵产物和应用

技术领域

本发明涉及微生物领域，具体而言，涉及一种出芽短梗霉及其发酵产物和应用。

背景技术

皮肤修护功效是指有助于维护皮肤各部位保证正常状态的功效。皮肤维持正常功能需要皮肤的稳定和对内外损伤的及时修复。随着皮肤科学和化妆品科学研究的不断深入，皮肤修复的范围也越来越深入和广泛，不仅包括皮肤角质层、表皮细胞，还包括真皮层的胶原蛋白、真表皮连接处的层粘连蛋白等。

皮肤自身具有很强的修复能力，包括皮肤抗氧化系统，皮肤免疫体系、皮肤增殖与再生功能。当皮肤屏障功能受损时，将会表皮增生过度和真皮炎症因子释放。现有皮肤屏障修复的活性成分，很难做到多角度实现屏障修复效果，往往只能减轻单一因素导致的屏障损伤现象，而无法同时兼顾紫外线等环境侵害引起的皮肤屏障多个靶点的损伤修护，因此往往无法达到满意的效果，实际应用上受到很大的限制。皮肤敏感、泛红、刺痛、干燥、脱屑、瘙痒等，通常是皮肤受损之后无法及时修复出现的高敏反应状态。造成皮肤的伤害，例如光老化、表皮皱纹、皮肤免疫力失调等。出现暗纹、细纹、皱纹等皮肤老化现象。

因此，需要提供一种具有多种修护效果的修护成分，以满足市场需求。

鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的目的在于提供一种出芽短梗霉及其发酵产物和应用。

本发明是这样实现的：

第一方面，本发明实施例提供了一种出芽短梗霉，其分类学拉丁文名为Aureobasidium pullulans，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCC No:M2022609。

第二方面，本发明实施例提供了一种发酵产物，由前述实施例所述的出芽短梗霉培养获得。

第三方面，本发明实施例提供了一种珍珠发酵物，由前述实施例所述的出芽短梗霉在含珍珠的培养基中发酵培养获得。

第四方面，本发明实施例提供了一种皮肤外用剂，其包括：前述实施例所述的出芽短梗霉、前述实施例所述的发酵产物和前述实施例所述的珍珠发酵物中的任意一种或多种。

第五方面，本发明实施例提供了如前述实施例所述的出芽短梗霉或前述实施例所述的发酵产物或前述实施例所述的珍珠发酵物或前述实施例所述的微生物制剂在制备皮肤外用剂中的应用。

第六方面，本发明实施例提供了如前述实施例所述的出芽短梗霉或前述实施例所述的发酵产物或前述实施例所述的珍珠发酵物或前述实施例所述的皮肤外用剂在生产多糖或制备用于生产多糖的产品中的应用。

本发明具有以下有益效果：

本发明提供了一种新的南极来源的出芽短梗霉OSM-NJ02-Gly-3-01，其发酵产生的多糖分子量比普通菌株发酵产生的多糖分子量更大，且分布更窄；该出芽短梗霉的发酵产物具有较好的抗紫外线活性，能提高胶原蛋白的生成，促进皮肤基底层和角质层的修护，抑制炎症因子的活性；且该出芽短梗霉可以通过与珍珠共发酵，进一步提高发酵产物的功效，为增强皮肤屏障功能，抗衰老和晒后修复提供了新的途径。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本发明的某些实施例，因此不应被看作是对范围的限定，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。

图1为南极出芽短梗霉发酵物和南极菌珍珠发酵物促进胶原生成的效果；其中，A为I型胶原蛋白水平表达，B为I型胶原mRNA水平表达；

图2为南极出芽短梗霉发酵物和南极菌珍珠发酵物对基底层修护效果；其中，A为laminin5蛋白水平表达，B为laminin5 mRNA水平表达；

图3为南极出芽短梗霉发酵物和南极菌珍珠发酵物对角质屏障修护效果；其中，A为Filaggrin和Loricrin蛋白水平表达，B为Filaggrin和Loricrin mRNA水平表达。

具体实施方式

为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。

针对现有技术存在的问题，本申请的发明人经一系列创造性劳动，通过低温诱变的筛选方法，获得了一株产窄分布高分子量多糖的出芽短梗霉CCTCC No:M2022609。该出芽短梗霉CCTCC No:M2022609的发酵产物具有拮抗UVA损伤、促进胶原生成、基底层修护、角质屏障修护的活性，并且可以通过与珍珠发酵，提高发酵液抗氧化活性、抑制炎症因子IL-8的活性，因此，该出芽短梗霉及其发酵产物能够应用于皮肤外用剂的制备中。所制得的皮肤外用剂拥有多重功效，能够抵御UV损伤、抗炎、强韧皮肤基底层和修护角质屏障，能够帮助皮肤增强屏障功能，预防光损伤和光老化，以及晒后修复。

具体的技术方案

一方面，本发明实施例提供了一种出芽短梗霉，其分类学拉丁文名为Aureobasidium pullulans，保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏号为CCTCC No:M2022609。

将分离自南极土壤的出芽短梗霉，经低温筛选获得所述的出芽短梗霉CCTCC No:M2022609。该出芽短梗霉在PDA液体培养基中生长良好。对该菌株进行鉴定，结果为出芽短梗霉(Aureobasidium pullulans)，命名为OSM-NJ02-Gly-3-01。该菌株已于2022年5月19日保藏在中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏地址：中国.武汉.武汉大学，邮编：430072。

另一方面，本发明实施例提供了一种发酵产物，由前述实施例所述的出芽短梗霉培养获得。

在一些实施例中，所述培养的步骤包括：对出芽短梗霉进行发酵培养。

本发明对出芽短梗霉的培养条件没有特殊限制，可选择现有应用于出芽短梗霉的培养条件。

在一些实施例中，所述发酵培养的条件包括：温度为15～30℃，时间为2～10天。该温度可以为15、16、18、20、22、24、26、28、30℃中的任意一种或任意两种之间的范围，优选为28℃。该时间可以为2、2.5、3、3.5、4、4.5、5、5.5、6、6.5、7、7.5、8、8.5、9、9.5、10天中的任意一种或任意两种之间的范围，优选为3～5天。

本发明对出芽短梗霉的培养基没有特殊限制，可选择现有应用于出芽短梗霉的培养基。

在一些实施例中，所述发酵培养采用的培养基选自：PDA液体培养基、YPD培养基和GMMY培养基中的任意一种或多种。

在一些实施例中，PDA液体培养基为本领域常规的PDA液体培养基；较佳地，其包括5g/L马铃薯浸粉、15g/L葡萄糖、10g/L蛋白胨和5g/L NaCl。

在一些实施例中，在进行所述发酵培养前，所述培养的步骤还包括：对出芽短梗霉进行种子培养，将种子培养获得的产物用于所述发酵培养；

本发明对种子培养的培养基和培养条件无特殊限制，可选择现有应用于出芽短梗霉的种子培养的条件和培养基。

在一些实施例中，所述种子培养的条件包括：温度为25～28℃，时间为48～60h。该温度可以为25、26、27、28℃中的任意一种或任意两种之间的范围，优选为48h。该时间可以为48、50、52、54、56、58、60h中的任意一种或任意两种之间的范围。

在一些实施例中，种子培养的培养基可以为PDA液体培养基。

在一些实施例中，种子培养的接种量为本领域常规接种量，具体可以为5％(体积百分比)。

另一方面，本发明实施例提供了一种珍珠发酵物，由前述任意实施例所述的出芽短梗霉在含珍珠的培养基中发酵培养获得。

在一些实施例中，所述含有珍珠的培养基包括：含珍珠粉和/或珍珠提取物的培养基；

在一些实施例中，在所述含珍珠的培养基中，所述珍珠的质量分数为0.01％～10％；

在一些实施例中，所述发酵培养的条件包括：温度为15～30℃，时间为2～10天。

另一方面，本发明实施例提供了一种皮肤外用剂，其包括：前述任意实施例所述的出芽短梗霉、前述任意实施例所述的发酵产物和前述任意实施例所述的珍珠发酵物中的任意一种或多种。

另一方面，本发明实施例提供了如前述任意实施例所述的出芽短梗霉或前述任意实施例所述的发酵产物或前述任意实施例所述的珍珠发酵物在制备皮肤外用剂中的应用。

本发明提供的出芽短梗霉CCTCC No.M2022609具有抵御紫外线能力强、产多糖含量高、抗氧化活性强的特性，能够应用于皮肤外用剂的制备中，以达到抗氧化、抗衰老的目的。

在一些实施例中，所述皮肤外用剂具有保护和/或增强皮肤屏障功能。

在一些实施例中，所述保护和/或增强皮肤屏障功能包括：抗衰老、防晒、抗氧化、抗炎、促进皮肤基底层修护、促进皮肤角质层修护中的任意一种或多种功效。

在一些实施例中，所述抗衰老的方式包括：促进胶原蛋白生成。

在一些实施例中，所述胶原蛋白包括I型胶原蛋白。

在一些实施例中，所述抗炎包括：抑制炎症因子。

在一些实施例中，所述炎症因子包括IL-8。

在一些实施例中，所述促进皮肤角质层修护包括：促进Filaggrin蛋白表达水平、促进Filaggrin mRNA表达水平、促进Loricrin蛋白的表达水平和促进Loricrin mRNA表达水平中的任意一种或多种升高。

在一些实施例中，所述促进皮肤基底层修护包括：促进laminin5蛋白表达水平和/或其mRNA表达水平升高。

本文所述的皮肤外用剂是通常用于皮肤外部的所有成分的统称概念，例如可以是化妆品、护肤品或药品。所述化妆品中可以是基础化妆品、面部化妆品、眼部化妆品、头部化妆品、身体用化妆品等，对其剂型无特殊限制，根据不同目的可合理选择。

在一些实施例中，所述皮肤外用剂包括：药物、化妆品和护肤品中的任意一种。

在一些实施例中，所述化妆品包括：粉底液和隔离霜中的任意一种。

在一些实施例中，所述护肤品包括：洗面奶、精华液、乳液、爽肤水、面霜、防晒霜和面膜中的任意一种。

在一些实施例中，所述皮肤外用剂的形式可以为任何合适的产品形式，所述的产品形式包括但不限于膏霜类、乳液类、水剂类、凝胶类、油剂类、粉剂类、贴类、膜类、冻干类、泥类和气雾剂类。众所周知地，本发明的皮肤外用剂可为化妆品、皮肤病学或药物局部施用产品，其制备方法可为本领域常规的制备方法。

在一些实施例中，所述皮肤外用剂还可以包括药用载体。所述的可药用载体是本领域常规可药用载体，较佳地为防腐剂、香精、亲水性活性剂和亲脂性活性剂中的一种或多种。所述的可药用载体的含量为本领域常规的含量。

在一些实施例中，所述皮肤外用剂还可以包括以下任意一种或多种组分：赋脂剂、分散剂、粘度调节剂、溶剂、抗静电剂、增稠剂、美白剂、皮肤保护剂、氧化剂、磨砂剂、螯合剂增塑剂、祛斑剂、消泡剂、变性剂、肤感调节剂、润肤剂、控油剂、角质软化剂、吸附剂、清洁剂、封闭剂、吸收剂、着色剂、角质剥落剂、遮盖剂、保湿剂、防晒剂、pH调节剂、悬浮剂、增溶剂、填充剂、缓冲剂、珠光剂、溶助剂、助滑剂、收敛剂、还原剂、遮光剂、乳化稳定剂、光稳定剂、清凉剂、表面改性剂、抗氧化剂、成膜剂或其任意组合。该些成分的含量可为本领域常规的含量。

此外，本发明实施例提供了如前述任意实施例所述的出芽短梗霉或前述任意实施例所述的发酵产物或前述任意实施例所述的珍珠发酵物或前述任意实施例所述的皮肤外用剂在生产多糖或制备用于生成多糖的产品中的应用。

以下结合实施例对本发明的特征和性能作进一步的详细描述。

实施例中所述室温是本领域常规的室温，较佳地为10～30℃。

实施例中所述培养基的组分如下所示：

YPD培养基：1％(w/w)酵母膏、2％(w/w)蛋白胨、2％(w/w)葡萄糖和水，pH为6.0。

PDA液体培养基：5g/L马铃薯浸粉、15g/L葡萄糖、15g/L蛋白胨和5g/L NaCl。

实施例1：微生物的获得

从采集自南极的潮间带土壤样本(样本编号：S02；采集地点：南极菲尔德斯半岛地区；经度58°57.8225′；纬度62°13.0705′；采样深度：0米；重量：100g；采样时间：2008年1月10日)中分离出其中的出芽短梗霉，取出芽短梗霉菌悬液1mL放置于-20℃冰箱一周低温处理之后，将其稀释10-3，取20μL进行涂布平板，28℃培养48小时待平板长出菌落之后，获得1株低温筛选菌株，该菌株编号OSM-NJ02-Gly-3-01，经菌种鉴定为出芽短梗霉(Aureobasidium pullulans)。该菌株已于2022年5月19日保藏在中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏编号CCTCC No.M2022609。

对照菌株为从采集自云南的土壤中分离获得的出芽短梗霉，菌株编号为：YN128-1。

实施例2：菌株的检测鉴定

将菌株OSM-NJ02-Gly-3-01在麦芽汁液体培养基中25℃培养三天，细胞卵形，椭圆形，长椭圆形。细胞大小为(3.2-5.4)×(4.2-9.6)μm，有沉淀形成。麦芽汁琼脂斜面25℃下培养，起初菌落奶酪状，乳白色，表面湿润光滑，有光泽。玉米粉琼脂Dalmau平板培养，无假菌丝产生。将菌株OSM-NJ02-Gly-3-01的D1/D2序列与NCBI数据库进行26S rDNA序列Blast比对，再结合菌株的形态学特征，确定该菌株为出芽短梗霉Aureobasidium pullulans。

rRNA基因D1D2区序列(5’-3’)测定结果如下：

GACCTCAGTCCCGGCTGGCCGTATTACACACTGGGCTATAACACCTCCACCGA

AGTGGAGGCCACATTCCCAGAGCCTTTATCCGGCCGCCGAAACTGATGCTGGCCT

GTCCAAACTGAGTAAACCGGTCAGAAGACCGGCCGAACAGTTTAAACAAGTCTGA

TTGCAAGCGCTTCCCTTTCAACAATTTCACGTGCTTTTTAACTCTCTTTCCAAAGTG

CTTTTCATCTTTCGATCACTCTACTTGTGCGCTATCGGTCTCTCGCCAATATTTAGCT

TTAGAAGAAATTTACCTCCCATTTAGAGCTGCATTCCCAAACAACTCGACTCGTCG

AAGGAGCTTTACATAGGTTAACATTTCCAGTCACATACGGGATTCTCACCCTCTATG

ACGTCCTGTTCCAAGGAACTTAGACTGGCGTTTTACCCAAAGCATCCTCTACAAAT

TACAATGCGAACCCGAAGGCTAGCTTTCAAATTTGAGCTGTTGCCGCTTCACTCGC

CGTTACTAGGGCAATCCCTGTTGGTTTCTTTTCCTCCGCTTATTGATATGCTTAAGTT

CAGCGGGTATCCCTACCTGATCCGAGGTCAACCTAGAAAAATAAAGGTTTCAATCG

GCAGAGTTCCTCTCCTTTGACAGACGTTCGAATAAATTCTACTACGCCTAAAGCCGGAGTGGCCTCGCCGAGGTCTTTAAGGCGCGCCCAACTAA。

实施例3：菌株的培养

将南极出芽短梗霉菌株OSM-NJ02-Gly-3-01接种至PDA液体培养基中，28℃培养48小时，得种子液；接种5％(v/v)种子液于至PDA液体培养基中，28℃，200rpm摇床培养2天，以获得菌株的发酵物。

实施例4：南极出芽短梗霉发酵物和南极菌珍珠发酵物的制备

将南极出芽短梗霉OSM-NJ02-Gly-3-01接种至PDA液体培养基中，28℃培养48小时，得种子液。

将市售亚微米珍珠粉(德清欧诗漫生物科技有限公司，批号220923)与去离子水，按1:10的重量比，搅拌混合均匀，添加浓度为20wt％乳酸水溶液(珍珠粉与乳酸的重量比为1:2)，搅拌溶解，过滤冻干得珍珠提取物。

接种5％(v/v)出芽短梗霉OSM-NJ02-Gly-3-01的种子液到不含珍珠粉或珍珠提取物pH＝6.0的PDA液体培养基中，28℃，200rpm，发酵罐培养5天，得培养液；将培养液于8℃，8000rpm离心10分钟，上清液用0.22μm的滤膜再次过滤，滤液冷冻干燥即得南极出芽短梗霉发酵物Antar-N1。

接种5％(v/v)出芽短梗霉OSM-NJ02-Gly-3-01的种子液到不含珍珠粉或珍珠提取物pH＝6.2的PDA液体培养基中，28℃，200rpm发酵罐培养5天，得培养液；将培养液于8℃，8000rpm离心10分钟，上清液用0.22μm的滤膜再次过滤，滤液冷冻干燥即得南极出芽短梗霉发酵物Antar-N2。

接种5％(v/v)出芽短梗霉OSM-NJ02-Gly-3-01的种子液到含有0.1％(wt/wt)珍珠提取物的PDA液体培养基中，28℃，200rpm发酵罐培养5天，得培养液；将培养液于8℃，8000rpm离心10分钟，上清液用0.22μm的滤膜再次过滤，滤液冷冻干燥即得南极菌珍珠发酵物Antar-P1。

接种5％(v/v)出芽短梗霉OSM-NJ02-Gly-3-01的种子液到含有1％(wt/wt)珍珠提取物的PDA液体培养基中，28℃，200rpm发酵罐培养5天，得培养液；将培养液于8℃，8000rpm离心10分钟，上清液用0.22μm的滤膜再次过滤，滤液冷冻干燥即得南极菌珍珠发酵物Antar-P2。

实施例5：南极出芽短梗霉发酵获得的多糖含量及其分子量

将南极出芽短梗霉OSM-NJ02-Gly-3-01与普通出芽短梗霉菌株YN128-1进行发酵培养(培养条件同实施例3)，获得粗多糖。

将发酵获得的粗多糖进行去蛋白处理之后，通过场流分离技术进行多糖分子量的测定，结果如表1所示。南极出芽短梗霉发酵产生的多糖，比普通菌株产生的多糖分子量更大，分子量分布范围更窄。

表1发酵液中多糖含量及分子量

实施例6：南极出芽短梗霉发酵物中的I型胶原蛋白的表达量增加

将生长于完全DMEM培养基且处于对数生长期的人成纤维细胞HSF，以合适的密度接种于6孔板，置37℃、5％CO₂浓度二氧化碳培养箱孵育。培养2天后，用无血清培养基配制南极出芽短梗霉发酵物和南极菌珍珠发酵物以0.01mg/mL及0.1mg/mL的浓度处理细胞，置培养箱孵育24h后，收取蛋白和RNA，用Western Blot和Q-PCR检测I型胶原蛋白的含量。

结果如图1所示，使用南极出芽短梗霉发酵物和南极菌珍珠发酵物样品处理后I型胶原蛋白的表达显著增加，高于空白对照组。

实施例7：南极出芽短梗霉发酵物促进基底层修护

人永生化角质形成细胞HaCaT细胞复苏后，以合适的细胞数量接种于6孔板，置37℃，5％ CO₂浓度的二氧化碳培养箱中，孵育至细胞贴壁。培养一天后，用无血清培养基配制南极出芽短梗霉发酵物和南极菌珍珠发酵物以0.01及0.1mg/mL的浓度处理细胞，继续置培养箱中孵育24小时后收取蛋白和RNA，进行Western Blot和Q-PCR检测。

结果如图2所示，使用南极出芽短梗霉发酵物和南极菌珍珠发酵物样品处理后laminin5蛋白水平及mRNA水平表达量均明显增加，高于空白对照组。

实施例8：南极出芽短梗霉发酵物促进角质层修护

人永生化角质形成细胞HaCaT细胞复苏后，以合适的细胞数量接种于6孔板，置37℃，5％ CO₂浓度的二氧化碳培养箱中，孵育至细胞贴壁。培养一天后，用无血清培养基配制南极出芽短梗霉发酵物以0.01及0.1mg/mL的浓度处理细胞，继续置培养箱中孵育24小时后收取蛋白和RNA，进行Western Blot和Q-PCR检测。

结果如图3所示，使用南极出芽短梗霉发酵物和南极菌珍珠发酵物样品处理后Filaggrin和Loricrin蛋白水平及mRNA水平表达量均明显增加，高于空白对照组。

实施例9：南极菌珍珠发酵物抵御紫外损伤活性测试

按实施例4制备发酵样品。

测定步骤为：

将HaCAT细胞按5000个/孔接种于96孔板，待细胞融合度约80％时，按下表配制样品并处理细胞，置CO₂培养箱继续孵育。24h后，用UVA或UVB辐照细胞，并设置未辐照组为空白对照。UVA辐照后立即吸掉培养基，加0.5mg/mL MTT，3h后加DMSO提取甲臜，用酶标仪检测560nm处吸光度；UVB辐照后，置CO₂培养箱继续孵育24h后，吸掉培养基，加0.5mg/mLMTT，3h后加DMSO提取甲臜，用酶标仪检测560nm处吸光度。以50μg/mL Vc为阳性对照。检测结果如下。

表2抵御UVA损伤活性测试

备注：表格中的样品浓度％中的“％”为质量分数。

实验结果显示，南极出芽短梗霉发酵物和南极菌珍珠发酵物均具有抵御UVA紫外损伤的活性。

表3抵御UVB损伤活性测试

实验结果显示，南极出芽短梗霉发酵物和南极菌珍珠发酵物均具有抵御UVB紫外损伤的活性。

实施例10：南极出芽短梗霉发酵物抑制炎症因子

抑制LPS诱导的KC细胞炎症反应：将生长于完全KSFM培养基且处于对数生长期的KC细胞，以0.05M个细胞/孔接种于24孔板，置37℃、5％CO₂浓度CO₂培养箱孵育。培养3天后，加入用完全培养基配制的0.006wt％南极出芽短梗霉发酵物Antar-N1和南极菌珍珠发酵物Antar-P1，置培养箱孵育。2h后，实验组加终浓度为1μg/mL的LPS，并设置NT组，置培养箱继续孵育。22h后，收取孔板中培养基，离心收集上清，用ELISA试剂盒检测上清液中IL-8含量。

结果显示，南极出芽短梗霉发酵物具有抑制KC细胞炎症因子的活性，对炎症因子IL-8的抑制率为32％。

抑制LPS诱导的THP-1细胞炎症反应：将生长于含10％FBS的RPMI-1640完全培养基且处于对数生长期的THP-1细胞，以0.5M个细胞/孔，500μL细胞悬液/孔接种于24孔板，置37℃、5％CO₂浓度培养箱孵育。

24h后，加活性物处理细胞，置培养箱继续孵育。2h后，LPS处理组和实验组加终浓度为1μg/mL的LPS，并设置NT组，置培养箱继续孵育。22h后，收取孔板中培养基，离心收集上清，用ELISA试剂盒检测IL-8浓度。

结果显示，南极出芽短梗霉发酵物具有抑制THP-1细胞炎症因子的活性，对炎症因子IL-8的抑制率为19％。

实施例11：精华液

按照本领域常规的精华液制备方法，制得精华液A和精华液B，组分见下表。

表4精华液组成成分表

精华液稳定性测试：对精华液A和B进行耐热、耐寒、交变、光照等稳定性测试。其中，耐热测试条件为：45±1℃，恒温避光，1个月；耐寒测试条件为：-20±1℃，恒温避光，1个月；交变测试条件为：-20℃恒温3.5天转至45℃恒温3.5天，避光；光照测试条件为：光照恒温恒湿试验箱(1.47×10⁶Lux·hr)。

测试结果如下表所示。

表5稳定性测试

	耐热	耐寒	交变	光照
					精华液A	无异常	无异常	无异常	无异常
精华液B	无异常	无异常	无异常	无异常

以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims

1.一种出芽短梗霉，其特征在于，其分类学拉丁文名为Aureobasidium pullulans，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCC No:

M2022609。

2.一种发酵产物，其特征在于，由权利要求1所述的出芽短梗霉培养获得。

3.根据权利要求2所述的发酵产物，其特征在于，所述培养的步骤包括：对出芽短梗霉进行发酵培养；

可选地，所述发酵培养的条件包括：温度为15～30℃，时间为2～10天；

可选地，所述发酵培养采用的培养基选自：PDA液体培养基、YPD培养基和GMMY培养基中的任意一种或多种；

可选地，在进行所述发酵培养前，所述培养的步骤还包括：对出芽短梗霉进行种子培养，将种子培养获得的产物用于所述发酵培养；

可选地，所述种子培养的条件包括：温度为25～28℃，时间为48～60h。

4.一种珍珠发酵物，其特征在于，由权利要求1所述的出芽短梗霉在含珍珠的培养基中发酵培养获得。

5.根据权利要求4所述的珍珠发酵物，其特征在于，所述含有珍珠的培养基包括：含珍珠粉和/或珍珠提取物的培养基；

可选地，在所述含珍珠的培养基中，所述珍珠的质量分数为0.01％～10％；

可选地，所述发酵培养的条件包括：温度为15～30℃，时间为2～10天。

6.一种皮肤外用剂，其特征在于，其包括：权利要求1所述的出芽短梗霉、权利要求2或3所述的发酵产物和权利要求4或5所述的珍珠发酵物中的任意一种或多种。

7.如权利要求1所述的出芽短梗霉或权利要求2或3所述的发酵产物或权利要求4或5所述的珍珠发酵物在制备皮肤外用剂中的应用。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述皮肤外用剂具有保护和/或增强皮肤屏障功能；

可选地，所述保护和/或增强皮肤屏障功能包括：抗衰老、防晒、抗氧化、抗炎、促进皮肤基底层修护、促进皮肤角质层修护中的任意一种或多种功效；

可选地，所述抗衰老的方式包括：促进胶原蛋白生成；

可选地，所述胶原蛋白包括I型胶原蛋白；

可选地，所述抗炎包括：抑制炎症因子；

可选地，所述炎症因子包括IL-8。

9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述皮肤外用剂包括：药物、化妆品和护肤品中的任意一种；

可选地，所述化妆品包括：粉底液和隔离霜中的任意一种；

可选地，所述护肤品包括：洗面奶、精华液、乳液、爽肤水、面霜、防晒霜和面膜中的任意一种。

10.如权利要求1所述的出芽短梗霉或权利要求2或3所述的发酵产物或权利要求4或5所述的珍珠发酵物或权利要求6所述的皮肤外用剂在生产多糖或制备用于生成多糖的产品中的应用。