CN114392210B - 具有抗衰、淡纹及提升皮肤光泽感功效的组合物及其制备 - Google Patents

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Abstract

本发明属于化妆品技术领域，具体涉及一种具有抗衰、淡纹和提升皮肤光泽感功效的化妆品组合物及其制备，所述化妆品组合物至少包含：丝素低聚肽/枯草芽孢杆菌发酵活性物；和扁浒苔提取物。试验证明，通过将本发明化妆品组合物施用于老化皮肤能够显著改善皮肤深度皱纹的深度和数量，同时对提升皮肤光泽感具有明显的效用。

Description

具有抗衰、淡纹及提升皮肤光泽感功效的组合物及其制备
技术领域
本发明属于化妆品技术领域。更具体地，涉及具有抗衰、淡纹及提升皮肤光泽感功效的组合物及其制备。
背景技术
皱纹和色素改变是皮肤老化的最具代表性的特征，为皮肤表面一级线的加深，其科学定义为“当沿垂直于线纹轴的方向，拉伸皮肤后留下一条明显的线(该线为皱纹的底)时，则称之为皱纹”。皱纹的产生主要与皮肤老化有关，包括真皮表皮连接变薄，胶原、氨基葡聚糖及皮下脂肪丢失、外在因素(温度、空气污染、吸烟等)。
皱纹按严重程度分级可分为5个等级，如下表所示[1]：
目前用于皮肤抗衰的功能原料众多，主要分为皮肤更新类(代表原料：Pitera、二裂酵母细胞溶液提取物、水杨酸等)、化学抗氧化类(代表原料：麦角硫因、SOD、维生素E等)、植物抗氧化类(草本类，代表品牌佰草集、资生堂等)、补充胶原蛋白类(代表原料：视黄醇、泛醌、水解胶原蛋白)、抗糖化类(代表原料：肌肽、硫辛酸、阿魏酸、白藜芦醇等)等。从这些抗衰老功能原料出发衍生出了一系列抗衰老产品，如以Pitera专利成分为主要功效成分的SK-Ⅱ神仙水，这款产品能够改善皮肤自然生理机能，调整皮肤更新的速度，改善皮肤状态；以二裂酵母细胞溶液提取物为主导抗衰成分的雅诗兰黛小棕瓶和兰蔻小黑瓶，能够加速皮肤角质层的更新速度，让皮肤从外观上更水嫩。但可惜的是，这些抗衰老产品对于提亮皮肤细腻度、光亮度及减轻轻度的皱纹有较好的效果，但是对于面部的深度皱纹或皱褶改善作用不大。
丝素蛋白是大分子量的纤维球状蛋白，由L链、H链和P25蛋白三部分构成，H链和L链以摩尔比6:1的比例通过二硫键结合，P25通过疏水基团与前两者结合。丝素蛋白因具有保湿、防紫外线、美白、延缓衰老(蚕丝蛋白中含有丰富的氨基酸，能够延缓皮肤衰老和减缓细小细纹的出现[2])等特性，但是丝素蛋白分子量大，不易溶于水，通常是通过水解制备成易被人体吸收的小分子多肽应用于化妆品领域。
有研究发现，扁浒苔提取物具有提高哺乳动物免疫力、降低血脂、消炎抗炎及抗氧化的生理活性，但是未知其在祛除深度皱纹，提高皮肤光泽感方面的功效如何。
参考文献：
[1]张元文.评价Revanesse～Ultra矫正鼻唇沟皱褶有效性和安全性的随机、对照研究[D].中国人民解放军医学院,2012。
[2]包立军，吴琼英，匡聪，等，家蚕丝蛋白的氨基酸组成及营养分析及酶消化产物的体外抗氧化活性[J].蚕业科学，2017,01:124-129.
发明内容
本发明要解决的技术问题是克服现有去皱产品存在的缺陷和不足，提供了一种化妆品组合物及使用该化妆品组合物达到减轻面部细纹、尤其是深度皱纹、提亮皮肤的方法。
本发明上述目的通过以下技术方案实现：一种具化妆品组合物，所述化妆品组合物至少包含：
丝素低聚肽/枯草芽孢杆菌发酵活性物；和
扁浒苔提取物。
已发现丝素低聚肽具有改善皮肤衰老迹象的作用，但仅仅对细小的皱纹有效，其不产生改善皮肤深度皱纹的效果；而令人惊讶的是，通过使用发酵的丝素低聚肽对改善深度皱纹是更为有效的，特别是，本发明中，能够产生令人惊讶的改善皮肤皱纹效果的丝素低聚肽/枯草芽孢杆菌发酵活性物是通过往含有丝素低聚肽的发酵基质中接种枯草芽孢杆菌进行发酵制备获得的。
需要特别提出的是，发酵选择的菌种对发酵活性物的生理活性起到了非常重要的作用，因为通过试验证明，采用酵母菌、保加利亚乳杆菌或短乳酸杆菌发酵并不能同样产生相同的效用，有些甚至产生了负面的影响。
上述“丝素低聚肽”是经丝素蛋白经水解后获得的肽，对于获得的肽的分子量没有特别的限定，作为上述肽的分子量的上限可以是500、600或1000；优选地，获得的丝素低聚肽的分子量上限是1000Da。
上述“水解”并没有特别的限定，可以采用酶、酸或碱进行。特别地，在本发明中，采用酶解的方式进行水解将会获得更为有益的丝素低聚肽。特别地，采用的酶可以是碱性蛋白酶，酶解过程通常在50～80℃中进行，优选在55～70℃中进行，更优选在60℃、65℃进行；酶解时间通常为3～12min，优选3～10min，更优选8min或10min；酶解过程的pH通常维持在7～9之间，优选为7～8.5，更优选为8.0或8.5；酶解过程中，加酶量通常是3～5％，优选为4～5％，优选为4％或5％；底物浓度通常为3～15g/L，优选为3～12g/L，更优选为10g/L或12g/L。
上述发酵可以是固体发酵或者液体发酵，发酵的条件没有特别限定。特别地，在本发明中，采用液体发酵的方式更容易获得预期的活性物，液体发酵的温度通常需要保持在20～45℃，优选为30～40℃，优选为37℃；液体发酵的时间通常需要24～72h，优选为24～50h，优选为36h或48h；液体发酵的pH通常为6.0～8.0，优选为6.5～7.6之间；所述发酵通常采用通气搅拌的方式进行，通常的搅拌通气量为1～3VVM。
特别地，上述发酵过程中，发酵基质是包含了8～30v/v％的丝素低聚肽的，优选含有10～25v/v％，更优选含有15～25v/v％。对于发酵过程中采用的发酵基质没有特别的限定，只要是适用于培养枯草芽孢杆菌的固体培养基或液体培养基都可。
上述发酵获得的活性物通常是发酵培养获得的发酵原液或者是发酵原液经过过滤获得的，通常可以被制成固体或者是液体形式的，以及利用常规技术进行除臭，脱色等处理。特别地，在本发明中，所述发酵活性物是发酵原液经过滤、脱色处理后获得的产物，其被制成是固体形式的。
上述扁浒苔提取物的提取方式是通过非极性溶剂采用常规提取工艺获得的，因为经试验证明，水提的扁浒苔提取物与上述发酵活性物组合并不产生显著改善皮肤深度皱纹外观的作用。通常这些非极性溶剂包括甲醇、乙醇、乙酸乙酯、氯仿中的一种以及它们的组合；优选为乙酸乙酯及乙醇的组合；当采用乙酸乙酯及乙醇构成的溶剂体系进行提取时，两者可以是连续分步提取或者是混合提取，优选为连续分步提取，提取通常是加热提取，温度通常为60～120℃，优选为80～110℃。通常地，需要将获得的乙醇提取物经乙酸乙酯萃取后即获得扁浒苔提取物，更多的试验证明，将这种扁浒苔提取物与上述发酵活性物组合在一起能够产生更为惊人的积极效果，简单地说，能够产生更明显的改善深度皱纹的效应。
本发明化妆品组合物中，丝素低聚肽/枯草芽孢杆菌发酵活性物和扁浒苔提取物最好以5:0.1～3的重量比存在；优选以5:1～3的重量比存在；更优选以5:2的重量比存在。在该重量比范围内，则可以获得更为充分的改善深度皱纹的作用。
本发明另一目的在于提供一种具有抗衰、淡纹和提亮肤色功效的护肤品，所述护肤品包含0.01～99.99％上述的化妆品组合物。特别地，所述化合物用量占护肤品总量约0.01～50％；优选为约0.01～32％，优选为约0.01～25％，更优选为0.1～25％。
对于上述护肤品的形式没有特别地限定，适用于本发明化妆品组合物的形式包括面膜、乳液、化妆水、精华液、肌底液、霜剂等形式。根据需要，所述护肤品还可包含美容上可接受的局部用载体，所述局部用载体包括溶剂、防腐剂、螯合剂、增稠剂、着色剂、香料等。
上述溶剂为水、有机溶剂及它们的组合。
上述增稠剂可以是来源于天然、合成水溶性聚合物和半合成水溶性聚合物中的一种或它们的组合；天然的增稠剂通常可选择动物胶类、蛋白类、植物类；半合成水溶性聚合物通常可选择纤维素类、瓜尔胶及其衍生物、淀粉类等；合成水溶性聚合物通常可选择乙烯类、丙烯酸和甲基丙烯酸衍生物类、聚氧乙烯类，具体可根据具体的制剂形式进行选择，这些增稠剂在护肤品中通常约占0.1～20％的重量。
合适的防腐剂可以列举例如苯氧乙醇、有机酸、季胺类、对羟基苯甲酸酯等，这些防腐剂在护肤品中通常约占0.001～0.5％的重量。
本发明另一发明目的在于提供一种减轻面部皮肤细纹、深度皱纹的方法，所述方法包括将上述护肤品施用于皮肤的步骤。优选地，该护肤品每天施用1-2次，优选每天施用1次；一般而言，足以产生改善皮肤深度皱纹外观的施用时间至少为14天；施用持续28天后将会产生显著的外观变化；这种变化通常表现为皱纹深度的变浅或皱纹数量的减少。
还被证明，本发明化妆品组合物对于提升皮肤光泽感亦具有明显的效用，因此，本发明另一目的在于提供一种提升皮肤光泽感的方法，所述方法包括将上述护肤品施用于皮肤的步骤。优选地，该护肤品每天施用1-2次，优选每天施用1次；一般而言，足以产生改善皮肤光泽度的施用时间至少为7天；施用持续14天后将会产生显著的外观变化。
本发明具有以下有益效果：
试验证明，通过将本发明化妆品组合物施用于老化皮肤能够显著改善皮肤老化的迹象，具体表现为深度皱纹的深度和数量明显减少，皮肤光泽感明显提升。
具体实施方式
通过下面的实施例可以对本发明进行进一步的描述，然而，本发明的范围并不限于下述实施例。本领域的专业人员能够理解，在不背离本发明的精神和范围的前提下，可以对本发明进行各种变化和修饰。
发酵所采用的菌种：酵母菌ATCC 9080；保加利亚乳酸杆菌CGMCC 7133；短乳酸杆菌CGMCC 1.3257；枯草芽孢杆菌CICC 24434。
实施例1原料制造
[1]扁浒苔提取物的制造
制造方法①：将洗净的扁浒苔粉碎，向扁浒苔粉中加入其质量10倍的65％乙醇溶液在90℃下进行加热回流提取2次，每次1h，过滤，合并提取液，减压除去溶剂后获得扁浒苔乙醇提取物；
将获得的乙醇提取物混悬于其3倍体积的去离子水中，加入等体积的乙酸乙酯进行萃取，收集萃取液，除去溶剂后获得扁浒苔提取物(命名为UP1)。
制造方法②：将洗净的扁浒苔粉碎，向扁浒苔粉中加入其质量10倍的65％乙醇溶液在90℃下进行加热回流提取2次，每次1h，过滤，合并提取液，减压除去溶剂后获得扁浒苔乙醇提取物；
将获得的乙醇提取物混悬于其3倍体积的去离子水中，加入等体积的氯仿进行萃取，收集萃取液，除去溶剂后获得扁浒苔提取物(命名为UP2)。
制造方法③：将洗净的扁浒苔粉碎，向扁浒苔粉中加入其质量10倍的65％甲醇溶液在90℃下进行加热回流提取2次，每次1h，过滤，合并提取液，减压除去溶剂后获得扁浒苔甲醇提取物；
将获得的乙醇提取物混悬于其3倍体积的去离子水中，加入等体积的乙酸乙酯进行萃取，收集萃取液，除去溶剂后获得扁浒苔提取物(命名为UP3)。
制造方法④：将洗净的扁浒苔粉碎，向扁浒苔粉中加入其质量10倍的65％甲醇溶液在90℃下进行加热回流提取2次，每次1h，过滤，合并提取液，减压除去溶剂后获得扁浒苔甲醇提取物；
将获得的乙醇提取物混悬于其3倍体积的去离子水中，加入等体积的氯仿进行萃取，收集萃取液，除去溶剂后获得扁浒苔提取物(命名为UP4)。
[2]丝素低聚肽的制备
将丝素蛋白与碱性蛋白酶置于65℃恒温水浴锅中进行反应，反应过程中持续滴加1.2mol/LNaOH溶液维持反应体系pH值为8.5，酶解8min，煮沸；冷却后离心，取上清液，浓缩，采用截留分子量为1000Da以下的透析袋透析3天，即获得丝素低聚肽溶液，浓缩，冷冻干燥，得到丝素低聚肽粉(命名为SO1)；其中，酶解过程中加酶量为4％，底物浓度为10g/L。
[3]发酵活性物的制造
制造方法①:向枯草芽孢杆菌液体培养基中加入20v/v％步骤[2]制备的丝素低聚肽得到发酵基质；调整发酵基质pH为6.5-7.0之间，按接种量为3％接种枯草芽孢杆菌，于37℃下通气搅拌发酵48h，通气量控制为1～3VVM；发酵结束后，压榨过滤，采用活性炭脱色后，过滤得到丝素低聚肽/枯草芽孢杆菌发酵活性物(命名为发酵物a)；其中枯草芽孢杆菌液体培养基组成为：每1L蒸馏水中含：15g/L葡萄糖、10g/L蛋白胨、5g/L氯化钠、0.5g/L牛肉膏及20g/L琼脂。
制造方法②:与制造方法①相比区别在于，采用丝素蛋白替换丝素低聚肽(命名为发酵物b)。
制造方法③：与制造方法①相比区别在于，采用酵母菌替换枯草芽孢杆菌进行发酵，具体过程为：向酵母菌液体培养基中加入20v/v％步骤[2]制备的丝素低聚肽得到发酵基质；调整发酵基质pH为5-5.5之间，按接种量为3％接种酵母菌，于28℃下通气搅拌发酵48h，通气量控制为1～4VVM；发酵结束后，压榨过滤，采用活性炭脱色后，过滤得到发酵活性物(命名为发酵物c)；其中酵母菌培养基组成为：每1L蒸馏水中含：20g/L葡萄糖、8g/L蛋白胨、5g/L氯化钠、7g/L硫酸铵及0.5g/LMgSO4.7H2O。
制造方法④：与制造方法①相比区别在于，采用保加利亚乳杆菌替换枯草芽孢杆菌进行发酵，具体过程为：向保加利亚乳杆菌液体培养基中加入20v/v％步骤[2]制备的丝素低聚肽得到发酵基质；调整发酵基质pH为7-7.5之间，按接种量为3％接种保加利亚乳杆菌，于35℃下通气搅拌发酵48h，通气量控制为1～4VVM；发酵结束后，压榨过滤，采用活性炭脱色后，过滤得到发酵活性物(命名为发酵物d)；其中保加利亚乳杆菌培养基组成为：每1L蒸馏水中含：18g/L葡萄糖、5g/L牛肉膏、5g/L酪蛋白胨、0.1g/L硫酸镁、0.02g/L硫酸锰、0.05g/L硫代硫酸钠、0.5g/L L-半胱胺酸盐酸盐及0.5g/LMgSO4.7H2O。
制造方法⑤：与制造方法①相比区别在于，采用短乳酸杆菌替换枯草芽孢杆菌进行发酵，具体过程为：向短乳酸杆菌液体培养基中加入20v/v％步骤[2]制备的丝素低聚肽得到发酵基质；调整发酵基质pH为6.5之间，按接种量为3％接种短乳酸杆菌，于37℃下通气搅拌发酵48h，通气量控制为1VVM；发酵结束后，压榨过滤，采用活性炭脱色后，过滤得到发酵活性物(命名为发酵物e)；其中短乳酸杆菌培养基组成为：每1L蒸馏水中含：20g/L葡萄糖、10g/L胰蛋白胨。
实施例2～4精华液配方(质量分数)
制备工艺：
向水相锅中依次加入水、黄原胶和卡波姆，搅拌均匀，然后加入聚乙二醇-8、甘油、1，3-丙二醇、三乙醇胺、EDTA-四钠和EDTA-二钠，加热至80℃，搅拌均匀，保温5min，得水相，备用；往油相锅中加入配方量的双-PEG-18甲基醚二甲基硅烷、油醇聚醚-3、霍霍巴蜡PEG-120酯类、鲸蜡醇聚醚-24和CI 14700，加热至80℃，搅拌均匀，保温3min，得油相；将水相和油相过滤后抽入乳化锅中，均质，降温至45℃，加入UP1、发酵物a、山梨酸钾和苯氧乙醇，搅拌均匀，即得。
在实施例2精华液配方的基础上(除UP和发酵物不同外，其余成分及含量相同)，按下表改变功效成分得到实施例5-13精华液。
组别 UP 发酵物
实施例5 14％UP1 -
实施例6 - 14％发酵物a
实施例7 4％UP1 10％发酵物b
实施例8 4％UP1 10％发酵物c
实施例9 4％UP1 10％发酵物d
实施例10 4％UP1 10％发酵物e
实施例11 4％UP2 10％发酵物a
实施例12 4％UP3 10％发酵物a
实施例13 4％UP4 10％发酵物a
效用评价
1.1筛选标准
选取120名自愿者，平均年龄50±1～2岁，无其他严重疾病；面部无皮肤损伤等；各自愿者面部左右眼角具有同等程度的皱纹，皮肤粗糙，缺乏弹性和光泽；试验期间未参与其他临床试验；受试者能按照试验要求并签署知情同意书。
1.2试验方法
将上述120名自愿者随机分为10组，每组12名，各组志愿者每天于洁面后施用精华液1次，连续使用28天，测试施用各组精华液后自愿者皮肤外观的变化，测试环境：在温度为22～25℃，相对湿度为35～45％的室内进行测定，各组受试者进入测试室休息30分钟后开始测试。
1.3指标测定
1.3.1皮肤TEWL和含水量变化测定
透皮失水率采用丹麦COrtex Technoiogy Aps公司的DERMALAB对施用不同时间段的皮肤TEWL值进行测定，统计皮肤TEWL变化率；皮肤含水量采用Courage+Khazaka Electronic GmbH公司的Corneometer CM 825测定施用不同时间段的皮肤含水量，分别重复3次，统计皮肤含水量增长率，结果分别如下表1所示。
式中，TEWL0为施用前皮肤TEWL值；TEWLt为施用后t时段皮肤TEWL值。
式中，MMV0为施用前皮肤MMV；MMVt为施用后t时段皮肤MMV。
表1:
结果显示，同时使用扁浒苔提取物和丝素低聚肽/枯草芽孢杆菌发酵活性物的实施例2与单独使用丝素低聚肽/枯草芽孢杆菌发酵活性物的实施例5或单独使用扁浒苔提取物的实施例6相比，具有更明显的修复肌肤屏障和保湿的作用；同时，根据实施例8-10的结果也清楚表示，采用不同菌种进行发酵对组合物的性能也存在一定的影响，其中，按效果排序，酵母菌发酵效果最好，枯草芽孢杆菌次之，最差的是短乳酸杆菌。根据实施例11-13结果可清楚表示，采取的提取溶剂不同获得的扁浒苔提取物与丝素低聚肽/枯草芽孢杆菌发酵活性物组合后产生了不同的效用。
1.3.2皮肤光泽度变化：采用美能达分析测试仪CN2600D测试自愿者使用前后面部的皮肤的L*值和b*值，结果如下表2所示。
表2
注：与施用前相比，*P＜0.05，**P＜0.01。
结果显示，同时使用扁浒苔提取物和丝素低聚肽/枯草芽孢杆菌发酵活性物的实施例2与施用前相比，皮肤L*值和b*值存在极显著差异(P＜0.01)；采用丝素蛋白替换丝素低聚肽的实施例7和采用酵母菌替换枯草芽孢杆菌的实施例8与施用前相比，皮肤L*值和b*值存在显著差异(P＜0.05)；使用乙醇与氯仿分级提取获得的扁浒苔提取物与发酵物a联用也能产生显著的提高肌肤亮度的效用；但是其余样品施用后皮肤L*值和b*值无显著差异。
1.3.3皮肤皱纹变化：
①目视评价法：由3位专家通过目视观察施用前后各组自愿者眼角处的皱纹，对皱纹状态所属等级按照参考文献1中皱纹等级进行评价，结果如表3所示。
②三维数据分析：采用皮肤光学三维测量系统(PRIMOS，GFMesstechnik公司)对各组自愿者施用前后两侧眼角外观情况进行测量并分析，获得皱纹平均深度、皱纹数量指标结果，如下表4所示。
表3
与施用前相比，*P＜0.05，**P＜0.01，与实施例2相比，#P＜0.05。
表4
与施用前相比，*P＜0.05，**P＜0.01。
分析表3和表4结果可知，同时使用扁浒苔提取物和丝素低聚肽/枯草芽孢杆菌发酵活性物的实施例2与施用前相比，皱纹等级、皱纹深度及数量均有极显著的变化(P＜0.01)；而单独使用丝素低聚肽/枯草芽孢杆菌发酵活性物的实施例5或单独使用扁浒苔提取物的实施例6与实施例2相比存在极显著的差异(P＜0.01)，显示扁浒苔提取物和丝素低聚肽/枯草芽孢杆菌发酵活性物在协同改善深度皱纹方面存在一定的协同增效作用。
上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。

Claims (7)

1.一种具有抗衰、淡纹和提升皮肤光泽感功效的化妆品组合物，其特征在于，所述化妆品组合物至少包含：
丝素低聚肽/枯草芽孢杆菌发酵活性物；和
扁浒苔提取物；
所述丝素低聚肽/枯草芽孢杆菌发酵活性物是通过往含有8~30v/v%丝素低聚肽的发酵基质中接种枯草芽孢杆菌进行液体发酵制备获得的；
所述扁浒苔提取物由乙酸乙酯及乙醇构成的溶剂体系进行提取获得；
所述化妆品组合物中，丝素低聚肽/枯草芽孢杆菌发酵活性物和扁浒苔提取物以5:0.1~3的重量比存在。
2.根据权利要求1所述化妆品组合物，其特征在于，所述丝素低聚肽是丝素蛋白经酶解后获得的肽。
3.根据权利要求2所述化妆品组合物，其特征在于，所述酶解过程中采用的酶为碱性蛋白酶。
4.根据权利要求1所述化妆品组合物，其特征在于，所述化妆品组合物中，丝素低聚肽/枯草芽孢杆菌发酵活性物和扁浒苔提取物以5:1~3的重量比存在。
5.根据权利要求4所述化妆品组合物，其特征在于，所述化妆品组合物中，丝素低聚肽/枯草芽孢杆菌发酵活性物和扁浒苔提取物以5:2的重量比存在。
6.一种具有抗衰、淡纹和提亮肤色功效的护肤品，其特征在于，所述护肤品包含0.01~99.99%根据权利要求1~5任一项所述的化妆品组合物。
7.根据权利要求6所述护肤品，其特征在于，所述护肤品还可包含美容上可接受的局部用载体。
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