KR19980038284A - 상황 균사체의 추출물을 함유하는 피부 노화방지 효과를 갖는 화장료 조성물 - Google Patents

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Abstract

본 발명은 피부 노화방지 효과를 갖는 화장료 조성물에 관한 것으로, 피부세포의 증식 및 콜라겐의 생성효과가 있는 상황(진흙버섯속;Phellinus sp.)의 균사체 또는 그의 배양액으로부터 얻은 추출물을 화장료 조성물 총량에 대하여 0.00001∼10중량%의 양으로 함유함을 특징으로 한다.

Description

상황 균사체의 추출물을 함유하는 피부 노화방지 효과를 갖는 화장료 조성물
본 발명은 피부 노화방지 효과를 갖는 화장료 조성물에 관한 것이고, 좀 더 상세하게는 상황 버섯의 균사체 또는 그의 배양액으로부터 얻은 추출물을 이용하여 피부 세포의 증식 및 콜라겐 생성효과가 탁월한 피부 노화방지 효과를 갖는 화장료 조성물을 제공하는 것이다.
피부는 체내의 제기관을 기온 및 습도 변화와 자외선등 외부환경의 자극으로 부터 보호해 주는 기능을 가지고 있다. 그러나 외부로부터 받는 끊임없는 물리적, 화학적 자극은 피부기능을 저하시키고 피부의 노화현상을 촉진시키게 되는데 이러한 현상을 방지하고 보다 건강하고 아름다운 피부를 유지하기 위하여 종래 각종 동물, 식물, 미생물 등으로부터 얻은 생리 활성물질들이 강화된 화장품을 사용하므로써 피부의 고유기능을 유지시키고 피부세포를 활성화시켜 피부노화를 효과적으로 억제하기 위한 노력이 있어 왔었다. 그러나 기존의 화장품 원료들은 그 효능이 미흡하거나 피부 부작용을 유발하는 등 여러 가지 문제점을 가지고 있다.
이에 본 발명자들은 피부노화의 주된 지표가 되는 피부세포, 거식세포, 랑게르한스(Langerhans)세포 등의 재생감소와 콜라겐 및 엘라스틴 합성의 저하 등과 같은 기능들을 억제시킬 수 있는 물질들에 관해 연구하던 중 상황(Phellinus sp.)의 균사체 추출물이 피부노화 방지에 탁월한 효과가 있음을 알고 본 발명을 완성하게 되었다.
따라서, 본 발명의 목적은 피부 노화방지 효과를 갖는 화장료 조성물을 제공하는 것이다.
상기한 목적을 이루기 위해서, 본 발명에 따른 피부 노화방지 효과를 갖는 화장료 조성물은 상황 균사체 또는 그의 배양액으로부터 얻은 추출물을 함유함을 특징으로 한다.
본 발명에서 상황 균사체 또는 그의 배양액으로부터 얻은 추출물은 균사체에 증류수를 가하여 약 100℃에서 3시간 동안 열수추출한 열수추출물 또는 균사체를 제거한 배양액을 분자량 10,000의 초여과막을 사용하여 여과시켜 분자량 10,000이하의 저분자 물질을 제거한 후, 알코올을 가하여 침전시켜서 얻은 침전물을 원심분리하여 얻은 것을 말한다.
상기한 본 발명의 목적, 그외의 목적, 특징 및 장점은 하기 발명의 상세한 설명란에 의해 당업자에게 명백하게 드러날 것이다.
이하, 본 발명을 보다 상세하게 설명할 것이다.
말똥진흙버섯(펠리누스 이그니아리우스; Phellinus igniarius)과 목질진흙버섯(펠리누스 린테우스; Phellinus linteus)은 소비늘과(Hymenochataceae), 진흙버섯속(Phellinus sp.)에 속하는 버섯으로, 한방에서는 상황(桑黃)이라는 약재로 알려져 있다. 본 발명에서는 주로 상황이라는 명칭을 사용한다. 한방에서 알려진 상황의 약리작용으로는 땀의 분비억제, 항암작용 등이 있다. 또한, 상황은 생식기 출혈, 대하증, 탈항, 부인허약, 임파선염, 장출혈, 설사, 이질에 사용된다고 보고되어있다.
본 발명에서 상기한 약리적 효과를 갖는 상황(Phellinus igniarius, Phellinus linteus)의 균사체는 상황의 버섯 자실체에서 얻은 포자를 발아시켜서 얻은 균사체를 고형배지 배양이나 액체배지 배양에 의해 얻을 수 있다. 그러나, 고형배지에 의한 균사체 배양은 배양기간이 길고, 균사체의 배양이 균일하게 이루어지지 않으며, 균사체 추출시 배지성분이 혼합될 우려가 있으므로, 바람직하게는 액체배지에 의한 균사체 배양법을 택하는 것이 바람직하다.
본 발명의 상황 균사체의 액체 배양방법을 설명하면 다음과 같다.
즉, 포자를 멸균된 증류수로 수회 세척한 후, 맥아즙 한천배지(맥아즙 20g, 펩톤 5g, 한천 15 g, 증류수 1ℓ)에 도말하여 24℃에서 7일간 배양하여 균사체를 얻는다. 균사체는 맥아즙 한천배지가 든 시험관에 사면배양하여 4℃에 보관하고 1개월마다 계대배양하여 사용한다.
사면배지에서 자란 균사체를 무균적으로 균질화하여 이를 액체배지에 3∼5%(v/v) 접종한다.
액체배지로는 포도당 3∼6%, 바람직하게는 4%, 전분 3∼6%, 바람직하게는 4%, 효모엑기스 1.0∼1.5%, 바람직하게는 1.2%, 맥아즙 0.5∼2%, 바람직하게는 1%를 함유한 영양배지가 균사체 성장의 측면에서 바람직하다.
균사체의 액체배양은 발효조에서 온도 20∼28℃, 바람직하게는 24℃, 회전수 100∼200rpm, 바람직하게는 150rpm, 통기량 0.5∼1.5vvm, 바람직하게는 1vvm의 조건으로 5∼10일간 배양한다.
균사체를 제거한 배양액을 분자량 10,000의 초여과막을 사용하여 여과시켜서 분자량 10,000이하의 저분자 물질을 제거하고, 3배량의 알코올, 바람직하게는 에틸알코올을 가하여 4℃서 하룻밤 방치한다. 생성된 침전물은 10,000rpm에서 30분간 원심분리하여 수거하고, 동결건조하여 시료 PI-1과 PL-1을 얻는다(PI-1:P.igniarius를 배양하여 얻은 시료, PL-1:P.linteus를 배양하여 얻은 시료).
배양액을 여과하여 얻은 균사체는 수세한 후, 3배량의 증류수를 가하여 100℃에서 3시간동안 열수추출한 후, 여과하는 과정을 2회 반복한다. 잔사를 제거한 여과액은 분자량 10,000의 초여과막을 사용하여 여과시켜서 저분자 물질을 제거한 후, 3배량의 알코올, 바람직하게는 에틸알코올을 가해 4℃에서 하룻밤 방치한다. 생성된 침전물은 10,000rpm에서 30분간 원심분리하여 수거하고, 동결건조하여 시료 PI-2와 PL-2를 얻는다(PI-2:P.igniarius를 배양하여 얻은 시료, PL-2:P.linteus를 배양하여 얻은 시료). 이와 같이 수득한 상황의 균사체 또는 그의 배양액의 추출물인 PI-1, PL-1, PI-2 및 PL-2는 분자량이 10,000이상으로 피부세포 증식 효과 및 콜라겐 생성 촉진효과를 뛰어난 단백다당체이다.
상기 방법으로 얻은 상황의 균사체 또는 그의 배양액으로부터 얻은 추출물은 본 발명의 피부 노화방지 효과를 갖는 화장료 조성물에 조성물 총 중량에 대하여 0.00001∼10중량%의 양으로 함유될 수 있다.
피부 노화방지 효과를 갖는 화장료 조성물의 제형은 특별히 한정되지는 않지만, 유연화장수, 영양화장수, 마사지 크림, 영양크림, 팩 등으로 제형화될 수 있다.
이하, 실시예를 들어 본 발명을 보다 상세하게 설명하지만, 본 발명이 이들 실시예로만 한정되는 것은 아니다.
[실시예 1]
상황버섯 균사체를 맥아즙 한천배지(맥아즙 20g, 펩톤 5g, 한천 15 g, 증류수 1ℓ)가 든 시험관에 사면배양하여 4℃에 보관하고 1개월마다 계대배양하여 사용하였다.
사면배지에서 자란 균사체를 무균적으로 균질화하여 이를 포도당 4%, 전분 4%, 효모엑기스 1.2%, 맥아즙 1%를 함유한 영양배지가 든 발효조에서 온도 24℃, 회전수 150rpm, 통기량 1vvm의 조건으로 7일간 배양하였다.
배양완료후, 균사체를 제거한 배양액을 분자량 10,000의 초여과막을 사용하여 여과시켜서 분자량 10,000이하의 저분자 물질을 제거하고, 3배량의 에틸알코올을 가하여 4℃에서 하룻밤 방치하였다. 생성된 침전물은 10,000 rpm에서 30분간 원심분리하여 수거하고, 동결건조하여 시료 PI-1과 PL-1을 얻었다(PI-1:P.igniarius를 배양하여 얻은 시료, PL-1:P.linteus를 배양하여 얻은 시료).
[실시예2]
실시예 1에서 배양액을 여과하여 얻은 균사체를 수세하여 3배량의 증류수를 가하여 100℃에서 3시간동안 열수추출한 후, 여과하는 과정을 2회 반복하였다. 잔사를 제거한 여과액은 분자량 10,000의 초여과막을 사용하여 여과시켜서 저분자 물질을 제거한 후, 3배량의 에틸알코올을 가해 4℃에서 하룻밤 방치하였다. 생성된 침전물은 시료 PI-1과 PL-1을 수득한 방법과 동일하게 처리하여 시료 PI-2와 PL-2를 얻었다(PI-2:P.igniarius를 배양하여 얻은 시료, PL-2:P.linteus를 배양하여 얻은 시료).
[시험예 1] 섬유아세포(Fibroblast)의 증식효능 측정
2.5%의 우태아 혈청이 함유된 DMEM (Dulbecco's modified Eagle's Media)배지에서 배양한 인간의 섬유아세포를 96-공평판배양기(96-well microtiter plate)에 5,000세포/well가 되도록 분주하고 실시예 1과 2에서 제조한 PI-1, PL-1 PI-2 및 PL-2를 배양배지로 1/10씩 순차적으로 희석하여 첨가한 후 37℃에서 4일간 배양하였다. 배양후 0.2% MTT ( 3-[4,5-dimethylthiazol-2-yl]-2,5- diphenyltetrazolium bromide)용액을 각 well당 50㎕씩 첨가하여 다시 37℃에서 4시간 배양한 후 생성된 포르마잔(formazan)을 DMSO을 사용하여 녹였다. 녹은 포르마잔은 마이크로플레이트 리더(microplate reader)를 이용하여 570nm에서 흡광도를 측정하였다. 대조군은 실시예 1과 2에서 제조한 PI-1, PL-1 PI-2 및 PL-2를 첨가하지 않는다는 것을 제외하고 상기에서와 동일한 방법으로 실시하여 흡광도를 측정한다. 상황의 추출물을 함유한 실험군과 대조군의 흡광도를 비교하여, 비교%를 표 1에 나타내었다.
[표1]
상황 균사체의 섬유아세포에 대한 증식효능 (단위:%)
시료명시료농도(%) P.igniarius P.linteus
PI-1 PI-2 PL-1 PL-2
1 × 10-7 7 5 8 5
6 × 10-7 7 10 9 5
4 × 10-6 10 30 7 8
2 × 10-5 12 25 5 15
1 × 10-4 30 27 20 20
8 × 10-4 30 10 23 25
5 × 10-3 52 5 30 13
3 × 10-2 75 5 45 10
2 × 10-1 80 9 40 7
표 1에서 알 수 있는 바와 같이,펠리누스 이그니아리우스로부터 추출한 PI-1은 최고 약 80%정도, PI-2는 약 30% 정도 대조군에 비해 세포증식을 증가시켰으며,펠리누스 린테우스로부터 추출한 PL-1과 PL-2는 각각 대조군에 비해 45%, 25% 세포증식효과가 있음을 알 수 있다.
[시험예 2] 각질형성세포(Keratinocyte)의 증식효능 측정
시험예 1과 동일한 방법으로 각질 형성세포의 증식 효능을 측정하여, 그 결과를 표 2에 나타내었다.
[표2]
상황 균사체의 각질형성세포에 대한 증식효능(단위:%)
시료명시료농도(%) P.igniarius P.linteus
PI-1 PI-2 PL-1 PL-2
1 ×10-7 7 5 8 5
6 ×10-7 7 10 9 5
4 ×10-6 10 10 7 8
2 ×10-5 12 15 5 11
1 ×10-4 15 12 10 20
8 ×10-4 15 14 13 10
5 ×10-3 23 5 15 13
3 ×10-2 20 5 25 10
2 ×10-1 10 9 10 7
표 2에서 알 수 있는 바와 같이, PI-1은 최고 약 23%정도, PI-2는 약 15% 정도 대조군에 비해 세포증식을 증가시켰다. 또한, PL-1과 PL-2는 각각 대조군에 비해 최고 25%, 20% 세포증식효과가 있음을 알 수 있다.
[시험예 3] 섬유아세포의 콜라겐 합성정도의 측정
24공 평판배양기 (24-well microtiter plate)에 인체 섬유아세포를 배양한 후 실시예 1과 2에서 제조한 PI-1, PI-2,PL-1 및 PL-2를 배양배지로 1/10씩 순차적으로 희석하여 첨가하였다. 배양 3일째 10% 우태아혈청이 함유된 DMEM 배지를 각 well당 0.5 ml씩 넣어준 후 L[2,3,4,5-3H]-프롤린 10μCi를 첨가하였다. 24시간 후 각 well에 들어있는 배지와 세포들을 긁어모아 5% TCA (Trichloroacetic acid)용액에 넣어 수세한 후 2개의 시험관에 분주하고 1개의 시험관에는 타입 I 콜라겐네이즈(Type I collagenase)1unit/1㎕를 넣고 37℃에서 90분간 배양하였으며, 다른 시험관은 4℃에 보관하였다. 그후 모든 시험관에 50% TCA를 0.05㎖씩 첨가하고 4℃에서 20분간 방치한 후 각각 12,000 rpm 에서 10분간 원심분리하여 각각의 상등액과 침전물을 LSC (Liquid Scintillation Counter)로 dpm (decay per minute)값을 얻어 아래의 공식에 따라서 대조군(실시예 1과 2에서 제조한 PI-1, PI-2,PL-1 및 PL-2을 첨가하지 않은 것)과 실험군 콜라겐 생합성 값(RCB;Relative Collagen Biosynthesis)을 구하고, 그 결과를 표 3에 나타내었다.
[표3]
상황 균사체의 콜라겐 생성촉진효과 (단위:%)
시료명시료농도(%) P.igniarius P.linteus
PI-1 PI-2 PL-1 PL-2
10-6 5 5 0 5
10-5 8 15 4 6
10-4 10 10 4 12
10-3 10 5 7 10
10-2 20 5 15 9
0.1 10 9 17 4
표 3에서 알 수 있는 바와 같이, PI-1은 최고 약 23%정도, PI-2는 약 15% 정도 대조군에 비해 세포증식을 증가시켰다. PL-1과 PL-2는 각각 대조군에 비해 최고 25%, 20% 세포증식효과가 있음을 알 수 있다.
이상의 시험예에서 보는 바와 같이, 본 발명의 화장료 조성물에 함유되는 상황 균사체의 추출물은 피부세포 증식 및 콜라겐 생성을 촉진하는 피부노화 방지 물질임을 알 수 있다.
[시험예 4]
하기 조성의 영양크림에 대하여 35∼ 45세의 안면주름이 있는 10명의 피검자를 대상으로 피부주름 개선효과를 비교 평가하였다(상황균사체 배양물은 실시예 1에서 얻은 PI-1과 PL-1 또는 실시예 2에서 얻은 PI-2와 PL-2를 말한다).
(단위 : 중량%)
원료명 (가) (나)
상황균사체배양물밀납폴리솔베이트 60피오이 60 경화피마자유솔비탄세스퀴올레이트유동파라핀스쿠알란카프릴릭/카프릭트리글리세라이드글리세린부틸렌글리콜프로필렌글리콜트리에탄올아민방부제, 색소, 향료정제수 0.110.01.52.00.510.05.05.05.03.03.00.2적량잔액 ­10.01.52.00.510.05.05.05.03.03.00.2적량잔액
[시험방법]
피검자의 안면 왼쪽부에는 (가)크림을, 오른쪽부에는 (나)크림을 3개월간 사용하도록 하였다. 크림 사용이전의 안면 양쪽부의 피부상태를 측정해 놓은 후, 크림사용 3개월 후 동일부위를 재측정하여 피부주름의 변화를 측정하였다. 피부측정은 24℃, 상대습도 40%의 항온항습실에서 하였으며, 눈꼬리 부위의 주름을 레플리커(replica)로 떠서 비시오메타 시스템 (Visiometer system ; C+K사)으로 피부주름을 측정하였다. 피부주름의 변화량은 다음 식에 따라 계산하였다.
Tdo: D0에서의 측정부위의 값
Tdi: D90에서의 측정부위의 값
상기 식에 따라 계산한 결과, 상황균사체 배양물을 포함하지 않은 (나)크림의 경우 피부주름이 3.2±2.3%(평균±표준편차)의 감소치를 나타낸 반면, 상황균사체 배양물을 포함한 (가)크림은 12±4.2%의 유익한 감소효과(p0.05)를 나타내었다. 따라서, 본 발명의 상황균사체 배양물을 함유하는 화장료 조성물은 피부 노화방지에 효과가 있음을 알 수 있다.
본 발명의 상황균사체 배양액을 함유하는 피부화장료 조성물의 구체적인 제형예를 들면 다음과 같다. 한편, 여기서 상황균사체 배양물은 실시예 1에서 얻은 PI-1과 PL-1 또는 실시예 2에서 얻은 PI-2와 PL-2를 말하는 것이다.
제형예 1. 유연화장수(스킨로션)
원료명 중량%
상황균사체배양물글리세린부틸렌글리콜프로필렌글리콜카르복시비닐폴리머 노닐페닐에테르 폴리솔베이트 80에탄올 트리에탄올아민방부제, 색소, 향료정제수 0.13.02.02.00.10.20.410.00.1적량잔액
제형예 2. 영양화장수(밀크로션)
원료명 중량%
상황균사체배양물스쿠알란밀납폴리솔베이트 60솔비탄세스퀴올레이트유동파라핀카프릴릭/카프릭트리글리세라이드글리세닌부틸렌글리콜프로필렌 글리콜카르복시비닐폴리머 트리에탄올아민방부제, 색소, 향료정제수 0.15.04.01.51.50.55.03.03.03.00.10.2적량잔액
제형예 3. 마사지 크림
원료명 중량%
상황균사체배양물밀납폴리솔베이트 60피오이 60 경화피마자유솔비탄세스퀴올레이트유동파라핀스쿠알란카프릴릭/카프릭트리글리세라이드글리세린부틸렌글리콜프로필렌글리콜트리에탄올아민방부제, 색소, 향료정제수 0.110.01.52.00.840.05.04.05.03.03.00.2적량잔액
제형예 4. 팩
원료명 중량%
상황균사체배양물폴리비닐알코올소듐카르복시메틸셀룰로오스글리세린알란토인에탄올노닐페닐에테르폴리솔베이트 60방부제, 색소, 향료정제수 0.113.00.25.00.16.00.30.3적량잔액
이상에서 설명한 바와 같이, 피부세포의 증식 및 콜라겐의 생성효과가 있는 상황(진흙버섯속;Phellinus sp.)균사체 또는 그의 배양액으로부터 얻은 추출물을 화장료 조성물에 함유시킴으로써, 피부 노화방지에 효과적인 화장료 조성물을 제공할 수 있다.

Claims (4)

  1. 상황(진흙버섯 속;Phellinus sp.)균사체 또는 그의 배양액으로부터 얻은 추출물을 함유함을 특징으로 하는 피부 노화방지 효과를 갖는 화장료 조성물.
  2. 제 1항에 있어서, 균사체 또는 그의 배양액으로부터 얻은 추출물은 조성물 총 중량에 대하여 0.00001 - 10 중량%의 양으로 함유함을 특징으로 하는 피부 노화방지 효과를 갖는 화장료 조성물.
  3. 제 1항에 있어서, 균사체 또는 그의 배양액으로부터 얻은 추출물은 균사체에 증류수를 가하여 약 100℃에서 3시간 동안 열수추출한 열수추출물 또는 균사체를 제거한 배양액을 분자량 10,000의 초여과막을 사용하여 여과시켜 분자량 10,000이하의 저분자 물질을 제거한 후, 알코올을 가하여 침전시켜서 얻은 침전물을 원심분리하여 얻은 것임을 특징으로 하는 피부 노화방지 효과를 갖는 화장료 조성물.
  4. 제 1항에 있어서, 화장료 조성물은 유연화장수, 영양화장수, 영양크림, 마사지크림 또는 팩의 제형을 가짐을 특징으로 하는 피부 노화방지 효과를 갖는 화장료 조성물.
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