CN117562941A - 一种中药乳酸菌双向发酵工艺 - Google Patents
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Abstract
本发明属于微生物发酵技术领域，具体涉及一种中药乳酸菌双向发酵工艺。通过对关木通、石韦、萹蓄三种中药组分优化处理，然后与乳酸菌进行发酵处理，最终获得的制剂有效物质含量高，在抗菌方面具有显著的协同作用，还能进一步降低关木通中马兜铃酸A以及马兜铃酸总量的含量，可进一步扩大化大生产。
Description
技术领域
本发明属于微生物技术发酵领域，具体涉及一种中药乳酸菌双向发酵工艺。
背景技术
中药双向发酵通常指的是利用两种或多种微生物（如细菌、真菌等）相互作用的发酵过程。在中药领域，这种双向发酵常常用于提高药材的药效成分含量、改善药材的理化性质，或者开发新的中药制剂。
一般而言，双向发酵包括以下两种方式：1）传统发酵：利用传统的发酵方法，通过控制微生物的培养条件，使得微生物在中药材中发挥作用。2）工程发酵：利用现代生物工程技术，对特定微生物进行基因改良或者筛选，使其能够更好地在中药材中发挥作用。
关木通（学名：Aristolochia manshuriensis）是一种传统中药材，过去在中药药典中被广泛使用。然而，由于其含有的马兜铃酸对人体有毒性，包括中国在内很多国家和地区已经将关木通从人用药典中移除或限制使用，但在兽药中一直使用。
石韦（学名：Saxifraga stolonifera），又称紫花石斛，是一种常见的草本植物，属于虎耳草科。它原产于日本和中国东北地区，现已广泛分布在中国、朝鲜半岛、俄罗斯等地。石韦具有清热解毒、消肿止痛、润肺止咳等功效，主要用于治疗肺热、肺炎、肺结核、咳嗽、痰多等症状。此外，石韦还可以用作食材，具有营养价值。
萹蓄（学名：Polygonumavicularel）茎呈圆柱形而略扁，有分枝，长15～40cm，直径0.2～0.3cm。表面灰绿色或棕红色，有细密微突起的纵纹；节部稍膨大，有浅棕色膜质的托叶鞘，节间长约3cm；质硬，易折断，断面髓部白色。叶互生，近无柄或具短柄，叶片多脱落或皱缩、破碎，完整者展平后呈披针形，全缘，两面均呈棕绿色或灰绿色，气微，味微苦。
乳酸菌是一类革兰氏阳性菌，能够在无氧条件下将糖类发酵产生乳酸。它们广泛存在于自然界中的动植物体内，如人体肠道、口腔、乳制品和发酵食品中。
乳酸菌对人体有益处，它们可以维护消化系统健康、增强免疫力、促进营养吸收等。常见的乳酸菌包括嗜酸乳杆菌、双歧杆菌、乳酸杆菌等。对于乳酸菌的选择和使用，需要根据用途以及制备工艺、组合等选择，以达到最好的效果。
目前对于乳酸菌联合关木通、石韦、萹蓄中药材进行双向发酵的技术，还未有相关技术的公开。
发明内容
为了克服现有技术的缺陷，本发明提供了一种中药乳酸菌双向发酵工艺。通过对关木通、石韦、萹蓄三种的成分的处理，然后与乳酸菌进行发酵处理，最终其有效物质含量显著高于现有技术，在抗菌方面具有显著的治疗效果，适合进一步扩大化大生产。
具体而言，本发明的技术方案是这样实现的：
一种中药乳酸菌发酵工艺，所述发酵工艺由如下方法得到：
1）挥发油提取：将关木通粉碎并过100目筛，再与石韦和萹蓄混合置于有机溶剂中超声，温度为40-60℃，时间0.5-1.5h，过滤，收集滤液，旋转蒸发，得挥发油备用；
2）原料液制备：向挥发油中加入15-30倍量的MRS液体培养基，然后加入MgCl2，混匀，灭菌得原料液；
3）乳酸菌活化：将乳酸菌接种到MRS固体培养基活化培养后，接种于MRS液体培养基中，制成菌落数均为108CFU/ml的菌悬液；
4）混合发酵：将菌悬液按3-7wt%接种量接入步骤2）灭菌后的原料液，置于37℃、180r/min摇床进行发酵培养，发酵时间为5-15天；
5）上清液制备：发酵完成后，将发酵液离心，活性炭过滤取得上清液；
6）制剂制备：将上清液浓缩至相对密度1.05-1.10，再与β-环糊精、淀粉混合进行流化床喷雾制粒，分装即得颗粒剂；
进一步的，所述的乳酸菌为嗜酸乳杆菌、副干酪乳杆菌、两歧双歧杆菌，其重量比为1-6：0.5-3：0.5-4。
更进一步的，所述嗜酸乳杆菌、副干酪乳杆菌、两歧双歧杆菌的重量用量比为4：2：1。
进一步的，所述的关木通：石韦：萹蓄的重量用量比为2-10：0.5-4：0.2-1。
更进一步的，所述的关木通：石韦：萹蓄的重量用量比为5：2：0.5。
在本发明的一些实施例中，所述的乳酸菌为嗜酸乳杆菌La28、副干酪乳杆菌YMC1069、两歧双歧杆菌TMC3115。
在本发明的一些实施例中，所述的有机溶剂选自三乙醇胺、乙醇、丙二醇、叔丁醇中的一种。
在本发明的优选的实施例中，所述的有机溶剂选自叔丁醇。
在本发明的优选的实施例中，所述工艺由如下方法制备得到：
1）挥发油提取：将关木通粉碎过100目筛，再与石韦和萹蓄混合置于叔丁醇中超声，温度为50℃，时间1h，过滤，收集滤液，旋转蒸发，得挥发油备用；
2）原料液制备：向挥发油中加入23倍量的MRS液体培养基，然后加入MgCl2，混匀，灭菌得原料液；
3）乳酸菌活化：将乳酸菌接种到MRS固体培养基活化培养后，接种于MRS液体培养基中，制成菌落数均为108CFU/ml的菌悬液；
4）混合发酵：将乳酸菌（嗜酸乳杆菌La28、副干酪乳杆菌YMC1069、两歧双歧杆菌TMC3115，其重量用量比为4：2：1）液按5wt%接种量接入步骤2）灭菌后的原料液，置于37℃、180r/min摇床进行发酵培养，发酵时间为10天；
5）上清液制备：发酵完成后，将发酵液离心，活性炭过滤取得上清液；
6）制剂制备：将上清液浓缩至相对密度1.08，再与β-环糊精、淀粉混合进行流化床喷雾制粒，分装即得颗粒剂；
在本发明的优选的实施例中，以w/v计算，所述的MgCl2为0.02-0.05份。
在本发明的优选的实施例中，以w/v计算，所述的MgCl2为0.03份。
本发明中乳酸菌为常规市售产品。
与现有技术相比，本发明的有益效果在于：
本发明通过对关木通、石韦、萹蓄三种的中药材发酵处理，提高了有效物质的含量，降低了关木通中马兜铃酸A以及马兜铃酸总量的含量，使得用药更为安全，可以在兽药，甚至人用药中使用，解决了目前关木通不能用于人用药的难点问题。
附图说明
图1：空白组对照、阳性对照组、实施例1-3组以及对比例1、2、3、7、8组，对家兔留置导尿管感染试验。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明做进一步的说明，但是本发明的保护范围并不限于这些实施例，实施例仅用于解释本发明。本领域技术人员应该理解的是，凡是不背离本发明构思的改变或等同替代均包括在本发明的保护范围之内。应该指出，以下详细说明都是例示性的，旨在对本申请提供进一步的说明。除非另有指明，本申请使用的所有技术和科学术语具有与本申请所属技术领域的普通技术人员通常理解的相同含义。
实施例1：一种中药乳酸菌双向发酵工艺，具体如下：
| 成分 | g |
| 关木通 | 5 |
| 石韦 | 2 |
| 萹蓄 | 0.5 |
制备方法为：
1）挥发油提取：将关木通粉碎过100目筛，再与石韦和萹蓄混合置于叔丁醇中超声，温度为50℃，时间1h，过滤，收集滤液，旋转蒸发，得挥发油备用；
2）原料液制备：向挥发油中加入23倍量的MRS液体培养基，然后加入0.3份MgCl2（w/v），混匀，灭菌得原料液；
3）乳酸菌活化：将乳酸菌接种到MRS固体培养基活化培养后，接种于MRS液体培养基中，制成菌落数均为108CFU/ml的菌悬液；
5）混合发酵：将菌悬液按5wt%接种量接入步骤2）灭菌后的原料液，置于37℃、180r/min摇床进行发酵培养，发酵时间为10天；
6）上清液制备：发酵完成后，将发酵液离心，活性炭过滤取得上清液；
7）制剂制备：将上清液浓缩至相对密度1.08，再与β-环糊精、淀粉混合进行流化床喷雾制粒，分装即得颗粒剂；
其中，所述的乳酸菌为嗜酸乳杆菌La28、副干酪乳杆菌YMC1069、两歧双歧杆菌TMC3115，其重量用量比为4：2：1。
实施例2：一种中药乳酸菌双向发酵工艺，具体如下：
| 成分 | g |
| 关木通 | 2 |
| 石韦 | 0.5 |
| 萹蓄 | 0.2 |
制备方法为：
1）挥发油提取：将关木通粉碎过100目筛，再与石韦和萹蓄混合置于乙醇中超声，温度为40℃，时间1h，过滤，收集滤液，旋转蒸发，得挥发油备用；
2）原料液制备：向挥发油中加入23倍量的MRS液体培养基，然后加入0.2份MgCl2（w/v），混匀，灭菌得原料液；
3）乳酸菌活化：将乳酸菌接种到MRS固体培养基活化培养后，接种于MRS液体培养基中，制成菌落数均为108CFU/ml的菌悬液；
4）混合发酵：将菌悬液按3wt%接种量接入步骤2）灭菌后的原料液，置于37℃、180r/min摇床进行发酵培养，发酵时间为5天；
5）上清液制备：发酵完成后，将发酵液离心，活性炭过滤取得上清液；
6）制剂制备：将上清液浓缩至相对密度1.05，再与β-环糊精、淀粉混合进行流化床喷雾制粒，分装即得颗粒剂；
其中，所述的乳酸菌为嗜酸乳杆菌La28、副干酪乳杆菌YMC1069、两歧双歧杆菌TMC3115，其重量用量比为1：0.5：0.5。
实施例3：一种中药乳酸菌双向发酵工艺，具体如下：
| 成分 | g |
| 关木通 | 10 |
| 石韦 | 4 |
| 萹蓄 | 1 |
制备方法为：
1）挥发油提取：将关木通粉碎过100目筛，再与石韦和萹蓄混合置于丙二醇中超声，温度为60℃，时间1.5h，过滤，收集滤液，旋转蒸发，得挥发油备用；
2）原料液制备：向挥发油中加入23倍量的MRS液体培养基，然后加入0.5份MgCl2（w/v），混匀，灭菌得原料液；
3）乳酸菌活化：将乳酸菌接种到MRS固体培养基活化培养后，接种于MRS液体培养基中，制成菌落数均为108CFU/ml的菌悬液；
4）混合发酵：将菌悬液按7wt%接种量接入步骤2）灭菌后的原料液，置于37℃、180r/min摇床进行发酵培养，发酵时间为10天；
5）上清液制备：发酵完成后，将发酵液离心，活性炭过滤取得上清液；
6）制剂制备：将上清液浓缩至相对密度1.08，再与β-环糊精、淀粉混合进行流化床喷雾制粒，分装即得颗粒剂；
其中，所述的乳酸菌为嗜酸乳杆菌La28、副干酪乳杆菌YMC1069、两歧双歧杆菌TMC3115，其重量用量比为6：0.5：0.5。
对比例1：一种中药乳酸菌双向发酵工艺，具体如下：
| 成分 | g |
| 关木通 | 12 |
| 石韦 | 5 |
| 萹蓄 | 1.5 |
制备方法同实施例1。
对比例2：一种中药乳酸菌双向发酵工艺，具体如下：
| 成分 | g |
| 关木通 | 5 |
| 车前草 | 2 |
| 萹蓄 | 0.5 |
制备方法同实施例1。
对比例3：一种中药乳酸菌双向发酵工艺，具体如下：
| 成分 | g |
| 关木通 | 5 |
| 石韦 | 2 |
| 通草 | 0.5 |
制备方法同实施例1。
对比例4：一种中药乳酸菌双向发酵工艺，具体如下：
| 成分 | g |
| 关木通 | 5 |
| 石韦 | 2 |
| 萹蓄 | 0.5 |
制备方法为：
1）水提液：将关木通粉碎、石韦和萹蓄煮沸后，文火1小时，过滤，收集滤液，蒸干得相对密度为1.05的清膏备用；
2）原料液制备：向清膏中加入23倍量的MRS液体培养基，然后加入0.3份MgCl2（w/v），混匀，灭菌得原料液；
3）乳酸菌活化：将乳酸菌接种到MRS固体培养基活化培养后，接种于MRS液体培养基中，制成菌落数均为108CFU/ml的菌悬液；
4）混合发酵：将菌悬液按5wt%接种量接入步骤2）灭菌后的原料液，置于37℃、180r/min摇床进行发酵培养，发酵时间为10天；
5）上清液制备：发酵完成后，将发酵液离心，活性炭过滤取得上清液；
6）制剂制备：将上清液浓缩至相对密度1.08，再与β-环糊精、淀粉混合进行流化床喷雾制粒，分装即得颗粒剂；
其中，所述的乳酸菌为嗜酸乳杆菌La28、副干酪乳杆菌YMC1069、两歧双歧杆菌TMC3115，其重量用量比为4：2：1。
对比例5：一种中药乳酸菌双向发酵工艺，具体如下：
| 成分 | g |
| 关木通 | 12 |
| 石韦 | 5 |
| 萹蓄 | 1.5 |
制备方法为：
1）水提取法获得挥发油：将关木通粉碎、石韦和萹蓄煮沸1.5h，蒸汽过冷凝器，收集挥发油；
2）原料液制备：向挥发油中加入23倍量的MRS液体培养基，然后加入0.3份MgCl2（w/v），混匀，灭菌得原料液；
3）乳酸菌活化：将乳酸菌接种到MRS固体培养基活化培养后，接种于MRS液体培养基中，制成菌落数均为108CFU/ml的菌悬液；
4）混合发酵：将菌悬液按5wt%接种量接入步骤2）灭菌后的原料液，置于37℃、180r/min摇床进行发酵培养，发酵时间为10天；
5）上清液制备：发酵完成后，将发酵液离心，活性炭过滤取得上清液；
6）制剂制备：将上清液浓缩至相对密度1.08，再与β-环糊精、淀粉混合进行流化床喷雾制粒，分装即得颗粒剂；
其中，所述的乳酸菌为嗜酸乳杆菌La28、副干酪乳杆菌YMC1069、两歧双歧杆菌TMC3115，其重量用量比为4：2：1。
对比例6：一种中药乳酸菌双向发酵工艺，具体如下：
| 成分 | g |
| 关木通 | 5 |
| 石韦 | 2 |
| 萹蓄 | 0.5 |
其中，所述的乳酸菌为嗜酸乳杆菌La28，其他同实施例1的制备方法。
对比例7：一种中药乳酸菌双向发酵工艺，具体如下：
| 成分 | g |
| 瞿麦 | 5 |
| 白茅根 | 2 |
| 白花蛇舌草 | 0.5 |
制备方法同实施例1。
对比例8：一种中药乳酸菌双向发酵工艺，具体如下：
| 成分 | g |
| 关木通 | 7.5 |
制备方法同实施例1。
对比例9：一种中药乳酸菌双向发酵工艺，具体如下：
| 成分 | g |
| 关木通 | 5 |
| 石韦 | 2 |
| 萹蓄 | 0.5 |
制备方法为：
1）挥发油提取：将关木通粉碎过100目筛，再与石韦和萹蓄混合置于甲醇中超声，温度为50℃，时间1h，过滤，收集滤液，旋转蒸发，得挥发油备用；
2）原料液制备：向挥发油中加入23倍量的MRS液体培养基，混匀，灭菌得原料液；
3）乳酸菌活化：将乳酸菌接种到MRS固体培养基活化培养后，接种于MRS液体培养基中，制成菌落数均为108CFU/ml的菌悬液；
4）混合发酵：将菌悬液按5wt%接种量接入步骤2）灭菌后的原料液，置于37℃、180r/min摇床进行发酵培养，发酵时间为10天；
5）上清液制备：发酵完成后，将发酵液离心，活性炭过滤取得上清液；
6）制剂制备：将上清液浓缩至相对密度1.08，再与β-环糊精、淀粉混合进行流化床喷雾制粒，分装即得颗粒剂；
其中，所述的乳酸菌为嗜酸乳杆菌La28、副干酪乳杆菌YMC1069、两歧双歧杆菌TMC3115，其重量用量比为4：2：1。
对比例10：一种中药乳酸菌双向发酵工艺，具体如下：
| 成分 | g |
| 关木通 | 5 |
| 石韦 | 2 |
| 萹蓄 | 0.5 |
制备方法为：
1）挥发油提取：将关木通粉碎过100目筛，再与石韦和萹蓄混合置于叔丁醇中超声，温度为50℃，时间1h，过滤，收集滤液，旋转蒸发，得挥发油备用；
2）原料液制备：向挥发油中加入23倍量的MRS液体培养基，然后加入0.3份MgCl2（w/v），混匀，灭菌得原料液；
3）乳酸菌活化：将乳酸菌接种到MRS固体培养基活化培养后，接种于MRS液体培养基中，制成菌落数均为108CFU/ml的菌悬液；
4）混合发酵：将菌悬液按5wt%接种量接入步骤2）灭菌后的原料液，置于37℃、180r/min摇床进行发酵培养，发酵时间为10天；
5）上清液制备：发酵完成后，将发酵液离心，活性炭过滤取得上清液；
6）制剂制备：将上清液浓缩至相对密度1.08，再与β-环糊精、淀粉混合进行流化床喷雾制粒，分装即得颗粒剂；
其中，所述的乳酸菌为嗜酸乳杆菌La28、副干酪乳杆菌YMC1069、两歧双歧杆菌TMC3115，其重量用量比为0.5：6：0.5。
对于以上产品的在抗菌效果、有效物质以毒性含量进行了验证，具体如下：
1.药理学实验：对家兔留置导尿管感染试验
实验材料以及动物选择
实验动物3~4个月龄，雄性家兔53只，体质量2~3kg，（动物许可证：SYXK（鲁）20230017）；大肠杆菌 E.coli ATCC 25922（自有保存）；LB培养基（赛默飞公司）按说明配制，高温灭菌后4℃保存备用；S-3400N 扫描电镜（SEM）（日本HITACHI公司），比浊仪（德国Siemens公司），双腔导尿管（思泰利）。
给药方式
本实验各实施例药物，即实施例1-3以及对比例1、2、3、7、8的颗粒剂。
导尿管兔模型的建立
选取45只实验兔随机分成9组。利用刷涂法均匀且等剂量涂布导尿管，阳性对照组（复方新霉素软膏），取实施例1-3以及对比例1、2、3、7、8的步骤3）的上清液进行涂布。将导尿管固化后留置并注入1mL E.coli ATCC25922（OD60≈1时稀释107倍，约100cfu）闭管1h后回笼。另取5只实验兔作为空白组对照，涂布生理盐水，同等条件下饲养。
分组编号：空白组对照、阳性对照组、实施例1-3以及对比例1、2、3、7、8，编号为A-K组。
检测细菌总量
第10天取尿道内段导尿管1cm，用1 mL的LB液洗涤并行超声振荡，取10μL振荡液行细菌培养，菌落计数后统计学比较各组间差异性。具体见1。
表1 组间单因素比较结果
*. 均值差的显著性水平为<0.05。
上述统计学数据采用 SPSS22.0软件对所得数据进行统计分析，多组间比较采用单因素方差分析，以显著性<0.05为差异有统计学意义。
表1显示空白组对照与其他各组相比具有显著性差异；实施例1-3中的细菌总量显著低于对比例2、3、7、8、阳性对照组。实施例1的细菌总量显著低于任一实施例，说明实施例1的治疗效果最好。
2.有效物质的检测：采用HPLC检测方法检测绿原酸和杨梅苷的含量
本发明处方的石韦中含有大量的绿原酸，采用HPLC检测方法的主要目的是检测其含量；本发明处方的萹蓄含有大量的杨梅苷，采用HPLC检测方法的主要目的是检测其含量。
二种物质的检测方法如下：
2.1绿原酸的检测
色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈-0.5%磷酸溶液（11：89）为流动相，检测波长为326nm。
对照品溶液的制备：取绿原酸对照品适量，精密称定，置棕色量瓶中，加50%甲醇制成每1mL含40μg的溶液，即得。
供试品溶液的制备：取本发明实施例颗粒2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50%甲醇50mL，称定重量，超声处理（功率300W，频率25kHz）45分钟，放冷，再称定重量，用50%的甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各1μL注入液相色谱仪，测定，即得。
2.2杨梅苷的含量检测（避光操作）
色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基烷键合硅胶为填充剂，以乙腈-0.5%磷酸溶液（14：86）为流动相；检测波长为352nm。
对照品溶液的制备：取杨梅苷对照品适量，精密称定，置棕色量瓶中，加60%乙醇制成每1mL含40μg的溶液，即得。
供试品溶液的制备：取本实施例1-3以及对比例1、对比例4-6、对比例9-10各2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入60%乙醇75mL，称定重量，冷浸8小时，超声处理（功率300W，频率40kHz）30分钟，再称定重量，用60%乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，药渣用60%乙醇适量洗涤，合并滤液与洗液，回收溶剂至干，残渣加60%乙醇溶解，转移至5mL量瓶中，加60%乙醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μL，注入液相色谱仪，测定，即得。
经过加速试验分别进行如上的检测，加速条件为在温度40±2℃，相对湿度75%±5%的条件下放置，分别在第0、1、2、3、6个月对绿原酸和杨梅苷进行检测，具体如表2。
表2 绿原酸和杨梅苷含量的检测
绿原酸和杨梅苷是本发明处方中石韦和萹蓄的有效成分，表2可知，本发明制备的中药乳酸菌中有效成分含量高。
3.有毒物质检测：马兜铃酸总含量和马兜铃酸A的含量
3.1总马兜铃酸含量的检测方法：
紫外分光光度计法：精密称取实施例1-3以及对比例1、对比例4-6、对比例9-10各2g，加 5%氨水50mL，称重，冷渍过夜，称重并补充至原重量，取续滤液10mL，加6mol/L盐酸至pH=2，乙醚萃取4次，合并醚层，用20mL水洗至中性，回收乙醚，加甲醇溶解并稀释至25mL，取1mL加甲醇稀释至10mL。
3.2马兜铃酸A的检测方法：
色谱柱C18色谱柱；流动相：甲醇-水（0.55：0.65），流速：1.2mL/min，检测波长：250nm，柱温为30℃；进样20μL。
对照品：取马兜铃酸A对照品适量，精密称定，置棕色量瓶中，加甲醇制成每1mL含40μg的溶液，即得。
供试品溶液的制备：精密称取实施例1-3以及对比例1、对比例4-6、对比例9-10各1g，置30mL索氏提取器中，加甲醇适量，水浴加热回流3h，浓缩至约10mL，定量转移至25mL容量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，用0.45μL的微孔滤膜滤过，即得。具体结果见表3。
表3 马兜铃酸总含量和马兜铃酸A的含量
| 实施例1 | 实施例2 | 实施例3 | 对比例1 | 对比例4 | 对比例5 | 对比例6 | 对比例9 | 对比例10 | |
| 马兜铃酸A（%） | 0.02 | 0.07 | 0.08 | 0.09 | 0.23 | 0.12 | 0.15 | 0.15 | 0.19 |
| 总马兜铃酸（%） | 0.13 | 0.28 | 0.29 | 0.32 | 2.35 | 1.95 | 2.12 | 1.25 | 1.36 |
表3可知，本发明中药乳酸菌中有毒物质马兜铃酸A和马兜铃酸总含量低，安全性高。
Claims (10)
1.一种中药乳酸菌发酵工艺，其特征在于：所述发酵工艺为：
1）挥发油提取：将关木通粉碎并过100目筛，再与石韦和萹蓄混合置于有机溶剂中超声，温度为40-60℃，时间0.5-1.5h，过滤，收集滤液，旋转蒸发，得挥发油备用；
2）原料液制备：向挥发油中加入15-30倍量的MRS液体培养基，然后加入MgCl2，混匀，灭菌得原料液；
3）乳酸菌活化：将乳酸菌接种到MRS固体培养基活化培养后，接种于MRS液体培养基中，制成菌落数为108CFU/ml的菌悬液；
5）混合发酵：将菌悬液按3-7wt%接种量接入步骤2）灭菌后的原料液，置于37℃、180r/min摇床进行发酵培养，发酵时间为5-15天；
6）上清液制备：发酵完成后，将发酵液离心，活性炭过滤取得上清液；
7）制剂制备：将上清液浓缩至相对密度1.05-1.10，再与β-环糊精、淀粉混合进行流化床喷雾制粒，分装即得颗粒剂；
所述的乳酸菌为嗜酸乳杆菌、副干酪乳杆菌、两歧双歧杆菌，其重量比为1-6：0.5-3：0.5-4。
2.根据权利要求1所述的中药乳酸菌发酵工艺，其特征在于，所述的关木通：石韦：萹蓄的重量用量比为2-10：0.5-4：0.2-1。
3.根据权利要求1所述的中药乳酸菌发酵工艺，其特征在于，所述的关木通：石韦：萹蓄的重量用量比为5：2：0.5。
4.根据权利要求1所述的中药乳酸菌发酵工艺，其特征在于，所述嗜酸乳杆菌、副干酪乳杆菌、两歧双歧杆菌的重量用量比为4：2：1。
5.根据权利要求1所述的中药乳酸菌发酵工艺，其特征在于，所述的乳酸菌为嗜酸乳杆菌La28、副干酪乳杆菌YMC1069、两歧双歧杆菌TMC3115。
6.根据权利要求1所述的中药乳酸菌发酵工艺，其特征在于，所述的有机溶剂选自三乙醇胺、乙醇、丙二醇、叔丁醇中的一种。
7.根据权利要求1所述的中药乳酸菌发酵工艺，其特征在于，所述的有机溶剂选自叔丁醇。
8.根据权利要求1所述的中药乳酸菌发酵工艺，其特征在于，所述发酵工艺为：
1）挥发油提取：将关木通粉碎过100目筛，再与石韦和萹蓄混合置于叔丁醇中超声，温度为50℃，时间1h，过滤，收集滤液，旋转蒸发，得挥发油备用；
2）原料液制备：向挥发油中加入23倍量的MRS液体培养基，然后加入MgCl2，混匀，灭菌得原料液；
3）乳酸菌活化：将乳酸菌接种到MRS固体培养基活化培养后，接种于MRS液体培养基中，制成菌落数均为108CFU/ml的菌悬液；
5）混合发酵：将菌悬液按5wt%接种量接入步骤2）灭菌后的原料液，置于37℃、180r/min摇床进行发酵培养，发酵时间为10天；
6）上清液制备：发酵完成后，将发酵液离心，活性炭过滤取得上清液；
7）制剂制备：将上清液浓缩至相对密度1.08，再与β-环糊精、淀粉混合进行流化床喷雾制粒，分装即得颗粒剂；
所述的乳酸菌为嗜酸乳杆菌La28、副干酪乳杆菌YMC1069、两歧双歧杆菌TMC3115，其重量用量比为4：2：1。
9.根据权利要求1或8所述的中药乳酸菌发酵工艺，其特征在于，以w/v计算，所述的MgCl2为0.02-0.05份。
10.根据权利要求1或8所述的中药乳酸菌发酵工艺，其特征在于，以w/v计算，所述的MgCl2为0.03份。
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