CN117511957A - 一个水稻NBS-LRR编码新基因Piyn及其在抗稻瘟病育种中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一个水稻NBS‑LRR编码新基因Piyn及其在抗稻瘟病育种中的应用，属于基因工程应用技术领域。本发明提供了一个水稻NBS‑LRR编码新基因Piyn，其核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。以及上述水稻NBS‑LRR编码新基因Piyn在抗稻瘟病育种中的应用，其中育种应用包括作为分子标记辅助选择育种和通过在育种中超表达水稻新基因Piyn进行抗稻瘟病育种。检测结果显示，阳性转基因水稻植株稻瘟病抗性显著高于受体亲本，但不影响水稻产量等基本农艺性状。Piyn基因在培育高产优质抗性新品种中具有重要的应用潜力，为培育新的高产优质的突破性作物新品种提供了新的基因资源。
Description
技术领域
本发明属于基因工程应用技术领域，尤其涉及一个水稻NBS-LRR编码新基因Piyn及其在抗稻瘟病育种中的应用。
背景技术
稻瘟病作为世界性的稻作病害，为十大植物真菌病害之首，严重影响水稻的丰产、稳产和稻米品质。防病虫是粮食稳产增产的重要行动之一。长期生产实践证明，抗病品种的种植是推进科学抗病，推进粮食生产环节减损，实现抗灾夺丰收的重要举措。然而，由于稻瘟病菌生理小种多样且复杂易变，在生产上推广使用的抗病品种在种植数年后往往抗病性下降甚至丧失，难以持续使用。因此，开展稻瘟病抗性研究，培育抗病新品种是保障水稻安全生产的重要途径。抗病基因的发掘和利用是水稻抗病育种的基础与核心。迄今为止，至少有100多个主效抗稻瘟病基因或位点被报道，其中大多数编码含有核苷酸结合域和富含亮氨酸重复序列(NBS-LRR,Nucleotide Binding Site-Leucine-Rich Repeat)的蛋白。抗性基因研究多，能够广泛应用的少，目前已鉴定的稻瘟病抗病基因中，仅Pi1、Pi2、Pi9、Pigm和Pi50等少数NBS-LRR基因被广泛应用于分子标记辅助选择育种，因此，发掘稻瘟病抗性新基因对解决稻瘟病危害具有重要应用价值。
发明内容
本发明的目的在于提供了一个水稻NBS-LRR编码新基因Piyn及其在抗稻瘟病育种中的应用，旨在解决目前缺少丰富的NBS-LRR类的稻瘟病抗性基因应用于抗稻瘟病育种的问题；本发明中从籼稻品种粤农丝苗中定位到一个新的稻瘟病抗性基因Piyn，将Piyn序列导入通过传统转育或转基因方式导入到不携带该基因的品种中，发现其可以提高稻瘟病抗性，在水稻抗瘟育种中具有重要应用前景。
为了实现上述的目的，本发明通过以下技术方案实现：
本发明的一个目的在于，提供一个水稻NBS-LRR编码新基因Piyn，其核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示；上述序列由7138个碱基组成。
上述的水稻NBS-LRR编码新基因Piyn，其蛋白质编码序列如SEQ ID NO:2所示；上述序列由2409个碱基组成。
上述的水稻NBS-LRR编码新基因Piyn，其蛋白质的氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示；共编码802个氨基酸。
上述的水稻NBS-LRR编码新基因Piyn从籼稻品种粤农丝苗中克隆得到。
优选的，用于克隆水稻NBS-LRR编码新基因Piyn全长的正向引物Piyn-F如SEQ IDNO:4所示和反向引物Piyn-R如SEQ ID NO:5所示。
正向引物Piyn-F(SEQ ID NO:4)：5'-tgtcgacacgaacacggtcg-3'；
反向引物Piyn-R(SEQ ID NO:5)：5'-aggcacaagaatccagccca-3'。
本发明的另一个目的在于，上述水稻NBS-LRR编码新基因Piyn在抗稻瘟病育种中的应用。
所述水稻NBS-LRR编码新基因Piyn在抗稻瘟病育种中的应用，具体为将水稻NBS-LRR编码新基因Piyn作为分子标记辅助选择育种。进一步优选的，用于检测新基因Piyn表达量检测用的RT-PCR检测引物，优选为正向引物PiynRT-F如SEQ ID NO:6所示和反向引物PiynRT-R如SEQ ID NO:7所示。
正向引物PiynRT-F(SEQ ID NO:6)：5'-ATTTGTGGCCTCCATCAACTAAAA-3'；
反向引物PiynRT-R(SEQ ID NO:7)：5'-GACGAGAAGTCAAATGTGCCAGTA-3'。
所述水稻NBS-LRR编码新基因Piyn在抗稻瘟病育种中的应用，通过在育种中超表达水稻NBS-LRR编码新基因Piyn进行抗稻瘟病育种。
上述在抗稻瘟病育种中的应用为：采用Piyn基因的蛋白质编码序列构建增强表达载体，转化水稻品种获得转基因的抗稻瘟病水稻植株。获得的抗稻瘟病水稻植株的稻瘟病抗性显著增强。上述应用鉴于Piyn具有不同的单倍型，其中粤农丝苗中的单倍型PiynYN表现为抗病，将PiynYN抗性基因型导入到感病亲本(日本晴、丽江新团黑谷、中花11等)中，水稻基本农艺性状保持不变，但稻瘟病抗性显著提高。
其中，所述增强表达载体优选为pU2301-cFLAG。
所述采用Piyn的蛋白质编码序列构建增强表达载体过程中，所用的Piyn的蛋白质编码序列SEQ ID NO:2需要删除终止密码子。
所述水稻品种优选为粳稻品种，进一步优选的，所述粳稻品种为丽江新团黑谷(LTH)、中花11(ZH11)、日本晴(NIP)等粳稻品种中的一种。
所述水稻NBS-LRR编码新基因Piyn在抗稻瘟病育种中的应用，具体包括以下具体育种步骤：
(1)以籼稻品种粤农丝苗幼苗为材料制备cDNA模板，扩增获得Piyn基因的蛋白质编码序列；
(2)构建超表达载体pU2301-cFLAG，获得转化载体pU2301-Piyn-cFLAG；
(3)利用农杆菌介导的转基因方法将所述的转化载体导入水稻受体中，获得转化植株；
(4)分析鉴定阳性转基因植株，并观察统计转基因植株表型；
(5)通过接菌鉴定转基因材料的稻瘟病抗性，获得抗稻瘟病育种水稻。
步骤(3)中所述的水稻受体优选为丽江新团黑谷(LTH)、中花11(ZH11)或日本晴(NIP)等感病材料中的一种。
步骤(4)中所述分析鉴定阳性转基因植株，优先采用PCR及qRT-PCR方法分析鉴定阳性转基因植株。
步骤(5)中所述接菌鉴定，优选为喷雾接菌或戳伤接菌的方法鉴定转基因材料的稻瘟病抗性。
此外，Piyn具有不同的单倍型，在本发明专利中，还提供了与所述水稻NBS-LRR编码新基因Piyn相对应的两个感病变体相关基因，其中，新基因Piyn的第一感病变体相关基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO:8所示，基因组序列全长1735个碱基；其蛋白质编码序列如SEQ ID NO:9所示，编码区具有600个碱基；其蛋白质的氨基酸序列如SEQ ID NO:10所示，编码199个氨基酸。所述新基因Piyn的第一感病变体相关基因，从稻瘟病感病材料丽江新团黑谷(LTH)中扩增获得。
新基因Piyn的第二感病变体相关基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO:11所示，基因组序列全长7043个碱基；其蛋白质编码序列如SEQ ID NO:12所示，编码区具有1734个碱基；其蛋白质的氨基酸序列如SEQ ID NO:13所示，编码577个氨基酸。所述新基因Piyn的第二感病变体相关基因，从稻瘟病感病材料日本晴(NIP)中扩增获得。
上述的两个新基因Piyn的感病变体相关基因，在抗稻瘟病育种中进行新基因Piyn的分析鉴定过程中，作为参照鉴定应用。
与现有技术相比，本发明的优点如下：
稻瘟病是水稻面临的最大真菌病害，严重影响粮食生产安全和稻米品质。抗病基因的发掘和利用是水稻抗病育种的基础与核心。迄今为止，至少有100多个主效抗稻瘟病基因或位点被报道，其中Pi2、Pi9、Pib、Pita、Pi1、Pik、Pigm、pi21、bsr-d1和Bsr-k1等36个基因已被克隆，其中大多数编码含有核苷酸结合域和富含亮氨酸重复序列(nucleotide-binding-leucine-rich-repeat,NBS-LRR)的蛋白。抗性基因研究多，能够广泛应用的少。目前已鉴定的稻瘟病抗病基因中，仅Pi1、Pi2、Pi9、Pigm和Pi50等少数NLR基因被广泛应用于分子标记辅助选择育种，随着这些基因的广泛应用和稻瘟病生理小种的不断变化，部分基因的抗性逐渐下调。而Piyn基因是申请人从广东省农业主导品种粤农丝苗中克隆到的主效抗病基因，多年多点均表现抗病性，属于有利单倍型，并且在感病材料中超表达该基因可以显著提高供体亲本的稻瘟病抗性而不影响产量等性状，具有重要的应用价值。
本发明中，从籼稻品种粤农丝苗中克隆的稻瘟病抗性新基因Piyn在增加稻瘟病抗性方面的新应用。本发明通过PCR方法，扩增出籼稻品种粤农丝苗中的Piyn基因的全长编码区，正向连接在植物超表达载体pU2301-cFLAG上；再遗传转化至不携带Piyn的水稻品种中，增强Piyn基因的表达量，得到该基因表达增强的转基因水稻植株。在超表达的T2代植株中发现，阳性转基因水稻植株稻瘟病抗性显著高于受体亲本，但不影响水稻产量等基本农艺性状。该基因在培育高产优质抗性新品种中具有重要的应用潜力，为培育新的高产优质的突破性作物新品种提供了新的基因资源。
附图说明
图1为超表达载体pU2301-cFLAG示意图，其中，Piyn基因的序列克隆至Kpn I和BamHI之间。
图2为在Piyn的超表达转基因在不同受体亲本背景下的稻瘟病抗性变化结果图；其中：YNSM为粤农丝苗，为阳性对照；LTH、NIP、ZH11为感病材料；NIL-PiynYN为Piyn的近等基因系；NOE1—NOE3代表PiynYN转化NIP的阳性植株；ZOE1—ZOE3为转化ZH11的转基因阳性植株。
图3为Piyn基因在T2代超表达转基因植株中的相对表达量结果示意图；其中：NIP和ZH11分别代表感稻瘟病亲本日本晴和中花11；NOE1—NOE3，ZOE1—ZOE3分别代表以日本晴和中花11为受体的T2代超表达转基因阳性植株。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明的一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
另外，若本发明实施例中有涉及“第一”、“第二”等的描述，则该“第一”、“第二”等的描述仅用于描述目的，而不能理解为指示或暗示其相对重要性或者隐含指明所指示的技术特征的数量。由此，限定有“第一”、“第二”的特征可以明示或者隐含地包括至少一个该特征。另外，各个实施例之间的技术方案可以相互结合，但是必须是以本领域普通技术人员能够实现为基础，当技术方案的结合出现相互矛盾或无法实现时应当认为这种技术方案的结合不存在，也不在本发明要求的保护范围之内。
目前，为解决目前缺少丰富的NBS-LRR类的稻瘟病抗性基因应用于抗稻瘟病育种的问题；本发明提出了一个水稻NBS-LRR编码新基因Piyn及其在抗稻瘟病育种中的应用。
实施例1：Piyn基因全长cDNA的扩增
对本发明所需要的基因PiynYN(对应日本晴参考基因组基因登录号为LOC_Os03g03180)，主要通过RT-PCR方法进行扩增得到PiynYN基因的全长序列。具体操作如下：
1)抽提来自水稻籼稻品种粤农丝苗(YNSM)(由广东省农业科学院水稻研究所水稻抗病育种研究室自主育成)幼苗叶片的RNA，RNA抽提用试剂是Invitrogen公司的Trizol抽提试剂盒(具体操作步骤见该试剂盒的说明书)；
2)RT-PCR中反转录合成cDNA第一链按Invitrogen公司的反转录试剂盒进行。
3)根据RiceRC数据库(http://ricerc.sicau.edu.cn/)公布的Piyn同源基因的全长cDNA序列，设计引物PCR扩增片段。PCR用到的体系为20μL，具体配法为：cDNA第一链模板1μL，10xPCR buffer 2μL，10mM dNTP 1.6μL，2.5mM Mg2+1.5μL，正向引物和反向引物各0.4μL，LATaq酶0.2μL，加水至20μL(所用到的PCR buffer、dNTP、Mg2+、LATaq酶等均购自宝生物工程大连有限公司)。PCR反应条件如下：①94℃4分钟，②94℃30秒，③58℃30秒，④72℃60秒，⑤从②－④循环35次，⑥72℃7分钟，⑦4℃保存。扩增该基因的全长序列：即用正向引物Piyn-F1(如SEQ ID NO:4所示)和反向引物Piyn-R1(如SEQ ID NO:5所示)扩增出全长序列。
用来克隆Piyn全长的引物如下所示：
正向引物Piyn-F(SEQ ID NO:4)：5'-tgtcgacacgaacacggtcg-3'；
反向引物Piyn-R(SEQ ID NO:5)：5'-aggcacaagaatccagccca-3'。
4)将扩增出的基因全长连接到T/A克隆载体pGEMT-vector(购自普洛麦格(北京)生物技术有限公司，即美国Promega公司)上用T7和SP6引物测序验证。得到最终的PiynYN基因的cDNA序列，其核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示。
此外，Piyn具有不同的单倍型，在本发明专利中，还提供了与所述水稻NBS-LRR编码新基因Piyn相对应的两个感病变体相关基因，其中，新基因Piyn的第一感病变体相关基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO:8所示，基因组序列全长1735个碱基；其蛋白质编码序列如SEQ ID NO:9所示，编码区具有600个碱基；其蛋白质的氨基酸序列如SEQ ID NO:10所示，编码199个氨基酸。所述新基因Piyn的第一感病变体相关基因，从稻瘟病感病材料丽江新团黑谷(LTH)中扩增获得。
新基因Piyn的第二感病变体相关基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO:11所示，基因组序列全长7043个碱基；其蛋白质编码序列如SEQ ID NO:12所示，编码区具有1734个碱基；其蛋白质的氨基酸序列如SEQ ID NO:13所示，编码577个氨基酸。所述新基因Piyn的第二感病变体相关基因，从稻瘟病感病材料日本晴(NIP)中扩增获得。
上述的两个新基因Piyn的感病变体相关基因，在抗稻瘟病育种中进行新基因Piyn的分析鉴定过程中，作为参照鉴定应用。
实施例2：PiynYN超表达载体的构建
对本发明所需要的基因，通过RT-PCR方法进行扩增得到PiynYN的全长序列，具体步骤是：根据RiceRC数据库(http://ricerc.sicau.edu.cn/)公布的PiynYN同源基因的全长cDNA序列，设计包含酶切位点的引物，以PiynYN基因全长cDNA(来自实施例1)为模板，PCR扩增基因全长片段。扩增产物通过T/A克隆连接到pGEMT-vector(购自美国Promega公司)进行测序验证。
用来克隆PiynYN的全长片段的正向引物YN-EGFP-F如SEQ ID NO:14所示和反向引物YN-EGFP-R如SEQ ID NO:15所示：
正向引物YN-EGFP-F(SEQ ID NO:14):
ACCATTTACGAACGATAGCCGGTACCAtgtcgacacgaacacggtcg；
反向引物YN-EGFP-R(SEQ ID NO:15):
TCCTCGCCCTTGCTCACCATGGATCCaggcacaagaatccagccca。
其扩增的cDNA片段如序列表SEQ ID NO:2所示，序列全长为2409bp。
具体步骤如下：
1)将带有PiynYN的全长片段的T/A克隆用KpnI和BamHI酶切，回收目标条带，与KpnI和Bam HI酶切的表达载体质粒pU2301-cFLAG(如图1所示)连接(所使用的限制性内切酶购自大连宝生物工程有限公司，使用方法及用量按照该公司提供的产品说明书；连接酶为上海英俊生物技术公司产品，用法及用量按照该公司产品说明书)；
2)连接产物通过电转化的方法(电转化仪为eppendorf公司产品，所用电压为1800v，操作方法见仪器说明书)导入大肠杆菌DH10B(购自普洛麦格(北京)生物技术有限公司，即美国Promega公司代理)，在含有250ppm卡那霉素(购自罗氏生物公司产品)的LA抗性培养基上涂皿培养；
3)将LA抗性培养基上长出的单菌落在超净工作台接种于灭菌的10mL离心管，管内预先加入3mL含250ppm卡那霉素的LB抗性培养基，然后在37℃摇床上培养16-18小时，抽提质粒，用KpnI和BamHI酶切并电泳检测，根据插入片段的大小获得阳性的超表达载体：pU2301-Piyn-cFLAG。
实施例3：质粒载体的转化及超表达转基因植株阳性和表达量检测
1)把新构建的超表达载体pU2301-Piyn-cFLAG(来自实施例2)通过电转化的方法(参考文献和使用的电压参数如实施例2的步骤2)所述)导入农杆菌EHA105(购自澳大利亚CAMBIA实验室)菌株中。将转化后的菌株命名为OE-Piyn。
2)将上步得到的OX-Piyn分别转化水稻粳稻感病品种日本晴和中花11中，转化方法参照Hiei等人报道的方法(Hiei等,Efficient transformation of rice(Oryza sativaL.)mediated by Agrobacterium and sequence analysis of the boundaries of theT-DNA.Plant J,1994,6:271-282.)以及华中农业大学作物遗传改良国家重点实验室的标准方法(例如：专利号ZL 200710053552.9，发明的名称：水稻广亲和基因S5的分离克隆及应用；专利公开号：CN101200725A；专利授权日：2010年04月21日的专利文献)进行。
3)取T0代转化植株叶片抽提总DNA,DNA抽提方法为CTAB法(Zhang等，geneticdiversity and differentiation of indica an japonica rice detected by RFLPanalysis,1992,Theor Appl Genet,83,495-499)。以叶片总DNA为模板，用PCR方法对T0代超表达转化植株用超表达载体检测引物(正向引物pU2301F如SEQ ID NO:16所示和反向引物pU2301R如SEQ ID NO:17所示)进行阳性检测。
超表达载体引物的序列如下：
正向引物pU2301F(SEQ ID NO:16)：5'-ATTTTCACCATTTACGAACG-3'；
反向引物pU2301R(SEQ ID NO:17)：5'-CTGGAGAAAAATAGAGAGAGATAGA-3'。
正向引物YN-FLAGF(SEQ ID NO:18)：5'-CATTTACGAACGATAGCCGGTACCAtgtcgacacgaacacggtcg-3'
反向引物YN-FLAGR(SEQ ID NO:19):5'-TCCTCGCCCTTGCTCACCATGGATCCaggcacaagaatccagccca-3'
以上引物均由生工生物工程(上海)有限公司(或称上海生工生物工程有限公司)合成。
PCR反应总体积为20μL，具体配法是：模板100ng，10xPCR buffer 2μL，10mM dNTP1.6μL，2.5mM Mg2+1.5μL，正向引物、反向引物(YN-FLAGF和YN-FLAGR)各0.4μL，r-Taq酶0.2μL,加去离子水至20μL(所用到的PCR buffer、dNTP、Mg2+、r-Taq酶等均购自宝生物工程大连有限公司)。PCR反应条件如下：①94℃4分钟，②94℃30秒，③57℃30秒，④72℃1分钟，⑤从②－④循环32次，⑥72℃7分钟，⑦4℃保存。PCR产物在1％(质量/体积)的TBE琼脂糖凝胶上电泳检测。因为超表达载体引物(pU2301F和pU2301R)片段为转化载体所特有，这样能扩增出特异条带的转基因植株即为阳性植株。对T0代阳性植株收种子(称为T1代)，为T1代的大田种植和性状调查做准备。
4)为了检测超表达转基因植株中的目标基因的表达量，申请人采用Real-timePCR的方法对转基因T0代植株进行了表达分析。实验所用的总RNA来自3叶期幼苗，RNA抽提用的试剂是采用Invitrogen公司的Trizol抽提试剂盒(具体操作步骤见试剂盒说明书)；按照实施例1的方法进行反转录，得到产物后用实时荧光定量PCR的方法检测Piyn的表达量。试剂购自宝生物工程大连有限公司，反应体系参见说明书。PCR仪为美国ABI公司的7500，PCR参数为95℃预变性10秒，进入循环后95℃变性10秒，58℃退火15秒，72℃延伸40秒，35个循环。
Real-time PCR所用引物序列为：
正向引物PiynRT-F(SEQ ID NO:6)：5'-ATTTGTGGCCTCCATCAACTAAAA-3'；
反向引物PiynRT-R(SEQ ID NO:7)：5'-GACGAGAAGTCAAATGTGCCAGTA-3'。
最终得到的T0代超表达转基因植株中Piyn表达结果(图3)。
实施例4：转基因植株稻瘟病抗性的鉴定
1)将本发明两种T0代阳性植株(即超表达转基因植株中Piyn基因表达量上升的植株)收种子(T1代)种入大田，选取表达量增加的株系(超表达T2代)，进行稻瘟病抗性鉴定，结果发现超表达转基因阳性植株稻瘟病抗性不同程度增加(图2)。
本发明中，从籼稻品种粤农丝苗中克隆的稻瘟病抗性新基因Piyn在增加稻瘟病抗性方面的新应用。本发明通过PCR方法，扩增出籼稻品种粤农丝苗中的Piyn基因的全长编码区，正向连接在植物超表达载体pU2301-cFLAG上；再遗传转化至不携带Piyn的水稻品种中，增强Piyn基因的表达量，得到该基因表达增强的转基因水稻植株。在超表达的T2代植株中发现，阳性转基因水稻植株稻瘟病抗性显著高于受体亲本，但不影响水稻产量等基本农艺性状。该基因在培育高产优质抗性新品种中具有重要的应用潜力，为培育新的高产优质的突破性作物新品种提供了新的基因资源。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (10)
1.一个水稻NBS-LRR编码新基因Piyn，其特征在于：核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。
2.根据权利要求1所述的水稻NBS-LRR编码新基因Piyn，其特征在于：蛋白质编码序列如SEQ ID NO:2所示。
3.根据权利要求1所述的水稻NBS-LRR编码新基因Piyn，其特征在于：蛋白质的氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示。
4.根据权利要求1所述的水稻NBS-LRR编码新基因Piyn，其特征在于：所述的水稻NBS-LRR编码新基因Piyn从籼稻品种粤农丝苗中克隆得到。
5.权利要求1-4任一项所述的水稻NBS-LRR编码新基因Piyn在抗稻瘟病育种中的应用。
6.根据权利要求5所述的水稻NBS-LRR编码新基因Piyn在抗稻瘟病育种中的应用，其特征在于：具体为将水稻NBS-LRR编码新基因Piyn作为分子标记辅助选择育种。
7.根据权利要求5所述的水稻NBS-LRR编码新基因Piyn在抗稻瘟病育种中的应用，其特征在于：用于检测新基因Piyn表达量检测用的RT-PCR检测引物，为正向引物PiynRT-F如SEQID NO:6所示和反向引物PiynRT-R如SEQ ID NO:7所示。
8.根据权利要求5所述的水稻NBS-LRR编码新基因Piyn在抗稻瘟病育种中的应用，其特征在于：通过在育种中超表达水稻NBS-LRR编码新基因Piyn进行抗稻瘟病育种。
9.根据权利要求8所述的水稻NBS-LRR编码新基因Piyn在抗稻瘟病育种中的应用，其特征在于：所述在抗稻瘟病育种中的应用为：采用Piyn基因的蛋白质编码序列构建增强表达载体，转化水稻品种获得转基因的抗稻瘟病水稻植株。
10.根据权利要求5所述的水稻NBS-LRR编码新基因Piyn在抗稻瘟病育种中的应用，其特征在于：具体包括以下具体育种步骤：
(1)以籼稻品种粤农丝苗幼苗为材料制备cDNA模板，扩增获得Piyn基因的蛋白质编码序列；
(2)构建超表达载体pU2301-cFLAG，获得转化载体pU2301-Piyn-cFLAG；
(3)利用农杆菌介导的转基因方法将所述的转化载体导入水稻受体中，获得转化植株；
(4)分析鉴定阳性转基因植株，并观察统计转基因植株表型；
(5)通过接菌鉴定转基因材料的稻瘟病抗性，获得抗稻瘟病育种水稻。
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