CN117426996A - 一种抗皱肽组合物及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提出了一种抗皱肽组合物及其制备方法,属于化妆品技术领域。将罗非鱼依次经过碱液、酸液浸泡,蛋白酶酶解,低热高压脉冲预处理,超声波辅助酶解处理,制得胶原蛋白肽,与可溶性锌盐和可溶性铜盐反应,制得胶原蛋白肽‑Zn‑Cu复合物,将玉米黄粉蛋白与玻尿酸和泛酸混合反应,酶解,制得玉米蛋白肽‑玻尿酸‑泛酸复合物,与胶原蛋白肽‑Zn‑Cu复合物、肽组合物混合包埋于微球中,制得抗皱肽组合物。在多种组合物的复配作用下,起到抗老化、抗氧化、抗衰老、保湿等作用,采用包埋技术,延长其保质时间,提高其流动性,具有广阔的应用前景。
Description
技术领域
本发明涉及化妆品技术领域,具体涉及一种抗皱肽组合物及其制备方法。
背景技术
皱纹是皮肤老化的标志之一,是由于人体受到内源性或外源性因素的影响后,导致皮肤支撑组织及皮肤结构的变化,造成皮肤保水能力的丧失,弹力纤维和胶原排列顺序的变化,导致皮肤的机械力和弹性下降,形成凹陷,最终形成皱纹。造成皱纹的因素较多,如活性氧、紫外照射、自由基、炎症等,随着年龄的增长,各因素造成的损伤逐渐累积,最终造成皮肤皱纹、松弛、衰老。
胶原蛋白I是真皮层中最主要的功能性蛋白,通常与胶原蛋白III相伴而行,它们排列在真皮的胶原纤维上,为真皮提供足够的营养和强度,也与皮肤再生密切相关。真皮纤维结构中,还有一类重要的蛋白--弹性蛋白,是真皮弹性纤维的主要成分。弹性纤维与胶原纤维共同组成真皮的纤维网络结构,赋予肌肤的弹性、强度和柔韧性。随着年龄的增长,真皮中I型和III型胶原蛋白、弹性蛋白的合成减少,导致真皮中胶原纤维和弹性纤维的功能大幅度减退,真皮层失去了足够的强度和弹性,导致皮肤深度皱纹的产生。
胶原蛋白IV将表皮固定到真表皮连接层,形成网状结构,使真表皮连接层结构稳定;胶原蛋白XVII,是连接表皮层和真皮层重要的跨膜蛋白质,也作为皮肤再生信号释放,它们共同组成了真表皮连接层(基底膜)的张力结构,发挥粘附作用。胶原蛋白IV和胶原蛋白XVII的合成减少,降低了表皮和真皮之间的营养渗透,会使真表皮连接层(基底膜)扁平化甚至凹陷坍塌,导致皮肤松弛失去韧性,加速皱纹的产生。
以前有很多的化妆品采用的是假性的填充等技术,无法长期真正的改善皮肤皱纹松弛等情况。目前,紧致、抗皱类的化妆品有很大一部分是使用肽类及肽类组合物来实现目的的。单一的肽类,需要很大量才能实现一定的紧致、抗皱效果。而多种肽类复配就成为了目前紧致、抗皱类化妆品的一个方向。但是,目前的技术方案多是各种肽类的简单复配,并没有实现作用机理的协同效果。且各种肽类原料的使用量特别大,导致产品成本很高,但效果却很一般。
发明内容
本发明的目的在于提出一种抗皱肽组合物及其制备方法,在多种肽及复合物的复配作用下,起到很好的抗老化、抗氧化、抗衰老、保湿等作用,从而对于皮肤有很好的修复和护理效果,同时,本发明采用包埋技术,保证活性肽及复合物不易于氧气接触而失活,延长其保质时间,提高其流动性,便于保藏和使用,具有广阔的应用前景。
本发明的技术方案是这样实现的:
本发明提供一种抗皱肽组合物的制备方法,将罗非鱼依次经过碱液、酸液浸泡,蛋白酶酶解,低热高压脉冲预处理,超声波辅助酶解处理,制得胶原蛋白肽,与可溶性锌盐和可溶性铜盐反应,制得胶原蛋白肽-Zn-Cu复合物,将玉米黄粉蛋白与玻尿酸和泛酸混合反应,酶解,制得玉米蛋白肽-玻尿酸-泛酸复合物,与胶原蛋白肽-Zn-Cu复合物、肽组合物混合包埋于微球中,制得抗皱肽组合物。
作为本发明的进一步改进,包括以下步骤:
S1.罗非鱼皮胶原蛋白的提取:将罗非鱼皮洗净,干燥,切块,浸泡在碱液中去除杂蛋白的色素,取出,洗净,浸泡于酸液中溶胀,洗净,加入水中,加入蛋白酶,酶解,灭酶,离心,得到罗非鱼皮胶原蛋白溶液;
S2.低热高压脉冲预处理:将步骤S1制得的罗非鱼皮胶原蛋白溶液加热,在一定脉冲压力条件下预处理,得到预处理的罗非鱼皮胶原蛋白溶液;
S3.超声波辅助酶解:向步骤S2制得的预处理的罗非鱼皮胶原蛋白溶液中加入复合酶,超声波辅助条件下,酶解,灭酶,离心,冷冻干燥,制得胶原蛋白肽;
S4.金属离子螯合:将步骤S3制得的胶原蛋白肽加入水中,加入可溶性锌盐和可溶性铜盐,搅拌反应,透析,透析液冷冻干燥,制得胶原蛋白肽-Zn-Cu复合物;
S5.玉米蛋白肽-玻尿酸-泛酸复合物的制备:将玻尿酸和泛酸溶于水中,加入玉米黄粉蛋白,微波加热搅拌反应,加入酶加热酶解,灭酶,制得玉米蛋白肽-玻尿酸-泛酸复合物;
S6.肽组合物的制备:将肌肽、乙酰基四肽-11、棕榈酰三肽-5混合均匀,制得肽组合物;
S7.抗皱肽组合物的制备:将步骤S4制得的胶原蛋白肽-Zn-Cu复合物、步骤S5制得的玉米蛋白肽-玻尿酸-泛酸复合物、步骤S6制得的肽组合物混合加入水中,加入海藻酸钠,搅拌混合均匀,快速膜乳化,滴加氯化钙溶液,常温固化,过滤,洗涤,干燥,制得抗皱肽组合物。
作为本发明的进一步改进,步骤S1中所述碱液为2-3g/L的NaOH或KOH溶液,所述酸液为1-3g/L的盐酸或硫酸溶液,所述罗非鱼皮、水、蛋白酶的质量比为15-20:100-150:1-2,所述蛋白酶为碱性蛋白酶或胰蛋白酶,所述酶解的温度为40-50℃,pH值为8-10,时间为1-2h。
作为本发明的进一步改进,步骤S2中所述加热的温度为35-40℃,所述脉冲压力的压力为100-150MPa,频率为每1min加压处理20-30s,预处理时间为20-30min;步骤S3中所述预处理的罗非鱼皮胶原蛋白溶液和复合酶的质量比为100:2-3,所述复合酶选自中性蛋白酶、胃蛋白酶、碱性蛋白酶、胰蛋白酶、糜蛋白酶、木瓜蛋白酶、无花果蛋白酶、菠萝蛋白酶、风味蛋白酶中的至少两种,优选地,为菠萝蛋白酶和胃蛋白酶,质量比为5-7:4,所述超声波的功率为500-700W,所述酶解的温度为35-38℃,pH值为3-5,时间为2-3h。
作为本发明的进一步改进,步骤S4中所述胶原蛋白肽、可溶性锌盐和可溶性铜盐的质量比为15-20:3-5:2-4,所述可溶性锌盐选自氯化锌、硫酸锌、硝酸锌中的至少一种;所述可溶性铜盐选自氯化铜、硫酸铜、硝酸铜中的至少一种;所述搅拌反应的温度为40-45℃,时间为20-40min,所述透析的透析袋孔径为300-500D,时间为5-7h。
作为本发明的进一步改进,步骤S5中所述玻尿酸、泛酸、玉米黄粉蛋白的质量比为0.2-0.5:0.3-0.5:10-12,所述微波加热搅拌反应的微波功率为700-1000W,加热的温度为35-40℃,时间为0.5-1h,所述酶为碱性蛋白酶或胰蛋白酶,添加量为体系总质量的1-2wt%,所述加热酶解的温度为40-50℃,pH值为8-10,时间为1-2h。
作为本发明的进一步改进,步骤S6中所述肌肽、乙酰基四肽-11、棕榈酰三肽-5的质量比为5-7:3-5:2-3。
作为本发明的进一步改进,步骤S7中所述胶原蛋白肽-Zn-Cu复合物、玉米蛋白肽-玻尿酸-泛酸复合物、肽组合物、海藻酸钠的质量比为7-10:5-7:3-5:20-25,所述快速膜乳化用的膜的孔径为5-10μm,所述氯化钙溶液的浓度为3-5wt%,所述常温固化的时间为30-40min。
作为本发明的进一步改进,具体包括以下步骤:
S1.罗非鱼皮胶原蛋白的提取:将15-20重量份罗非鱼皮洗净,干燥,切块,浸泡在100重量份2-3g/L的NaOH或KOH溶液中20-30min,取出,洗净,浸泡于100重量份1-3g/L的盐酸或硫酸溶液中20-30min,洗净,加入100-150重量份水中,加入1-2重量份蛋白酶,40-50℃,pH值为8-10,酶解1-2h,灭酶,离心,得到罗非鱼皮胶原蛋白溶液;
S2.低热高压脉冲预处理:将步骤S1制得的罗非鱼皮胶原蛋白溶液加热至35-40℃,在脉冲压力条件下,压力为100-150MPa,频率为每1min加压处理20-30s,预处理20-30min,得到预处理的罗非鱼皮胶原蛋白溶液;
S3.超声波辅助酶解:向100重量份步骤S2制得的预处理的罗非鱼皮胶原蛋白溶液中加入2-3重量份复合酶,500-700W超声波辅助条件下,35-38℃,pH值为3-5,酶解2-3h,灭酶,离心,冷冻干燥,制得胶原蛋白肽;
所述复合酶为菠萝蛋白酶和胃蛋白酶,质量比为5-7:4;
S4.金属离子螯合:将15-20重量份步骤S3制得的胶原蛋白肽加入100重量份水中,加入3-5重量份可溶性锌盐和2-4重量份可溶性铜盐,40-45℃搅拌反应20-40min,透析5-7h,透析袋孔径为300-500D,透析液冷冻干燥,制得胶原蛋白肽-Zn-Cu复合物;
S5.玉米蛋白肽-玻尿酸-泛酸复合物的制备:将0.2-0.5重量份玻尿酸和0.3-0.5重量份泛酸溶于100重量份水中,加入10-12重量份玉米黄粉蛋白,700-1000W微波加热至35-40℃,搅拌反应0.5-1h,加入酶,添加量为体系总质量的1-2wt%,加热至40-50℃,pH值为8-10,酶解1-2h,灭酶,制得玉米蛋白肽-玻尿酸-泛酸复合物;
S6.肽组合物的制备:将5-7重量份肌肽、3-5重量份乙酰基四肽-11、2-3重量份棕榈酰三肽-5混合均匀,制得肽组合物;
S7.抗皱肽组合物的制备:将7-10重量份步骤S4制得的胶原蛋白肽-Zn-Cu复合物、5-7重量份步骤S5制得的玉米蛋白肽-玻尿酸-泛酸复合物、3-5重量份步骤S6制得的肽组合物混合加入200重量份水中,加入20-25重量份海藻酸钠,搅拌混合均匀,快速膜乳化,所用的膜的孔径为5-10μm,滴加20重量份3-5wt%氯化钙溶液,常温固化30-40min,过滤,洗涤,干燥,制得抗皱肽组合物。
本发明进一步保护一种上述的制备方法制得的抗皱肽组合物。
本发明具有如下有益效果:
罗非鱼是一种广泛养殖的淡水鱼,加工过程中会产生大量的副产物,包括鱼皮和鱼鳞,其中鱼皮含有丰富的胶原蛋白,可作为提取胶原蛋白肽的理想原料。本发明首先将罗非鱼皮经过碱液浸泡,去除杂蛋白和色素,然后再酸液中溶胀,使得大部分胶原蛋白便于溶出,进一步加入蛋白酶酶解,促进鱼皮中胶原蛋白的溶出,以及酶解成小分子活性胶原蛋白。在相同的压力会立即且均等地施加给食品物料,与传统的热处理工艺相比,超高压技术能保证食品的质地、形状、色泽,还能保证食品的风味和营养特性;在超高压处理过程中,食品物料会随着压力的方向发生移动,其体积减小,食品体系的平衡和体积变化速率、分子构象都发生一定程度的改变。
本发明中,采用低热处理,可以适当的改变蛋白质的构象,暴露酶解的位点,并采用超高压脉冲处理,通过采用超高压脉冲处理,可以解离胶原蛋白中的非共价键、离子键、疏水键和氢键,压力的变化引起蛋白质的局部或整体变化,改变稳定天然蛋白质折叠构象。还可以使蛋白质体系分散,提高后续的酶解效率和产品活性。
随后采用超声波辅助酶解处理,超声波的辅助处理促进酶的扩散,增加酶解的接触频率,添加的复合酶包括菠萝蛋白酶和胃蛋白酶,能够快速水解碱性氨基酸(例如精氨酸)、酸性氨基酸、或芳香族氨基酸(例如苯丙氨酸、酪氨酸)的羧基侧上的肽链,从而获得肽链较短的活性胶原蛋白肽产物,该制得的胶原蛋白肽的氨基酸序列呈现(G-X-Y)n周期性排列,G为甘氨酸,X多为脯氨酸,由于其含有丰富的甘氨酸和脯氨酸,因此具备良好的锌离子和铜离子的螯合能力。
锌在结构、催化和调节等方面发挥重要作用,锌能使加速细胞的修复、再生,维持皮肤的弹性与活力。铜元素刺激真皮胶原纤维,有助于抗自由基的活动。丰富铜元素,能够活化肌肤中天然的抗氧化酶,从而加强肌细胞的锁水能力。因此,通过将胶原蛋白肽与铜盐、锌盐进行螯合作用形成复合物后,制得的胶原蛋白肽-Zn-Cu复合物有很好的抗氧化、抗衰老、美白等活性,能够作为重塑皮肤组织的激活剂,促进成纤维细胞内金属蛋白酶MMP1、金属蛋白酶MMP2和金属蛋白酶抑制剂TIMP1和TIMP2的表达,从而促进胶原蛋白和弹性蛋白的生成,有效促进抚平皮肤皱纹,调控表皮层细胞增殖,促进胶原蛋白、弹性蛋白及纤连蛋白的合成及分泌,从而加速皮肤的修复,其胶原蛋白肽部分还可以增强胶原蛋白的产生并抑制降解胶原蛋白的酶,预防和修复皮肤衰老,同时还具有一定的有改善光损伤、皮肤老化的作用。
玉米黄粉蛋白是玉米籽粒通过湿磨法加工制备玉米淀粉后分离出的蛋白质水,经过浓缩后脱水得到的粉末,其游离氨基酸可以与泛酸、玻尿酸中的羰基结合形成功能性化合物,从而提高了热稳定性和溶解性,以及生理活性。玻尿酸具有高亲水性和高黏弹性,对皮肤有保湿、营养、修复等多种作用,是重要的化妆品原料。但其渗透性差,稳定性不高,应用范围受到限制。另外,泛酸不仅具有良好的保湿作用,同时还具有一定的抗炎和修复肌肤的功效,外用能缓解一些肌肤敏感状况,促进愈合,但是,简单的补充泛酸容易造成泛酸的流失从而对于皮肤的改善效果不佳。本发明通过将玉米黄粉蛋白与玻尿酸和泛酸进行混合反应,不仅提高了玻尿酸的稳定性和渗透性,改善了皮肤对泛酸的吸收率,同时,经过酶解后得到的玉米蛋白肽-玻尿酸-泛酸复合物还能起到很好的抗氧化和抑制糖基化和氧化应激来改善衰老,此外还能促进I型胶原蛋白的增加和金属蛋白酶MMPs的减少的作用,从而起到一定的抗衰老作用。
人体生理代谢的过程会不断产生各种自由基,适量的自由基有益于人体生理进程,可以帮助传递维持能量。过量的活性氧和活性氮会导致氧化应激,使蛋白质和酶等失去活性,进而加速细胞衰亡。本发明肽组合物具有清除自由基,提高机体抗氧化能力,促进胶原纤维及胶原蛋白生成的作用。活性肽因其分子量小,结构简单,具有活性官能团,能够有效捕捉人体内的游离自由基,从而延缓自由基对人体的侵害,延缓细胞衰老,包括肌肽、乙酰基四肽-11和棕榈酰三肽-5,其中:
肌肽是一种天然抗氧化剂,能够捕获人体内的活性氧以及α-β不饱和醛,保护皮肤免受氧化损伤,同时,也是单线态氧清除剂,能够有效猝灭单线态氧,抑制抗坏血酸和铜离子诱导的脱氧鸟苷氧化羟基化,在人体内起到内源性抗氧化剂的作用,肌肽中的咪唑环能够直接螯合铜离子,并与脂质过氧化物反应,从而抑制铜催化脂肪氧化活性,促进细胞新陈代谢。
乙酰基四肽-11能够通过促进角质形成细胞中多配体聚糖-1的合成,增强整体皮肤的凝聚力,促进胶原蛋白XVII的生成,从而提高表皮凝聚力,有效抚平皱纹,重建真皮和成纤维细胞中基膜聚糖和Ⅰ型胶原蛋白的合成,从而提高皮肤中细胞外胶原纤维的密度和结构。
棕榈酰三肽-5能够促进细胞外基质中多型胶原蛋白和弹性蛋白等的生成,从而有效减少皮肤皱纹,改善肤质,刺激细胞外基质尤其是胶原蛋白、弹力蛋白和透明质酸的生成,同时抑制弹性蛋白酶、胶原蛋白酶等活性,从而提高皮肤弹性,减少细纹的生成,阻断神经传递肌肉收缩信号,达到抚平动态纹、静态纹和细纹的效果。
因此,本发明抗皱肽组合物在多种肽及复合物的复配作用下,起到很好的抗老化、抗氧化、抗衰老、保湿等作用,从而对于皮肤有很好的修复和护理效果,同时,本发明采用包埋技术,保证活性肽及复合物不易于氧气接触而失活,延长其保质时间,提高其流动性,便于保藏和使用,具有广阔的应用前景。
具体实施方式
下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述,显然,所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例,而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例,本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例,都属于本发明保护的范围。
玉米黄粉蛋白,蛋白质含量>60%,河南巨龙生物工程有限公司;罗非鱼皮,广东百维生物科技有限公司;碱性蛋白酶,10万U/g,菠萝蛋白酶,10万U/g,胃蛋白酶,5000NF,南宁东恒华道生物科技有限责任公司;胰蛋白酶,5000U/g,上海源叶生物科技有限公司;玻尿酸,纯度>98%,西安贝吉诺生物科技有限公司;泛酸,纯度>99%,山东爱采生物科技有限公司。
实施例1
本实施例提供一种抗皱肽组合物的制备方法,具体包括以下步骤:
S1.罗非鱼皮胶原蛋白的提取:将15重量份罗非鱼皮洗净,干燥,切块,浸泡在100重量份2g/L的NaOH溶液中20min,取出,洗净,浸泡于100重量份1g/L的盐酸溶液中30min,洗净,加入100重量份水中,加入1重量份碱性蛋白酶,40℃,pH值为10,酶解1h,灭酶,离心,得到罗非鱼皮胶原蛋白溶液;
S2.低热高压脉冲预处理:将步骤S1制得的罗非鱼皮胶原蛋白溶液加热至35℃,在脉冲压力条件下,压力为100MPa,频率为每1min加压处理30s,预处理20min,得到预处理的罗非鱼皮胶原蛋白溶液;
S3.超声波辅助酶解:向100重量份步骤S2制得的预处理的罗非鱼皮胶原蛋白溶液中加入2重量份复合酶,500W超声波辅助条件下,35℃,pH值为3,酶解2h,灭酶,离心,冷冻干燥,制得胶原蛋白肽;
所述复合酶为菠萝蛋白酶和胃蛋白酶,质量比为5:4;
S4.金属离子螯合:将15重量份步骤S3制得的胶原蛋白肽加入100重量份水中,加入3重量份硫酸锌和2重量份硫酸铜,40℃搅拌反应20min,透析5h,透析袋孔径为300D,透析液冷冻干燥,制得胶原蛋白肽-Zn-Cu复合物;
S5.玉米蛋白肽-玻尿酸-泛酸复合物的制备:将0.2重量份玻尿酸和0.3重量份泛酸溶于100重量份水中,加入10重量份玉米黄粉蛋白,700W微波加热至35℃,搅拌反应0.5h,加入碱性蛋白酶,添加量为体系总质量的1wt%,加热至40℃,pH值为10,酶解1h,灭酶,制得玉米蛋白肽-玻尿酸-泛酸复合物;
S6.肽组合物的制备:将5重量份肌肽、3重量份乙酰基四肽-11、2重量份棕榈酰三肽-5,搅拌混合20min,制得肽组合物;
S7.抗皱肽组合物的制备:将7重量份步骤S4制得的胶原蛋白肽-Zn-Cu复合物、5重量份步骤S5制得的玉米蛋白肽-玻尿酸-泛酸复合物、3重量份步骤S6制得的肽组合物混合加入200重量份水中,加入20重量份海藻酸钠,搅拌混合20min,快速膜乳化,所用的膜的孔径为5μm,滴加20重量份3wt%氯化钙溶液,常温固化30min,过滤,洗涤,干燥,制得抗皱肽组合物。
实施例2
本实施例提供一种抗皱肽组合物的制备方法,具体包括以下步骤:
S1.罗非鱼皮胶原蛋白的提取:将20重量份罗非鱼皮洗净,干燥,切块,浸泡在100重量份3g/L的KOH溶液中30min,取出,洗净,浸泡于100重量份3g/L的硫酸溶液中30min,洗净,加入150重量份水中,加入2重量份胰蛋白酶,50℃,pH值为8,酶解2h,灭酶,离心,得到罗非鱼皮胶原蛋白溶液;
S2.低热高压脉冲预处理:将步骤S1制得的罗非鱼皮胶原蛋白溶液加热至40℃,在脉冲压力条件下,压力为150MPa,频率为每1min加压处理20s,预处理30min,得到预处理的罗非鱼皮胶原蛋白溶液;
S3.超声波辅助酶解:向100重量份步骤S2制得的预处理的罗非鱼皮胶原蛋白溶液中加入3重量份复合酶,700W超声波辅助条件下,38℃,pH值为5,酶解3h,灭酶,离心,冷冻干燥,制得胶原蛋白肽;
所述复合酶为菠萝蛋白酶和胃蛋白酶,质量比为7:4;
S4.金属离子螯合:将20重量份步骤S3制得的胶原蛋白肽加入100重量份水中,加入5重量份氯化锌和4重量份氯化铜,45℃搅拌反应40min,透析7h,透析袋孔径为500D,透析液冷冻干燥,制得胶原蛋白肽-Zn-Cu复合物;
S5.玉米蛋白肽-玻尿酸-泛酸复合物的制备:将0.5重量份玻尿酸和0.5重量份泛酸溶于100重量份水中,加入12重量份玉米黄粉蛋白,1000W微波加热至40℃,搅拌反应1h,加入胃蛋白酶,添加量为体系总质量的2wt%,加热至50℃,pH值为8,酶解2h,灭酶,制得玉米蛋白肽-玻尿酸-泛酸复合物;
S6.肽组合物的制备:将7重量份肌肽、5重量份乙酰基四肽-11、3重量份棕榈酰三肽-5,搅拌混合20min,制得肽组合物;
S7.抗皱肽组合物的制备:将10重量份步骤S4制得的胶原蛋白肽-Zn-Cu复合物、7重量份步骤S5制得的玉米蛋白肽-玻尿酸-泛酸复合物、5重量份步骤S6制得的肽组合物混合加入200重量份水中,加入25重量份海藻酸钠,搅拌混合20min,快速膜乳化,所用的膜的孔径为10μm,滴加20重量份5wt%氯化钙溶液,常温固化40min,过滤,洗涤,干燥,制得抗皱肽组合物。
实施例3
本实施例提供一种抗皱肽组合物的制备方法,具体包括以下步骤:
S1.罗非鱼皮胶原蛋白的提取:将17重量份罗非鱼皮洗净,干燥,切块,浸泡在100重量份2.5g/L的NaOH溶液中25min,取出,洗净,浸泡于100重量份2g/L的盐酸溶液中25min,洗净,加入125重量份水中,加入1.5重量份碱性蛋白酶,45℃,pH值为9,酶解1.5h,灭酶,离心,得到罗非鱼皮胶原蛋白溶液;
S2.低热高压脉冲预处理:将步骤S1制得的罗非鱼皮胶原蛋白溶液加热至37℃,在脉冲压力条件下,压力为125MPa,频率为每1min加压处理25s,预处理25min,得到预处理的罗非鱼皮胶原蛋白溶液;
S3.超声波辅助酶解:向100重量份步骤S2制得的预处理的罗非鱼皮胶原蛋白溶液中加入2.5重量份复合酶,600W超声波辅助条件下,37℃,pH值为4,酶解2.5h,灭酶,离心,冷冻干燥,制得胶原蛋白肽;
所述复合酶为菠萝蛋白酶和胃蛋白酶,质量比为6:4;
S4.金属离子螯合:将17重量份步骤S3制得的胶原蛋白肽加入100重量份水中,加入4重量份硝酸锌和3重量份硝酸铜,42℃搅拌反应30min,透析6h,透析袋孔径为400D,透析液冷冻干燥,制得胶原蛋白肽-Zn-Cu复合物;
S5.玉米蛋白肽-玻尿酸-泛酸复合物的制备:将0.35重量份玻尿酸和0.4重量份泛酸溶于100重量份水中,加入11重量份玉米黄粉蛋白,850W微波加热至37℃,搅拌反应1h,加入碱性蛋白酶,添加量为体系总质量的1.5wt%,加热至45℃,pH值为9,酶解1.5h,灭酶,制得玉米蛋白肽-玻尿酸-泛酸复合物;
S6.肽组合物的制备:将6重量份肌肽、4重量份乙酰基四肽-11、2.5重量份棕榈酰三肽-5,搅拌混合20min,制得肽组合物;
S7.抗皱肽组合物的制备:将8.5重量份步骤S4制得的胶原蛋白肽-Zn-Cu复合物、6重量份步骤S5制得的玉米蛋白肽-玻尿酸-泛酸复合物、4重量份步骤S6制得的肽组合物混合加入200重量份水中,加入22重量份海藻酸钠,搅拌混合20min,快速膜乳化,所用的膜的孔径为7μm,滴加20重量份4wt%氯化钙溶液,常温固化35min,过滤,洗涤,干燥,制得抗皱肽组合物。
实施例4
与实施例3相比,不同之处在于,复合酶为单一的菠萝蛋白酶。
实施例5
与实施例3相比,不同之处在于,复合酶为单一的胃蛋白酶。
对比例1
与实施例3相比,不同之处在于,步骤S1中未添加碱性蛋白酶。
具体如下:
S1.罗非鱼皮胶原蛋白的提取:将17重量份罗非鱼皮洗净,干燥,切块,浸泡在100重量份2.5g/L的NaOH溶液中25min,取出,洗净,浸泡于100重量份2g/L的盐酸溶液中25min,洗净,加入125重量份水中,45℃加热处理1.5h,离心,得到罗非鱼皮胶原蛋白溶液。
对比例2
与实施例3相比,不同之处在于,步骤S2中未进行脉冲高压处理。
具体如下:
S2.低热预处理:将步骤S1制得的罗非鱼皮胶原蛋白溶液加热至37℃,预处理25min,得到预处理的罗非鱼皮胶原蛋白溶液。
对比例3
与实施例3相比,不同之处在于,步骤S2中未进行加热处理。
具体如下:
S2.高压脉冲预处理:将步骤S1制得的罗非鱼皮胶原蛋白溶液在脉冲压力条件下,压力为125MPa,频率为每1min加压处理25s,预处理25min,得到预处理的罗非鱼皮胶原蛋白溶液。
对比例4
与实施例3相比,不同之处在于,未进行步骤S2。
具体如下:
S1.罗非鱼皮胶原蛋白的提取:将17重量份罗非鱼皮洗净,干燥,切块,浸泡在100重量份2.5g/L的NaOH溶液中25min,取出,洗净,浸泡于100重量份2g/L的盐酸溶液中25min,洗净,加入125重量份水中,加入1.5重量份碱性蛋白酶,45℃,pH值为9,酶解1.5h,灭酶,离心,得到罗非鱼皮胶原蛋白溶液;
S2.超声波辅助酶解:向100重量份步骤S1制得的罗非鱼皮胶原蛋白溶液中加入2.5重量份复合酶,600W超声波辅助条件下,37℃,pH值为4,酶解2.5h,灭酶,离心,冷冻干燥,制得胶原蛋白肽;
所述复合酶为菠萝蛋白酶和胃蛋白酶,质量比为6:4;
S3.金属离子螯合:将17重量份步骤S2制得的胶原蛋白肽加入100重量份水中,加入4重量份硝酸锌和3重量份硝酸铜,42℃搅拌反应30min,透析6h,透析袋孔径为400D,透析液冷冻干燥,制得胶原蛋白肽-Zn-Cu复合物;
S4.玉米蛋白肽-玻尿酸-泛酸复合物的制备:将0.35重量份玻尿酸和0.4重量份泛酸溶于100重量份水中,加入11重量份玉米黄粉蛋白,850W微波加热至37℃,搅拌反应1h,加入碱性蛋白酶,添加量为体系总质量的1.5wt%,加热至45℃,pH值为9,酶解1.5h,灭酶,制得玉米蛋白肽-玻尿酸-泛酸复合物;
S5.肽组合物的制备:将6重量份肌肽、4重量份乙酰基四肽-11、2.5重量份棕榈酰三肽-5,搅拌混合20min,制得肽组合物;
S6.抗皱肽组合物的制备:将8.5重量份步骤S3制得的胶原蛋白肽-Zn-Cu复合物、6重量份步骤S4制得的玉米蛋白肽-玻尿酸-泛酸复合物、4重量份步骤S5制得的肽组合物混合加入200重量份水中,加入22重量份海藻酸钠,搅拌混合20min,快速膜乳化,所用的膜的孔径为7μm,滴加20重量份4wt%氯化钙溶液,常温固化35min,过滤,洗涤,干燥,制得抗皱肽组合物。
对比例5
与实施例3相比,不同之处在于,步骤S3中未添加复合酶。
具体如下:
S3.超声波辅助处理:向100重量份步骤S2制得的预处理的罗非鱼皮胶原蛋白溶液在600W超声波辅助条件下,37℃,处理2.5h,离心,冷冻干燥,制得胶原蛋白肽。
对比例6
与实施例3相比,不同之处在于,步骤S4中未加入硝酸锌。
具体如下:
S4.金属离子螯合:将17重量份步骤S3制得的胶原蛋白肽加入100重量份水中,加入7重量份硝酸铜,42℃搅拌反应30min,透析6h,透析袋孔径为400D,透析液冷冻干燥,制得胶原蛋白肽-Cu复合物。
对比例7
与实施例3相比,不同之处在于,步骤S4中未加入硝酸铜。
具体如下:
S4.金属离子螯合:将17重量份步骤S3制得的胶原蛋白肽加入100重量份水中,加入7重量份硝酸锌,42℃搅拌反应30min,透析6h,透析袋孔径为400D,透析液冷冻干燥,制得胶原蛋白肽-Zn复合物。
对比例8
与实施例3相比,不同之处在于,未进行步骤S4。
具体如下:
S1.罗非鱼皮胶原蛋白的提取:将17重量份罗非鱼皮洗净,干燥,切块,浸泡在100重量份2.5g/L的NaOH溶液中25min,取出,洗净,浸泡于100重量份2g/L的盐酸溶液中25min,洗净,加入125重量份水中,加入1.5重量份碱性蛋白酶,45℃,pH值为9,酶解1.5h,灭酶,离心,得到罗非鱼皮胶原蛋白溶液;
S2.低热高压脉冲预处理:将步骤S1制得的罗非鱼皮胶原蛋白溶液加热至37℃,在脉冲压力条件下,压力为125MPa,频率为每1min加压处理25s,预处理25min,得到预处理的罗非鱼皮胶原蛋白溶液;
S3.超声波辅助酶解:向100重量份步骤S2制得的预处理的罗非鱼皮胶原蛋白溶液中加入2.5重量份复合酶,600W超声波辅助条件下,37℃,pH值为4,酶解2.5h,灭酶,离心,冷冻干燥,制得胶原蛋白肽;
所述复合酶为菠萝蛋白酶和胃蛋白酶,质量比为6:4;
S4.玉米蛋白肽-玻尿酸-泛酸复合物的制备:将0.35重量份玻尿酸和0.4重量份泛酸溶于100重量份水中,加入11重量份玉米黄粉蛋白,850W微波加热至37℃,搅拌反应1h,加入碱性蛋白酶,添加量为体系总质量的1.5wt%,加热至45℃,pH值为9,酶解1.5h,灭酶,制得玉米蛋白肽-玻尿酸-泛酸复合物;
S5.肽组合物的制备:将6重量份肌肽、4重量份乙酰基四肽-11、2.5重量份棕榈酰三肽-5,搅拌混合20min,制得肽组合物;
S6.抗皱肽组合物的制备:将8.5重量份步骤S3制得的胶原蛋白肽、6重量份步骤S4制得的玉米蛋白肽-玻尿酸-泛酸复合物、4重量份步骤S5制得的肽组合物混合加入200重量份水中,加入22重量份海藻酸钠,搅拌混合20min,快速膜乳化,所用的膜的孔径为7μm,滴加20重量份4wt%氯化钙溶液,常温固化35min,过滤,洗涤,干燥,制得抗皱肽组合物。
对比例9
与实施例3相比,不同之处在于,步骤S5中未添加玻尿酸。
具体如下:
S5.玉米蛋白肽-泛酸复合物的制备:将0.75重量份泛酸溶于100重量份水中,加入11重量份玉米黄粉蛋白,850W微波加热至37℃,搅拌反应1h,加入碱性蛋白酶,添加量为体系总质量的1.5wt%,加热至45℃,pH值为9,酶解1.5h,灭酶,制得玉米蛋白肽-泛酸复合物。
对比例10
与实施例3相比,不同之处在于,步骤S5中未添加泛酸。
具体如下:
S5.玉米蛋白肽-玻尿酸复合物的制备:将0.75重量份玻尿酸溶于100重量份水中,加入11重量份玉米黄粉蛋白,850W微波加热至37℃,搅拌反应1h,加入碱性蛋白酶,添加量为体系总质量的1.5wt%,加热至45℃,pH值为9,酶解1.5h,灭酶,制得玉米蛋白肽-玻尿酸复合物,
对比例11
与实施例3相比,不同之处在于,步骤S5中未添加泛酸和玻尿酸。
具体如下:
S5.玉米蛋白肽的制备:向100重量份水中加入11重量份玉米黄粉蛋白,850W微波加热至37℃,搅拌反应1h,加入碱性蛋白酶,添加量为体系总质量的1.5wt%,加热至45℃,pH值为9,酶解1.5h,灭酶,制得玉米蛋白肽。
对比例12
与实施例3相比,不同之处在于,步骤S5中未添加碱性蛋白酶。
具体如下:
S5.玉米蛋白-玻尿酸-泛酸复合物的制备:将0.35重量份玻尿酸和0.4重量份泛酸溶于100重量份水中,加入11重量份玉米黄粉蛋白,850W微波加热至37℃,搅拌反应2.5h,制得玉米蛋白-玻尿酸-泛酸复合物。
对比例13
与实施例3相比,不同之处在于,步骤S7中未添加胶原蛋白肽-Zn-Cu复合物。
具体如下:
S7.抗皱肽组合物的制备:将6重量份步骤S5制得的玉米蛋白肽-玻尿酸-泛酸复合物、4重量份步骤S6制得的肽组合物混合加入200重量份水中,加入22重量份海藻酸钠,搅拌混合20min,快速膜乳化,所用的膜的孔径为7μm,滴加20重量份4wt%氯化钙溶液,常温固化35min,过滤,洗涤,干燥,制得抗皱肽组合物。
对比例14
与实施例3相比,不同之处在于,步骤S7中未添加玉米蛋白肽-玻尿酸-泛酸复合物。
具体如下:
S7.抗皱肽组合物的制备:将8.5重量份步骤S4制得的胶原蛋白肽-Zn-Cu复合物、4重量份步骤S6制得的肽组合物混合加入200重量份水中,加入22重量份海藻酸钠,搅拌混合20min,快速膜乳化,所用的膜的孔径为7μm,滴加20重量份4wt%氯化钙溶液,常温固化35min,过滤,洗涤,干燥,制得抗皱肽组合物。
对比例15
与实施例3相比,不同之处在于,步骤S7中未添加肽组合物。
具体如下:
S7.抗皱肽组合物的制备:将8.5重量份步骤S4制得的胶原蛋白肽-Zn-Cu复合物、6重量份步骤S5制得的玉米蛋白肽-玻尿酸-泛酸复合物混合加入200重量份水中,加入22重量份海藻酸钠,搅拌混合20min,快速膜乳化,所用的膜的孔径为7μm,滴加20重量份4wt%氯化钙溶液,常温固化35min,过滤,洗涤,干燥,制得抗皱肽组合物。
测试例1细胞毒性测试
将本发明实施例1-5和对比例1-15制得的抗皱肽组合物溶于无血清DMEM(dulbecco'smodified eagle medium)培养液中,浓度为100mg/mL的混悬液,以无血清DMEM培养液为阴性对照样组,每个样品设置3个重复。
MTT检测:将生长良好的L929细胞调整浓度为1×105个/mL,按照100μL/孔接种至96孔板,在37℃,5%CO2环境中,无血清DMEM培养液培养24h。贴壁生长后,吸弃有培养液,按照实验分组方案每孔加入100μL样品溶液,阴性对照组继续无血清DMEM培养,常规培养48h。向细胞培养板中每孔加入5mg/mL MTT(3-(4,5-dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2-H-tetrazolium bromide,Thiazolyl Blue Tetrazolium Bromide,3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐)溶液20μL,置培养箱内避光孵育4h。吸弃上清,每孔加入二甲基亚砜100μL。细胞培养板,50r/min,振荡20min,在570nm波长处测定吸光度。
按下式计算各组细胞相对存活率(%)。结果如表1所示。
存活率(%)=An/A0
式中,An为实验组吸光度,A0为阴性对照组吸光度。
表1
组别 | 细胞相对存活率(%) |
实施例1 | 99.7 |
实施例2 | 99.2 |
实施例3 | 99.8 |
实施例4 | 99.1 |
实施例5 | 99.3 |
对比例1 | 98.9 |
对比例2 | 99.0 |
对比例3 | 97.9 |
对比例4 | 98.2 |
对比例5 | 97.2 |
对比例6 | 98.4 |
对比例7 | 96.8 |
对比例8 | 97.5 |
对比例9 | 97.1 |
对比例10 | 95.6 |
对比例11 | 96.8 |
对比例12 | 97.7 |
对比例13 | 95.4 |
对比例14 | 96.2 |
对比例15 | 97.3 |
根据ISO 10993-5:2009所述的毒性分级评价方法,细胞存活率大于70%,因此,可以认为本发明制得的抗皱肽组合物无毒性。
测试例2抗氧化测试
将本发明实施例1-5和对比例1-15制得的抗皱肽组合物加入水中,配置成1g/L的混悬液,加热至37℃处理20min,制得样品溶液。
1、DPPH自由基清除能力的测定
取2mL样品溶液与2mL 0.1mmol/L DPPH(1,1-二苯基-2-三硝基苯肼)乙醇溶液迅速混匀,在25℃下避光静置30min,于517nm处检测吸光度值,记为A1;
取2mL蒸馏水与2mL 0.1mmol/L DPPH乙醇溶液迅速混匀,在25℃下避光静置30min,于517nm处检测吸光度值,记为A2;
取2mL样品溶液与2mL蒸馏水迅速混匀,在25℃下避光静置30min,于517nm处检测吸光度值,记为A0。
以1g/L的抗坏血酸作为对照。
DPPH自由基清除率的计算公式为:
DPPH自由基清除率(%)=1-(A1-A0)/A2×100%
2、·OH自由基清除能力的测定
取1mL样品溶液,依次加入0.5mL 9mmol/L FeSO4溶液、1mL9mmol/L水杨酸乙醇溶液、1mL 4.4mmol/L H2O2溶液与2mL去离子水,迅速混匀,在37℃下静置60min,于510nm处检测吸光度值,记为A1;
取1mL去离子水,依次加入0.5mL 9mmol/L FeSO4溶液、1mL9mmol/L水杨酸乙醇溶液、1mL 4.4mmol/L H2O2溶液与2mL去离子水,迅速混匀,在37℃下静置60min,于510nm处检测吸光度值,记为A2;
取1mL样品溶液,依次加入0.5mL 9mmol/L FeSO4溶液、1mL 4.4mmol/L H2O2溶液与2mL去离子水,迅速混匀,在37℃下静置60min,于510nm处检测吸光度值,记为A0。
以1g/L的抗坏血酸作为对照。
·OH自由基清除率的计算公式为:
·OH自由基清除率(%)=1-(A1-A0)/A2×100%
结果见表2。
表2
由上表可知,本发明实施例1-3制得的抗皱组合物具有较好的抗氧化效果。
测试例3Ⅲ型胶原蛋白的合成促进实验
将本发明实施例1-5和对比例1-15制得的抗皱肽组合物加入水中,配置成1g/L的混悬液,加热至37℃处理20min,制得样品溶液。
将在含12%FBS(胎牛血清)的DMEM(dulbecco's modified eagle medium)培养基中培养的人成纤维细胞(购于普诺塞生命科技有限公司)接种于96孔板中,细胞附着后,用含有0.2%FBS和250μM抗坏血酸磷酸镁的DMEM培养基进行培养基交换,分别加入100μL样品溶液(对照组添加100μL去离子水),混合均匀,培养72h后,收集上清,离心,采用试剂盒测定所得上清中的Ⅲ型胶原蛋白的含量,计算Ⅲ型胶原蛋白的合成促进率,公式如下:
Ⅲ型胶原蛋白的合成促进率(%)=(W1-W0)/W0*100%
W1:添加样品后的Ⅲ型胶原蛋白生成量
W0:未添加样品的Ⅲ型胶原蛋白生成量
结果见表3。
表3
由上表可知,本发明实施例1-3制得的抗衰老乳液抗皱组合物具有较好的促进Ⅲ型胶原蛋白的效果。
测试例4
将本发明实施例1-5和对比例1-15制得的抗皱肽组合物加入水中,配置成0.5g/mL的混悬液,加热至37℃处理20min,制得样品溶液。
健康女性志愿者100名,年龄32-45岁,志愿者排除条件符合《化妆品接触性皮炎诊断标准及处理原则》纳入、排除标准。受试者每日早晚洁面后,每次使用1mL样品溶液,轻轻按摩至吸收,实验期间停用其他抗皱护肤品,测试部位面部左右脸颊部位。实验测试时,清水清洗受试部位,在温度25℃±1.0℃,相对湿度55%±5%RH的恒温恒湿环境中,静坐30min之后进行数据采集。周期为28天,分别在第0天、第28天进行皮肤测试。
变化率=(第28天测试值-第0天初始值)/第0天初始值×100%
结果见表4。
表4
由上表可知,本发明实施例1-3制得的抗皱肽组合物具有较好的保湿、淡化细纹、改善皮肤弹性的效果。
实施例4、5与实施例3相比,复合酶为单一的菠萝蛋白酶或胃蛋白酶。对比例5与实施例3相比,步骤S3中未添加复合酶,抗氧化效果下降,Ⅲ型胶原蛋白的合成促进效果下降,淡化细纹、改善皮肤弹性的效果下降。本发明采用超声波辅助酶解处理,超声波的辅助处理促进酶的扩散,增加酶解的接触频率,添加的复合酶包括菠萝蛋白酶和胃蛋白酶,能够快速水解碱性氨基酸(例如精氨酸)、酸性氨基酸、或芳香族氨基酸(例如苯丙氨酸、酪氨酸)的羧基侧上的肽链,从而获得肽链较短的活性胶原蛋白肽产物,该制得的胶原蛋白肽的氨基酸序列呈现(G-X-Y)n周期性排列,G为甘氨酸,X多为脯氨酸,由于其含有丰富的甘氨酸和脯氨酸,因此具备良好的锌离子和铜离子的螯合能力。
对比例1与实施例3相比,步骤S1中未添加碱性蛋白酶,抗氧化效果下降。本发明首先将罗非鱼皮经过碱液浸泡,去除杂蛋白和色素,然后再酸液中溶胀,使得大部分胶原蛋白便于溶出,进一步加入蛋白酶酶解,促进鱼皮中胶原蛋白的溶出,以及酶解成小分子活性胶原蛋白。
对比例2与实施例3相比,步骤S2中未进行脉冲高压处理。对比例3与实施例3相比,步骤S2中未进行加热处理。对比例4与实施例3相比,未进行步骤S2。抗氧化效果下降,Ⅲ型胶原蛋白的合成促进效果下降,淡化细纹、改善皮肤弹性的效果下降。本发明中,采用低热处理,可以适当的改变蛋白质的构象,暴露酶解的位点,并采用超高压脉冲处理,通过采用超高压脉冲处理,可以解离胶原蛋白中的非共价键、离子键、疏水键和氢键,压力的变化引起蛋白质的局部或整体变化,改变稳定天然蛋白质折叠构象。还可以使蛋白质体系分散,提高后续的酶解效率和产品活性。在相同的压力会立即且均等地施加给食品物料,与传统的热处理工艺相比,超高压技术能保证食品的质地、形状、色泽,还能保证食品的风味和营养特性;在超高压处理过程中,食品物料会随着压力的方向发生移动,其体积减小,食品体系的平衡和体积变化速率、分子构象都发生一定程度的改变。
对比例6、7与实施例3相比,步骤S4中未加入硝酸锌或硝酸铜。对比例8与实施例3相比,未进行步骤S4。抗氧化效果下降,Ⅲ型胶原蛋白的合成促进效果下降,淡化细纹、改善皮肤弹性的效果下降。锌在结构、催化和调节等方面发挥重要作用,锌能使加速细胞的修复、再生,维持皮肤的弹性与活力。铜元素刺激真皮胶原纤维,有助于抗自由基的活动。丰富铜元素,能够活化肌肤中天然的抗氧化酶,从而加强肌细胞的锁水能力。因此,通过将胶原蛋白肽与铜盐、锌盐进行螯合作用形成复合物后,制得的胶原蛋白肽-Zn-Cu复合物有很好的抗氧化、抗衰老、美白等活性,能够作为重塑皮肤组织的激活剂,促进成纤维细胞内金属蛋白酶MMP1、金属蛋白酶MMP2和金属蛋白酶抑制剂TIMP1和TIMP2的表达,从而促进胶原蛋白和弹性蛋白的生成,有效促进抚平皮肤皱纹,调控表皮层细胞增殖,促进胶原蛋白、弹性蛋白及纤连蛋白的合成及分泌,从而加速皮肤的修复,其胶原蛋白肽部分还可以增强胶原蛋白的产生并抑制降解胶原蛋白的酶,预防和修复皮肤衰老,同时还具有一定的有改善光损伤、皮肤老化的作用。
对比例9、10与实施例3相比,步骤S5中未添加玻尿酸或泛酸。对比例11与实施例3相比,步骤S5中未添加泛酸和玻尿酸。对比例12与实施例3相比,步骤S5中未添加碱性蛋白酶。对比例14与实施例3相比,步骤S7中未添加玉米蛋白肽-玻尿酸-泛酸复合物。抗氧化效果下降,Ⅲ型胶原蛋白的合成促进效果下降,保湿、淡化细纹、改善皮肤弹性的效果下降。玉米黄粉蛋白是玉米籽粒通过湿磨法加工制备玉米淀粉后分离出的蛋白质水,经过浓缩后脱水得到的粉末,其游离氨基酸可以与泛酸、玻尿酸中的羰基结合形成功能性化合物,从而提高了热稳定性和溶解性,以及生理活性。玻尿酸具有高亲水性和高黏弹性,对皮肤有保湿、营养、修复等多种作用,是重要的化妆品原料。但其渗透性差,稳定性不高,应用范围受到限制。另外,泛酸不仅具有良好的保湿作用,同时还具有一定的抗炎和修复肌肤的功效,外用能缓解一些肌肤敏感状况,促进愈合,但是,简单的补充泛酸容易造成泛酸的流失从而对于皮肤的改善效果不佳。本发明通过将玉米黄粉蛋白与玻尿酸和泛酸进行混合反应,不仅提高了玻尿酸的稳定性和渗透性,改善了皮肤对泛酸的吸收率,同时,经过酶解后得到的玉米蛋白肽-玻尿酸-泛酸复合物还能起到很好的抗氧化和抑制糖基化和氧化应激来改善衰老,此外还能促进I型胶原蛋白的增加和金属蛋白酶MMPs的减少的作用,从而起到一定的抗衰老作用。泛酸和玻尿酸的加入具有协同增效的作用。
对比例13与实施例3相比,步骤S7中未添加胶原蛋白肽-Zn-Cu复合物。抗氧化效果下降,Ⅲ型胶原蛋白的合成促进效果下降,淡化细纹、改善皮肤弹性的效果下降。
对比例15与实施例3相比,步骤S7中未添加肽组合物。抗氧化效果下降,Ⅲ型胶原蛋白的合成促进效果下降,淡化细纹、改善皮肤弹性的效果下降。人体生理代谢的过程会不断产生各种自由基,适量的自由基有益于人体生理进程,可以帮助传递维持能量。过量的活性氧和活性氮会导致氧化应激,使蛋白质和酶等失去活性,进而加速细胞衰亡。本发明肽组合物具有清除自由基,提高机体抗氧化能力,促进胶原纤维及胶原蛋白生成的作用。活性肽因其分子量小,结构简单,具有活性官能团,能够有效捕捉人体内的游离自由基,从而延缓自由基对人体的侵害,延缓细胞衰老。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已,并不用以限制本发明,凡在本发明的精神和原则之内,所作的任何修改、等同替换、改进等,均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (10)
1.一种抗皱肽组合物的制备方法,其特征在于,将罗非鱼依次经过碱液、酸液浸泡,蛋白酶酶解,低热高压脉冲预处理,超声波辅助酶解处理,制得胶原蛋白肽,与可溶性锌盐和可溶性铜盐反应,制得胶原蛋白肽-Zn-Cu复合物,将玉米黄粉蛋白与玻尿酸和泛酸混合反应,酶解,制得玉米蛋白肽-玻尿酸-泛酸复合物,与胶原蛋白肽-Zn-Cu复合物、肽组合物混合包埋于微球中,制得抗皱肽组合物。
2.根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:
S1.罗非鱼皮胶原蛋白的提取:将罗非鱼皮洗净,干燥,切块,浸泡在碱液中去除杂蛋白的色素,取出,洗净,浸泡于酸液中溶胀,洗净,加入水中,加入蛋白酶,酶解,灭酶,离心,得到罗非鱼皮胶原蛋白溶液;
S2.低热高压脉冲预处理:将步骤S1制得的罗非鱼皮胶原蛋白溶液加热,在一定脉冲压力条件下预处理,得到预处理的罗非鱼皮胶原蛋白溶液;
S3.超声波辅助酶解:向步骤S2制得的预处理的罗非鱼皮胶原蛋白溶液中加入复合酶,超声波辅助条件下,酶解,灭酶,离心,冷冻干燥,制得胶原蛋白肽;
S4.金属离子螯合:将步骤S3制得的胶原蛋白肽加入水中,加入可溶性锌盐和可溶性铜盐,搅拌反应,透析,透析液冷冻干燥,制得胶原蛋白肽-Zn-Cu复合物;
S5.玉米蛋白肽-玻尿酸-泛酸复合物的制备:将玻尿酸和泛酸溶于水中,加入玉米黄粉蛋白,微波加热搅拌反应,加入酶加热酶解,灭酶,制得玉米蛋白肽-玻尿酸-泛酸复合物;
S6.肽组合物的制备:将肌肽、乙酰基四肽-11、棕榈酰三肽-5混合均匀,制得肽组合物;
S7.抗皱肽组合物的制备:将步骤S4制得的胶原蛋白肽-Zn-Cu复合物、步骤S5制得的玉米蛋白肽-玻尿酸-泛酸复合物、步骤S6制得的肽组合物混合加入水中,加入海藻酸钠,搅拌混合均匀,快速膜乳化,滴加氯化钙溶液,常温固化,过滤,洗涤,干燥,制得抗皱肽组合物。
3.根据权利要求2所述的制备方法,其特征在于,步骤S1中所述碱液为2-3g/L的NaOH或KOH溶液,所述酸液为1-3g/L的盐酸或硫酸溶液,所述罗非鱼皮、水、蛋白酶的质量比为15-20:100-150:1-2,所述蛋白酶为碱性蛋白酶或胰蛋白酶,所述酶解的温度为40-50℃,pH值为8-10,时间为1-2h。
4.根据权利要求2所述的制备方法,其特征在于,步骤S2中所述加热的温度为35-40℃,所述脉冲压力的压力为100-150MPa,频率为每1min加压处理20-30s,预处理时间为20-30min;步骤S3中所述预处理的罗非鱼皮胶原蛋白溶液和复合酶的质量比为100:2-3,所述复合酶选自中性蛋白酶、胃蛋白酶、碱性蛋白酶、胰蛋白酶、糜蛋白酶、木瓜蛋白酶、无花果蛋白酶、菠萝蛋白酶、风味蛋白酶中的至少两种,优选地,为菠萝蛋白酶和胃蛋白酶,质量比为5-7:4,所述超声波的功率为500-700W,所述酶解的温度为35-38℃,pH值为3-5,时间为2-3h。
5.根据权利要求2所述的制备方法,其特征在于,步骤S4中所述胶原蛋白肽、可溶性锌盐和可溶性铜盐的质量比为15-20:3-5:2-4,所述可溶性锌盐选自氯化锌、硫酸锌、硝酸锌中的至少一种;所述可溶性铜盐选自氯化铜、硫酸铜、硝酸铜中的至少一种;所述搅拌反应的温度为40-45℃,时间为20-40min,所述透析的透析袋孔径为300-500D,时间为5-7h。
6.根据权利要求2所述的制备方法,其特征在于,步骤S5中所述玻尿酸、泛酸、玉米黄粉蛋白的质量比为0.2-0.5:0.3-0.5:10-12,所述微波加热搅拌反应的微波功率为700-1000W,加热的温度为35-40℃,时间为0.5-1h,所述酶为碱性蛋白酶或胰蛋白酶,添加量为体系总质量的1-2wt%,所述加热酶解的温度为40-50℃,pH值为8-10,时间为1-2h。
7.根据权利要求2所述的制备方法,其特征在于,步骤S6中所述肌肽、乙酰基四肽-11、棕榈酰三肽-5的质量比为5-7:3-5:2-3。
8.根据权利要求2所述的制备方法,其特征在于,步骤S7中所述胶原蛋白肽-Zn-Cu复合物、玉米蛋白肽-玻尿酸-泛酸复合物、肽组合物、海藻酸钠的质量比为7-10:5-7:3-5:20-25,所述快速膜乳化用的膜的孔径为5-10μm,所述氯化钙溶液的浓度为3-5wt%,所述常温固化的时间为30-40min。
9.根据权利要求2所述的制备方法,其特征在于,具体包括以下步骤:
S1.罗非鱼皮胶原蛋白的提取:将15-20重量份罗非鱼皮洗净,干燥,切块,浸泡在100重量份2-3g/L的NaOH或KOH溶液中20-30min,取出,洗净,浸泡于100重量份1-3g/L的盐酸或硫酸溶液中20-30min,洗净,加入100-150重量份水中,加入1-2重量份蛋白酶,40-50℃,pH值为8-10,酶解1-2h,灭酶,离心,得到罗非鱼皮胶原蛋白溶液;
S2.低热高压脉冲预处理:将步骤S1制得的罗非鱼皮胶原蛋白溶液加热至35-40℃,在脉冲压力条件下,压力为100-150MPa,频率为每1min加压处理20-30s,预处理20-30min,得到预处理的罗非鱼皮胶原蛋白溶液;
S3.超声波辅助酶解:向100重量份步骤S2制得的预处理的罗非鱼皮胶原蛋白溶液中加入2-3重量份复合酶,500-700W超声波辅助条件下,35-38℃,pH值为3-5,酶解2-3h,灭酶,离心,冷冻干燥,制得胶原蛋白肽;
所述复合酶为菠萝蛋白酶和胃蛋白酶,质量比为5-7:4;
S4.金属离子螯合:将15-20重量份步骤S3制得的胶原蛋白肽加入100重量份水中,加入3-5重量份可溶性锌盐和2-4重量份可溶性铜盐,40-45℃搅拌反应20-40min,透析5-7h,透析袋孔径为300-500D,透析液冷冻干燥,制得胶原蛋白肽-Zn-Cu复合物;
S5.玉米蛋白肽-玻尿酸-泛酸复合物的制备:将0.2-0.5重量份玻尿酸和0.3-0.5重量份泛酸溶于100重量份水中,加入10-12重量份玉米黄粉蛋白,700-1000W微波加热至35-40℃,搅拌反应0.5-1h,加入酶,添加量为体系总质量的1-2wt%,加热至40-50℃,pH值为8-10,酶解1-2h,灭酶,制得玉米蛋白肽-玻尿酸-泛酸复合物;
S6.肽组合物的制备:将5-7重量份肌肽、3-5重量份乙酰基四肽-11、2-3重量份棕榈酰三肽-5混合均匀,制得肽组合物;
S7.抗皱肽组合物的制备:将7-10重量份步骤S4制得的胶原蛋白肽-Zn-Cu复合物、5-7重量份步骤S5制得的玉米蛋白肽-玻尿酸-泛酸复合物、3-5重量份步骤S6制得的肽组合物混合加入200重量份水中,加入20-25重量份海藻酸钠,搅拌混合均匀,快速膜乳化,所用的膜的孔径为5-10μm,滴加20重量份3-5wt%氯化钙溶液,常温固化30-40min,过滤,洗涤,干燥,制得抗皱肽组合物。
10.一种如权利要求1-9任一项所述的制备方法制得的抗皱肽组合物。
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