CN108852868B - 具有除皱和抗衰老功效的组合物及其制备方法与应用 - Google Patents

具有除皱和抗衰老功效的组合物及其制备方法与应用 Download PDF

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Abstract

本发明涉及一种具有除皱和抗衰老功效的组合物及其制备方法与应用，组合物的原料组分按重量份计，包括：水溶性富勒烯50～60重量份、油溶性富勒烯15～25重量份、苦瓜提取物8～10重量份和玫瑰提取物1～3重量份；优选还包括藻类发酵物10～15重量份。本发明采用水溶性和油溶性富勒烯、经过特定工艺制备得到的提取物等物质作为原料组分，制备得到的组合物能有效的清除活性氧自由基、改善微循环，活化皮肤细胞、预防衰老；原料中各组分间有协同增效的作用，具有显著的滋养保湿、淡化皱纹、改善松弛、预防衰老、提亮肤色等功效，让肌肤充满活力。

Description

具有除皱和抗衰老功效的组合物及其制备方法与应用
技术领域
本发明涉及化妆品技术领域，具体涉及一种具有除皱和抗衰老功效的组合物及其制备方法与应用。
背景技术
衰老是人体机能变缓的直接表现，也是一种自然的过程。皮肤衰老除了受年龄、遗传等客观因素影响外，还受日光、环境、健康等多种因素影响。过分日晒或暴晒，不但加速皮肤衰老，还易产生色斑；长期生活在污染严重的环境中或过多接触对皮肤有害的化学物质，都会使皮肤受损，加速衰老；营养不良、精神不振、疾病缠身，皮肤更易过早衰老。特别是现代人生活压力大，加班熬夜、长时间对电脑、吸烟、睡眠不足、长时间呆在空调房、饮酒、用眼过度等成为了生活常态，肌肤各层会累积大量由内在或外在因素所引起的细胞分子毒素，会导致肌肤细胞窒息，并影响了肌肤自身的毒素清除能力，从而导致皮肤肤色暗沉、色斑沉积、缺乏光泽并加速肌肤衰老。
研究发现自由基会损伤人体细胞，从而引起众多疾病，加速人体衰老。自由基从生成到淬灭，深刻影响着脂褐素的形成、线粒体DNA的突变、诱导细胞凋亡和蛋白质的合成，自由基与衰老间有一定的关系，这在为人类减缓自身衰老方面提供了一定的科学依据，抗氧化成为了近几年来美容界的热门话题，通过补充抗氧化物质可以帮助减少自由基的产生。
现有的化妆品普遍存在活性成分易氧化、效果持续性差等缺陷。因此，研究发开出一种抗氧化性强，能够有效清除自由基、延缓衰老的化妆品是目前研究的重要方向。
发明内容
针对现有技术中的缺陷，本发明目的在于提供一种具有除皱和抗衰老功效的组合物，该组合物能有效的清除活性氧自由基、改善微循环，活化皮肤细胞、预防衰老；原料中各组分间有协同增效的作用，具有显著的滋养保湿、淡化皱纹、改善松弛、预防衰老、提亮肤色等功效，让肌肤充满活力。
为实现上述目的，本发明提供的技术方案为：
本发明提供了一种具有除皱和抗衰老功效的组合物，原料组分按重量份计，包括：水溶性富勒烯50～60重量份、油溶性富勒烯15～25重量份、苦瓜提取物8～10重量份和玫瑰提取物1～3重量份。
优选地，组合物的原料组分还包括藻类发酵物10～15重量份。
藻类发酵物的制备方法包括步骤：S1：将石莼藻干粉和螺旋藻干粉混合均匀，然后加入水，得到发酵预混物；S2：在发酵预混物中加入第一发酵菌剂进行一次发酵，得到第一发酵产物；S3：在第一发酵产物中加入小球藻干粉和第二发酵菌剂进行二次发酵，得到第二发酵产物；S4：将第二发酵产物灭菌后，进行分离纯化，得到藻类发酵物。
S1具体包括步骤：将石莼藻干粉和螺旋藻干粉混合均匀，然后加入蒸馏水超声分散溶解，然后调节pH值至6.5～6.8，121℃灭菌20min，灭菌完毕后冷却至室温，得到发酵预混物；其中，蒸馏水的体积用量以石莼藻干粉质量计为30～50mL/g，石莼藻干粉和螺旋藻干粉的质量比为1：(1.5～2.3)；超声的功率为250～350W，超声的频率为25～30kHz，超声的温度为20～30℃，超声的时间为40～50min。
S2中，第一发酵菌剂包括枯草芽孢杆菌和纳豆芽孢杆菌，第一发酵菌剂的培养方法包括步骤：将枯草芽孢杆菌和纳豆芽孢杆菌接种至培养基中进行活化培养，得到第一发酵菌剂；其中，培养基的成分包括：牛肉膏0.2％，蛋白胨0.8％，葡萄糖0.2％，氯化钠0.5％，琼脂1.5％，余量为蒸馏水，pH值为6.7；制备得到的第一发酵菌剂中：枯草芽孢杆菌的浓度为1×(108～109)CFU/g，纳豆芽孢杆菌的浓度为1×(105～106)CFU/g；第一发酵菌剂的接种量为4％～6％；一次发酵的温度为30～35℃，一次发酵是在100～150r/min的摇床转速下发酵58～70h。
S3中，石莼藻干粉和小球藻干粉的质量比为1：(0.3～0.5)；第二发酵菌剂包括枯草芽孢杆菌和米曲霉，第二发酵菌剂的培养方法包括步骤：将枯草芽孢杆菌和米曲霉接种至培养基中进行活化培养，得到第二发酵菌剂；其中，培养基的成分包括：牛肉膏0.2％，蛋白胨0.8％，葡萄糖0.2％，氯化钠0.5％，琼脂1.5％，余量为蒸馏水，pH值为6.7；制备得到的第二发酵菌剂中：枯草芽孢杆菌的浓度为1×(106～107)CFU/g，米曲霉的浓度为1×(108～109)CFU/g；第二发酵菌剂的接种量为7％～10％；二次发酵的温度为30～35℃，二次发酵是在100～150r/min的摇床转速下发酵42～48h。
S4中，分离纯化具体包括步骤：将灭菌后的第二发酵产物6500～7000r/min离心分离25～30min，然后取上清液，将上清液浓缩后冷冻干燥。
苦瓜提取物的制备方法包括步骤：将苦瓜和水以1:(3～4)的质量比混合后进行打浆，得到浆液；将浆液的pH值调节至4.0～4.2，然后加入复合酶，42～48℃进行酶解90～100分钟，得到酶解液；将酶解液过滤，收集滤液，将滤液减压浓缩至干，得到苦瓜提取物；其中，复合酶的质量是浆液的质量的0.04％～0.06％，复合酶包括质量比为1:(0.4～0.6):(1.3～1.5)的果胶甲酯酶、纤维素酶和木聚糖酶；
玫瑰提取物的制备方法包括步骤：将玫瑰放入5～7倍质量的体积分数为25％～35％的乙醇水溶液中，50～60℃浸泡4～8小时后，超声提取30～40分钟，超声提取的功率为200～250W，超声提取的温度为35～40℃，提取完毕后过滤，收集滤液，将滤液减压浓缩至干，得到玫瑰提取物。
本发明还提供了具有除皱和抗衰老功效的组合物的制备方法，包括步骤：将所有原料组分混合均匀，得到具有除皱和抗衰老功效的组合物。
本发明还保护具有除皱和抗衰老功效的组合物在制备化妆品中的应用。
化妆品包括但不限于面霜、眼霜、乳液、精华液和化妆水；化妆品的形式包括但不限于膏霜剂、乳液、溶液剂、凝胶剂和气雾剂。上述各种剂型的化妆品均可以按照化妆品领域的常规方法制备。
本发明提供的技术方案，具有如下的有益效果：(1)本发明采用水溶性和油溶性富勒烯、经过特定工艺制备得到的藻类发酵物等物质作为原料组分，制备得到的组合物能有效的清除活性氧自由基、改善微循环，活化皮肤细胞、预防衰老；原料中各组分间有协同增效的作用，具有显著的滋养保湿、淡化皱纹、改善松弛、预防衰老、提亮肤色等功效，让肌肤充满活力；(2)本发明采用的富勒烯的多个P轨道构成的大π键共轭体系，使得其具有较强的接受电子的能力，因其独特的结构和理化性质，使其具有优异的清除自由基性能，同时还表现出优异的抗氧化性能；富勒烯可以消除细胞内的活性氧，抑制线粒体的去极化、半胱氨酸蛋白酶的激活、细胞膜上磷脂酰丝氨酸的曝光以及DNA的分裂，富勒烯表现出保护细胞不被氧化凋亡的作用；通过防御UVA对皮肤结构，细胞核和胶原纤维的破坏以及向人体皮肤组织的渗透来起到抗氧化作用，能够亲和自由基；(3)本发明制备得到的组合物可以用于制备面霜、眼霜、乳液、精华液和化妆水等，化妆品的形式可以是膏霜剂、乳液、溶液剂、凝胶剂和气雾剂等，应用广泛，制备方法简单。
本发明的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变得明显，或通过本发明的实践了解到。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例，对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述。以下实施例仅用于更加清楚地说明本发明的技术方案，因此只是作为示例，而不能以此来限制本发明的保护范围。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为自常规商店购买得到的。以下实施例中的定量试验，均设置三次重复实验，数据为三次重复实验的平均值或平均值±标准差。
制备本发明具有除皱和抗衰老功效的组合物的各原料组分是按照重量份作为配比，在生产时可按照相应的比例增大或减少，如大规模生产可以千克或以吨为单位，小规模生产也可以克为单位，重量可以增大或减小，但各组成之间的质量配比比例不变。
本发明提供一种具有除皱和抗衰老功效的组合物，原料组分按重量份计，包括：水溶性富勒烯50～60重量份、油溶性富勒烯15～25重量份、苦瓜提取物8～10重量份和玫瑰提取物1～3重量份；
在本发明的进一步实施方式中，原料组分还包括：藻类发酵物10～15重量份。
其中，藻类发酵物的制备方法包括步骤：
S1：将石莼藻干粉和螺旋藻干粉以1：(1.5～2.3)的质量比混合均匀，然后加入蒸馏水，超声分散溶解，然后调节pH值至6.5～6.8，121℃灭菌20min，灭菌完毕后冷却至室温，得到发酵预混物；其中，蒸馏水的体积用量以石莼藻干粉质量计为30～50mL/g；超声的功率为250～350W，超声的频率为25～30kHz，超声的温度为20～30℃，超声的时间为40～50min；
S2：在发酵预混物中加入第一发酵菌剂，第一发酵菌剂的接种量为4％～6％，然后在100～150r/min的摇床转速下，30～35℃发酵58～70h，得到第一发酵产物；其中，第一发酵菌剂包括枯草芽孢杆菌和纳豆芽孢杆菌，第一发酵菌剂的培养方法包括步骤：将枯草芽孢杆菌和纳豆芽孢杆菌接种至培养基中进行活化培养，得到第一发酵菌剂；培养基的成分包括：牛肉膏0.2％，蛋白胨0.8％，葡萄糖0.2％，氯化钠0.5％，琼脂1.5％，余量为蒸馏水，pH值为6.7；制备得到的第一发酵菌剂中：枯草芽孢杆菌的浓度为1×(108～109)CFU/g，纳豆芽孢杆菌的浓度为1×(105～106)CFU/g；
S3：在第一发酵产物中加入小球藻干粉和第二发酵菌剂，第二发酵菌剂的接种量为7％～10％，然后在100～150r/min的摇床转速下，30～35℃发酵42～48h，得到第二发酵产物；其中，石莼藻干粉和小球藻干粉的质量比为1：(0.3～0.5)；第二发酵菌剂包括枯草芽孢杆菌和米曲霉，第二发酵菌剂的培养方法包括步骤：将枯草芽孢杆菌和米曲霉接种至培养基中进行活化培养，得到第二发酵菌剂；培养基的成分包括：牛肉膏0.2％，蛋白胨0.8％，葡萄糖0.2％，氯化钠0.5％，琼脂1.5％，余量为蒸馏水，pH值为6.7；制备得到的第二发酵菌剂中：枯草芽孢杆菌的浓度为1×(106～107)CFU/g，米曲霉的浓度为1×(108～109)CFU/g；
S4：将第二发酵产物灭菌后，6500～7000r/min离心分离25～30min，然后取上清液，将上清液浓缩后冷冻干燥，得到藻类发酵物。
苦瓜提取物的制备方法包括步骤：将苦瓜和水以1:(3～4)的质量比混合后进行打浆，得到浆液；将浆液的pH值调节至4.0～4.2，然后加入复合酶，42～48℃进行酶解90～100分钟，得到酶解液；将酶解液过滤，收集滤液，将滤液减压浓缩至干，得到苦瓜提取物；其中，复合酶的质量是浆液的质量的0.04％～0.06％，复合酶包括质量比为1:(0.4～0.6):(1.3～1.5)的果胶甲酯酶、纤维素酶和木聚糖酶；
玫瑰提取物的制备方法包括步骤：将玫瑰放入5～7倍质量的体积分数为25％～35％的乙醇水溶液中，50～60℃浸泡4～8小时后，超声提取30～40分钟，超声提取的功率为200～250W，超声提取的温度为35～40℃，提取完毕后过滤，收集滤液，将滤液减压浓缩至干，得到玫瑰提取物。
另外，本发明还提供了上述具有除皱和抗衰老功效的组合物的制备方法，包括如下步骤：
将所有原料组分混合均匀，得到具有除皱和抗衰老功效的组合物。
下面结合具体实施例对本发明提供的技术方案作进一步说明。
实施例1
本实施例提供一种具有除皱和抗衰老功效的组合物，原料组分按重量份计，包括：水溶性富勒烯55重量份、油溶性富勒烯22重量份、苦瓜提取物9重量份和玫瑰提取物2重量份；
其中，苦瓜提取物的制备方法包括步骤：将苦瓜和水以1:3.5的质量比混合后进行打浆，得到浆液；将浆液的pH值调节至4.1，然后加入复合酶，45℃进行酶解95分钟，得到酶解液；将酶解液过滤，收集滤液，将滤液减压浓缩至干，得到苦瓜提取物；其中，复合酶的质量是浆液的质量的0.05％，复合酶包括质量比为1:0.5:1.4的果胶甲酯酶、纤维素酶和木聚糖酶；
玫瑰提取物的制备方法包括步骤：将玫瑰放入6倍质量的体积分数为30％的乙醇水溶液中，55℃浸泡6小时后，超声提取35分钟，超声提取的功率为240W，超声提取的温度为37℃，提取完毕后过滤，收集滤液，将滤液减压浓缩至干，得到玫瑰提取物；
按上述的原料，采用本发明提供的制备方法，制备具有除皱和抗衰老功效的组合物：
将所有原料组分混合均匀，得到具有除皱和抗衰老功效的组合物。
实施例2
本实施例提供一种具有除皱和抗衰老功效的组合物，原料组分按重量份计，包括：水溶性富勒烯55重量份、油溶性富勒烯22重量份、苦瓜提取物9重量份、玫瑰提取物2重量份和藻类发酵物13重量份。
其中，苦瓜提取物的制备方法包括步骤：将苦瓜和水以1:3.5的质量比混合后进行打浆，得到浆液；将浆液的pH值调节至4.1，然后加入复合酶，45℃进行酶解95分钟，得到酶解液；将酶解液过滤，收集滤液，将滤液减压浓缩至干，得到苦瓜提取物；其中，复合酶的质量是浆液的质量的0.05％，复合酶包括质量比为1:0.5:1.4的果胶甲酯酶、纤维素酶和木聚糖酶；
玫瑰提取物的制备方法包括步骤：将玫瑰放入6倍质量的体积分数为30％的乙醇水溶液中，55℃浸泡6小时后，超声提取35分钟，超声提取的功率为240W，超声提取的温度为37℃，提取完毕后过滤，收集滤液，将滤液减压浓缩至干，得到玫瑰提取物；
藻类发酵物的制备方法包括步骤：
S1：将石莼藻干粉和螺旋藻干粉以1：1.9的质量比混合均匀，然后加入蒸馏水，超声分散溶解，然后调节pH值至6.7，121℃灭菌20min，灭菌完毕后冷却至室温，得到发酵预混物；其中，蒸馏水的体积用量以石莼藻干粉质量计为40mL/g；超声的功率为300W，超声的频率为28kHz，超声的温度为25℃，超声的时间为46min；
S2：在发酵预混物中加入第一发酵菌剂，第一发酵菌剂的接种量为5％，然后在120r/min的摇床转速下，33℃发酵64h，得到第一发酵产物；其中，第一发酵菌剂包括枯草芽孢杆菌和纳豆芽孢杆菌，第一发酵菌剂的培养方法包括步骤：将枯草芽孢杆菌和纳豆芽孢杆菌接种至培养基中进行活化培养，得到第一发酵菌剂；培养基的成分包括：牛肉膏0.2％，蛋白胨0.8％，葡萄糖0.2％，氯化钠0.5％，琼脂1.5％，余量为蒸馏水，pH值为6.7；制备得到的第一发酵菌剂中：枯草芽孢杆菌的浓度为1.8×108CFU/g，纳豆芽孢杆菌的浓度为5.0×105CFU/g；
S3：在第一发酵产物中加入小球藻干粉和第二发酵菌剂，第二发酵菌剂的接种量为8％，然后在120r/min的摇床转速下，32℃发酵45h，得到第二发酵产物；其中，石莼藻干粉和小球藻干粉的质量比为1：0.4；第二发酵菌剂包括枯草芽孢杆菌和米曲霉，第二发酵菌剂的培养方法包括步骤：将枯草芽孢杆菌和米曲霉接种至培养基中进行活化培养，得到第二发酵菌剂；培养基的成分包括：牛肉膏0.2％，蛋白胨0.8％，葡萄糖0.2％，氯化钠0.5％，琼脂1.5％，余量为蒸馏水，pH值为6.7；制备得到的第二发酵菌剂中：枯草芽孢杆菌的浓度为4.5×106CFU/g，米曲霉的浓度为6.8×108CFU/g；
S4：将第二发酵产物灭菌后，6800r/min离心分离28min，然后取上清液，将上清液浓缩后冷冻干燥，得到藻类发酵物。
按上述的原料，采用本发明提供的制备方法，制备具有除皱和抗衰老功效的组合物：
将所有原料组分混合均匀，得到具有除皱和抗衰老功效的组合物。
实施例3
本实施例提供一种具有除皱和抗衰老功效的组合物，原料组分按重量份计，包括：水溶性富勒烯50重量份、油溶性富勒烯25重量份、苦瓜提取物8重量份、玫瑰提取物3重量份和藻类发酵物10重量份。
其中，苦瓜提取物的制备方法包括步骤：将苦瓜和水以1:3的质量比混合后进行打浆，得到浆液；将浆液的pH值调节至4.0，然后加入复合酶，42℃进行酶解90分钟，得到酶解液；将酶解液过滤，收集滤液，将滤液减压浓缩至干，得到苦瓜提取物；其中，复合酶的质量是浆液的质量的0.04％，复合酶包括质量比为1:0.4:1.3的果胶甲酯酶、纤维素酶和木聚糖酶；
玫瑰提取物的制备方法包括步骤：将玫瑰放入5倍质量的体积分数为25％的乙醇水溶液中，50℃浸泡4小时后，超声提取30分钟，超声提取的功率为200W，超声提取的温度为35℃，提取完毕后过滤，收集滤液，将滤液减压浓缩至干，得到玫瑰提取物；
藻类发酵物的制备方法包括步骤：
S1：将石莼藻干粉和螺旋藻干粉以1：1.5的质量比混合均匀，然后加入蒸馏水，超声分散溶解，然后调节pH值至6.5，121℃灭菌20min，灭菌完毕后冷却至室温，得到发酵预混物；其中，蒸馏水的体积用量以石莼藻干粉质量计为30mL/g；超声的功率为250W，超声的频率为25kHz，超声的温度为20℃，超声的时间为40min；
S2：在发酵预混物中加入第一发酵菌剂，第一发酵菌剂的接种量为4％，然后在100r/min的摇床转速下，30℃发酵58h，得到第一发酵产物；其中，第一发酵菌剂包括枯草芽孢杆菌和纳豆芽孢杆菌，第一发酵菌剂的培养方法包括步骤：将枯草芽孢杆菌和纳豆芽孢杆菌接种至培养基中进行活化培养，得到第一发酵菌剂；培养基的成分包括：牛肉膏0.2％，蛋白胨0.8％，葡萄糖0.2％，氯化钠0.5％，琼脂1.5％，余量为蒸馏水，pH值为6.7；制备得到的第一发酵菌剂中：枯草芽孢杆菌的浓度为1×108CFU/g，纳豆芽孢杆菌的浓度为1×105CFU/g；
S3：在第一发酵产物中加入小球藻干粉和第二发酵菌剂，第二发酵菌剂的接种量为7％，然后在100r/min的摇床转速下，30℃发酵42h，得到第二发酵产物；其中，石莼藻干粉和小球藻干粉的质量比为1：0.3；第二发酵菌剂包括枯草芽孢杆菌和米曲霉，第二发酵菌剂的培养方法包括步骤：将枯草芽孢杆菌和米曲霉接种至培养基中进行活化培养，得到第二发酵菌剂；培养基的成分包括：牛肉膏0.2％，蛋白胨0.8％，葡萄糖0.2％，氯化钠0.5％，琼脂1.5％，余量为蒸馏水，pH值为6.7；制备得到的第二发酵菌剂中：枯草芽孢杆菌的浓度为1×106CFU/g，米曲霉的浓度为1×108CFU/g；
S4：将第二发酵产物灭菌后，6500r/min离心分离25min，然后取上清液，将上清液浓缩后冷冻干燥，得到藻类发酵物。
按上述的原料，采用本发明提供的制备方法，制备具有除皱和抗衰老功效的组合物：
将所有原料组分混合均匀，得到具有除皱和抗衰老功效的组合物。
实施例4
本实施例提供一种具有除皱和抗衰老功效的组合物，原料组分按重量份计，包括：水溶性富勒烯60重量份、油溶性富勒烯15重量份、苦瓜提取物10重量份、玫瑰提取物1重量份和藻类发酵物10重量份。
其中，苦瓜提取物的制备方法包括步骤：将苦瓜和水以1:4的质量比混合后进行打浆，得到浆液；将浆液的pH值调节至4.2，然后加入复合酶，48℃进行酶解100分钟，得到酶解液；将酶解液过滤，收集滤液，将滤液减压浓缩至干，得到苦瓜提取物；其中，复合酶的质量是浆液的质量的0.06％，复合酶包括质量比为1:0.6:1.5的果胶甲酯酶、纤维素酶和木聚糖酶；
玫瑰提取物的制备方法包括步骤：将玫瑰放入7倍质量的体积分数为35％的乙醇水溶液中，60℃浸泡8小时后，超声提取40分钟，超声提取的功率为250W，超声提取的温度为40℃，提取完毕后过滤，收集滤液，将滤液减压浓缩至干，得到玫瑰提取物；
藻类发酵物的制备方法包括步骤：
S1：将石莼藻干粉和螺旋藻干粉以1 2.3的质量比混合均匀，然后加入蒸馏水，超声分散溶解，然后调节pH值至6.8，121℃灭菌20min，灭菌完毕后冷却至室温，得到发酵预混物；其中，蒸馏水的体积用量以石莼藻干粉质量计为50mL/g；超声的功率为350W，超声的频率为30kHz，超声的温度为30℃，超声的时间为50min；
S2：在发酵预混物中加入第一发酵菌剂，第一发酵菌剂的接种量为6％，然后在150r/min的摇床转速下，35℃发酵70h，得到第一发酵产物；其中，第一发酵菌剂包括枯草芽孢杆菌和纳豆芽孢杆菌，第一发酵菌剂的培养方法包括步骤：将枯草芽孢杆菌和纳豆芽孢杆菌接种至培养基中进行活化培养，得到第一发酵菌剂；培养基的成分包括：牛肉膏0.2％，蛋白胨0.8％，葡萄糖0.2％，氯化钠0.5％，琼脂1.5％，余量为蒸馏水，pH值为6.7；制备得到的第一发酵菌剂中：枯草芽孢杆菌的浓度为1×109CFU/g，纳豆芽孢杆菌的浓度为1×106CFU/g；
S3：在第一发酵产物中加入小球藻干粉和第二发酵菌剂，第二发酵菌剂的接种量为10％，然后在150r/min的摇床转速下，35℃发酵48h，得到第二发酵产物；其中，石莼藻干粉和小球藻干粉的质量比为1：0.5；第二发酵菌剂包括枯草芽孢杆菌和米曲霉，第二发酵菌剂的培养方法包括步骤：将枯草芽孢杆菌和米曲霉接种至培养基中进行活化培养，得到第二发酵菌剂；培养基的成分包括：牛肉膏0.2％，蛋白胨0.8％，葡萄糖0.2％，氯化钠0.5％，琼脂1.5％，余量为蒸馏水，pH值为6.7；制备得到的第二发酵菌剂中：枯草芽孢杆菌的浓度为1×107CFU/g，米曲霉的浓度为1×109CFU/g；
S4：将第二发酵产物灭菌后，7000r/min离心分离30min，然后取上清液，将上清液浓缩后冷冻干燥，得到藻类发酵物。
按上述的原料，采用本发明提供的制备方法，制备具有除皱和抗衰老功效的组合物：
将所有原料组分混合均匀，得到具有除皱和抗衰老功效的组合物。
对比例1
本对比例提供一种具有除皱和抗衰老功效的组合物，原料组分按重量份计，包括：水溶性富勒烯55重量份、油溶性富勒烯22重量份、苦瓜提取物9重量份、玫瑰提取物2重量份和藻类发酵物13重量份。
其中，苦瓜提取物的制备方法包括步骤：将苦瓜和水以1:3.5的质量比混合后进行打浆，得到浆液；将浆液的pH值调节至4.1，然后加入复合酶，45℃进行酶解95分钟，得到酶解液；将酶解液过滤，收集滤液，将滤液减压浓缩至干，得到苦瓜提取物；其中，复合酶的质量是浆液的质量的0.05％，复合酶包括质量比为1:0.5:1.4的果胶甲酯酶、纤维素酶和木聚糖酶；
玫瑰提取物的制备方法包括步骤：将玫瑰放入6倍质量的体积分数为30％的乙醇水溶液中，55℃浸泡6小时后，超声提取35分钟，超声提取的功率为240W，超声提取的温度为37℃，提取完毕后过滤，收集滤液，将滤液减压浓缩至干，得到玫瑰提取物；
藻类发酵物的制备方法包括步骤：
S1：将石莼藻干粉、螺旋藻干粉和小球藻干粉以1：1.9：0.4的质量比混合均匀，然后加入蒸馏水，超声分散溶解，然后调节pH值至6.7，121℃灭菌20min，灭菌完毕后冷却至室温，得到发酵预混物；其中，蒸馏水的体积用量以石莼藻干粉质量计为40mL/g；超声的功率为300W，超声的频率为28kHz，超声的温度为25℃，超声的时间为46min；
S2：在发酵预混物中加入第一发酵菌剂，第一发酵菌剂的接种量为5％，然后在120r/min的摇床转速下，33℃发酵64h，得到第一发酵产物；其中，第一发酵菌剂包括枯草芽孢杆菌和纳豆芽孢杆菌，第一发酵菌剂的培养方法包括步骤：将枯草芽孢杆菌和纳豆芽孢杆菌接种至培养基中进行活化培养，得到第一发酵菌剂；培养基的成分包括：牛肉膏0.2％，蛋白胨0.8％，葡萄糖0.2％，氯化钠0.5％，琼脂1.5％，余量为蒸馏水，pH值为6.7；制备得到的第一发酵菌剂中：枯草芽孢杆菌的浓度为1.8×108CFU/g，纳豆芽孢杆菌的浓度为5.0×105CFU/g；
S3：在第一发酵产物中加入第二发酵菌剂，第二发酵菌剂的接种量为8％，然后在120r/min的摇床转速下，32℃发酵45h，得到第二发酵产物；其中，第二发酵菌剂包括枯草芽孢杆菌和米曲霉，第二发酵菌剂的培养方法包括步骤：将枯草芽孢杆菌和米曲霉接种至培养基中进行活化培养，得到第二发酵菌剂；培养基的成分包括：牛肉膏0.2％，蛋白胨0.8％，葡萄糖0.2％，氯化钠0.5％，琼脂1.5％，余量为蒸馏水，pH值为6.7；制备得到的第二发酵菌剂中：枯草芽孢杆菌的浓度为4.5×106CFU/g，米曲霉的浓度为6.8×108CFU/g；
S4：将第二发酵产物灭菌后，6800r/min离心分离28min，然后取上清液，将上清液浓缩后冷冻干燥，得到藻类发酵物。
按上述的原料，制备具有除皱和抗衰老功效的组合物：
将所有原料组分混合均匀，得到具有除皱和抗衰老功效的组合物。
对比例2
本对比例提供一种具有除皱和抗衰老功效的组合物，原料组分按重量份计，包括：水溶性富勒烯55重量份、油溶性富勒烯22重量份、苦瓜提取物9重量份、玫瑰提取物2重量份和藻类发酵物13重量份。
其中，苦瓜提取物的制备方法包括步骤：将苦瓜和水以1:3.5的质量比混合后进行打浆，得到浆液；将浆液的pH值调节至4.1，然后加入复合酶，45℃进行酶解95分钟，得到酶解液；将酶解液过滤，收集滤液，将滤液减压浓缩至干，得到苦瓜提取物；其中，复合酶的质量是浆液的质量的0.05％，复合酶包括质量比为1:0.5:1.4的果胶甲酯酶、纤维素酶和木聚糖酶；
玫瑰提取物的制备方法包括步骤：将玫瑰放入6倍质量的体积分数为30％的乙醇水溶液中，55℃浸泡6小时后，超声提取35分钟，超声提取的功率为240W，超声提取的温度为37℃，提取完毕后过滤，收集滤液，将滤液减压浓缩至干，得到玫瑰提取物；
藻类发酵物的制备方法包括步骤：
S1：将石莼藻干粉、螺旋藻干粉和小球藻干粉以1：1.9：0.4的质量比混合均匀，然后加入蒸馏水，超声分散溶解，然后调节pH值至6.7，121℃灭菌20min，灭菌完毕后冷却至室温，得到发酵预混物；其中，蒸馏水的体积用量以石莼藻干粉质量计为40mL/g；超声的功率为300W，超声的频率为28kHz，超声的温度为25℃，超声的时间为46min；
S2：在发酵预混物中加入发酵菌剂，发酵菌剂的接种量为5％，然后在120r/min的摇床转速下，33℃发酵64h，得到发酵产物；其中，第一发酵菌剂包括枯草芽孢杆菌、纳豆芽孢杆菌和米曲霉，发酵菌剂的培养方法包括步骤：将枯草芽孢杆菌、纳豆芽孢杆菌和米曲霉接种至培养基中进行活化培养，得到发酵菌剂；培养基的成分包括：牛肉膏0.2％，蛋白胨0.8％，葡萄糖0.2％，氯化钠0.5％，琼脂1.5％，余量为蒸馏水，pH值为6.7；制备得到的发酵菌剂中：枯草芽孢杆菌的浓度为1.8×108CFU/g，纳豆芽孢杆菌的浓度为5.0×105CFU/g，米曲霉的浓度为6.8×108CFU/g；
S3：将发酵产物灭菌后，6800r/min离心分离28min，然后取上清液，将上清液浓缩后冷冻干燥，得到藻类发酵物。
按上述的原料，制备具有除皱和抗衰老功效的组合物：
将所有原料组分混合均匀，得到具有除皱和抗衰老功效的组合物。
对比例3
本对比例提供一种具有除皱和抗衰老功效的组合物，原料组分按重量份计，包括：水溶性富勒烯55重量份、油溶性富勒烯22重量份、玫瑰提取物2重量份和藻类发酵物13重量份。
其中，玫瑰提取物的制备方法包括步骤：将玫瑰放入6倍质量的体积分数为30％的乙醇水溶液中，55℃浸泡6小时后，超声提取35分钟，超声提取的功率为240W，超声提取的温度为37℃，提取完毕后过滤，收集滤液，将滤液减压浓缩至干，得到玫瑰提取物；
藻类发酵物的制备方法包括步骤：
S1：将石莼藻干粉和螺旋藻干粉以1：1.9的质量比混合均匀，然后加入蒸馏水，超声分散溶解，然后调节pH值至6.7，121℃灭菌20min，灭菌完毕后冷却至室温，得到发酵预混物；其中，蒸馏水的体积用量以石莼藻干粉质量计为40mL/g；超声的功率为300W，超声的频率为28kHz，超声的温度为25℃，超声的时间为46min；
S2：在发酵预混物中加入第一发酵菌剂，第一发酵菌剂的接种量为5％，然后在120r/min的摇床转速下，33℃发酵64h，得到第一发酵产物；其中，第一发酵菌剂包括枯草芽孢杆菌和纳豆芽孢杆菌，第一发酵菌剂的培养方法包括步骤：将枯草芽孢杆菌和纳豆芽孢杆菌接种至培养基中进行活化培养，得到第一发酵菌剂；培养基的成分包括：牛肉膏0.2％，蛋白胨0.8％，葡萄糖0.2％，氯化钠0.5％，琼脂1.5％，余量为蒸馏水，pH值为6.7；制备得到的第一发酵菌剂中：枯草芽孢杆菌的浓度为1.8×108CFU/g，纳豆芽孢杆菌的浓度为5.0×105CFU/g；
S3：在第一发酵产物中加入小球藻干粉和第二发酵菌剂，第二发酵菌剂的接种量为8％，然后在120r/min的摇床转速下，32℃发酵45h，得到第二发酵产物；其中，石莼藻干粉和小球藻干粉的质量比为1：0.4；第二发酵菌剂包括枯草芽孢杆菌和米曲霉，第二发酵菌剂的培养方法包括步骤：将枯草芽孢杆菌和米曲霉接种至培养基中进行活化培养，得到第二发酵菌剂；培养基的成分包括：牛肉膏0.2％，蛋白胨0.8％，葡萄糖0.2％，氯化钠0.5％，琼脂1.5％，余量为蒸馏水，pH值为6.7；制备得到的第二发酵菌剂中：枯草芽孢杆菌的浓度为4.5×106CFU/g，米曲霉的浓度为6.8×108CFU/g；
S4：将第二发酵产物灭菌后，6800r/min离心分离28min，然后取上清液，将上清液浓缩后冷冻干燥，得到藻类发酵物。
按上述的原料，制备具有除皱和抗衰老功效的组合物：
将所有原料组分混合均匀，得到具有除皱和抗衰老功效的组合物。
将本发明实施例1至实施例4制备得到的具有除皱和抗衰老功效的组合物，通过功能学试验来系统评价其效果，并以对比例1至对比例3制备得到的组合物作为对照。
1、清除自由基实验
(1)氧自由基清除活性测定
取0.75mmol/L的邻二氮菲溶液1mL于10mL具塞试管中，依次加入2mL0.2mmol/L，pH为7.5的PBS缓冲液、1mL0.75mmol/L的硫酸亚铁混合均匀，加入1mL样品溶液，混匀后加入1mL0.01％的过氧化氢，用去离子水定容，37℃水浴加热60min，在510nm处出测定其吸光度值。对氧自由基的清除率按下式计算：清除率＝[(A1-A0)/(A2-A0)]×100％。
其中，A1为加入过氧化氢和样品时的吸光度；A0为加入过氧化氢但不加样品时的吸光度；A2为过氧化氢和样品均不加时的吸光度。此外，样品溶液的配置方法为：分别取100g的实施例1至实施例4、对比例1至对比例3制备得到的组合物于6个烧杯中，加入100mL去离子水后于45℃微波加热60min，冷却至室温后得到本发明所需的样品溶液。
各实施例和对比例的组合物清除氧自由基的具体实验数据如表1所示：
表1 各组氧自由基的清除率
Figure BDA0001772153850000161
(2)DPPH·清除率的测定
取上述样品溶液各2mL，加入2mL 0.1mmol/L的DPPH溶液混合均匀，避光反应30min后，于217nm处测定吸光度值A1；空白组以DPPH代替样品溶液，对照组以等体积蒸馏水代替样品溶液。清除率按下式计算：清除率＝[1-(A1-A0)/A2]×100％。
其中，A1为样品组的吸光度；A0为空白组的吸光度；A2为对照组的吸光度。
各实施例和对比例的组合物DPPH清除率的具体实验数据如表2所示：
表2 各实施例对DPPH·的清除率
Figure BDA0001772153850000171
2、抗衰老能力评估
招募70位身体健康的女性测试者进行鱼尾纹和眼周皱纹的测试评估，将70位测试者随机分为7组，每组10位。评估试验采用10分制，10分为抗皱效果最好，9分次之，1分抗皱效果最差。
采用本发明实施例1至实施例4、对比例1至对比例3制备得到的组合物制备成含1％组合物的抗衰老眼霜(在市售眼霜中加入本申请的组合物)，每位测试者左眼使用市售眼霜，右眼使用该组对应的含1％组合物的抗衰老眼霜，每天早晚各使用一次，连续使用8周。记录每位测试者左眼和右眼的评估结果，并将每组10位患者的结果取平均值，计算得到的结果如下表3所示。
表3 抗衰老能力评估结果
Figure BDA0001772153850000172
Figure BDA0001772153850000181
3、毒性试验
选体重为18～22g的小白鼠40只(雌雄各20只)，分为4组，每组雌雄各5只，分别在去毛的背部涂抹本发明实施例1至实施例4制备得到的组合物，每次涂抹量为0.11mg/kg，连续涂抹30天。涂抹组合物期间及停涂抹组合物后1周时，观察白鼠生长状态和活动饮食，鉴定血液学、血液生化学、脏器组织结构以及尿常规等。结果发现所有小白鼠均健康生存，无任何毒副作用；解剖观察血象、肝功能、各脏器组织状态，与正常小白鼠比较无差异。实验证明，本发明提供的组合物无毒，使用安全可靠。
需要说明的是，本发明实施例采用的水溶性富勒烯购买自日本Vitamin C60Bioresearch Corporation公司，商品名为Radical Sponge；油溶性富勒烯购买自日本Vitamin C60 Bioresearch Corporation公司，商品名为Lipo Fullerene。需要注意的是，除非另有说明，本申请使用的技术术语或者科学术语应当为本发明所属领域技术人员所理解的通常意义。除非另外具体说明，否则在这些实施例中阐述的部件和步骤的相对步骤、数字表达式和数值并不限制本发明的范围。在这里示出和描述的所有示例中，除非另有规定，任何具体值应被解释为仅仅是示例性的，而不是作为限制，因此，示例性实施例的其他示例可以具有不同的值。
在本发明的描述中，需要理解的是，术语“第一”、“第二”仅用于描述目的，而不能理解为指示或暗示相对重要性或者隐含指明所指示的技术特征的数量。由此，限定有“第一”、“第二”的特征可以明示或者隐含地包括一个或者更多个该特征。在本发明的描述中，“多个”的含义是两个以上，除非另有明确具体的限定。
最后应说明的是：以上各实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述各实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分或者全部技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的范围，其均应涵盖在本发明的保护范围当中。

Claims (4)

1.一种具有除皱和抗衰老功效的组合物，其特征在于，由如下重量份原料组分制成：
水溶性富勒烯50～60重量份、油溶性富勒烯15～25重量份、苦瓜提取物8～10重量份、玫瑰提取物1～3重量份、藻类发酵物10～15重量份；
所述藻类发酵物的制备方法包括步骤：
S1：将石莼藻干粉和螺旋藻干粉混合均匀，然后加入水，得到发酵预混物；
S2：在所述发酵预混物中加入第一发酵菌剂进行一次发酵，得到第一发酵产物；
S3：在所述第一发酵产物中加入小球藻干粉和第二发酵菌剂进行二次发酵，得到第二发酵产物；
S4：将所述第二发酵产物灭菌后，进行分离纯化，得到所述藻类发酵物；
S1具体包括步骤：将石莼藻干粉和螺旋藻干粉混合均匀，然后加入蒸馏水超声分散溶解，然后调节pH值至6.5～6.8，121℃灭菌20min，灭菌完毕后冷却至室温，得到发酵预混物；其中，所述蒸馏水的体积用量以所述石莼藻干粉质量计为30～50mL/g，所述石莼藻干粉和所述螺旋藻干粉的质量比为1：(1.5～2.3)；所述超声的功率为250～350W，所述超声的频率为25～30kHz，所述超声的温度为20～30℃，所述超声的时间为40～50min；
S2中，所述第一发酵菌剂包括枯草芽孢杆菌和纳豆芽孢杆菌，所述第一发酵菌剂的培养方法包括步骤：将枯草芽孢杆菌和纳豆芽孢杆菌接种至培养基中进行活化培养，得到所述第一发酵菌剂；其中，所述培养基的成分包括：牛肉膏0.2％，蛋白胨0.8％，葡萄糖0.2％，氯化钠0.5％，琼脂1.5％，余量为蒸馏水，pH值为6.7；制备得到的所述第一发酵菌剂中：枯草芽孢杆菌的浓度为1×(108～109)CFU/g，纳豆芽孢杆菌的浓度为1×(105～106)CFU/g；
所述第一发酵菌剂的接种量为4％～6％；所述一次发酵的温度为30～35℃，所述一次发酵是在100～150r/min的摇床转速下发酵58～70h；
S3中，所述石莼藻干粉和所述小球藻干粉的质量比为1：(0.3～0.5)；所述第二发酵菌剂包括枯草芽孢杆菌和米曲霉，所述第二发酵菌剂的培养方法包括步骤：将枯草芽孢杆菌和米曲霉接种至培养基中进行活化培养，得到所述第二发酵菌剂；其中，所述培养基的成分包括：牛肉膏0.2％，蛋白胨0.8％，葡萄糖0.2％，氯化钠0.5％，琼脂1.5％，余量为蒸馏水，pH值为6.7；制备得到的所述第二发酵菌剂中：枯草芽孢杆菌的浓度为1×(106～107)CFU/g，米曲霉的浓度为1×(108～109)CFU/g；
所述第二发酵菌剂的接种量为7％～10％；所述二次发酵的温度为30～35℃，所述二次发酵是在100～150r/min的摇床转速下发酵42～48h；
S4中，所述分离纯化具体包括步骤：将灭菌后的第二发酵产物6500～7000r/min离心分离25～30min，然后取上清液，将所述上清液浓缩后冷冻干燥。
2.根据权利要求1所述的具有除皱和抗衰老功效的组合物，其特征在于，
所述苦瓜提取物的制备方法包括步骤：将苦瓜和水以1:(3～4)的质量比混合后进行打浆，得到浆液；将所述浆液的pH值调节至4.0～4.2，然后加入复合酶，42～48℃进行酶解90～100分钟，得到酶解液；将所述酶解液过滤，收集滤液，将所述滤液减压浓缩至干，得到所述苦瓜提取物；其中，所述复合酶的质量是所述浆液的质量的0.04％～0.06％，所述复合酶包括质量比为1:(0.4～0.6):(1.3～1.5)的果胶甲酯酶、纤维素酶和木聚糖酶；
所述玫瑰提取物的制备方法包括步骤：将玫瑰放入5～7倍质量的体积分数为25％～35％的乙醇水溶液中，50～60℃浸泡4～8小时后，超声提取30～40分钟，超声提取的功率为200～250W，超声提取的温度为35～40℃，提取完毕后过滤，收集滤液，将所述滤液减压浓缩至干，得到所述玫瑰提取物。
3.权利要求1-2任一项所述的具有除皱和抗衰老功效的组合物的制备方法，其特征在于，包括步骤：
将所有原料组分混合均匀，得到所述具有除皱和抗衰老功效的组合物。
4.权利要求1-2任一项所述的具有除皱和抗衰老功效的组合物在制备化妆品中的应用。
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